СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИБИОТИКОВ ГРУППЫ ХЛОРАМФЕНИКОЛА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СТАНДАРТНОГО ОБРАЗЦА СВОЙСТВ Российский патент 2002 года по МПК G01N33/15 

Предполагаемое изобретение относится к области медицины и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях для стандартизации и контроля качества лекарственных средств.

Актуальным вопросом здравоохранения является контроль за качеством выпускаемых лекарственных средств. Эффективность контроля качества лекарственных препаратов, а также проведение их всестороннего изучения обеспечивается внедрением в практику фармацевтического анализа современных физико-химических методов, среди которых важное место занимает спектрофотометрия в УФ-области.

Объектами настоящего исследования являются антибиотики группы хлорамфеникола, применяемые для лечения кишечных инфекций и гнойно-воспалительных заболеваний кожи и слизистых оболочек - левомицетин и синтомицин.

Известен способ титриметрического определения левомицетина и синтомицина, заключающийся в восстановлении ароматической нитрогруппы до аминогруппы в присутствии концентрированной кислоты хлористоводородной и цинковой пыли с последующим их нитритометрическим определением /ФС 42-5050-95 "Левомицетин", ФС 42-2317-92 "Синтомицин"/.

Наиболее близким и принятым нами за прототип является способ спектрофотометрического определения таблеток левомицетина, заключающийся в приготовлении водно-спиртовых растворов испытуемого вещества и рабочего стандартного образца (РСО) левомицетина с последующим их фотометрированием при длине волны 278 нм и расчетом результатов по РСО левомицетина с учетом его фактического содержания в серийном препарате. /ФС 42-3679-98 "Таблетки левомицетина по 0,25 и 0,5г."/
Рекомендованный нормативно-технической документацией нитритометрический метод количественного определения левомицетина и синтомицина длителен, трудоемок и недостаточно воспроизводим. Относительная погрешность определения составляет ±6,58%. В связи с этим был предложен спектрофотометрический способ количественного определения субстанций левомицетина и синтомицина. Для избежания погрешности градуировки и повышения точности анализа в спектрофотометрии используют стандартные образцы. Так как государственные стандартные образцы левомицетина и синтомицина отсутствуют, а выпуск их является дорогостоящим и малодоступным для многих лабораторий, возникла необходимость использования стандартных образцов свойств.

Техническим результатом предлагаемого способа является повышение воспроизводимости результатов определения и уменьшение погрешности анализа.

Технический результат достигается путем приготовления раствора определяемого вещества и стандартного образца свойств с последующим их спектрофотометрированием и расчетом результатов.

Новым в достижении технического результата является то, что в качестве растворителя для приготовления испытуемых растворов используют 0,1 М раствор натрия гидроксида.

Новым является и то, что в качестве стандартного образца используют хромат калия, вводя в формулу расчета результатов коэффициент пересчета.

Изучаемые вещества изменяют спектр поглощения в зависимости от рН среды. Исходя из значений констант ионизации и свойств левомицетина и синтомицина авторы доказали, что оптимальным растворителем для их спектрофотометрического определения является 0,1 М раствор натрия гидроксида. Оптимальный растворитель обеспечивает стабилизацию испытуемых растворов, что повышает воспроизводимость результатов определения и уменьшает погрешности анализа.

В данном растворителе спектры поглощения левомицетина и синтомицина характеризуются максимумом поглощения при 280 нм.

Исходя из установленной авторами зависимости, согласно которой в качестве стандартных образцов свойств могут применяться вещества, для которых интервал между аналитической длиной волны и максимумом (или минимумом) поглощения этого стандартного образца не превышает половины полуширины его полосы поглощения, в качестве стандартного образца в предлагаемом способе используют хромат калия, так как оптимальные области поглощения, в которых его можно использовать как стандартный образец свойств 264-286, 357-386 нм. Хромат калия выпускается серийно промышленностью как химически чистое вещество, имеется ГОСТ, регламентирующий его качество (ГОСТ 4459-75), раствор хромата калия устойчив в оптимальном растворителе длительное время. Использование хромата калия в предлагаемом способе приводит к уменьшению погрешности анализа.

Сопоставительный анализ показывает, что заявляемое техническое решение отличается тем, что в качестве растворителя для приготовления испытуемых растворов используют 0,1 М раствор натрия гидроксида, а в качестве стандартного образца - хромат калия, вводя в формулу расчета результатов коэффициент пересчета, что соответствует критерию изобретения "новизна".

Новая совокупность признаков обеспечивает повышение воспроизводимости результата определения, уменьшение погрешности анализа, а также позволяет снизить стоимость и уменьшить время анализа, что соответствует критерию "промышленная применимость".

При анализе известных решений было выявлено, что в них отсутствуют сведения о влиянии отличительных признаков на достижение поставленного технического результата, следовательно, изобретение соответствует критерию "изобретательский уровень".

Способ осуществляют следующим образом.

Готовят раствор стандартного образца хромата калия. Для этого точную массу хромата калия (0,1500 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 0,1 М растворе натрия гидроксида и доводят раствор до метки этим же растворителем, перемешивают. 1 мл приготовленного раствора хромата калия помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят 0,1 М раствором натрия гидроксида до метки, перемешивают. Затем проводят количественное определение левомицетина и синтомицина в субстанции. Для этого точную массу препарата (0,0500г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в горячей воде, охлаждают и доводят этой водой до метки, перемешивают. 2 мл приготовленного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят 0,1 М раствором натрия гидроксида до метки, перемешивают. Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора при длине волны 280 нм относительно 0,1 М раствора натрия гидроксида на спектрофотометре в кювете с длиной рабочего слоя 10 мм. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора стандартного образца хромата калия при длине волны 280 нм относительно 0,1 М раствора натрия гидроксида на спектрофотометре в кювете с длиной рабочего слоя 10 мм.

Расчет результатов количественного определения проводят по формуле:

D_χ и D_ст - оптические плотности определяемого вещества и стандартного образца соответственно;
a_χ и a_ст - точные навески определяемого вещества и стандартного образца соответственно;
100 - коэффициент для пересчета в проценты;
k_пер - коэффициент пересчета, который рассчитывается следующим образом:

удельный показатель поглощения стандартного образца хромата калия при 280 нм;
E1%1см

Содержание левомицетина должно быть 98,0-102% в пересчете на сухое вещество. Синтомицина в пересчете на сухое вещество должно быть не менее 99%.

Предлагаемый способ поясняется следующими примерами. Готовят растворы испытуемого образца и стандартного вещества выше описанным способом. Измеряют на спектрофотометре оптические плотности приготовленных растворов. Далее ведут расчет результатов по формуле, используя коэффициент пересчета.

При определении левомицетина получили следующие результаты: D_χ = 0,58, D_ст= 0,54, a_χ = 0,0498, a_ст= 0,1500, влажность 0,1%, χ = 99,58%. При n=6, S=0,141, Р=95%/, А%=0,15.

При определении синтомицина получили следующие результаты: D_χ = 0,60, D_ст= 0,55, a_χ = 0,0504, a_ст= 0,1497, влажность 0,19%, χ = 99,83%. При n=6, S=0,356, /Р=95%/, А%=0,37.

Данные примеры подтверждают, что содержание левомицетина и синтомицина соответствует требованиям нормативного документа. Предлагаемый способ с использованием стандартного образца хромата калия оказался оптимальным и для количественного определения синтомицина в свечах, левомицетина в таблетках, глазных каплях и спиртовом растворе, а также позволил с достаточной точностью провести контроль теста "растворения" таблеток левомицетина.

Методика количественного определения синтомицина в свечах и левомицетина в таблетках, глазных каплях и спиртовом растворе отличается от методики количественного определения синтомицина и левомицетина в субстанциях только приготовлением испытуемого раствора.

Для количественного определения левомицетина в таблетках по 0,25 и 0,5 г берут точную массу порошка (0,0500 г) растертых таблеток левомицетина, количественно переносят с помощью горячей воды в мерную колбу вместимостью 100 мл, взбалтывают в течение 15 мин, охлаждают, доводят объем раствора водой до метки, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые 15-20 мл фильтрата. 2 мл полученного фильтрата переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора 0,1 М раствором натрия гидроксида до метки, перемешивают.

Содержание левомицетина в таблетках по 0,25г должно быть 0,238-0,262 г, в таблетках по 0,5 г - 0,475-0,525 г.

Количественное определение левомицетина в таблетках поясняется следующими примерами. При анализе таблеток левомицетина по 0,25 г получены результаты: D_χ = 0,525, D_ст= 0,53, a_χ = 0,0501, a_ст= 0,1500, Р_ср= 0,2767, χ = 0,252. При анализе таблеток левомицетина по 0,5 г получены результаты: D_χ = 0,53, D_ст=0,541, a_χ = 0,0501, а_ст=0,1503, P_ст=0,5456, χ = 0,493.
Данные примеры подтверждают, что содержание левомицетина в таблетках соответствует требованиям нормативного документа.

Для количественного определения левомицетина в 0,25% глазных каплях объем лекарственной формы 2 мл помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора водой до метки, перемешивают. 5 мл приготовленного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора 0,1 М раствором гидроксида натрия до метки, перемешивают. Содержание левомицетина в 0,25% глазных каплях должно быть 0,24-0,26%.

При анализе левомицетина в 0,25% глазных каплях получены результаты: D_χ = 0,585, D_ст,=0,54, a_ст=0,1500, χ = 0,2498%.
Для количественного определения левомицетина в растворе левомицетина спиртовом 3% объем лекарственной формы 2 мл помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки, перемешивают. 2 мл приготовленного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора 0,1 М раствором гидроксида натрия до метки, перемешивают.

Содержание левомицетина в растворе левомицетина спиртовом 3% должно быть 2,7-3,3%.

При анализе левомицетина в растворе левомицетина спиртовом 3% получены результаты: D_χ = 0,68, D_ст=0,52, а_ст=0,1500, χ ==3,02%.
Данные примеры подтверждают, что содержание левомицетина в глазных каплях и спиртовом растворе соответствует требованиям нормативного документа.

Для количественного определения синтомицина в суппозиториях вагинальных по 0,25 г 1 суппозиторий помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, добавляют 40-50 мл горячей воды, тщательно встряхивают и нагревают на водяной бане до полного растворения основы и высвобождения действующего вещества. Охлаждают и доводят объем водой до метки, перемешивают. Раствор фильтруют через бумажный фильтр, первые 30-40 мл фильтрата отбрасывают, затем 2 мл фильтрата помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят 0,1М раствором гидроксида натрия до метки, перемешивают. Содержание синтомицина в суппозиториях вагинальных с синтомицином по 0,25 г должно быть 0,24-0,26 г.

При анализе синтомицина в суппозиториях вагинальных получены результаты: D_χ = 0,58, D_ст=0,53, a_ст=0,1503, χ = 0,253 г.
Данный пример подтверждает, что содержание синтомицина в суппозиториях вагинальных с синтомицином по 0,25 соответствует требованиям нормативного документа.

Для контроля теста растворения таблеток левомицетина за основу брали унифицированную методику (ГФ XI изд., с.159-160). В качестве среды растворения использовали 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной, время растворения - 30 мин, объем среды - 1000 мл, скорость вращения - 100 об/мин, температура (37±1)^oС. При анализе таблеток левомицетина по 0,25 г и 0,5 г в корзинку помещают одну таблетку, через 30 минут вращения отбирают пробу. Раствор фильтруют, 10 мл фильтрата (при анализе таблеток по 0,25г) и 5 мл фильтрата (при анализе таблеток по 0,5 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем 0,1М раствором гидроксида натрия до метки, перемешивают.

Согласно ГФ XI изд.с.159-160 в среду растворения должно перейти не менее 75% действующего вещества от содержания в лекарственной форме.

При анализе таблеток левомицетина по 0,25 г высвобождение действующего вещества составило 97,1; 95,9; 94,5; 99,8; 98,5% для пяти таблеток соответственно.

При анализе таблеток левомицетина по 0,5 г высвобождение действующего вещества составило 95,7; 93,4; 94,0; 97,8; 99,2% для пяти таблеток соответственно.

Таким образом, предлагаемый способ определения лекарственных средств антибиотиков группы хлорамфеникола с использованием стандартного образца свойств позволяет повысить воспроизводимость результатов определения, уменьшить погрешность анализа, снизить его стоимость и унифицировать методики анализа.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях для стандартизации и контроля качества лекарственных средств. Сущность способа: готовят растворы определяемого вещества и стандартного образца свойств. В качестве растворителя для приготовления испытуемых растворов используют 0,1 М раствор натрия гидроксида, а в качестве стандартного образца - хромат калия. Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора и раствора стандартного образца хромата калия на спектрофотометре. Расчет результатов количественного определения проводят по формуле, вводя в нее коэффициент пересчета. Способ позволяет повысить воспроизводимость результатов определения и уменьшить погрешность анализа.

Способ определения антибиотиков группы хлорамфеникола с использованием стандартного образца свойств путем приготовления растворов определяемого вещества и стандартного образца свойств с последующим их спектрофотометрированием и расчетом результатов, отличающийся тем, что в качестве растворителя для приготовления испытуемых растворов используют 0,1 М раствор натрия гидроксида, а в качестве стандартного образца - хромат калия, вводя в формулу расчета результатов коэффициент пересчета.