СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ СЛИЗИ КОЖИ РЫБ ДЛЯ АКТИВАЦИИ АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ И СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ IN VITRO Российский патент 2018 года по МПК G01N33/48 

Описание патента на изобретение RU2652444C1

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, а именно гематологии. Известны препараты биологического гемостаза, а именно фибриновая пленка, коллагеновая гемостатическая губка [7, 8], гемостоп, желатиновая губка, ГемоКомпакт, Тахокомб и др., которые активно разрабатываются и внедряются в повседневную практику хирурга [4-6]. Общим недостатком гемостатических средств на основе коллагена является то, что коллаген рассасывается только под действием фермента коллагеназы, которой в организме очень мало, и коллагеновые губки следует удалять из раны после осуществления гемостаза, что приводит к повторной травматизации тканей.

Препараты на основе хитозана активно применяются для остановки кровотечений в медицинской и военной практике [2]. Перевязочные материалы с использованием тромбина и фибриногена лосося удачно останавливали как аортальное, так и поверхностное раневое кровотечение, причем результаты этого исследования показали, что многократное воздействие плазменных белков лосося в течение шести месяцев не давало никаких неблагоприятных эффектов со стороны иммунной системы [3]. Стоит отметить и немаловажные отечественные исследования применения биологического клея на основе плавательного пузыря осетра, богатого коллагеном, на искусственно поврежденной печени белых мышей [1]. Проведенные опыты подтвердили кровоостанавливающий эффект и большую регенераторную способность этого биопрепарата, также не вызывавшего ни аллергической реакции, пи цитотоксических эффектов. Несмотря на все свои плюсы, существенными минусами являются их высокая стоимость и сложность получения компонентов для изготовления вышеуказанных препаратов.

Задача изобретения - оценить пригодность слизи рыб для осуществления гемостаза IN VITRO.

Способ осуществляется следующим образом.

Гемостатическую активность определяют путем внесения 100 мкл слизи кожи рыб в плазму крови овец, обогащенную тромбоцитами с последующей оценкой времени образования сгустка в опытной и контрольной пробах (с индуктором агрегации тромбоцитов млекопитающих - АДФ). При укорочении времени свертывания по сравнению с контролем судят о пригодности препарата для осуществления гемостаза.

Заявляемый способ осуществляется следующим способом.

Для оценки агрегационной активности слизи кожи рыб кровь овцы забирают из яремной вены в пробирки с цитратом натрия 3,8% в соотношении 9:1, центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин для получения обогащенной тромбоцитами плазмы (ОТП). Часть плазмы отбирают, а оставшуюся центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин, получая бедную тромбоцитами плазму (БТП). Для оценки агонистической способности слизи кожи рыб применяют количественный метод, основанный на регистрации изменений светопропускания богатой тромбоцитами плазмы с применением ФЭК по Howard М.А. Определяли суммирующий индекс агрегации тромбоцитов (СИАТ), скорость агрегации (СА) и индекс дезагрегации тромбоцитов (ИДТ) овец со слизью рыб (опытная группа) и индуктором агрегации - АДФ в концентрации 0,1 мг/мл (контрольная группа). АДФ является активатором тромбоцитов. При добавлении его в плазму, богатую тромбоцитами, формируются агрегаты, повышается прозрачность плазмы и, следовательно, увеличивается поток проходящего через кювету света.

Исследуемую ОТП (1,2-1,5 мл) вносят в кювету ФЭК с длиной оптического пути 3 мм и измеряют оптическую плотность при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) против дистиллированной воды.

Переливают плазму из кюветы в пробирку, прогревают при температуре 37°С.

Через 1 мин вносят в пробирку один из активаторов и включают секундомер.

Через 1, 3, 5 и 10 мин инкубации измеряют оптическую плотность исследуемой плазмы.

Определяют оптическую плотность исследуемой БТП.

Определяют суммирующий индекс агрегации тромбоцитов (СИАТ) по формуле

где Е - оптическая плотность БТП в единицах оптической плотности;

E1 - оптическая плотность ОТП до агрегации в единицах оптической плотности;

Е2 - оптическая плотность ОТП после агрегации в единицах оптической плотности.

Скорость агрегации (СА) рассчитывают по формуле

где E1 - оптическая плотность ОТП до агрегации в единицах оптической плотности;

Е2 - оптическая плотность ОТП после агрегации в единицах оптической плотности;

t - время, за которое произошло максимальное падение оптической плотности, в мин.

Рассчитывают Индекс дезагрегации тромбоцитов (ИДТ):

где Е3 - максимальная оптическая плотность ОТП, измеренная через 10 мин после добавления активатора;

Е2 - оптическая плотность ОТП после агрегации в единицах оптической плотности.

Результаты определения индуцированной агрегации тромбоцитов у овец контрольной и опытной групп приведены в табл. 1.

* Различия достоверны (р<0,05).

Данные табл. 1 свидетельствуют о влиянии слизи рыб на агрегацию тромбоцитов млекопитающих in vitro. При использовании слизи кожи рыб как агониста тромбоцитов получили достоверно более высокий индекс и скорость агрегации, чем при использовании АДФ, сильнейшего агониста тромбоцитов млекопитающих.

Способ поясняется следующим примером.

На одно предметное стекло наносят автоматическим дозатором каплю нативной крови овцы в объеме 200 мкл, на второе предметное стекло - 100 мкл крови и 100 мкл слизи кожи рыб, каждые 30 сек определяют при осторожном наклоне стекла образование плотного сгустка.

Точность метода оценивалась на основании результатов повторных определений гемостатической активности слизи с одной и той же порцией крови донора (не менее 9 определений).

Результаты повторных определений приведены в табл.2.

* Различия достоверны (р<0,05).

Слизь кожи рыб активирует тромбоциты овец и пригодна для осуществления гемостаза IN VITRO.

Литература

1. Ксенофонтов, А.М., Никифоров, П.В., Федоров, А.П. Экспериментальный метод применения биологического клея на основе плавательного пузыря осетра при операциях на печени /A.M. Ксенофонтов, П.В. Никифоров, А.П. Федоров // Здоровье и образование в XXI веке. - 2012. Т.14. - №1. - С. 223-224.

2. В России разработано новое гемостатическое средство//Военно-промышленный курьер [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://vpk-news.ru/news/25817

3. The long term immunological response of swine after two exposures lo a salmon thrombin and fibrinogen hemostatic bandage / S.W. Rothwell, T. Settle, S. Wallace et al // Biologicals. - November 2010. - V. 38, I. 6. - P. 619-628, ISSN 1045-1056,

4. Горский В.А., Шуркалин Б.К., Фаллер А.П. Окончательный гемостаз при вмешательствах на паренхиматозных органах // Анн. хирург. гепатол. - 2007. - Т.12. - №3. - С. 253.

5. Ткачев П.В., Акопян А.А. Возможности гемостаза ложа желчного пузыря при экстренных лапароскопических холецистэктомиях // XXX Итоговая конференция общества молодых ученых. Труды конференции. М.: МГМСУ, 2008. - С. 332-334.

6. Борисов А.Е., Митин С.Е., Шолков СИ. Использование тахокомба в нестандартных ситуациях // Анн. хирург. гепатол. - 2007. - Т. 12. - №3. - С. 48.

7. Заявка на патент РФ 96119573/14, МКИ6 А61L 15/32, опубл. 10.01.99. БИ 1.

8. Патент РФ 2034572, МКИ6 А61L 15/32, опубл. 10.05.95. БИ 13.

Похожие патенты RU2652444C1

название год авторы номер документа
БИОКЛЕЙ НА ОСНОВЕ АКТИВНЫХ КОМПОНЕНТОВ СЛИЗИ КОЖИ РЫБ VetGlu 2020
  • Суров Денис Игоревич
RU2779401C2
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ НАРУШЕНИЙ АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ ПРИ МУКОВИСЦИДОЗЕ У ДЕТЕЙ 2013
  • Симонова Ольга Игоревна
  • Гордеева Ольга Борисовна
  • Намазова-Баранова Лейла Сеймуровна
  • Ботвиньева Виктория Владимировна
  • Горинова Юлия Викторовна
  • Солошенко Маргарита Александровна
RU2533287C1
СПОСОБ ОЦЕНКИ ГЕМОСТАТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ТРОМБОЦИТОВ 2015
  • Ройтман Евгений Витальевич
  • Колесникова Ирина Максимовна
  • Румянцев Сергей Александрович
RU2601111C1
СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНТИАГРЕГАНТНОЙ И АНТИКОАГУЛЯНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ 2014
  • Замятина Светлана Владимировна
  • Зверев Яков Федорович
  • Кулеш Надежда Ивановна
  • Федореев Сергей Александрович
RU2573379C1
Способ определения аспиринорезистентности 2019
  • Тютрин Иван Илларионович
  • Жуков Егор Леонидович
  • Слизевич Дмитрий Сергеевич
RU2700000C1
СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНТИАГРЕГАНТНОЙ И АНТИКОАГУЛЯНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ 2015
  • Кулеш Надежда Ивановна
  • Замятина Светлана Владимировна
  • Зверев Яков Федорович
  • Федореев Сергей Александрович
  • Веселова Марина Владимировна
  • Мищенко Наталья Петровна
RU2601407C1
Способ диагностики потенциальной тромбо- и геморрагофилии 1989
  • Грицюк Александр Иосифович
  • Полтавец Наталия Ивановна
  • Горожкина Валентина Федоровна
  • Косюк Лилия Николаевна
SU1681262A1
Способ определения агрегационной способности тромбоцитов 1982
  • Поляков Анатолий Евгеньевич
  • Черняк Виталий Андреевич
SU1345115A1
Способ эндоскопической остановки желудочно-кишечного кровотечения 2016
  • Чередников Евгений Фёдорович
  • Будневский Андрей Валериевич
  • Баранников Сергей Викторович
  • Фурсов Константин Олегович
  • Бондаренко Александр Анатольевич
  • Чередников Евгений Евгеньевич
  • Волкова Ирина Васильевна
RU2632771C1
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВТОРИЧНЫХ ПОСТТРАВМАТИЧЕСКИХ ВНУТРИГЛАЗНЫХ КРОВОИЗЛИЯНИЙ 2007
  • Гундорова Роза Александровна
  • Зиновьев Михаил Юрьевич
  • Вериго Елена Николаевна
  • Хватов Валерий Борисович
  • Щетникович Клавдия Александровна
RU2349251C1

Реферат патента 2018 года СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ СЛИЗИ КОЖИ РЫБ ДЛЯ АКТИВАЦИИ АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ И СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ IN VITRO

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, а именно гематологии. Способ определения пригодности слизи кожи рыб для осуществления гемостаза путем активации агрегации тромбоцитов и свертывания крови IN VITRO включает внесение слизи в плазму крови овец, обогащенную тромбоцитами (ОТП), в нативную кровь и определение времени образования сгустка визуально и путем фотометрии на фотоэлектроколориметре (ФЭК) в опытной и контрольной пробах. При ускорении образования сгустка по сравнению с контролем судят о пригодности слизи кожи рыб для осуществления гемостаза. 2 табл., 1 пр.

Формула изобретения RU 2 652 444 C1

Способ определения пригодности слизи кожи рыб для осуществления гемостаза путем активации агрегации тромбоцитов и свертывания крови IN VITRO путем внесения слизи в плазму крови овец, обогащенную тромбоцитами (ОТП), нативную кровь и определения времени образования сгустка, отличающийся тем, что в качестве испытуемого препарата используют слизь кожи рыб, в качестве биологической жидкости - кровь и плазму, время образования сгустка определяют визуально и путем фотометрии на фотоэлектроколориметре (ФЭК) в опытной и контрольной пробах и при ускорении образования сгустка по сравнению с контролем судят о пригодности слизи кожи рыб для осуществления гемостаза.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2018 года RU2652444C1

ГЕМОСТАТИЧЕСКАЯ ГУБКА 1992
  • Истранов Л.П.
  • Абоянц Р.К.
  • Воложин А.И.
  • Курдюмов С.Г.
  • Орловский В.П.
  • Смоляницкий А.Я.
RU2034572C1
А.М.Ксенофонтов и др
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ МЕТОД ПРИМЕНЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОГО КЛЕЯ НА ОСНОВЕ ПЛАВАТЕЛЬНОГО ПУЗЫРЯ ОСЕТРА ПРИ ОПЕРАЦИЯХ НА ПЕЧЕНИ / Журнал научных статей "Здоровье и образование в XXI веке" (Серия медицина), 2012, том 14 [1], стр
Способ исправления пайкой сломанных алюминиевых предметов 1921
  • Касаткин П.М.
SU223A1
ГЕМОСТАТИЧЕСКАЯ ГУБКА 2011
  • Хедрих Ганс Христиан
  • Хёфингхофф Йорис
RU2562569C2

RU 2 652 444 C1

Авторы

Фомина Любовь Леонидовна

Суров Денис Игоревич

Вайцель Анастасия Эдуардовна

Березина Дарья Игоревна

Даты

2018-04-26Публикация

2017-04-07Подача