Изобретение относится к применению в косметологии активного агента, полученного из микроорганизма, принадлежащего роду Vitreoscilla sp. (в частности, вид: Vitreoscilla filiformis), в качестве активного агента для предупреждения и/или лечения состояний кожи головы, связанных с появлением перхоти, включая состояния, связанные с появлением перхоти, ассоциированные с размножением на коже головы патогенных микроорганизмов и/или дисбалансом экофлоры кожи головы.
Кожа представляет собой ткань, в которой клетки соединены и интегрально прикреплены друг к другу. Ткань кожи образует внешнее покрытие, содержащее сальные или потовые железы, и волосяные фолликулы. Кожа и, в частности кожа головы, представляют собой эпителии, которые подвергаются непрерывному обновлению. Обновление или шелушение представляет собой скоординированный и тонко регулируемый процесс, приводящий в результате к незаметному и невидимому удалению поверхностных клеток.
Однако отклоняющееся от нормы или нерегулярное шелушение клеток рогового слоя по разным причинам может приводить к образованию больших, толстых клеточных кластеров, которые видны невооруженным глазом и называются "чешуйками" или "перхотью" в случае кожи головы, или в других ситуациях к истончению рогового слоя. Нарушения шелушения, происходящие в результате ненормального или нерегулярного шелушения, могут приводить в результате к хрупкости или даже отсутствию барьерных свойств эпидермиса.
В качестве примера факторов, которые стимулируют появление чешуек или перхоти, можно упомянуть напряжение, зимний период, избыток кожного сала, недостаток увлажнения или колонизацию кожи или волосяных фолликул дрожжами Malassezia sp. Данные факторы, в частности, имеют общее свойство вызывания и/или стимуляции воспаления кожи. Такое воспаление усиливает появление или даже увеличивает наличие чешуек или перхоти. В частности, дрожжи типа Malassezia sp., которые составляют часть нормальной симбиотической флоры на поверхности кожи головы у индивидуумов, не имеющих перхоти, испытывают существенное увеличение своего относительного содержания в случае перхоти или в случае ассоциированного себорейного дерматита. Дисбаланс в экофлоре кожи головы является фактором, который стимулирует или даже усиливает появление перхоти.
Наличие чешуек или состояния, связанные с появлением перхоти, могут быть регулярно возникающими, частыми, хроническими состояниями, которые в социальном отношении изнуряют благодаря своей очевидной некрасивой природе. Более того, состояния кожи головы, связанные с появлением перхоти, или отклоняющееся от нормы шелушение кожи могут отражаться на нарушении барьерной функции эпидермиса или вызывать ощущения зуда или почесуху, приводя в результате к расчесыванию, которое усиливает явление появления чешуек или перхоти и, в свою очередь, раздражение кожи головы или кожи.
Состояния кожи головы, связанные с появлением перхоти, могут быть жирного типа или сухого типа. Состояния кожи головы, связанные с появлением перхоти, сухого типа чаще проявляются и усиливаются во время нарушений увлажнения кожи и, в частности, во время существенной сухости эпидермиса кожи головы. При этом, так как кожа головы богата сальными железами, состояние, связанное с появлением перхоти, может развиваться быстрее в избыточном присутствии кожного сала и может быстрее вызывать зуд. Таким образом, избыточная секреция кожного сала, или гиперсеборея, стимулирует появление состояния кожи головы, связанного с появлением перхоти, жирного типа, или перхоти жирного типа, обычно связанных с неудовольствием, ощущениями дискомфорта, нарушениями с эстетической точки зрения или даже с патологическим состоянием кожи.
Состояния, связанные с появлением перхоти, обычно поддаются разным видам местного или системного лечения. Однако эффективность данных видов лечения является только поддерживающей и требует жесткого соблюдения со стороны лица, проходящего данное лечение (достаточная частота применения и достаточное время применения). Однако ежедневное и длительное использование данных видов лечения может приводить к явлению привыкания, снижению своей эффективности, причем привыкание в основном связано с симптомом отдачи, встречающимся, когда лечение заканчивается. Данное явление проявляется через гиперсеборею, которая ухудшает состояние, связанное с появлением перхоти, и повреждает барьерную функцию кожи головы. Кроме того, агрессивность конкретного активного агента против перхоти относительно эпидермальных клеток или экофлоры кожи головы может также воздействовать на барьерные функции кожи головы и приводить к ухудшению состояния, связанного с появлением перхоти. Наконец, эффективность видов лечения, направленных против перхоти, часто медленно развивается и требует жесткого применения в течение длительного времени. Данный период задержки часто приводит к невозможности соблюдать режим лечения. Следовательно, много неудач возникает при применении данных видов лечения.
Многие эпидермальные факторы, экспрессия, биологическая активность или созревание которых меняются, снижаются или повышаются, как известно, вовлечены, прямо или косвенно, в процесс обновления или шелушения кожи головы.
Данные факторы можно применять в качестве биологических маркеров в отношении кожи головы, в качестве мишеней скрининга или даже в качестве косметических активных агентов.
Однако все еще остается много неизвестных факторов в отношении непосредственного механизма и факторов, участвующих в шелушении кожи и, в частности, в появлении перхоти.
Также существует потребность в новых активных агентах и новых способах лечения для предупреждения и/или лечения нарушения шелушения кожи и, конкретнее, состояния кожи головы, связанного с появлением перхоти.
Также все еще существует потребность в новых косметических способах лечения для предупреждения, облегчения и/или лечения состояний кожи головы, связанных с появлением перхоти, которые являются эффективными и не обладают побочными эффектами, ответственными за негативное воздействие строгого соблюдения лечения.
Также существует потребность в косметическом лечении состояний кожи головы, связанных с появлением перхоти, которое не оказывает негативного воздействия на экофлору кожи головы или которое даже пополняет наличие здоровой экофлоры.
Существует потребность в косметических способах лечения состояний, связанных с появлением перхоти, которые способны поддерживать или даже усиливать барьерные свойства кожи головы.
Существует потребность в косметических способах лечения состояний, связанных с появлением перхоти, которые не обладают вышеупомянутыми побочными эффектами, и, в частности, которые не вызывают гиперсеборею, себорейный дерматит или состояния, вызывающие зуд.
Также существует потребность в косметическом способе лечения состояний, связанных с появлением перхоти, который не вызывает воспаления.
Задача настоящего изобретения заключается в удовлетворении данных потребностей.
Таким образом, настоящее изобретение нацелено, в частности, на предложение нового активного агента, который удовлетворяет вышеупомянутым требованиям и который, в частности, проявляет эффективность в отношении нарушений барьерной функции кожи головы, несмотря на патогенную микрофлору. Как подробно описано ниже в данном документе, новый активный агент по изобретению преимущественно применяют при осуществлении способов косметического лечения состояний кожи головы, связанных с появлением перхоти.
В частности, настоящее изобретение относится к применению в косметологии лизата бактерии или бактерий, принадлежащих к роду Vitreoscilla sp. (в частности, вид: Vitreoscilla filiformis), в полной ферментационной среде в качестве активного агента для предупреждения и/или лечения состояний кожи головы, связанных с появлением перхоти, в частности, связанных с дисбалансом экофлоры кожи головы.
Предупреждение и/или лечение состояний, связанных с появлением перхоти, охватывает предупреждение и/или лечение перхоти и/или предупреждение и/или лечение зуда кожи головы, связанного с наличием перхоти.
В контексте настоящего изобретения выражение "лизат в полной ферментационной среде" означает, что лизат применяют, и лизат присутствует в косметической или дерматологической композиции, содержащей его, приготовлен в виде препарата в своей полной культуральной среде источника, как определено ниже в данном документе, причем полная культуральная среда представляет собой среду, в которой бактерии культивировали до тех пор, пока фаза роста микроорганизмов не приводила к использованию питательных субстратов, исходно находящихся в культуральной среде.
В контексте настоящего изобретения выражение "полная ферментационная среда" предназначено для того, чтобы обозначать среду, получающуюся в результате способа культивирования, который применяли для роста и клеточного лизиса микроорганизма, причем указанная среда не подвергалась, помимо этого, дополнительной манипуляции, направленной на разделение и/или удаление всех или части ее неводных компонентов.
В контексте настоящего изобретения термин "предупреждение" означает абсолютное устранение или частичное снижение риска проявления данного явления, т.е. в настоящем изобретении, проявления состояний кожи головы, связанных с появлением перхоти. Под "частичным снижением" подразумевается то, что риск остается, но в меньшей степени, чем перед реализацией изобретения.
Композицию, содержащую активный агент согласно изобретению, можно вводить местно.
Применение экстракта нефотосинтезирующих, неплодоносящих нитчатых бактерий, подобно бактериям рода Vitreoscilla sp. (в частности, вид Vitreoscilla filiformis), в качестве активного агента для модуляции и предпочтительно ингибирования адгезии и/или размножения патогенных микроорганизмов на коже и коже головы уже было предложено в документе FR 2879452.
Однако экстракт, рассматриваемый в том документе, состоит либо из супернатанта ферментационной среды указанной бактерии, либо биомассы, полученной после культивирования указанных бактерий или оболочек, или фракций оболочек или еще экстрактов, полученных после дополнительной обработки биомассы. Вследствие этого, все вышеупомянутые экстракты получают только после дополнительной операции, такой как, например, фильтрация или центрифугирование, применяемой относительно ферментационной среды в целях отделения рассматриваемого экстракта от других компонентов данной ферментационной среды.
Поэтому рассматриваемый активный агент согласно изобретению является полностью отличным от экстракта, рассматриваемого и описанного в документе FR 2879452.
Косметические и/или дерматологические композиции, содержащие полный экстракт Vitreoscilla filiformis, описаны в Европейской патентной заявке № ЕР 1400237. В заявке ЕР 1400237 описаны разные экстракты Vitreoscilla filiformis, соответственно (i) бактериальные клетки, отделенные от биомассы, например, посредством центрифугирования, (ii) биомасса, которая представляет собой неклеточную суспензию, которая может содержать клеточный дебрис, и (iii) фракция супернатанта данной биомассы.
В отличие от экстракта, описанного в FR 2879452, или еще от экстрактов, описанных в ЕР 1400237, рассматриваемый активный агент согласно изобретению состоит из всех компонентов, находящихся в ферментационной среде. Вследствие этого, неожиданный эффект применения согласно изобретению происходит в результате применения в первый раз авторами изобретения в качестве активного агента лизата микроорганизмов в своей полной ферментационной среде.
Действительно, и как становится ясным из примеров ниже в данном документе, авторы изобретения заметили, что активный агент согласно изобретению показывает регуляторную активность на микрофлору кожи головы, которая выше, чем регуляторная активность, отмеченная для экстракта типа биомассы той же бактерии. В частности, авторы изобретения наблюдали, что после способа лечения по изобретению баланс микрофлоры и барьерные свойства кожи головы усилены.
Не желая быть связанными нижеследующим, данное повышение эффективности могло быть результатом синергетического эффекта между компонентами бактерии, которые обычно отделены один от другого, например, ее водорастворимые метаболиты, образованные во время ее размножения в ее ферментационной среде, и которые традиционно находятся в водном супернатанте, и ее компоненты, такие как нерастворимые в воде клеточные оболочки или фракции клеточных оболочек, составляющие всю или часть биомассы ее культуральной среды, или даже ее выделенного лизата.
Таким образом, в примерах показано, что косметическая композиция, содержащая активный агент согласно изобретению (лизат бактерий, принадлежащих роду Vitreoscilla sp. в полной ферментационной среде), имеет свойства облегчения состояний кожи головы, связанных с появлением перхоти, которые равны или даже превосходят свойства известных активных агентов против перхоти, таких как октопирокс или цинк пиритион (ZnPT). В частности, в примерах показано, что косметическая композиция, содержащая активный агент по изобретению, является активной относительно состояний кожи головы, связанных с появлением перхоти, при гораздо более низких дозах, чем дозы традиционных активных агентов против перхоти, требующиеся для получения таких же действий, оказываемых на перхоть кожи головы.
Также показали, что активный агент согласно изобретению также обладает свойствами снижения зуда кожи головы, вызванного состояниями, связанными с появлением перхоти.
Вопреки всем ожиданиям, активный агент согласно изобретению, по-видимому, с одной стороны, не обладает какой-либо ингибирующей активностью относительно разных изученных штаммов Malassezia sp.: globosa и restricta, как показано в примерах.
Согласно другому воплощению настоящее изобретение относится к косметическому способу предупреждения и/или лечения состояний кожи головы, связанных с появлением перхоти, включая состояния кожи головы, связанные с появлением перхоти, ассоциированные с преобладанием у индивидуума патогенных микроорганизмов на коже головы и/или дисбалансом в экофлоре кожи головы, включающему по меньшей мере одну стадию введения указанному индивидууму, в частности перорально, эффективного количества по меньшей мере одного лизата бактерии или бактерий, принадлежащих роду Vitreoscilla sp. (в частности, вид: Vitreoscilla filiformis), в полной ферментационной среде.
В контексте настоящего изобретения термин "эффективное количество" означает достаточное и необходимое количество рассматриваемого соединения для получения ожидаемого эффекта. Такое количество можно определять любым способом, известным специалистам в данной области, например, посредством предварительных экспериментальных тестов.
Согласно его другому аспекту настоящее изобретение относится к смываемой после нанесения или несмываемой после нанесения косметической и/или дерматологической композиции, содержащей в физиологически приемлемой среде по меньшей мере один лизат микроорганизма или микроорганизмов, принадлежащих роду Vitreoscilla sp. (в частности, вида: Vitreoscilla filiformis), в полной ферментационной среде.
Полная ферментационная среда
Как отмечалось ранее, выражение "полная ферментационная среда" предназначено для того, чтобы обозначать ферментационную или же культуральную среду, которая имеет такой же состав, по меньшей мере с точки зрения неводных компонентов или даже полностью, как ферментационная среда, в которой последовательно проводили ферментацию и клеточный лизис микроорганизма, предназначенного для образования лизата, одновременно необходимого согласно изобретению.
Другими словами, данная среда не подвергалась, помимо этого, дополнительной манипуляции, нацеленной на отделение и/или удаление всех или части ее неводных компонентов.
В частности, рассматриваемый активный агент согласно изобретению образуется из лизата микроорганизмов и из всей или части, с точки зрения количества, культуральной среды, использованной для ферментации указанной бактерии и в которой последовательно проводили ее клеточный лизис (т.е. полная ферментационная среда).
С точки зрения указанного выше, выходит, что активный агент, образованный согласно изобретению из лизата и из "полной" ферментационной среды, содержит цитоплазматические и цитозольные фракции, фрагменты клеточных стенок и метаболиты, образованные и/или высвобождаемые во время клеточного лизиса указанного микроорганизма, и все биологические объекты, способные образовываться и высвобождаться бактерией самопроизвольно во время процесса ее ферментации и поэтому уже находящиеся в ферментационной среде перед клеточным лизисом указанной бактерии.
Следовательно, активный агент согласно изобретению, т.е. образованный из лизата бактерии, принадлежащей роду Vitreoscilla sp. (в частности, вид: Vitreoscilla filiformis), в полной ферментационной среде согласно изобретению явно отличается от супернатанта ферментационной среды бактерии, принадлежащей роду Vitreoscilla sp. (в частности, вид: Vitreoscilla filiformis).
Действительно, рассматриваемый активный агент согласно изобретению, в отличие от супернатанта, содержит фрагменты клеток указанной бактерии, представленные лизатом.
Активный агент согласно изобретению, т.е. образованный из лизата бактерии, принадлежащей роду Vitreoscilla sp. (в частности, вид: Vitreoscilla filiformis), в полной ферментационной среде согласно изобретению, также отличается от биомассы или фракции биомассы, или даже от лизата или фракции лизата, выделенной из ферментационной среды бактерии, принадлежащей роду Vitreoscilla sp. (в частности, вид: Vitreoscilla filiformis).
Действительно, рассматриваемый активный агент согласно изобретению, в отличие от данной биомассы или фракции биомассы, или данного лизата или фракции лизата, содержит значительное количество водорастворимых метаболитов, высвобождающихся в естественных условиях в культуральную среду во время размножения указанной бактерии.
В контексте настоящего изобретения под выражением "неводные компоненты" подразумевается, что вода, которая является главным компонентом традиционной ферментационной среды, не является частью компонентов, которые, как таковые, должны оставаться, т.е. в равном количестве, в полной культуральной среде согласно изобретению.
Таким образом, под выражением "полная среда" также понимают форму полной среды, называемой концентрированной благодаря тому факту, что ее получают в конце частичного упаривания воды, составляющей ферментационную среду, в которой последовательно проводят культивирование соответствующего микроорганизма и его клеточный лизис. Конечно, упаривание проводят в условиях эксплуатации, регулируемых так, чтобы не нарушить целостность неводных компонентов, образующих данную полную среду.
Состав ферментационной среды
По определению ферментационная или же культуральная среда представляет собой основу, которая делает возможным культивирование и, таким образом, в случае необходимости рост клеток, бактерий и дрожжей. В принципе, клетки получают из данной среды компоненты, необходимые им для быстрого размножения в большом количестве, а также иногда элементы, которые позволят поддерживать рост особых родов бактерий или определенного семейства, в данном случае бактерии, принадлежащей роду Vitreoscilla sp.(в частности, вид: Vitreoscilla filiformis).
Поэтому состав среды должен удовлетворять потребности рассматриваемого микроорганизма в питательных элементах и необходимости его размножения.
В частности, состав данной культуральной среды должен:
- удовлетворять потребности с точки зрения минеральных ионов и факторов роста и обеспечивать источник углерода и энергии;
- иметь pH, близкий к оптимальному pH; и
- иметь оптимальную ионную силу (среда может быть изотонической, но это не обязательно).
Таким образом, в состав ферментационной среды, подходящей для изобретения, включены мо меньшей мере:
- источник углерода и энергии, главным образом представленный сахаром и преимущественно глюкозой,
- источник калия и фосфора, подобно, например, K2HPO4,
- источник азота и серы, который может быть представлен соединением (NH4)2SO4,
- источник магния, такой как, например, MgCl2,
- источник кальция, такой как, например, CaCl2,
- источник железа и, в частности, цитрат железа, причем роль цитрата заключается в том, чтобы удерживать железо в растворе,
- источник следовых элементов, выбранный, в частности, из солей Cu, Zn, Co, Ni, В, Ti,
- источник воды, обычно стерильной, необходимой для всех форм жизни,
- pH буфер, который может быть представлен KH2PO4.
Если один из данных компонентов не присутствует, бактерии не растут, поскольку они не могут сами по себе компенсировать его отсутствие.
В качестве примера ферментационной среды, подходящей для роста микроорганизма согласно изобретению, можно, в частности, упомянуть среду, представленную ниже в данном документе в примере 1.
Эффективное количество рассматриваемого микроорганизма согласно изобретению вводят туда, и целую смесь помещают в условия, подходящие для размножения указанного организма.
Для получения лизата бактерий, принадлежащих роду Vitreoscilla sp., в полной ферментационной среде согласно способу, включающему стадию культивирования указанных бактерий, специалисты в данной области могут ссылаться, в частности, на пример 1.
Преимущественно, для получения активного агента согласно изобретению, т.е. лизата бактерий, принадлежащих роду Vitreoscilla sp., в полной ферментационной среде, биомассу (бактериальные клетки после фазы роста, находящиеся в среде, в которой их культивировали) замораживают, например, при температуре -20°, и затем стерилизуют, предпочтительно, нагреванием, в частности, подвергая ранее замороженную биомассу стадии нагревания при температуре 100°C. Для наглядности, стадию стерилизации биомассы можно проводить посредством автоклавирования, например, при температуре 121°C.
Как следует из указанного выше, по окончании данного культивирования указанного микроорганизма последний превращается в форму лизата непосредственно в ферментационной среде, которую применяли для его культивирования.
Лизис бактерий для получения активного агента согласно изобретению
Лизат обычно обозначает материал, полученный после разрушения или растворения биологических клеток посредством явления, известного как клеточный лизис, таким образом, приводя к высвобождению внутриклеточных и клеточных биологических компонентов, содержащихся в естественных условиях в рассматриваемых биологических клетках.
В контексте настоящего изобретения термин "лизат" обозначает весь лизат, полученный посредством лизиса рассматриваемого микроорганизма, а именно бактерии, принадлежащей к роду Vitreoscilla sp. (в частности, вида: Vitreoscilla filiformis).
Применяемый лизат, поэтому, образуется из всех ее внутриклеточных биологических компонентов, в частности ее метаболитов и компонентов клеточных стенок и мембран, образующихся во время лизиса ее клетки.
В контексте изобретения термин "метаболит" обозначает любое вещество, полученное в результате метаболизма рассматриваемого микроорганизма согласно изобретению.
Данный клеточный лизис можно осуществлять посредством разных методик, таких как, например, осмотический шок, тепловой шок, посредством обработки ультразвуком или в качестве альтернативы под механическим напряжением типа механического напряжения, возникающего при центрифугировании.
В частности, данный лизат можно получать согласно методике, описанной в патенте США 4464362 и, в частности, согласно следующему протоколу.
Ферментационную среду, использованную для культивирования рассматриваемого микроорганизма и поэтому содержащую указанный микроорганизм, подвергают разложению посредством ультразвука для высвобождения оттуда цитоплазматических и цитозольных фракций, фрагментов клеточной стенки и продуктов, являющихся результатом метаболизма данного микроорганизма. Все данные компоненты затем сохраняют там в своем естественном распространении в стабилизированной форме в "полной" ферментационной среде.
Следовательно, рассматриваемый активный агент согласно изобретению можно получать способом, включающим:
- культивирование по меньшей мере одной бактерии, принадлежащей к роду Vitreoscilla sp. (в частности, вид: Vitreoscilla filiformis), на ферментационной среде в условиях, подходящих для размножения указанной бактерии, и
- клеточный лизис указанных бактерий в указанной ферментационной среде.
Бактерии, принадлежащие к роду Vitreoscilla sp. (в частности, вид: Vitreoscilla filiformis)
Как описано выше, микроорганизм, рассматриваемый согласно изобретению, в форме лизата представляет собой несинтетическую нитчатую бактерию, как определено в классификации Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology (Vol.3, sections 22 and 23, 9th edition, 1989), и принадлежащую к роду Vitreoscilla sp. (в частности, вид: Vitreoscilla filiformis).
Как следует из примеров, представленных ниже в данном документе, авторы изобретения неожиданно открыли, что такая бактерия, используемая в форме своего лизата, приготовленная в полной ферментационной среде, как определено в настоящем изобретении, имеет свойства, с точки зрения эффективности, превосходящие свойства биомассы, полученной из той же ферментационной среды.
В частности, это бактерия, принадлежащая к роду Beggiatoa, Vitreoscilla, Flexithrix или Leucothrix.
Среди бактерий, которые можно применять, можно упомянуть, например, Vitreoscilla filiformis (ATCC 15551).
Согласно одному предпочтительному варианту изобретения это бактерия Vitreoscilla filiformis.
Применения
Как ранее указано, рассматриваемый активный агент согласно настоящему изобретению является особенно преимущественным с точки зрения своей эффективности относительно определенных расстройств в области косметологии, связанных с состояниями кожи головы, связанными с появлением перхоти, ассоциированными с преобладанием патогенных микроорганизмов на коже головы и/или дисбалансом экофлоры кожи головы.
Активный агент согласно изобретению преимущественно применяют в целях лечения и/или предотвращения состояний, связанных с появлением перхоти, и ассоциированных расстройств кожи головы.
Таким образом, кожа головы, демонстрирующая избыточную сухость или избыточную секрецию кожного сала, может проявляться в состоянии, связанном с появлением перхоти, которое, в зависимости от случая, может характеризоваться наличием сухих или жирных хлопьев перхоти, или даже почесухой и/или воспалением эпидермиса.
Состояния, связанные с появлением перхоти сухого типа, отражают патологическую сухость кожи головы, которая может объединяться с чрезмерно быстрым обновлением ее рогового слоя.
Хлопья перхоти сухого типа обычно небольшие и белые или серые, и покрывают кожу головы и одежду, являясь причиной неэстетического визуального эффекта.
Относительно состояний, связанных с появлением перхоти, жирного типа, они проявляются в одной из субпатологических форм себорейного дерматита.
При состояниях кожи головы, связанных с появлением перхоти, у кожного барьера нарушен баланс, нарушены его целостность и увлажненность, а ее экофлора подорвана. Кожа головы раздражена и вызывает зуд, уязвима, менее увлажнена и чувствительна к инфицированию.
Как выходит из примеров ниже в данном документе, настоящее изобретение преимущественно позволяет получить новый активный агент, который особенно эффективен относительно состояний, связанных с появлением перхоти.
Преимущественно, активный агент согласно изобретению способен снижать риск возникновения побочных эффектов.
Рассматриваемый активный агент согласно изобретению также преимущественно позволяет восстанавливать здоровую кожу головы, в оптимальном состоянии, и восстанавливать сбалансированную экофлору.
Следовательно, применения в косметологии, косметические способы и композиции согласно изобретению оказываются самым особенным образом эффективными:
- для улучшения гигиены и/или ухода за кожей головы, и в частности
- для предупреждения и/или лечения состояний кожи головы, связанных с появлением перхоти, будь они сухого, или жирного типа,
- для предупреждения и/или лечения расстройств, в частности расстройств, связанных с эстетикой, кожи головы, ассоциированных с избыточной экскрецией и/или секрецией кожного сала,
- для придания коже головы ощущения хорошего самочувствия,
- для улучшения ощущения комфорта кожи головы,
- для улучшения и/или восстановления эндогенной противомикробной защиты кожи головы,
- для предупреждения и/или усиления целостности барьерных функций кожи головы,
- для восстановления сбалансированной экофлоры кожи головы, и/или
- для предупреждения и/или лечения почесухи и зуда источника себореи, ассоциированных с состояниями кожи головы, связанными с появлением перхоти.
В общем, настоящее изобретение направлено на композицию, содержащую в качестве единственного активного агента против перхоти лизат бактерии или бактерий, относящихся к роду Vitreoscilla sp., в полной ферментационной среде.
Однако изобретение также направлено на композицию, содержащую дополнительно к лизату согласно изобретению в полной ферментационной среде по меньшей мере один отличный дополнительный активный агент против перхоти и/или по меньшей мере один дополнительный косметический активный агент.
Дополнительный косметический активный агент
Способ согласно изобретению может включать введение по меньшей мере одной трети косметического активного агента, дополнительно к введению активного агента согласно изобретению возможно в форме, объединенной с активным агентом против перхоти.
Преимущественно, такой дополнительный косметический активный агент может быть предназначен для оказания косметического действия, осуществления ухода или оказания гигиенического действия на кожу головы или даже может быть предназначен для усиления кожного барьера кожи головы.
Он может, в частности, включать пробиотический микроорганизм и/или его фракцию, и/или его метаболит, который отличается от указанной бактерии, рассматриваемой в активном агенте согласно изобретению, и/или от полной культуры данного микроорганизма.
Пробиотические микроорганизмы
В контексте настоящего изобретения термин "пробиотический микроорганизм" означает живой организм, который, при потреблении в подходящем количестве, оказывает положительное действие на здоровье своего хозяина (Joint FAG/WHO Expert Consultation on Evaluation of Health and Nutritional Properties of Probiotic in Food Including Powder Milk with Live Lactic Acid Bacteria, 6 October 2001), и который может, в частности, улучшать кишечный микробный баланс.
Согласно одному воплощению пробиотический микроорганизм, который является подходящим для изобретения, может быть выбран из Lactobacillus sp., Bifidobacterium sp., Cocci, дрожжей и спорообразующих бактерий и их смесей.
Согласно одному воплощению микроорганизм, который является подходящим для изобретения, предпочтительно выбран из:
- молочнокислых бактерий: которые образуют молочную кислоту посредством сбраживания сахара. Согласно их морфологии они делятся на две группы:
Вид Lactobacillus: Lactobacillus acidophilus, amylovorus, casei, rhamnosus, brevis, crispatus, delbrueckii fsubsp. bulgaricus, lactis), fermentum, helveticus, gallinarum, gasseri, johnsonii, plantarum, reuteri, salivarius, alimentarius, curvatus, casei subsp. casei, sake, и
Кокки: Enterococcus (faecalis, faecium), Lactococcus lactis (subsp. lactis или cremoris), Leuconostoc mesenteroides subsp. dextranicum, Pediococcus acidilactici, Sporolactobacillus inulinus, Streptococcus salvarius subsp. thermophilus, Streptococcus thermophilus, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus xylosus,
- бифидобактерии или вид Bifidobacterium: Bifidobacteriufn adolescentis, animalis, bifidum, breve, lactis, longum, infantis, pseudocatenulatum,
- дрожжи: Saccharomyces (cerevisiae или boulardii),
- другие спорообразующие бактерии: Bacillus (cereus var. toyo или subtilis), Bacillus coagulans, Bacillus licheniformis, Escherichia coli штамм nissle, Propionibacterium freudenreichii,
- и их смеси.
Микроорганизм, который подходит для изобретения, может быть выбран, в частности, из аскомицетов, таких как Saccharomyces, Yarrowia, Kluyveromyces, Torulaspora, Schizosaccharomyces pombe, Debaromyces, Candida, Pichia, Aspergillus и Penicillium, бактерий родов Bifidobacterium, Bacteroides, Fusobacterium, Melissococcus, Propionibacterium, Enterococcus, Lactococcus, Staphylococcus, Peptostrepococcus, Bacillus, Pediococcus, Micrococcus, Leuconostoc, Weissella, Aerococcus, Oenococcus и Lactobacillus, и их смесей.
В качестве других примеров пробиотических микроорганизмов, которые подходят для изобретения, можно упомянуть Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium pseudocatenulatum, Lactobacillus acidophilus NCFB 1748; LactobaciHus amylovoi’us, Lactobacillus casei (Shirota), Lactobacillus rhamnosus штамм GG, Lactobacillus brevis, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus gallinarum, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus johnsonii CNCM 1-1225, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus alimentarius, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus casei subsp. casei, Lactobacillus sake, Lactococcus lactis, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Lactococcus lactis subsp. lactis, Lactococcus lactis subsp.cremoris, Leuconostoc mesenteroides subsp.dextranicum, Pediococcus acidilactici, Sporolactobacillus inulinus, Streptococcus salvarius subsp. thermophilus, Streptococcus thermophilus, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus xylosus, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardii, Bacillus cereus var. toyo, Bacillus cereus var. subtilis, Bacillus coagulans, Bacillus licheniformis, Escherichia coli штамм nissle и Propionibacterium freudenreichii, и их смеси.
В частности, это может быть пробиотическим микроорганизмом, выбранным из Lactobacillus sp., Sporolactobacillus sp., Enterococcus sp., Lactococcus sp., Bacillus sp., Streptococcus sp., Pediococcus sp., Leuconostoc sp. и Bifidobacterium sp., и, в частности, выбранным из Lactobacillus sp. и Bifidobacterium sp., и их смесей.
Для иллюстрации данных пробиотических микроорганизмов, можно упомянуть, в частности, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus casei, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium adolescentis и Bifidobacterium pseudocatenulatum и их смеси.
Виды, которые самым лучшим образом подходят, представляют собой Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus paracasei, Bifidobacterium adolescentis и Bifidobacterium longum, которые депонировали соответственно согласно Будапештскому договору, в институте Пастера (28 rue du Docteur Roux, F-75024 Paris cedex 15) 06/30/92, 01/12/99, 04/15/99 и 04/15/99 под следующими номерами CNCM 1-1225, CNCM 1-2116, CNCM 1-2168 и CNCM 1-2170, и род Bifidobacterium lactis (Bb 12) (ATCC27536) или Bifidobacterium longum (BB536). Штамм Bifidobacterium lactis (ATCC27536) можно получить от Hansen (Chr. Hansen A/S, 10-12 BoegeAlle, P.O. Box 407, DK-2970 Hoersholm, Дания).
Преимущественно, микроорганизм, который подходит для изобретения, в качестве вторичного активного агента, может быть молочнокислым пробиотическим микроорганизмом.
Согласно одному предпочтительному воплощению пробиотический микроорганизм, который подходит для изобретения, может, в частности, представлять собой микроорганизм рода Lactobacillus sp.
Предпочтительно, микроорганизм рода Lactobacillus sp, который подходит для изобретения, может быть выбран из видов Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus paracasei и Lactobacillus casei, и их смесей.
Согласно одному предпочтительному воплощению микроорганизм, который подходит для изобретения, может представлять собой Lactobacillus paracasei.
Микроорганизм, пригодный для изобретения, может, в частности, представлять собой штамм Lactobacillus paracasei ST11, депонированный согласно Будапештскому договору, в институте Пастера (28 rue du Docteur Roux, F-75024 Paris cedex 15) 01/12/99 под номером CNCM 1-2116, и/или его фракцию и/или его метаболит.
Согласно другому предпочтительному воплощению пробиотический микроорганизм, который подходит для изобретения, может, в частности, представлять собой микроорганизм рода Bifidobacterium sp., и, в частности, Bifidobacterium longum, в частности Bifidobacterium longum (BB536).
Такой микроорганизм может быть приготовлен в виде композиции в соотношении по меньшей мере 0,0001%, выраженном на сухую массу, в частности в соотношении от 0,0001 до 20% и в частности в соотношении от 0,001 до 15 мас.%, в частности от 0,01 до 10 мас.% и в частности от 0,1 до 2 мас.% относительно общей массы композиции, содержащей его.
Галеновая композиция
Композицию, содержащую активный агент согласно изобретению, можно вводить перорально или местно.
Композиция согласно изобретению преимущественно содержит количество лизата бактерии или бактерий, принадлежащих роду Vitreoscilla sp, в полной ферментационной среде, варьирующее от 0,001 до 10 мас.%, относительно общей массы сухого экстракта указанной композиции. В конкретных воплощениях композиция согласно изобретению преимущественно содержит количество лизата бактерии или бактерий, принадлежащих роду Vitreoscilla sp, в полной ферментационной среде, варьирующее от 0,01 до 5 мас.% относительно общей массы сухого экстракта указанной композиции. В других воплощениях композиция согласно изобретению преимущественно содержит количество лизата бактерии или бактерий, принадлежащих роду Vitreoscilla sp, в полной ферментационной среде, варьирующее от 0,1 до 1 мас.% относительно всей массы сухого экстракта указанной композиции.
Поэтому она может находиться в любой из галеновых форм, обычно доступных при выбранном способе введения.
Подложка может быть разной природы, в зависимости от типа рассматриваемой композиции.
В частности, в отношении композиций, предназначенных для наружного местного применения, они могут быть водными, водно-спиртовыми или масляными растворами, растворами или дисперсиями типа лосьона или сыворотки, эмульсиями жидкой или полужидкой консистенции типа молока, полученными диспергированием жирной фазы в водной фазе (М/В) или, наоборот (В/М), или суспензиями, или эмульсиями мягкой, полутвердой или твердой консистенции типа крема, водными, или безводными гелями, микроэмульсиями, микрокапсулами, микрочастицами, или везикулярными дисперсиями ионного и/или неионного типа.
Данные композиции получают согласно традиционным способам.
Данные композиции могут, в частности, составлять очищающие, защитные, лечебно-оздоровительные кремы или кремы для ухода, лосьоны для ухода за кожей головы, гели или муссы, например очищающие или обеззараживающие лосьоны для кожи головы.
Их можно также применять для кожи головы в форме растворов, кремов, гелей, эмульсий или муссов, или в качестве альтернативы в форме аэрозольных композиций, также содержащих находящийся под давлением пропеллант.
Композиция для местного применения согласно изобретению может быть преимущественно приготовлена в любой галеновой форме, которая подходит для ухода за волосами, в частности в форме лосьона для волос, шампуня, в частности шампуня против перхоти, кондиционера для волос, средства для распутывания, крема для волос или геля, лака для укладки волос, лосьона для укладки волос, обрабатывающего лосьона, композиции для окрашивания (в частности, для окислительного окрашивания), возможно в форме оттеночного шампуня, лосьона для изменения структуры волос, композиции для перманентной завивки, лосьона или геля для борьбы с выпадением волос, противопаразитарного шампуня, лечебного шампуня, в частности, противосеборейного шампуня, или продукта для ухода за кожей головы, который, в частности, является не вызывающим раздражения, омолаживающим или меняющим структуру, или который активирует циркуляцию крови.
Когда композиция по изобретению представляет собой эмульсию, доля жирной фазы может находиться в интервале от 5 до 80 масс.% и предпочтительно от 10 до 50 масс.% относительно общей массы композиции. Масла, эмульгаторы и вспомогательные эмульгаторы, применяемые в композиции в форме эмульсии, выбраны из масел, эмульгаторов и вспомогательных эмульгаторов, традиционной применяемых в области косметологии и/или дерматологии. Эмульгатор и вспомогательный эмульгатор может находиться в композиции в соотношении, находящемся в интервале от 0,3 до 30 масс.% и предпочтительно от 0,5 до 20 масс.% относительно общей массы композиции.
Когда композиция по изобретению представляет собой масляный раствор или гель, жирная фаза может представлять более чем 90% общей массы композиции.
В известном смысле, галеновые формы, предназначенные для местного введения, могут также содержать адъюванты, которые являются обычными в области косметологии, фармацевтической области и/или области дерматологии, такие как гидрофильные или липофильные гелеобразующие агенты, гидрофильные или липофильные активные агенты, консерванты, антиоксиданты, растворители, ароматизаторы, наполнители, экранирующие агенты, поглотители запахов и красители. Количества данных разных адъювантов представляют собой количества, традиционно используемые в рассматриваемой области, например, от 0,01% до 20% общей массы композиции. В зависимости от их природы, данные адъюванты можно вводить в жирную фазу и/или в водную фазу.
В качестве жирных веществ, которые можно применять по изобретению, можно упомянуть минеральные масла, например, гидрированный полизобутен и жидкий нефтяной вазелин, растительные масла, например, жидкую фракцию масла из семян ши, подсолнечное масло и масло из косточек абрикоса, животные масла, например пергидросквален, синтетические масла, в частности пурцеллиновое масло, изопропилмиристат и этилгексилпальмитат, ненасыщенные жирные кислоты и фтормасла, например, простые перфторполиэфиры. Также возможно применять жирные спирты, жирные кислоты, например, стеариновую кислоту и, например, воска, в частности, парафиновый воск, карнаубский воск и пчелиный воск. Также возможно применять силиконовые соединения, например силиконовые масла и, например, циклометикон и диметикон, и силиконовые воска, смолы и силиконовые каучуки.
В качестве эмульгаторов, которые можно применять в изобретении, можно упомянуть, например, глицерилстеарат, полисорбат 60, смесь цетилстеарилового спирта/цетилстеарилового спирта, оксиэтиленированного 33 моль этиленоксида, продающуюся под названием Sinnowax АО® компанией Henkel, смесь ПЭГ (полиэтиленгликоль)-6/ПЭГ-32/гликоль стеарат, продающуюся под названием Tefose® 63 компанией Gattefosse, простой миристиловый эфир PPG-3, силиконовые эмульгаторы, такие как цетилдиметикон кополиол, и сорбитан моностеарат или тристеарат, ПЭГ-40 стеарат и оксиэтиленированный (20 ОЕ) сорбитан моностеарат.
В качестве растворителей, которые можно применять в изобретении, можно упомянуть низшие спирты, в частности этанол и изопропанол, и пропиленгликоль.
Композиция по изобретению может также преимущественно содержать ключевую и/или минеральную воду, выбранную, в частности, из воды Vittel, вод от Vichy Basin, и воды Roche Posay.
Гидрофильные гелеобразующие агенты, которые можно упомянуть, включают карбоксилсодержащие полимеры, такие как карбомер, акриловые сополимеры, такие как спополимеры акрилата и алкилакрилата, полиакриламиды и, в частности, смесь полиакриламида, С13-14 изопарафина и лаурет-7, продающуюся под названием Sepigel 305® компанией SEPPIC, полисахариды, например, производные целлюлозы, такие как гидроксиалкилцеллюлозы, и, в частности, гидроксипропилцеллюлозу и гидроксиэтилцеллюлозу, природные камеди, такие как гуаровая камедь, камедь бобов рожкового дерева и ксантановая камедь, и глины.
Липофильные гелеобразующие агенты, которые можно упомянуть, включают модифицированные глины, например, бентонитовые глины, соли металлов жирных кислот, например, стеараты алюминия, и гидрофобный диоксид кремния или еще этилцеллюлозу и полиэтилен.
Способ косметического лечения
Как показано ранее, способ согласно изобретению можно реализовывать местно, в частности, посредством применения для кожи головы по меньшей мере одного лизата бактерии, принадлежащей роду Vitreoscilla sp. (в частности, вид: Vitreoscilla filiformis), в полной ферментационной среде, в качестве активного агента для предупреждения и/или лечения состояний кожи головы, связанных с появлением перхоти, в частности состояний, связанных с появлением перхоти, ассоциированных с размножением патогенных микроорганизмов на коже головы и/или дисбалансом экофлоры кожи головы и, в частности, косметической композиции, как определено ранее.
Преимущественно, способ по изобретению посредством местного применения может включать применение композиции согласно изобретению, например, в форме очищающих кремов, лосьонов для ухода за кожей головы или для профилактического ухода или гелей, гелей для ухода за кожей головы или муссов, например, очищающих или обеззараживающих лосьонов или шампуней. Согласно одному варианту реализации способ по изобретению может включать местное применение для кожи головы по меньшей мере одного активного агента согласно изобретению, например, в форме шампуня, гелей, сывороток или лосьонов.
Способ местного введения косметического средства согласно изобретению можно осуществлять, например, ежесуточно, с частотой, например, одно введение в сутки или одно введение дважды в сутки, например, один раз утром и один раз вечером.
Способ местного введения косметического средства можно осуществлять на протяжении периода времени, находящегося в интервале от одной недели до нескольких недель, или даже нескольких месяцев, причем данный период, более того, возможно повторяют после периодов без лечения, в течение нескольких месяцев или даже нескольких лет.
Как пример, местное введение соединения согласно изобретению можно повторять, например, от 2 до 3 раз в неделю или чаще, и, как правило, на протяжении продолжительного периода, составляющего по меньшей мере 4 недели или даже от 4 до 15 недель с, если целесообразно, одним или более чем одним периодом прерывания.
В описании и примерах, которые следуют ниже, если не указано особо, проценты представляют собой массовые проценты, а интервалы значений, написанные в форме "между… и…", включают установленные нижние и верхние пределы.
Примеры представлены ниже в данном документе в качестве неограничивающих иллюстраций области изобретения.
Примеры
Пример 1 Получение активного агента согласно изобретению
Полную ферментационную среду получают посредством культивирования штамма Vitreoscilla filiformis в своей полной культуральной среде.
Исходная культуральная среда для получения полной ферментационной среды имеет состав, описанный ниже в таблице 1.
Для получения косметического активного агента согласно изобретению, т.е. в данном примере лизата бактерий Vitreoscilla filiformis в полной ферментационной среде, осуществляли способ, как описано ниже в данном документе.
Штамм Vitreoscilla filiformis получали из АТСС (Американская коллекция типовых культур) (штамм 15551). Данный штамм культивировали в определенной культуральной среде, 2BHG2, состав которой дан выше.
Биомассу получают посредством длительного культивирования в биореакторе с рабочей емкостью 3000 литров. Скорость роста приблизительно 70% μmax (μ=0,12 ч-1) записывают во время продолжительной продуктивной фазы. В течение данной стадии контролируют pH (7,00), температуру (26°C) и растворенный кислород (0,5%). Экстракцию и отделение клеток получают посредством центрифугирования (10000 г/20 мин).
Биомассу замораживают при -20°C, затем упаковывают в пакеты (нарушая стерильность) и стабилизируют посредством стерилизации при 121°C в течение 30 мин. Тогда биомасса называется Vfe.
Анализы технических характеристик биомассы выглядят следующим образом:
- Фиксированный остаток при 105°C (г/100 г): от 4,0 до 4,5%
- общее содержание азота относительно AM (аммоний): от 10,0 до 14,0%
- Микробиология 0 микроорганизм/г
- содержание 3-гидроксимасляной кислоты: от 2 до 10 г/л (<10 г/л)
- pH раствора фактически: от 4 до 5.
Ферментационная среда представляет собой полную культуру, полученную во время продолжительной ферментации. Глюкозу в начальной среде потребляли микроорганизмы (процесс, контролируемый на микроуровне, с помощью источника углерода), так же как и разные элементы пептонов и дрожжевого экстракта, которыми обеспечили в начале. Ферментационную среду, тестируемую в настоящий момент, отбирают непосредственно из ферментера и затем подвергают схеме стерилизации.
FM, которая представляет собой неконцентрированную полную культуру (от 0,7 до 0,9% DM), автоклавируют (30 мин, 121°C), как и лизат (от 4,0 до 4,5% DM).
В примерах, которые следуют ниже, активный агент согласно изобретению (лизат бактерий Vitreoscilla filiformis в полной ферментационной среде, также обозначаемой "FM"), а также сравнительный активный агент, состоящий из выделенного бактериального лизата в отсутствии полной ферментационной среды, являлись предметом клинических испытаний на головах для проверки их активности, направленной против перхоти, по сравнению с контрольной композицией шампуня против перхоти. Две контрольных композиции шампуня против перхоти, в частности, тестировали, причем соответственно первая контрольная композиция шампуня содержала октопирокс, а вторая контрольная композиция шампуня содержала ZnPT.
Пример 2
В примере 2 сравнивали действия, оказываемые на состояния кожи головы, связанные с появлением перхоти, (i) композиции шампуня, содержащей активный агент против перхоти согласно изобретению (лизат бактерий Vitreoscilla filiformis в полной ферментационной среде, полученный согласно примеру 1) и (ii) контрольной композиции шампуня против перхоти, не содержащей активного агента против перхоти согласно изобретению, содержащей традиционный активный агент против перхоти (ZnPT).
Таким образом, лизат бактерий в полной ферментационной среде (активный агент против перхоти согласно изобретению), как получено в примере 1, применяют в качестве активного агента против перхоти в композиции шампуня, основной состав которой описан ниже в таблице 2.
Проводили несколько клинических исследований,
- клиническое исследование 1, соответствующее фиг.1,
- клиническое исследование 2, соответствующее фиг.2,
- клиническое исследование 3, соответствующее фиг.3-11.
Композиция шампуня, применяемая в клиническом исследовании 3, таблицы 2 содержит 2 масс.% активного агента против перхоти согласно изобретению (лизат бактерий в полной ферментационной среде, в концентрации 160 г/л) относительно общей массы композиции, т.е. 0,32 масс.% указанного активного агента против перхоти относительно общей массы сухого экстракта указанной композиции.
Равным образом, композиция шампуня, применяемая в клиническом исследовании 3, содержит 1 масс.% активного агента против перхоти согласно изобретению (лизат бактерий в полной ферментационной среде, в концентрации 160 г/л) относительно общей массы композиции, т.е. 0,16 масс.% указанного активного агента против перхоти относительно общей массы сухого экстракта указанной композиции.
Равным образом, композиция шампуня, применяемая в клиническом исследовании 1, содержит 2,5 масс.% и 5 масс.% активного агента бактериального лизата (лизат бактерий, не содержащий полной ферментационной среды) относительно общей массы композиции, т.е. соответственно 0,1075 масс.% и 0,215 масс.% указанного активного агента относительно общей массы сухого экстракта указанной композиции.
Равным образом, композиция шампуня, применяемая в клиническом исследовании 2, содержит 20 масс.% активного агента против перхоти согласно изобретению (лизат бактерий в полной ферментационной среде, в концентрации 7,5 г/л) относительно общей массы композиции, т.е. 0,14 масс.% указанного активного агента против перхоти относительно общей массы сухого экстракта указанной композиции.
Описано, что количество в виде масс.% лизата в своей полной ферментационной среде находится в интервале от 0,1% до 0,5% в расчете на сухой экстракт.
Посредством сравнения тестировали контрольную композицию шампуня, описанную ниже в таблице 3, которая содержит цинк пиритион (ZnPT) в качестве активного агента против перхоти в концентрации 2 масс.% относительно общей массы композиции, т.е. 1 масс.% цинк пиритиона относительно общей массы сухого экстракта указанной композиции.
Протокол
Лечение заключается в местном применении формулы, тестируемой в течение четырех недель.
Клиническое исследование 1:
Данное исследование проводили для сравнения (i) шампуня, содержащего выделенный бактериальный лизат, не содержащий полной ферментационной среды, применяемый в концентрации 2,5 масс.% (что соответствует 0,1075% сухого экстракта), (ii) шампуня, содержащего выделенный бактериальный лизат, не содержащий полной ферментационной среды, применяемый в концентрации 5 масс.% (что соответствует 0,215% сухого экстракта) и (iii) контрольной формулы шампуня против перхоти.
Данное исследование проводили на 60 субъектах, являющихся взрослыми мужчинами, в возрасте между 18 и 60, у которых после клинической оценки идентифицировали состояние, связанное с появлением перхоти, классифицируемое от умеренного до тяжелого в соответствии с количеством баллов, выше или равным 5 (по шкале от 0 до 9), в присутствии чешуек, прилипающих к по меньшей мере двум четвертям головы, и покраснения кожи головы.
60 субъектов разбивали на три параллельные группы по 20 субъектов, причем каждую из групп лечили только одной из двух композиций + контрольная группа.
Клиническое исследование 2:
Данное исследование проводили для сравнения (i) шампуня, содержащего активный агент по изобретению в концентрации 20 масс.% (что соответствует 0,14% сухого экстракта), и (ii) контрольной формулы шампуня. Активный агент по изобретению находится в форме в концентрации 7,5 г/л.
Данное исследование проводили на 42 субъектах, являющихся взрослыми мужчинами, в возрасте между 18 и 60, у которых после клинической оценки идентифицировали их состояние, связанное с появлением перхоти, классифицируемое от умеренного до тяжелого в соответствии с количеством баллов выше или равным 5 (по шкале от 0 до 9) в присутствии чешуек, прилипающих к по меньшей мере двум четвертям головы, и покраснения их кожи головы.
42 субъекта разбивали на три параллельные группы по 21 субъекту, причем одну группу лечили композицией, имеющей активный агент по изобретению, + одну контрольную группу лечили контрольным активным агентом против перхоти.
Клиническое исследование 3:
Данное исследование проводили для сравнения (i) шампуня, содержащего активный агент по изобретению в концентрации 0,16% в расчете на сухой экстракт, (ii) шампуня, содержащего активный агент по изобретению в концентрации 0,32% в расчете на сухой экстракт, и (iii) контрольной формулы шампуня, содержащей цинк пиритион в концентрации 1% в расчете на сухой экстракт. Активный агент по изобретению находится в форме в концентрации 160 г/л.
Данное исследование проводили на 67 субъектах, являющихся взрослыми мужчинами, в возрасте между 18 и 60, у которых после клинической оценки идентифицировали их состояние, связанное с появлением перхоти, классифицируемое от умеренного до тяжелого в соответствии с количеством баллов выше или равным 5 (по шкале от 0 до 9) в присутствии чешуек, прилипающих к по меньшей мере двум четвертям головы, и покраснения их кожи головы.
67 субъектов разбивали на 3 параллельные группы из 22 субъектов, причем каждую из групп лечили только одной из двух композиций + контрольная группа.
Клиническая оценка состояния кожи головы, связанного с появлением перхоти (баллы).
Действия, оказываемые на перхоть, тестировали и оценивали с помощью сравнения групп на D2, D7, D15, D21 и D28 посредством клинических оценок, проводимых относительно следующих параметров: свободные хлопья перхоти, прилипшие чешуйки и покраснение, и считали суммарный балл.
Данные оценки выполняли квалифицированные дерматологи согласно методикам, обычно используемым в данной области.
Во время каждого визита состояние, связанное с появлением перхоти, свободные хлопья перхоти и прилипшие чешуйки оценивали в баллах, для каждого пункта, с использованием шкалы 0-9, причем балл 0 присваивали в отсутствии состояния, связанного с появлением перхоти, а балл 9 присваивали в случае очень тяжелого состояния, связанного с появлением перхоти.
Результаты выражают как различие между (i) значением балла перед началом лечения и (ii) значением балла во время каждого измерения.
Самооценка состояния кожи головы, связанного с появлением перхоти, самими субъектами.
Действия, оказываемые на перхоть, тестировали и оценивали с помощью сравнения групп на Д2, Д7, Д15, Д21 и Д28 посредством клинических самооценок, проводимых самими субъектами. Данные самооценки показывают "Мнение субъектов".
Результаты выражают значением балла, присвоенного самим субъектом, при самооценке состояния, связанного с появлением перхоти.
Клиническая оценка зуда кожи головы.
Действия, оказываемые на зуд кожи головы, тестировали и оценивали с помощью сравнения групп на Д2, Д7, Д15, Д21 и Д28 посредством клинических оценок, проводимых согласно традиционному протоколу.
Данные оценки проводили квалифицированные дерматологи согласно методикам, обычно используемым в данной области.
Во время каждого визита зуд кожи головы оценивали в баллах с использованием шкалы 0-9, причем балл 0 присваивали в отсутствии зуда, а балл 9 присваивали в случае очень тяжелого зуда.
Результаты выражают различием между (i) значением балла перед началом лечения и (ii) значением балла во время каждого измерения.
Результаты
Полученные результаты показаны на фиг.1-4.
На Фиг.1 показаны результаты сравнения действий на перхоть (i) шампуня, содержащего выделенный бактериальный лизат, не содержащий полной ферментационной среды, применяемый в концентрации 2,5 масс.% (что соответствует 0,1075% сухого экстракта), (ii) шампуня, содержащего выделенный бактериальный лизат, не содержащий полной ферментационной среды, применяемый в концентрации 5 масс.% (что соответствует 0,215% сухого экстракта), и (iii) контрольной формулы шампуня против перхоти.
Из сравнения результатов фиг.1 выходит, что две композиции шампуня, содержащие выделенный бактериальный лизат, применяемый в концентрации 0,1075% и 0,215% в расчете на сухой экстракт, дают, каждая, суммарный балл, который значительно ниже, чем суммарный балл, полученный с контрольной композицией шампуня. Следовательно, результаты фиг.1 показывают, что композиции шампуня, содержащие выделенный бактериальный изолят, не содержащий ферментационную среду, оказывает очень слабое и даже фактически нулевое противоперхотное действие по сравнению с контрольной формулой шампуня.
На Фиг.2 показаны результаты сравнения действий на перхоть (i) шампуня, содержащего активный агент по изобретению в концентрации 20 масс.% (что соответствует 0,14% сухого экстракта) и (ii) контрольной формулы шампуня.
Результаты фиг.2 показывают, что композиция шампуня согласно изобретению проявляет активность, направленную против перхоти, которая эквивалентна активности, направленной против перхоти, контрольной формулы, причем это справедливо при эквивалентной концентрации 0,14% в расчете на сухой экстракт, т.е. при концентрации активного агента, для которой наблюдают слабое действие или отсутствие действия в случае сравнительных композиций шампуня, содержащих выделенный бактериальный лизат, не содержащий полной ферментационной среды (см. результаты фиг.1).
На Фиг.3 показаны результаты сравнения действий на перхоть (i) шампуня, содержащего активный агент по изобретению в концентрации 0,16% в расчете на сухой экстракт, (ii) шампуня, содержащего активный агент по изобретению в концентрации 0,32% в расчете на сухой экстракт, и (iii) контрольной формулы шампуня, содержащей цинк пиритион в концентрации 1% в расчете на сухой экстракт.
Результаты фиг.3 показывают, что композиция шампуня, содержащая 0,16% активного агента согласно изобретению в расчете на сухой экстракт, оказывает противоперхотное действие, которое является эквивалентным противоперхотному действию контрольной композиции шампуня, которая содержит 1 масс.% традиционного активного агента (см. также статистическое исследование Примера 6).
На Фиг.4 показаны результаты сравнения действий, оказываемых на зуд кожи головы, (i) шампуня, содержащего активный агент по изобретению в концентрации 0,16% в расчете на сухой экстракт, (ii) шампуня, содержащего активный агент по изобретению в концентрации 0,32% в расчете на сухой экстракт, и (iii) контрольной формулы шампуня, содержащей цинк пиритион в концентрации 1 масс.%.
Результаты фиг.4 показывают, что композиция шампуня, содержащая 0,16% и 0,32% активного агента согласно изобретению в расчете на сухой экстракт, оказывает действие, направленное против зуда кожи головы, которое эквивалентно контрольной композиции шампуня, которая содержит 1 масс.% традиционного активного агента.
Пример 3
Негативные MIC данные, показывающие, что действие не является противогрибковым.
Тестируемый продукт приводят в контакт с суспензией Malassezia. Смесь наносят на поверхность агаризованной среды. Ее распределяют, а избыток извлекают перед инкубированием. Ее инкубируют в течение по меньшей мере 5 дней при 30°C.
Продукты помещают в раствор в жидкую модифицированную среду Leeming и Notman (LNm), и испытания проводят в двух повторностях. Концентрация полной культуры составляет 7,5 г/л или 150 г/л (концентрированный вариант) в расчете на сухое вещество.
Полную культуру тестировали при 10% (для концентрации 7,5 г/л) и при 1% (для концентрации 150 г/л).
Положительным контролем является 1% цинк пиритион.
Растворы продуктов являются концентрированными в два раза для того, чтобы учесть разведение в 1/2 во время приведения в контакт с суспензией Malassezia.
Штаммы Malassezia globosa и restricts получали на скошенных агарах и субкультивировали и инкубировали при 30°C до проведения тестов.
Суспензии получают в 15 мл забуференного раствора (ссыл. АЕВ611294, AES).
Плотность суспензий измеряют при 550 нм.
Противогрибковое действие контрольного продукта оценивают посредством отсутствия роста тестируемого штамма Malassezia. Данное ингибирование оценивают относительно контроля роста.
Ингибирование оценивают в баллах от 3 до 0 посредством оценки плотности культуры на поверхности агара по сравнению с контролем роста для штамма.
Продукты не оказывают какого-либо противогрибкового ингибирующего эффекта на Malassezia restricta или Malassezia globosa.
ПРИМЕР 4
Действие, оказываемое на состояние, связанное с появлением перхоти: мнение относительно суммарного балла за состояние, связанное с появлением перхоти, и относительно мнения субъектов в отношении перхоти.
В данном примере, противоперхотное действие композиции шампуня согласно изобретению оценивали по сравнению с контрольной композицией шампуня (содержащей цинк пиритион в качестве активного агента).
Лизат бактерий Vitreoscilla filiformis в полной ферментационной среде применяли в форме, концентрированной за счет упаривания, в концентрациях в расчете на сухой экстракт лизата, составляющих 0,16% и 0,32% в расчете на сухой экстракт.
Клиническая оценка состояния кожи головы, связанного с появлением перхоти (баллы).
Действия на перхоть тестировали и оценивали с помощью сравнения групп на Д0, Д7, Д15, Д21 и Д28 посредством клинических оценок, выполняемых относительно следующих параметров: свободные хлопья перхоти, прилипшие чешуйки и покраснение, и рассчитывали суммарный балл.
Данные оценки проводили квалифицированные дерматологи согласно методикам, обычно применяемым в данной области.
Во время каждого визита состояние, связанное с появлением перхоти, свободные хлопья перхоти и прилипшие чешуйки оценивали в баллах, для каждого пункта, с использованием шкалы 0-9, причем балл 0 присваивали в отсутствии состояния, связанного с появлением перхоти, а балл 9 присваивали в случае очень тяжелого состояния, связанного с появлением перхоти.
Субъектов разных групп также просили проводить самооценки. Данные самооценки описаны как "Мнение субъектов".
Результаты приведены на фиг.5-9.
На фиг.5, 6, 8 и 9 результаты выражают в абсолютных значениях балла при каждом оценивании.
На фиг.7 результаты выражают как разницу между (i) значением балла перед началом лечения и (ii) значением балла во время каждого измерения.
На фиг.5 показаны результаты сравнения суммарных баллов, полученные с применением композиции шампуня согласно изобретению, содержащей 0,16 масс.% активного агента (бактериальный лизат в полной ферментационной среда) относительно общей массы сухого экстракта композиции. Контрольная сравнительная композиция содержит 1 масс.% ZnPT в качестве активного агента относительно общей массы сухого экстракта.
На фиг.6 показаны результаты сравнения суммарных баллов, полученные с применением композиции шампуня согласно изобретению, содержащей 0,32 масс.% активного агента (бактериальный лизат в полной ферментационной среде) относительно общей массы сухого экстракта композиции. Контрольная сравнительная композиция содержит 1 масс.% ZnPT в качестве активного агента относительно общей массы сухого экстракта.
На фиг.8 показаны результаты сравнения мнений подвергнутых лечению пациентов, полученные с применением композиции шампуня согласно изобретению, содержащей 0,16 масс.% активного агента (бактериальный лизат в полной ферментационной среде) относительно общей массы сухого экстракта композиции. Контрольная сравнительная композиция содержит 1 масс.% ZnPT в качестве активного агента относительно общей массы сухого экстракта.
На фиг.9 показаны результаты сравнения мнений подвергнутых лечению пациентов, полученные с применением композиции шампуня по изобретению, содержащей 0,32 масс.% активного агента (бактериальный лизат в полной ферментационной среде) относительно общей массы сухого экстракта композиции. Контрольная сравнительная композиция содержит 1 масс.% ZnPT в качестве активного агента относительно общей массы сухого экстракта.
На фиг.7 показаны результаты сравнения различий в суммарном балле, полученные (i) с применением композиции шампуня согласно изобретению, содержащей 0,16 масс.% активного агента (бактериальный лизат в полной ферментационной среде) относительно общей массы сухого экстракта композиции, и (ii) с применением композиции шампуня согласно изобретению, содержащей 0,32 масс.% активного агента (бактериальный лизат в полной ферментационной среде) относительно общей массы сухого экстракта композиции. Контрольная сравнительная композиция содержит 1 масс.% активного агента относительно общей массы сухого экстракта.
Все результаты примера 6 показывают, что композиция шампуня согласно изобретению, которая содержит 0,16% активного агента против перхоти, имеет активность, которая по меньшей мере идентична и даже слегка выше, чем у контрольной композиции шампуня, которая содержит 1% традиционного активного агента против перхоти.
Все результаты примера 6 показывают, что композиция шампуня согласно изобретению, которая содержит 0,32% активного агента против перхоти, имеет активность, которая по меньшей мере идентична и даже слегка выше, чем у контрольной композиции шампуня, которая содержит 1% традиционного активного агента против перхоти.
Статистический анализ:
Полная культура в концентрации 0,32% в расчете на сухой экстракт никогда значимо не отличается от ZnPT в концентрации 1% в расчете на сухой экстракт.
Принимая во внимание множественность тестов (3 сравнения), полная культура в концентрации 0,16% в расчете на сухой экстракт никогда значимо не отличается от ZnPT в концентрации 1% в расчете на сухой экстракт.
Две композиции полной культуры с концентрацией 0,32% в расчете на сухой экстракт и 0,16% в расчете на сухой экстракт значимо не отличаются.
Пример 5
Действие на состояние, связанное с появлением перхоти: мнение субъектов относительно зуда.
В данном примере противоперхотное действие композиции шампуня согласно изобретению оценивали по сравнению с контрольной композицией шампуня (содержащей цинк пиритион в качестве активного агента).
Лизат бактерий Vitreoscilla filiformis в полной ферментационной среде применяли в форме, концентрированной при упаривании, в концентрациях в расчете на сухой экстракт лизата 0,16% и 0,32% в расчете на сухой экстракт.
Действия, оказываемые на зуд кожи головы, тестировали и оценивали с помощью сравнения групп на D2, D7, D15, D21 и D28 посредством клинических оценок, выполняемых согласно традиционному протоколу.
Данные оценки проводили квалифицированные дерматологи согласно методикам, обычно применяемым в данной области.
Результаты даны на фиг.10 и 11.
На Фиг.10 показаны результаты сравнения действий на зуд кожи головы (мнение субъектов), полученные с применением композиции шампуня согласно изобретению, содержащей 0,32 масс.% активного агента (бактериальный лизат в полной ферментационной среде) относительно общей массы сухого экстракта композиции. Контрольная сравнительная композиция содержит 1 масс.% активного агента относительно общей массы сухого экстракта.
На Фиг.11 показаны результаты сравнения действий на зуд кожи головы (мнение субъектов), полученные при использовании композиции шампуня согласно изобретению, содержащей 0,16 масс.% активного агента (бактериальный лизат в полной ферментационной среде) относительно общей массы сухого экстракта композиции. Контрольная сравнительная композиция содержит 1 масс.% активного агента относительно общей массы сухого экстракта.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| РИБОСОМНАЯ ФРАКЦИЯ И КОМПОЗИЦИЯ, ЕЕ СОДЕРЖАЩАЯ | 1996 |
|
RU2170584C2 |
| КОСМЕТИЧЕСКАЯ КОМБИНАЦИЯ МИКРООРГАНИЗМА И ПРОИЗВОДНОГО ФИТОСФИНГОЗИНА | 2009 |
|
RU2428967C1 |
| ШТАММ LACTOBACILLUS CRISPATUS KBL693 И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2019 |
|
RU2791561C2 |
| КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ПРОБИОТИЧЕСКИЕ БАКТЕРИИ ИЛИ ИХ КОМПОНЕНТЫ, И СПОСОБ ЕЕ ПРИМЕНЕНИЯ В ЛЕЧЕНИИ ИММУННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ КОЖИ | 2017 |
|
RU2699540C2 |
| ШТАММ Lactobacillus gasseri KBL697 И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | 2019 |
|
RU2798872C2 |
| ПРИМЕНЕНИЕ ЭКСТРАКТА ИЗ НЕФОТОСИНТЕЗИРУЮЩЕЙ НИТЧАТОЙ БАКТЕРИИ И СОДЕРЖАЩАЯ ЕГО КОМПОЗИЦИЯ | 1996 |
|
RU2188029C2 |
| СРЕДСТВО ДЛЯ ОЧИЩЕНИЯ И УХОДА ЗА ВОЛОСАМИ И КОЖЕЙ ВОЛОСИСТОЙ ЧАСТИ ГОЛОВЫ | 2021 |
|
RU2799443C2 |
| ПРОБИОТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ И СПОСОБ ЕЁ ПОЛУЧЕНИЯ | 2021 |
|
RU2790676C1 |
| МИКРОКАПСУЛЫ, СОДЕРЖАЩИЕ ЖИВЫЕ МИКРООРГАНИЗМЫ, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | 2017 |
|
RU2652277C1 |
| КОМПОЗИЦИЯ КОРМА ДЛЯ ДОМАШНИХ ЖИВОТНЫХ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ИХ КОЖИ ОТ ДЕЙСТВИЯ СВЕТА | 2003 |
|
RU2334404C2 |
Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно к косметическому применению лизата бактерии, принадлежащей роду Vitreoscilla, в полной ферментационной среде в качестве активного агента для предупреждения и/или лечения состояний кожи головы, связанных с появлением перхоти; к косметической и дерматологической композициям для предупреждения и/или лечения состояний кожи головы, связанных с появлением перхоти, включающей в физиологически приемлемой среде по меньшей мере один лизат бактерии, принадлежащей роду Vitreoscilla, в полной ферментационной среде, причем указанный лизат в полной ферментационной среде включен в указанную косметическую и дерматологическую композицию в количестве, находящемся в интервале от 0,001 до 10 мас.% относительно общей массы сухого экстракта указанной композиции; к косметическому способу предупреждения и/или лечения состояний кожи головы, связанных с появлением перхоти, включающему стадию введения индивидууму по меньшей мере одного лизата бактерии, принадлежащей роду Vitreoscilla, в полной ферментационной среде. 4 н. и 10 з.п. ф-лы, 11 ил., 10 табл., 5 пр.
1. Косметическое применение лизата бактерии, принадлежащей роду Vitreoscilla, в полной ферментационной среде в качестве активного агента для предупреждения и/или лечения состояний кожи головы, связанных с появлением перхоти, где полная ферментационная среда представляет собой всю или часть, с точки зрения количества, ферментационной среды, применяемой при ферментации указанной бактерии, и в которой последовательно проводили лизис клеток бактерии, и где лизат в полной ферментационной среде содержит цитоплазматические фракции, фрагменты клеточных стенок и метаболиты, образующиеся и/или высвобождающиеся во время клеточного лизиса указанной бактерии, и водорастворимые метаболиты, образующиеся и высвобождающиеся самопроизвольно бактерией в ходе ферментирования.
2. Применение по п. 1, где указанные состояния кожи головы, связанные с появлением перхоти, связаны с размножением патогенных микроорганизмов на коже головы и/или дисбалансом экофлоры кожи головы.
3. Применение по п. 1 или 2, где указанная бактерия представляет собой штамм Vitreoscilla filiformis.
4. Применение по п. 1 или 2, где указанная бактерия представляет собой штамм Vitreoscilla filiformis (АТСС 15551).
5. Косметическая композиция для предупреждения и/или лечения состояний кожи головы, связанных с появлением перхоти, включающая в физиологически приемлемой среде по меньшей мере один лизат бактерии, принадлежащей роду Vitreoscilla, в полной ферментационной среде, где полная ферментационная среда представляет собой всю или часть, с точки зрения количества, ферментационной среды, применяемой при ферментации указанной бактерии, и в которой последовательно проводили лизис клеток бактерии, и где лизат в полной ферментационной среде содержит цитоплазматические фракции, фрагменты клеточных стенок и метаболиты, образующиеся и/или высвобождающиеся во время клеточного лизиса указанной бактерии, и водорастворимые метаболиты, образующиеся и высвобождающиеся самопроизвольно бактерией в ходе ферментирования, причем указанный лизат в полной ферментационной среде включен в указанную косметическую композицию в количестве, находящемся в интервале от 0,001 до 10 мас.% относительно общей массы сухого экстракта указанной композиции.
6. Композиция по п. 5, где указанная бактерия представляет собой Vitreoscilla filiformis или Vitreoscilla beggiatoe.
7. Композиция по п. 5 или 6, которая находится в форме лосьона для волос, шампуня или кондиционера для волос.
8. Дерматологическая композиция для предупреждения и/или лечения состояний кожи головы, связанных с появлением перхоти, включающая в физиологически приемлемой среде по меньшей мере один лизат бактерии, принадлежащей роду Vitreoscilla, в полной ферментационной среде, где полная ферментационная среда представляет собой всю или часть, с точки зрения количества, ферментационной среды, применяемой при ферментации указанной бактерии, и в которой последовательно проводили лизис клеток бактерии, и где лизат в полной ферментационной среде содержит цитоплазматические фракции, фрагменты клеточных стенок и метаболиты, образующиеся и/или высвобождающиеся во время клеточного лизиса указанной бактерии, и водорастворимые метаболиты, образующиеся и высвобождающиеся самопроизвольно бактерией в ходе ферментирования, причем указанный лизат в полной ферментационной среде включен в указанную дерматологическую композицию в количестве, находящемся в интервале от 0,001 до 10 мас.% относительно общей массы сухого экстракта указанной композиции.
9. Композиция по п. 8, где указанная бактерия представляет собой Vitreoscilla filiformis или Vitreoscilla beggiatoe.
10. Композиция по п. 8 или 9, которая находится в форме лосьона для волос, шампуня или кондиционера для волос.
11. Косметический способ предупреждения и/или лечения состояний кожи головы, связанных с появлением перхоти, у индивидуума, включающий по меньшей мере одну стадию введения указанному индивидууму по меньшей мере одного лизата бактерии, принадлежащей роду Vitreoscilla, в полной ферментационной среде, где полная ферментационная среда представляет собой всю или часть, с точки зрения количества, ферментационной среды, применяемой при ферментации указанной бактерии, и в которой последовательно проводили лизис клеток бактерии, и где лизат в полной ферментационной среде содержит цитоплазматические фракции, фрагменты клеточных стенок и метаболиты, образующиеся и/или высвобождающиеся во время клеточного лизиса указанной бактерии, и водорастворимые метаболиты, образующиеся и высвобождающиеся самопроизвольно бактерией в ходе ферментирования.
12. Способ по п. 11, где указанные состояния кожи головы, связанные с появлением перхоти, связаны с размножением патогенных микроорганизмов на коже головы и/или дисбалансом экофлоры кожи головы.
13. Способ по п. 11, где указанная бактерия представляет собой такую, как определено в пп. 3 и 4.
14. Способ по любому из пп. 11-13, осуществляемый местно.
| ПРИМЕНЕНИЕ ЭКСТРАКТА ИЗ НЕФОТОСИНТЕЗИРУЮЩЕЙ НИТЧАТОЙ БАКТЕРИИ И СОДЕРЖАЩАЯ ЕГО КОМПОЗИЦИЯ | 1996 |
|
RU2188029C2 |
| Способ приготовления лака | 1924 |
|
SU2011A1 |
| EP 1400237 A2, 24.03.2004 | |||
| GUENICHE A | |||
| et al | |||
| Пломбировальные щипцы | 1923 |
|
SU2006A1 |
| GUENICHE A | |||
| et al | |||
| Effects of nonpathogenic gram-negative bacterium Vitreoscilla filiformis lysate on atopic dermatitis: a prospective, ramdomized, double-bind, placebo-controlled clinical study// Br J Dermatol | |||
| Станок для изготовления деревянных ниточных катушек из цилиндрических, снабженных осевым отверстием, заготовок | 1923 |
|
SU2008A1 |
