МИКРОБНЫЕ ШТАММЫ, КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ УВЕЛИЧЕНИЯ ДОСТУПНОГО ФОСФАТА ДЛЯ РАСТЕНИЙ Российский патент 2018 года по МПК C12N1/14 A01N63/04 C12R1/80 

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем документе раскрываются новые микробные штаммы. Кроме того, раскрываются композиции, содержащие новые микробные штаммы и способы использования новых микробных штаммов, в частности, композиции и способы для увеличения доступного фосфата для растений.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Для поддержания нормального роста растения должны извлекать ряд элементов из почвы, в которой они растут. Эти элементы включают фосфор и так называемые питательные микроэлементы (например, медь, железо, цинк и т.д.), но во многих почвах недостаточно этих элементов или они содержат их только в формах, которые не могут легко поглощаться растениями (в общем, считается, что необходимые элементы не могут легко поглощаться растениями, если они не присутствуют в почве в растворенной форме).

Для нейтрализации этих недостатков источники недостающих элементов обычно вносят в почвы для улучшения показателей скорости роста и урожайности, получаемых у культурных растений. Например, фосфаты часто добавляют в почву для нейтрализации нехватки доступного фосфора. Фосфаты, добавленные в почву в виде коммерческого удобрения (например, монофосфата аммония или тройного суперфосфата), являются легкодоступными для растений, но в почве быстро превращаются в относительно недоступные формы. Было рассчитано, что только от 10 до 30% фосфатного удобрения используется растением в том году, в котором его вносят, и от одной трети до половины вносимого фосфатного удобрения может никогда не использоваться растением.

Ранее предпринимались попытки применения микроорганизмов для улучшения доступности важных элементов в почвенных системах. В частности, для этой цели использовали виды грибов Penicillium.

Например, в патенте США №5026417 раскрываются выделенные штаммы P. bilaii, которые при внесении в почву способны улучшать поглощение фосфора растениями.

В опубликованной заявке на патент США №2010/0099560 раскрывается способ улучшения условий роста растений путем выращивания растений в почве, содержащей поблизости от корней растений как источник фосфора, так и по меньшей мере два штамма грибов Penicillium.

В патенте США №5484464 раскрываются способы и композиции для увеличения доступности растворимого фосфата и фиксированного азота для симбиоза бобовые:Rhizobium, предусматривающие совместную инокуляцию семян бобовых с солюбилизирующим фосфат почвенным грибом Penicillium bilaii и Rhizobium spp. перед высаживанием.

Однако все еще сохраняется потребность в системах для улучшения условий роста растений, в частности, путем увеличения уровней доступного фосфора в почвенных системах.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем документе описываются новые грибковые штаммы, которые солюбилизируют фосфор. Авторы настоящего изобретения выделили и протестировали значительное количество грибковых штаммов на предмет их способности солюбилизировать фосфор.

Как раскрывается, выделенными штаммами являются штаммы из рода Penicillium spp. В частности, выделенными штаммами являются штаммы Penicillium bilaiae. Еще более конкретно, выделенными штаммами являются выделенные штаммы Penicillium bilaiae, выбранные из группы, состоящей из

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50776,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50777,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50778,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50779,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50780,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50781,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50782,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50783,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50784,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50785,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50786,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50787,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50788 и

смеси двух или более из этих штаммов.

Также в настоящем документе раскрываются композиции, содержащие носитель и один или несколько грибковых штаммов, раскрываемых в настоящем документе. Композиции, кроме того, могут содержать источник фосфора, такой как фосфорит или удобрение, содержащее фосфор, для солюбилизации фосфора грибковыми штаммами композиций. Источник фосфора или удобрения, содержащие фосфор, можно использовать как часть одной композиции или посредством способа с отдельной обработкой.

В другом варианте осуществления композиция содержит одну или несколько сигнальных молекул растения. В одном варианте осуществления композиция содержит по меньшей мере один липохитоолигосахарид (LCO). В одном варианте осуществления композиция содержит по меньшей мере один хитоолигосахарид (СО). В другом варианте осуществления композиция содержит по меньшей мере один флавоноид. В еще одном варианте осуществления композиция содержит жасмоновую кислоту или ее производное. В следующем варианте осуществления композиция содержит линолевую кислоту или ее производное. В следующем варианте осуществления композиция содержит линоленовую кислоту или ее производное. В еще одном варианте осуществления композиция содержит каррикин.

Дополнительно в настоящем документе раскрывается способ увеличения доступности фосфора для поглощения растением из почвы. Способ предусматривает введение в почву инокулюма одного или нескольких грибковых штаммов, раскрываемых в настоящем документе. В другом варианте осуществления способ дополнительно может предусматривать добавление источника фосфора в почву. В следующем варианте осуществления способ предусматривает введение в почву инокулюма одного или нескольких грибковых штаммов в качестве покрытия семени.

Также в настоящем документе раскрывается способ увеличения поглощения фосфора растением(ями), предусматривающий выращивание растения(ий) в почве, которая содержит источник фосфора и один или несколько грибковых штаммов, раскрываемых в настоящем документе. В одном варианте осуществления растением(ями) является бобовое растение(ия), растение(ия), не являющееся бобовым растением(иями) или их комбинации. В другом варианте осуществления растением является растение, выбранное из группы, состоящей из сои, фасоли, люцерны, клевера, кукурузы, латука, разновидностей томата, разновидностей картофеля, разновидностей огурца и их комбинаций.

Кроме того, в настоящем документе раскрываются семена, покрытые грибковыми штаммами, раскрываемыми в настоящем документе.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Раскрываемые грибковые штаммы выделяли и тестировали на предмет их способности солюбилизировать фосфор. Это подробно описывается в разделе "Примеры", представленном ниже. Раскрываемые варианты осуществления, кроме того, относятся к композициям, покрытиям семени, способам увеличения доступности фосфора для поглощения растением из почвы и способам увеличения поглощения фосфора растениями, предусматривающим выращивание растений в почве, содержащей источник фосфора.

Определения

Подразумевается, что применяемые в настоящем документе формы единственного числа также включают формы множественного числа, если из контекста явно не следует иное.

Используемый в настоящем документе термин "биологически чистая культура"означает культуру, фактически не содержащую биологическое загрязнение и обладающую генетической однородностью так, что различные субкультуры, полученные из нее, будут проявлять по сути идентичные генотипы и фенотипы (например, культуры с чистотой по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, до 100% чистоты).

Используемый в настоящем документе термин "изолят, изоляты, выделение и/или выделенный и т.п." означает, что упоминаемый материал извлекается из среды, в которой он обычно находится.

Используемый в настоящем документе термин "инокулюм" означает любую форму грибковых клеток, мицелия или спор, которая способна распространяться на почве или в почве при условиях температуры, влажности и т.п., благоприятных для роста грибов.

Используемый в настоящем документе термин "спора" имеет свое обычное значение, которое хорошо известно и понятно специалистам в данной области техники, и, как правило, означает микроорганизм в его состоянии покоя, защищенном состоянии.

Используемый в настоящем документе термин "источник" конкретного элемента означает соединение этого элемента, которое по меньшей мере в условиях рассматриваемой почвы не делает элемент полностью доступным для поглощения растением.

Используемые в настоящем документе термины "эффективное количество", "эффективная концентрация" или "эффективная доза" означают количество, концентрацию или дозу одного или нескольких грибковых изолятов, достаточную для обеспечения солюбилизации источника фосфора. Фактическая эффективная доза в абсолютном значении зависит от факторов, в том числе без ограничения размера (например, участка, общей площади и т.д.) угодья для внесения грибковых изолятов, синергических или антагонистических взаимодействий других активных или инертных ингредиентов, которые могут увеличить или уменьшить активность грибковых изолятов при солюбилизации фосфата, а также стабильности грибковых изолятов в композициях и/или при обработках семени. "Эффективное количество", "эффективная концентрация" или "эффективная доза" грибкового пестицида может быть определена, например, с помощью обычного эксперимента доза-эффект.

Используемый в настоящем документе термин "носитель" относится к среде, способной поддерживать один или несколько грибковых изолятов, раскрываемых в настоящем документе.

Используемый в настоящем документе термин "совместимый с почвой носитель" относится к любому материалу, который может быть добавлен в почву без причинения/осуществления неблагоприятного влияния на рост растения, структуру почвы, почвенный дренаж или подобное.

Используемый в настоящем документе "по меньшей мере один биологически активный ингредиент" означает биологически активные ингредиенты (например, сигнальные молекулы, другие микроорганизмы и т.д.), отличные от одного или нескольких грибковых изолятов, описанных в настоящем документе.

Используемые в настоящем документе термины "сигнальная молекула(ы)" или "сигнальная молекула(ы) растения", которые могут быть использованы взаимозаменяемо с "усиливающее рост растения средство(а)", в широком смысле относятся к любому средству, как встречающемуся в природе в растениях или микробах, так и синтетическому (и которое может быть не встречающимся в природе), которое непосредственно или опосредованно активирует или инактивирует биохимический путь растения, что приводит к усилению или повышению роста растения по сравнению с необработанными растениями или растениями, собранными из необработанного семени.

Используемые в настоящем документе термины "усиленный рост растения" или "повышенный рост растения" означает повышение урожайности растения (например, увеличение биомассы, увеличение числа плодов или их комбинацию, что измеряют в бушелях на акр), увеличение количества корней, увеличение корневой массы, увеличение корневого объема, увеличение площади листьев, повышение густоты стояния растений, повышение мощности растения или их комбинации.

Используемые в настоящем документе термины "растение(ия)" и "часть (части) растения" относятся ко всем растениям и популяциям растений, таким как желательные и нежелательные дикорастущие растения или культурные растения (в том числе к встречающимся в природе культурным растениям). Культурные растения могут быть растениями, которые могут быть получены традиционной селекцией растений и способами оптимизации, или способами биотехнологии и генной инженерии, или комбинацией этих способов, включая трансгенные растения и включая сорта растений, охраняемые или не охраняемые правами селекционеров. Под частями растения следует понимать все части и органы растений над и под землей, такие как побег, лист, цветок и корень, в качестве примеров которых могут быть упомянуты листья, иголки, стебли, стволы, цветы, плоды, фрукты, семена, корни, клубни и корневища. Также части растения включают в себя собранный материал, вегетативный и генеративный материал для размножения (например, черенки, клубни, корневища, отростки, семена и т.д.).

Используемые в настоящем документе термины "солюбилизация фосфатов" или "солюбилизирующий фосфаты" и т.п. означают превращение нерастворимого фосфата (например, фосфорита и т.п.) в форму растворимого фосфата.

Используемый в настоящем документе термин "солюбилизирующий фосфаты организм" относится к любому организму, способному превращать нерастворимый фосфат в растворимую форму фосфата.

Используемый в настоящем документе термин "питательный микроэлемент(ы)" обозначает питательные вещества, которые необходимы для роста растения, здоровья растения и/или развития растения.

Используемый в настоящем документе термин "биостимулятор(ы)" означает любое вещество, способное улучшать метаболические или физиологические процессы в растениях и в почвах.

Используемый в настоящем документе термин "увлажняющее средство(а)" относится к любому веществу, способному понижать и/или уменьшать поверхностное натяжение воды.

ШТАММЫ

В одном варианте осуществления штаммом(ами), раскрываемым в настоящем документе, является солюбилизирующий фосфаты грибковый штамм(ы). В другом варианте осуществления штаммом(ами) является штамм(ы) Penicillium bilaiae. Как используется в настоящем документе, видовое название "Penicillium bilaiae" предназначено включать в себя все итерации видового названия "Penicillium bilaiae", например, те видовые названия, которые встречаются в литературе (например, "Penicillium bilaji", "Penicillium bilaii" и т.п.).

В другом варианте осуществления штаммом(ами) является потомство штамма Penicillium bilaiae с учетным номером в депозитарии V08/021001 (депонированного в Национальном институте метрологии). В другом варианте осуществления штаммом(ами) является потомство штамма Penicillium bilaiae с учетным номером в депозитарии АТСС-20851 (депонированного в Американской коллекции типовых культур). В другом варианте осуществления штаммом(ами) является потомство штамма Penicillium bilaiae с учетным номером в депозитарии АТСС-22348 (депонированного в Американской коллекции типовых культур). В следующем варианте осуществления штаммом(ами) является потомство штамма Penicillium bilaiae с учетным номером в депозитарии V08/021001 и штамма Penicillium bilaiae с учетным номером в депозитарии АТСС-20851. В следующем варианте осуществления штаммом(ами) является потомство штамма Penicillium bilaiae с учетным номером в депозитарии V08/021001 и штамма Penicillium bilaiae с учетным номером в депозитарии АТСС-22348. В следующем варианте осуществления штаммом(ами) является потомство штамма Penicillium bilaiae с учетным номером в депозитарии АТСС-20851 и штамма Penicillium bilaiae с учетным номером в депозитарии АТСС-22348.

В следующем варианте осуществления штаммами являются штаммы Penicillium, выбранные из группы, состоящей из:

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50776,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50777,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50778,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50779,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50780,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50781,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50782,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50783,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50784,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50785,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50786,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50787,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50788 и

смеси двух или более из этих штаммов.

В конкретном варианте осуществления штаммом(ами) может быть один или несколько из вышеупомянутых депонируемых штаммов (например, включая по меньшей мере два из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере три из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере четыре из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере пять из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере шесть из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере семь из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере восемь из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере девять из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере десять из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере одиннадцать из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере двенадцать из вышеупомянутых штаммов и включая все вышеупомянутые штаммы).

В варианте осуществления штаммом является штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50776. В варианте осуществления штаммом является штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50777. В варианте осуществления штаммом является штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50778. В варианте осуществления штаммом является штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50779. В варианте осуществления штаммом является штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50780. В варианте осуществления штаммом является штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50781. В варианте осуществления штаммом является штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50782. В варианте осуществления штаммом является штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50783. В варианте осуществления штаммом является штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50784. В варианте осуществления штаммом является штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50785. В варианте осуществления штаммом является штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50786. В варианте осуществления штаммом является штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50787. В варианте осуществления штаммом является штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50788.

В другом варианте осуществления штаммом(ами) может быть потомство одного из депонируемых штаммов. В другом варианте осуществления депонируемым штаммом(ами) является биологически чистая культура (например, культуры с чистотой по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, до 100% чистоты).

Депонируемые культуры грибов происходят из выделенных встречающихся в природе грибковых штаммов. Все из депонируемых штаммов были собраны в Саскатуне, Канада, в 2012 г. Культуры депонируемых штаммов могут состоять из находящихся в состоянии покоя грибковых спор и/или жизнеспособных грибов.

Грибы Penicillium, раскрываемые в настоящем документе, и, в частности, штаммы с учетными номерами в депозитарии NRRL В-50776, NRRL В-50777, NRRL В-50778, NRRL В-50779, NRRL В-50780, NRRL В-50781, NRRL В-50782, NRRL В-50783, NRRL В-50784, NRRL В-50785, NRRL В-50786, NRRL В-50787 и NRRL В-50788 можно выращивать с использованием ферментации в твердом или жидком состоянии и приемлемого источника углерода. Изоляты Penicillium можно выращивать при помощи любого приемлемого способа, известного специалисту в данной области техники. Например, гриб можно культивировать на твердой питательной среде, такой как картофельно-декстрозный агар или солодово-пептонный агар, или в колбах, содержащих приемлемую жидкую среду, такую как среда Чапека-Докса или картофельно-декстрозный бульон. Эти способы культивирования можно использовать при получении инокулюма Penicillium spp. для покрытия семян и/или нанесения на носитель для внесения в почву.

Получения спор Penicillium при твердофазном культивировании можно достичь путем инокуляции твердой среды, такой как субстрат на основе торфа или вермикулита, или зерна, в том числе без ограничения разновидностей овса, пшеницы, ячменя или риса. Стерилизованную среду (полученную при помощи автоклавирования или облучения) инокулируют суспензией спор (1×10²-1×10⁷ КОЕ/мл) соответствующего Penicillium spp. и влажность доводят до 20-50% в зависимости от субстрата. Этот материал инкубируют в течение 2-8 недель при комнатной температуре. Споры также можно получать при помощи культивирования на жидкой среде (Cunningham et al., 1990. Can J Bot 68:2270-2274). Получения на жидкой среде можно достичь путем культивирования гриба в любых подходящих средах, таких как картофельно-декстрозный бульон или среды с сахарозой и дрожжевым экстрактом, при соответствующем значении рН и температурных условиях (что может быть выполнено любым специалистом в данной области техники).

Полученный в результате материал может быть использован непосредственно в композиции, в качестве обработки семени, или споры могут быть собраны, сконцентрированы центрифугированием, составлены и затем высушены с использованием методик сушки воздухом, сушки замораживанием или сушки в псевдоожиженном слое (Friesen Т., Hill G., Pugsley Т., Holloway G., and Zimmerman D. 2005, Experimental determination of viability loss of Penicillium bilaiae conidia during convective air-drying Appl Microbiol Biotechnol 68:397-404) с получением смачиваемого порошка.

Вышеупомянутые депонируемые штаммы были депонированы 1 октября 2012 г., как указывается более подробно ниже в разделе "Материалы и способы", при соблюдении условий Будапештского договора о международном признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры при Службе сельскохозяйственных исследований, 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604, U.S.A.

КОМПОЗИЦИИ

В другом аспекте настоящее изобретение относится к композиции, содержащей носитель и инокулюм одного или нескольких депонируемых штаммов (либо в форме спор, либо штаммов в вегетативной стадии), раскрываемых в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления композиция может быть в виде жидкости, взвеси, твердого вещества или порошка (смачиваемого порошка или сухого порошка). В другом варианте осуществления композиция может быть в виде покрытия семени. Композиции в форме жидкости, взвеси или порошка (например, смачиваемого порошка) могут быть подходящими для нанесения покрытия на семена. При применении для покрытия семян композицию можно наносить на семена и обеспечивать высыхание. В вариантах осуществления, где композиция представляет собой порошок (например, смачиваемый порошок), возможно потребуется добавление к порошку жидкости, такой как вода, перед нанесением на семя.

Носители

Носители, раскрываемые в настоящем документе, при составлении обеспечат сохранение депонируемого грибкового штамма(ов) эффективным (например, способным солюбилизировать фосфаты) и жизнеспособным. Неограничивающие примеры носителей, описанных в настоящем документе, включают жидкости, взвеси или твердые вещества (в том числе смачиваемые порошки или сухие порошки). В варианте осуществления носитель представляет собой совместимый с почвой носитель, как раскрывается в настоящем документе.

В одном варианте осуществления носитель представляет собой жидкий носитель. Неограничивающие примеры жидкостей, применяемых в качестве носителей для композиций, описанных в настоящем документе, включают в себя воду, водный раствор или неводный раствор. В одном варианте осуществления носитель представляет собой воду. В другом варианте осуществления носитель представляет собой водный раствор, такой как вода с сахаром. В другом варианте осуществления носитель представляет собой неводный раствор. Если используется жидкий носитель, то жидкий (например, водный) носитель может дополнительно содержать ростовые среды для культивирования депонируемых грибковых штаммов. Неограничивающие примеры приемлемых ростовых сред для депонируемых грибковых штаммов включают в себя среду Чапека-Докса, картофельно-декстрозный бульон или любую среду, известную специалистам в данной области техники, совместимую с и/или обеспечивающую питательными веществами для роста депонируемых грибковых штаммов.

В другом варианте осуществления носителем является взвесь. В варианте осуществления взвесь может содержать прилипатель, жидкость или их комбинацию. Предполагается, что прилипателем может быть любое средство, способное приклеивать инокулюм (например, один или несколько депонируемых штаммов) к представляющему интерес субстрату (например, к семени). Неограничивающие примеры прилипателей включают в себя альгинат, минеральное масло, сироп, аравийскую камедь, мед, метил целлюлозу, молоко, обойный клей и их комбинации. Неограничивающие примеры жидкостей, предназначенных для взвеси, включают в себя воду или воду с сахаром.

В другом варианте осуществления носителем является твердое вещество. В конкретном варианте осуществления твердым веществом является порошок. В одном варианте осуществления порошком является смачиваемый порошок. В одном варианте осуществления порошком является сухой порошок. В другом варианте осуществления твердым веществом является гранула. Неограничивающие примеры твердых веществ, применимых в качестве носителей для композиций, раскрываемых в настоящем документе, включают в себя торф, пшеницу, сечку пшеничной соломы, измельченную пшеничную солому, отруби, вермикулит, целлюлозу, крахмал, почву (пастеризованную или непастеризованную), гипс, тальк, глины (например, каолин, бентонит, монтмориллонит) и силикагели.

Необязательные ингредиенты

Композиции, раскрываемые в настоящем документе, могут содержать один или несколько необязательных ингредиентов. Неограничивающие примеры необязательных ингредиентов включают в себя один или несколько источников фосфора, один или несколько биологически активных ингредиентов, питательных микроэлементов, биостимуляторов, консервантов, полимеров, увлажняющих средств, поверхностно-активных средств или их комбинаций.

Источник(и) фосфора

Композиции, раскрываемые в настоящем документе, необязательно могут содержать один или несколько источников фосфора. Можно использовать любой источник фосфора, который может солюбилизироваться депонируемыми штаммами.

В одном варианте осуществления одним или несколькими источниками фосфора являются фосфориты.

В другом варианте осуществления одним или несколькими источниками фосфора являются удобрения, содержащие один или несколько источников фосфора. Коммерчески доступные готовые фосфатные удобрения подразделяются на множество видов. Некоторые распространенные виды содержат фосфатную руду, моноаммонийфосфат, диаммонийфосфат, монокальцийфосфат, суперфосфат, тройной суперфосфат и/или полифосфат аммония. Все из этих удобрений получают путем химической обработки нерастворимой природной фосфатной руды на оборудовании для производства удобрений в промышленном масштабе, и этот продукт является дорогостоящим. Посредством настоящего изобретения возможно уменьшение количества этих удобрений, вносимых в почву, при сохранении такого же количества фосфора, поглощаемого из почвы.

В следующем варианте осуществления одним или несколькими источниками фосфора являются органические источники фосфора. В другом конкретном варианте осуществления источником фосфора может являться органическое удобрение. Органическое удобрение относится к почвоулучшителю, полученному из природных источников, что обеспечивает по меньшей мере минимальное процентное содержание азота, фосфата и карбоната калия. Неограничивающие примеры органических удобрений включают в себя растительные продукты и продукты жизнедеятельности животных, каменную пыль, морские водоросли, инокулянты и кондиционеры. Эти удобрения зачастую являются доступными в садовых центрах и от садоводческих компаний-поставщиков. В частности, органический источник фосфора доступен в виде костной муки, мясной муки, навоза, компоста, осадка сточных вод или гуано, или их комбинации.

В следующем варианте осуществления одним или несколькими источниками фосфора может быть комбинация источников фосфора, в том числе без ограничения фосфорит, моноаммония фосфат, диаммония фосфат, монокальция фосфат, суперфосфат, тройной суперфосфат, аммония полифосфат, удобрения, содержащие один или несколько источников фосфора, один или несколько органических источников фосфора и их комбинации.

Биологически активный ингредиент(ы)

Грибковые композиции, описанные в настоящем документе, могут необязательно включать в себя один или несколько биологически активных ингредиентов, как описано в настоящем документе, отличных от грибковых пестицидов, описанных в настоящем документе. Неограничивающие примеры биологически активных ингредиентов включают в себя сигнальные молекулы (например, липохитоолигосахариды (LCO), хитоолигосахариды (СО), хитиновые соединения, флавоноиды, жасмоновую кислоту или ее производные, линолевую кислоту или ее производные, линоленовую кислоту или ее производные, керрикины и т.д.) и полезные микроорганизмы (например, Rhizobium spp., Bradyrhizobium spp., Sinorhizobium spp., Azorhizobium spp. и т.д.).

Сигнальная молекула(ы)

В варианте осуществления композиции, описанные в настоящем документе, включают в себя одну или несколько сигнальных молекул. В одном варианте осуществления одна или несколько сигнальных молекул представляют собой один или несколько LCO. В другом варианте осуществления одна или несколько сигнальных молекул представляют собой одно или несколько хитиновых соединений. В другом варианте осуществления одна или несколько сигнальных молекул представляют собой один или несколько СО. В еще одном варианте осуществления одна или несколько сигнальных молекул представляют собой один или несколько флавоноидов или их производных. В еще одном варианте осуществления одна или несколько сигнальных молекул представляют собой один или несколько нефлавоноидных индукторов nod-генов (например, жасмоновую кислоту, линолевую кислоту, линоленовую кислоту и их производные). В еще одном варианте осуществления одна или несколько сигнальных молекул представляют собой один или несколько каррикинов или их производных. В еще одном варианте осуществления одна или несколько сигнальных молекул представляют собой один или несколько LCO, одно или несколько хитиновых соединений, один или несколько СО, один или несколько флавоноидов и их производные, один или несколько нефлавоноидных индукторов nod-генов и их производные, один или несколько каррикинов и их производные, или любую их комбинацию с сигнальной молекулой. LCO

Соединения липохитоолигосахаридов (LCO), также известные из уровня техники как симбиотические Nod-сигналы или Nod-факторы, состоят из олигосахаридной основной цепи β-1,4-связанных остатков N-ацетил-D-глюкозамина ("GlcNAc") с N-связанной ацильной цепью жирной кислоты, конденсированной на невосстанавливающем конце. LCO отличаются по количеству остатков GlcNAc в основной цепи, по длине и степени насыщения ацильной цепи жирной кислоты и по замещениям в восстанавливающих и невосстанавливающих остатках сахара. Пример LCO представлен ниже формулой I,

где

G представляет собой гексозамин, который может быть замещен, например, ацетильной группой по азоту, сульфатной группой, ацетильной группой и/или эфирной группой по кислороду,

R₁, R₂, R₃, R₅, R₆ и R₇, которые могут быть идентичными или различными, представляют собой H, CH₃ CO-, C_xH_yCO-, где x представляет собой целое число от 0 до 17, и y представляет собой целое число от 1 до 35, или любую другую ацильную группу, такую как, например, карбамил,

R₄ представляет собой алифатическую цепь с одной, двумя или тремя ненасыщенными связями, содержащую по меньшей мере 12 атомов углерода, и n представляет собой целое число от 1 до 4.

LCO могут быть получены (выделены и/или очищены) из бактерий, таких как Rhizobia, например, Rhizobium spp., Bradyrhizobium spp., Sinorhizobium spp. и Azorhizobium spp. Структура LCO является характерной для каждого такого вида бактерий и каждый штамм может продуцировать несколько LCO с различными структурами. Например, конкретные LCO из S. meliloti также были описаны в патенте США №5549718 и характеризуются формулой II,

в которой R представляет собой H или CH₃CO-, и n равняется 2 или 3.

Еще более конкретные LCO включают NodRM, NodRM-1, NodRM-3. При ацетилировании (R=CH₃CO-) они превращаются в AcNodRM-1 и AcNodRM-3, соответственно (патент США №5545718).

LCO из Bradyrhizobium japonicum описаны в патентах США №№5175149 и 5321011. В общем, они представляют собой пентасахаридные фитогормоны, содержащие метилфукозу. Описан ряд этих LCO, полученных из В. japonicum: BjNod-V (C_18:1); BjNod-V (A_C, C_18:1), BjNod-V (C_16:1) и BjNod-V (A_C, C_16:1), при этом "V" указывает на присутствие пяти N-ацетилглюкозаминов; "Ac" обозначает ацетилирование; число после "C" указывает на число атомов углерода в боковой цепи жирной кислоты, а число после ":" указывает на число двойных связей.

LCO, применяемые в композициях в соответствии с настоящим изобретением, можно получать (т.е. выделять и/или очищать) из штаммов бактерий, которые продуцируют LCO, таких как штаммы Azorhizobium, Bradyrhizobium (в том числе В. japonicum), Mesorhizobium, Rhizobium (в том числе R. leguminosarum), Sinorhizobium (в том числе S. meliloti), и штаммов бактерий, сконструированных при помощи генной инженерии так, что они продуцируют LCO.

Также настоящее изобретение охватывает композиции, в которых применяют LCO, которые получены (т.е. выделены и/или очищены) из микоризных грибов, таких как грибы из группы Glomerocycota, например, Glomus intraradicus. Структуры типичных LCO, полученных из этих грибов, описаны в патентных документах WO 2010/049751 и WO 2010/049751 (LCO, описанные в этих документах, также называются "Мус-факторами").

Кроме того, настоящее изобретение охватывает композиции, в которых применяют синтетические соединения LCO, такие, которые описаны в WO 2005/063784, и рекомбинантные LCO, полученные с помощью генной инженерии. Базовая структура LCO, встречающихся в природе, может содержать модификации или замещения, обнаруживаемые во встречающихся в природе LCO, таких как описанные в Spaink, Crit. Rev. Plant Sci. 54: 257-288 (2000), и D'Haeze, et al., Glycobiology 12: 79R-105R (2002). Олигосахаридные молекулы, относящиеся к предшественникам (СО, которые описаны ниже, также являются пригодными в качестве сигнальных молекул для растений по настоящему изобретению), для конструирования LCO также могут быть синтезированы организмами, сконструированными при помощи генной инженерии, например, как в Samain, et al., Carb. Res. 302:35-42 (1997); Samain, et al., J. Biotechnol. 72:33-47 (1999).

LCO можно использовать при различных формах чистоты и можно применять отдельно или в форме культуры LCO-продуцирующих бактерий или грибов. Способы для обеспечения практически чистых LCO предусматривают просто удаление микробных клеток из смеси LCO и микроба или продолжение выделения и очистки молекул LCO посредством разделения фаз LCO-растворитель с последующей HPLC, как описано, например, в патенте США №5549718. Очистка может быть улучшена посредством повторной HPLC и очищенные молекулы LCO можно лиофилизировать для длительного хранения.

CO

Хитоолигосахариды (СО) известны из уровня техники как структуры на основе N-ацетилглюкозаминов, связанных β-1-4-связями, определенные как олигомеры хитина, а также как N-ацетилхитоолигосахариды. CO имеют уникальные и различные фрагменты боковой цепи, которые отличают их от молекул хитина [(C₈H₁₃NO₅)n, № согласно CAS 1398-61-4], и молекул хитозана [(C₅H₁₁NO₄)n, № согласно CAS 9012-76-4]. Далее представлена типичная литература, в которой описаны структура и получение CO. Van der Hoist, et al., Current Opinion in Structural Biology, 11:608-616 (2001); Robina, et al., Tetrahedron 58:521-530 (2002); Hanel, et al., Planta 232:787-806 (2010); Rouge, et al. Chapter 27, "The Molecular Immunology of Complex Carbohydrates" in Advances in Experimental Medicine and Biology, Springer Science; Wan, et al., Plant Cell 27:1053-69 (2009); PCT/F100/00803 (9/21/2000) и Demont-Caulet, et al., Plant Physiol. 120(1):83-92 (1999). CO могут быть синтетическими или рекомбинантными. Способы получения рекомбинантных CO известны из уровня техники. См., например, Samain, et al. (выше); Cottaz, et al., Meth. Eng. 7(4):311-7 (2005), и Samain, et al., J. Biotechnol. 72:33-47 (1999).

Хитиновые соединения

Хитины и хитозаны, которые являются основными компонентами клеточных стенок грибов и экзоскелетов насекомых и ракообразных, также состоят из остатков GlcNAc. Хитиновые соединения включают хитин (IUPAC): N-[5-[[3-ацетиламино-4,5-дигидрокси-6-(гидроксиметил)оксан-2-ил]метоксиметил]-2-[[5-ацетиламино-4,6-дигидрокси-2-(гидроксиметил)оксан-3-ил]метоксиметил]-4-гидрокси-6-(гидроксиметил)оксан-3-ис]этанамид), хитозан (IUPAC: 5-амино-6-[5-амино-6-[5-амино-4,6-дигидрокси-2(гидроксиметил)оксан-3-ил]окси-4-гидрокси-2-(гидроксиметил)оксан-3-ил]окси-2(гидроксиметил)оксан-3,4-диол).

Эти соединения можно получать коммерчески, например, от Sigma-Aldrich, или получать из насекомых, панцирей ракообразных или клеточных стенок грибов. Способы получения хитина и хитозана известны из уровня техники и были описаны, например, в патенте США №4536207 (получение из панцирей ракообразных), Pochanavanich, et al., Lett. Appl. Microbiol. 35:17-21 (2002) (получение из клеточных стенок грибов) и в патенте США №5965545 (получение из панцирей крабов и гидролиз коммерческого хитозана). Деацетилированные хитины и хитозаны могут быть получены со степенью деацетилирования от менее 35% до более 90% и охватывают широкий спектр молекулярных масс, например, олигомеры низкомолекулярного хитозана с менее 15 кДа и олигомеры хитина с от 0,5 до 2 кДа; хитозан "практической степени чистоты" с молекулярной массой приблизительно 15 кДа и высокомолекулярный хитозан со значением веса вплоть до 70 кДа. Композиции на основе хитина и хитозана, составленные для обработки семян, также являются коммерчески доступными. Коммерческие продукты включают в себя, например, ELEXA® (Plant Defense Boosters, Inc.) и BEYOND™ (Agrihouse, Inc.).

Флавоноиды

Флавоноиды представляют собой фенольные соединения, характеризующиеся общей структурой из двух ароматических колец, соединенных трехуглеродным мостиком. Флавоноиды продуцируются растениями и характеризуются множеством функций, например, в качестве полезных сигнальных молекул и в качестве защиты от насекомых, животных, грибов и бактерий. Классы флавоноидов включают халконы, антоцианидины, кумарины, флавоны, флаванолы, флавонолы, флаваноны и изофлавоны. См. Jain, et al., J. Plant Biochem. & Biotechnol. 77:1-10 (2002); Shaw, et al., Environmental Microbiol. 77:1867-80 (2006).

Иллюстративные флавоноиды, которые можно применять в композициях в соответствии с настоящим изобретением, включают лютеолин, апигенин, тангеритин, кверцетин, кемпферол, мирицетин, физетин, изорамнетин, пачиподол, рамназин, гесперетин, нарингенин, формононетин, эриодиктиол, гомоэриодиктиол, дигидрокверцетин, таксифолин, дигидрокемпферол, генистеин, даидзеин, глицитеин, катехин, галлокатехин, катехин-3-галлат, галлокатехин-3-галлат, эпикатехин, эпигаллокатехин, эпикатехин-3-галлат, эпигаллокатехин-3-галлат, цианидин, делфинидин, мальвидин, пеларгонидин, пеонидин, петунидин или их производные. Флавоноидные соединения являются коммерчески доступными, например, от Natland International Corp., Research Triangle Park, Северная Каролина; MP Biomedicals, Ирвайн, Калифорния; LC Laboratories, Вобурн, Массачусетс.Флавоноидные соединения можно выделять из растений или семян, например, как описано в патентах США №№5702752; 5990291 и 6146668. Флавоноидные соединения также могут продуцироваться организмами, сконструированными при помощи методик генной инженерии, такими как дрожжи, как описано в Ralston, et al., Plant Physiology 737:1375-88 (2005).

Нефлавоноидный индуктор(ы) Nod-генов

Жасмоновую кислоту (JA, [1R-[1α,2β(Z)]]-3-оксо-2-(пентенил)циклопентануксусную кислоту) и ее производные, линолевую кислоту ((Z,Z)-9,12-октадекадиеноевую кислоту) и ее производные, а также линоленовую кислоту ((Z,Z,Z)-9,12,15-октадекатриеновую кислоту) и ее производные также можно применять в композициях, описанных в настоящем изобретении. Жасмоновая кислота и ее метиловый сложный эфир, метилжасмонат (MeJA), в совокупности известные как жасмонаты, представляют собой октадеканоидные соединения, которые в естественных условиях встречаются у растений. Жасмоновая кислота продуцируется корнями проростков пшеницы и микроорганизмами, относящимися к грибам, такими как Botryodiplodia theobromae и Gibbrella fujikuroi, дрожжами (Saccharomyces cerevisiae), а также патогенными и непатогенными штаммами Escherichia coli. Линолевая кислота и линоленовая кислота образуются в ходе биосинтеза жасмоновой кислоты. Как сообщается, жасмонаты, линолевая кислота и линоленовая кислота (и их производные) являются индукторами экспрессии nod-гена или образования LCO ризобактериями. См., например, Mabood, Fazli, Jasmonates induce the expression of nod genes in Bradyrhizobium japonicum, May 17, 2001; и Mabood, Fazli, "Linoleic and linolenic acid induce the expression of nod genes in Bradyrhizobium japonicum," USDA 3, May 17, 2001.

Полезные производные линолевой кислоты, линоленовой кислоты и жасмоновой кислоты, которые можно применять в композициях в соответствии с настоящим изобретением, включают в себя сложные эфиры, амиды, гликозиды и соли. Типичные сложные эфиры представляют собой соединения, в которых карбоксильная группа линолевой кислоты, линоленовой кислоты или жасмоновой кислоты была заменена группой -COR, где R представляет собой группу -OR¹, в которой R¹ представляет собой алкильную группу, например, C₁-C₈ неразветвленную или разветвленную алкильную группу, например, метильную, этильную или пропильную группу; алкенильную группу, например, C₂-C₈ неразветвленную или разветвленную алкенильную группу; алкинильную группу, например, C₂-C₈ неразветвленную или разветвленную алкинильную группу; арильную группу, содержащую, например, 6-10 атомов углерода; или гетероарильную группу, содержащую, например, 4-9 атомов углерода, где гетероатомы в гетероарильной группе могут представлять собой, например, N, O, P или S. Типичные амиды представляют собой соединения, в которых карбоксильная группа линолевой кислоты, линоленовой кислоты или жасмоновой кислоты была заменена группой -COR, где R представляет собой группу NR²R³, в которой R² и R³ независимо представляют собой водород; алкильную группу, например, C₁-C₈ неразветвленную или разветвленную алкильную группу, например, метильную, этильную или пропильную группу; алкенильную группу, например, C₂-C₈ неразветвленную или разветвленную алкенильную группу; алкинильную группу, например, C₂-C₈ неразветвленную или разветвленную алкинильную группу; арильную группу, содержащую, например, 6-10 атомов углерода; или гетероарильную группу, содержащую, например, 4-9 атомов углерода, где гетероатомы в гетероарильной группе могут представлять собой, например, N, О, P или S. Сложные эфиры можно получать при помощи известных способов, например, катализируемого кислотой нуклеофильного присоединения, где осуществляют реакцию карбоновой кислоты со спиртом в присутствии каталитического количества минеральной кислоты. Амиды также можно получать при помощи известных способов, например, путем реакции карбоновой кислоты с соответствующим амином в присутствии связующего вещества, такого как дициклогексилкарбодиимид (DCC), при нейтральных условиях. Подходящие соли линолевой кислоты, линоленовой кислоты и жасмоновой кислоты включают, например, соли присоединения основания. Основания, которые могут быть применены в качестве реагентов для получения метаболически приемлемых основных солей этих соединений, включают те, которые получены с катионами, такими как катионы щелочных металлов (например, калия и натрия) и катионы щелочно-земельных металлов (например, кальция и магния). Эти соли можно легко получать при помощи смешивания раствора линолевой кислоты, линоленовой кислоты или жасмоновой кислоты с раствором основания. Эту соль можно осаждать из раствора и собирать при помощи фильтрации или можно извлекать при помощи других средств, например, при помощи выпаривания растворителя.

Каррикин(ы)

Каррикины представляют собой виниловые 4H-пироны, например, 2H-фуро[2,3-c]пиран-2-оны, в том числе их производные и аналоги. Примеры этих соединений представлены следующей структурой:

где Z представляет собой О, S или NR₅; каждый из R₁, R₂, R₃ и R₄ независимо представляет собой Н, алкил, алкенил, алкинил, фенил, бензил, гидрокси, гидроксиалкил, алкокси, фенилокси, бензилокси, CN, COR₆, COOR=, галоген, NR₆R₇ или NO₂; и каждый из R₅, R₆ и R₇ независимо представляет собой H, алкил или алкенил, или их биологически приемлемой солью. Примеры биологически приемлемых солей этих соединений могут включать в себя соли присоединения кислоты, образованные биологически приемлемыми кислотами, примеры которых включают в себя гидрохлорид, гидробромид, сульфат или бисульфат, фосфат или гидрофосфат, ацетат, бензоат, сукцинат, фумарат, малеат, лактат, цитрат, тартрат, глюконат; метансульфонат, бензолсульфонат и п-толуолсульфоновую кислоту. Дополнительные биологически приемлемые соли металлов могут включать соли щелочных металлов, полученные с основаниями, примеры которых включают натриевые и калиевые соли. Примеры соединений, которые охвачены структурой и могут быть подходящими для применения согласно настоящему изобретению, включают следующие: 3-метил-2H-фуро[2,3-c]пиран-2-он (где R₁=CH₃, R₂, R₃, R₄=H), 2H-фуро[2,3-c]пиран-2-он (где R₁, R₂, R₃, R4=H), 7-метил-2H-фуро[2,3-c]пиран-2-он (где R₁, R₂, R₄=H, R₃=CH₃), 5-метил-2H-фуро[2,3-c]пиран-2-он (где R₁, R₂, R₃=H, R₄=CH₃), 3,7-диметил-2H-фуро[2,3-c]пиран-2-он (где R₁, R₃=CH₃, R₂, R₄=H), 3,5-диметил-2H-фуро[2,3-c]пиран-2-он (где R₁, R₄=CH₃, R₂, R₃=H), 3,5,7-триметил-2H-фуро[2,3-c]пиран-2-он (где R₁, R₃, R₄=CH₃, R₂=H), 5-метоксиметил-3-метил-2H-фуро[2,3-c]пиран-2-он (где R₁=CH₃, R₂, R₃=H, R₄=CH₂OCH₃), 4-бром-3,7-диметил-2H-фуро[2,3-c]пиран-2-он (где R₁, R₃=CH₃, R₂=Br, R₄=H), 3-метилфуро[2,3-c]пиридин-2(3H)-он (где Z=NH, R₁=CH₃, R₂, R₃, R₄=H), 3,6-диметилфуро[2,3-c]пиридин-2(6H)-он (где Z=N-CH₃, R₁=CH₃, R₂, R₃, R₄=H). См., патент США №7576213. Эти молекулы также известны как каррикины. См. Halford, "Smoke Signals," в Chem. Eng. News (12 апреля 2010 г.), на страницах 37-38, сообщили, что каррикины или бутенолиды, которые содержатся в дыме, действуют как стимуляторы роста и способствуют прорастанию семян после лесного пожара, и могут активировать семена, например, кукурузы, разновидностей томата, латука и разновидностей лука, которые подвергались хранению. Эти молекулы являются объектом патента США №7576213.

Полезный микроорганизм(ы)

В одном из вариантов осуществления композиции, описанные в настоящем документе, могут содержать один или несколько полезных микроорганизмов. Один или несколько полезных микроорганизмов могут обладать одним или несколькими полезными свойствами (например, продуцировать одну или несколько сигнальных молекул, описанных в настоящем документе, увеличивать поглощение питательных веществ и воды, стимулировать и/или увеличивать фиксацию азота, усиливать рост, улучшать прорастание семени, улучшать всхожесть проростков, прерывать латентность или состояние покоя растения и т.д.).

В одном варианте осуществления полезным микроорганизмом(ами) является одна или несколько бактерий. В другом варианте осуществления бактерии представляют собой диазотрофы (т.е. бактерии, которые представляют собой симбиотические азотфиксирующие бактерии). В еще одном варианте осуществления бактерия представляет собой бактерию из рода Rhizobium spp. (например, R. cellulosilyticum, R. daejeonense, R. etli, R. galegae, R. gallicum, R. giardinii, R. hainanense, R. huautlense, R. indigoferae, R. leguminosarum, R. loessense, R. lupini, R. lusitanum, R. meliloti, R. mongolense, R. miluonense, R. sullae, R. tropici, R. undicola и/или R. yanglingense), Bradyrhizobium spp. (например, В. bete, В. canariense, В. elkanii, В. iriomotense, В. japonicum, В. jicamae, В. liaoningense, В. pachyrhizi и/или В. yuanmingense), Azorhizobium spp. (например, A. caulinodans и/или A. doebereinerae), Sinorhizobium spp. (например, S. abri, S. adhaerens, S. americanum, S. aboris, S. fredii, S. indiaense, S. kostiense, S. kummerowiae, S. medicae, S. meliloti, S. mexicanus, S. morelense, S. saheli, S. terangae и/или S. xinjiangense), Mesorhizobium spp., (M. albiziae, M. amorphae, M. chacoense, M. ciceri, M. huakuii, M. loti, M. mediterraneum, M. pluifahum, M. septentrionale, M. temperatum и/или M. tianshanense) и их комбинации. В конкретном варианте осуществления полезный микроорганизм выбран из группы, состоящей из В. japonicum, R leguminosarum, R meliloti, S. meliloti и их комбинаций. В другом варианте осуществления полезный микроорганизм представляет собой В. japonicum. В другом варианте осуществления полезный микроорганизм представляет собой R leguminosarum. В другом варианте осуществления полезный микроорганизм представляет собой R meliloti. В другом варианте осуществления полезный микроорганизм представляет собой S. meliloti.

В другом варианте осуществления полезный микроорганизм представляет собой одну или несколько микориз. В частности, одна или несколько микориз представляют собой эндомикоризу (также называемую везикулярно-арбускулярными микоризами, VAM, арбускулярными микоризами или AM), эктомикоризу или их комбинации.

В одном варианте осуществления одна или несколько из микориз представляют собой эндомикоризу отдела Glomeromycota и родов Glomus и Gigaspora. В еще одном варианте осуществления эндомикориза представляет собой штамм Glomus aggregatum, Glomus brasilianum, Glomus clarum, Glomus deserticola, Glomus etunicatum, Glomus fasciculatum, Glomus intraradices, Glomus monosporum или Glomus mosseae, Gigaspora margarita или их комбинацию.

В другом варианте осуществления одна или несколько микориз представляют собой эктомикоризу из отдела Basidiomycota, Ascomycota и Zygomycota. В еще одном варианте осуществления эктомикориза представляет собой штамм Laccaria bicolor, Laccaria laccata, Pisolithus tinctorius, Rhizopogon amylopogon, Rhizopogon fulvigleba, Rhizopogon luteolus, Rhizopogon villosuli, Scleroderma сера, Scleroderma citrinum или их комбинацию.

В еще одном варианте осуществления одна или несколько микориз представляют собой микоризу эрикоид, микоризу арбутоид или микоризу монотропоид. Микориза арбускулярного типа и эктомикориза образуют микоризу эрикоид со многими растениями, принадлежащими к порядку Ericales, при этом некоторые представители Ericales образуют микоризы арбутоид и монотропоид. Все орхидеи являются микогетеротрофами на определенной стадии их жизненного цикла и образуют орхидные микоризы с отделом базидиальных грибов. В одном варианте осуществления микориза может представлять собой микоризу эрикоид, предпочтительно из отдела Ascomycota, например, Hymenoscyphous ericae или Oidiodendron sp. В другом варианте осуществления микориза также может представлять собой микоризу арбутоид, предпочтительно из отдела Basidiomycota. В еще одном варианте осуществления микориза может представлять собой микоризу монотропоид, предпочтительно из отдела Basidiomycota. В еще одном варианте осуществления микориза может представлять собой микоризу орхидеи, предпочтительно из рода Rhizoctonia.

Питательный микроэлемент(ы)

В еще одном варианте осуществления композиции, описанные в настоящем документе, могут содержать один или несколько полезных питательных микроэлементов. Неограничивающие примеры питательных микроэлементов для применения в композициях, описанных в настоящем документе, включают в себя витамины (например, витамин А, комплекс витаминов группы В (т.е., витамин B₁, витамин В₂, витамин В₃, витамин В₅, витамин В₆, витамин В₇, витамин В₈, витамин В₉, витамин В₁₂, холин) витамин С, витамин D, витамин Е, витамин K, каротиноиды (α-каротин, β-каротин, криптоксантин, лютеин, ликопен, зеаксантин и т.д.), макроэлементы (например, кальций, магний, калий, натрий, железо и т.д.), микроэлементы (например, бор, кобальт, хлор, хром, медь, фтор, йод, железо, марганец, молибден, селен, цинк и т.д.), органические кислоты (например, уксусную кислоту, лимонную кислоту, молочную кислоту, яблочную кислоту, таурин и т.д.), а также их комбинации.

В конкретном варианте осуществления композиции содержат бор, хлор, медь, железо, марганец, молибден, цинк или их комбинации.

Биостимулятор(ы)

В одном варианте осуществления композиции, описанные в настоящем документе, могут содержать один или несколько полезных биостимуляторов. Биостимуляторы могут улучшить метаболические или физиологические процессы, такие как дыхание, фотосинтез, усвоение нуклеиновой кислоты, потребление ионов, доставку питательных веществ или их комбинации. Неограничивающие примеры биостимуляторов включают экстракты морских водорослей (например, Ascophyllum nodosum), гуминовые кислоты (например, гумат калия), фульвокислоты, мио-инозитол, глицин и их комбинации. В другом варианте осуществления композиции включают экстракты морских водорослей, гуминовые кислоты, фульвокислоты, мио-инозитол, глицин и их комбинации.

Полимер(ы)

В одном варианте осуществления композиции, описанные в настоящем документе, могут дополнительно содержать один или несколько полимеров. Неограничивающие применения полимеров в сельскохозяйственной отрасли включают агрохимическую доставку, удаление тяжелых металлов, удержание воды и/или подачу воды и их комбинации. Pouci, et al., Am. J. Agri. & Biol. Sci., 3(1):299-314 (2008). В одном варианте осуществления один или несколько полимеров представляют собой природный полимер (например, агар, крахмал, альгинат, пектин, целлюлозу и т.д.), синтетический полимер, биоразлагаемый полимер (например, поликапролактон, полилактид, поливиниловый спирт) и т.д.) или их комбинации.

Неограничивающий список полимеров, применяемых для композиций, описанных в настоящем документе, представлен в Pouci, et al., Am. J. Agri. & Biol. Sci., 3(7):299-314 (2008). В одном из вариантов осуществления композиции, описанные в настоящем документе, включают в себя целлюлозу, производные целлюлозы, метилцеллюлозу, производные метилцеллюлозы, крахмал, агар, альгинат, пектин, поливинилпирролидон и их комбинации.

Увлажняющее средство(а)

В одном варианте осуществления композиции, описанные в настоящем документе, могут дополнительно содержать один или несколько увлажняющих средств. Увлажняющие средства обычно используются на почвах, в частности гидрофобных почвах, для улучшения инфильтрации и/или проникновения воды в почву. Увлажняющим средством могут быть вспомогательное средство, масло, поверхностно-активное средство, буфер, подкислитель или их комбинация. В варианте осуществления увлажняющим средством является поверхностно-активное средство. В варианте осуществления увлажняющим средством является один или несколько неионных поверхностно-активных средств, одно или несколько анионных поверхностно-активных средств или их комбинация. В следующем варианте осуществления увлажняющим средством является одно или несколько неионных поверхностно-активных средств.

Поверхностно-активные средства, приемлемые для композиций, раскрываемых в настоящем документе, представлены в разделе "Поверхностно-активные средства".

Поверхностно-активное средство(а)

Поверхностно-активные средства, подходящие для композиций, описанных в настоящем документе, могут быть неионными поверхностно-активными средствами (например, полуполярными, и/или анионными, и/или катионными, и/или цвиттерионными). Предполагается, что поверхностно-активное средство(а) будет меньше ухудшать активность одного или нескольких депонируемых штаммов и/или одного или нескольких полезных микроорганизмов, насколько это возможно. С помощью поверхностно-активных средств возможны увлажнение и эмульгация почвы(почв) и/или грунта (грунтов). Предполагается, что поверхностно-активные средства, применяемые в описываемой композиции, обладают низкой токсичностью в отношении микроорганизмов, содержащихся в композиции. Кроме того, предполагается, что поверхностно-активные средства, применяемые в описываемой композиции, характеризуются низкой фитотоксичностью (т.е. степенью токсичности вещества или комбинации веществ по отношению к растению). Можно применять одно поверхностно-активное средство или смесь из нескольких поверхностно-активных средств.

Анионные поверхностно-активные средства

Анионные поверхностно-активные средства или смеси анионных и неионогенных поверхностно-активных средств также могут применяться в композициях. Анионные поверхностно-активные средства представляют собой поверхностно-активные средства, у которых гидрофильная часть в водном растворе находится в анионном или отрицательно заряженном состоянии. Композиции, описанные в настоящем документе, могут содержать одно или несколько анионных поверхностно-активных средств. Анионное поверхностно-активное средство(а) может быть либо растворимым в воде анионным поверхностно-активным средством, или нерастворимым в воде анионным поверхностно-активным средством, или комбинацией растворимого в воде анионного поверхностно-активного средства и нерастворимого в воде анионного поверхностно-активного средства. Неограничивающие примеры анионных поверхностно-активных средств включают в себя сульфоновые кислоты, сложные эфиры серной кислоты, карбоновые кислоты и их соли. Неограничивающие примеры растворимых в воде анионных поверхностно-активных средств включают в себя алкилсульфаты, алкиловые эфиры серной кислоты, алкиловые эфиры амида серной кислоты, алкиларилполиэфиры серной кислоты, алкиларилсульфаты, алкиларилсульфонаты, моноглицериды серной кислоты, алкилсульфонаты, алкиламидсульфонаты, алкиларилсульфонаты, бензолсульфонаты, толуолсульфонаты, ксилолсульфонаты, кумолсульфонаты, алкилбензолсульфонаты, алкилдифенилоксидсульфонат, альфа-олефинсульфонаты, алкилнафталинсульфонаты, сульфонаты на основе парафинов, сульфонаты лигнина, алкилсульфосукцинаты, этоксилированные сульфосукцинаты, алкиловые эфиры сульфосукцинатов, алкиламидные сульфосукцинаты, алкилсульфосукцинамат, алкилсульфоацетаты, алкилфосфаты, эфиры фосфорной кислоты, алкиловые эфиры фосфорной кислоты, ацилсаркозинаты, ацилизетионаты, N-ацилтаураты, N-ацил-N-алкилтаураты, алкилкарбоксилаты или их комбинации.

Неионогенные поверхностно-активные средства

Неионогенные поверхностно-активные средства представляют собой поверхностно-активные средства, характеризующиеся отсутствием электрического заряда при растворении или диспергировании в водной среде. По меньшей мере в одном варианте осуществления в композиции, описанной в настоящем документе, применяют одно или несколько неионогенных поверхностно-активных средств, поскольку они обеспечивают желаемые смачивающие и эмульгирующие эффекты и существенно не ингибируют стабильность и активность споры. Неионогенное поверхностно-активное средство(а) могут быть либо растворимыми в воде неионогенными поверхностно-активными средствами, нерастворимыми в воде неионогенными поверхностно-активными средствами или комбинацией растворимых в воде неионогенных поверхностно-активных средств и нерастворимых в воде неионогенных поверхностно-активных средств.

Нерастворимые в воде поверхностно-активные средства

Неограничивающие примеры нерастворимых в воде неионогенных поверхностно-активных средств включают в себя алкильные и арильные сложные эфиры глицерина, гликолевые эфиры, этаноламиды, сульфоаниламиды, спирты, амиды, спиртовые этоксилаты, сложные эфиры глицерина, гликолевые эфиры, этоксилаты сложного эфира глицерина и гликолевых эфиров, сахарные алкилполигликозиды, полиоксиэтилированные жирные кислоты, конденсаты алканоламина, алканоламиды, третичные ацетиленовые гликоли, полиоксиэтилированные меркаптаны, сложные эфиры карбоновых кислот, полиоксиэтилированные полиоксипропиленгликоли, эфиры сорбита и жирных кислот или их комбинации. Также включены блок-сополимеры ЕО/РО (ЕО представляет собой оксид этилена, РО представляет собой оксид пропилена), полимеры и сополимеры ЕО, полиамины и поливинилпирролидоны.

Растворимые в воде неионогенные поверхностно-активные средства

Неограничивающие примеры растворимых в воде неионогенных поверхностно-активных средств включают этоксилаты спирта сорбита и жирной кислоты и этоксилаты эфира сорбита и жирной кислоты.

Комбинация неионогенных поверхностно-активных средств

В одном варианте осуществления композиции, описанные в настоящем документе, содержат по меньшей мере одно или несколько неионогенных поверхностно-активных средств. В одном варианте осуществления композиции содержат по меньшей мере одно нерастворимое в воде неионогенное поверхностно-активное средство и по меньшей мере одно растворимое в воде неионогенное поверхностно-активное средство. В следующем варианте осуществления композиции содержат комбинацию неионогенных поверхностно-активных средств, содержащих углеводородные цепи практически одинаковой длины.

Другие поверхностно-активные средства

В другом варианте осуществления композиции, описанные в настоящем документе, также могут содержать кремнийорганические поверхностно-активные средства, противовспениватели на основе силикона, применяемые в качестве поверхностно-активных средств в противовспенивателях на основе силикона и минеральных масел. В еще одном варианте осуществления композиции, описанные в настоящем документе, также могут включать соли щелочных металлов и жирных кислот (например, растворимые в воде соли щелочных металлов и жирных кислот и/или не растворимые в воде соли щелочных металлов и жирных кислот).

Гербицид(ы)

В одном варианте осуществления композиции, описанные в настоящем документе, могут дополнительно содержать один или несколько гербицидов. В конкретном варианте осуществления гербицид может быть довсходовым гербицидом, послевсходовым гербицидом или их комбинацией.

Подходящие гербициды включают в себя химические гербициды, природные гербициды (например, биогербициды, органические гербициды и т.д.) или их комбинации. Неограничивающие примеры приемлемых гербицидов включают в себя бентазон, ацифлуорфен, хлоримурон, лактофен, кломазон, флуазифоп, глуфосинат, глифосат, сетоксидим, имазетапир, имазамокс, фомесаф, флумиклорак, имазаквин, клетодим, пендиметалин; 3,4-диметил-2,6-динитро-N-пентан-3-ил-анилин; N-(1-этилпропил)-2,6-динитро-3,4-ксилидин; пронамид; пропизамид; 3,5-дихлор-N-(1,1-диметилпропинил)бензамид; 3,5-дихлор-N-(1,1-диметил-2-пропинил)бензамид; N-(1,1-диметилпропинил)-3,5-дихлорбензамид; S-этил-N-этилтиоциклогексанкарбамат; трифлуралин; 2,6-динитро-N,N-дипропил-4-(трифторметил)анилин; глифосат; N-(фосфонометил)глицин и их производные. В одном варианте осуществления один или несколько гербицидов для применения в соответствии с настоящим раскрытием включают в себя пронамид (коммерчески известный как Kerb®); пропизамид; 3,5-дихлор-N-(1,1-диметилпропинил)бензамид; 3,5-дихлор-N-(1,1-диметил-2-пропинил)бензамид; N-(1,1-диметилпропинил)-3,5-дихлорбензамид; циклоат, S-этил-N-этилтиоциклогексанкарбамат (коммерчески известный как Ro-Neet®); трифлуралин; 2,6-динитро-N,N-дипропил-4-(трифторметил)анилин; глифосат; N-(фосфонометил)глицин и их производные. Коммерческие продукты, содержащие каждое из этих соединений, являются легкодоступными. Концентрация гербицида в композиции, как правило, будет соответствовать обозначенной норме применения для определенного гербицида.

Фунгицид(ы)

В одном варианте осуществления композиции, описанные в настоящем документе, могут дополнительно содержать один или несколько фунгицидов. Фунгициды, пригодные для композиций, описанных в настоящем документе, соответственно обладают активностью в отношении широкого спектра патогенных микроорганизмов, в том числе без ограничения Phytophthora, Rhizoctonia, Fusarium, Pythium, Phomopsis или Selerotinia и Phakopsora, a также их комбинаций.

Неограничивающие примеры коммерческих фунгицидов, которые могут быть подходящими для композиций, описанных в настоящем документе, включают в себя PROTÉGÉ, RIVAL или ALLEGIANCE FL или LS (Gustafson, Плейно, Техас), WARDEN RTA (Agrilance, Сент-Пол, Миннесота), APRON XL, APRON МАХХ RTA или RFC, MAXIM 4FS или XL (Syngenta, Вилмингтон, Делавер), CAPTAN (Arvesta, Гвелф, Онтарио) и PROTREAT (Nitragin Argentina, Буэнос-Айрес, Аргентина). Активные ингредиенты в этих и других коммерческих фунгицидах включают, но без ограничения, флудиоксонил, мефеноксам, азоксистробин и металаксил. Коммерческие фунгициды в наиболее подходящем случае применяют согласно инструкциям производителя в рекомендуемых концентрациях.

Инсектицид(ы)

В одном варианте осуществления композиции, описанные в настоящем документе, могут дополнительно содержать один или несколько инсектицидов. Инсектициды, пригодные для композиций, описанных в настоящем документе, соответственно обладают активностью в отношении широкого спектра насекомых, в том числе без ограничения проволочников, совок, червовидных личинок, кукурузного жука, личинок мухи ростковой, земляных блошек, клопов-наземников, тли, листоедов, щитников и их комбинаций.

Неограничивающие примеры коммерческих инсектицидов, которые могут быть подходящими для композиций, описанных в настоящем документе, включают в себя CRUISER (Syngenta, Уилмингтон, Делавэр), GAUCHO и PONCHO (Gustafson, Плано, Техас). Активные ингредиенты в этих и других коммерческих инсектицидах включают тиаметоксам, клотианидин и имидаклоприд. Коммерческие инсектициды в наиболее подходящем случае применяют согласно инструкциям производителя в рекомендуемых концентрациях.

СПОСОБЫ

В другом аспекте раскрываются способы применения депонируемых штаммов и композиций, раскрываемых в настоящем документе.

В одном варианте осуществления раскрывается способ увеличения доступности фосфора для поглощения растением из почвы. Способ предусматривает введение в почву одного или нескольких грибковых штаммов, выбранных из группы, состоящей из:

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50776,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50777,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50778,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50779,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50780,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50781,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50782,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50783,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50784,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50785,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50786,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50787,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50788 и

смеси двух или более из этих штаммов.

В конкретном варианте осуществления способ предусматривает введение инокулюма одного или нескольких из вышеупомянутых депонируемых штаммов (например, включая по меньшей мере два из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере три из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере четыре из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере пять из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере шесть из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере семь из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере восемь из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере девять из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере десять из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере одиннадцать из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере двенадцать из вышеупомянутых штаммов и включая все вышеупомянутые штаммы).

В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50776. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50777. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50778. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50779. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50780. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50781. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50782. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50783. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50784. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50785. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50786. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50787. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50788.

В следующем варианте осуществления стадия введения в почву инокулюма одного или нескольких из депонируемых грибковых штаммов предусматривает введение в почву одной или нескольких композиций, раскрываемых в настоящем документе. Инокулюм(ы) или композиции могут быть введены в почву согласно способам, известным специалистам в данной области техники. Неограничивающие примеры включают в себя внесение в борозду, распыление, покрытие семян, нанесение на листья и т.д. В конкретном варианте осуществления стадия введения предусматривает внесение в борозду инокулюма или композиций, раскрываемых в настоящем документе.

В некоторых вариантах осуществления стадия введения в почву одного или нескольких депонируемых грибковых штаммов предусматривает введение эффективного количества одного или нескольких депонируемых грибковых штаммов. В определенных вариантах осуществления стадия введения в почву инокулюма одного или нескольких депонируемых грибковых штаммов предусматривает введение инокулюма в почву в количестве 1×10¹-1×10⁸, более предпочтительно 1×10⁶-1×10¹² колониеобразующих единиц на гектар. В некоторых других вариантах осуществления стадия введения в почву инокулюма одного или нескольких депонируемых грибковых штаммов предусматривает введение депонируемых грибковых штаммов в виде семени, покрытого 1×10¹-1×10⁸, более предпочтительно 1×10²-1×10⁶ колониеобразующих единиц на семя.

Более того, способ может предусматривать контакт грибкового штамма с одним или несколькими источниками фосфора, например, путем добавления одного или нескольких источников фосфора в почву. Стадия добавления источник фосфора можно осуществлять до, после или в ходе стадии введения инокулюма в почву. В следующем варианте осуществления одним или несколькими источниками фосфора может быть ингредиент в композиции, раскрываемой в настоящем документе. Согласно способу, раскрываемому в настоящем документе, может быть использован любой источник фосфора, который может быть солюбилизирован депонируемыми штаммами.

В одном варианте осуществления одним или несколькими источниками фосфора являются фосфориты.

В другом варианте осуществления одним или несколькими источниками фосфора являются удобрения, содержащие один или несколько источников фосфора. Коммерчески доступные готовые фосфатные удобрения подразделяются на множество видов. Некоторые распространенные виды содержат фосфорит, моноаммонийфосфат, диаммонийфосфат, монокальцийфосфат, суперфосфат, тройной суперфосфат и/или полифосфат аммония. Все из этих удобрений получают путем химической обработки нерастворимых природных фосфоритов на оборудовании для производства удобрений в промышленном масштабе, и этот продукт является дорогостоящим. Посредством настоящего изобретения возможно уменьшение количества этих удобрений, вносимых в почву, при сохранении такого же количества фосфора, поглощаемого из почвы.

В следующем варианте осуществления одним или несколькими источниками фосфора являются органические источники фосфора. В другом конкретном варианте осуществления источником фосфора может являться органическое удобрение. Органическое удобрение относится к почвоулучшителю, полученному из природных источников, что обеспечивает по меньшей мере минимальное процентное содержание азота, фосфата и карбоната калия. Неограничивающие примеры органических удобрений включают в себя растительные продукты и продукты жизнедеятельности животных, каменную пыль, морские водоросли, инокулянты и кондиционеры. Эти удобрения зачастую являются доступными в садовых центрах и от садоводческих компаний-поставщиков. В частности, органический источник фосфора доступен в виде костной муки, мясной муки, навоза, компоста, осадка сточных вод или гуано, или их комбинации.

В следующем варианте осуществления одним или несколькими источниками фосфора может быть комбинация источников фосфора, в том числе без ограничения фосфорит, моноаммония фосфат, диаммония фосфат, монокальция фосфат, суперфосфат, тройной суперфосфат, аммония полифосфат, удобрения, содержащие один или несколько источников фосфора, один или несколько органических источников фосфора и их комбинации.

В другом аспекте способ предусматривает выращивание растений в почве, содержащей один или несколько источников фосфора и один или несколько грибковых штаммов, выбранных из группы, состоящей из:

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50776,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50777,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50778,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50779,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50780,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50781,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50782,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50783,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50784,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50785,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50786,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50787,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50788 и

смеси двух или более из этих штаммов.

В конкретном варианте осуществления способ предусматривает инокулюм одного или нескольких из вышеупомянутых депонируемых штаммов (например, включая по меньшей мере два из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере три из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере четыре из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере пять из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере шесть из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере семь из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере восемь из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере девять из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере десять из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере одиннадцать из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере двенадцать из вышеупомянутых штаммов и включая все вышеупомянутые штаммы).

В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50776. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50777. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50778. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50779. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50780. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50781. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50782. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50783. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50784. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50785. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50786. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50787. В варианте осуществления инокулюм содержит штамм с учетным номером в депозитарии NRRL В-50788.

В конкретном варианте осуществления стадия введения в почву одного или нескольких из депонируемых грибковых штаммов предусматривает введение в почву одной или нескольких композиций, раскрываемых в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит эффективное количество одного или нескольких депонируемых грибковых штаммов. В определенных вариантах осуществления стадия введения в почву инокулюма одного или нескольких депонируемых грибковых штаммов предусматривает введение инокулюмв в почву в количестве 1×10¹-1×10⁸, более предпочтительно 1×10⁶-1×10¹² колониеобразующих единиц на гектар. В некоторых других вариантах осуществления стадия введения в почву инокулюма одного или нескольких депонируемых грибковых штаммов предусматривает введение депонируемых грибковых штаммов в виде семени, покрытого 1×10¹-1×10⁸, более предпочтительно 1×10²-1×10⁶ колониеобразующих единиц на семя.

В варианте осуществления способ дополнительно предусматривает стадии введения одного или нескольких источников фосфора до или в ходе стадии выращивания и введение инокулюма одного или нескольких депонируемых штаммов до или в ходе стадии выращивания. Введение одного или нескольких источников фосфора и введение инокулюма одного или нескольких депонируемых штаммов можно осуществлять в одно и то же время, практически в одно и то же время или в разное время. В другом варианте осуществления стадии введения при необходимости можно повторять.

В одном варианте осуществления одним или несколькими источниками фосфора являются фосфориты.

В другом варианте осуществления одним или несколькими источниками фосфора являются удобрения, содержащие один или несколько источников фосфора. Коммерчески доступные готовые фосфатные удобрения подразделяются на множество видов. Некоторые распространенные виды содержат фосфорит, моноаммонийфосфат, диаммонийфосфат, монокальцийфосфат, суперфосфат, тройной суперфосфат и/или полифосфат аммония. Все из этих удобрений получают путем химической обработки нерастворимых природных фосфоритов на оборудовании для производства удобрений в промышленном масштабе, и этот продукт является дорогостоящим. Посредством настоящего изобретения возможно уменьшение количества этих удобрений, вносимых в почву, при сохранении такого же количества фосфора, поглощаемого из почвы.

В следующем варианте осуществления одним или несколькими источниками фосфора являются органические источники фосфора. В другом конкретном варианте осуществления источником фосфора может являться органическое удобрение. Органическое удобрение относится к почвоулучшителю, полученному из природных источников, что обеспечивает по меньшей мере минимальное процентное содержание азота, фосфата и карбоната калия. Неограничивающие примеры органических удобрений включают в себя растительные продукты и продукты жизнедеятельности животных, каменную пыль, морские водоросли, инокулянты и кондиционеры. Эти удобрения зачастую являются доступными в садовых центрах и от садоводческих компаний-поставщиков. В частности, органический источник фосфора доступен в виде костной муки, мясной муки, навоза, компоста, осадка сточных вод или гуано, или их комбинации.

В следующем варианте осуществления одним или несколькими источниками фосфора может быть комбинация источников фосфора, в том числе без ограничения фосфорит, моноаммония фосфат, диаммония фосфат, монокальция фосфат, суперфосфат, тройной суперфосфат, аммония полифосфат, удобрения, содержащие один или несколько источников фосфора, один или несколько органических источников фосфора и их комбинации.

Способы, раскрываемые в настоящем документе, являются потенциально применимыми для улучшения условий роста, приводящих к улучшенным поглощению фосфора и/или урожайности для любого типа растения. В одном конкретном варианте осуществления растение выбрано из группы, состоящей из растений, не являющихся бобовыми, бобовых, Brassica spp., зерновых, плодовых, овощных, ореховых, цветов и газонных трав. В частности, зерновыми являются пшеница, кукуруза, рис, овес, рожь, ячмень. В частности, бобовыми являются разновидности чечевицы, нута, фасоли, сои, гороха и люцерны.

В другом конкретном варианте осуществления растения выбраны из группы, состоящей из люцерны, риса, пшеницы, ячменя, ржи, овса, хлопчатника, подсолнечника, арахиса, кукурузы, картофеля, сладкого картофеля, фасоли, гороха, нута, чечевицы, цикория, салата-латука, эндивия, капусты, брюссельской капусты, свеклы, пастернака, репы, цветной капусты, брокколи, репы, редиса, шпината, лука, чеснока, баклажана, перца, сельдерея, моркови, кабачка, тыквы, цуккини, огурца, яблони, груши, дыни, цитрусовых, клубники, винограда, малины, ананаса, сои, табака, томата, сорго и сахарного тростника.

НАНЕСЕНИЕ ПОКРЫТИЙ НА СЕМЯ

В другом аспекте семена покрывают одним или несколькими грибковыми штаммами, выбранными из группы, состоящей из:

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50776,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50777,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50778,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50779,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50780,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50781,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50782,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50783,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50784,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50785,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50786,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50787,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50788 и

смеси двух или более из этих штаммов.

В конкретном варианте осуществления семя (семена) покрывают одним или несколькими из вышеупомянутых депонируемых штаммов (например, включая по меньшей мере два из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере три из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере четыре из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере пять из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере шесть из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере семь из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере восемь из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере девять из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере десять из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере одиннадцать из вышеупомянутых штаммов, по меньшей мере двенадцать из вышеупомянутых штаммов и включая все вышеупомянутые штаммы).

В варианте осуществления семя (семена) покрывают штаммом с учетным номером в депозитарии NRRL В-50776. В варианте осуществления семя (семена) покрывают штаммом с учетным номером в депозитарии NRRL В-50777. В варианте осуществления семя (семена) покрывают штаммом с учетным номером в депозитарии NRRL В-50778. В варианте осуществления семя (семена) покрывают штаммом с учетным номером в депозитарии NRRL В-50779. В варианте осуществления семя (семена) покрывают штаммом с учетным номером в депозитарии NRRL В-50780. В варианте осуществления семя (семена) покрывают штаммом с учетным номером в депозитарии NRRL В-50781. В варианте осуществления семя (семена) покрывают штаммом с учетным номером в депозитарии NRRL В-50782. В варианте осуществления семя (семена) покрывают штаммом с учетным номером в депозитарии NRRL В-50783. В варианте осуществления семя (семена) покрывают штаммом с учетным номером в депозитарии NRRL В-50784. В варианте осуществления семя (семена) покрывают штаммом с учетным номером в депозитарии NRRL В-50785. В варианте осуществления семя (семена) покрывают штаммом с учетным номером в депозитарии NRRL В-50786. В варианте осуществления семя (семена) покрывают штаммом с учетным номером в депозитарии NRRL В-50787. В варианте осуществления семя (семена) покрывают штаммом с учетным номером в депозитарии NRRL В-50788.

В одном варианте осуществления семена могут быть обработаны композицией(иями), описанной в настоящем документе, несколькими способами, но предпочтительно путем распыления или капельной обработки. Распыление и капельная обработка могут быть проведены путем составления композиций, описанных в настоящем документе, и распыления или капельной обработки композиции(ий) по отношению к семени (семенам) посредством непрерывной системы подачи (которую калибруют для проведения обработки на предварительно определенной скорости пропорционально непрерывному потоку семени), такой как установка барабанного типа. Также могут применяться системы для работы с партиями, в которых предварительно определенный объем партии семян и композиции(ий), описанной в настоящем документе, подают в смеситель. Системы и аппараты для осуществления этих способов являются коммерчески доступными от многочисленных поставщиков, например, Bayer CropScience (Gustafson).

В другом варианте осуществления обработка предусматривает нанесение покрытия на семена. Один такой способ предусматривает покрытие внутренней стенки сферического контейнера композицией(иями), описанной в настоящем документе, добавление семян, затем вращение контейнера для обеспечения контакта семян со стенкой и композицией(ями), причем способ известен из уровня техники как "нанесение покрытия при помощи контейнера". На семена можно наносить покрытие при помощи комбинаций способов нанесения покрытия. Замачивание обычно влечет за собой применение жидких форм описываемых композиций. Например, семена могут быть замочены в течение от приблизительно 1 минуты до приблизительно 24 часов (например, по меньшей мере 1 мин., 5 мин., 10 мин., 20 мин., 40 мин., 80 мин., 3 ч., 6 ч., 12 ч., 24 ч.).

В определенных вариантах осуществления семя(семена), покрытое одной или несколькими из композиций, раскрываемых в настоящем документе, будет содержать 1×10¹-1×10⁸, более предпочтительно 1×10²-1×10⁶ колониеобразующих единиц одного или нескольких депонируемых грибковых штаммов на семя.

Настоящее изобретение далее описывается следующими пронумерованными пунктами.

1. Выделенный грибковый штамм, выбранный из группы, состоящей из:

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50777,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50778,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50779,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50780,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50781,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50782,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50783,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50784,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50785,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50786,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50787,

штамма с учетным номером в депозитарии NRRL В-50788 и

смеси двух или более из этих штаммов.

2. Композиция, содержащая носитель и один или несколько из грибковых штаммов по пункту 1.

3. Композиция по пункту 2, содержащая инокулюм одного или нескольких грибковых штаммов по пункту 1.

4. Композиция по любому из пунктов 2-3, где композиция дополнительно содержит источник фосфора.

5. Композиция по пункту 4, где источником фосфора является фосфорит.

6. Композиция по пункту 4, где источником фосфора является удобрение.

7. Композиция по пункту 6, где удобрение содержит моноаммония фосфат, диаммония фосфат, монокальция фосфат, суперфосфат, тройной суперфостфатфосфат, аммония полифосфат и их комбинации.

8. Композиция по пункту 4, где источником фосфора является органический источник фосфора.

9. Композиция по пункту 8, где органический источник фосфора содержит костную муку, мясную муку, навоз, компост, осадок сточных вод или гуано или их комбинации.

10. Композиция по любому из пунктов 2-9, где композиция дополнительно содержит одну или несколько сигнальных молекул растения.

11. Композиция по пункту 10, где одной или несколькими сигнальными молекулами растения является липохитоолигосахарид (LCO).

12. Композиция по пункту 11, где LCO является синтетическим.

13. Композиция по пункту 11, где LCO является рекомбинантным.

14. Композиция по пункту 11, где LCO является встречающимся в природе.

15. Композиция по пункту 11, где LCO получен из видов Rhizobia, выбранных из Rhizobium spp., Bradyrhizobium spp., Sinorhizobium spp., Azorhizobium spp. или их комбинации.

16. Композиция по пункту 11, где LCO получен из Bradyrhizobium japonicum.

17. Композиция по пункту 11, где LCO получен из арбускулярного микоризного гриба.

18. Композиция по пункту 10, где одной или несколькими сигнальными молекулами растения является хитиновое соединение.

19. Композиция по пункту 18, где хитиновое соединение представляет собой хитоолигомер (СО).

20. Композиция по пункту 19, где СО является синтетическим.

21. Композиция по пункту 19, где СО является рекомбинантным.

22. Композиция по пункту 19, где СО является встречающимся в природе.

23. Композиция по пункту 10, где одной или несколькими сигнальными молекулами растения является флавоноид.

24. Композиция по пункту 23, где флавоноидом является лютеолин, апигенин, тангеритин, кверцетин, кемпферол, мирицетин, физетин, изорамнетин, пачиподол, рамназин, гесперетин, нарингенин, эриодиктиол, гомоэриодиктиол, дигидрокверцетин, таксифолин, дигидрокемпферол, генистеин, даидзеин, глицитеин, катехин, галлокатехин, катехин-3-галлат, галлокатехин-3-галлат, эпикатехин, эпигаллокатехин, эпикатехин-3-галлат, эпигаллокатехин-3-галлат, цианидин, делфинидин, мальвидин, пеларгонидин, пеонидин, петунидин или их производные.

25. Композиция по пункту 10, где одной или несколькими сигнальными молекулами растения является жасмоновая кислота или ее производное.

26. Композиция по пункту 10, где одной или несколькими сигнальными молекулами растения является линолевая кислота или ее производное.

27. Композиция по пункту 10, где одной или несколькими сигнальными молекулами растения является линоленовая кислота или ее производное.

28. Композиция по пункту 10, где одной или несколькими сигнальными молекулами растения является каррикин.

29. Композиция по любому из пунктов 2-28, где носителем является совместимый с почвой носитель.

30. Композиция по любому из пунктов 2-29, где носитель содержит тальк, глину, каолин, силикагель, крахмал, целлюлозу, метилцеллюлозу, поливинилпирролидон, торф, солому, пшеницу, отруби, аравийскую камедь или их комбинации.

31. Композиция по любому из пунктов 2-30, где носителем является жидкая среда.

32. Композиция по любому из пунктов 2-31, где композиция дополнительно содержит один или несколько питательных микроэлементов.

33. Композиция по пункту 32, где один или несколько питательных микроэлементоа содержат медь, железо, цинк или их комбинацию.

34. Способ увеличения доступности фосфора для поглощения растением из почвы, предусматривающий введение в почву одного или нескольких грибковых штаммов по пункту 1.

35. Способ по пункту 34, где способ предусматривает введение в почву эффективного количества одного или нескольких грибковых штаммов по пункту 1.

36. Способ по пункту 34, где способ предусматривает введение инокулюма одного или нескольких грибковых штаммов по пункту 1.

37. Способ по пункту 36, где способ предусматривает введение в почву эффективного количества инокулюма одного или нескольких грибковых штаммов по пункту 1.

38. Способ по любому из пунктов 34-37, где способ предусматривает контакт одного или нескольких грибковых штаммов по пункту 1 с источником фосфора.

39. Способ по любому из пунктов 34-38, где способ дополнительно предусматривает добавление источника фосфора в почву.

40. Способ по пункту 39, где источником фосфора является фосфорит.

41. Способ по пункту 39, где источником фосфора является удобрение.

42. Способ по пункту 41, где удобрение содержит моноаммония фосфат, диаммония фосфат, монокальция фосфат, суперфосфат, тройной суперфостфатфосфат, аммония полифосфат и их комбинации.

43. Способ по пункту 39, где источником фосфора является органический источник фосфора.

44. Способ по пункту 43, где органический источник фосфора содержит костную муку, мясную муку, навоз, компост, осадок сточных вод, или гуано, или их комбинации.

45. Способ по пункту 39, где стадию добавления источника фосфора в почву осуществляют до, после или в ходе стадии введения в почву инокулюма одного или нескольких грибковых штаммов по пункту 1.

46. Способ по любому из пунктов 34-35, где стадия введения в почву одного или нескольких грибковых штаммов по пункту 1 предусматривает введение одного или нескольких грибковых штаммов по пункту 1 в почву в количестве 1×10¹-1×10⁸, более предпочтительно 1×10⁶-1×10¹² колониеобразующих единиц на гектар.

47. Способ по любому из пунктов 34-35, где стадия введения в почву одного или нескольких грибковых штаммов по пункту 1 предусматривает введение одного или нескольких грибковых штаммов по пункту 1 в виде покрытия семени.

48. Способ по пункту 47, где покрытие семени содержит 1×10¹-1×10⁸, более предпочтительно 1×10²-1×10⁶ колониеобразующих единиц на семя.

49. Способ по любому из пунктов 36-37, где стадия введения в почву инокулюма одного или нескольких грибковых штаммов по пункту 1 предусматривает введение инокулюма в почву в количестве 1×10¹-1×10⁸, более предпочтительно 1×10⁶-1×10¹² колониеобразующих единиц на гектар.

50. Способ по любому из пунктов 36-37, где стадия введения в почву инокулюма одного или нескольких грибковых штаммов по пункту 1 предусматривает введение инокулюма в виде покрытия семени.

51. Способ по пункту 50, где покрытие семени содержит 1×10¹-1×10⁸, более предпочтительно 1×10²-1×10⁶ колониеобразующих единиц на семя.

52. Способ по пункту 34, предусматривающий введение в почву какой-либо из композиций по пунктам 2-33.

53. Способ усиления поглощения фосфора растениями, предусматривающий выращивание растений в почве, содержащей источник фосфора и один или несколько грибковых штаммов по пункту 1.

54. Способ по пункту 53, где источником фосфора является фосфорит.

55. Способ по пункту 56, где источником фосфора является удобрение.

56. Способ по пункту 55, где удобрение содержит моноаммония фосфат, диаммония фосфат, монокальция фосфат, суперфосфат, тройной суперфостфатфосфат, аммония полифосфат и их комбинации.

57. Способ по пункту 53, где источником фосфора является органический источник фосфора.

58. Способ по пункту 57, где органический источник фосфора содержит костную муку, мясную муку, навоз, компост, осадок сточных вод, или гуано, или их комбинации.

59. Способ по пункту 53, где стадию добавления источника фосфора в почву осуществляют до, после или в ходе стадии введения в почву инокулюма одного или нескольких грибковых штаммов по пункту 1.

60. Способ по пункту 53, где растениями являются бобовые растения.

61. Способ по пункту 60, где бобовые растения выбраны из группы, состоящей из сои, фасоли, люцерны и клевера.

62. Способ по пункту 53, где растениями являются растения, отличные от бобовых.

63. Способ по пункту 62, где растением, отличным от бобового, является кукуруза.

64. Семя, покрытое одним или несколькими грибковыми штаммами по пункту 1.

65. Семя, покрытое какой-либо из композиций по пунктам 2-33.

ПРИМЕРЫ

Следующие примеры приведены в иллюстративных целях и не предназначены для ограничения объема изобретения, заявленного в настоящем документе. Любые вариации в иллюстрируемых примерах, которые приходят на ум специалистам в данной области, предназначены для включения в объем настоящего изобретения.

Материалы и способы

Депонирование биологического материала

Следующий биологический материал депонировали при условиях Будапештского договора при Службе сельскохозяйственных исследований, 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604, U.S.A., со следующими номерами доступа:

Штамм депонировали при условиях, которые обеспечивали доступ к культуре во время рассмотрения настоящей заявки на патент для определения уполномоченным по патентам и товарным знакам на основании статья 37 CFR §1.14 и статьи 35 U.S.С. §122. Депонируемый объект представляет собой чистую культуру депонируемого штамма. Депонируемый объект доступен по требованию иностранных патентных поверенных в странах, в которых подаются эквиваленты настоящей заявки или родственные ей заявки. Однако следует отметить, что доступность депонируемого объекта не дает права осуществлять на практике настоящее изобретение с отступлением от патентных прав, гарантированных правительством.

Пример 1. Анализы солюбилизации фосфата

Выращивание грибка для анализов солюбилизации фосфата осуществляли в 96-луночных микробиореакторных планшетах (EnzyScreen, Netherlands) в 1,5 мл безнитратной минимальной солевой среде (таблица 1). Планшеты инокулировали из планшетов с маточной глицериновой суспензией спор, хранящейся при 80°C, с использованием 96-иголочного криорепликатора, который стерилизовали нагреванием и охлаждали перед переносом. В планшетах осуществляли выращивание при комнатной температуре (20-25°C) и 300 rpm в течение 14 дней. Через 14 дней планшет центрифугировали в течение 5 минут при 5100 rpm и 1 мл супернатанта переносили в 96-луночный фильтровальный планшет (96-луночный фильтровальный планшет AcroPrep Advance, 1 μм стекловолокно, Pall Life Sciences #8231). Фильтровальный планшет помещали на 2-мл планшет-приемник (96-луночный круглодонный Whatman Uniplate, Whatman #7701-5200) и образцы фильтровали под вакуумом с использованием вакуумного коллектора для многолуночных планшетов (Pall Life Sciences #5017). Отфильтрованные супернатанты разбавляли 100Х стерильной водой и растворимый фосфат измеряли с использованием спектрофотометра для считывания планшетов (Biotek, Winooski, VT) с набором BioVision Phosphate Colorimetric Assay (BioVision Research Products, Mountain View, CA) и сопроводительными инструкциями. Каждый изолят выращивали и тестировали на предмет солюбилизации фосфата в трех повторностях и вычисляли среднее и стандартные отклонения. Результаты приведены в таблице 2.

Результаты показывают, что все изоляты солюбилизировали больше фосфата, чем штамм-предок V08/021001. Результаты показывают, что все изоляты солюбилизировали больше фосфата, чем штамм-предок V08/20851. 5 изолятов солюбилизировали больше фосфата, чем штамм-предок АТСС 22348.

Пример 2. Продуцирование гибридами глюконовой кислоты

Продуцирование органической кислоты коррелирует со способностью солюбилизировать фосфат.Некоторые органические кислоты, однако, могут быть токсичными для растений (JJ.A.L. van Kan, Trends in Plant Science 11:247-253 (2006)). Глюконовая кислота нетоксична для растений, и ее продуцирование P. bilaiae показывает сильную корреляцию с солюбилизацией фосфата. Продуцирование глюконовой кислоты 5 изолятами и соответствующими им предками исследовали с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC). Двадцать мкл супернатанта из примера 1 прогоняли через колонку HPLC (колонка Restek Allure Organic Acids (250×4,6 мм, 5 мкм)) при 15°C. Подвижная фаза состояла из 25 мМ фосфатного буфера (отрегулированного до pH 2,5 с помощью фосфорной кислоты) при 1 мл/минута на Agilent Infinity 1260 HPLC, оснащенной детектором на диодной матрице (DAD). Пик глюконовой кислоты идентифицировали сравнением со стандартом чистой глюконовой кислоты. Измеряли площадь под пиком глюконовой кислоты и усредняли по трем повторностям эксперимента. Результаты приведены в таблице 3.

Результаты показывают, что все изоляты продуцировали больше глюконовой кислоты, чем по меньшей мере один предок, и 3 из 5 изолятов продуцировали больше глюконовой кислоты, чем любой предок.

Следует понимать, что описание и примеры являются иллюстративными вариантами осуществления настоящего изобретения и что другие варианты осуществления в пределах сущности и объема заявленных вариантов осуществления будут очевидными для специалистов в данной области техники. Хотя настоящее изобретение было описано по отношению к конкретным формам и их вариантам осуществления, будет понятно, что различные модификации, отличные от описанных выше, могут быть применены без отступления от сущности или объема настоящего изобретения, как определено в прилагаемой формуле изобретения. Например, могут быть заменены конкретно описанные эквиваленты, а в некоторых случаях конкретная последовательность стадий может быть обратной или прерванной без отступления от сущности или объема настоящего изобретения, как описано в прилагаемой формуле изобретения.

Группа изобретений относится к микробиологии, а именно к новым солюбилизирующим фосфаты штаммам, а также к композиции и способам увеличения доступности фосфата для поглощения растением. Предложены штаммы Penicillium bilaiae NRRL В-50776, NRRL В-50777, NRRL В-50778, NRRL В-50779, NRRL В-50780, NRRL В-50781, NRRL В-50782, NRRL В-50783, NRRL В-50784, NRRL В-50785, NRRL В-50786, NRRL В-50787 и NRRL В-50788 для превращения нерастворимого фосфата в растворимую форму фосфата. Предложенные штаммы Penicillium bilaiae вводят в почву в виде инокулюма и выращивают растения, тем самым обеспечивая увеличение доступности фосфора и усиление поглощения фосфора растениями. Также штаммы применяют для нанесения покрытия на семя растения. 17 н. и 9 з.п. ф-лы, 3 табл., 2 пр.

1. Выделенный грибковый штамм Penicillium bilaiae для превращения нерастворимого фосфата в растворимую форму фосфата, где указанный штамм имеет учетный номер в депозитарии NRRL B-50776.

2. Выделенный грибковый штамм Penicillium bilaiae для превращения нерастворимого фосфата в растворимую форму фосфата, где указанный штамм имеет учетный номер в депозитарии NRRL B-50777.

3. Выделенный грибковый штамм Penicillium bilaiae для превращения нерастворимого фосфата в растворимую форму фосфата, где указанный штамм имеет учетный номер в депозитарии NRRL B-50778.

4. Выделенный грибковый штамм Penicillium bilaiae для превращения нерастворимого фосфата в растворимую форму фосфата, где указанный штамм имеет учетный номер в депозитарии NRRL B-50779.

5. Выделенный грибковый штамм Penicillium bilaiae для превращения нерастворимого фосфата в растворимую форму фосфата, где указанный штамм имеет учетный номер в депозитарии NRRL B-50780.

6. Выделенный грибковый штамм Penicillium bilaiae для превращения нерастворимого фосфата в растворимую форму фосфата, где указанный штамм имеет учетный номер в депозитарии NRRL B-50781.

7. Выделенный грибковый штамм Penicillium bilaiae для превращения нерастворимого фосфата в растворимую форму фосфата, где указанный штамм имеет учетный номер в депозитарии NRRL B-50782.

8. Выделенный грибковый штамм Penicillium bilaiae для превращения нерастворимого фосфата в растворимую форму фосфата, где указанный штамм имеет учетный номер в депозитарии NRRL B-50783.

9. Выделенный грибковый штамм Penicillium bilaiae для превращения нерастворимого фосфата в растворимую форму фосфата, где указанный штамм имеет учетный номер в депозитарии NRRL B-50784.

10. Выделенный грибковый штамм Penicillium bilaiae для превращения нерастворимого фосфата в растворимую форму фосфата, где указанный штамм имеет учетный номер в депозитарии NRRL B-50785.

11. Выделенный грибковый штамм Penicillium bilaiae для превращения нерастворимого фосфата в растворимую форму фосфата, где указанный штамм имеет учетный номер в депозитарии NRRL B-50786.

12. Выделенный грибковый штамм Penicillium bilaiae для превращения нерастворимого фосфата в растворимую форму фосфата, где указанный штамм имеет учетный номер в депозитарии NRRL B-50787.

13. Выделенный грибковый штамм Penicillium bilaiae для превращения нерастворимого фосфата в растворимую форму фосфата, где указанный штамм имеет учетный номер в депозитарии NRRL B-50788.

14. Композиция для увеличения доступности фосфата для поглощения растением, содержащая носитель и выделенный грибковый штамм по любому из пп.1-13.

15. Композиция по п. 14, отличающаяся тем, что композиция дополнительно содержит источник фосфора.

16. Композиция по п.14, отличающаяся тем, что композиция дополнительно содержит липохитоолигосахарид.

17. Композиция по п.14, отличающаяся тем, что композиция дополнительно содержит хитоолигомер.

18. Композиция по п.14, отличающаяся тем, что композиция дополнительно содержит флавоноид.

19. Способ увеличения доступности фосфора для поглощения растением из почвы, предусматривающий введение в почву инокулюма выделенного грибкового штамма по любому из пп.1-13.

20. Способ по п.19, отличающийся тем, что стадия введения в почву инокулюма выделенного грибкового штамма по любому из пп.1-12 предусматривает введение инокулюма в виде покрытия семени.

21. Способ усиления поглощения фосфора растениями, предусматривающий выращивание растений в почве, содержащей источник фосфора и выделенный грибковый штамм по любому из пп.1-13.

22. Способ по п.21, отличающийся тем, что растениями являются бобовые растения.

23. Способ по п.21, отличающийся тем, что растениями являются растения, отличные от бобовых.

24. Способ по п.21, отличающийся тем, что растениями являются растения пшеницы.

25. Способ по п.21, отличающийся тем, что растениями являются растения кукурузы.

26. Применение выделенного грибкового штамма по любому из пп.1-13 для нанесения покрытия на семя растения.