Способ определения абакавира Российский патент 2018 года по МПК G01N33/15 G01N21/33 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях для стандартизации и контроля качества лекарственных средств.

Производные пурина N-гликозидной структуры занимают ведущее положение среди лекарственных средств антиретровирусного действия. Так абакавира сульфат нашел применение при лечении заболеваний, вызываемых вирусами иммунодефицита человека (ВИЧ-1 и ВИЧ-2). Он ингибирует обратную транскриптазу, вызывает обрыв цепей РНК и прекращает репликацию указанных вирусов.

Действующая система контроля качества лекарственных средств требует от фармацевтической науки постоянного повышения эффективности имеющихся методов анализа.

Для аналитического контроля целесообразно использовать простые, но надежные и производительные экспрессные методики анализа.

Среди современных методов фармацевтического анализа важное место занимают оптические методы контроля, которые широко применяются как для целей количественного определения, так и для контроля чистоты и идентификации лекарственных средств.

Известны различные способы определения абакавира [(1S,4R)-4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9H-пурин-9-ил]циклопент-2-ен-1-метанола сульфат], применяемого для лечения ВИЧ-инфекции.

Предложено количественное определение абакавира сульфата алкалиметрическим методом с потенциометрической индикацией точки эквивалентности (Международная Фармакопея, Монография «Абакавира сульфат», Рабочий документ QAS / 0.5144 (2005)). Рекомендованный нормативной документацией титриметрический метод количественного определения абакавира сульфата малоспецифичен, трудоемок.

Наиболее близким является способ определения абакавира сульфата в субстанции и лекарственных формах, путем приготовления раствора испытуемого вещества в 0,1 М хлористоводородной кислоте с последующим спектрофотометрированием при длине волны 296 или 256 нм. (М.С. Гойзман, Т.Д. Балаянц, Г.Б. Тихомирова, Н.Н. Сальникова Количественное определение абакавира сульфата // Химико-фармацевтический журнал. - 2012. - №3 (46). - С. 44-49). В этой работе предложен спектрофотометрический метод определения абакавира сульфата по удельному показателю поглощения, что приводит к увеличению погрешности анализа, так как анализ и градуировка в этом способе проводятся в разных опытах. В работе показана возможность количественного определения абакавира в концентрации 0,001-0,004%.

Использование спектрофотометрического метода для анализа субстанции абакавира сульфата затруднено из-за отсутствия государственных стандартных образцов на данный препарат. Выпуск таких стандартных образцов является дорогостоящим, так как они находят применение только в фармацевтическом анализе. Поэтому способ определения с использованием государственных стандартных образцов будет не доступным для многих лабораторий.

В предлагаемом способе авторы используют в качестве растворителя 0,1М раствор натрия гидроксида, чувствительность определения в 2 раз выше, чем в прототипе, показана возможность количественного определения абакавира сульфата в концентрации 0,005 мг/мл, в качестве аналитической используют длину волны 285 нм. Использование в качестве растворителя 0,1М раствора натрия гидроксида и 285 нм в качестве аналитической длины позволяет уменьшить погрешность анализа, что подтверждает сравнение погрешностей определения Е=0,64% для предложенного способа и Е=4,56% для близкого аналога, следовательно, предложенный способ позволяет уменьшить погрешность анализа по сравнению с прототипом. Кроме этого, повышается воспроизводимость результатов определения, что подтверждает сравнение дисперсий двух выборочных совокупностей при помощи F - распределения при f₁=f₂=10, р=99% для предложенного способа и близкого аналога. Установлено F_экс.=15,3 при F_табл.=8,47, следовательно, предложенный способ обладает более высокой воспроизводимостью.

Использование тропеолина 00 в качестве стандартного образца в предлагаемом способе, приводит к уменьшению погрешности анализа. Важную роль в анализе по внешним образцам сравнения играет конкретное значение коэффициента пересчета, позволяющее сделать пересчет на исследуемое вещество. Точность определения коэффициента пересчета существенно влияет на достижение технического результата. Проведенные авторами экспериментальные исследования доказали, что значение коэффициента пересчета 0,4194 приводит к получению воспроизводимых и точных результатов, что обусловливает ошибку определения 0,64%. Значение коэффициента пересчета обязательно указывается в расчетной формуле.

Коэффициент пересчета находят из выражения:

,

где Е_вос - удельный показатель поглощения образца сравнения тропеолина 00 при аналитической длине волны;

Е_ос - удельный показатель поглощения рабочего образца сравнения определяемого (исследуемого) вещества при аналитической длине волны (определяется при разработке методики).

Техническим результатом предлагаемого способа является повышение воспроизводимости результатов определения и уменьшение погрешности анализа.

Технический результат достигается путем приготовления раствора определяемого вещества и стандартного образца сравнения с последующим их спектрофотометрированием и расчетом результатов.

Новым в достижении технического результата является то, что в качестве растворителя для приготовления определяемого раствора используют 0,1М раствор натрия гидроксида, концентрация испытуемого раствора составляет 0,000005 г/мл, в качестве стандартного образца сравнения используют тропеолин 00, измеряют оптическую плотность растворов при длине волны 285 нм, в формулу расчета результатов вводят значение коэффициента пересчета 0,4194.

Изучаемое вещество изменяет спектр поглощения в зависимости от pH среды. Исходя из экспериментальных данных и свойств абакавира сульфата, авторы доказали, что оптимальным растворителем для их спектрофотометрического определения является 0,1М раствор натрия гидроксида. Оптимальный растворитель обеспечивает стабилизацию испытуемого раствора, что повышает воспроизводимость результатов определения и уменьшает погрешность анализа.

Спектр поглощения абакавира сульфата в 0,1 М растворе натрия гидроксида характеризуется двумя максимумами поглощения при длинах волн 209±1 нм и 285±1 нм, а также наличием «плеча» в области 260-266 нм. Изучение стабильности растворов в течение суток показал, что при всех значениях pH изменение оптических свойств абакавира сульфата не существенно. В качестве оптимального растворителя нами выбран 0,1 М раствор натрия гидроксида, так как в этом растворителе абакавира сульфат находится в виде основания, являющемся более стабильной формой.

Исходя из установленной авторами зависимости, согласно которой в качестве образцов сравнения могут применяться вещества, для которых интервал между аналитической длиной волны и максимумом (или минимумом поглощения) этого образца сравнения не превышает половины полуширины его полосы поглощения, в качестве стандартного образца сравнения в предлагаемом способе авторы используют тропеолин 00. Оптимальная область поглощения тропеолина 00 в 0,1М растворе натрия гидроксида, в которой его можно использовать в качестве образца сравнения составляет 264-289 нм. Тропеолин 00 выпускается серийно промышленностью категории чда, на него имеются ТУ 6-09-412-75, регламентирующие его качество.

Раствор тропеолина 00 в 0,1 М растворе натрия гидроксида устойчив при хранении длительное время. Использование тропеолина 00, являющегося менее дорогостоящим образцом сравнения (в 25 раз меньше стоимость) по сравнению с рабочим стандартным образцом абакавира сульфата, приводит к уменьшению стоимости анализа.

Сопоставительный анализ с прототипом показывает, что заявляемое техническое решение отличается тем, что в качестве растворителя для приготовления определяемого раствора используют 0,1М раствор натрия гидроксида, концентрация испытуемого раствора составляет 0,000005 г/мл, в качестве стандартного образца сравнения используют тропеолин 00, измеряют оптическую плотность растворов при длине волны 285 нм, в формулу расчета результатов вводят значение коэффициента пересчета 0,4194, что соответствует критерию изобретения «новизна».

Новая совокупность признаков обеспечивает повышение воспроизводимости результатов определения и уменьшение погрешности анализа, что соответствует критерию «промышленная применимость».

При анализе известных решений было выявлено, что в них отсутствуют сведения о влиянии отличительных признаков на достижение поставленного технического решения, следовательно, изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Способ осуществляют следующим образом. Готовят раствор образца сравнения тропеолина 00 для анализа абакавира сульфата. Для этого точную массу тропеолина 00 (0,1000 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 20 мл натрия гидроксида, доводят объем раствора этим же растворителем до метки и перемешивают. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора до метки 0,1М раствором натрия гидроксида и перемешивают.

Затем проводят количественное определение абакавира сульфата в субстанции. Для этого точную массу препарата (0,1000 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 20 мл воды очищенной, доводят объем раствора этим же растворителем до метки и перемешивают. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора до метки 0,1М раствором натрия гидроксида и перемешивают. Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 285 нм в кювете с длиной рабочего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения применяют 0,1М раствор натрия гидроксида. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора образца сравнения тропеолина 00 на спектрофотометре при длине волны 285 нм в кювете с длиной рабочего слоя 10 мм относительно 0,1 М раствора натрия гидроксида.

Расчет результатов количественного определения абакавира сульфата проводят по формуле:

,

где D_x и D_вос - оптические плотности определяемого вещества и образца сравнения соответственно;

a _х и а_вос - точные навески определяемого вещества и образца сравнения соответственно;

V₁ и V₂ - объемы приготовленного раствора определяемого вещества;

V₃ - объем аликвоты определяемого вещества;

- объем приготовленного раствора образца сравнения;

100 - коэффициент для пересчета в проценты;

W - влажность, %;

0,4194 - коэффициент пересчета по тропеолину 00 в 0,1 М растворе натрия гидроксида.

Содержание абакавира сульфата должно быть не менее 97,0% и не более 102% в пересчете на сухое веществ, согласно нормативного документа.

Предлагаемый способ поясняется следующими примерами.

Пример 1. Готовят растворы определяемого вещества и образца сравнения вышеописанным способом. Измеряют на спектрофотометре оптические плотности приготовленных растворов. Далее ведут расчет результатов по формуле, используя коэффициент пересчета.

При определении абакавира сульфата по тропеолину 00 получили следующие результаты:

Д_х=0,470; Д_вос=0,394; а_х=0,1001; а_вос=0,1002; влажность=0,5%; Х=100,66%. Результаты опытов статистически обработаны:

При n=10; ; S²=0,7778; S=0,8820; ; ΔХ=0,63; Е%=0,64; S_r=0,009.

Данные примеры подтверждают, что содержание абакавира сульфата соответствует требованиям нормативного документа.

Предлагаемый способ с использованием образца сравнения тропеолина 00 является оптимальным и для количественного определения абакавира сульфата в таблетках.

Способ количественного определения абакавира сульфата в лекарственной форме отличается от способа количественного определения абакавира сульфата в субстанции только приготовлением испытуемого раствора.

Пример 2. Для количественного определения абакавира сульфата в таблетках по 0,6 г берут точную массу порошка растертых таблеток (0,17 г), помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 20 мл воды очищенной, доводят объем раствора этим же растворителем до метки и перемешивают. Раствор фильтруют, первые 10-15 мл фильтрата отбрасывают. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора до метки 0,1М раствором натрия гидроксида и перемешивают.

Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 285 нм в кювете с длиной рабочего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 0,1М раствор натрия гидроксида. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора внешнего образца сравнения тропеолина 00.

Содержание абакавира сульфата в таблетках по 0,6 г должно быть 0,54-0,66 г, считая на среднюю массу одной таблетки.

При анализе таблеток абакавира сульфата по 0,6 г по тропеолину 00 получены результаты:

Д_х=0,453; Д_вос=0,405; а_х=0,1703; а_вос=0,1002; Р_ср=1,043; Х=0,58 г.

Таким образом, содержание абакавира сульфата в таблетках соответствует требованиям нормативного документа.

Пример 3. Для контроля теста «растворения» таблеток абакавира сульфата за основу брали унифицированную методику (ГФ XIII издания). В качестве среды растворения использовали 0,1М раствор хлористоводородной кислоты, время растворения - 15 минут, объем среды растворения - 1000 мл, скорость вращения - 100 об/мин, температура (37±1)°С.

При анализе таблеток абакавира сульфата по 0,6 г в корзинку помещают одну таблетку, через 15 мин вращения раствор фильтруют. Отбирают пробу 1 мл фильтрата, помещают ее в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора до метки 0,1М раствором натрия гидроксида и перемешивают. Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 285 нм в кювете с длиной рабочего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 0,1М раствор натрия гидроксида. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора внешнего образца сравнения тропеолина 00. Методика приготовления раствора тропеолина 00 описана выше.

Согласно ГФ XIII издания в среду растворения должно перейти не менее 75% действующего вещества от содержания в лекарственной форме в течение 15 минут.

При анализе таблеток абакавира сульфата по 0,6 г высвобождение вещества составило: 99,05%, 98,42%, 97,34%, 96,82%, 95,16%, 95,37%, 95,2%, 94,66%, 94,92%, 94,91% для десяти таблеток соответственно.

Предлагаемый способ определения абакавира сульфата с использованием образца сравнения тропеолина 00 позволяет повысить воспроизводимость определения и уменьшить погрешность анализа.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях для стандартизации и контроля качества лекарственных средств. Способ определения массовой доли абакавира сульфата в препарате абакавира сульфата включает спектрофотометрирование определяемого вещества и образца сравнения и расчет массовой доли абакавира с учетом коэффициента пересчета 0,4194. При этом в качестве растворителя для приготовления определяемого раствора используют 0,1М раствор натрия гидроксида, концентрация препарата абакавира сульфата в испытуемом растворе составляет 0,000010 г/мл, спектрофотометрирование проводят при длине волны 285 нм, а в качестве образца сравнения используют тропеолин 00. Способ позволяет повысить воспроизводимость результатов определения абакавира и уменьшить погрешность анализа. 3 пр.

Способ определения массовой доли абакавира сульфата в препарате абакавира сульфата путем спектрофотометрирования определяемого вещества и образца сравнения, отличающийся тем, что в качестве растворителя для приготовления определяемого раствора используют 0,1М раствор натрия гидроксида, концентрация препарата абакавира сульфата в испытуемом растворе составляет 0,000010 г/мл, спектрофотометрирование проводят при длине волны 285 нм, в качестве образца сравнения используют тропеолин 00, в формулу расчета результатов вводят значение коэффициента пересчета 0,4194 и проводят расчет по следующей формуле:

где Х% - массовая доля абакавира сульфата в препарате абакавира сульфата (%);

D_x и D_вос - оптические плотности определяемого вещества и образца сравнения соответственно;

a_x и a_вос - точные навески определяемого вещества и образца сравнения соответственно;

V₁ - объем первого раствора, приготовленного путем растворения навески a_x определяемого вещества, соответствует 100 мл;

V₃ - объем аликвоты определяемого вещества, соответствует 1 мл;

V₂ - объем второго раствора, приготовленного путем разбавления объема V₃ первого раствора определяемого вещества, соответствует 100 мл;

V₁^|- объем приготовленного раствора образца сравнения, соответствует 50 мл;

100 - коэффициент для пересчета в проценты;

W - влажность, %;

0,4194 - коэффициент пересчета по тропеолину 00 в 0,1 М растворе натрия гидроксида.