N-(4-(АЗАИНДАЗОЛ-6-ИЛ)-ФЕНИЛ)-СУЛЬФОНАМИДЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ Российский патент 2018 года по МПК C07D471/04 C07D487/04 A61K31/437 A61K31/52 A61P9/00 A61P19/02 

Настоящее изобретение относится к N-(4-(азаиндазол-6-ил)-фенил)-сульфонамидам формулы I,

в которой Ar, n, X, Z, R1, R2 и R3 обладают указанными ниже значениями. Соединения формулы I являются ценными фармакологически активными соединениями, которые модулируют активность протеинкиназы, точнее активность сывороточной и регулируемой глюкокортикоидами киназы (SGK), в частности, изоформы 1 сывороточной и регулируемой глюкокортикоидами киназы (SGK-1, SGK1), и являются подходящими для лечения заболеваний, при которых активность SGK является неподходящей, например, дегенеративных нарушений суставов или воспалительных процессов, таких как остеоартрит или ревматизм. Кроме того, настоящее изобретение относится к способам получения соединений формулы I, к их применению в качестве лекарственных средств и к содержащим их фармацевтическим композициям.

Вследствие своей физиологической значимости, многочисленности и широкой распространенности протеинкиназы стали одними из самых важных и подробно изученных семейств ферментов, применяющихся в биохимических и медицинских исследованиях. Исследования показали, что известные в настоящее время примерно 500 различных протеинкиназ являются ключевыми регуляторами многих функций клеток, включая передачу сигналов, регуляцию транскрипции, подвижность, рост, дифференциацию, деление и разрушение клеток. Они действуют путем обратимого фосфорилирования гидроксигрупп различных аминокислот белков. Показано, что некоторые онкогены кодируют протеинкиназы, что указывает на ключевую роль киназ в онкогенезе. Эти процессы строго регулируются, часто с помощью сложных взаимосвязанных путей, когда каждая киназа сама регулируется одной или большим количеством киназ. Поэтому аберрантная или неподходящая активность протеинкиназы может способствовать усилению патологических состояний, связанных с такой аберрантной активностью киназы.

Семейство протеинкиназ обычно разделяют на два основных подсемейства, протеинтирозинкиназы, которые фосфорилируют тирозиновые остатки, и протеинсерин/треонинкиназы (PSTK), которые фосфорилируют сериновые и треониновые остатки. Киназы подсемейства PSTK обычно обычно являются цитоплазматическими или связаны с конкретными фракциями клеток, возможно, с помощью якорных белков. Аберрантная активность PSTK участвует или предположительно участвует в целом ряде патологий, таких как ревматоидный артрит, псориаз, септический шок, потеря костной массы, многие раковые и другие пролиферативные заболевания. Соответственно, PSTK и связанные с ними пути передачи сигналов являются важными мишенями при разработке лекарственного средства.

Сывороточные и регулируемые глюкокортикоидами киназы, также называющиеся, как сывороточная/регулируемая глюкокортикоидами киназа, сывороточная и индуцированная глюкокортикоидами киназа, сывороточная и индуцируемая глюкокортикоидами киназа или сывороточная и зависимая от глюкокортикоидов киназа, образуют семейство PSTK. В настоящее время известны три представителя, обозначаемые, как SGK-1, SGK-2 и SGK-3. Для SGK-3 также используют обозначение SGKL (SGK-подобная) и CISK (цитокин-независимая киназа выживаемости). На уровне белка в своем каталитическом домене эти 3 изоформы обладают гомологией не менее, чем на 80%. SGK-1 впервые описана в 1993 г., как "предранний ген" в линии клеток рака молочной железы крыс (Webster, M.K. et al., Immediate-early Transcriptional Regulation и Rapid mRNA Turnover of a Putative Serine/Threonine Protein Kinase, J. Biol. Chem. 1993, 268, 11482-11485). SGK-1 мРНК экспрессируется почти во всех исследованных до настоящего времени тканях взрослых и в некоторых тканях эмбриона. SGK-2 в наибольшем количестве экспрессируется в эпителиальных тканях, например, в почках, печени, поджелудочной железе, и в особых участках головного мозга, тогда как SGK-3 обнаруживали во всех исследованных тканях и, в частности, в сердце и селезенке взрослых (Kobayashi, T. et al., Characterization of the structure and regulation of two novel isoforms of serum and glucocorticoidinduced protein kinase, Biochem. J. 1999, 344, 189-197).

Особенность SGK, отличающая ее от многих других киназ, основана на жесткой зависимой от стимула регуляции транскрипции, локализации клеток и ферментативной активации молекулы (Firestone, G.L. et al., Stimulus-Dependent Regulation of Serum and Glucocorticoid Inducible Protein Kinase (SGK) Transcription, Subcellular Localization and Enzymatic Activity, Cell. Physiol. Biochem. 2003, 13, 1-12). Известны различные стимулы, индуцирующие и активирующие SGK-1. Они включают минералокортикоиды, гонадотропины, 1.25(OH)2D3, p53, осмотические, гипотонические изменения и изменения объема клеток, и цитокины такие как GM-CSF, TNF-альфа и TGF-бета (обзор приведен в публикации Lang, F. et al., (Patho)physiological Significance of the Serum- and Glucocorticoid-Inducible Kinase Isoforms, Physiol. Rev. 2006, 86, 1151-1178). В других зависимых от роста путях передачи сигналов SGK индуцируется сывороткой, инсулином и IGF-1, FSH, фактором роста фибробластов и тромбоцитарным фактором роста, активаторами каскада сигналов Erk и TPA (обзор приведен в публикации Lang, F. et al., Physiol. Rev. 2006, 86, 1151-1178). Также известно, что SGK-1 активируется при патологических изменениях, таких как ишемическое поражение головного мозга (Imaizumi, K. et al., Differential expression of sgk mRNA, a member of the Ser/Thr protein kinase gene family, in rat brain after CNS injury, Mol. Brain Res. 1994, 26, 189-196), фиброз легких (Warntges, S. et al., Excessive Transcription of the Human Serum and Glucocorticoid Dependent Kinase hSGK1 in Lung Fibrosis, Cell. Physiol. Biochem. 2002, 12, 135-142) или фиброз сердца (Funder, J., Mineralocorticoids and Cardiac Fibrosis: The Decade in Review, Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 2001, 28, 1002-1006).

Для превращения в свою функциональную форму необходима активация SGK-1 путем фосфорилирования. Оно опосредуется каскадом сигналов, включающим фосфатидилинозит-3 (PI-3) киназу и фосфоинозитид-3-зависимые киназы PDK1 и PDK2. Известно, что активация SGK-1 с помощью пути передачи сигналов киназы PI-3 является ответом на инсулин, IGF и факторы роста. Для активации фосфорилирования двух аминокислотных остатков необходимы треонин²⁵⁶ в T-петле (опосредуется с помощью PDK1) и серин⁴²² в гидрофобном фрагменте белка катализируется предполагаемой PDK2) (обзор приведен в публикации Lang, F. et al., Physiol. Rev. 2006, 86, 1151-1178).

Проведен ряд исследований функции SGK, которые продемонстрировали регуляторное влияние SGK-1, SGK-2 и SGK-3 на каналы клеточных мембран. Показано, что эпителиальный Na⁺ канал (ENaC), основной переносчик при регулируемой минералокортикоидом реабсорбции Na⁺ в почечных канальцах, является мишенью для SGK-1, SGK-2 и SGK-3 (Faletti, C.J. et al., sgk: an essential convergence point for peptide and steroid hormone regulation of ENaCmediated Na⁺ transport, Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2002, 282, C494-C500; Friedrich, B. et al., The serine/threonine kinases SGK2 and SGK3 are potent stimulators of the epithelial Na⁺ Channel alpha, beta, gamma-ENaC, Pflugers Arch. - Eur. J. Physiol. 2003, 445, 693-696). Взаимодействие ENaC и SGK происходит не путем прямого фосфорилирования, а вследствие дезактивации убиквитинлигазы Nedd4-2 (Debonneville, C. et al., Phosphorylation of Nedd4-2 by Sgk1 regulates epithelial Na⁺ channel cell surface expression, EMBO J. 2001, 20, 7052-7059) в результате фосфорилирования с помощью SGK. В результате этого увеличивается количество и время пребывания ENaC в клеточной мембране (Staub, O. et al., Regulation of stability and function of the epithelial Na⁺ channel (ENaC) by ubiquitination, EMBO J. 1997, 16, 6325-6336). Также показано, что внешний медуллярный калиевый канал почек (ROMK1) и натрий-водородный обменник 3 (NHE3) косвенно рергулируются посредством SGK с помощью регулирующего фактора 2 обмена Na⁺/H⁺ (NHERF2) в качестве опосредующей молекулы (Yun, C.C. et al., Glucocorticoid Activation of Na⁺/H+ Exchanger Isoform 3 Revisited. The Roles of SGK1 и NHERF2, J. Biol. Chem. 2002, 277, 7676-7683; Yun, C.C., Concerted Roles of SGK1 and the Na⁺/H⁺ Exchanger Regulatory Factor 2 (NHERF2) in Regulation of NHE3, Cell. Physiol, Biochem. 2003, 13, 29-40). Кроме того, также показано, что SGK влияет на зависимый от канала Kv1.3 поток K⁺ (Gamper, N. et al., IGF-1 up-regulates K⁺ Channels via PI3-kinase, PDK1 and SGK1, Pflugers Arch. 2002, 443, 625-634) и регулирует переносчик аминокислоты SN1 и 4F2/LAT (Wagner, C.A. et al., The heterodimeric amino acid transporter 4F2hc/LAT1 is associated in Xenopus oocytes with a non-selective cation channel that is regulated by the serine/threonine kinase sgk-1, J. Physiol. 2000, 526,1, 35-46; Boehmer, C. et al., Properties and regulation of glutamine transporter SN1 by protein kinases SGK and PKB, Biochem. Biophys. Res. Commun. 2003, 306, 156-162). Также показано, что SGK-1 играет роль в пролиферации клеток и гомеостазе электролита (Vallon, V. et al., New insights into the role of serum- and glucocorticoid-inducible kinase SGK1 in the regulation of renal function and blood pressure, Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 2005, 14, 59-66; Lang, F. et al., Regulation of Channels by the Serum and Glucocorticoid-Iinducible Kinase - Implications for Transport, Excitability and Cell Proliferation, Cell. Physiol. Biochem. 2003, 13, 41-50). Полагают, что SGK-1 регулирует некоторые клеточные механизмы, которые вносят вклад в патологические состояния. Например, показано, что SGK-1 опосредует образование фибронектина при диабетической нефропатии (Feng, Y. et al., SGK1-mediated Fibronectin Formation in Diabetic Nephropathy, Cell. Physiol. Biochem. 2005, 16, 237-244). Также показано, что SGK1 опосредует удерживание инсулина, IGF-1 и индуцируемого альдостероном Na⁺ при заболевании почек и сердечно-сосудистом заболевании (Vallon, V. et al., Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 2005, 14, 59-66; Lang, F. et al., Cell. Physiol. Biochem. 2003, 13, 41-50). Кроме того, показано, что SGK-1 активируется при потере лафорина при болезни Лафоры, генетической формы миоклонической эпилепсии, ингибирование SGK1 приводит к уменьшению накопления аномального гликогена создает возможность лечения болезни Лафоры (Singh, P. K. et al., Activation of serum/glucocorticoid-induced kinase 1 (SGK1) underlies increased glycogen levels, mTOR activation, and autophagy defects in Lafora disease, Mol. Biol. Cell 2013, 24, 3776-3786).

Остеоартрит (ОА) является одним из самых распространенных дегенеративных заболеваний суставов и на поздней стадии приводит к потере функции суставов. Во время хронического протекания заболевания происходит разрушение суставного хряща до подлежащей костной ткани, что делает необходимой операцию по замене сустава у пораженных пациентов. В дополнение к разрушению хряща также могут наблюдаться патологические изменения в синовиальной мембране и связках. Заболевание временно сопровождается воспалительными процессами, такими как ревматоидный артрит, но отличается от него. Точные причины заболевания пока не известны, однако рассматриваются различные факторы, такие как изменения метаболизма, механический стресс, генетические нарушения или поражения суставов. Независимо от исходной причины обычным патологическим проявлением ОА является деградация суставного хряща. Основной особенностью патологического состояния ОА является протеолитическое расщепление коллагенов и протеогликанов. Одновременно протекает целый ряд других процессов, таких как механизмы анаболического восстановления, повторная дифференциация клеток или гибель клеток. Точные молекулярные механизмы, лежащие в основе этих процессов, все еще плохо изучены.

Функционирование хряща взрослого в здоровом состоянии обусловлено его уникальными биомеханическими характеристиками, обеспечивающими стойкость к высокому давлению, а также необходимую эластичность ткани. Определяющим фактором является особая организация ткани хряща. В отличие от большинства других тканей, клетки хряща непосредственно не соприкасаются друг с другом, а по отдельности включены во внеклеточный матрикс (ECM). Макромолекулы этого ECM обеспечивают жизнеспособность суставного хряща и суставов. Основная структура ECM состоит из сетки, которая образована фибриллами коллагена типов II, IX и XI. Протеогликаны, в основном агрекан, включены в ECM и обеспечивают чрезвычайно высокую способность связывать осмотическую воду. Давление воды, обусловленное свойствами коллагеновой основы, обеспечивает специфические свойства хряща. Основной особенностью патогенеза ОА является потеря ECM хряща и ткани суставного хряща. В соответствии с этим механизмом функция пораженного сустава ограничивается или утрачивается. Кроме того, при симптоматическом прогрессировании этого заболевания возникают различные симптоматические проявления, такие как боль. Современные средства лечения остеоартрита в основном ограничиваются уменьшением связанных с симптомами жалоб. Лечение путем воздействия на причину с помощью лекарственных средств при современном уровне знаний невозможно. Поэтому, настоятельно необходимы новые лекарственные средства для предупреждения и/или лечения остеоартрита.

С помощью сравнительного анализа экспрессии генов в образцах всей клеточной РНК (рибонуклеиновая кислота) из здорового и дегенерированного/дегенерирующего хряща показано, что SGK-1 экспрессируется в дегенерированном/дегенерирующем остеоартритном хряще, но не обнаруживается в здоровом суставном хряще (Bartnik, E. et al., Use of a Serum/Glucocorticoid-regulated Kinase, WO 2006/061130). Кроме того, в дополнительных экспериментах получены данные о причинной связи SGK с патогенезом дегенеративных изменений хряща (Bartnik, E. et al., WO 2006/061130). По данным этих исследований сделан вывод о том, что SGK-1 специфически участвует в патологических состояниях хряща, например, в контексте ревматоидного артрита или остеоартрита, в особенности в контексте остеоартрита, и она является ключевой молекулой, индуцирующей дегенеративные процессы в хряще. Вследствие высокой степени гомологии между представителями семейства SGK предлагается, что это относится и к SGK-2, и SGK-3.

Установление этих взаимосвязей позволяет выявить лекарственные средства для предупреждения или терапии дегенеративных изменений хряща путем определения влияния возможных лекарственных средств на активность SGK и/или содержание SGK с помощью известных методик исследования. Причинная связь SGK с патогенезом дегенеративного заболевания суставов позволяет сосредоточить усилия на поиске терапевтических средств, которые направлены на регуляторные механизмы, для восстановления нормальной физиологии клеток хряща. В суставах эмбрионов мышей SGK-1 мРНК обнаружены именно в гипертрофированных хондроцитах, но не в пролиферирующих клетках. Роль SGK-1 в этой модели развития скелета и эндохондрального окостенения показывает, что естественное наличие SGK-1 в хряще не связано с синтезом и обеспечением функционирования хряща, но осуществляет свое действие при превращении (гипертрофии) и деградации. Таким образом, экспрессия SGK-1 в остеоартритном хряще является процессом, который вызывает или стимулирует патологию ОА. Вследствие своей способности регулировать SGK-1 может быть ключевой молекулой для индуцирования ранних патологических изменений в хряще, а также для последующего проявления деградации. Поэтому SGK-1 является весьма подходящей мишенью для фармакологического вмешательства при остеоартрите.

Для специального исследования функции SGK-1 при дифференциации хряща SGK-1 человека сверхэкспрессировали в мышиных клетках ATDC5. В этих экспериментах четко показано, что сверхэкспрессирование SGK-1 приводит к подавлению синтеза хряща. Значительно уменьшались количества протеогликана, окрашенного альциановым синим, а также мРНК агрекана. Однако форма с дефицитом киназы SGK-1 не оказывала негативного влияния на эти параметры. Из данных этих экспериментов можно сделать некоторые заключения о влиянии SGK-1 на пораженный ОА суставной хрящ. С одной стороны, экспрессирующие SGK-1 хондроциты больше не могут синтезировать достаточное количество внеклеточного матрикса, такого как протеогликаны, что необходимо для функционирования этой ткани. С другой стороны, клетки хряща подавлены для компенсации или восстановления процессов разрушения за счет экспрессии генов, таких как агрекан. Поэтому подтверждается функция SGK-1 в качестве возможной причины и главного фактора патологии ОА. Таким образом, SGK-1 является весьма подходящей мишенью при разработке новых лекарственных средств, предназначенных для лечения дегенеративных изменений хряща, в особенности остеоартрита.

Вследствие связи SGK-1 с различными физиологическими процессами, указанными выше, ингибиторы SGK-1, такие как соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, можно использовать для лечения, включая терапию и профилактику, различных патологических состояний, при которых играет роль активность SGK-1 или которые связаны с неподходящей активностью SGK-1, или при которых для врача желательно ингибирование, регулирование или модуляция передачи сигналов с помощью SGK-1, например, дегенеративных нарушений суставов и дегенеративных изменений хряща, включая остеоартрит, остеоартроз, ревматоидный артрит, спондилез, хондролиз после травмы сустава и длительной иммобилизации сустава после поражений мениска или коленной чашечки или разрывов связок, нарушений соединительной ткани, таких как коллагенозы, периодонтальных нарушений, нарушений заживления ран, диабета, включая сахарный диабет, диабетическую нефропатию, диабетическую невропатию, диабетическую ангиопатию и микроангиопатию, ожирения, метаболического синдрома (дислипидемии), системной и легочной гипертензии, инфарктов головного мозга, сердечно-сосудистых заболеваний, включая фиброз сердца после инфаркта миокарда, гипертрофии сердца и сердечной недостаточности, артериосклероза, заболеваний почек, включая гломерулосклероз, нефросклероз, нефрит, нефропатию и нарушение выведения электролита, и любого типа фиброза и воспалительных процессов, включая цирроз печени, фиброз легких, фиброзирующий панкреатит, ревматизм, артрит, подагру, болезнь Крона, хронический бронхит, лучевой фиброз, склеродерматит, муковисцидоз, образование рубцов и болезнь Альцгеймера. Ингибиторы SGK-1, такие как соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, также можно использовать для лечения боли, включая острую боль, такую как боль после травм, послеоперационную боль, боль в связи с острым приступом подагры и острую боль после операций челюстной кости, и хроническая боль, такую как боль, связанная с хроническими скелетно-мышечными заболеваниями, боль в спине, боль, связанная с остеоартритом или ревматоидным артритом, боль, связанная с воспалением, боль после ампутации, боль, связанная с рассеянным склерозом, боль, связанная с невритом, боль, связанная с карциномами и саркомами, боль, связанная со СПИД (синдром приобретенного иммунодефицита), боль, связанная с химиотерапией, невралгия тройничного нерва, головная боль, мигрень, цефалгия, невропатические боли, невралгия после опоясывающего герпеса. Ингибиторы SGK-1, такие как соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, также можно использовать при терапии опухоли для подавления роста опухолевых клеток и метастазов опухоли. Ингибиторы SGK-1, такие как соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, также можно использовать для лечения хронических нарушений опорно-двигательного аппарата, таких как воспалительно, иммунологически или метаболически обусловленные острые и хронические артритиды, артропатии, миалгии и нарушения метаболизма костей. Кроме того, ингибиторы SGK-1, такие как соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, можно использовать для лечения пептических язв, в особенности в формах, которые вызваны стрессом, для лечения шума в ушах, для лечения бактериальных инфекций и в противоинфекционной терапии, для улучшения способности к обучению и внимания, для противодействия старению клеток и стрессам и тем самым увеличения вероятной продолжительности жизни и состояния здоровья в старости, в состояниях нейронной возбудимости, включая эпилепсию и прогруссирующую миоклоническую эпилепсию типа Лафоры (болезнь Лафоры), для лечения глаукомы или катаракт, и для лечения коагулопатий, включая дисфибриногенемию, гипопроконвертинемию, гемофилию B, болезнь Стюарта-Прауэра, дефицит протромбинового комплекса, коагулопатию потребления, фибринолиз, иммунокоагулопатию или сложные коагулопатии. Дополнительные подробности о физиологической роли SGK приведены в литературе, например, в указанных публикациях и других.

Поэтому желательно и является задачей настоящего изобретения выявление малых соединений, которые специфически ингибируют, регулируют или модулируют передачу сигнала с помощью SGK. Однако, наряду с тем, что они являются эффективными ингибиторами SGK, желательно, чтобы такие ингибиторы также обладали другими полезными характеристиками, например, высокой биологической доступностью, стабильностью в плазме и печени и селективно не воздействовали на другие киназы или рецепторы, ингибирование или активация которых не предусмотрены. Таким образом, задачей настоящего изобретения является получение ингибиторов SGK, которые эффективно ингибируют аберрантную активность SGK в патологическом контексте и которые обладают другими полезными характеристиками, например, высокой биологической доступностью, стабильностью в плазме и печени, и селективно не воздействуют на другие киназы и рецепторы, воздействие на которые в агонистическом или антагонистическом смысле не предусмотрено. Эта задача решена с помощью новых соединений формулы I, которые обладают превосходной ингибирующей активностью по отношению к SGK-1 и являются полезными средствами, обладающими высокой биологической доступностью и стабильностью в плазме и печени.

Таким образом, объектом настоящего изобретения являются соединения формулы I в любых из их стереоизомерных форм или смесь стереоизомерных форм в любом соотношении и их фармацевтически приемлемые соли,

в которой

Ar выбран из группы, включающей фенил и 5- или 6-членную моноциклическую ароматическую гетероциклическую группу, которая содержит 1, 2 или 3 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, и присоединена через кольцевой атом углерода, которые все являются незамещенными или содержат один или большее количество одинаковых или разных заместителей R5;

n выбран из группы, включающей 0, 1 и 2;

X выбран из группы, включающей N и CH;

Z выбран из группы, включающей непосредственную связь, O, S и N(R10);

R1 выбран из группы, включающей H, -N(R11)-R12, -N(R13)-C(O)-R14, -N(R13)-S(O)₂-R15, -N(R13)-C(O)-NH-R16, (C₁-C₄)-алкил и -(C₁-C₄)-алкил-O-R17;

R2 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, -O-(C₁-C₄)-алкил и -CN;

R3 выбран из группы, включающей H, (C₁-C₈)-алкил, R30 и -(C₁-C₄)-алкил-R30, где (C₁-C₈)-алкил является незамещенным или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R31;

R5 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил, -O-(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -C(O)-N(R6)-R7 и -CN,

и две группы R5, связанные с соседними кольцевыми атомами углерода в Ar, вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, могут образовать 5- - 8-членное моноциклическое ненасыщенное кольцо, которое содержит 0, 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, и которое является незамещенным или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R8;

R6 и R7 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей H и (C₁-C₄)-алкил;

R8 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, -O-(C₁-C₄)-алкил и -CN;

R10 выбран из группы, включающей H и (C₁-C₄)-алкил;

R11 и R12 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей H, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, Het1, -(C₁-C₄)-алкил-Het1 и -(C₁-C₄)-алкилфенил, где фенил является незамещенным или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R50,

или R11 и R12 вместе с атомом азота, с которыми они связаны, образуют 4- - 7-членную моноциклическую насыщенную гетероциклическую группу, которая в дополнение к атому азота, с которым связаны R11 и R12, содержит 0 или 1 дополнительный кольцевой гетероатом, выбранный из группы, включающей азот, кислород и серу, и которая является незамещенной или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей, выбранных из группы, включающей фтор и (C₁-C₄)-алкил;

R13 выбран из группы, включающей H, (C₁-C₄)-алкил и (C₃-C₇)-циклоалкил;

R14 и R16 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей (C₁-C₈)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, фенил, -(C₁-C₄)-алкилфенил, Het2 и -(C₁-C₄)-алкил-Het2, где (C₁-C₈)-алкил и (C₃-C₇)-циклоалкил все являются незамещенными или содержат один или большее количество одинаковых или разных заместителей, выбранных из группы, включающей -OH и -O-(C₁-C₄)-алкил, и где фенил и Het2 все являются незамещенными или содержат один или большее количество одинаковых или разных заместителей R50;

R15 выбран из группы, включающей (C₁-C₈)-алкил, фенил и Het3, где фенил и Het3 все являются незамещенными или содержат один или большее количество одинаковых или разных заместителей R50;

R17 выбран из группы, включающей H и (C₁-C₄)-алкил;

R30 означает 3- - 12-членную моноциклическую или бициклическую, насыщенную, частично ненасыщенную или ароматическую циклическую группу, которая содержит 0, 1, 2 или 3 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, которая является незамещенной или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R32;

R31 выбран из группы, включающей галоген, -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил, -O-(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -N(R33)-R34, -CN и -C(O)-N(R35)-R36;

R32 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39, -(C₁-C₄)-алкил-CN, -C(O)-(C₁-C₄)-алкил, -CN, -OH, =O, -O-(C₁-C₄)-алкил, -N(R40)-R41, -C(O)-O-(C₁-C₄)-алкил и -C(O)-N(R42)-R43;

R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39, R40, R41, R42 и R43 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей H и (C₁-C₄)-алкил;

R50 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, -O-(C₁-C₄)-алкил и -CN;

Het1 означает 4- - 7-членную моноциклическую насыщенную гетероциклическую группу, которая содержит 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, и присоединена через кольцевой атом углерода и которая является незамещенной или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей, выбранных из группы, включающей фтор и (C₁-C₄)-алкил;

Het2 означает 4- - 7-членную моноциклическую, насыщенную, частично ненасыщенную или ароматическую гетероциклическую группу, которая содержит 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, и присоединена через кольцевой атом углерода;

Het3 означает 5- или 6-членную моноциклическую ароматическую гетероциклическую группу, которая содержит 1, 2 или 3 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, и присоединена через кольцевой атом углерода;

где все циклоалкильные группы независимо от любых других заместителей, которые могут содержаться в циклоалкильной группе, могут содержать один или большее количество одинаковых или разных заместителей, выбранных из группы, включающей фтор и (C₁-C₄)-алкил;

где все алкильные группы независимо от любых других заместителей, которые могут содержаться в алкильной группе, могут содержать один или большее количество фторидных заместителей.

Если структурные элементы, например, такие как группы, заместители или числа, могут содержаться в соединениях формулы I несколько раз, все они независимы друг от друга и в каждом случае могут обладать любым из указанных значений и в каждом случае они могут быть идентичны любому другому такому элементу или отличаться от него. Например в диалкиламиногруппе алкильные группы могут быть одинаковыми или разными.

Алкильные группы, т.е. насыщенные углеводородные остатки, могут быть линейными (обладающими линейной цепью) или разветвленными. Это также относится к случаю, когда эти группы являются замещенными или являются частью другой группы, например, -O-алкильной группы (алкилоксигруппы, алкоксигруппы) или HO-замещенной алкильной группы (-алкил-OH, гидроксиалкильная группа). В зависимости от соответствующего определения количество атомов углерода в алкильной группе может равняться 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8, 1, 2, 3, 4, 5 или 6, или 1, 2, 3 или 4, или 1, 2 или 3, или 1 или 2, или 1. Примерами алкилов являются метил, этил, пропил, включая н-пропил и изопропил, бутил, включая н-бутил, втор-бутил, изобутил и трет-бутил, пентил, включая н-пентил, 1-метилбутил, изопентил, неопентил и трет-пентил, гексил, включая н-гексил, 2,2,-диметилгексил, 3,3-диметилбутил, 2-метилпентил, 3-метилпентил и изогексил, гептил, включая н-гептил, и октил, включая н-октил. Примерами -O-алкильных групп являются метоксигруппа, этоксигруппа, н-пропоксигруппа, изопропоксигруппа, н-бутоксигруппа, изобутоксигруппа, трет-бутоксигруппа, н-пентоксигруппа.

Замещенная алкильная группа может быть замещена в любых положениях при условии, что соответствующее соединение является достаточно стабильным и применимым в качестве фармацевтически активного соединения. Обязательным является условие о том, чтобы конкретная группа и соединение формулы I были достаточно стабильными и применимыми в качестве фармацевтически активного соединения, которое в целом относится к определениям всех групп, содержащихся в соединениях формулы I. Алкильная группа, которая независимо от любых других заместителей может быть замещена одним или большим количеством фторидных заместителей, может не быть замещена фторидными заместителями, т.е. не содержать фторидные заместители, или может быть замещена, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 фторидными заместителями, или 1, 2, 3, 4 или 5 фторидными заместителями, или 1, 2 или 3 фторидными заместителями, которые могут находиться в любых положениях. Т.е. независимо от любых других заместителей, которые могут находиться в алкильной группе, алкильная группа может не быть замещена фторидными заместителями, т.е. не содержать фторидных заместителей или содержать фторидные заместители, где все алкильные группы в соединениях формулы I независимы друг от друга применительно к необязательному замещению фторидными заместителями. Например, во фторзамещенной алкильной группе одна или большее количество метильных групп могут содержать три фторидных заместителя каждая и находиться в виде трифторметильных групп и/или одна или большее количество метиленовых групп (CH₂) может содержать два фторидных заместителя каждая и находиться в виде дифторметиленовых групп. Пояснения о замещении группы фтором также относятся к случаю, когда группа дополнительно содержит другие заместители и/или является частью другой группы, например, -O-алкильной группы. Примерами фторзамещенных алкильных групп являются -CF₃ (трифторметил), -CHF₂, -CH₂F, -CHF-CF_3, -CHF-CHF₂, -CHF-CH₂F, -CH₂-CF₃, -CH₂-CHF₂, -CH₂-CH₂F, -CF₂-CF₃, -CF_2-CHF₂, -CF₂-CH₂F, -CH₂-CHF-CF₃, -CH₂-CHF-CHF₂, -CH₂-CHF-CH₂F, -CH₂-CH₂-CF₃, -CH₂-CH₂-CHF₂, -CH₂-CH₂-CH₂F, -CH₂-CF₂-CF₃, -CH₂-CF₂-CHF₂, -CH₂-CF₂-CH₂F, -CHF-CHF-CF₃, -CHF-CHF-CHF₂, -CHF-CHF-CH₂F, -CHF-CH₂-CF₃, -CHF-CH₂-CHF₂, -CHF-CH₂-CH₂F, -CHF-CF₂-CF₃, -CHF-CF₂-CHF₂, -CHF-CF₂-CH₂F, -CF₂-CHF-CF_3, -CF₂-CHF-CHF₂, -CF₂-CHF-CH₂F, -CF₂-CH₂-CF₃, -CF₂-CH₂-CHF₂, -CF₂-CH₂-CH₂F, -CF₂-CF₂-CF_3, -CF₂-CF₂-CHF₂, или -CF₂-CF₂-CH₂F. Примерами фторзамещенных -O-алкильных групп являются трифторметоксигруппа (-OCF₃), 2,2,2-трифторэтоксигруппа, пентафторэтоксигруппа и 3,3,3-трифторпропоксигруппа. Применительно ко всем группам или заместителям в соединениях формулы I, которой может быть алкильная группа, которая обычно может содержать один или большее количество фторидных заместителей, в качестве примера групп или заместителей, содержащих фторзамещенный алкил, который можно включить в определение группы или заместителя, можно отметить группу CF₃ (трифторметил) или соответствующую группу, такую как CF₃-O-.

Приведенные выше пояснения для алкильных групп соответственно относятся к алкильным группам, которые в соответствии с определением группы в соединениях формулы I связаны с двумя соседними группами или соединены с двумя группами, и могут рассматриваться, как двухвалентные алкильные группы (алкандиильные группы), как в случае алкильного фрагмента замещенной алкильной группы. Таким образом, такие группы также могут быть линейными или разветвленными, связи с соседними группами могут находиться в любых положениях и могут исходить из одного и того же атома углерода или из разных атомов углерода, и они могут быть незамещенными или замещенными фторидными заместителями независимо от любых других заместителей. Примерами таких двухвалентных алкильных групп являются -CH₂-, -CH₂-CH₂-, -CH₂-CH₂-CH₂-, -CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-, -CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-, -CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-, -CH(CH₃)-, -C(CH₃)₂-, -CH(CH₃)-CH₂-, -CH₂-CH(CH₃)-, -C(CH₃)₂-CH₂-, -CH₂-C(CH₃)₂-. Примерами фторзамещенных алкандиильных групп, которые могут содержать 1, 2, 3, 4, 5 или 6 фторидных заместителей или 1, 2, 3 или 4 фторидных заместителя, или 1 или 2 фторидных заместителя, например, являются -CF₂-, -CHF-, -CHF-CHF₂-, -CHF-CHF-, -CH₂-CF₂-, -CH₂-CHF-, -CF₂-CF₂-, -CF₂-CHF-, -CH₂-CHF-CF₂-, -CH₂-CHF-CHF-, -CH₂-CH₂-CF₂-, -CH₂-CH₂-CHF, -CH₂-CF₂-CF₂-, -CH₂-CF₂-CHF-, -CHF-CHF-CF₂-, -CHF-CHF-CHF-, -CHF-CH₂-CF₂-, -CHF-CH₂-CHF-, -CHF-CF₂-CF₂-, -CHF-CF₂-CHF-, -CF₂-CHF-CF₂-, -CF₂-CHF-CHF-, -CF₂-CH₂-CF₂-, -CF₂-CH₂-CHF-, -CF₂-CF₂-CF₂- или -CF₂-CF₂-CHF-.

Количество кольцевых атомов углерода в (C₃-C₇)-циклоалкильной группе может равняться 3, 4, 5, 6 или 7. Примерами циклоалкилов являются циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил. Независимо от любых других заместителей, которые могут содержаться в циклоалкильной группе, и, если не указано иное, циклоалкильные группы могут быть замещены одним или большим количеством (C₁-C₄)-алкильных заместителей, например, 1, 2, 3 или 4 одинаковыми или разными (C₁-C₄)-алкильными заместителями, например, метильными группами, которые могут находиться в любых положениях. Т.е. независимо от любых других заместителей, которые могут находиться в циклоалкильной группе, циклоалкилалкильная группа может не быть замещена (C₁-C₄)-алкильными заместителями, т.е. не содержать (C₁-C₄)-алкильные заместители, или содержать (C₁-C₄)-алкильные заместители, где все циклоалкильные группы в соединениях формулы I независимы друг от друга применительно к необязательному замещению (C₁-C₄)-алкильными заместителями. Примерами таких алкилзамещенных циклоалкильных групп являются 1-метилциклопропил, 2,2-диметилциклопропил, 1-метилциклопентил, 2,3-диметилциклопентил, 1-метилциклогексил, 4-метилциклогексил, 4-изопропилциклогексил, 4-трет-бутилциклогексил, 3,3,5,5-тетраметилциклогексил. Независимо от любых других заместителей, включая (C₁-C₄)-алкильные заместители, которые могут находиться в циклоалкильной группе, и, если не указано иное, циклоалкильные группы могут содержать один или большее количество фторидных заместителей, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 фторидных заместителей, или 1, 2, 3, 4 или 5 фторидных заместителей, или 1, 2 или 3 фторидных заместителя, которые могут находиться в любых положениях и также могут находиться в (C₁-C₄)-алкильном заместителе. Т.е. независимо от любых других заместителей, которые могут находиться в циклоалкильной группе, циклоалкильная группа может не быть замещена фторидными заместителями, т.е. не содержать фторидные заместители, или может быть замещена фторидными заместителями, где все циклоалкильные группы в соединениях формулы I независимы друг от друга применительно к необязательному замещению фторидными заместителями. Примерами фторзамещенных циклоалкильных групп являются 1-фторциклопропил, 2,2-дифторциклопропил, 3,3-дифторциклобутил, 1-фторциклогексил, 4,4-дифторциклогексил, 3,3,4,4,5,5-гексафторциклогексил. Циклоалкильные группы также могут быть замещены одновременно фтором и алкилом. Примерами -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкила являются циклопропилметил-, циклобутилметил-, циклопентилметил-, циклогексилметил-, циклогептилметил-, 1-циклопропилэтил-, 2-циклопропилэтил-, 1-циклобутилэтил-, 2-циклобутилэтил-, 1-циклопентилэтил-, 2-циклопентилэтил-, 1-циклогексилэтил-, 2-циклогексилэтил-, 1-циклогептилэтил-, 2-циклогептилэтил-. В одном варианте осуществления настоящего изобретения -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкильная группа в любом одном или большем количестве случаев появления такой группы, независимо от любых других случаев появления представляет собой -(C₁-C₂)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкильную группу, в другом варианте осуществления -CH₂-(C₃-C₇)-циклоалкильную группу. В группе -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил и, аналогичным образом, во всех других группах, концевой дефис указывает свободную связь, с помощью которой присоединена эта группа, и, таким образом, указывает, с помощью какой подгруппы присоединена группа, состоящая из подгрупп.

В замещенных фенильных группах, включая фенильные группы, например, представляющие собой Ar, заместители могут находиться в любых положениях. В монозамещенных фенильных группах заместитель может находиться в положении 2, в положении 3 или в положении 4. В дизамещенных фенильных группах заместители могут находиться в положениях 2 и 3, в положениях 2 и 4, в положениях 2 и 5, в положениях 2 и 6, в положениях 3 и 4 или в положениях 3 и 5. В тризамещенных фенильных группах заместители могут находиться в положениях 2, 3 и 4, в положениях 2, 3 и 5, в положениях 2, 3 и 6, в положениях 2, 4 и 5, в положениях 2, 4 и 6 или в положениях 3, 4 и 5. Если фенильная группа содержит четыре заместителя, часть них может быть атомами фтора, например, заместители могут находиться в положениях 2, 3, 4 и 5, в положениях 2, 3, 4 и 6 или в положениях 2, 3, 5 и 6. Если полизамещенная фенильная группа или любая другая полизамещенная группа содержит разные заместители, то каждый заместитель может находиться в любом подходящем положении и настоящее изобретение включает все изомеры положения. Количество заместителей в замещенной фенильной группе может равняться 1, 2, 3, 4 или 5. В одном варианте осуществления настоящего изобретения количество заместителей в замещенной фенильной группе, равно 1, 2, 3 или 4, в другом варианте осуществления 1, 2 или 3, в другом варианте осуществления 1 или 2, в другом варианте осуществления 1, где количество заместителей в любом случае появления такой замещенной группы не зависит от количества заместителей в других случаях появления.

В гетероциклических группах, включая группы Het1, Het2, Het3, гетероциклические группы, представляющие собой Ar, гетероциклические группы R30 и другие гетероциклические кольца, которые могут содержаться в соединениях формулы I, такие как кольца, образованные двумя группами вместе с атомом или атомами, к которым они присоединены, элементы гетероатомного кольца могут содержаться в любой комбинации и находиться в любых подходящих положениях при условии, что полученная группа и соединение формулы I являются подходящими и достаточно стабильными в качестве фармацевтически активного соединения. В одном варианте осуществления настоящего изобретения два атома кислорода в любом гетероциклическом кольце в соединениях формулы I не могут находиться в соседних положениях кольца. В другом варианте осуществления настоящего изобретения два элемента гетероатомного кольца, выбранные из группы, включающей атомы кислорода и атомы серы, не могут находиться в соседних положениях кольца в любом гетероциклическом кольце в соединениях формулы I. В другом варианте осуществления настоящего изобретения два элемента гетероатомного кольца, выбранные из группы, включающей атомы азота, содержащие экзоциклическую группу, такую как атом водорода или заместитель, атомы серы и атомы кислорода, не могут находиться в соседних положениях кольца в любом гетероциклическом кольце в соединениях формулы I. Выбор элементов гетероатомного кольца в ароматическом гетероциклическом кольце ограничивается предварительным условием о том, что кольцо является ароматическим, т.е. оно представляет собой циклическую систему, содержащую 6 делокализованных пи-электронов в случае, если она является моноциклической, или 10 делокализованных пи-электронов в случае, если она является бициклической. Моноциклические ароматические гетероциклы представляют собой 5-членные или 6-членные кольца и в случае 5-членного кольца содержат один кольцевой гетероатом, выбранный из группы, включающей кислород, серу и азот, где этот кольцевой атом азота содержит экзоциклическую группу, такую как атом водорода или заместитель, и необязательно один или большее количество дополнительных кольцевых атомов азота, и в случае 6-членного кольца содержат один или большее количество атомов азота в качестве кольцевых гетероатомов, но не содержат атомы кислорода и атомы серы в качестве кольцевых гетероатомов. Гетероциклические группы в соединениях формулы I могут быть присоединены через кольцевой атом углерода или кольцевой атом азота, если не указано иное в определении соответствующей группы, где гетероциклическая группа может быть присоединена через любой находящийся в кольце подходящий атом углерода или атом азота соответственно. В замещенных гетероциклических группах заместители могут находиться в любых положениях.

Примерами гетероциклических кольцевых систем, из которых можно образовать гетероциклические группы в соединениях формулы I, включая, например, гетероциклические группы Het1, Het2, Het3, представляющие собой Ar, гетероциклические группы R30 и кольца, образованные двумя группами вместе с атомом или атомами, с которыми они связаны, и из числа любой одной или большего количества которых любые гетероциклические группы в соединениях формулы I выбраны в одном варианте осуществления настоящего изобретения при условии, что кольцевая система представляет собой то, что соответствует определению группы, являются оксетан, тиетан, азетидин, фуран, тетрагидрофуран, тиофен, тетрагидротиофен, пиррол, пирролин, пирролидин, [1,3]диоксол, [1,3]диоксолан, изоксазол ([1,2]оксазол), изоксазолин, изоксазолидин, оксазол ([1,3]оксазол), оксазолин, оксазолидин, изотиазол ([1,2]тиазол), изотиазолин, изотиазолидин, тиазол ([1,3]тиазол), тиазолин, тиазолидин, пиразол, пиразолин, пиразолидин, имидазол, имидазолин, имидазолидин, [1,2,3]триазол, [1,2,4]триазол, [1,2,4]оксадиазол, [1,3,4]оксадиазол, 1,2,5-оксадиазол, [1,2,4]тиадиазол, пиран, тетрагидропиран, тиопиран, тетрагидротиопиран, 2,3-дигидро[1,4]диоксин, 1,4-диоксан, пиридин, 1,2,5,6-тетрагидропиридин, пиперидин, морфолин, тиоморфолин, пиперазин, пиридазин, пиримидин, пиразин, [1,2,4]триазин, оксепан, тиепан, азепан, [1,3]диазепан, [1,4]диазепан, [1,4]оксазепан, [1,4]тиазепан, бензофуран, изобензофуран, бензотиофен (бензо[b]тиофен), 1H-индол, 2,3-дигидро-1H-индол, 2H-изоиндол, 2-азаспиро[4.4]нонан, 2-азаспиро[4.5]декан, 2-азаспиро[4.6]ундекан, 2-азаспиро[5.5]ундекан, 3-азаспиро[5.5]ундекан, 6-азаспиро[2.5]октан, 7-азаспиро[3.5]нонан, 8-азаспиро[4.5]декан, бензо[1,3]диоксол, бензоксазол, бензтиазол, 1H-бензимидазол, хроман, изохроман, тиохроман, бензо[1,4]диоксан, 3,4-дигидро-2H-бензо[b][1,4]диоксепин (3,4-дигидро-2H-1,5-бензодиоксепин), 3,4-дигидро-2H-бензо[1,4]оксазин, 1-окса-8-азаспиро[4.5]декан, 2-окса-6-азаспиро[3,3]гептан, 2-окса-6-азаспиро[3.4]октан, 2-окса-6-азаспиро[3.5]нонан, 2-окса-7-азаспиро[3.5]нонан, 8-окса-2-азаспиро[4.5]декан, 3,4-дигидро-2H-бензо[1,4]тиазин, хинолин, 5,6,7,8-тетрагидрохинолин, изохинолин, 5,6,7,8-тетрагидроизохинолин, циннолин, хиназолин, хиноксалин, фталазин и [1,8]нафтиридин, которые все могут быть незамещенными или замещены в любых подходящих положениях так, как указано в определении соответствующей группы в соединениях формулы I, где указанная степень ненасыщенности приведена только для примера, и в отдельных группах также могут находиться кольцевые системы, характеризующиеся большей или меньшей степенью насыщенности или гидрирования, или ненасыщенности, как это указано в определении группы. Кольцевые атомы серы, в частности, в насыщенных и частично ненасыщенных гетероциклах, обычно могут содержать одну или две оксогруппы, т.е. присоединенные с помощью двойной связи атомы кислорода (=O), и в таких гетероциклах в качестве элемента гетероатомного кольца кроме кольцевого атома серы также может содержаться группа S(O) (S(=O)) и группа S(O)₂ (S(=O)₂).

Как отмечено выше, если не указано иное в определении соответствующей группы в соединениях формулы I, гетероциклические группы могут быть присоединены через любой подходящий кольцевой атом углерода и кольцевой атом азота, например, в случае гетероциклических групп, представляющих собой R30. Так, например, наряду с другими положениями оксетановое и тиетановое кольцо может быть присоединено через положения 2 и 3, азетидиновое кольцо через положения 1, 2 и 3, фурановое кольцо, тетрагидрофурановое кольцо, тиофеновое кольцо и тетрагидротиофеновое кольцо через положения 2 и 3, пиррольное кольцо и пирролидиновое кольцо через положения 1, 2 и 3, изоксазольное кольцо и изотиазольное кольцо через положения 3, 4 и 5, пиразольное кольцо через положения 1, 3, 4 и 5, оксазольное кольцо и тиазольное кольцо через положения 2, 4 и 5, имидазольное кольцо и имидазолидиновое кольцо через положения 1, 2, 4 и 5, тетрагидропирановое и тетрагидротиопирановое кольцо через положения 2, 3 и 4, 1,4-диоксановое кольцо через положение 2, пиридиновое кольцо через положения 2, 3 и 4, пиперидиновое кольцо через положения 1, 2, 3 и 4, морфолиновое кольцо и тиоморфолиновое кольцо через положения 2, 3 и 4, пиперазиновое кольцо через положения 1 и 2, пиримидиновое кольцо через положения 2, 4 и 5, пиразиновое кольцо через положение 2, азепановое кольцо через положения 1, 2, 3 и 4, бензофурановое кольцо и бензотиофеновое кольцо через положения 2, 3, 4, 5, 6 и 7, 1H-индольное кольцо и 2,3-дигидро-1H-индольное кольцо через положения 1, 2, 3, 4, 5, 6 и 7, бензо[1,3]диоксольное кольцо через положения 4, 5, 6 и 7, бензоксазольное кольцо и бензтиазольное кольцо через положения 2, 4, 5, 6 и 7, 1H-бензимидазольное кольцо через положения 1, 2, 4, 5, 6 и 7, бензо[1,4]диоксановое кольцо через положения 5, 6, 7 и 8, хинолиновое кольцо через положения 2, 3, 4, 5, 6, 7 и 8, 5,6,7,8-тетрагидрохинолиновое кольцо через положения 2, 3 и 4, изохинолиновое кольцо через положения 1, 3, 4, 5, 6, 7 и 8, 5,6,7,8-тетрагидроизохинолиновое кольцо через положения 1, 3 и 4, где образованные остатки гетероциклических групп все могут быть незамещенными или замещенными в любых подходящих положениях, как это указано в определении соответствующей группы в соединениях формулы I.

Галоген означает фтор, хлор, бром или йод. В одном варианте осуществления настоящего изобретения галоген в любых случаях его появления означает фтор, хлор или бром, в другом варианте осуществления фтор или хлор, в другом варианте осуществления фтор, в другом варианте осуществления хлор, где все случаи появления галогена независимы друг от друга.

Настоящее изобретение включает все стереоизомерные формы соединений формулы I, например, все энантиомеры и диастереоизомеры, включая цис/транс-изомеры. Настоящее изобретение также включает смеси двух или большего количества стереоизомерных форм, например, смеси энантиомеров и/или диастереоизомеров, включая цис/транс-изомеры, во всех соотношениях. Асимметрические центры, содержащиеся в соединениях формулы I, все независимо друг от друга могут обладать S-конфигурацией или R-конфигурацией. Настоящее изобретение относится к энантиомерам, к левовращающим и правовращающим антиподам, в энантиомерно чистой форме и в основном в энантиомерно чистой форме, и в форме их рацемата, т.е. смеси этих двух энантиомеров в молярном отношении 1:1, и в форме смесей этих двух энантиомеров во всех соотношениях. Настоящее изобретение также относится к диастереоизомерам в форме чистых и в основном чистых диастереоизомеров и в форме смесей двух или большего количества диастереоизомеров во всех соотношениях. Настоящее изобретение также включает все цис/транс-изомеры соединений формулы I в чистом виде и в основном в чистом виде, и в форме смесей цис-изомера и транс-изомера во всех соотношениях. Цис/транс-изометрия может наблюдаться в замещенных кольцах. Получение отдельных стереоизомеров при необходимости можно провести путем разделения смеси по обычным методикам, например, с помощью хроматографии или кристаллизации, или путем использования в синтезе стереохимически однородных исходных соединений, или с помощью стереоселективных реакций. До разделения стереоизомеров необязательно можно получить их производные. Разделение смеси стереоизомеров можно провести во время синтеза на стадии получения соединения формулы I или на стадии получения промежуточного продукта. Например, в случае соединения формулы I, содержащего асимметрический центр, отдельные энантиомеры можно получить путем приготовления рацемата соединения формулы I и его разделения на энантиомеры с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии на хиральной фазе по стандартным методикам, или разделения рацемата любого промежуточного продукта во время синтеза с помощью такой хроматографии или с помощью кристаллизации его соли с оптически активным амином или кислотой и превращения энантиомеров промежуточного продукта в энантиомерные формы конечного соединения формулы I, или путем проведения энантиоселективной реакции во время синтеза. Настоящее изобретение также включает все таутомерные формы соединений формулы I.

Наряду со свободными соединениями формулы I, т.е. соединениями, в которых кислотные и основные группы не находятся в форме соли, настоящее изобретение также включает соли соединений формулы I, в частности, их физиологически или токсикологически приемлемые соли или их фармацевтически приемлемые соли, которые можно образовать с помощью одной или большего количества кислотных или основных групп, содержащихся в соединениях формулы I, например, основных гетероциклических фрагментов. В соединениях формулы I кислотные группы можно депротонировать с помощью неорганического или органического основания и использовать, например, в виде солей со щелочными металлами. Соединения формулы I, содержащие по меньшей мере одну основную группу, также можно получить и использовать в виде их солей присоединения с кислотами, например, в форме фармацевтически приемлемых солей с неорганическими кислотами и органическими кислотами, таких как соли с хлористоводородной кислотой, и в этом случае они содержатся, например, в виде гидрохлоридов. Обычно соли можно получить из кислотных и основных соединений формулы I по реакции с кислотой или основанием в растворителе или разбавителе по обычным методикам. Если в молекуле соединения формулы I одновременно содержится кислотная и основная группы, то в дополнение к указанным солевым формам настоящее изобретение также включает внутренние соли (бетаины, цвиттерионы). Настоящее изобретение также включает все соли соединений формулы I, которые вследствие плохой физиологический переносимости непосредственно непригодны для применения в качестве лекарственного средства, но являются подходящими для применения в качестве промежуточных продуктов для химических реакций или для получения физиологически приемлемых солей, например, с помощью анионного обмена или катионного обмена.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения ароматический гетероцикл, представляющий собой группу Ar, содержит 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, в другом варианте осуществления 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, которые выбраны из группы, включающей азот и серу. В другом варианте осуществления ароматический гетероцикл, представляющий собой Ar, означает 5-членный гетероцикл, который содержит 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, которые выбраны из группы, включающей азот и серу, или он означает 6-членный гетероцикл, который содержит 1 или 2 кольцевых гетероатома, которые являются атомами азота, в другом варианте осуществления он означает 5-членный гетероцикл, который содержит 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, которые выбраны из группы, включающей азот и серу, и эти гетероциклы все являются незамещенными замещены одним или большим количеством одинаковых или разных заместителей R5. В другом варианте осуществления ароматический гетероцикл, представляющий собой Ar, выбран из группы, включающей тиофен, тиазол, пиразол, имидазол, пиридин, пиридазин, пиримидин и пиразин, в другом варианте осуществления из группы, включающей тиофен, тиазол, пиразол, имидазол и пиридин, в другом варианте осуществления из группы, включающей тиофен, тиазол, пиразол и имидазол, в другом варианте осуществления из группы, включающей тиофен и пиразол, в другом варианте осуществления он означает тиофен, и в другом варианте осуществления он означает пиразол и эти гетероциклы все являются незамещенными или замещены одним или большим количеством одинаковых или разных заместителей R5. В одном варианте осуществления настоящего изобретения Ar означает фенил, который является незамещенным или замещен одним или большим количеством одинаковых или разных заместителей R5, в другом варианте осуществления Ar означает фенил, который замещен одним или большим количеством одинаковых или разных заместителей R5, в другом варианте осуществления Ar означает 5-членный или 6-членный ароматический гетероцикл, который является незамещенным или замещен одним или большим количеством одинаковых или разных заместителей R10, и в другом варианте осуществления Ar означает 5-членный или 6-членный ароматический гетероцикл, который замещен одним или большим количеством одинаковых или разных заместителей R5. В одном варианте осуществления Ar замещен одним или большим количеством одинаковых или разных заместителей R5. В одном варианте осуществления настоящего изобретения количество одинаковых или разных заместителей R5, которые могут содержаться в группе Ar, равно 1, 2, 3 или 4, в другом варианте осуществления оно равно 1, 2 или 3, в другом варианте осуществления оно равно 1 или 2, в другом варианте осуществления оно равно 1, в другом варианте осуществления оно равно 2, 3 или 4, в другом варианте осуществления оно равно 2 или 3, в другом варианте осуществления оно равно 3, в другом варианте осуществления оно равно 2.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения число n выбрано из группы, включающей 0 и 1, в другом варианте осуществления из группы, включающей 1 и 2, в другом варианте осуществления оно равно 1, в другом варианте осуществления оно равно 0.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения X означает N и, таким образом, соединения формулы I представляют собой N-[4-(1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-сульфонамиды. В другом варианте осуществления настоящего изобретения X означает CH и, таким образом, соединения формулы I представляют собой N-[4-(1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-6-ил)-фенил]-сульфонамиды.

В случае, если двухвалентная группа Z представляет собой двойную связь, группа R3 с помощью ординарной связи непосредственно связана с концевым атомом углерода, находящимся в положении 4 бициклической кольцевой системы, представленной в формуле I, которая содержит Z, и, таким образом, соединение формулы I представляет собой соединение формулы Ia, в которой Ar, n, X, R1, R2 и R3 определены так, как в соединениях формулы I. В одном варианте осуществления настоящего изобретения Z выбран из группы, включающей

непосредственную связь, O и N(R10), в другом варианте осуществления из группы, включающей непосредственную связь и O, в другом варианте осуществления из группы, включающей непосредственную связь и N(R10), в другом варианте осуществления из группы, включающей O, S и N(R10), в другом варианте осуществления из группы, включающей O и N(R10), в другом варианте осуществления Z означает непосредственную связь, в другом варианте осуществления Z означает O, т.е. атом кислорода, в другом варианте осуществления Z означает S, т.е. атом серы, и в другом варианте осуществления Z означает N(R10), т.е. атом азота, к которому присоединен атом или группа R10.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения R1 выбран из группы, включающей H, -N(R11)-R12, -N(R13)-C(O)-R14, -N(R13)-S(O)₂-R15, -N(R13)-C(O)-NH-R16 и (C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей H, -N(R11)-R12, -N(R13)-C(O)-R14, -N(R13)-S(O)₂-R15 и -N(R13)-C(O)-NH-R16, в другом варианте осуществления из группы, включающей -N(R11)-R12, -N(R13)-C(O)-R14, -N(R13)-S(O)₂-R15, -N(R13)-C(O)-NH-R16 и (C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей -N(R11)-R12, -N(R13)-C(O)-R14, -N(R13)-S(O)₂-R15 и -N(R13)-C(O)-NH-R16, в другом варианте осуществления из группы, включающей -N(R11)-R12 и N(R13)-C(O)-R14, и в другом варианте осуществления R1 означает -N(R11)-R12. В другом варианте осуществления R1 выбран из группы, включающей H, -N(R11)-R12, -N(R13)-C(O)-R14 и (C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей H, -N(R11)-R12 и (C₁-C₄)-алкил, и в другом варианте осуществления из группы, включающей -N(R11)-R12 и (C₁-C₄)-алкил. В другом варианте осуществления R1 выбран из группы, включающей H, (C₁-C₄)-алкил и -(C₁-C₄)-алкил-O-R17, в другом варианте осуществления из группы, включающей H и (C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления R1 означает H, в другом варианте осуществления R1 означает (C₁-C₄)-алкил и в другом варианте осуществления R1 означает -(C₁-C₄)-алкил-O-R17. В одном варианте осуществления (C₁-C₄)-алкильная группа, представляющая собой R1 или содержащаяся в -(C₁-C₄)-алкил-O-R17, представляет собой (C₁-C₃)-алкил, в другом варианте осуществления она представляет собой (C₁-C₂)-алкил, в другом варианте осуществления она представляет собой метил. Как это в общем случае относится к алкильным группам, во всех этих вариантах осуществления алкильная группа, представляющая собой R1 или содержащаяся в R1, например, группа (C₁-C₄)-алкил, представляющая собой R1, может быть замещена одним или большим количеством фторидных заместителей, т.е. независимо от любых других заместителей алкильной группы она не содержит фторидные заместители или содержит фторидные заместители. В одном варианте осуществления алкильная группа, представляющая собой R1 или содержащаяся в R1, например, группа (C₁-C₄)-алкил, представляющая собой R1, независимо от любых других заместителей алкильной группы не содержит фторидные заместители. В другом варианте осуществления алкильная группа, представляющая собой R1 или содержащаяся в R1, например, группа (C₁-C₄)-алкил, представляющая собой R1, независимо от любых других заместителей алкильной группы замещена одним или большим количеством фторидных заместителей, например, 1, 2, 3, 4 или 5 фторидными заместителями или 1, 2 или 3 фторидными заместителями.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения R2 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил и -O-(C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген и (C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген и -O-(C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -O-(C₁-C₄)-алкил и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, где во всех этих вариантах осуществления алкил может быть замещен одним или большим количеством, например, 1, 2, 3, 4 или 5, 1, 2 или 3 фторидными заместителями, как это в общем случае относится к алкильным группам. В одном варианте осуществления (C₁-C₄)- алкильная группа, представляющая собой R3 или содержащаяся в R2, представляет собой (C₁-C₃)-алкил, в другом варианте осуществления она представляет собой (C₁-C₂)-алкил, в другом варианте осуществления она представляет собой метил. В одном варианте осуществления галоген, представляющий собой R2, выбран из группы, включающей фтор и хлор, в другом варианте осуществления он представляет собой фтор. Кольцевые атомы углерода в двухвалентной фенильной группе, содержащейся в формуле I, которые не связаны с соседними группами в формуле I, и которые не содержат группу R2, содержат атомы водорода. Таким образом, в случае, если число n равно 0 и, следовательно, отсутствует группа R2, все четыре атома углерода в кольцевых положениях двухвалентной фенильной группы, содержащейся в формуле I, которые в формуле I' обозначены, как положения 2', 3', 5' и 6', содержат атомы водорода. В случае, если число n равно 1 и, следовательно, содержится одна группа R2, один из четырех атомов углерода в кольцевых положениях двухвалентной фенильной группы, содержащейся в формуле I, которые в формуле I' обозначены, как положения 2', 3', 5' и 6', содержит группу R2 и другие три из указанных атомов углерода содержат атомы водорода. В случае, если число n равно 2 и, следовательно, содержатся две группы R2, два из этих четырех атомов углерода в кольцевых положениях двухвалентной фенильной группы, содержащейся в формуле I, которые в формуле I' обозначены, как положения 2', 3', 5' и 6', содержат группы R2 и другие два указанных атома углерода содержат атомы водорода.

Группы R2 могут находиться в любых положениях двухвалентной фенильной группы, содержащейся в формуле I, которые в формуле I' обозначены, как положения 2', 3', 5' и 6'. Если содержится одна группа R2, то в одном варианте осуществления настоящего изобретения группа R2 находится в положении, которое в формуле I' обозначено, как положение 2', которое эквивалентно положению 6', и в другом варианте осуществления она находится в положении, которое в формуле I' обозначено, как положение 3', которое эквивалентно положению 5'. Если содержатся две группы R2, то в одном варианте осуществления настоящего изобретения группы R2 находятся в положениях, которые в формуле I' обозначены, как положения 2' и 3', в другом варианте осуществления в положениях, которые в формуле I' обозначены, как положения 2' и 5', в другом варианте осуществления в положениях, которые в формуле I' обозначены, как положения 2' и 6', в другом варианте осуществления в положениях, которые в формуле I' обозначены, как положения 3' и 5'.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения R3 выбран из группы, включающей H, (C₁-C₈)-алкил и R30, в другом варианте осуществления из группы, включающей H, (C₁-C₈)-алкил и -(C₁-C₄)-алкил-R30, в другом варианте осуществления из группы, включающей H и (C₁-C₈)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей H и R30, в другом варианте осуществления из группы, включающей (C₁-C₈)-алкил, R30 и -(C₁-C₄)-алкил-R30, в другом варианте осуществления из группы, включающей (C₁-C₈)-алкил и R30, в другом варианте осуществления из группы, включающей R30 и -(C₁-C₄)-алкил-R30, в другом варианте осуществления R3 означает H, в другом варианте осуществления R3 означает (C₁-C₈)-алкил, в другом варианте осуществления R3 означает R30, и в другом варианте осуществления R3 означает -(C₁-C₄)-алкил-R30, где во всех этих вариантах осуществления (C₁-C₈)-алкил является незамещенным или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R31, и где в одном варианте осуществления настоящего изобретения все эти варианты осуществления независимо относятся к соединениям формулы I, в которой Z означает непосредственную связь, с одной стороны, и к соединениям формулы I, в которой Z выбран из группы, включающей O, S и N(R10), с другой стороны, и, таким образом, для таких соединений R3 определяется по-разному. Например, в одном варианте осуществления R3 выбран из группы, включающей H, (C₁-C₈)-алкил и R30 в случае, если Z означает непосредственную связь, и R3 выбран из группы, включающей H, (C₁-C₈)-алкил, R30 и -(C₁-C₄)-алкил-R30 в случае, если Z выбран из группы, включающей O, S и N(R10), в другом варианте осуществления R3 выбран из группы, включающей H, (C₁-C₈)-алкил и R30 в случае, если Z означает непосредственную связь, и R3 выбран из группы, включающей H, (C₁-C₈)-алкил и R30 в случае, если Z выбран из группы, включающей O, S и N(R10), в другом варианте осуществления R3 выбран из группы, включающей H, (C₁-C₈)-алкил и R30 в случае, если Z означает непосредственную связь, и R3 выбран из группы, включающей (C₁-C₈)-алкил, R30 и -(C₁-C₄)-алкил-R30 в случае, если Z выбран из группы, включающей O, S и N(R10), в другом варианте осуществления R3 выбран из группы, включающей H, (C₁-C₈)-алкил и R30 в случае, если Z означает непосредственную связь, и R3 выбран из группы, включающей (C₁-C₈)-алкил и R30 в случае, если Z выбран из группы, включающей O, S и N(R10), в другом варианте осуществления R3 выбран из группы, включающей H и R30 в случае, если Z означает непосредственную связь, и R3 выбран из группы, включающей (C₁-C₈)-алкил, R30 и -(C₁-C₄)-алкил-R30 в случае, если Z выбран из группы, включающей O, S и N(R10), и в другом варианте осуществления R3 выбран из группы, включающей H и R30 в случае, если Z означает непосредственную связь, и R3 выбран из группы, включающей (C₁-C₈)-алкил и R30 в случае, если Z выбран из группы, включающей O, S и N(R10), где во всех этих вариантах осуществления (C₁-C₈)-алкил является незамещенным или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R31. В одном варианте осуществления количество заместителей R31, которые необязательно содержатся в алкильных группах, представляющих собой R3, равно 1, 2, 3, 4 или 5, в другом варианте осуществления оно равно 1, 2, 3 или 4, в другом варианте осуществления оно равно 1, 2 или 3, в другом варианте осуществления оно равно 1 или 2, в другом варианте осуществления оно равно 1, где независимо от заместителей R31 алкильная группа, которая представляет собой R3, может быть замещена одним или большим количеством фторидных заместителей, как это в общем случае относится к алкильным группам. В одном варианте осуществления (C₁-C₈)-алкильная группа, которая представляет собой R3, представляет собой (C₁-C₆)-алкил, в другом варианте осуществления она представляет собой (C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления она представляет собой (C₁-C₃)-алкил, в другом варианте осуществления она представляет собой (C₁-C₂)-алкил и эти группы все являются незамещенными или содержат один или большее количество одинаковых или разных заместителей R31 и/или фторидных заместителей. В одном варианте осуществления (C₁-C₄)-алкильный фрагмент в группе -(C₁-C₄)-алкил-R30, представляющей собой R3, представляет собой (C₁-C₃)-алкил, в другом варианте осуществления он представляет собой (C₁-C₂)-алкил, в другом варианте осуществления он представляет собой метил.

Если две группы R5, связанные с соседними кольцевыми атомами углерода в Ar, вместе с кольцевыми атомами углерода, с которыми они связаны, образуют 5- - 8-членное кольцо, это кольцо является по меньшей мере мононенасыщенным, т.е. образовавшееся кольцо содержит по меньшей мере одну двойную связь в кольце и эта двойная связь между двумя указанными соседними кольцевыми атомами углерода в ароматическом кольце Ar, которые являются общими для кольца Ar и кольца, образованного двумя группами R5, и по правилам номенклатуры для конденсированных колец она рассматривается, как двойная связь, содержащаяся в обоих кольцах. Кольцо, образованное двумя группами R5 вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, может содержать 1, 2 или 3 двойные связи в кольце. В одном варианте осуществления образовавшееся кольцо содержит 1 или 2 двойные связи, в другом варианте осуществления 1 двойную связь в кольце. В случае 6-членного карбоциклического или гетероциклического кольца или 5-членного гетероциклического кольца образовавшееся кольцо может быть ароматическим и вместе с ароматическим кольцом Ar образует бициклическую ароматическую кольцевую систему, например, нафталиновую кольцевую систему, хинолиновую кольцевую систему, изохинолиновую кольцевую систему или бензотиофеновую кольцевую систему. В одном варианте осуществления настоящего изобретения не более двух заместителей R5 в Ar, вместе с кольцевыми атомами углерода в Ar, к которым они присоединены, образуют кольцо, т.е. в этом варианте осуществления не более одного кольца, образованного двумя группами R5 вместе с кольцевыми атомами углерода в Ar, к которым они присоединены, сконденсировано с Ar. Если содержаться две группы R5, образующие кольцо, то у Ar могут находиться дополнительные отдельные группы R5, например, такие группы, как галоген, (C₁-C₄)-алкил или -O-(C₁-C₄)-алкил.

Случай, когда две группы R5, связанные с соседними кольцевыми атомами углерода в Ar, вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, образуют 5- - 8-членное ненасыщенное кольцо, другими словами можно описать, как случай, когда две группы R5 вместе образуют двухвалентный остаток, включающий цепь, содержащую от 3 до 6 атомов, из которых 0, 1 или 2 являются одинаковыми или разными гетероатомами, выбранными из группы, включающей азот, кислород и серу, концевые атомы которого связаны с двумя соседними кольцевыми атомами углерода в Ar. Примерами таких двухвалентных остатков, из любого одного или большего количества которых выбраны две группы R5, связанные с соседними кольцевыми атомами углерода в Ar, в одном варианте осуществления настоящего изобретения являются остатки -CH₂-CH₂-CH₂-, -CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-, -CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-, -CH=CH-CH=CH-, -N=CH-CH=CH-, -CH=CH-CH=N-, -CH=N-CH=CH-, -CH=CH-N=CH-,-O-CH₂-CH₂-,-CH₂-CH₂-O-, -O-CH₂-O-, -O-CH₂-CH₂-O-, -O-CH₂-CH₂-CH₂-O-, -O-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-O-,-S-CH=CH-, -CH=CH-S-, =CH-S-CH=, -N=CH-S-, -S-CH=N-, -N=CH-O-, -O-CH=N-, -NH-CH₂-CH₂-O-, -O-CH₂-CH₂-NH-, -S-CH₂-CH₂-NH- и -NH-CH₂-CH₂-S-, которые все могут быть замещены одним или большим количеством одинаковых или разных заместителей R8, и, таким образом, также могут содержаться, например, в виде двухвалентных остатков -O-CF₂-O-, -O-C(CH₃)₂-O-, -S-C(Cl)=CH-, -CH=C(Cl)-S-, -N(CH₃)-CH₂-CH₂-O-, -O-CH₂-CH₂-N(CH₃)-, -S-CH₂-CH₂-N(CH₃)- и -N(CH₃)-CH₂-CH₂-S-. В одном варианте осуществления настоящего изобретения кольцевые гетероатомы, которые необязательно содержатся в кольце, образованном двумя группами R5, связанными с соседними кольцевыми атомами углерода в Ar, вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, выбраны из группы, включающей азот и кислород, в другом варианте осуществления из группы, включающей кислород и серу, и в другом варианте осуществления они являются атомами кислорода. В одном варианте осуществления настоящего изобретения кольцо, которое могут образовать две группы R5, связанные с соседними кольцевыми атомами углерода в Ar, вместе с кольцевыми атомами углерода, с которыми они связаны, является 5- - 7-членным, в другом варианте осуществления 5- - 6-членным, в другом варианте осуществления 6- - 7-членным, в другом варианте осуществления 5-членным, в другом варианте осуществления 6-членным кольцом, в другом варианте осуществления 7-членным кольцом. В одном варианте осуществления настоящего изобретения кольцо, которое могут образовать две группы R5, связанные с соседними атомами углерода в Ar, вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, содержит 0 кольцевых гетероатомов, т.е. оно представляет собой карбоциклическое кольцо и в другом варианте осуществления оно содержит 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома. В одном варианте осуществления настоящего изобретения количество заместителей R8, которые могут содержаться в кольце, образованном двумя группами R5, связанными с соседними кольцевыми атомами углерода в Ar, вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, равно 1, 2, 3 или 4, в другом варианте осуществления 1, 2 или 3, в другом варианте осуществления 1 или 2, в другом варианте осуществления 1, в другом варианте осуществления оно равно 0.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения R5 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил, -C(O)-N(R6)-R7 и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -O-(C₁-C₄)-алкил, -C(O)-N(R6)-R7 и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил, -C(O)-N(R6)-R7 и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, -O-(C₁-C₄)-алкил, -C(O)-N(R6)-R7 и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, -O-(C₁-C₄)-алкил и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -(C₁-C₄)-алкил и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -O-(C₁-C₄)-алкил и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей -O-(C₁-C₄)-алкил и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, и во всех этих вариантах осуществления две группы R5, связанные с соседними кольцевыми атомами углерода в Ar, вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, могут образовать 5- - 8-членное моноциклическое ненасыщенное кольцо, которое содержит 0, 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, и которое является незамещенным или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R8.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения R5 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил, -C(O)-N(R6)-R7 и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -O-(C₁-C₄)-алкил, -C(O)-N(R6)-R7 и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил, -C(O)-N(R6)-R7 и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, -O-(C₁-C₄)-алкил, -C(O)-N(R6)-R7 и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, -O-(C₁-C₄)-алкил и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -(C₁-C₄)-алкил и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -O-(C₁-C₄)-алкил и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей -O-(C₁-C₄)-алкил и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген.

В одном варианте осуществления заместители R5, которые связаны с кольцевым атомом азота в Ar, например, в случае пиррольного, пиразольного или имидазольного кольца, представляющего собой Ar, выбраны из группы, включающей (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил и -C(O)-N(R6)-R7, в другом варианте осуществления из группы, включающей (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил и -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей (C₁-C₄)-алкил.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения (C₁-C₄)-алкильная группа, которая представляет собой R5 или содержится в группе -O-(C₁-C₄)-алкил, представляющей собой R5, является (C₁-C₃)-алкильной группой, в другом варианте осуществления (C₁-C₂)-алкильной группой, в другом варианте осуществления метильной группой, где все эти алкильные группы необязательно могут быть замещены фторидными заместителями, как это в общем случае относится к алкильным группам, и также она содержится, например, в виде трифторметильной группы. В одном варианте осуществления алкильная группа, представляющая собой R5 или содержащаяся в группе, представляющей собой R5, независимо от любых других алкильных групп, содержащихся в R5, не содержит фторидные заместители. В одном варианте осуществления (C₃-C₇)-циклоалкильная группа, представляющая собой R5 или содержащаяся в группе, представляющей собой R5, представляет собой (C₃-C₆)-циклоалкильную группу, в другом варианте осуществления (C₃-C₄)-циклоалкильную группу, в другом варианте осуществления циклопропильную группу. В одном варианте осуществления галоген, представляющий собой R5, выбран из группы, включающей фтор и хлор.

Примерами групп Ar, включая необязательные заместители R5 у Ar, из одного или большего количества которых выбран Ar, в одном варианте осуществления настоящего изобретения являются 2-хлорфенил, 2-фторфенил, 3-фторфенил, 2,3-дихлорфенил, 2,5-дихлорфенил, 2,5-дифторфенил, 2-хлор-3-фторфенил, 2-хлор-4-фторфенил, 3-хлор-2-фторфенил, 5-хлор-2-фторфенил, 2,3,5-трифторфенил, 2,4,5-трифторфенил, 2-хлор-3,5-дифторфенил, 2-хлор-4,5-дифторфенил, 3-хлор-2,5-дифторфенил, 3-хлор-2,6-дифторфенил, 5-хлор-2,4-дифторфенил, 2-фтор-5-метилфенил, 2-фтор-5-метоксифенил, 2-хлор-5-метоксифенил, 2-бром-4,5-диметоксифенил, 2-фтор-4,5-диметоксифенил, 4,5-диметокси-2-метилфенил, 2-цианофенил, 3-цианофенил, 2-циано-3-фторфенил, 2-циано-5-фторфенил, 3-циано-4-фторфенил, 5-циано-2-фторфенил, 3-хлор-2-цианофенил, 5-хлор-2-цианофенил, 2-циано-5-метилфенил, 5-циано-2-метилфенил, 2-циано-5-метоксифенил, 2-карбамоилфенил, 4-бромтиофен-2-ил, 4-хлортиофен-3-ил, 5-бромтиофен-2-ил, 5-хлортиофен-2-ил, 2,5-дихлортиофен-3-ил, 4,5-дихлортиофен-2-ил, 5-хлор-1,3-диметилпиразол-4-ил, 7-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-6-ил, 8-бром-3,4-дигидро-2H-бензо[b][1,4]диоксепин-7-ил, 8-хлор-3,4-дигидро-2H-бензо[b][1,4]диоксепин-7-ил.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения R6 и R7 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей водород и (C₁-C₃)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей водород и (C₁-C₂)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей водород и метил, и в другом варианте осуществления R6 и R7 означают водород.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения заместители R8, которые могут содержаться в кольце, образованном двумя группами R5, связанными с соседними кольцевыми атомами углерода в Ar, вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, выбраны из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -O-(C₁-C₄)-алкил и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген и (C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей (C₁-C₄)-алкил. В одном варианте осуществления заместители R8, которые связаны с кольцевым атомом азота в кольце, образованном двумя группами R5, связанными с соседними кольцевыми атомами углерода в Ar, вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, выбраны из группы, включающей (C₁-C₄)-алкил.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения R10 выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₃)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей водород и (C₁-C₂)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей водород и метил, и в другом варианте осуществления R10 означает водород.

Моноциклический гетероцикл, который могут образовать группы R11 и R12 вместе с атомом азота, с которым они связаны, и, таким образом, гетероцикл присоединен через кольцевой атом азота, может быть 4-членным, 5-членным, 6-членным или 7-членным. В одном варианте осуществления настоящего изобретения гетероцикл, образованный группами R11 и R12 вместе с атомом азота, с которым они связаны, является 4- - 6-членным, в другом варианте осуществления он является 5-членным или 6-членным, в другом варианте осуществления он является 6-членным. В одном варианте осуществления дополнительный кольцевой гетероатом, который необязательно содержится в гетероцикле, образованном группами R11 и R12 вместе с атомом азота, с которым они связаны, выбран из группы, включающей азот и кислород, в другом варианте осуществления он является атомом азота и в другом варианте осуществления он является атомом кислорода, и в другом варианте осуществления дополнительный кольцевой гетероатом не содержится. В одном варианте осуществления настоящего изобретения количество заместителей, выбранных из группы, включающей фтор и (C₁-C₄)-алкил, которые могут содержаться в кольце, образованном группами R11 и R12 вместе с атомом азота, с которым они связаны, равно 1, 2 или 3, в другом варианте осуществления 1 или 2, в другом варианте осуществления 1. В одном варианте осуществления настоящего изобретения заместителями, которые могут содержаться в кольце, образованном группами R11 и R12 вместе с атомом азота, с которым они связаны, являются фторидные заместители, и в другом варианте осуществления ими являются (C₁-C₄)-алкильные заместители, например, метильные заместители. В одном варианте осуществления ими являются заместители в кольце, образованном группами R11 и R12 вместе с атомом азота, с которым они связаны, которые связаны с кольцевым атомом азота, выбранные из группы, включающей (C₁-C₄)-алкил. Примерами гетероциклических групп, из любой одной или большего количества которых выбрана гетероциклическая группа, образованная группами R11 и R12 вместе с атомом азота, с которым они связаны, в одном варианте осуществления настоящего изобретения являются азетидин-1-ил, пирролидин-1-ил, пиперидин-1-ил, морфолин-4-ил, тиоморфолин-4-ил, и 4-метилпиперазин-1-ил.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения одна из групп R11 и R12 выбрана из группы, включающей водород и (C₁-C₄)-алкил, и вторая из групп R11 и R12 выбрана из группы, включающей водород, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, Het1, -(C₁-C₄)-алкил-Het1 и -(C₁-C₄)-алкилфенил, в другом варианте осуществления вторая из групп R11 и R12 выбрана из группы, включающей водород, (C₁-C₄)-алкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил и -(C₁-C₄)-алкил-Het1, в другом варианте осуществления вторая из групп R11 и R12 выбрана из группы, включающей водород, (C₁-C₄)-алкил и -(C₁-C₄)-алкил-Het1, в другом варианте осуществления группы R11 и R12 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей водород, (C₁-C₄)-алкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил и -(C₁-C₄)-алкил-Het1, в другом варианте осуществления группы R11 и R12 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей водород, (C₁-C₄)-алкил и -(C₁-C₄)-алкил-Het1, в другом варианте осуществления группы R11 и R12 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей водород и (C₁-C₄)-алкил, и в другом варианте осуществления группы R11 и R12 обе означают водород, т.е. в этом последнем варианте осуществления группа -N(R11)-R12, представляющая собой R1, является группой -NH₂ (аминогруппой), или во всех этих вариантах осуществления R11 и R12 вместе с атомом азота, с которыми они связаны, образуют моноциклический 4- - 7-членнный насыщенный гетероцикл, который в дополнение к атому азота, с которым связаны R11 и R12, содержит 0 или 1 дополнительный кольцевой гетероатом, выбранный из группы, включающей азот, кислород и серу, и которая является незамещенной или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей, выбранных из группы, включающей фтор и (C₁-C₄)-алкил.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения R11 и R12 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей водород (H), (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, Het1, -(C₁-C₄)-алкил-Het1 и -(C₁-C₄)-алкилфенил, где фенил является незамещенным или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R50. В другом варианте осуществления одна из групп R11 и R12 выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)-алкил, и вторая из групп R11 и R12 выбрана из группы, включающей водород, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, Het1, -(C₁-C₄)-алкил-Het1 и -(C₁-C₄)-алкилфенил, в другом варианте осуществления вторая из групп R11 и R12 выбрана из группы, включающей водород, (C₁-C₄)-алкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил и -(C₁-C₄)-алкил-Het1, и в другом варианте осуществления вторая из групп R11 и R12 выбрана из группы, включающей водород, (C₁-C₄)-алкил и -(C₁-C₄)-алкил-Het1. В одном варианте осуществления группы R11 и R12 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей водород, (C₁-C₄)-алкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил и -(C₁-C₄)-алкил-Het1, в другом варианте осуществления группы R11 и R12 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей водород, (C₁-C₄)-алкил и -(C₁-C₄)-алкил-Het1, в другом варианте осуществления группы R11 и R12 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей водород и (C₁-C₄)-алкил, и в другом варианте осуществления группы R11 и R12 обе означают водород, т.е. в этом последнем варианте осуществления группа -N(R11)-R12, представляющая собой R1, является группой -NH₂.

В одном варианте осуществления одна из групп R11 и R12 означает водород, и вторая из групп R11 и R12 выбрана из группы, включающей водород, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, Het1, -(C₁-C₄)-алкил-Het1 и -(C₁-C₄)-алкилфенил, в другом варианте осуществления вторая из групп R11 и R12 выбрана из группы, включающей водород, (C₁-C₄)-алкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил и -(C₁-C₄)-алкил-Het1, в другом варианте осуществления вторая из групп R11 и R12 выбрана из группы, включающей водород, (C₁-C₄)-алкил и -(C₁-C₄)-алкил-Het1, и в другом варианте осуществления вторая из групп R11 и R12 выбрана из группы, включающей водород и (C₁-C₄)-алкил.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения R13 выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей водород и (C₁-C₃)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей водород и (C₁-C₂)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей водород и метил, и в другом варианте осуществления R13 означает водород.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения R14 выбран из группы, включающей (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, фенил, -(C₁-C₄)-алкилфенил, Het2 и -(C₁-C₄)-алкил-Het2, в другом варианте осуществления из группы, включающей (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, фенил, -(C₁-C₄)-алкилфенил и Het2, в другом варианте осуществления из группы, включающей (C₃-C₇)-циклоалкил, фенил, -(C₁-C₄)-алкилфенил, Het2 и -(C₁-C₄)-алкил-Het2, в другом варианте осуществления из группы, включающей (C₃-C₇)-циклоалкил, фенил, -(C₁-C₄)-алкилфенил и Het2, в другом варианте осуществления из группы, включающей (C₃-C₇)-циклоалкил, фенил и Het2, в другом варианте осуществления из группы, включающей (C₃-C₇)-циклоалкил и Het2, в другом варианте осуществления R14 означает (C₃-C₇)-циклоалкил, в другом варианте осуществления R14 означает Het2, и в другом варианте осуществления R14 означает фенил, где во всех этих вариантах осуществления (C₃-C₇)-циклоалкильные группы все являются незамещенными или содержат один или большее количество одинаковых или разных заместителей, выбранных из группы, включающей -OH и -O-(C₁-C₄)-алкил и, независимо от них, один или большее количество одинаковых или разных заместителей, выбранных из группы, включающей фтор и (C₁-C₄)-алкил, как это в общем случае относится к циклоалкильным группам, и фенил и группы Het2 все являются незамещенными или содержат один или большее количество одинаковых или разных заместителей R50. В одном варианте осуществления количество заместителей, выбранных из группы, включающей -OH и -O-(C₁-C₄)-алкил, которые могут содержаться в (C₁-C₈)-алкильной группе, представляющей собой R14, или в (C₃-C₇)-циклоалкильной группе, содержащейся в R14, равно 1, 2 или 3, в другом варианте осуществления оно равно 1 или 2, в другом варианте осуществления оно равно 1. В одном варианте осуществления количество заместителей R50, которые могут содержаться в фенильной группе или группе Het2, представляющей собой R14 или содержащейся в R14, равно 1, 2 или 3, в другом варианте осуществления оно равно 1 или 2, в другом варианте осуществления оно равно 1.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения R15 выбран из группы, включающей фенил и Het3, в другом варианте осуществления из группы, включающей (C₁-C₈)-алкил и фенил, и в другом варианте осуществления R15 означает фенил, где во всех этих вариантах осуществления фенил и Het3 все являются незамещенными или содержат один или большее количество одинаковых или разных заместителей R50. В одном варианте осуществления количество заместителей R50, которые могут содержаться в фенильной группе или группе Het3, представляющей собой R15, равно 1, 2, 3 или 4, в другом варианте осуществления оно равно 1, 2 или 3, в другом варианте осуществления оно равно 1 или 2, в другом варианте осуществления оно равно 1.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения R16 выбран из группы, включающей (C₁-C₈)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкилфенил, Het2 и -(C₁-C₄)-алкил-Het2, в другом варианте осуществления из группы, включающей (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкилфенил, Het2 и -(C₁-C₄)-алкил-Het2, в другом варианте осуществления из группы, включающей -(C₁-C₄)-алкилфенил, Het2 и -(C₁-C₄)-алкил-Het2, в другом варианте осуществления из группы, включающей -(C₁-C₄)-алкилфенил и -(C₁-C₄)-алкил-Het2, где (C₁-C₈)-алкил и (C₃-C₇)-циклоалкил все являются незамещенными или содержат один или большее количество одинаковых или разных заместителей, выбранных из группы, включающей -OH и -O-(C₁-C₄)-алкил и, независимо от них, фторидные заместители и в случае циклоалкильных групп (C₁-C₄)-алкильные заместители, и где фенил и Het2 все являются незамещенными или содержат один или большее количество одинаковых или разных заместителей R50. В одном варианте осуществления количество заместителей, выбранных из группы, включающей -OH и -O-(C₁-C₄)-алкил, которые могут содержаться в (C₁-C₈)-алкильной группе, представляющей собой R16 или (C₃-C₇)-циклоалкильной группе, содержащейся в R16, равно 1 или 2, в другом варианте осуществления оно равно 1 и в другом варианте осуществления оно равно 0. В одном варианте осуществления количество заместителей R50, которые могут содержаться в фенильной группе или группе Het2, представляющей собой R16 или содержащейся в R16, равно 1, 2 или 3, в другом варианте осуществления оно равно 1 или 2, в другом варианте осуществления оно равно 1 и в другом варианте осуществления оно равно 0.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения R17 означает (C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления R17 означает водород. В одном варианте осуществления (C₁-C₄)-алкильная группа, представляющая собой R17, означает (C₁-C₃)-алкил, в другом варианте осуществления она означает (C₁-C₂)-алкил, в другом варианте осуществления она означает метил.

Циклическая группа R30, которая может быть моноциклической и бициклической, может содержать 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 элементов кольца. В одном варианте осуществления настоящего изобретения R30 содержит 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или 11 элементов кольца, в другом варианте осуществления 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 элементов кольца, в другом варианте осуществления 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 элементов кольца. В одном варианте осуществления количество элементов кольца в моноциклической группе R30 равно 3, 4, 5, 6 или 7, в другом варианте осуществления 3, 4, 5 или 6, в другом варианте осуществления 3 или 4, в другом варианте осуществления 5, 6 или 7, в другом варианте осуществления 5 или 6, в другом варианте осуществления 3, в другом варианте осуществления 4, в другом варианте осуществления 5, в другом варианте осуществления 6, и количество элементов кольца в моноциклической группе R30 равно 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12, в другом варианте осуществления 6, 7, 8, 9, 10 или 11, в другом варианте осуществления 6, 7, 8, 9 или 10, в другом варианте осуществления 7, 8, 9, 10 или 11, в другом варианте осуществления 7, 8, 9 или 10, в другом варианте осуществления 7, 8 или 9, в другом варианте осуществления 8, 9 или 10. В одном варианте осуществления количество элементов кольца в циклической группе R30 равно от 3 до 12 в случае карбоциклического кольца и от 4 до 12 в случае гетероциклического кольца. В одном варианте осуществления циклическая группа R30 является моноциклической, в другом варианте осуществления она является бициклической. Бициклическая группа R30 может быть конденсированной кольцевой системой или мостиковой кольцевой системой или спироциклической кольцевой системой. В одном варианте осуществления бициклическая группа R30 является конденсированной или мостиковой кольцевой системой, в другом варианте осуществления она является конденсированной или спироциклической кольцевой системой, в другом варианте осуществления она является мостиковой или спироциклической кольцевой системой, в другом варианте осуществления она является конденсированной кольцевой системой, в другом варианте осуществления она является мостиковой кольцевой системой, и в другом варианте осуществления она является спироциклической кольцевой системой. В одном варианте осуществления циклическая группа R30 является насыщенной группой, т.е. она не содержит двойную связь в кольце, или она является ароматической группой, т.е. она содержит две двойные связи в кольце в случае 5-членного моноциклического ароматического гетероцикла и эти двойные связи вместе с электронной парой кольцевого гетероатома образуют делокализованную циклическую систему из 6 пи-электронов и 3 двойные связи в кольце в случае фенильной группы или 6-членного моноциклического ароматического гетероцикла, или 2, 3, 4 или 5 двойных связей в двух конденсированных кольцах в случае бициклической группы, содержащей одно или два ароматических кольца. В другом варианте осуществления R30 является частично ненасыщенной группой, т.е. она содержит одну или большее количество, например, одну или две двойные связи в кольце, с помощью которых она связана, но не является ароматической в этом кольце. В другом варианте осуществления R30 является насыщенной группой или она является частично ненасыщенной группой, в другом варианте осуществления R30 является ароматической группой или она является частично ненасыщенной группой, в другом варианте осуществления R30 является насыщенной группой и в другом варианте осуществления R30 является ароматической группой.

Циклическая группа R30 может быть карбоциклической группой, т.е. содержать 0 (ноль) кольцевых гетероатомов или гетероциклических групп, т.е. содержать 1, 2 или 3 одинаковых или разных кольцевых гетероатомов. В одном варианте осуществления R30 содержит 0, 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, в другом варианте осуществления 0 или 1 кольцевой гетероатом. В другом варианте осуществления R30 содержит 0 кольцевых гетероатомов, т.е. R30 является карбоциклической группой. В другом варианте осуществления R30 является гетероциклической группой, которая содержит 1, 2 или 3 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, в другом варианте осуществления 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, в другом варианте осуществления 1 кольцевой гетероатом. В одном варианте осуществления кольцевые гетероатомы в R30 выбраны из группы, включающей азот и кислород, в другом варианте осуществления из группы, включающей кислород и серу, в другом варианте осуществления они являются атомами азота и в другом варианте осуществления они являются атомами кислорода. Гетероциклические группы, представляющие собой R30, могут быть связаны с группой Z с помощью кольцевого атома углерода или кольцевого атома азота. В одном варианте осуществления гетероциклическая группа, представляющая собой R30, связана с помощью кольцевого атома углерода, в другом варианте осуществления она с помощью кольцевого атома азота.

Примерами карбоциклических групп, которые могут представлять собой R30 и любая одна или большее количество из которых могут быть включены в определение R30 в одном варианте осуществления настоящего изобретения и из любой одной или большего количества которых выбран R30 в другом варианте осуществления, например, являются циклоалкильные группы, такие как (C₃-C₇)-циклоалкил, включая циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил, циклоалкенильные группы, такие как (C₅-C₇)-циклоалкенил, включая циклопентенил, циклогексенил и циклогептенил, бициклоалкильные группы, такие как (C₆-C₁₂)-бициклоалкил, фенильные группы, инданильные группы, включая индан-1-ил и индан-2-ил, и нафтильные группы, включая нафталин-1-ил и нафталин-2-ил, которые все могут быть незамещенными или содержать один или большее количество одинаковых или разных заместителей R32. Приведенные выше пояснения, например, для циклоалкильных групп и фенильных групп, также относятся к таким группам, представляющим собой R30.

Примерами гетероциклических групп, которые могут представлять собой R30 и любая одна или большее количество из которых могут быть включены в определение R30 в одном варианте осуществления настоящего изобретения и из любой одной или большего количества которых выбран R30 в другом варианте осуществления, например, являются 4- - 7-членные моноциклические, насыщенные, частично ненасыщенные или ароматические, гетероциклические группы, которые содержат 1, 2 или 3 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, и связаны с помощью атома азота, 6- - 12-членные бициклические, насыщенные или частично ненасыщенные гетероциклические группы, которые содержат 1, 2 или 3 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, и связаны с помощью атома азота, и группы Het1, Het2 и Het3, и более предпочтительно оксетанил, включая оксетан-2-ил и оксетан-3-ил, тетрагидрофуранил, включая тетрагидрофуран-2-ил и тетрагидрофуран-3-ил, тетрагидропиранил, включая тетрагидропиран-2-ил, тетрагидропиран-3-ил и тетрагидропиран-4-ил, оксепанил, включая оксепан-2-ил, оксепан-3-ил и оксепан-4-ил, азетидинил, включая азетидин-1-ил, азетидин-2-ил и азетидин-3-ил, пирролидинил, включая пирролидин-1-ил, пирролидин-2-ил и пирролидин-3-ил, пиперидинил, включая пиперидин-1-ил, пиперидин-2-ил, пиперидин-3-ил и пиперидин-4-ил, азепанил, включая азепан-1-ил, азепан-2-ил, азепан-3-ил и азепан-4-ил, морфолинил, включая морфолин-2-ил, морфолин-3-ил и морфолин-4-ил, тиоморфолинил, включая тиоморфолин-2-ил, тиоморфолин-3-ил и тиоморфолин-4-ил, пиперазинил, включая пиперазин-1-ил и пиперазин-2-ил, фуранил, включая фуран-2-ил и фуран-3-ил, тиофенил (тиенил) , включая тиофен-2-ил и тиофен-3-ил, пирролил, включая пиррол-1-ил, пиррол-2-ил и пиррол-3-ил, изоксазолил, включая изоксазол-3-ил, изоксазол-4-ил и изоксазол-5-ил, оксазолил, включая оксазол-2-ил, оксазол-4-ил и оксазол-5-ил, тиазолил, включая тиазол-2-ил, тиазол-4-ил и тиазол-5-ил, пиразолил, включая пиразол-1-ил, пиразол-3-ил, пиразол-4-ил и пиразол-5-ил, имидазолил, включая имидазолил-1-ил, имидазол-2-ил, имидазол-4-ил и имидазол-5-ил, [1,2,4]триазолил, включая [1,2,4]триазол-1-ил, [1,2,4]триазол-3-ил и [1,2,4]триазол-5-ил, пиридинил (пиридил) , включая пиридин-2-ил, пиридин-3-ил и пиридин-4-ил, пиразинил, включая пиразин-2-ил, которые все могут быть незамещенными или содержать один или большее количество одинаковых или разных заместителей R32. Приведенные выше и ниже пояснения, например, для гетероциклических групп в целом и групп Het1, Het2 и Het3, также относятся к таким группам, представляющим собой R30.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения количество заместителей R32, которые могут содержаться в R30, равно 1, 2, 3, 4, 5 или 6, в другом варианте осуществления оно равно 1, 2, 3, 4 или 5, в другом варианте осуществления оно равно 1, 2, 3 или 4, в другом варианте осуществления оно равно 1, 2 или 3, в другом варианте осуществления оно равно 1 или 2, в другом варианте осуществления оно равно 1. В другом варианте осуществления R30 является незамещенным.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения R31 выбран из группы, включающей галоген, -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил, -O-(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -N(R33)-R34 и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил, -N(R33)-R34 и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил, -N(R33)-R34, -CN и -C(O)-N(R35)-R36, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил, -O-(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил и -N(R33)-R34, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил, -O-(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -N(R33)-R34 и -C(O)-N(R35)-R36, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил и -N(R33)-R34, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил, -N(R33)-R34 и -C(O)-N(R35)-R36, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил и -N(R33)-R34, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил, -N(R33)-R34 и -C(O)-N(R35)-R36, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил, -N(R33)-R34 и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил, -N(R33)-R34, -CN и -C(O)-N(R35)-R36, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил и -O-(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил и-O-(C₃-C₇)-циклоалкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -OH и -O-(C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген и -N(R33)-R34, в другом варианте осуществления из группы, включающей -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил и -N(R33)-R34, в другом варианте осуществления из группы, включающей -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил, -N(R33)-R34 и -C(O)-N(R35)-R36, в другом варианте осуществления из группы, включающей -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил и -O-(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил и-O-(C₃-C₇)-циклоалкил. В одном варианте осуществления галоген, представляющий собой R31, выбран из группы, включающей фтор и хлор, в другом варианте осуществления галоген, представляющий собой R31, означает фтор.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения R32 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39, -C(O)-(C₁-C₄)-алкил, -OH, =O, -O-(C₁-C₄)-алкил, -N(R40)-R41, -C(O)-O-(C₁-C₄)-алкил и -C(O)-N(R42)-R43, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39, -OH, =O, -O-(C₁-C₄)-алкил, -N(R40)-R41, -C(O)-O-(C₁-C₄)-алкил и -C(O)-N(R42)-R43, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39, -OH, =O, -O-(C₁-C₄)-алкил и -N(R40)-R41, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39, -OH, =O, -O-(C₁-C₄)-алкил и -N(R40)-R41, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39, -OH, =O и -O-(C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -OH, =O и -O-(C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39, -OH и -O-(C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39, -OH и =O, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37 и -OH, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил и -OH, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил и (C₃-C₇)-циклоалкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -OH и -O-(C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген и -OH, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -OH и -O-(C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -OH и -O-(C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, -OH и -O-(C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, -OH и -O-(C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей -OH и -O-(C₁-C₄)-алкил, и в другом варианте осуществления R32 означает -OH. В другом варианте осуществления R32 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39, -C(O)-(C₁-C₄)-алкил, -OH, =O, -O-(C₁-C₄)-алкил, -N(R40)-R41, -C(O)-O-(C₁-C₄)-алкил и -C(O)-N(R42)-R43, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39, -C(O)-(C₁-C₄)-алкил, -OH, =O, -O-(C₁-C₄)-алкил и -N(R40)-R41, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39, -C(O)-(C₁-C₄)-алкил, -OH, =O, -O-(C₁-C₄)-алкил и -N(R40)-R41, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39, -C(O)-(C₁-C₄)-алкил, -OH, =O и -O-(C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37,-OH, =O и -O-(C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39, -C(O)-(C₁-C₄)-алкил, -OH и -O-(C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39, -C(O)-(C₁-C₄)-алкил, -OH и =O, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -C(O)-(C₁-C₄)-алкил и -OH, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -C(O)-(C₁-C₄)-алкил и -OH, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил и (C₃-C₇)-циклоалкил и -C(O)-(C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -C(O)-(C₁-C₄)-алкил, -OH и -O-(C₁-C₄)-алкил, и в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -C(O)-(C₁-C₄)-алкил, -OH и -O-(C₁-C₄)-алкил.

В одном варианте осуществления заместители R32, которые связаны с кольцевыми атомами азота в R30, выбраны из группы, включающей (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39, -(C₁-C₄)-алкил-CN, -C(O)-(C₁-C₄)-алкил, -C(O)-O-(C₁-C₄)-алкил и -C(O)-N(R42)-R43, в другом варианте осуществления из группы, включающей (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39 и -(C₁-C₄)-алкил-CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил и -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, в другом варианте осуществления из группы, включающей (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил и -(C₁-C₄)-алкил-O-R37. В одном варианте осуществления количество заместителей - оксогрупп (=O), содержащихся в циклической группе R30, не больше двух, в другом варианте осуществления оно не больше одного. В одном варианте осуществления галоген, представляющий собой R32, выбран из группы, включающей фтор и хлор, в другом варианте осуществления галоген, представляющий собой R32, означает фтор. В другом варианте осуществления заместители R32, которые связаны с кольцевыми атомами азота в R30, выбраны из группы, включающей (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39 и -C(O)-(C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37 и -C(O)-(C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37 и -C(O)-(C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил и -C(O)-(C₁-C₄)-алкил. В одном варианте осуществления количество заместителей - оксогрупп (=O) R32, содержащихся в циклической группе R30, не больше двух, в другом варианте осуществления оно не больше одного. В одном варианте осуществления галоген, представляющий собой R32, выбран из группы, включающей фтор и хлор, в другом варианте осуществления галоген, представляющий собой R32 означает фтор.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39, R40, R41, R42 и R43 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей водород и (C₁-C₃)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей водород и (C₁-C₂)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей водород и метил. В другом варианте осуществления любая из групп R33, R34, R35, R36, R37, R38, R39, R40, R41, R42 и R43 независимо от любой другой группы означает водород, в другом варианте осуществления она означает (C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления (C₁-C₃)-алкил, в другом варианте осуществления (C₁-C₂)-алкил, и в другом варианте осуществления метил.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения R50 в любом из его случаев появления независимо от других случаев его появления выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил и -CN; в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил и -O-(C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген и (C₁-C₄)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген и -CN, в другом варианте осуществления из группы, включающей галоген. В одном варианте осуществления группа R50, которая связана с кольцевым атомом азота в группе Het2 или Het3, выбрана из группы, включающей (C₁-C₄)-алкил. В одном варианте осуществления (C₁-C₄)-алкильная группа, представляющая собой R50 или содержащаяся в R50, независимо от других случаев появления выбрана из группы, включающей (C₁-C₃)-алкил, в другом варианте осуществления из группы, включающей (C₁-C₂)-алкил, и в другом варианте осуществления она означает метил.

Группа Het1 может содержать 4, 5, 6 или 7 элементов кольца. В одном варианте осуществления настоящего изобретения Het1 является 4- - 6-членным, в другом варианте осуществления 5-членным или 6-членным, в другом варианте осуществления 6-членным. В одном варианте осуществления Het1 содержит 1 кольцевой гетероатом. В одном варианте осуществления кольцевые гетероатомы в Het1 выбраны из группы, включающей азот и кислород, в другом варианте осуществления из группы, включающей кислород и серу, в другом варианте осуществления они являются атомами азота и в другом варианте осуществления они являются атомами кислорода. Примерами гетероциклов, из любого одного или большего количества которых выбран Het1, в одном варианте осуществления являются оксетанил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, оксепанил, тетрагидротиофенил, тетрагидротиопиранил, азетидинил, пирролидинил, пиперидинил, азепанил, морфолинил, тиоморфолинил и пиперазинил. В одном варианте осуществления количество необязательных заместителей в группе Het1 равно 1, 2, 3 или 4, в другом варианте осуществления оно равно 1, 2 или 3, в другом варианте осуществления оно равно 1 или 2, в другом варианте осуществления оно равно 1 и в другом варианте осуществления Het1 является незамещенным. В одном варианте осуществления заместители, которые связаны с кольцевым атомом азота в Het1, выбраны из группы, включающей (C₁-C₄)-алкил.

Группа Het2 может содержать 4, 5, 6 или 7 элементов кольца. В одном варианте осуществления настоящего изобретения Het2 является 4- - 6-членным, в другом варианте осуществления 5-членным или 6-членным, в другом варианте осуществления 6-членным. В одном варианте осуществления Het2 является насыщенной или ароматической группой, в другом варианте осуществления насыщенной группой, в другом варианте осуществления ароматической группой. В одном варианте осуществления Het2 содержит 1 кольцевой гетероатом. В одном варианте осуществления кольцевые гетероатомы в Het2 выбраны из группы, включающей азот и кислород, в другом варианте осуществления из группы, включающей азот и серу, в другом варианте осуществления из группы, включающей кислород и серу, в другом варианте осуществления они являются атомами азота, в другом варианте осуществления они являются атомами кислорода, и в другом варианте осуществления они являются атомами серы. Примерами гетероциклов, из любого одного или большего количества которых выбран Het2, в одном варианте осуществления являются оксетанил, тетрагидрофуранил, фуранил, тетрагидропиранил, оксепанил, тетрагидротиофенил, тиофенил, тетрагидротиопиранил, азетидинил, пирролидинил, пирролил, пиперидинил, пиридинил, азепанил, пиразолил, имидазолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, морфолинил, тиоморфолинил и пиперазинил.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения группа Het3 является 5-членной, в другом варианте осуществления она является 6-членной. В одном варианте осуществления Het3 содержит 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатомов, в другом варианте осуществления 1 кольцевой гетероатом. В одном варианте осуществления кольцевые гетероатомы в Het3 выбраны из группы, включающей азот и кислород, в другом варианте осуществления из группы, включающей азот и серу, в другом варианте осуществления они являются атомами азота, и в другом варианте осуществления они являются атомами серы. Примерами гетероциклов, из любого одного или большего количества которых выбран Het3, в одном варианте осуществления являются фуранил, тиофенил, пирролил, пиридинил, пиразолил, имидазолил, [1,2,4]триазолил, оксазолил, изоксазолил и тиазолил.

Объектом настоящего изобретения являются все соединения формулы I, в которой любой один или большее количество структурных элементов, таких как группы, остатки, заместители и числа, определены, как в любом из указанных вариантов осуществления или определений элементов, или обладают одним или большим количеством заданных значений, которые указаны в настоящем изобретении в качестве примеров элементов, где все комбинации одного или большего количества определений соединений или элементов и/или указанных вариантов осуществления и/или конкретных значений элементов, являются объектом настоящего изобретения. Также применительно ко всем таким соединениям формулы I все их стереоизомерные формы и смеси стереоизомерных форм в любом соотношении и их фармацевтически приемлемые соли являются объектом настоящего изобретения.

В качестве примера соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, которые применительно к любым структурным элементам определены, как в указанных вариантах осуществления настоящего изобретения или в определениях таких элементов, можно отметить соединения формулы I в любых из их стереоизомерных форм или смесь стереоизомерных форм в любом соотношении и их фармацевтически приемлемые соли, в которой

Ar выбран из группы, включающей фенил и 5- или 6-членную моноциклическую ароматическую гетероциклическую группу, которая содержит 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, и присоединена через кольцевой атом углерода, которые все являются незамещенными или содержат один или большее количество одинаковых или разных заместителей R5;

n выбран из группы, включающей 0, 1 и 2;

X выбран из группы, включающей N и CH;

Z выбран из группы, включающей непосредственную связь, O, S и N(R10);

R1 выбран из группы, включающей H, -N(R11)-R12, -N(R13)-C(O)-R14, -N(R13)-S(O)₂-R15, -N(R13)-C(O)-NH-R16 и (C₁-C₄)-алкил;

R2 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, -O-(C₁-C₄)-алкил и -CN;

R3 выбран из группы, включающей H, (C₁-C₈)-алкил, R30 и -(C₁-C₄)-алкил-R30, где (C₁-C₈)-алкил является незамещенным или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R31;

R5 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил, -C(O)-N(R6)-R7 и -CN,

и две группы R5, связанные с соседними кольцевыми атомами углерода в Ar, вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, могут образовать 5- - 8-членное моноциклическое ненасыщенное кольцо, которое содержит 0, 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, и которое является незамещенным или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R8;

R6 и R7 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей H и (C₁-C₄)-алкил;

R8 выбран из группы, включающей галоген и (C₁-C₄)-алкил;

R10 выбран из группы, включающей H и (C₁-C₄)-алкил;

R11 и R12 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей H, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, Het1, -(C₁-C₄)-алкил-Het1 и -(C₁-C₄)-алкилфенил, где фенил является незамещенным или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R50;

R13 выбран из группы, включающей H и (C₁-C₄)-алкил;

R14 и R16 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей (C₁-C₈)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, фенил, -(C₁-C₄)-алкилфенил, Het2 и -(C₁-C₄)-алкил-Het2, где (C₁-C₈)-алкил и (C₃-C₇)-циклоалкил все являются незамещенными или содержат один или большее количество одинаковых или разных заместителей, выбранных из группы, включающей -OH и -O-(C₁-C₄)-алкил, и где фенил и Het2 все являются незамещенными или содержат один или большее количество одинаковых или разных заместителей R50;

R15 выбран из группы, включающей фенил и Het3, где фенил и Het3 все являются незамещенными или содержат один или большее количество одинаковых или разных заместителей R50;

R30 означает 3- - 12-членную моноциклическую или бициклическую, насыщенную, частично ненасыщенную или ароматическую циклическую группу, которая содержит 0, 1, 2 или 3 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, которая является незамещенной или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R32;

R31 выбран из группы, включающей галоген, -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил, -O-(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -N(R33)-R34 и -CN;

R32 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39, -(C₁-C₄)-алкил-CN, -C(O)-(C₁-C₄)-алкил, -CN, -OH, =O, -O-(C₁-C₄)-алкил, -N(R40)-R41, -C(O)-O-(C₁-C₄)-алкил и -C(O)-N(R42)-R43;

R33, R34, R37, R38, R39, R40, R41, R42 и R43 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей H и (C₁-C₄)-алкил;

R50 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, -O-(C₁-C₄)-алкил и -CN;

Het1 означает 4- - 7-членную моноциклическую насыщенную гетероциклическую группу, которая содержит 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, и присоединена через кольцевой атом углерода и которая является незамещенной или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей, выбранных из группы, включающей фтор и (C₁-C₄)-алкил;

Het2 означает 4- - 7-членную моноциклическую, насыщенную, частично ненасыщенную или ароматическую гетероциклическую группу, которая содержит 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, и присоединена через кольцевой атом углерода;

Het3 означает 5- или 6-членную моноциклическую ароматическую гетероциклическую группу, которая содержит 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, и присоединена через кольцевой атом углерода;

где все циклоалкильные группы независимо от любых других заместителей, которые могут содержаться в циклоалкильной группе, могут содержать один или большее количество одинаковых или разных заместителей, выбранных из группы, включающей фтор и (C₁-C₄)-алкил;

где все алкильные группы независимо от любых других заместителей, которые могут содержаться в алкильной группе, могут содержать один или большее количество фторидных заместителей.

В качестве другого такого примера можно отметить соединения формулы I в любых из их стереоизомерных форм или смесь стереоизомерных форм в любом соотношении и их фармацевтически приемлемые соли, в которой

Ar выбран из группы, включающей фенил и 5-членную моноциклическую ароматическую гетероциклическую группу, которая содержит 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот и серу, и присоединена через кольцевой атом углерода, которые все являются незамещенными или содержат один или большее количество одинаковых или разных заместителей R5;

n выбран из группы, включающей 0, 1 и 2;

X выбран из группы, включающей N и CH;

Z выбран из группы, включающей непосредственную связь, O, S и N(R10);

R1 выбран из группы, включающей H, -N(R11)-R12, -N(R13)-C(O)-R14, -N(R13)-S(O)₂-R15, -N(R13)-C(O)-NH-R16 и (C₁-C₄)-алкил;

R2 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил и -O-(C₁-C₄)-алкил;

R3 выбран из группы, включающей H, (C₁-C₈)-алкил, R30 и -(C₁-C₄)-алкил-R30, где (C₁-C₈)-алкил является незамещенным или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R31;

R5 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил и -CN,

и две группы R5, связанные с соседними кольцевыми атомами углерода в Ar, вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, могут образовать 5- - 7-членное моноциклическое ненасыщенное кольцо, которое содержит 0, 1 или 2 атома кислорода в качестве кольцевых гетероатомов и которое является незамещенным или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R8;

R8 выбран из группы, включающей галоген и (C₁-C₄)-алкил;

R10 выбран из группы, включающей H и (C₁-C₄)-алкил;

одна из групп R11 и R12 выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)-алкил, и вторая из групп R11 и R12 выбрана из группы, включающей водород, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, Het1, -(C₁-C₄)-алкил-Het1 и -(C₁-C₄)-алкилфенил;

R13 выбран из группы, включающей H и (C₁-C₄)-алкил;

R14 и R16 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей (C₁-C₈)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, фенил, -(C₁-C₄)-алкилфенил, Het2 и -(C₁-C₄)-алкил-Het2, где (C₁-C₈)-алкил и (C₃-C₇)-циклоалкил все являются незамещенными или содержат один или большее количество одинаковых или разных заместителей, выбранных из группы, включающей -OH и -O-(C₁-C₄)-алкил, и где фенил и Het2 все являются незамещенными или содержат один или большее количество одинаковых или разных заместителей R50;

R15 означает фенил, который является незамещенным или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R50;

R30 означает 3- - 12-членную моноциклическую или бициклическую, насыщенную, частично ненасыщенную или ароматическую циклическую группу, которая содержит 0, 1, 2 или 3 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот и кислород, которая является незамещенной или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R32;

R31 выбран из группы, включающей галоген, -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил, -O-(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил и -N(R33)-R34;

R32 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39, -OH, =O, -O-(C₁-C₄)-алкил и -N(R40)-R41;

R33, R34, R37, R38, R39, R40 и R41 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей H и (C₁-C₄)-алкил;

R50 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, -O-(C₁-C₄)-алкил и -CN;

Het1 означает 4- - 7-членную моноциклическую насыщенную гетероциклическую группу, которая содержит 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот и кислород, и присоединена через кольцевой атом углерода и которая является незамещенной или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей, выбранных из группы, включающей фтор и (C₁-C₄)-алкил;

Het2 означает 4- - 7-членную моноциклическую, насыщенную, частично ненасыщенную или ароматическую гетероциклическую группу, которая содержит 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, и присоединена через кольцевой атом углерода;

где все циклоалкильные группы независимо от любых других заместителей, которые могут содержаться в циклоалкильной группе, могут содержать один или большее количество одинаковых или разных заместителей, выбранных из группы, включающей фтор и (C₁-C₄)-алкил;

где все алкильные группы независимо от любых других заместителей, которые могут содержаться в алкильной группе, могут содержать один или большее количество фторидных заместителей.

В качестве другого такого примера можно отметить соединения формулы I в любых из их стереоизомерных форм или смесь стереоизомерных форм в любом соотношении и их фармацевтически приемлемые соли, в которой

Ar означает фенил, который является незамещенным или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R5;

n выбран из группы, включающей 0 и 1;

X выбран из группы, включающей N и CH;

Z выбран из группы, включающей непосредственную связь, O и N(R10);

R1 выбран из группы, включающей H, -N(R11)-R12, -N(R13)-C(O)-R14 и (C₁-C₄)-алкил;

R2 выбран из группы, включающей галоген и -O-(C₁-C₄)-алкил;

R3 выбран из группы, включающей H, (C₁-C₈)-алкил, R30 и -(C₁-C₄)-алкил-R30, где (C₁-C₈)-алкил является незамещенным или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R31;

R5 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, -O-(C₁-C₄)-алкил и -CN,

и две группы R5, связанные с соседними кольцевыми атомами углерода в Ar, вместе с атомами углерода, с которыми они связаны, могут образовать 5- - 7-членное моноциклическое ненасыщенное кольцо, которое содержит 0, 1 или 2 атома кислорода в качестве кольцевых гетероатомов и которое является незамещенным или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R8;

R8 выбран из группы, включающей галоген и (C₁-C₄)-алкил;

R10 выбран из группы, включающей H и (C₁-C₄)-алкил;

одна из групп R11 и R12 выбран из группы, включающей водород и (C₁-C₄)-алкил, и вторая из групп R11 и R12 выбрана из группы, включающей водород, (C₁-C₄)-алкил, -(C₁-C₄)-алкил-(C₃-C₇)-циклоалкил и -(C₁-C₄)-алкил-Het1;

R13 выбран из группы, включающей H и (C₁-C₄)-алкил;

R14 выбран из группы, включающей (C₃-C₇)-циклоалкил, фенил и Het2, где (C₃-C₇)-циклоалкил является незамещенным или замещены одним или большим количеством одинаковых или разных заместителей, выбранных из группы, включающей -OH и -O-(C₁-C₄)-алкил, и где фенил и Het2 все являются незамещенными или содержат один или большее количество одинаковых или разных заместителей R50;

R30 означает 3- - 10-членную моноциклическую или бициклическую насыщенную, частично ненасыщенную или ароматическую циклическую группу, которая содержит 0, 1, 2 или 3 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот и кислород, которая является незамещенной или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R32;

R31 выбран из группы, включающей галоген, -OH, -O-(C₁-C₄)-алкил, -O-(C₃-C₇)-циклоалкил и -N(R33)-R34;

R32 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39, -OH, =O, -O-(C₁-C₄)-алкил и -N(R40)-R41;

R33, R34, R37, R38, R39, R40 и R41 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей H и (C₁-C₄)-алкил;

R50 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, -O-(C₁-C₄)-алкил и -CN;

Het1 означает 4- - 7-членную моноциклическую насыщенную гетероциклическую группу, которая содержит 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот и кислород, и присоединена через кольцевой атом углерода и которая является незамещенной или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей, выбранных из группы, включающей фтор и (C₁-C₄)-алкил;

Het2 означает 4- - 7-членную моноциклическую насыщенную или ароматическую гетероциклическую группу, которая содержит 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот, кислород и серу, и присоединена через кольцевой атом углерода;

где все циклоалкильные группы независимо от любых других заместителей, которые могут содержаться в циклоалкильной группе, могут содержать один или большее количество одинаковых или разных заместителей, выбранных из группы, включающей фтор и (C₁-C₄)-алкил;

где все алкильные группы независимо от любых других заместителей, которые могут содержаться в алкильной группе, могут содержать один или большее количество фторидных заместителей.

В качестве другого такого примера можно отметить соединения формулы I в любых из их стереоизомерных форм или смесь стереоизомерных форм в любом соотношении и их фармацевтически приемлемые соли, в которой

Ar означает фенил, который является незамещенным или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R5;

n выбран из группы, включающей 0 и 1;

X выбран из группы, включающей N и CH;

Z выбран из группы, включающей непосредственную связь и O;

R1 выбран из группы, включающей H, -N(R11)-R12 и (C₁-C₄)-алкил;

R2 выбран из группы, включающей галоген;

R3 выбран из группы, включающей H, R30 и -(C₁-C₄)-алкил-R30;

R5 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, -O-(C₁-C₄)-алкил и -CN;

R11 и R12 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей водород и (C₁-C₄)-алкил;

R30 означает 3- - 7-членную моноциклическую насыщенную или ароматическую циклическую группу, которая содержит 0, 1 или 2 одинаковых или разных кольцевых гетероатома, выбранных из группы, включающей азот и кислород, которая является незамещенной или содержит один или большее количество одинаковых или разных заместителей R32;

R32 выбран из группы, включающей галоген, (C₁-C₄)-алкил, (C₃-C₇)-циклоалкил, -(C₁-C₄)-алкил-O-R37, -(C₁-C₄)-алкил-N(R38)-R39, -OH и =O;

R37, R38 и R39 независимо друг от друга выбраны из группы, включающей H и (C₁-C₄)-алкил;

где все циклоалкильные группы могут быть замещены одним или большим количеством одинаковых или разных заместителей, выбранных из группы, включающей фтор и (C₁-C₄)-алкил;

где все алкильные группы независимо от любых других заместителей, которые могут содержаться в алкильной группе, могут содержать один или большее количество фторидных заместителей.

Объектом настоящего изобретения также является соединение формулы I, которое выбрано из числа любых конкретных соединений формулы I, которые раскрыты в настоящем изобретении, или является любым из конкретных соединений формулы I, которые раскрыты в настоящем изобретении, независимо от того, раскрыты ли они в виде свободного соединения и/или в виде конкретной соли, или его фармацевтически приемлемой соли, где соединение формулы I является объектом настоящего изобретения в любой из его стереоизомерных форм или смеси стереоизомерных форм в любом соотношении, если это возможно. Например, объектом настоящего изобретения является соединение формулы I, которое выбрано из группы, включающей:

N-[4-(3-Амино-4-циклопропил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2-циано-5-метоксибензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2,5-дифторбензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2-цианобензолсульфонамид,

2-Хлор-N-{4-[4-(1-этилпиперидин-3-илокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-5-метоксибензолсульфонамид,

5-Хлор-N-{4-[4-(1-этилпиперидин-3-илокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-2-фторбензолсульфонамид,

этиловый эфир 4-{6-[4-(2,5-дифторбензолсульфониламино)-фенил]-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-илокси}-пиперидин-1-карбоновой кислоты,

N-[4-(3-Амино-4-пропокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2,5-дифторбензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-4-этокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2-фторбензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-4-пропокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2-фторбензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-4-этокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2,5-дифторбензолсульфонамид,

2-Фтор-N-(4-{4-[1-(2-метоксиэтил)-пиперидин-4-илокси]-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил}-фенил)-5-метилбензолсульфонамид,

2,5-Дифтор-N-(4-{4-[1-(2-метоксиэтил)-пиперидин-4-илокси]-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил}-фенил)-бензолсульфонамид,

5-Хлор-2-фтор-N-(4-{4-[1-(2-метоксиэтил)-пиперидин-4-илокси]-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил}-фенил)-бензолсульфонамид,

N-{4-[4-(1-Этилпиперидин-4-илокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-2-фтор-5-метоксибензолсульфонамид,

2,5-Дихлор-N-{4-[4-(1-этилпиперидин-4-илокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-бензолсульфонамид,

N-{4-[4-(1-Этилпиперидин-4-илокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-2-фтор-5-метилбензолсульфонамид,

N-{4-[4-(1-Этилпиперидин-4-илокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-2-фторбензолсульфонамид,

5-Хлор-N-{4-[4-(1-этилпиперидин-4-илокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-2-фторбензолсульфонамид,

N-{4-[4-(1-Циклобутилпиперидин-4-илокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-2,5-дифторбензолсульфонамид,

2,5-Дифтор-N-(4-{4-[1-(3-метоксипропил)-пиперидин-4-илокси]-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил}-фенил)-бензолсульфонамид,

5-Хлор-2-фтор-N-{4-[4-(3-гидроксипропокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-бензолсульфонамид,

2,5-Дифтор-N-{4-[4-(1-изопропилпиперидин-4-илокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-бензолсульфонамид,

2-Фтор-N-(4-{4-[1-(2-фторэтил)-пиперидин-4-илокси]-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил}-фенил)-бензолсульфонамид,

5-Хлор-2-фтор-N-{4-[4-(1-изопропилпиперидин-4-илокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-бензолсульфонамид,

2,5-Дифтор-N-(4-{4-[1-(2-фторэтил)-пиперидин-4-илокси]-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил}-фенил)-бензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-4-изопропокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2,5-дихлорбензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-4-изобутокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2,5-дифторбензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-4-изобутокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2-фтор-5-метоксибензолсульфонамид,

2,5-Дихлор-N-{4-[3-метил-4-(пиперидин-3-илокси)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-бензолсульфонамид,

2,5-Дифтор-N-{4-[3-метил-4-(пиперидин-3-илокси)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-бензолсульфонамид,

2-Фтор-5-метил-N-{4-[3-метил-4-(морфолин-2-илметокси)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-бензолсульфонамид,

N-{4-[4-(3-Аминометилоксетан-3-илметокси)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-5-хлор-2-фторбензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-4-этоксиметил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2-фтор-5-метилбензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-4-трифторметил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2,5-дифторбензолсульфонамид,

2-Фтор-N-{4-[4-(пиперидин-4-илокси)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-бензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2-фтор-5-метоксибензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-4-метоксиметил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2-фторбензолсульфонамид,

N-{4-[4-(3-Аминопропокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-5-хлор-2-фторбензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2,5-дифторбензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2,4,5-трифторбензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2-хлор-4,5-дифторбензолсульфонамид,

N-{4-[3-Амино-4-(2,2,2-трифторэтокси)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-2-циано-5-метилбензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-4-трифторметил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2-фторбензолсульфонамид,

N-{4-[3-Амино-4-(2-метоксиэтил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-2-циано-5-метилбензолсульфонамид,

2-Циано-5-метил-N-{4-[4-(2,2,2-трифторэтокси)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-бензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-4-циклопропил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2,4,5-трифторбензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-4-циклопропил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2-фторбензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-4-циклопропил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2,5-дифторбензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-4-метокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2-фторбензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-4-метокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2-цианобензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-4-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2-хлор-3,5-дифторбензолсульфонамид,

2-Циано-N-{4-[4-(4-гидроксициклогексилокси)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-5-метоксибензолсульфонамид,

N-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2,4-дифторбензолсульфонамид и

5-Хлор-2-циано-N-{4-[4-(4-гидроксициклогексилокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-бензолсульфонамид и/или из группы, включающей:

N-{4-[4-(1-Циклопропилпиперидин-4-илокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-2,5-дифторбензолсульфонамид,

5-Хлор-N-{4-[4-(1-циклопропилпиперидин-4-илокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-2-фторбензолсульфонамид,

N-{4-[4-(1-Ацетилпиперидин-4-илокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-2-фтор-5-метоксибензолсульфонамид,

N-{4-[4-(1-Ацетилпиперидин-4-илокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-2,5-дифторбензолсульфонамид,

N-{4-[4-(1-Ацетилпиперидин-4-илокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-5-хлор-2-фторбензолсульфонамид,

5-Хлор-2-фтор-N-{4-[4-(6-гидроксипиридин-3-илокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-бензолсульфонамид и

2-Фтор-N-{4-[4-(6-гидроксипиридин-3-илокси)-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-5-метилбензолсульфонамид,

или которое представляет собой любое из этих соединений, и его фармацевтически приемлемые соли.

Другим объектом настоящего изобретения являются способы получения соединений формулы I, которые описаны ниже и с помощью которых можно получить соединения формулы I и промежуточные продукты, образующиеся при их синтезе, и их соли. Соединения формулы I можно получить путем использования процедур и методик, которые сами по себе известны специалисту в данной области техники. Обычно пиразоло[3,4-d]пиримидины и пиразоло[4,3-c]пиридины формулы I можно получить, например, во время конвергентного синтеза путем связывания двух или большего количества фрагментов, которые можно получить с помощью ретросинтеза из формулы I. Точнее, подходящие замещенные исходные производные 1H-пиразоло[3,4-d]пиримидина и 1H-пиразоло[4,3-c]пиридина можно использовать в качестве структурных блоков для получения соединений формулы I, которые можно синтезировать из подходящих соединений-предшественников, которые позволяют ввести множество заместителей в различные положения 1H-пиразоло[3,4-d]пиримидиновой или 1H-пиразоло[4,3-c]пиридиновой системы и которые затем можно дополнительно химически модифицировать, чтобы в конечном счете получить соединения формулы I, содержащие необходимые заместители. Для синтеза 1H-пиразоло[3,4-d]пиримидиновой и 1H-пиразоло[4,3-c]пиридиновой кольцевой системы также можно использовать процедуры и превращения, которые описаны в литературе применительно к индазолам. В качестве обзоров, в которых содержатся многочисленные подробности и литература по химии индазолов и методикам синтеза для их получения, можно отметить публикации J. Eiguero in Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, Eds. A. Katritzky, Ch. Rees, E. Scriven, Elsevier 1996, Vol. 3; W. Stadlbauer in Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie (Methods of Organic Chemistry), Georg Thieme Verlag, Stuttgart, Germany, 1994, Vol. E8b, Hetarene; W. Stadlbauer in Houben-Weyl, Science of Synthesis, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, Germany, 2002, vol. 12,2, 227-324. Исходные вещества, использующиеся для синтеза соединений формулы I, имеются в продаже или их можно получить по методикам или аналогично методикам, описанным в литературе или в настоящем изобретении.

В одном синтетическом подходе для получения соединений формулы I, соединение формулы II и соединение формулы III вводят в реакцию и получают соединение формулы IV, которое уже может быть конечным соединением формулы I или которое затем превращают в искомое конечное соединение формулы I.

Точнее, в конкретном случае, когда группа R1 в соединении формулы I означает водород или необязательно замещенную алкильную группу, в соответствии с этим подходом соединение формулы II получают по реакции соединения формулы V с гидразином формулы VI, полученное соединение формулы II и соединение формулы III вводят в реакцию и получают соединение формулы IV, которое уже может быть конечным соединением формулы I, и соединение формулы IV необязательно превращают в соединение формулы I.

В альтернативном подходе для получения соединения формулы IV соединение формулы V сначала вводят в реакцию с соединением формулы III с получением соединения формулы VII и затем соединение формулы VII вводят в реакцию с гидразином формулы VI.

В другом синтетическом подходе для получения соединений формулы I, в частности в случае соединений, в которых группа R1 присоединена через атом азота к 1H-пиразоло[3,4-d]пиримидиновой или 1H-пиразоло[4,3-c]пиридиновой кольцевой системой, в особенности в случае получения соединений, в которых R1 означает аминогруппу, соединение формулы X получают по реакции соединения формулы VIII с гидразином формулы VI и полученное соединение формулы IX вводят в реакцию с соединением формулы III и получают соединение формулы X, которое уже может быть конечным соединением формулы I, и соединение формулы X необязательно превращают в соединение формулы I.

В альтернативном подходе для получения соединения формулы X соединение формулы VIII сначала вводят в реакцию с соединением формулы III с получением соединения формулы XI и затем соединение формулы XI вводят в реакцию с гидразином формулы VI.

Соединение формулы XI, в котором X означает N, т.е. соединение формулы XV, также можно получить, в частности, в случае соединений, в которых группа -Z-R3 означает водород или группу, которая присоединена через атом углерода к 1H-пиразоло[3,4-d]пиримидиновой кольцевой системе, по реакции амидина формулы XII с эфиром 2-цианоакриловой кислоты формулы XIII, в которой R70 означает алкильную группу, такую как (C₁-C₂)-алкил, такой как метил или этил, и получить соединение формулы XIV, и превратить соединение формулы XIV в соединение формулы XV.

В другом подходе для получения соединения формулы I начинают с соединения формулы XVI, которое вводят в реакцию с соединением формулы XVII с получением соединения формулы II, которое затем вводят в реакцию с соединением формулы III с получением соединения формулы IV, которое уже может быть конечным соединением формулы I или его необязательно превращают в соединение формулы I.

Группы X, Z, R1, R2 и R3 и число n в соединениях формул II-XVII определены так, как в соединениях формулы I, в которой в некоторых случаях их значения могут быть более специфическими, как также указано выше, и, кроме того, могут быть функциональными группами, содержащимися в защищенной форме или в форме группы-предшественника, которую затем превращают в конечную группу.

Группа G1 в соединениях формул II, V, VIII, IX и XVI означает отщепляющуюся группу, которую можно заменить по реакции типа Судзуки или реакции типа Стилле, такую как атом галогена, предпочтительно бром или хлор, или сульфонилоксигруппу, предпочтительно трифторметансульфонилоксигруппу, метансульфонилоксигруппу, бензолсульфонилоксигруппу или тозилоксигруппу (4-метилбензолсульфонилоксигруппу).

Группа G2 в соединениях формул V, VII, VIII, XI и XV может совпадать с группой G1 или отличаться от нее и означает отщепляющуюся группу, такую как атом галогена, предпочтительно бром или хлор, или сульфонилоксигруппу, предпочтительно трифторметансульфонилоксигруппу, метансульфонилоксигруппу, бензолсульфонилоксигруппу или тозилоксигруппу, или алкилсульфанильную группу, в частности, метилсульфанил или этилсульфанил.

Группой G3 в соединениях формул II, IV, VI, IX, X и XVI может быть водород и в этом случае соединение формулы VI может представлять собой гидразин, или она может быть защитной группой, которая пригодна для защиты кольцевого атома азота в 1H-пиразоло[3,4-d]пиримидиновой или 1H-пиразоло[4,3-c]пиридиновой кольцевой системе или аналогичных кольцевых системах, таких как пиразольная кольцевая система, например, такой как тетрагидропиран-2-ильная группа, трет-бутоксикарбонильная группа, этоксикарбонильная группа, бензильная группа или замещенная бензильная группа, такая как 4-метоксибензильная группа или 2,5-диметоксибензильная группа.

Группа G4 в соединениях формул III, IV, VII, X, XI, XII, XIV и XV уже может быть искомой конечной сульфонамидной группой формулы Ar-S(O)₂-NH-, в которой Ar определен так, как в соединениях формулы I, и, кроме того, функциональные группы могут находиться в защищенной форме или в форме группы-предшественника, которую затем превращают в конечную группу. G4 также может означать группу, которую можно превратить в искомую конечную сульфонамидную группу формулы Ar-S(O)₂-NH- на подходящей стадии синтеза, например, в соединениях формул IV и X, такую как группа-предшественник, такую как нитрогруппа, которую можно восстановить в аминогруппу, или защищенную аминогруппу, такую как трет-бутоксикарбониламиногруппа или бензилоксикарбониламиногруппа, из которой путем удаления защитной группы можно получить аминогруппу, или свободную аминогруппу, и затем аминогруппу превращают в группу Ar-S(O)₂-NH- по реакции с сульфонилхлоридом формулы Ar-S(O)₂-Cl при стандартных условиях.

Группа G5 в соединениях формулы III представляет собой триалкилстаннильную группу, например, три((C₁-C₄)-алкил)станнильную группу или группу бороновой кислоты (-B(OH)₂), или группу эфира бороновой кислоты, или группу циклического эфира бороновой кислоты, например, группу -B(O-(C₁-C₄)-алкил)₂ или 4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ильную группу, предпочтительно группу бороновой кислоты или группу эфира бороновой кислоты, или группу циклического эфира бороновой кислоты, что позволяет провести реакцию типа Судзуки или реакцию типа Стилле сочетания соединений формул II, V, VIII и IX с соединениями формулы III.

Группа G6 в соединениях формулы XIII означает отщепляющуюся группу, такую как атом галогена, предпочтительно хлор, или алкилоксигруппу, предпочтительно (C₁-C₂)-алкилоксигруппу, такую как этоксигруппу или метоксигруппу. Соединения формулы XIII можно получить из соответствующих соединений, которые содержат гидроксигруппу вместо группы G6, галогенированием, например, путем обработки хлорирующим реагентом, таким как оксалилхлорид или оксихлорид фосфора, или алкилированием, например, путем обработки алкиловым эфиром трифторметансульфоновой кислоты, или, например, с помощью конденсации алкилового эфира цианоуксусной кислоты с орто-эфиром карбоновой кислоты.

Группа G7 в соединениях формулы XVI может совпадать с группой G1 в соединении формулы XVI или отличаться от нее и аналогичным образом означает отщепляющуюся группу, такую как атом галогена, предпочтительно хлор. Разная реакционная способность групп G1 и G7 позволяет провести селективную реакцию и в случае, когда они являются одинаковыми и, например, обе означают хлор.

Группа G8 в соединениях формулы XVII может означать водород в случае, если группа Z в соединении формулы XVII означает O, S или N(R10), и в таком случае группа Z заменяет группу G7 в соединении формулы XVI при нуклеофильном замещении или она может быть содержащей металл группой, такой как триалкилстаннильная группа, например, три((C₁-C₄)-алкил)станнильная группа, или магнийгалогенидной группой ClMg или BrMg, и тогда соединение формулы XVII представляет собой соединение Гриньяра, или содержащей литий и тогда соединение формулы XVII представляет собой литийорганическое соединение, например, в случае, если группа Z в соединении формулы XVII означает непосредственную связь и R3 отличается от водорода.

Для синтеза соединений формулы I также можно использовать исходные соединения и промежуточные продукты, полученные и/или использующиеся, в форме солей, например, солей присоединения с кислотами в случае основных соединений. Промежуточные продукты также могут находиться в другой таутомерной форме, например, в случае соединений формул II или IX, в которых G3 означает водород, которые могут находиться в форме соответствующих производных 2H-пиразоло[3,4-d]пиримидина или 2H-пиразоло[4,3-c]пиридина, в которых подвижный атом водорода, который в соединении формулы II связан с кольцевым атомом азота в положении 1 пиразоло[3,4-d]пиримидиновой или пиразоло[4,3-c]пиридиновой кольцевой системы, связан с кольцевым атомом азота в положении 2 пиразоло[3,4-d]пиримидиновой или пиразоло[4,3-c]пиридиновой кольцевой системы.

Реакцию соединений формул V, VII, VIII и XI с гидразином формулы VI обычно проводят в протонном или апротонном растворителе, таком как вода, спирт, такой как метанол, этанол, трифторэтанол, н-пропанол, изопропанол, бутанол, изобутанол, трет-бутанол, 2-метилбутан-2-ол, 3-метил-3-пентанол, 3-этил-3-пентанол, углеводород, такой как бензол, толуол, ксилол, мезитилен, нитрил, такой как ацетонитрил, простой эфир, такой как тетрагидрофуран или диглим (ди(2-метоксиэтиловый) эфир), амид, такой как диметилформамид, N-метилпирролидинон, диметилацетамид, сульфоксид, такой как диметилсульфоксид, или амин, такой как пиридин, или в смеси растворителей при температурах, равных от примерно 20°C до примерно 200°C, например, при температурах, равных от примерно 80°C до примерно 120°C. Длительность проведения реакции обычно составляет от примерно 30 мин до примерно 48 ч, например, от примерно 5 ч до примерно 16 ч в зависимости от условий в конкретном случае и выбранного диапазона температуры. Вместо использования обычного нагревания реакцию также можно провести в микроволновой печи с использованием микроволнового излучения температурах, равных от примерно 60°C до примерно 200°C, например, температурах, равных от примерно 80°C до примерно 120°C. В таком случае длительность проведения реакции обычно составляет от примерно 5 мин до примерно 12 ч, например, от примерно 10 мин до примерно 3 ч в зависимости от условий в конкретном случае и выбранного диапазона температуры. Соединение формулы VI можно использовать в свободной форме, т.е. не в форме соли, например, в форме раствора в растворителе, таком как этанол или изопропанол, или в форме соли присоединения с кислотой, например, в форме соли с хлористоводородной кислотой. В случае использования соли ее можно превратить в свободную форму до прибавления к реакционной смеси или in situ, например, с помощью органического или неорганического основания, такого как амин, такой как триэтиламин, этилдиизопропиламин, N-метилморфолин или 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, алкоксид, такой как метоксид натрия, этоксид натрия, метоксид калия, трет-бутоксид калия, амид, такой как диизопропиламид лития или амид натрия, или карбонат щелочного металла, такой как, например, карбонат натрия, карбонат калия или карбонат цезия.

Реакция соединений формул II, V, VIII и IX с соединением формулы III, в которой G5 означает группу бороновой кислоты или группу эфира бороновой кислоты, или группу циклического эфира бороновой кислоты, представляет собой реакцию типа Судзуки и ее обычно проводят в присутствии в присутствии являющегося катализатором соединения палладия, например, соли палладия(II), такой как ацетат палладия(II) или хлорид палладия(II), которую можно использовать в присутствии фосфина, такого как 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен, трициклогексилфосфин или трифенилфосфин, или комплекса палладия, такого как тетракис(трифенилфосфин)палладий(0), 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроценпалладий(II)дихлорид, палладий(0)бис(три-трет-бутилфосфин) или бис(трифенилфосфин)палладий(II)дихлорид, и предпочтительно в присутствии основания, например, карбоната щелочного металла или фосфата щелочного металла, такого как карбонат цезия, карбонат натрия или трифосфат калия, в инертном растворителе, таком как углеводород, такой как бензол, толуол или ксилол, или в простом эфире, таком как (ТГФ), диоксан или 1,2-диметоксиэтан (ДМЭ), или в воде, или в смеси растворителей, при температурах, равных от примерно 20°C до примерно 200°C, например, при температурах, равных от примерно 80°C до примерно 120°C. Длительность проведения реакции обычно составляет от примерно 30 мин до примерно 48 ч, например, от 30 мин до примерно 16 ч в зависимости от условий в конкретном случае и выбранного диапазона температуры. За исключением случая использования воды в качестве растворителя, эти пояснения для реакций типа Судзуки в основном также относятся к реакциям с соединениями формулы III, в которой G5 означает триалкилстаннильную группу, т.е. к реакциям типа Стилле.

Реакция соединений формулы XII с соединениями формулы XIII с получением соединения формулы XIV является стандартной реакцией синтеза производных пиримидина и ее обычно проводят в присутствии основания, например, алкоксида щелочного металла, такого как этоксид натрия или гидроксида щелочного металла, такого как гидроксид натрия, в инертном растворителе, таком как спирт, такой как метанол или этанол, или в воде, при температурах, равных от примерно 20°C до примерно 100°C, в зависимости от условий в конкретном случае, таких как характеристики использующегося соединения формулы XIII. Превращение гидроксигруппы в соединении формулы XIV, которая также может находиться в таутомерной форме в виде оксогруппы, в отщепляющуюся группу G2 в соединении формулы XV, аналогичным образом является стандартной реакцией и ее можно провести, например, в случае, если G2 в соединении формулы XV означает хлор, путем обработки соединения формулы XIV хлорирующим реагентом, таким как оксихлорид фосфора, который обычно используют в избытке, и при кипячении с обратным холодильником, предпочтительно в присутствии третичного амина, такого как N,N-диметиланилин.

Условия проведения реакции соединений формулы XVI с соединениями формулы XVII с получением соединения формулы IV зависят от конкретного случая. Если используют соединение формулы XVII, в которой Z означает O, S или N(R10) и G8 означает водород, то реакцию с соединением формулы XVI предпочтительно проводят в присутствии основания, например, третичного амина, такого как этилдиизопропиламин или триэтиламин, или гидрида щелочного металла, такого как гидрид натрия или карбоната щелочного металла, такого как карбонат цезия, в инертном растворителе, таком как хлорированный углеводород, такой как дихлорметан, простой эфир, такой как ТГФ или нитрил, такой как ацетонитрил, или в избытке соединения формулы XVII при температурах, равных от примерно 0°C до примерно 60°C, например, при температурах, равных от примерно 20°C до примерно 40°C. Если используют соединение формулы XVII, в которой Z означает непосредственную связь, R3 отличается от водорода и G8 представляет собой содержащую металл группу, такую как триалкилстаннильная группа, или магнийгалогенидную группу и, таким образом, реакция с соединением формулы XVI представляет собой реакцию типа Стилле или реакцию типа Гриньяра соответственно, то реакцию можно провести при обычных для такого типа реакций условиях, например, в инертном растворителе, таком как углеводород или простой эфир в присутствии являющегося катализатором соединения палладия, указанного выше для реакции соединений формул II и III, в случае реакции типа Стилле, или в простом эфире, таком как ТГФ, при температурах, равных от примерно -80°C до примерно 40°C, в случае реакции типа Гриньяра.

Кроме того, для получения искомого соединения формулы I функциональные группы, вводимые в кольцевую систему при синтезе 1H-пиразоло[3,4-d]пиримидина или 1H-пиразоло[4,3-c]пиридина можно химически модифицировать с помощью различных реакций и таким образом получить необходимые группы. Например, соединение формулы I, содержащее атом водорода в положении 4, также можно получить омылением и последующим декарбоксилированием соответствующего соединения, содержащего сложноэфирную группу в этом положении. Атомы галогенов можно ввести, например, по хорошо известным методикам, описанным в литературе. Фторирование ароматических субструктур соединений формулы I можно провести с помощью различных реагентов, включая, например, N-фтор-2,4,6-триметилпиридинийтрифлат. Хлорирование, бромирование или йодирование можно провести по реакции с элементарными галогенами или, например, путем использования N-бромсукцинимида, N-хлорсукцинимида или N-йодсукцинимида и многих других реагентов, хорошо известных специалисту в данной области техники. С помощью селективного обмена галоген/металл или металирования путем селективного обмена водород/металл и последующей реакции с самыми различными электрофильными реагентами различные заместители можно ввести по общеизвестным методикам. Например, атомы галогенов, гидроксигруппы после превращения, например, в трифлат или нонафлат или первичные аминогруппы после превращения в соль диазония можно непосредственно или после превращения в соответствующий станнан или бороновую кислоту или эфир бороновой кислоты превратить в самые различные другие группы, такие как, например, -CN, -CF₃, -C₂F₅ и простая эфирная, карбоксигруппа, амидная, аминогруппа, алкильная или арильная группы. Для такого превращения также с успехом можно использовать реакции, катализируемые переходными металлами, такими как палладиевые или никелевые катализаторы или соли меди, как это описано, например, в публикациях Diederich, F. et al., Metal-catalyzed Cross-coupling Reactions, Wiley-VCH, 1998; Beller, M. et al., Transition Metals for Organic Synthesis, Wiley-VCH, 1998; Tsuji, J., Palladium Reagents and Catalysts, Wiley, 1996; Hartwig, J., Angew. Chem. 1998, 110, 2154; Farina, V. et al., The Stille Reaction, Wiley, 1994; Buchwald, S. et al. J. Am. Chem. Soc. 2001, 123, 7727; Buchwald, S. et al., Organic Lett. 2002, 4, 581; Netherton, M.R. et al., Topics in Organometallic Chemistry 2005, 14, 85-108; Littke, A.F. et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2002, 41, 4176-4211; Muci, A.R. et al., Topics in Current Chemistry 2002, 219, 131-209. Нитрогруппы можно восстановить в аминогруппы с помощью различных восстановительных реагентов, таких как сульфиды, дитиониты, комплексные гидриды, или с помощью каталитического гидрирования. Восстановление нитрогруппы также можно провести одновременно с реакцией, проводимой с другой функциональной группой, например, реакцией группы, такой как цианогруппа, с сульфидом водорода или при гидрировании группы. Аминогруппы, включая аминогруппу, представляющую собой R1, можно модифицировать по стандартным методикам, например, алкилировать по реакции с необязательно замещенными алкилгалогенидами, такими как хлориды, бромиды или йодиды, или сульфонилоксисоединениями, такими как тозилокси-, мезилокси- или трифторметилсульфонилоксисоединения, предпочтительно в присутствии основания, такого как карбонат калия, карбонат цезия, гидрид натрия или трет-бутоксид калия, или с помощью восстановительного аминирования карбонильных соединений, или ацилировать по реакции с активированными производными карбоновых кислот, такими как хлорангидрид кислоты, ангидриды, активированные эфиры или другие, или по реакции с карбоновыми кислотами в присутствии активирующего реагента, или сульфировать по реакции с сульфонилхлоридами. Сложноэфирные группы можно гидролизовать с получением соответствующих карбоновых кислот, которые после активации можно ввести в реакцию с аминами при стандартных условиях. Кроме того, сложноэфирные или карбоксигруппы можно восстановить с получением соответствующих спиртов по многим стандартным методикам и полученные гидроксисоединения алкилировать. Простые эфирные группы, например, бензилоксигруппы или другие легко расщепляющиеся простые эфирные группы, можно расщепить и получить гидроксигруппы, которые затем можно ввести в реакцию с различными реагентами, например, этерифицирующими реагентами или активирующими реагентами, что позволяет заменить гидроксигруппу на другие группы. Гидроксигруппу также можно превратить в отщепляющуюся группу и ввести в реакцию с различными компонентами реакции при хорошо известных условиях проведения реакции Мицунобу (Mitsunobu, O., Synthesis 1981, 1) или по другим методикам, известным специалисту в данной области техники.

Указанные реакции превращения функциональных групп в целом подробно описаны в учебниках по органической химии, таких как, например, M. Smith, J. March, March's Advanced Organic Chemistry, Wiley-VCH, 2001, и в Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie (Methods of Organic Chemistry), Georg Thieme Verlag, Stuttgart, Germany; Organic Reactions, John Wiley & Sons, New York; R. C. Larock, Comprehensive Organic Transformations, Wiley-VCH, 2^nd ed (1999); B. Trost, I. Fleming (eds.), Comprehensive Organic Synthesis, Pergamon,1991; A. Katritzky, C. Rees, E. Scriven, Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, Elsevier Science, 1996; где подробно описано проведение реакций и указаны первоисточники. Поскольку в настоящем случае в пиразоло[3,4-d]пиримидинах или пиразоло[4,3-c]пиридинах содержатся функциональные группы, в некоторых случаях может потребоваться специальное изменение условий проведения реакции или выбор особых реагентов из числа различных реагентов, которые, в принципе, можно использовать в реакции превращения, или принять другие особые меры для обеспечения необходимого превращения, например, использовать методику применения защитных групп, которую обычно используют и которая известна специалисту в данной области техники.

Во время получения соединений формулы I для уменьшения протекания или предупреждения нежелательных реакций или побочных реакций на соответствующих стадиях синтеза обычно предпочтительно или необходимо временно блокировать функциональные группы с помощью защитных групп, подходящих для конкретных задач синтеза, или содержать их, или вводить их в виде групп-предшественников и позднее превращать их в необходимые функциональные группы. Такие стратегии хорошо известны специалисту в данной области техники и описаны, например, в публикациях Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, 1991, или P. Kocienski, Protecting Groups, Thieme 1994. Примерами групп-предшественников являются цианогруппы и нитрогруппы. На последующей стадии цианогруппу с помощью гидролиза можно превратить в производные карбоновой кислоты или с помощью восстановления в аминометильные группы. Нитрогруппы с помощью восстановления, такого как каталитическое гидрирование, можно превратить в аминогруппы. Примерами защитных групп, которые можно отметить, являются бензильные защитные группы, например, бензиловые эфиры гидроксисоединений и бензиловые эфиры карбоновых кислот, из которых бензильную группу можно удалить с помощью каталитического гидрирования в присутствии палладиевого катализатора, трет-бутильные защитные группы, например, трет-бутиловые эфиры карбоновых кислот, из которых трет-бутильную группу можно удалить путем обработки трифторуксусной кислотой, ацильные защитные группы, например, сложные эфиры и амиды гидроксисоединений и аминов, которые можно повторно расщепить с помощью кислотного или щелочного гидролиза, или алкоксикарбонильные защитные группы, например, трет-бутоксикарбонильные производные аминов, которые можно повторно расщепить путем обработки трифторуксусной кислотой. Соединения формулы I также можно получить по твердофазной методике. В таком синтетическом подходе твердую фазу также можно рассматривать в качестве защитной группы и отщепление от твердой фазы как удаление защитной группы. Применение таких методик известно специалисту в данной области техники (см. Burgess, K. (Ed.), Solid Phase Organic Synthesis, New York, Wiley, 2000). Например, гидроксигруппу фенола можно связать с тритил-полистирольной смолой, которая выступает в качестве защитной группы, и молекулу отщепляют от смолы путем обработки трифторуксусной кислотой или другой кислотой на последующей стадии синтеза.

Соответствующие подробные описания условий, использующихся в конкретном способе получения, включая растворитель, основание или кислоту, температуру, порядок добавления, молярные соотношения и другие параметры которые являются обычными и используются во всех реакциях при синтезе соединения формулы l, специалист в данной области техники выбирает стандартным образом с учетом характеристик исходных соединений и искомых соединений и других особенностей конкретного случая. Как также известно специалисту в данной области техники, не все способы, описанные в настоящем изобретении, в одинаковой степени могут быть применимы для получения всех соединений формулы I и их промежуточных продуктов и необходимо вносить изменения. Во всех способах получения соединений формулы I обработку реакционной смеси и очистку продукта проводят по стандартным методикам, известным специалисту в данной области техники, которые включают, например, остановку реакции водой, регулирование некоторых значений pH, осаждение, экстракцию, сушку, концентрирование, кристаллизацию, перегонку и хроматографию. В качестве дополнительных примеров методик, применимых для синтеза соединений формулы I, например, можно отметить обработку микроволновым излучением для ускорения, облегчения протекания или обеспечения возможности протекания реакций, как это описано в публикации P. Lidstrom, J. Tierney, B. Wathey, J. Westman, Tetrahedron, 57 (2001), 9225, и современные методики разделения, такие как препаративная высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), которую можно использовать для разделения смесей изомеров положения, которые могут образовываться в любых реакциях. Для характеризации продуктов также используют обычные методики, такие как ЯМР, ИК и масс-спектроскопия.

Другим объектом настоящего изобретения являются новые исходные соединения и промежуточные продукты, образующиеся при синтезе соединений формулы I, включая соединения формул II - XVII, в которых группы X, Z, R1 - R3, G1 - G8 и число n являются такими, как определено выше, в любых из их стереоизомерных форм или смеси стереоизомерных форм в любом соотношении и их соли, и их применение в качестве промежуточных продуктов для синтеза или исходных соединений. Все общие пояснения, описания вариантов осуществления и определения чисел и групп, приведенные выше применительно к соединениям формулы I, соответственно применимы к указанным промежуточным продуктам и исходным соединениям. Объектом настоящего изобретения являются, в частности, новые особые исходные соединения и промежуточные продукты, описанные в настоящем изобретении. Независимо от того, описаны ли они, как свободные соединения и/или как конкретная соль, они являются объектом настоящего изобретения и в форме свободных соединений, и в форме их солей, и, если описана конкретная соль, дополнительно в форме этой конкретной соли.

Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, являются ингибиторами SGK, которые способны ингибировать чрезмерную или неподходящую активность SGK при патологических состояниях и поэтому являются подходящими для профилактики и терапии заболеваний, указанных выше и ниже. В частности, они являются высокоактивными ингибиторами фермента SGK-1. Они являются селективными ингибиторами SGK-1, поскольку они существенно не ингибируют и не промотируют активность других ферментов и рецепторов, активация или ингибирование которых нежелательны. Активность соединений формулы I можно определить, например, с помощью исследований, описанных ниже, или других исследований in vitro, ex vivo или in vivo, известных специалисту в данной области техники. Например, возможность соединений ингибировать фермент SGK можно определить по методикам, сходным с описанными в публикации D. Perrin et al., Expert Opin. Drug Discov. (2010) 5, 51-63, и по методикам, описанным ниже. По ингибирующей активности по отношению к SGK-1 в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям, которые характеризуются значением IC₅₀, составляющим <1 мкМ, в другом варианте осуществления составляющим <0,1 мкМ, в другом варианте осуществления составляющим <0,01 мкМ, что характеризует ингибирование SGK-1, определенное с помощью исследования, описанного ниже, и которая в другом варианте осуществления на оказывает значительного влияния на активность других ферментов и рецепторов, ингибирование или активация которых нежелательна. Способность соединений ингибировать опосредуемое с помощью SGK-1 фосфорилирование гликогенсинтазыкиназы 3beta (GSK3beta) в клеточной системе можно определить по методикам, сходным с описанными в публикации Sakoda, H. et al., Differing Roles of Akt and Serum- and Glucocorticoid-regulated Kinase in Glucose Metabolism, DNA Synthesis, and Oncogenic Activity, J. Biol. Chem. 2003, 278, 25802-25807, и по методике, описанной ниже. Способность соединений ингибировать зависимую от SGK1 активацию потоков эпителиального Na⁺ канала (ENaC) в монослоях клеток можно определить по методикам, сходным с описанными в публикациях Alvarez de la Rosa, D. et al., Role of SGK in hormonal regulation of epithelial sodium channel in A6 cells, Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2003, 284, C404-C414; Alvarez de la Rosa, D. et al.; Mechanisms of Regulation of Epithelial Sodium Channel by SGK1 in A6 Cells, J. Gen. Physiol. 2004, 124, 395-407, и с помощью исследования, описанного ниже. Неподходящая активность SGK-1, упомянутая в настоящем изобретении, представляет собой любую активность SGK-1, которая отличается от ожидаемой нормальной активности SGK-1. Неподходящая активность SGK-1 может проявиться в виде, например, аномального увеличения активности или отклонения зависимости от времени и/или регулирования активности SGK-1. Такая неподходящая активность может быть обусловлена, например, сверхэкспрессированием или мутацией протеинкиназы, приводящим к неподходящей или нерегулируемой активации. В качестве ингибиторов SGK-1 соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли обычно являются подходящими для профилактики и/или терапии патологических состояний, при которых играет роль или проявляется в нежелательной степени неподходящая активность фермента SGK-1, или на которые можно благоприятно повлиять путем ингибирования фермента SGK-1 или уменьшения его активности, или для предупреждения, смягчения или излечивания которого для врача желательно ингибирование SGK-1 или уменьшение его активности.

Благодаря их фармакологическим характеристикам соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, являются подходящими для лечения всех нарушений, в прогрессировании которых участвует повышенная активность фермента SGK, включая, например, показания, описанные во введении. Настоящее изобретение, в частности, относится к применению соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для лечения дегенеративных нарушений суставов и дегенеративных изменений хряща, включая остеоартрит, остеоартроз, ревматоидный артрит, спондилез, хондролиз после травмы сустава и длительной иммобилизации сустава после поражений мениска или коленной чашечки или разрывов связок, нарушений соединительной ткани, таких как коллагенозы, периодонтальных нарушений, нарушений заживления ран, диабета, включая сахарный диабет, диабетическую нефропатию, диабетическую невропатию, диабетическую ангиопатию и микроангиопатию, ожирения, метаболического синдрома (дислипидемии), системной и легочной гипертензии, инфарктов головного мозга, сердечно-сосудистых заболеваний, включая фиброз сердца после инфаркта миокарда, гипертрофии сердца и сердечной недостаточности, артериосклероза, заболеваний почек, включая гломерулосклероз, нефросклероз, нефрит, нефропатию и нарушение выведения электролита, любого типа фиброза и воспалительных процессов, включая цирроз печени, фиброз легких, фиброзирующий панкреатит, ревматизм, артрит, подагру, болезнь Крона, хронический бронхит, лучевой фиброз, склеродерматит, муковисцидоз, образование рубцов, болезнь Альцгеймера, боли, включая острую боль, такую как боль после травм, послеоперационную боль, боль в связи с острым приступом подагры и острую боль после операций челюстной кости, и хроническую боль, такую как боль, связанная с хроническими скелетно-мышечными заболеваниями, боль в спине, боль, связанная с остеоартритом или ревматоидным артритом, боль, связанная с воспалением, боль после ампутации, боль, связанная с рассеянным склерозом, боль, связанная с невритом, боль, связанная с карциномами и саркомами, боль, связанная со СПИД, боль, связанная с химиотерапией, невралгия тройничного нерва, головная боль, мигрень, цефалгия, невропатические боли, невралгия после опоясывающего герпеса, хронических нарушений опорно-двигательного аппарата, таких как воспалительно, иммунологически или метаболически обусловленные острые и хронические артритиды, артропатии, миалгии и нарушения метаболизма костей, пептических язв, в особенности в формах, которые вызваны стрессом, шума в ушах, бактериальных инфекций, глаукомы, катаракт, коагулопатий, включая дисфибриногенемию, гипопроконвертинемию, гемофилию B, болезнь Стюарта-Прауэра, дефицит протромбинового комплекса, коагулопатию потребления, фибринолиз, иммунокоагулопатию или сложные коагулопатии, и к применению при терапии опухоли, включая подавление роста опухолевых клеток и метастазов опухоли, применение в потивоинфекционной терапии, применение для улучшения способности к обучению и внимания, применение для противодействия старению клеток и стрессам и тем самым увеличения вероятной продолжительности жизни и состояния здоровья в старости, и применение в состояниях нейронной возбудимости, включая эпилепсию и прогрессирующую миоклоническую эпилепсию типа Лафоры (болезнь Лафоры). Лечение заболеваний в настоящем изобретении обычно следует понимать, как включающее и терапию имеющихся патологических изменений или нарушений функций организма, или имеющихся симптомов с целью ослабления, смягчения или излечивания, и профилактику или предупреждение патологических изменений или нарушений функций организма, или симптомов у людей или животных, которые восприимчивы к ним и нуждаются в такой профилактике или предупреждении, с целью предупреждения или подавления их возникновения или ослабления в случае их возникновения. Например, у пациентов, которые вследствие своего анамнеза подвержены инфаркту миокарда, с помощью профилактического или предупредительного лекарственного лечения можно предупредить возникновение или повторное возникновение инфаркта миокарда или уменьшить его тяжесть и осложнения. В одном варианте осуществления настоящего изобретения лечение заболеваний представляет собой терапию имеющихся патологических изменений или нарушений функций, в другом варианте осуществления оно представляет собой профилактику или предупреждение патологических изменений или нарушений функций. Лечение заболеваний можно проводить и в острых случаях, и в хронических случаях.

Поэтому соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли можно применять для животных, предпочтительно млекопитающих и в особенности людей в качестве лекарственного средства или лекарственного препарата по отдельности, в смесях друг с другом или в форме фармацевтических композиций. Объектом настоящего изобретения также являются соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли, предназначенные для применения в качестве лекарственного средства. Объектом настоящего изобретения также являются фармацевтические композиции и лекарственные средства, которые содержат по меньшей мере одно соединение формулы I и/или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента в дозе, эффективной для предназначенного применения, и фармацевтически приемлемый носитель, т.е. один или большее количество фармацевтически нетоксичных или неопасных разбавителей и/или инертных наполнителей и необязательно одно или большее количество других фармацевтически активных соединений.

Объектом настоящего изобретения также являются соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли, предназначенные для применения для лечения заболеваний, указанных выше или ниже, включая лечение любого из указанных заболеваний, например, лечение дегенеративных нарушений суставов, дегенеративных изменений хряща, диабета, сердечно-сосудистых заболеваний, фиброза, воспалительных процессов, эпилепсии, боли, опухолей или инфарктов головного мозга, где лечение заболеваний включает их терапию и профилактику, как отмечено выше, или для применения в качестве ингибитора сывороточной и регулируемой глюкокортикоидами киназы (SGK). Объектом настоящего изобретения также является применение соединений формулы I и их фармацевтически приемлемых солей для приготовления лекарственного средства для лечения заболеваний, указанных выше или ниже, включая лечение любого из указанных заболеваний, например, лечение дегенеративных нарушений суставов, дегенеративных изменений хряща, диабета, сердечно-сосудистых заболеваний, фиброза, воспалительных процессов, эпилепсии, боли, опухолей или инфарктов головного мозга, где лечение заболеваний включает их терапию и профилактику, как отмечено выше, или лекарственного средства для ингибирования сывороточной и регулируемой глюкокортикоидами киназы (SGK). Объектом настоящего изобретения также являются способы лечения заболеваний, указанных выше или ниже, включая лечение любого из указанных заболеваний, например, лечение дегенеративных нарушений суставов, дегенеративных изменений хряща, диабета, сердечно-сосудистых заболеваний, фиброза, воспалительных процессов, эпилепсии, боли, опухолей или инфарктов головного мозга, где лечение заболеваний включает их терапию и профилактику, как отмечено выше, и способ ингибирования сывороточной и регулируемой глюкокортикоидами киназы (SGK), который включает введение эффективного количества по меньшей мере одного соединения формулы I и/или его фармацевтически приемлемой соли человеку или животному, которое в нем нуждается.

Соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли, и содержащие их фармацевтические композиции и лекарственные средства можно вводить энтерально, например, путем перорального или ректального введения в виде пилюль, таблеток, таблеток с лаковым покрытием, таблеток с покрытием, гранул, капсул из твердого и мягкого желатина, растворов, сиропов, эмульсий, суспензий, смесей аэрозолей или суппозиториев, или парентерально. Парентеральное введение можно провести, например, внутривенно, внутрисуставно, внутрибрюшинно, внутримышечно или подкожно, в виде растворов для инъекции или растворов для вливания, микрокапсул, имплантатов или стержней, или подкожно, чрескожно или местно, например, в виде мазей, растворов или настоек, или другими путями, например, в виде аэрозолей или назальных спреев. Предпочтительная форма введения зависит от условий в конкретном случае.

Фармацевтические составы, предназначенные для чрескожного введения, можно использовать в виде пластырей для продолжительного непосредственного взаимодействия с наружным слоем кожи реципиента. Для местного введения можно использовать такие составы, как мази, кремы, суспензии, лосьоны, порошки, растворы, пасты, гели, спреи, аэрозоли или масла. Для лечения глаз или другой наружной ткани, например, рта и кожи, подходящими составами являются, например, мази или кремы для наружного применения. В случае мазей активный ингредиент можно использовать с парафиновой или смешивающейся с водой кремовой основой. Альтернативно, активный ингредиент можно приготовить в виде состава и получить крем с кремовой основной типа масло-в-воде или вода-в-масле. Фармацевтические составы, предназначенные для местного введения в глаза, включают глазные капли, в которых активный ингредиент растворен или суспендирован в подходящем носителе, предпочтительно в водном растворителе.

Фармацевтические композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, готовят по общеизвестной методике, известной специалисту в данной области техники, путем смешивания одного или большего количества фармацевтически приемлемых инертных неорганических и/или органических разбавителей и инертных наполнителей с одним или большим количеством соединений формулы I и/или их фармацевтически приемлемых солей и их приготовления в форме, подходящей для дозирования и введения, которую затем можно использовать в медицине или ветеринарии. Для приготовления пилюль, таблеток, таблеток с покрытием и капсул из твердого желатина можно использовать, например, лактозу, кукурузный крахмал или его производные, тальк, стеариновую кислоту или ее соли. Для приготовления капсул из желатина и суппозиториев можно использовать, например, жиры, воска, полужидкие и жидкие полиолы, природные или отвержденные масла. Для приготовления растворов, например, растворов для инъекций или эмульсий или сиропов, можно использовать, например, воду, физиологический раствор, спирты, глицерин, полиолы, сахарозу, инвертный сахар, глюкозу, растительные масла, и для приготовления микрокапсул, имплантатов или стержней можно использовать, например, сополимеры гликолевой кислоты и молочной кислоты. Фармацевтические композиции обычно содержат примерно от 0,5% до 90 мас.% соединений формулы I и/или их фармацевтически приемлемых солей. Количество активного ингредиента формулы I и/или его фармацевтически приемлемых солей в разовой дозе фармацевтических композиций обычно составляет от примерно 0,5 мг до примерно 1000 мг, предпочтительно от примерно 1 мг до примерно 500 мг. В зависимости от типа фармацевтической композиции и других условий в конкретном случае количество может отклоняться от указанных значений.

В дополнение к активным ингредиентам формулы I и/или их фармацевтически приемлемым солям и разбавителям или носителям фармацевтические композиции могут содержать инертные наполнители или вспомогательные вещества или добавки, такие как, например, наполнители, разрыхлители, связующие, смазывающие вещества, смачивающие агенты, стабилизаторы, эмульгаторы, консерванты, подсластители, красители, вкусовые добавки, ароматизаторы, загустители, разбавители, буферные вещества, растворители, солюбилизаторы, агенты для обеспечения эффекта депо, соли для изменения осмотического давления, агенты для образования покрытия или антиоксиданты. Они также могут содержать два или большее количество соединений формулы I и/или их фармацевтически приемлемых солей. В случае, если фармацевтическая композиция содержит два или большее количество соединений формулы I, выбору отдельных соединений может помочь конкретный общий фармакологический профиль фармацевтической композиции. Например, высокоактивное соединение, обладающее более кратковременной длительностью действия, можно объединить с соединением, обладающим длительным действием и меньшей активностью. Возможность подбора заместителей в соединениях формулы I позволяет в широком диапазоне регулировать биологические и физико-химические характеристики соединений и тем самым позволяет выбрать такие желательные соединения.

При использовании соединений формулы I дозу можно менять в широких пределах и, как это обычно известно врачу, ее в каждом случае следует подбирать в соответствии с состоянием индивидуума. Она зависит, например, от конкретного использующегося соединения, от типа и тяжести заболевания, подвергающегося лечению, от пути и режима введения или от того, подвергается ли лечению острое или хроническое патологическое состояние, или от того, проводят ли профилактику. Подходящую дозу можно установить с помощью клинических методик, известных специалисту в данной области техники. Обычно суточная доза, обеспечивающая желательные результаты для взрослого, обладающего массой, равной примерно 75 кг, составляет от примерно 0,01 мг/кг до примерно 100 мг/кг, предпочтительно от примерно 0,1 мг/кг до примерно 50 мг/кг, более предпочтительно от примерно 0,1 мг/кг до примерно 10 мг/кг, в каждом случае в миллиграммах в пересчете на килограмм массы тела. Суточную дозу можно разделить, в частности, в случае введения относительно больших количеств, на несколько, например, 2, 3 или 4, вводимых частей. Обычно в зависимости от реакции индивидуума может потребоваться увеличение или уменьшение указанной суточной дозы.

Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, также применимы в качестве стандартных или эталонных соединений, например, в качестве стандарта или контроля качества, в исследованиях или анализах, включающих ингибирование фермента SGK. Для такого применения, например, в фармацевтическом исследовании с участием фермента SGK, соединения можно использовать в виде имеющегося в продаже набора. Например, соединение, предлагаемое в настоящем изобретении, можно использовать в качестве эталона при анализе для его сопоставления, как обладающего известной активностью, с соединением с неизвестной активностью. Кроме того, соединения формулы I можно использовать для синтеза промежуточных продуктов для получения других соединений, в частности, других фармацевтически активных соединений, которые можно получить из соединений формулы I, например, путем введения заместителей или модификации функциональных групп.

Приведенные ниже примеры иллюстрируют настоящее изобретение.

Примеры

Когда на конечной стадии синтеза соединения примера использовали кислоту, такую как трифторуксусная кислота или уксусная кислота, например, когда трифторуксусную кислоту использовали для удаления нестойкой по отношению к кислоте защитной группы, содержащей трет-бутильную группу, или когда соединение очищали с помощью хроматографии с использованием элюента, который содержал такую кислоту, что обычно для очистки с помощью ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография) на колонках с обращенной фазой, в некоторых случаях в зависимости от процедуры обработки, например, особенностей проведения сушки вымораживанием, соединение частично или полностью получали в форме соли использующейся кислоты, например, в форме соли с уксусной кислотой или соли с трифторуксусной кислотой. В названиях соединений примеров и структурных формулах такая содержащаяся трифторуксусная кислота или уксусная кислота не указана. Аналогичным образом, в названиях и формулах не указан кислотный компонент других солей присоединения с кислотами, таких как, например, гидрохлориды, в форме в которой частично выделены соединения прмеров.

Полученные соединения обычно характеризовали с помощью спектроскопических данных и хроматографических данных, в частности, с помощью масс-спектров (МС) и/или спектров ядерного магнитного резонанса (ЯМР). ¹H-ЯМР спектры обычно регистрировали при 400 МГц. При исследовании с помощью ЯМР для пиков приведены химический сдвиг δ (в част./млн), количество атомов водорода (H), константа спин-спинового взаимодействия J (в Гц) и мультиплетность (s: синглет, d: дублет, dd: двойной дублет, t: триплет, dt: двойной триплет, m: мультиплет; br: широкий). При исследовании с помощью МС приведены массовое число (m/e) пика молекулярного иона (M) или родственного иона, такого как ион (M+1), т.е. протонированного молекулярного иона (M+H), или иона (M-1), который образовался в соответствии с использованной методикой ионизации. Обычно методикой ионизации являлась ионизация электрораспылением (ES+ или ES-).

Аббревиатуры

БДФП 1,1'-Бис(дифенилфосфино)ферроценпалладий(II)дихлорид (Pd(dppf)₂Cl₂)

ДХМ Дихлорметан ДИОКС [1,4]Диоксан ДМФ N,N-Диметилформамид ДМСО Диметилсульфоксид EtOAc Этилацетат Hep н-Гептан iPrOH Изопропанол MeCN Ацетонитрил КТ Комнатная температура (от 20°C до 25°C) ТФК Трифторуксусная кислота ТГФ Тетрагидрофуран

Пример 1: 2,5-Дихлор-N-[4-(3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-бензолсульфонамид

(i) 2,5-Дихлор-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенил]-бензолсульфонамид

2,5-Дихлорбензолсульфонилхлорид (11,7 г) и 4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фениламин (10,0 г) добавляли в сосуд для проведения реакции, содержащий стержень для магнитной мешалки, затем 200 мл сухого ДХМ и 4,1 мл пиридин. Реакционную смесь перемешивали при КТ в течение 20 ч, затем охлаждали в бане со льдом и реакцию останавливали 1M водным раствором гидроксида натрия. Органическую фазу отделяли и водную фазу подкисляли 2M водным раствором хлористоводородной кислоты и трижды экстрагировали с помощью EtOAc. Объединенные органические фазы промывали рассолом и сушили над сульфатом натрия и выпаривали и получали неочищенный продукт. Очистка с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием смеси EtOAc и Hep в качестве элюента давало 2,5-дихлор-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенил]-бензолсульфонамид в виде бесцветного твердого вещества после выпаривания растворителей при пониженном давлении. Выход: 13,67 г (70%).

МС (ES-): m/e=426,2 (M-H), данные для содержащего хлор фрагмента.

(ii) 2,5-Дихлор-N-[4-(3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-бензолсульфонамид

2,5-Дихлор-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенил]-бензолсульфонамид (514 мг) добавляли в сосуд для проведения реакции, содержащий стержень для магнитной мешалки, вместе с 6-хлор-3-метил-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидином (303 мг) (получали из 6-хлор-3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидина (WO 2005/121107) по методике, аналогичной описанной в примере 3 (i)), БДФП (70 мг) и карбонатом цезия (1,17 г), затем 12 мл ДИОКС и 2 мл воды и смесь при перемешивании нагревали при 100°C. Через 3 ч реакционную смесь охлаждали до КТ и реакцию останавливали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (100 мл) и экстрагировали с помощью EtOAc (3×200 мл). Объединенные водные фазы сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали и получали неочищенный продукт в виде коричневого масла. Неочищенный продукт растворяли в смеси 4M HCl с ДИОКС (6 мл) и iPrOH (6 мл) и перемешивали в течение 2 ч при КТ, затем растворитель выпаривали. Неочищенный продукт очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистый 2,5-дихлор-N-[4-(3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-бензолсульфонамид. Выход: 83 мг (16%).

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=2,55 (с, 3H), 7,27 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,69 (д, J=8,5 Гц, 1H), 7,74 (дд, J=2,5, 8,5 Гц, 1H), 8,07 (д, J=2,5 Гц, 1H), 8,34 (д, J=8,8 Гц, 2H), 9,31 (с, 1H), 11,12 (с, 1H), 13,56 (с, 1H).

МС (ES+): m/e=434,1 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 2: 2,5-Дихлор-N-[4-(4-морфолин-4-ил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-бензолсульфонамид

(i) 6-Хлор-4-морфолин-4-ил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин

Морфолин (1,19 мл) при КТ добавляли в сосуд для проведения реакции, содержащий стержень для магнитной мешалки и содержащий раствор имеющегося в продаже 4,6-дихлор-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидина (2,46 г) в ДХМ (100 мл) и триэтиламина (3,61 мл). Реакционную смесь перемешивали при КТ в течение 2 ч и за это время образовывался белый осадок и затем выпаривали досуха. Остаток перемешивали в воде (100 мл) в течение 1 ч, фильтровали и твердое вещество промывали водой и сушили в вакууме и получали 2,84 г 6-хлор-4-морфолин-4-ил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидина в виде бесцветного твердого вещества (91%).

МС (ES+): m/e=240,1 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

(ii) 6-Хлор-4-морфолин-4-ил-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин

6-Хлор-4-морфолин-4-ил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин (1,2 г) растворяли в ТГФ (30 мл), затем при КТ добавляли 3,4-дигидро-2H-пиран (2,29 мл) и пиридиний-4-толуолсульфонат (63 мг). Реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 3 ч и давали охладиться и затем выпаривали летучие вещества. Остаток растворяли в ДХМ (80 мл) и промывали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (3×50 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали и получали 6-хлор-4-морфолин-4-ил-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин с количественным выходом.

МС (ES+): m/e=324,1 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

(iii) 2,5-Дихлор-N-[4-(4-морфолин-4-ил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-бензолсульфонамид

2,5-Дихлор-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенил]-бензолсульфонамид (343 мг) добавляли в сосуд для проведения реакции, содержащий стержень для магнитной мешалки, вместе с 6-хлор-4-морфолин-4-ил-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидином (259 мг), БДФП (47 мг) и карбонатом цезия (782 мг), затем добавляли 8 мл ДИОКС и 2 мл воды и смесь при перемешивании нагревали при 100°C. Через 3 ч реакционную смесь охлаждали до КТ и реакцию останавливали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (100 мл) и экстрагировали с помощью EtOAc (3×200 мл). Объединенные водные фазы сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали и получали неочищенный продукт в виде коричневого масла. Неочищенный продукт растворяли в смеси 4M HCl с ДИОКС (6 мл) и iPrOH (6 мл) и перемешивали в течение 2 ч при КТ, затем растворитель выпаривали. Неочищенный продукт очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистый 2,5-дихлор-N-[4-(4-морфолин-4-ил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-бензолсульфонамид. Выход: 163 мг (40%).

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=3,76-3,79 (м, 2H), 4,00 (шир., 2H), 7,24 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,69 (д, J=8,6 Гц, 1H), 7,74 (дд, J=2,5, 8,6 Гц, 1H), 8,06 (д, J=2,5 Гц, 1H), 8,26 (д, J=8,8 Гц, 2H), 8,39 (шир., 1H), 11,12 (шир.с, 1H).

МС (ES+): m/e=505,3 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 3: 5-Хлор-2-фтор-N-{4-[4-(4-гидроксициклогексилокси)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-бензолсульфонамид

(i) 4,6-Дихлор-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин

Имеющийся в продаже 4,6-дихлор-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин (30 г) растворяли в ТГФ (400 мл) в сосуде для проведения реакции, содержащем стержень для магнитной мешалки, затем при КТ добавляли 3,4-дигидро-2H-пиран (72,5 мл) и пиридиний-4-толуолсульфонат (1,99 г). Реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 2 ч и ей давали охладиться и затем выпаривали летучие вещества. Остаток растворяли в EtOAc (200 мл) и промывали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (3×100 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали и получали 4,6-дихлор-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин с количественным выходом.

(ii) 4-[6-Хлор-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-илокси]-циклогексанол

1,4-Циклогександиол (1,91 г, цис-транс смесь) растворяли в 25 мл сухого ТГФ в сосуде для проведения реакции, содержащем стержень для магнитной мешалки, в атмосфере аргона и смесь охлаждали в бане со льдом. Затем добавляли гидрид натрия (132 мг, 60% суспензия в минеральном масле) и смесь перемешивали в бане со льдом в течение примерно 30 мин, затем добавляли 4,6-дихлор-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин (948 мг), растворенный в 10 мл ТГФ. Баню со льдом удаляли и смесь перемешивали при КТ до полного превращения исходного вещества, за которым следили с помощью ВЭЖХ/МС. Затем реакцию останавливали водой (50 мл) и экстрагировали с помощью EtOAc (3×100 мл) и объединенные органические фазы сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали. Неочищенный продукт очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием смеси EtOAc и Hep в качестве элюента и после выпаривания получали 4-[6-хлор-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-илокси]-циклогексанол в виде бесцветного масла. Выход: 755 мг (65%).

МС (ES+): m/e=353,0 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

(iii) 5-Хлор-2-фтор-N-{4-[4-(4-гидроксициклогексилокси)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-бензолсульфонамид

5-Хлор-2-фтор-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан -2-ил)-фенил]-бензолсульфонамид (205 мг) добавляли в сосуд для проведения реакции, содержащий стержень для магнитной мешалки, вместе с 4-[6-хлор-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-илокси]-циклогексанолом (177 мг), БДФП (29 мг) и карбонатом цезия (489 мг), затем добавляли 5 мл ДИОКС и 1 мл воды и смесь при перемешивании нагревали при 100°C. Через 3 ч реакционную смесь охлаждали до КТ и реакцию останавливали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (50 мл) и экстрагировали с помощью EtOAc (3×75 мл). Объединенные водные фазы сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали и получали неочищенный продукт в виде коричневого масла. Неочищенный продукт растворяли в смеси 4M HCl с ДИОКС (6 мл) и iPrOH (6 мл) и перемешивали в течение 2 ч при КТ, затем растворитель выпаривали. Неочищенный продукт очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистый 5-хлор-2-фтор-N-{4-[4-(4-гидроксициклогексилокси)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-бензолсульфонамид. Выход: 49 мг (19%).

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=1,39-2,20 (м, 8H), 3,55-3,63 (м, 0,67H), 3,66-3,72 (м, 0,33H), 4,55 (шир., 0,33H), 4,63 (шир., 0,67H), 5,40-5,48 (м, 0,67H), 5,50-5,55 (м, 0,33H), 7,26-7,31 (м, 2H), 7,49-7,54 (м, 1H), 7,77-7,81 (м, 1H), 7,86-7,89 (м, 1H), 8,11 (шир.с, 0,67H), 8,14 (шир.с, 0,33H), 8,29-8,34 (м, 2H), 11,10 (шир.с, 0,33H), 11,11 (шир.с, 0,67H), 13,86 (шир.с, 1H).

МС (ES+): m/e=518,1 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 4: 2-Циано-N-{4-[4-(4-гидроксициклогексилокси)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-5-метилбензолсульфонамид

(i) 4-[6-(4-Аминофенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-илокси]-циклогексанол

4-[6-Хлор-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-илокси]-циклогексанол (2,0 г) (пример 3, стадия (ii)) добавляли в сосуд для проведения реакции, содержащий стержень для магнитной мешалки, вместе с 4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фениламином (1,24 г), БДФП (331 мг) и карбонатом цезия (5,5 г), затем добавляли 50 мл ДИОКС и 5 мл воды, и смесь при перемешивании нагревали при 100°C. Через 1 ч реакционную смесь охлаждали до КТ и реакцию останавливали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (50 мл) и экстрагировали с помощью EtOAc (3×75 мл). Объединенные водные фазы сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали и получали неочищенный продукт в виде коричневого масла. Неочищенный продукт очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием смеси EtOAc и Hep в качестве элюента и получали 4-[6-(4-аминофенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-илокси]-циклогексанол в виде коричневого вспененного вещества. Выход: 1,1 г (47%).

МС (ES+): m/e=410,2 (M+H).

(ii) 2-Циано-N-{4-[4-(4-гидроксициклогексилокси)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-5-метилбензолсульфонамид

4-[6-(4-Аминофенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-илокси]-циклогексанол (280 мг) растворяли в пиридине (3 мл) и добавляли 2-циано-5-метилбензолсульфонилхлорид (147 мг) и смесь нагревали при 100°C в течение 1 ч и ей давали охладиться и затем выпаривали летучие вещества. Неочищенный продукт очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистый 2-циано-N-{4-[4-(4-гидроксициклогексилокси)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-5-метилбензолсульфонамид. Выход: 166,7 мг (48%).

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=1,39-1,50 (м, 2H), 1,55-1,66 (м, 2H), 1,87-1,95 (м, 2H), 2,11-2,20 (м, 2H), 3,56-3,62 (м, 1H), 5,41-5,47 (м, 1H), 7,27 (д, J=8,7 Гц, 2H), 7,64 (д, J=7,8 Гц, 1H), 7,97 (д, J=7,8 Гц, 1H), 7,97 (с, 1H), 8,12 (с, 1H), 8,30 (д, J=8,7 Гц, 2H), 11,13 (с, 1H), 13,87 (шир.с, 1H).

МС (ES+): m/e=505,2 (M+H).

Пример 5: 2,5-Дихлор-N-[4-(4-пиридин-3-ил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-бензолсульфонамид

(i) 6-Хлор-4-пиридин-3-ил-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин

В сосуде для проведения реакции, содержащем стержень для магнитной мешалки, 4,6-дихлор-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин (1,0 г) (пример 3, стадия (i)) растворяли в сухом толуоле (50 мл) и затем добавляли хлорид лития (434 мг), тетракис(трифенилфосфин)палладий (338 мг) и 3-(трибутилстаннил)пиридин (1,17 мл). Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 20 ч, затем охлаждали до КТ и реакцию останавливали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (50 мл) и экстрагировали с помощью EtOAc (3×100 мл). Объединенные водные фазы сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали и получали неочищенный продукт, который очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием смеси EtOAc и Hep в качестве элюента и получали чистый 6-хлор-4-пиридин-3-ил-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин. Выход: 45 мг (4%).

МС (ES+): m/e=316,1 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

(ii) 2,5-Дихлор-N-[4-(4-пиридин-3-ил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-бензолсульфонамид

2,5-Дихлор-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенил]-бензолсульфонамид (67,1 мг) добавляли в сосуд для проведения реакции, содержащий стержень для магнитной мешалки, вместе с 6-хлор-4-пиридин-3-ил-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидином (45 мг), БДФП (8 мг) и карбонатом цезия (140 мг), затем добавляли 3 мл ДИОКС и 0,5 мл воды и смесь при перемешивании нагревали при 100°C. Через 20 ч реакционную смесь охлаждали до КТ и реакцию останавливали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (25 мл) и экстрагировали с помощью EtOAc (3×25 мл). Объединенные водные фазы сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали и получали неочищенный продукт в виде коричневого масла. Неочищенный продукт растворяли в смеси 4M HCl с ДИОКС (6 мл) и iPrOH (6 мл) и перемешивали в течение 2 ч при КТ, затем растворитель выпаривали. Неочищенный продукт очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистый 2,5-дихлор-N-[4-(4-пиридин-3-ил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-бензолсульфонамид. Выход: 15,7 мг (21%).

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=7,33 (д, J=8,9 Гц, 2H), 7,70 (д, J=8,5 Гц, 1H), 7,75 (дд, J=2,5, 8,5 Гц, 1H), 7,83-7,88 (м, 1H), 8,09 (д, J=2,5 Гц, 1H), 8,50 (д, J=8,9 Гц, 2H), 8,78 (с, 1H), 8,92 (д, J=5,0 Гц, 1H), 8,98 (д, J=7,8 Гц, 1H), 9,63 (д, J=2,0 Гц, 1H), 11,19 (с, 1H).

МС (ES-): m/e=495,3 (M-H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 6: 5-Хлор-2-фтор-N-[4-(4-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-бензолсульфонамид

(i) 6-Хлор-4-метил-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин

4,6-Дихлор-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин (1,0 г) (пример 3, стадия (i)) растворяли в сухом ТГФ (20 мл) в атмосфере аргона в сосуде для проведения реакции, содержащем стержень для магнитной мешалки. Раствор охлаждали в бане с твердым диоксидом углерода и ацетоном и шприцем медленно добавляли метилмагнийбромид (1,22 мл, 3M в диэтиловом эфире) и охлаждающую баню удаляли. При КТ наблюдали неполное превращение и добавляли еще эквивалент метилмагнийбромида (1,22 мл, 3M в диэтиловом эфире). Через 2 ч реакцию останавливали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (50 мл) и экстрагировали с помощью EtOAc (3×100 мл). Объединенные водные фазы сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали и получали 6-хлор-4-метил-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин. Выход: 920 мг (99%).

МС (ES+): m/e=253,1 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

(ii) 5-Хлор-2-фтор-N-[4-(4-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-бензолсульфонамид

5-Хлор-2-фтор-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенил]-бензолсульфонамид (325 мг) добавляли в сосуд для проведения реакции, содержащий стержень для магнитной мешалки, вместе с 6-хлор-4-метил-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидином (200 мг), БДФП (46 мг) и карбонатом цезия (773 мг), затем добавляли 6 мл ДИОКС и 1,0 мл воды и смесь при перемешивании нагревали при 100°C. Через 4 ч реакционную смесь охлаждали до КТ и реакцию останавливали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (35 мл) и экстрагировали с помощью EtOAc (3×75 мл). Объединенные водные фазы сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали и получали неочищенный продукт в виде коричневого масла. Неочищенный продукт растворяли в смеси 4M HCl с ДИОКС (6 мл) и iPrOH (6 мл) и перемешивали в течение 2 ч при КТ, затем растворитель выпаривали. Неочищенный продукт очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистый 5-хлор-2-фтор-N-[4-(4-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-бензолсульфонамид. Выход: 48,3 мг (15%).

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=2,98 (с, 3H), 7,29 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,51 (д, J=8,9 Гц, 1H), 7,76-7,81 (м, 1H), 7,88 (дд, J=2,5, 6,0 Гц, 1H), 8,35 (д, J=8,8 Гц, 2H), 8,40 (с, 1H), 11,11 (с, 1H), 13,56 (с, 1H).

МС (ES+): m/e=417,9 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 7: N-[4-(3-Амино-4-метокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2-фторбензолсульфонамид

(i) 6-Хлор-4-метокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин

К имеющемуся в продаже 4,6-дихлор-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидину (5,0 г), растворенному в сухом ТГФ (100 мл), добавляли карбонат цезия (17,2 г) и метанол (60 мл) и смесь нагревали при 60°C. Через 30 мин реакцию останавливали водой и трижды экстрагировали с помощью EtOAc. Объединенные органические фазы сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали и получали 6-хлор-4-метокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин в виде коричневого твердого вещества. Выход: 3,34 г (68%).

МС (ES+): m/e=185,0 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

(ii) 6-Хлор-3-йод-4-метокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин

К 6-хлор-4-метокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидину (2,45 г), растворенному в сухом ДМФ (60 мл), добавляли N-йодсукцинимид (3,45 г) и реакционную смесь при перемешивании нагревали при 80°C. Через 3 ч реакционную смесь охлаждали до КТ и ДМФ удаляли путем выпаривания в роторном испарителе. К остатку добавляли воду и затем его трижды экстрагировали трет-бутилметиловым эфиром. Объединенные органические фазы промывали водой и сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали и получали 6-хлор-3-йод-4-метокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин в виде коричневого твердого вещества. Выход: 4,13 г (100%).

МС (ES+): m/e=310,9 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

(iii) 6-Хлор-3-йод-4-метокси-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин

6-Хлор-3-йод-4-метокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин (4,1 г) растворяли в ТГФ (60 мл), в сосуде для проведения реакции, содержащем стержень для магнитной мешалки, затем при КТ добавляли 3,4-дигидро-2H-пиран (11,4 мл) и пиридиний 4-толуолсульфонат (170 мг). Реакционную смесь нагревали при 60°C в течение 3 ч и ей давали охладиться и затем выпаривали летучие вещества. Остаток растворяли в EtOAc (200 мл) и промывали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (3×100 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали и получали 6-хлор-3-йод-4-метокси-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин с количественным выходом.

МС (ES+): m/e=395,0 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

(iv) Бензгидрилиден-[6-хлор-4-метокси-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-ил]-амин

К смеси ацетата палладия (305 мг) и 9,9-диметил-4,5-бис(дифенилфосфино)ксантена (923 мг) в атмосфере аргона добавляли ДИОКС (40 мл) и бензофенонимин (2,98 г) и смесь нагревали при 100°C в течение 5 мин и затем охлаждали до КТ. Затем добавляли карбонат цезия (13,1 г) и 6-хлор-3-йод-4-метокси-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин (5,25 г) в 90 мл ДИОКС и реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали, выпаривали и разбавляли водой (400 мл) и трижды экстрагировали трет-бутилметиловым эфиром. Объединенные органические фазы промывали водой и сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали и получали неочищенный продукт, который очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием смеси EtOAc и Hep в качестве элюента и получали чистый бензгидрилиден-[6-хлор-4-метокси-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-ил]-амин. Выход: 3,23 г (54%).

МС (ES+): m/e=448,3 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

(v) N-{4-[3-(Бензгидрилиденамино)-4-метокси-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-5-хлор-2-фторбензолсульфонамид

В сосуд для проведения реакции, содержащий 5-хлор-2-фтор-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенил]-бензолсульфонамид (288 мг), стержень для магнитной мешалки и бензгидрилиден-[6-хлор-4-метокси-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-ил]-амин (313 мг) добавляли БДФП (41 мг) и карбонат цезия (688 мг), затем 6 мл ДИОКС и 1,0 мл воды и смесь при перемешивании нагревали при 80°C. Через 3 ч реакционную смесь охлаждали до КТ и реакцию останавливали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (35 мл) и экстрагировали с помощью EtOAc (3×75 мл). Объединенные водные фазы сушили над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали и получали неочищенный продукт, который очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с использованием смеси EtOAc и Hep в качестве элюента и получали чистый N-{4-[3-(бензгидрилиденамино)-4-метокси-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-5-хлор-2-фторбензолсульфонамид. Выход: 430 мг (88%).

МС (ES+): m/e=697,2 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

(vi) N-[4-(3-Амино-4-метокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2-фторбензолсульфонамид

N-{4-[3-(Бензгидрилиденамино)-4-метокси-1-(тетрагидропиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-5-хлор-2-фторбензолсульфонамид (430 мг) растворяли в смеси 4M HCl с ДИОКС (6 мл) и iPrOH (6 мл) и перемешивали в течение 2 ч при КТ, затем растворитель выпаривали. Неочищенный продукт очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистый N-[4-(3-амино-4-метокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2-фторбензолсульфонамид. Выход: 45 мг (13%).

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=4,12 (с, 3H), 5,39 (шир.с, 2H), 7,26 (д, J=8,7 Гц, 2H), 7,49-7,54 (м, 1H), 7,76-7,81 (м, 1H), 7,87 (дд, J=2,6, 6,0 Гц, 1H), 8,30 (д, J=8,8 Гц, 2H), 11,10 (с, 1H), 12,35 (с, 1H).

МС (ES+): m/e=449,1 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

По методикам, аналогичным описанным в приведенных выше примерах, синтезировали соединения примеров формулы Ib

приведенные в таблице 1. В формулах групп -Z-R3 в таблице 1 линия, пересеченная значком , означает свободную связь, с помощью которой группа -Z-R3 связана с атомом углерода, находящимся в положении 4 пиразоло[3,4-d]пиримидиновой кольцевой системы. Т.е. в формуле полной молекулы конечная точка линии, пересеченной указанным значком, находится на атоме углерода, находящемся в положении 4 пиразоло[3,4-d]пиримидиновой кольцевой системы. Если соответствующее исходное соединение формулы H-Z-R3 содержит две первичные или вторичные аминогруппы, то в использующемся исходном веществе одну из них защищали трет-бутоксикарбонильной группой. Если соответствующее исходное соединение формулы H-Z-R3 содержит гидроксигруппу и первичную или вторичную аминогруппу и предполагалось проведение реакции по гидроксигруппе, то в использующемся исходном веществе аминогруппу защищали трет-бутоксикарбонильной группой. Удаление защитных групп обычно проводили с использованием хлорида водорода в ДИОКС и/или iPrOH или ТФК в ДХМ, например, смеси 1:1 или ТФК и ДХМ. В столбце "Синтез" номер примера указан по аналогии с тем, в котором проводили синтез, и в скобках приведена ссылка на примечания. Методикой ионизации при исследовании с помощью МС являлась ES+, если указанным ионом является M+H, и ES-, если указанным ионом является M-H. CP означает данные для содержащего хлор фрагмента, BP означает данные для содержащего бром фрагмента в масс-спектре.

Таблица 1.
Соединения примеров формулы Ib Пример № Ar R1 Синтез Выход (%) МС (m/e) 8 5-хлор-2-фторфенил H 2 2 489,2 (M+H), CP 9 2,3-дихлорфенил H 2 49 505,2 (M+H), CP 10 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 1 40 418,2 (M+H), CP 11 2,3-дихлорфенил CH₃ 1 35 434,1 (M+H), CP 12 2,3-дихлорфенил H 2 41 518,3 (M+H), CP 13 5-хлор-2-фторфенил H 2 19 502,2 (M+H), CP

14 2,5-дихлорфенил H 2 40 518,3 (M+H), CP 15 2,3-дихлорфенил H 2 66 502,2
(M-H), CP 16 5-хлор-2-фторфенил H 2 56 486,3
(M-H), CP 17 2,5-дихлорфенил H 2 65 502,1
(M-H), CP 18 2,3-дихлорфенил H 2 88 526,3 (M+H), CP 19 5-хлор-2-фторфенил H 2 14 510,3 (M+H), CP

20 5-хлор-2-фторфенил H 2 31 510,1 (M+H), CP 21 2,5-дихлорфенил H 2 22 526,1 (M+H), CP 22 5-хлор-2-фторфенил H 2 22 510,1 (M+H), CP 23 5-хлор-2-фторфенил H 3 18 497,1 (M+H), CP 24 2,5-дихлорфенил H 3 11 513,0 (M+H), CP 25 2,5-дихлорфенил H 5 7 497,1 (M+H), CP

26 5-хлор-2-фторфенил H 3 11 495,3
(M-H), CP 27 2,5-дихлорфенил H 3 20 511,1
(M-H), CP 28 2,3-дихлорфенил H 3 51 492,3
(M-H), CP 29 5-хлор-2-фторфенил H 3 49 476,2
(M-H), CP 30 2,5-дихлорфенил H 3 62 494,1 (M+H), CP 31 2,3-дихлорфенил H 3 64 480,1 (M+H), CP 32 5-хлор-2-фторфенил H 3 84 464,1 (M+H), CP

33 2,5-дихлорфенил H 3 53 480,1 (M+H), CP 34 2,3-дихлорфенил H 3 60 508,1 (M+H), CP 35 5-хлор-2-фторфенил H 3 72 492,1 (M+H), CP 36 2,5-дихлорфенил H 3 69 508,1 (M+H), CP 37 5-хлор-2-фторфенил H 3 5 512,1 (M+H), CP 38 5-хлор-2-фторфенил H 3 22 470,1 (M+H), CP 39 2,5-дихлорфенил H 3 20 486,0 (M+H), CP

40 5-хлор-2-фторфенил H 3 13 471,1 (M+H), CP 41 2,5-дихлорфенил H 3 7 487,1 (M+H), CP 42 5-хлор-2-фторфенил H 2 18 477,1 (M+H), CP 43 2,5-дихлорфенил H 2 6 493,1 (M+H), CP 44 2,3-дихлорфенил H 2 15 493,1 (M+H), CP 45 2,3-дихлорфенил H 2 29 478,0 (M+H), CP 46 5-хлор-2-фторфенил H 2 29 476,1 (M+H), CP

47 5-хлор-2-фторфенил H 2 14 463,1 (M+H), CP 48 2,5-дихлорфенил H 2 24 479,1 (M+H), CP 49 2,3-дихлорфенил H 2 13 479,0 (M+H), CP 50 5-хлор-2-фторфенил H 2 32 462,0 (M+H), CP 51 2,5-дихлорфенил H 2 22 478,0 (M+H), CP 52 2,5-дихлорфенил H 2 21 492,0 (M+H), CP 53 2,3-дихлорфенил H 2 23 492,0 (M+H), CP

54 5-хлор-2-фторфенил H 3 10 461,2
(M-H), CP 55 2,5-дихлорфенил H 3 9 477,0
(M-H), CP 56 2,3-дихлорфенил H 3 10 477,1
(M-H), CP 57 5-хлор-2-фторфенил H 3 14 506,1 (M+H), CP 58 2,5-дихлорфенил H 3 22 522,2 (M+H), CP 59 2,3-дихлорфенил H 3 23 522,0 (M+H), CP

60 2,5-дихлорфенил H 3 25 520,0 (M+H), CP 61 2,5-дихлорфенил H 3 10 534,0 (M+H), CP 62 5-хлор-2-фторфенил H 3 25 477,0 (M+H), CP 63 2,5-дихлорфенил H 3 23 493,0 (M+H), CP 64 2,3-дихлорфенил H 3 22 493,0 (M+H), CP 65 5-хлор-2-фторфенил H 3 8 420,0 (M+H), CP 66 5-хлор-2-фторфенил H 2 24 489,0 (M+H), CP

67 2,5-дихлорфенил H 2 27 505,0 (M+H), CP 68 5-хлор-2-фторфенил H 2 57 475,0 (M+H), CP 69 2,5-дихлорфенил H 2 40 491,0 (M+H), CP 70 5-хлор-2-фторфенил H 3 15 546,1 (M+H), CP 71 5-хлор-2-фторфенил H 2 53 503,0 (M+H), CP 72 2,5-дихлорфенил H 2 16 517,0
(M-H), CP

73 5-хлор-2-фторфенил H 2 47 512,0 (M+H), CP 74 2,5-дихлорфенил H 2 14 519,0 (M+H), CP 75 5-хлор-2-фторфенил H 3 45 504,0 (M+H), CP 76 2,5-дихлорфенил H 6 20 433,9 (M+H), CP 77 5-хлор-2-фторфенил H
транс-конфигурация 2 32 517,0 (M+H), CP 78 2,5-дихлорфенил H
транс-конфигурация 2 18 533,0 (M+H), CP

79 5-хлор-2-фторфенил H
транс-конфигурация 3 54 518,0 (M+H), CP 80 2,5-дихлорфенил H
транс-конфигурация 3 43 534,0 (M+H), CP 81 5-хлор-2-фторфенил H
цис-конфигурация, рацемический 3 48 518,0 (M+H), CP 82 2,5-дихлорфенил H
цис-конфигурация, рацемический 3 39 534,0 (M+H), CP

83 5-хлор-2-цианофенил H 3 44 525,0 (M+H), CP 84 5-хлор-2-фторфенил H 3 48 518,0 (M+H), CP 85 2,5-дихлорфенил H 3 50 534,0 (M+H), CP 86 5-хлор-2-фторфенил H 3 46 506,0 (M+H), CP 87 5-хлор-2-фторфенил H
транс, R,R-конфигурация 3 47 504,0 (M+H), CP

88 2,5-дихлорфенил H
транс, R,R-конфигурация 3 45 520,0 (M+H), CP 89 2,5-дихлорфенил H 3
(a) 19 510,0 (M+H), CP 90 2-хлор-5-метоксифенил H 3 9 530,0 (M+H), CP 91 2-хлор-5-метоксифенил H 3 49 516,0 (M+H), CP 92 2-фтор-5-метилфенил H 4 36 496,3
(M-H) 93 2-циано-5-метилфенил CH₃ 1 66 405,2 (M+H)

94 5-хлор-1,3-диметил-1H-пиразол-4-ил CH₃ 1 418,2 (M+H), CP 95 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 1 90 398,2 (M+H) 96 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3 35 519,3 (M+H) 97 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3 42 505,3 (M+H) 98 2-циано-5-метилфенил CH₃
транс-конфигурация 2 38 518,3 (M+H) 99 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3 15 519,3 (M+H)

100 5-хлор-2-цианофенил CH₃ 3 15 539,3 (M+H), CP 101 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3 34 512,3 (M+H) 102 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3 40 544,3 (M+H), CP 103 7-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-6-ил CH₃ 4 67 458,1 (M+H), CP 104 2-фтор-4,5-диметоксифенил CH₃ 4 80 444,2 (M+H) 105 2-бром-4,5-диметоксифенил CH₃ 4 53 504,1 (M+H), BP 106 4,5-диметокси-2-метилфенил CH₃ 4 54 440,2 (M+H)

107 2-фтор-5-метилфенил H 3 24 497,2 (M+H) 108 2-фтор-5-метилфенил H 3
(b) 19 399,2 (M+H) 109 2-фтор-5-метилфенил H 2 21 469,2 (M+H) 110 2-хлор-5-метоксифенил H 2 10 501,2 (M+H), CP 111 5-хлор-2-цианофенил H 2 9 496,2 (M+H), CP 112 2-фтор-5-метилфенил H 3 38 485,2 (M+H)

113 2-хлор-5-метоксифенил H 3 25 517,2 (M+H), CP 114 5-хлор-2-цианофенил H 3 20 512,2 (M+H), CP 115 5-хлор-2-цианофенил H 3 29 498,1 (M+H), CP 116 2-фтор-5-метилфенил H 3 21 471,2 (M+H) 117 2-хлор-5-метоксифенил H 3 23 503,2 (M+H), CP 118 2-циано-5-метилфенил H 3 12 478,2 (M+H)

119 2-фтор-5-метилфенил H
полностью-цис-конфигурация 3 67 514,2 (M+H) 120 2-циано-5-метилфенил H
полностью-цис-конфигурация 3 23 521,3 (M+H) 121 2-фтор-5-метилфенил H 3 30 480,2 (M+H) 122 2-циано-5-метилфенил H 3 28 487,3 (M+H)

123 2-фтор-5-метилфенил H 3 52 562,2 (M+H) 124 2-циано-5-метилфенил H 3 18 569,2 (M+H) 125 2-циано-5-метилфенил H 3 4 504,2 (M+H) 126 2-хлор-5-метоксифенил H 3
(b) 432,1 (M+H), CP 127 5-хлор-2-цианофенил H 3 1 524,2 (M+H), CP

128 5-циано-2-фторфенил CH₃ 3 42 523,3 (M+H) 129 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3 40 528,3 (M+H) 130 2-циано-5-метоксифенил CH₃ 3 40 528,3 (M+H) 131 2-циано-5-фторфенил CH₃ 3 5 523,3 (M+H) 132 5-циано-2-фторфенил H 3 21 509,3 (M+H) 133 2-фтор-5-метоксифенил H 3 23 514,3 (M+H) 134 2-циано-5-метоксифенил H 3 16 521,3 (M+H)

135 2-циано-5-метилфенил H 3 3 421,2 (M+H) 136 5-хлор-2-фторфенил H 3 13 434,1 (M+H), CP 137 2-фтор-5-метилфенил H 3 35 414,1 (M+H) 138 5-хлор-2-цианофенил H 3 49 441,1 (M+H), CP 139 2,5-дихлорфенил H 3 48 450,0 (M+H), CP 140 2-фтор-5-метилфенил H 3 27 429,1 (M+H) 141 2-фтор-5-метилфенил H 6 59 424,1 (M+H) 142 5-хлор-2-фторфенил H 6 42 444,1 (M+H)

143 2-хлор-5-метоксифенил H 3 82 444,1
(M-H), CP 144 2-фтор-5-метоксифенил H 3 84 430,0 (M+H) 145 2-циано-5-метилфенил H 6 5 431,3 (M+H) 146 2-циано-5-метилфенил H 6 10 467,2 (M+H), CP 147 2-фтор-5-метоксифенил H 6 5 440,2 (M+H) 148 2-фтор-5-метоксифенил H 6 12 476,2 (M+H), CP 149 2-циано-5-метилфенил NH₂ 7 7 436,2 (M+H)

150 2-хлор-5-метоксифенил NH₂ 7 12 461,2 (M+H), CP 151 5-хлор-2-цианофенил NH₂ 7 12 456,1 (M+H), CP 152 2-фтор-5-метоксифенил NH₂ 7 15 445,2 (M+H) 153 2,5-дихлорфенил NH₂ 7 29 465,1 (M+H), CP 154 2-фтор-5-метилфенил H 6 2 469,2 (M+H) 155 2-хлор-5-метоксифенил H 6 4 501,2 (M+H), CP 156 2,5-дихлорфенил H 6 1 505,1 (M+H), CP

157 2-циано-5-метилфенил H 6 1 476,2 (M+H) 158 2-фтор-5-метилфенил H 6 36 482,1 (M+H) 159 2-хлор-5-метоксифенил H 6 42 514,1 (M+H), CP 160 5-хлор-2-фторфенил H 6 32 502,1 (M+H), CP 161 2,5-дихлорфенил H 6 13 518,1 (M+H), CP 162 5-хлор-2-цианофенил H 6 27 509,1 (M+H), CP 163 2-циано-5-метилфенил H 6 40 489,1 (M+H)

164 2-хлор-4-фторфенил NH₂ 6 26 433,1 (M+H), CP 165 2,4,5-трифторфенил NH₂ 6 19 435,1 (M+H) 166 5-бромтиофен-2-ил NH₂ 6 21 465,0 (M+H), BP 167 5-хлортиофен-2-ил NH₂ 6 26 421,0 (M+H), CP 168 4,5-дихлортиофен-2-ил NH₂ 6 23 455,0 (M+H), CP 169 2-фторфенил NH₂ 6 25 399,1 (M+H) 170 2-хлор-4,5-дифторфенил NH₂ 6 25 451,1 (M+H), CP 171 3-хлор-2-фторфенил NH₂ 6 20 433,1 (M+H), CP

172 4-бромтиофен-2-ил NH₂ 6 31 465,0 (M+H), BP 173 4-бромтиофен-3-ил NH₂ 6 13 465,0 (M+H), BP 174 4-хлортиофен-3-ил NH₂ 6 30 419,1
(M-H), CP 175 2,5-дихлортиофен-3-ил NH₂ 6 31 454,9 (M+H), CP 176 3-хлор-2-цианофенил H 3 21 441,1 (M+H), CP 177 2-хлор-3,5-дифторфенил H 3 31 452,0 (M+H), CP 178 5-хлор-2,4-дифторфенил H 3 37 452,0 (M+H), CP

179 2,4,5-трифторфенил H 3 38 436,1 (M+H) 180 2-хлор-4-фторфенил H 3 33 434,0 (M+H), CP 181 3-хлор-2-фторфенил H 3 42 434,0 (M+H), CP 182 2-хлор-4,5-дифторфенил H 3 38 452,0 (M+H), CP 183 4,5-дихлортиофен-2-ил H 3 28 455,9 (M+H), CP 184 2,5-дихлортиофен-3-ил H 3 18 455,9 (M+H), CP 185 2,5-дихлорфенил H 3 35 547,1 (M+H), CP

186 5-хлор-2-фторфенил H 3 46 531,1 (M+H), CP 187 5-хлор-2-цианофенил H 3 24 538,1 (M+H), CP 188 2-циано-5-метилфенил H 3 12 462,1 (M+H) 189 2-хлор-5-метоксифенил H 3 13 487,1 (M+H), CP 190 2,5-дихлорфенил H 3 12 490,9 (M+H), CP 191 5-хлор-2-цианофенил H 3 10 482,1 (M+H), CP 192 2-фтор-5-метоксифенил H 3 12 471,1 (M+H)

193 2-циано-5-метилфенил NH₂ 7
(c) 9 504,1 (M+H) 194 2-хлор-5-метоксифенил NH₂ 7
(c) 12 529,0 (M+H), CP 195 2,5-дихлорфенил NH₂ 7
(c) 13 533,0 (M+H), CP 196 5-хлор-2-цианофенил NH₂ 7
(c) 11 524,0 (M+H), CP 197 2-фтор-5-метоксифенил NH₂ 7
(c) 13 513,0 (M+H) 198 5-хлор-2-фторфенил H 3 5 489,1 (M+H), CP 199 2,5-дифторфенил H 3 1 461,1 (M+H)

200 2,5-дифторфенил H 3
(b) 10 404,1 (M+H) 201 2-фторфенил H 3 7 443,2 (M+H) 202 2-фторфенил H 3 18 386,1 (M+H) 203 2-хлор-5-метоксифенил H 3 5 489,1 (M+H), CP 204 2-фтор-5-метилфенил H 3 42 457,2 (M+H) 205 2,5-дифторфенил H 6 30 428,1 (M+H) 206 2-фторфенил H 6 35 410,1 (M+H)

207 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3 59 471,1 (M+H) 208 2,5-дифторфенил CH₃ 3 58 475,1 (M+H) 209 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 67 491,1 (M+H), CP 210 2,5-дихлорфенил CH₃ 3 78 505,0
(M-H), CP 211 2-фторфенил CH₃ 3 52 457,1 (M+H) 212 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3 78 503,1 (M+H), CP 213 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3 57 478,1 (M+H)

214 2,5-дихлорфенил CH₃ 3 53 548,0 (M+H), CP 215 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 70 532,1 (M+H), CP 216 2-фторфенил CH₃ 3 51 498,2 (M+H) 217 2,5-дифторфенил CH₃ 3 38 516,2 (M+H) 218 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3 74 487,1 (M+H) 219 2-фтор-5-метоксифенил H 3 25 473,1 (M+H) 220 5-хлор-2-цианофенил CH₃ 3 3 498,1 (M+H), CP

221 2-фтор-5-метилфенил H 3 40 483,2 (M+H) 222 2,5-дифторфенил H 3 62 487,1 (M+H) 223 2-хлор-5-метоксифенил H 3 68 515,1 (M+H), CP 224 5-хлор-2-фторфенил H 3 70 503,1 (M+H), CP 225 2,5-дихлорфенил H 3 10 517,0
(M-H), CP 226 2-циано-5-метилфенил H 3 42 490,2 (M+H)

227 2-фтор-5-метокси-.фенил H 3 78 499,2 (M+H) 228 2-фторфенил H 3 42 469,1 (M+H) 229 2,5-дифторфенил H 3 7 503,2 (M+H) 230 2-фтор-5-метилфенил H 3 23 499,2 (M+H) 231 2-фторфенил H 3 22 485,2 (M+H) 232 5-хлор-2-фторфенил H 3 24 519,2 (M+H), CP

233 2-хлор-5-метоксифенил H 3 10 531,2 (M+H), CP 234 2-фтор-5-метоксифенил H 3 18 515,2 (M+H) 235 5-хлор-2-цианофенил H 3 7 526,2 (M+H), CP 236 2,5-дихлорфенил H 3 8 535,1 (M+H), CP 237 2-циано-5-метилфенил H 3 11 506,2 (M+H)

238 2-фторфенил H 3 35 483,2 (M+H) 239 2,5-дихлорфенил H 3 58 533,1 (M+H) 240 2,5-дифторфенил H 3 68 523,1 (M+H) 241 2-фторфенил H 3 66 505,1 (M+H) 242 2-фтор-5-метилфенил H 3 70 519,2 (M+H) 243 5-хлор-2-фторфенил H 3 60 539,1 (M+H), CP

244 2-фтор-5-метоксифенил H 3 65 535,2 (M+H) 245 2-хлор-5-метоксифенил H 3 71 551,1 (M+H), CP 246 5-хлор-2-цианофенил H 3 18 546,1 (M+H), CP 247 2,5-дихлорфенил H 3 11 555,1 (M+H), CP 248 2-циано-5-метилфенил H 3 64 526,2 (M+H)

249 2-фтор-5-метоксифенил H 3 50 513,2 (M+H) 250 2,5-дифторфенил H 3 89 501,2 (M+H) 251 2-фтор-5-метоксифенил H 3 19 499,2 (M+H) 252 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3 17 533,2 (M+H) 253 2,5-дифторфенил CH₃ 3 17 537,2 (M+H) 254 2-фторфенил CH₃ 3 39 519,2 (M+H)

255 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 40 571,1 (M+H), CP 256 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3 56 549,2 (M+H) 257 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3 61 565,2 (M+H), CP 258 5-хлор-2-цианофенил CH₃ 3 25 560,1 (M+H), CP 259 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3 27 540,2 (M+H)

260 2,5-дихлорфенил CH₃ 3 14 569,1 (M+H), CP 261 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 41 553,1 (M+H), CP 262 2,5-дифторфенил H 3 59 487,2 (M+H) 263 2-фторфенил H 3 23 469,2 (M+H) 264 2-фтор-5-метилфенил H 3 55 483,2 (M+H) 265 5-хлор-2-фторфенил H 3 71 517,2 (M+H), CP

266 2,5-дихлорфенил H 3 3 519,2 (M+H), CP 267 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3 73 513,3 (M+H) 268 2,5-дифторфенил CH₃ 3 99 501,2 (M+H) 269 5-хлор-2-фторфенил H 3 59 503,2 (M+H), CP 270 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3 8 497,3 (M+H) 271 2-фтор-5-метилфенил H 3 4 497,2 (M+H)

272 2,5-дифторфенил CH₃ 3 34 515,3
(M-H) 273 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3 30 518,3
(M-H) 274 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3 32 511,3
(M-H) 275 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 35 531,2
(M-H), CP 276 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3 34 527,2
(M-H)

277 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3 35 543,2
(M-H), CP 278 2,5-дихлорфенил CH₃ 3 23 547,2
(M-H), CP 279 5-хлор-2-цианофенил CH₃ 3 23 538,2
(M-H), CP 280 2-фторфенил CH₃ 3 6 483,2 (M+H) 281 2,5-дихлорфенил CH₃ 3 2 533,1 (M+H), CP 282 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 70 517,2 (M+H), CP

283 2-хлор-5-метоксифенил H 3 76 515,2 (M+H), CP 284 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3 74 529,2 (M+H), CP 285 5-циано-2-метилфенил H 3 67 490,2 (M+H) 286 5-циано-2-метилфенил CH₃ 3 59 504,3 (M+H) 287 2-хлор-5-метоксифенил H 3 35 529,2 (M+H), CP 288 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3 55 513,3 (M+H)

289 2-фторфенил CH₃ 3 91 499,3 (M+H) 290 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3 59 545,3 (M+H), CP 291 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 23 533,2 (M+H), CP 292 2,5-дифторфенил CH₃ 3 92 517,3 (M+H), CP 293 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3 24 520,3 (M+H)

294 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3 9 513,3 (M+H) 295 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3 5 529,3 (M+H) 296 2,5-дифторфенил CH₃ 3 58 519,1 (M+H) 297 2-фторфенил CH₃ 3 62 501,2 (M+H) 298 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3 71 515,2 (M+H)

299 5-хлор-2-цианофенил CH₃ 3 16 542,1 (M+H), CP 300 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3 69 522,2 (M+H) 301 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 60 535,1 (M+H), CP 302 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3 77 531,2 (M+H) 303 2,5-дихлорфенил CH₃ 3 26 551,1 (M+H), CP

304 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3 78 547,2 (M+H), CP 305 5-хлор-2-фторфенил H 3 519,1 (M+H), CP 306 2-хлор-5-метоксифенил H 3 61 531,1 (M+H), CP 307 2-фторфенил H 3 60 485,2 (M+H) 308 2-фтор-5-метилфенил H 3 43 499,2 (M+H)

309 2-фтор-5-метоксифенил H 3 45 515,2 (M+H) 310 2,5-дихлорфенил NH₂ 7 26 507,1 (M+H), CP 311 2,5-дифторфенил H 3 59 503,2 (M+H) 312 2,5-дихлорфенил H 3 12 535,1 (M+H), CP 313 2,5-дихлорфенил CH₃ 3 23 549,2 (M+H), CP

314 2-циано-5-метилфенил H 3 15 502,3
(M-H) 315 2-циано-5-метилфенил H 3 5 506,3 (M+H) 316 2-хлорфенил NH₂ 7 29 473,2 (M+H), CP 317 2-фтор-5-метилфенил NH₂ 7 46 471,2 (M+H) 318 2-хлор-4-фторфенил NH₂ 7 7 491,2 (M+H), CP 319 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3 95 529,2 (M+H), CP

320 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3 99 504,4 (M+H) 321 2,5-дифторфенил CH₃ 3 63 501,3 (M+H) 322 2,5-дихлорфенил CH₃ 3 74 533,3 (M+H), CP 323 2-фторфенил CH₃ 3 68 483,3 (M+H) 324 2-хлор-3-фторфенил NH₂ 7 27 491,2 (M+H), CP 325 2-хлор-4,5-дифторфенил NH₂ 7 38 509,2 (M+H), CP

326 2-фтор-5-метоксифенил NH₂ 7 26 487,2 (M+H) 327 3-хлор-2-фторфенил NH₂ 7 26 491,2 (M+H), CP 328 2,5-дифторфенил NH₂ 7 24 475,2 (M+H) 329 2,4,5-трифторфенил NH₂ 7 32 493,1 (M+H) 330 2,5-дихлортиофен-3-ил NH₂ 7 3 513,1 (M+H), CP 331 2-фторфенил NH₂ 7 26 457,2 (M+H)

332 2-хлор-5-methoxxy-фенил NH₂ 7 25 503,1 (M+H), CP 333 2-циано-5-метилфенил NH₂ 7 10 478,2 (M+H) 334 5-хлор-2-фторфенил NH₂ 7 27 491,1 (M+H), CP 335 2,5-дихлорфенил NH₂ 7 3 493,1 (M+H), CP 336 2-циано-5-метоксифенил NH₂ 7 19 494,2 (M+H) 337 2-хлор-3,5-дифторфенил NH₂ 7 30 509,1 (M+H), CP

338 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3 67 495,2
(M-H) 339 2-фтор-5-хлорфенил CH₃ 3 93 515,2
(M-H) 340 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3 10 543,4 (M+H) 341 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3 20 573,2
(M-H) 342 2,5-дихлорфенил CH₃ 3 3 579,3 (M+H), CP

343 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3 21 550,2 (M+H) 344 2,5-дифторфенил CH₃ 3 13 547,4 (M+H) 345 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3 92 571,4 (M+H), CP 346 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 88 559,3 (M+H), CP 347 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3 21 559,4 (M+H)

348 2-фторфенил CH₃ 3 20 529,3 (M+H) 349 2,5-дифторфенил CH₃ 3 93 543,0 (M+H) 350 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3 93 546,3 (M+H) 351 2,5-дихлорфенил CH₃ 3 66 575,2 (M+H), CP 352 2-фторфенил CH₃ 3 74 525,3 (M+H) 353 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3 91 539,3 (M+H)

354 5-хлор-2-цианофенил NH₂ 7 3 498,1 (M+H), CP 355 2,5-дихлорфенил NH₂ 7 8 505,2 (M+H), CP 356 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 5 563,3 (M+H), CP 357 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3 36 555,3 (M+H) 358 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3 19 534,2 (M+H) 359 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 15 522,2 (M+H), CP

360 2-фторфенил CH₃ 3 13 488,2 (M+H) 361 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3 18 502,2 (M+H) 362 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3 8 539,2 (M+H), CP 363 2-фторфенил CH₃ 3 8 493,2 (M+H) 364 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3 7 507,1 (M+H) 365 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3 15 523,2 (M+H)

366 2,5-дифторфенил CH₃ 3 33 511,1 (M+H) 367 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 16 527,1 (M+H), CP 368 2,5-дихлорфенил CH₃ 3 6 538,0 (M+H), CP 369 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3 12 518,2 (M+H) 370 2,5-дифторфенил CH₃ 3 7 506,1 (M+H) 371 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3 13 509,2 (M+H)

372 2,5-дифторфенил CH₃ 3 12 499,1 (M+H) 373 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 17 515,1 (M+H) 374 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3 35 495,1 (M+H) 375 2,5-дихлорфенил CH₃ 3 10 531,1 (M+H), CP 376 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3 31 502,2 (M+H) 377 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3 13 472,2 (M+H) 378 2,5-дихлорфенил CH₃ 3 2 508,1 (M+H), CP

379 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3 11 488,2 (M+H) 380 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3 9 479,2 (M+H) 381 2,5-дифторфенил CH₃ 3 45 583,2 (M+H) 382 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 49 599,1 (M+H) 383 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3 34 611,1 (M+H), CP 384 2-фторфенил CH₃ 3 32 565,2 (M+H) 385 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3 24 579,2 (M+H)

386 2,5-дихлорфенил CH₃ 3 21 615,1 (M+H), CP 387 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3 35 595,2 (M+H) 388 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3 48 586,2 (M+H) 389 2-фторфенил CH₃ 3 10 458,1 (M+H) 390 2,5-дифторфенил CH₃ 3 17 476,2 (M+H) 391 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 10 492,1 (M+H), CP 392 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3 11 504,1 (M+H), CP

393 2,5-дифторфенил H 3 22 541,2 (M+H) 394 2,5-дифторфенил H 3 29 559,2 (M+H) 395 2,5-дифторфенил H 3 13 559,1 (M+H) 396 2,5-дифторфенил H 3 5 527,1 (M+H) 397 2,5-дифторфенил CH₃ 3 20 573,1 (M+H) 398 2,5-дифторфенил CH₃ 3 27 555,1 (M+H)

399 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 21 545,1 (M+H) 400 2,5-дифторфенил CH₃ 3 37 529,1 (M+H) 401 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3 26 557,1 (M+H), CP 402 2-фторфенил CH₃ 3 60 511,1 (M+H) 403 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3 47 525,2 (M+H) 404 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3 34 541,1 (M+H)

405 2,5-дихлорфенил CH₃ 3 42 561,1 (M+H), CP 406 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 62 575,1 (M+H), CP 407 2,5-дифторфенил CH₃ 3 62 559,1 (M+H) 408 2-фтор-5-метил--фенил CH₃ 3 63 555,2 (M+H) 409 2-фторфенил CH₃ 3 31 541,1 (M+H)

410 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3 49 571,2 (M+H) 411 5-хлор-2-цианофенил CH₃ 3 45 582,1 (M+H), CP 412 2,5-дифторфенил CH₃ 3 8 573,1 (M+H) 413 2,5-дифторфенил NH₂ 7 37 447,0 (M+H) 414 5-хлор-2-фторфенил NH₂ 7 28 477,0 (M+H), CP 415 2,5-дифторфенил NH₂ 7 57 461,0 (M+H)

416 5-хлор-2-фторфенил NH₂ 7 18 463,0 (M+H), CP 417 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3 41 532,1 (M+H) 418 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 27 545,1 (M+H), CP 419 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3 12 557,1 (M+H), CP 420 2-фторфенил CH₃ 3 25 511,1 (M+H) 421 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3 30 525,2 (M+H)

422 2,5-дихлорфенил CH₃ 3 10 561,0 (M+H), CP 423 2,5-дифторфенил CH₃ 3 20 529,1 (M+H) 424 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3 3 541,1 (M+H) 425 2,5-дихлорфенил NH₂ 7 23 493,0 (M+H), CP 426 2,5-дихлорфенил NH₂ 7 12 479,0 (M+H), CP 427 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3 6 532,1 (M+H)

428 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3 20 553,1 (M+H) 429 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 32 557,1 (M+H), CP 430 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3 23 569,1 (M+H), CP 431 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3 17 537,1 (M+H) 432 2,5-дихлорфенил CH₃ 3 29 573,0 (M+H), CP 433 2,5-дифторфенил CH₃ 3 40 541,1 (M+H)

(a) Карбонат цезия использовали вместо гидрида натрия.

(b) В качестве исходного вещества использовали воду.

(c) Использовали бензгидрилиден-[6-хлор-1-(тетрагидропиран-2-ил)-4-(2,2,2-трифторэтокси)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-ил]-амин.

Типичные данные ЯМР для соединений примеров

Пример 346

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=1,31 (д, J=6,6 Гц, 6H), 2,02-2,14 (м, 1H), 2,24-2,34 (м, 2H), 2,57 (с, 2H), 3,12-3,41 (м, 3H), 3,45-3,57 (м, 3H), 5,56-5,86 (м, 1H), 7,27 (дд, J=3,8, 8,8 Гц, 2H), 7,52 (т, J=8,8 Гц, 1H), 7,76-7,82 (м, 1H), 7,84-7,89 (м, 1H), 8,33 (дд, J=8,7, 11,3 Гц, 2H), 9,73-10,01 (м, 1H), 11,13 (д, J=5,6 Гц, 1H), 13,48 (шир., 1H).

Пример 429

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=0,87 (шир.с, 2H),=0,98 (шир. с, 2H), 1,83-1,96 (м, 1H), 2,07-2,18 (м, 1H), 2,29-2,39 (м, 1H), 2,50 (с, 3H), 2,61 (шир., 2H), 2,83-3,15 (м, 1H), 3,30-3,42, 3,45-3,59 (м, 1H), 3,61-3,68 (м, 1H), 5,59-5,79 (м, 1H), 7,27 (д, J=8,5 Гц, 2H), 7,52 (т, J=9,2 Гц, 1H), 7,77-7,83 (м, 1H), 7,87 (дд, J=2,7, 6,0 Гц, 1H), 8,30 (д, J=8,3 Гц, 2H), 9,01 (шир., 1H), 11,13 (с, 1H), 13,47 (шир., 1H)

Пример 433

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=0,87 (шир.с, 2H), 0,97 (шир.с, 2H), 1,82-1,96 (м, 1H), 2,05-2,18 (м, 1H), 2,29-2,39 (м, 1H), 2,50 (с, 3H), 2,61 (шир., 1H), 2,83-3,15 (м, 1H), 3,45-3,71 (м, 3H), 5,58-5,78 (м, 1H), 7,26 (д, J=8,4 Гц, 2H), 7,49-7,56 (м, 1H), 7,57-7,64 (м, 1H), 7,69-7,75 (м, 1H), 8,30 (д, J=8,3 Гц, 2H), 8,92 (шир., 1H), 11,12 (с, 1H), 13,46 (с, 1H).

По методикам, аналогичным описанным в приведенных выше примерах, соединения примеров формулы Ic

приведенные в таблице 2, синтезировали с использованием 2-фтор-4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фениламина вместо 4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фениламина в качестве исходного вещества. В формулах групп -Z-R3 в таблице 2 линия, пересеченная значком , означает свободную связь, с помощью которой группа -Z-R3 связана с атомом углерода, находящимся в положении 4 пиразоло[3,4-d]пиримидиновой кольцевой системы. Т.е. в формуле полной молекулы конечная точка линии, пересеченной указанным значком, находится на атоме углерода, находящемся в положении 4 пиразоло[3,4-d]пиримидиновой кольцевой системы. В примере 442 трет-бутиловый эфир 3-гидроксиазетидин-1-карбоновой кислоты использовали в качестве исходного вещества. Удаление защитных групп обычно проводили с использованием хлорида водорода в ДИОКС и/или iPrOH или ТФК в ДХМ, например, смеси 1:1 или ТФК и ДХМ. В столбце "Синтез" номер примера указан по аналогии с тем, в котором проводили синтез, и в скобках приведена ссылка на примечания. Методикой ионизации при исследовании с помощью МС являлась ES+. CP означает данные для содержащего хлор фрагмента в масс-спектре.

Таблица 2.
Соединения примеров формулы Ic Пример № Ar R1 Синтез Выход (%) МС (m/e) 434 2,5-дихлорфенил CH₃ 1 35 452,0 (M+H), CP 435 5-хлор-2-фторфенил H 2 21 507,0 (M+H), CP 436 5-хлор-2-фторфенил H 2 30 493,0 (M+H), CP 437 2,5-дихлорфенил H 2 11 508,9 (M+H), CP 438 2,5-дихлорфенил H 2 22 523,0 (M+H), CP 439 2,5-дихлорфенил H 3 42 551,9 (M+H), CP

440 5-хлор-2-фторфенил H 3 42 536,0 (M+H), CP 441 5-хлор-2-фторфенил H 2 14 507,2 (M+H), CP 442 5-хлор-2-фторфенил H 3 13 493,0 (M+H), CP 443 5-хлор-2-фторфенил H 6 27 462,0 (M+H), CP

Пример 444: N-[4-(3-Амино-4-изопропокси-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-2-фторфенил]-5-хлор-2-фторбензолсульфонамид

Искомое соединение получали с выходом 29% по методике, аналогичной описанной в примере 7, с использованием бензгидрилиден-[6-хлор-1-(тетрагидропиран-2-ил)-4-(2,2,2-трифторэтокси)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-ил]-амина и 5-хлор-2-фтор-N-[2-фтор-4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенил]-бензолсульфонамида на стадии (v). Замена 2,2,2-трифторэтоксигруппы на изопропоксигруппу происходила при обработке изопропанолом на стадии (vi).

МС (ES+): m/e=495,09 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 445: N-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2,4-дифторбензолсульфонамид

(i) 4-Гидрокси-2-(4-нитрофенил)пиримидин-5-карбонитрил

К раствору 3,14 г этилового эфира 2-циано-3-этоксиакриловой кислоты (US 2824121) и 3 г 4-нитробензимидамида в 50 мл этанола медленно добавляли 14 мл раствора этоксида натрия (20% в этаноле). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 1 ч. После охлаждения до КТ и разбавления водой реакционную смесь подкисляли разбавленным вдвое концентрированным водным раствором хлористоводородной кислоты до pH 1. Органические растворители удаляли при пониженном давлении и осадившийся продукт собирали фильтрованием в виде коричневого твердого вещества. Выход: 3,0 г.

(ii) 4-Хлор-2-(4-нитрофенил)пиримидин-5-карбонитрил

К раствору 3,0 г 4-гидрокси-2-(4-нитрофенил)пиримидин-5-карбонитрила в 18 мл оксихлорида фосфора, 1,6 мл диметилфениламина добавляли. Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 1 ч, затем охлаждали до КТ и концентрировали при пониженном давлении. После добавления воды со льдом и разбавления с помощью ДХМ добавляли насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия и смесь экстрагировали с помощью ДХМ (3×200 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и растворители удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле при элюировании в градиентном режиме с помощью Hep/EtOAc. Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Выход: 3,2 г.

К раствору 1,5 г 4-хлор-2-(4-нитрофенил)пиримидин-5-карбонитрила в 10 мл iPrOH добавляли 12,7 мл раствора гидразина (35% в iPrOH) и реакционную смесь нагревали в течение 25 мин при 80°C с помощью микроволнового излучения (аппарат Biotage^® Initiator). Реакционную смесь охлаждали до КТ и разбавляли уксусной кислотой (20%). Осадившийся продукт собирали фильтрованием и использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки. Выход: 867 мг.

(iv) трет-Бутил-3-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-6-(4-нитрофенил)пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-карбоксилат

К суспензии 867 мг 6-(4-нитрофенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-амина в 10 мл ДХМ добавляли 2,3 г ди-трет-бутилдикарбоната, 1,4 мл триэтиламина и 4 мг диметилпиридин-4-иламина. Смесь перемешивали в течение 16 ч при КТ, затем реакцию останавливали путем добавления воды и разбавляли с помощью ДХМ. После отделения органического слоя водный слой экстрагировали с помощью ДХМ (3×200 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и растворители удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле при элюировании в градиентном режиме с помощью Hep/EtOAc. Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Выход: 1,4 г.

(v) трет-Бутил-6-(4-аминофенил)-3-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-карбоксилат

К раствору 1,4 г трет-бутил-3-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-6-(4-нитрофенил)пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-карбоксилата, полученного на предыдущей стадии, в 50 мл EtOAc в атмосфере аргона добавляли 347 мг Pd/C (10%) и суспензию перемешивали в атмосфере водорода (2 бар) в течение 16 ч. Суспензию фильтровали через слой целита^® и промывали с помощью EtOAc. Неочищенный продукт после выпаривания растворителя получали в виде коричневого твердого вещества и сушили при пониженном давлении. Выход: 3,3 г.

(vi) N-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2,4-дифторбензолсульфонамид

К раствору 150 мг трет-бутил-6-(4-аминофенил)-3-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-карбоксилата в 2,5 мл ДХМ и 25 мкл пиридина добавляли 140 мг 5-хлор-2,4-дифторбензолсульфонилхлорида. После перемешивания реакционной смеси в течение 16 ч при КТ растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в 2 мл ДХМ и 0,5 мл ТФК и перемешивали в течение 6 ч при КТ. Затем добавляли толуол и растворители удаляли при пониженном давлении и получали коричневое твердое вещество. Этот неочищенный продукт очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистое искомое соединение в виде его соли с трифторуксусной кислотой. Это твердое вещество растворяли в 1 мл смеси вода/MeCN, затем добавляли 0,5 мл 1M водного раствора хлористоводородной кислоты и раствор повторно лиофилизировали и получали искомое соединение в форме N-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2,4-дифторбензолсульфонамидгидрохлорида. Выход: 87 мг.

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=7,28 (д, J=8,7 Гц, 2H), 7,83 (т, J=10,3 Гц, 1H), 8,10 (т, J=8,5 Гц, 1H), 8,27 (д, J=8,7 Гц, 2H), 9,17 (с, 1H), 11,18 (с, 1H).

МС (ES+): m/e=436,9 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 446: N-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2-цианобензолсульфонамид

(i) трет-Бутил-3-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-6-[4-[(5-хлор-2-цианофенил)сульфониламино]фенил]пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-карбоксилат

(iii) 6-(4-Нитрофенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-амин

К раствору 3 г трет-бутил-6-(4-аминофенил)-3-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-карбоксилата (пример 445, стадия (v)) в 50 мл ДХМ и 1,4 мл пиридина добавляли 1,4 г 5-хлор-2-цианобензолсульфонилхлорида. После перемешивания реакционной смеси в течение 16 ч при КТ растворители удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле при элюировании в градиентном режиме с помощью Hep/EtOAc. Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Выход: 2,7 г.

(ii) N-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2-цианобензолсульфонамид

1,6 г трет-Бутил-3-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-6-[4-[(5-хлор-2-цианофенил)сульфониламино]фенил]пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-карбоксилата растворяли в 20 мл ДХМ и 1,7 мл ТФК. Реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при КТ, затем разбавляли водой и нейтрализовывали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия. Осадившийся неочищенный продукт собирали фильтрованием, промывали с помощью EtOAc и перекристаллизовывали из этанола. Выход: 625 мг.

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=7,25 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,59 (д, J=8,5 Гц, 1H), 8,07 (с, 1H), 8,12 (д, J=8,5 Гц, 1H), 8,33 (д, J=8,8 Гц, 2H), 9,13 (с, 1H), 11,19 (с, 1H).

МС (ES-): m/e=424,2 (M-H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 447: N-[4-(3-Амино-4-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2,4-дифторбензолсульфонамид

(i) 6-Метил-2-(4-нитрофенил)-4-оксо-4,5-дигидропиримидин-5-карбонитрил

К раствору 5,5 г этилового эфира 2-циано-3-этокси-бут-2-карбоновой кислоты (US 2824121) и 5 г 4-нитробензимидамида в 200 мл этанола медленно добавляли 23,5 мл раствора этоксида натрия (20% в этаноле). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 1 ч. После охлаждения до КТ и разбавления водой реакционную смесь подкисляли разбавленным вдвое концентрированным водным раствором хлористоводородной кислоты до pH 1. Органические растворители удаляли при пониженном давлении и осадившийся продукт собирали фильтрованием в виде коричневого твердого вещества. Выход: 7,2 г.

(ii) 4-Хлор-6-метил-2-(4-нитрофенил)-пиримидин-5-карбонитрил

К раствору 5,3 г 6-метил-2-(4-нитрофенил)-4-оксо-4,5-дигидропиримидин-5-карбонитрила в 71 мл оксихлорида фосфора добавляли 2,6 мл диметилфениламина. Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 1 ч, затем охлаждали до КТ и концентрировали при пониженном давлении. После добавления воды со льдом и разбавления с помощью ДХМ добавляли насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия и смесь экстрагировали с помощью ДХМ (3×200 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и растворители удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле при элюировании в градиентном режиме с помощью Hep/EtOAc. Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Выход: 3,8 г.

(iii) 4-Метил-6-(4-нитрофенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-иламин

К раствору 3,9 г 4-хлор-6-метил-2-(4-нитрофенил)-пиримидин-5-карбонитрила в 25 мл iPrOH добавляли 24,5 мл раствора гидразина (35% в iPrOH) и реакционную смесь нагревали в течение 10 мин при 80°C с помощью микроволнового излучения (аппарат Biotage^® Initiator). Реакционную смесь охлаждали до КТ и разбавляли уксусной кислотой (20%). Осадившийся продукт собирали фильтрованием и использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки. Выход: 3,4 г.

(iv) трет-Бутил-3-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-4-метил-6-(4-нитрофенил)пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-карбоксилат

К суспензии 3,4 г 4-метил-6-(4-нитрофенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-иламина в 105 мл ДХМ добавляли 8,3 г ди-трет-бутилдикарбоната, 5,3 мл триэтиламина и 16 мг диметилпиридин-4-иламина. Смесь перемешивали в течение 16 ч при КТ, затем реакцию останавливали путем добавления воды и разбавляли с помощью ДХМ. После отделения органического слоя водный слой экстрагировали с помощью ДХМ (3×200 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и растворители удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле при элюировании в градиентном режиме с помощью Hep/EtOAc. Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Выход: 6,5 г.

(v) трет-Бутил-6-(4-аминофенил)-3-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-4-метилпиразоло[3,4-d]пиримидин-1-карбоксилат

К раствору 5,6 г трет-бутил-3-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-4-метил-6-(4-нитрофенил)пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-карбоксилата, полученного на предыдущей стадии, в 85 мл EtOAc в атмосфере аргона добавляли 559 мг Pd/C (10%) и суспензию перемешивали в атмосфере водорода (2 бар) в течение 16 ч. Суспензию фильтровали через слой целита^® и промывали с помощью EtOAc. Неочищенный продукт после выпаривания растворителя получали в виде коричневого твердого вещества и сушили при пониженном давлении. Выход: 5,0 г.

(vi) N-[4-(3-Амино-4-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2,4-дифторбензолсульфонамид

К раствору 250 мг трет-бутил-6-(4-аминофенил)-3-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-4-метилпиразоло[3,4-d]пиримидин-1-карбоксилата в 2,5 мл ДХМ и 75 мкл пиридина добавляли 114 мг 5-хлор-2,4-дифторбензолсульфонилхлорида. После перемешивания реакционной смеси в течение 16 ч при КТ растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в 2 мл ДХМ и 0,5 мл ТФК и перемешивали в течение 6 ч при КТ. Затем добавляли толуол и растворители удаляли при пониженном давлении и получали коричневое твердое вещество. Этот неочищенный продукт очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистое искомое соединение в виде его соли с трифторуксусной кислотой. Выход: 65 мг.

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=2,77 (с, 3H), 7,27 (д, J=8,7 Гц, 2H), 7,83 (т, J=10,3 Гц, 1H), 8,09 (т, J=8,5 Гц, 1H), 8,26 (д, J=8,5 Гц, 2H), 11,16 (с, 1H).

МС(ES+): m/e=451,0 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 448: N-[4-(3-Амино-4-циклопропил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)фенил]-5-хлор-2,4-дифторбензолсульфонамид

(i) Этиловый эфир 2-циано-3-циклопропил-3-гидроксиакриловой кислоты

К раствору 11,0 г этилового эфира цианоксусной кислоты в 100 мл MeCN при 0°C добавляли 9,0 г безводного хлорида магния. Через 10 мин к реакционной смеси по каплям добавляли 26,1 мл триэтиламина и через 1 ч раствор 10,0 г циклопропанкарбонилхлорида в 30 мл ДХМ. После перемешивания в течение еще 1 ч реакционную смесь подкисляли разбавленным вдвое концентрированным водным раствором хлористоводородной кислоты до pH 1 и смесь экстрагировали с помощью ДХМ (3×200 мл). Объединенные органические слои промывали водой, сушили над сульфатом магния и растворители удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали путем кристаллизации из Hep/EtOAc и получали кристаллическое твердое вещество. Выход: 10,1 г.

(ii) Этиловый эфир 2-циано-3-циклопропил-3-этоксиакриловой кислоты

К раствору 10,1 г этилового эфира 2-циано-3-циклопропил-3-гидроксиакриловой кислоты в 200 мл MeCN при 0°C добавляли 18,1 г карбоната цезия, затем по каплям добавляли 7,26 мл этилового эфира трифторметансульфоновой кислоты. Через 1 ч реакционной смеси давали нагреться до КТ и перемешивали в течение 16 ч. Затем реакцию останавливали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (15 мл) и фильтровали через картридж Chem Elut^® при элюировании с помощью EtOAc. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и полученный неочищенный продукт использовали на следующей стадии реакции. Выход: 12 г.

(iii) 4-Циклопропил-6-гидрокси-2-(4-нитрофенил)пиримидин-5-карбонитрил

К раствору 9,3 г этилового эфира 2-циано-3-циклопропил-3-этоксиакриловой кислоты и 3,7 г 4-нитробензимидамида в 200 мл этанола медленно добавляли 31 мл раствора этоксида натрия (20% в этаноле). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 1 ч. После охлаждения до КТ и разбавления водой реакционную смесь подкисляли разбавленным вдвое концентрированным водным раствором хлористоводородной кислоты до pH 1. Органические растворители удаляли при пониженном давлении и осадившийся продукт собирали фильтрованием в виде коричневого твердого вещества. Выход: 4,1 г.

(iv) 4-Хлор-6-циклопропил-2-(4-нитрофенил)пиримидин-5-карбонитрил

К раствору 4,1 г 4-циклопропил-6-гидрокси-2-(4-нитрофенил)пиримидин-5-карбонитрила в 24,4 мл оксихлорида фосфора добавляли 1,9 мл диметилфениламина. Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 1 ч, затем охлаждали до КТ и концентрировали при пониженном давлении. После добавления воды со льдом и разбавления с помощью ДХМ добавляли насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия и смесь экстрагировали с помощью ДХМ (3×100 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и растворители удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле при элюировании в градиентном режиме с помощью Hep/EtOAc. Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Выход: 2,8 г.

(v) 4-Циклопропил-6-(4-нитрофенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-амин

К раствору 2,0 г 4-хлор-6-циклопропил-2-(4-нитрофенил)пиримидин-5-карбонитрила в 18 мл iPrOH добавляли 18 мл раствора гидразина (35% в iPrOH) и реакционную смесь нагревали в течение 15 мин при 100°C с помощью микроволнового излучения (аппарат Biotage^® Initiator). Реакционную смесь охлаждали до КТ и разбавляли уксусной кислотой (20%). Осадившийся продукт собирали фильтрованием и использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки. Выход: 1,9 г.

(iv) трет-Бутил-3-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-4-циклопропил-6-(4-нитрофенил)пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-карбоксилат

К суспензии 890 мг 4-циклопропил-6-(4-нитрофенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-амина в 20 мл ДХМ добавляли 2 г ди-трет-бутилдикарбоната, 1,2 мл триэтиламина и 4 мг диметилпиридин-4-иламина. Смесь перемешивали в течение 16 ч при КТ, затем реакцию останавливали путем добавления воды и разбавляли с помощью ДХМ. После отделения органического слоя водный слой экстрагировали с помощью ДХМ (3×200 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и растворители удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле при элюировании в градиентном режиме с помощью Hep/EtOAc. Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Выход: 1,3 г.

(v) трет-Бутил-6-(4-аминофенил)-3-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-4-циклопропилпиразоло[3,4-d]пиримидин-1-карбоксилат

К раствору 1,4 г трет-бутил-3-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-4-циклопропил-6-(4-нитрофенил)пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-карбоксилата, полученного на предыдущей стадии, в 8 мл EtOAc в атмосфере аргона добавляли 139 мг Pd/C (10%) и суспензию перемешивали в атмосфере водорода (2 бар) в течение 16 ч. Суспензию фильтровали через слой целита^® и промывали с помощью EtOAc. Неочищенный продукт после выпаривания растворителя получали в виде коричневого твердого вещества и сушили при пониженном давлении. Выход: 1,3 г.

(vi) N-[4-(3-Амино-4-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2,4-дифторбензолсульфонамид

К раствору 250 мг трет-бутил-6-(4-аминофенил)-3-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-4-циклопропилпиразоло[3,4-d]пиримидин-1-карбоксилата в 2 мл ДХМ и 43 мкл пиридина добавляли 67 мг 5-хлор-2,4-дифторбензолсульфонилхлорида. После перемешивания реакционной смеси в течение 16 ч при КТ растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в 2 мл ДХМ и 1 мл ТФК и перемешивали в течение 1 ч при КТ. Затем добавляли толуол и растворители удаляли при пониженном давлении и получали коричневое твердое вещество. Этот неочищенный продукт очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистое искомое соединение в виде его соли с трифторуксусной кислотой. Выход: 40 мг.

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=1,11 (м, 2H), 1,28 (м, 2H), 2,66 (м, 1H), 7,20 (д, J=8,5 Гц, 2H), 7,79 (т, J=8,5 Гц, 1H), 8,03 (т, J=8,5 Гц, 1H), 8,21 (д, J=8,5 Гц, 2H), 11,02 (с, 1H).

МС (ES+): m/e=477,2 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 449: 5-Хлор-2,4-дифтор-N-[4-(3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-бензолсульфонамид

(i) 5-Хлор-2,4-дифтор-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фенил]бензолсульфонамид

К раствору 500 мг 4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фениламина в 5 мл ДХМ и 0,2 мл пиридина добавляли 564 мг 5-хлор-2,4-дифторбензолсульфонилхлорида и реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при КТ. Затем растворители удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле при элюировании в градиентном режиме с помощью Hep/EtOAc. Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Выход: 1,0 г.

(ii) 5-Хлор-2,4-дифтор-N-[4-(3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-бензолсульфонамид

Раствор 59 мг 6-хлор-3-метил-1-тетрагидропиран-2-илпиразоло[3,4-d]пиримидина, 102 мг 5-хлор-2,4-дифтор-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фенил]бензолсульфонамида и 232 мг карбоната цезия в 1,5 мл ДИОКС и 0,2 мл воды продували аргоном. Затем добавляли 13 мг БДФП и реакционную смесь нагревали при 100°C. Через 2 ч реакционную смесь охлаждали до КТ и разбавляли водой. После фильтрования через картридж Chem Elut^® при элюировании с помощью EtOAc растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток при КТ растворяли в 2 мл iPrOH и 2 мл HCl в ДИОКС (4M). Через 15 мин реакционную смесь разбавляли с помощью 20 мл толуола и растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистое искомое соединение в виде его соли с трифторуксусной кислотой. Выход: 31 мг

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=2,56 (с, 3H), 7,28 (д, J=8,7 Гц, 2H), 7,85 (т, J=10,3 Гц, 1H), 8,09 (т, J=8,5 Гц, 1H), 8,36 (д, J=8,5 Гц, 2H), 9,34 (с, 1H), 11,16 (с, 1H).

МС (ES+): m/e=436,0 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 450: 2,5-Дихлор-N-{4-[3-метил-4-(2-окса-6-азаспиро[3.4]окт-6-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-бензолсульфонамид

(i) 2,5-Дихлор-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенил]бензолсульфонамид

К раствору 10 г 4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фениламина в 100 мл ДХМ и 4 мл пиридина добавляли 11,7 г 2,5-дихлорбензолсульфонилхлорида и реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при КТ. Затем растворители удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле при элюировании в градиентном режиме с помощью Hep/EtOAc. Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Выход: 17,9 г.

(ii) 7-(6-Хлор-3-метил-1-тетрагидропиран-2-илпиразоло[3,4-d]пиримидин-4-ил)-2-окса-6-азаспиро[3.4]октан

К раствору 300 мг 4,6-дихлор-3-метил-1-тетрагидропиран-2-илпиразоло[3,4-d]пиримидина (WO 2011/140338) и 0,4 мл триэтиламина в 5 мл MeCN добавляли 118 мг 2-окса-6-азаспиро[3.4]октана. Реакционную смесь перемешивали в течение 5 ч при КТ, реакцию останавливали насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (3 мл) и фильтровали через картридж Chem Elut^® при элюировании с помощью EtOAc. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и полученный неочищенный продукт использовали на следующей стадии реакции. Выход: 309 мг.

(iii) 2,5-Дихлор-N-{4-[3-метил-4-(2-окса-6-азаспиро[3.4]окт-6-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-бензолсульфонамид

Раствор 155 мг 7-(6-хлор-3-метил-1-тетрагидропиран-2-илпиразоло[3,4-d]пиримидин-4-ил)-2-окса-7-азаспиро[3.4]октана, 182 мг 2,5-дихлор-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенил]-бензолсульфонамида и 415 мг карбоната цезия в 5 мл ДИОКС и 1,6 мл воды продували аргоном. Затем добавляли 28 мг БДФП и реакционную смесь нагревали при 100°C. Через 3 ч реакционную смесь охлаждали до КТ и разбавляли водой. После фильтрования через картридж Chem Elut^® при элюировании с помощью EtOAc растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток при КТ растворяли в 3 мл ДХМ и 0,5 мл ТФК. Через 2 ч реакционную смесь разбавляли с помощью 20 мл толуола и растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистое искомое соединение в виде его соли с трифторуксусной кислотой. Выход: 39 мг.

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=2,33 (т, J=6,6 Гц, 2H), 2,65 (с, 3H), 3,85 (с, 2H), 4,06 (с, 2H), 4,55 (д, J=5,9 Гц, 2H), 4,67 (д, J=5,9 Гц, 2H), 7,21 (д, J=8,5 Гц, 2H), 7,75 - 7,67 (м, 2H), 8,05 (с, 1H), 8,27 (д, J=8,5 Гц, 2H), 11,16 (с, 1H).

МС (ES+): m/e=545,2 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

По методикам, аналогичным описанным в приведенных выше примерах, синтезировали соединения примеров формулы Ib

приведенные в таблице 3. В формулах групп -Z-R3 в таблице 3 линия, пересеченная значком , означает свободную связь, с помощью которой группа -Z-R3 связана с атомом углерода, находящимся в положении 4 пиразоло[3,4-d]пиримидиновой кольцевой системы. Т.е. в формуле полной молекулы конечная точка линии, пересеченной указанным значком, находится на атоме углерода, находящемся в положении 4 пиразоло[3,4-d]пиримидиновой кольцевой системы. В столбце "Синтез" номер примера указан по аналогии с тем, в котором проводили синтез. Методикой ионизации при исследовании с помощью МС являлась ES+, если указанным ионом является M+H, и ES-, если указанным ионом является M-H. CP означает данные для содержащего хлор фрагмента, BP означает данные для содержащего бром фрагмента в масс-спектре.

Таблица 3.
Соединения примеров формулы Ib Пример № Ar R1 Синтез МС (m/e) 451 5-хлор-2,4-дифторфенил NH₂ 7 481,0 (M+H), CP 452 2,5-дихлорфенил NH₂ 445 435,1 (M+H), CP 453 2-циано-5-метилфенил NH₂ 445 406,1 (M+H) 454 3-циано-4-фторфенил NH₂ 445 410,1 (M+H) 455 2-фтор-5-метилфенил NH₂ 445 399,1 (M+H) 456 3-хлор-2-цианофенил NH₂ 445 426,1 (M+H), CP 457 3-цианофенил NH₂ 445 392,1 (M+H)

458 8-хлор-3,4-дигидро-2H-бензо[b][1,4]диоксепин-7-ил NH₂ 445 473,2 (M+H), CP 459 8-бром-3,4-дигидро-2H-бензо[b][1,4]диоксепин-7-ил NH₂ 445 517,2 (M+H), BP 460 5-хлор-1,3-диметил-1H-пиразол-4-ил NH₂ 445 419,1 (M+H), CP 461 2-хлор-5-метоксифенил NH₂ 445 431,0 (M+H), CP 462 2-хлор-3,5-дифторфенил NH₂ 445 437,1 (M+H), CP 463 2,5-дихлортиофен-3-ил NH₂ 445 441,1 (M+H), CP 464 2,5-дихлорфенил NH₂ 447 449,1 (M+H), CP 465 5-хлор-2-цианофенил NH₂ 447 440,2 (M+H), CP

466 5-хлор-2-фторфенил NH₂ 447 433,1 (M+H), CP 467 2-хлор-5-метоксифенил NH₂ 447 445,0 (M+H), CP 468 2-циано-5-метилфенил NH₂ 447 420,2 (M+H) 469 3-циано-4-фторфенил NH₂ 447 424,2 (M+H) 470 3-хлор-2-цианофенил NH₂ 447 440,2 (M+H), CP 471 3-цианофенил NH₂ 447 406,1 (M+H) 472 2-фтор-5-метилфенил NH₂ 447 413,2 (M+H) 473 5-циано-2-метилфенил NH₂ 447 420,2 (M+H) 474 2-циано-3-фторфенил NH₂ 447 424,2 (M+H)

475 5-хлор-1,3-диметил-1H-пиразол-4-ил NH₂ 447 433,1 (M+H), CP 476 8-хлор-3,4-дигидро-2H-бензо[b][1,4]диоксепин-7-ил NH₂ 447 485,2
(M-H), CP 477 8-бром-3,4-дигидро-2H-бензо[b][1,4]диоксепин-7-ил NH₂ 447 531,1 (M+H), BP 478 7-хлор-2,3-дигидробензо[1,4]диоксин-6-ил NH₂ 447 473,2 (M+H), CP 479 2-хлор-3,5-дифторфенил NH₂ 447 451,1 (M+H), CP 480 2-хлор-3,5-дифторфенил NH₂ 448 477,1 (M+H), CP 481 2-хлор-4,5-дифторфенил NH₂ 448 477,1 (M+H), CP 482 3-хлор-2-фторфенил NH₂ 448 459,1 (M+H), CP 483 2-хлор-4-фторфенил NH₂ 448 459,1 (M+H), CP

484 2,4,5-трифторфенил NH₂ 448 461,2 (M+H) 485 2-фторфенил NH₂ 448 425,2 (M+H) 486 2,5-дифторфенил NH₂ 448 443,2 (M+H) 487 5-хлор-2-фторфенил NH₂ 448 459,1 (M+H), CP 488 2-фтор-5-метилфенил NH₂ 448 439,2 (M+H) 489 2,5-дихлорфенил NH₂ 448 475,1 (M+H), CP 490 2-цианофенил CH₃ 449 391,0 (M+H) 491 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 449 430,0 (M+H), CP 492 5-хлор-2-цианофенил CH₃ 449 425,0 (M+H), CP

493 3-циано-4-фторфенил CH₃ 449 409,0 (M+H) 494 3-цианофенил CH₃ 449 391,3 (M+H) 495 5-циано-2-метилфенил CH₃ 449 405,2 (M+H) 496 2,5-дихлорфенил CH₃ 450 559,2 (M+H), CP 497 2,5-дихлорфенил CH₃ 450 531,2 (M+H), CP 498 2,5-дихлорфенил CH₃ 450 559,2 (M+H), CP 499 5-хлор-2-цианофенил CH₃ 450 550,4 (M+H), CP

500 2,5-дихлортиофен-3-ил NH₂ 448 480,9 (M+H), CP 501 5-хлор-2,4-дифторфенил NH₂ 448 495,0 (M+H), CP 502 2-хлор-5-метоксифенил NH₂ 448 489,1 (M+H), CP 503 2-фтор-5-метилфенил NH₂ 448 457,1 (M+H) 504 2-фтор-5-метоксифенил NH₂ 448 473,1 (M+H) 505 2,5-дихлорфенил NH₂ 448 493,0 (M+H), CP 506 5-хлор-2-фторфенил NH₂ 448 477,0 (M+H), CP 507 2-хлор-4-фторфенил NH₂ 448 477,0 (M+H), CP

508 2,5-дифторфенил NH₂ 448 461,1 (M+H) 509 2,5-дихлортиофен-3-ил NH₂ 448 497,1
(M-H), CP 510 2-хлор-4,5-дифторфенил NH₂ 448 495,0 (M+H), CP 511 3-хлор-2-фторфенил NH₂ 448 477,0 (M+H), CP 512 2-фторфенил NH₂ 448 443,1 (M+H) 513 2-циано-5-метилфенил NH₂ 448 464,1 (M+H) 514 2-хлор-4,5-дифторфенил NH₂ 445 437,0 (M+H), CP 515 3-хлор-2-фторфенил NH₂ 445 419,0 (M+H), CP

516 2,4,5-трифторфенил NH₂ 445 421,1 (M+H) 517 2-фторфенил NH₂ 445 385,1 (M+H) 518 2,4,5-трифторфенил NH₂ 448 479,1 (M+H) 519 2,5-дифторфенил NH₂ 445 403,1 (M+H) 520 2-циано-5-метоксифенил NH₂ 448 462,1 (M+H) 521 2-циано-5-метоксифенил NH₂ 448 480,1 (M+H) 522 2-циано-5-метоксифенил NH₂ 445 422,1 (M+H) 523 2-хлор-3-фторфенил NH₂ 445 419,1 (M+H), CP 524 2-хлорфенил NH₂ 445 401,1 (M+H), CP

525 5-хлор-2-фторфенил NH₂ 448 463,1 (M+H), CP 526 2-хлор-4-фторфенил NH₂ 445 419,0 (M+H), CP 527 2-фтор-5-метоксифенил NH₂ 445 415,1 (M+H) 528 2-фтор-5-метилфенил NH₂ 448 457,1 (M+H) 529 2,5-дихлорфенил NH₂ 448 493,1 (M+H), CP 530 3-хлор-2,6-дифторфенил NH₂ 447 451,0 (M+H), CP 531 3-хлор-2,6-дифторфенил NH₂ 445 437,0 (M+H), CP

Типичные данные ЯМР для соединений примеров

Пример 519

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=7,27 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,52 (м, 1H), 7,51 (м, 1H), 7,70 (м, 1H), 8,27 (д, J=8,8 Гц, 2H), 9,14 (с, 1H), 11,13 (с, 1H).

Пример 520

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=1,14 (м, 2H), 1,31 (м, 2H), 2,71 (м, 1H), 3,88 (с, 3H), 7,23 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,33 (м, 1H), 7,52 (д, J=2,5 Гц, 1H), 8,00 (д, J=8,8 Гц), 8,23 (д, J=8,8 Гц, 2H), 11,02 (с, 1H).

Пример 527

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=3,88 (с, 3H), 7,21 (м, 1H), 7,26 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,33 (м, 1H), 8,27 (д, J=8,8 Гц, 2H), 9,13 (с, 1H), 11,10 (с, 1H).

Пример 531

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=7,30 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,38 (т, J=8,8 Гц, 1H), 7,94 (м, 1H), 8,31 (д, J=8,8 Гц, 2H), 9,14 (с, 1H), 11,24 (с, 1H).

Пример 532: 2-[4-(3-Метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенилсульфамоил]-бензамид

Искомое соединение выделяли в качестве дополнительного продукта в примере 490.

МС (ES+): m/e=409,0 (M+H).

Пример 533: 2-Хлор-N-[2-фтор-4-(3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-метоксибензолсульфонамид

Искомое соединение получали по методике, аналогичной описанной в примере 449, с использованием 2-хлор-N-[2-фтор-4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенил]-5-метоксибензолсульфонамида вместо 5-хлор-2,4-дифтор-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фенил]бензолсульфонамида.

МС (ES+): m/e=448,0 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 534: 2,5-Дихлор-N-[2-метокси-4-(3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-бензолсульфонамид

Искомое соединение получали по методике, аналогичной описанной в примере 449, с использованием 2,5-дихлор-N-[2-метокси-4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенил]-бензолсульфонамида вместо 5-хлор-2,4-дифтор-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фенил]бензолсульфонамида.

МС (ES+): m/e=464,2 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 535: 2,5-Дихлор-N-[4-(3-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-2-трифторметоксифенил]-бензолсульфонамид

Искомое соединение получали по методике, аналогичной описанной в примере 449, с использованием 2,5-дихлор-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-2-трифторметоксифенил]-бензолсульфонамида вместо 5-хлор-2,4-дифтор-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фенил]бензолсульфонамида.

МС (ES+): m/e=518,0 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 536: {6-[4-(2,5-Дихлорбензолсульфониламино)-фенил]-4-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-ил}-амид 3-гидроксициклобутанкарбоновой кислоты

К раствору 100 мг N-[4-(3-амино-4-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2,5-дихлорбензолсульфонамида и 23 мг 3-гидроксициклобутанкарбоновой кислоты в 1,5 мл ДМФ при КТ добавляли 0,1 мл триэтиламина и 45 мг хлорангидрида бис(2-оксо-3-оксазолидинил)фосфоновой кислоты (BOP-Cl). После перемешивания в течение 16 ч растворители удаляли и остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистое искомое соединение в виде его соли с трифторуксусной кислотой. Выход: 3 мг.

МС (ES+): m/e=547,2 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

По методике, аналогичной описанной в примере 536, синтезировали соединения примеров формулы Id

приведенные в таблице 4. В формулах групп -R1 в таблице 4 линия, пересеченная значком , означает свободную связь, с помощью которой группа -R1 связана с атомом углерода, находящимся в положении 3 пиразоло[3,4-d]пиримидиновой кольцевой системы. Т.е. в формуле полной молекулы конечная точка линии, пересеченной указанным значком, находится на атоме углерода, находящемся в положении 3 пиразоло[3,4-d]пиримидиновой кольцевой системы. Методикой ионизации при исследовании с помощью МС являлась ES+. CP означает данные для содержащего хлор фрагмента в масс-спектре.

Таблица 4.
Соединения примеров формулы Id Пример № МС (m/e) 537 503,1 (M+H), CP 538 531,1 (M+H), CP

539 545,1 (M+H), CP 540 607,0 (M+H), CP 541 547,1 (M+H), CP 542 573,1 (M+H), CP 543 553,2 (M+H), CP 544 545,1 (M+H), CP

Пример 545: N-[6-[4-[(2,5-Дихлорфенил)сульфониламино]фенил]-4-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-ил]тетрагидропиран-4-карбоксамид

К раствору 100 мг N-[4-(3-амино-4-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2,5-дихлорбензолсульфонамида в 2 мл пиридина добавляли 26 мг тетрагидропиран-4-карбонилхлорида и реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при КТ. Затем растворители удаляли при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистое искомое соединение в виде его соли с трифторуксусной кислотой. Выход: 12 мг.

МС (ES+): m/e=561,2 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 546: N-[6-[4-[(2,5-Дихлорфенил)сульфониламино]фенил]-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-ил]пиперидин-4-карбоксамид

Искомое соединение получали по методике, аналогичной описанной в примере 545, с использованием 1-трет-бутоксикарбонилпиперидин-4-карбоновой кислоты в присутствии хлорангидрида бис(2-оксо-3-оксазолидинил)фосфоновой кислоты (BOP-Cl) в качестве реагента сочетания вместо тетрагидропиран-4-карбонилхлорида и защитную группу удаляли с помощью ТФК.

МС (ES+): m/e=546,3 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 547: 2,5-Дихлор-N-(4-{4-метил-3-[(тетрагидропиран-4-илметил)-амино]-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил}-фенил)-бензолсульфонамид

К раствору 100 мг N-[4-(3-амино-4-метил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2,5-дихлорбензолсульфонамида и 20 мг тетрагидропиран-4-карбальдегида в 1 мл метанола при КТ добавляли 22 мг борогидрида натрия и 2 мкл уксусной кислоты. После перемешивания в течение 16 ч добавляли воду и реакционную смесь фильтровали через картридж Chem Elut^® при элюировании с помощью EtOAc. После удаления растворителей при пониженном давлении остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистое искомое соединение в виде его соли с трифторуксусной кислотой. Выход: 9 мг.

МС (ES+): m/e=547,2 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 548: N-{4-[3-(Бензиламино]-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]-фенил}-2,5-дихлорбензолсульфонамид

Искомое соединение получали по методике, аналогичной описанной в примере 547, с использованием бензальдегида вместо тетрагидропиран-4-карбальдегида.

МС (ES+): m/e=525,2 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 549: N-[4-(3-Амино-4-гидрокси-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-6-ил)фенил]-5-хлор-2,4-дифторбензолсульфонамид

(i) трет-Бутил-N-[4-[3,3-бис(метилсульфанил)проп-2-еноил]фенил]карбамат

К суспензии 2,45 г трет-бутилата натрия в 40 мл толуола при 0°C добавляли 3 г трет-бутил-N-(4-ацетилфенил)карбамата и 0,77 мл дисульфида углерода. После выдерживания в течение 4 ч при 0°C смесь перемешивали в течение 16 ч при КТ. Затем растворители удаляли при пониженном давлении и остаток растворяли в 40 мл сухого метанола. После добавления 1,6 мл метилйодида реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 30 мин, затем охлаждали до КТ и реакцию останавливали путем добавления 50 мл воды. Осадившийся продукт собирали фильтрованием, сушили при пониженном давлении и очищали с помощью хроматографии на силикагеле при элюировании в градиентном режиме с помощью Hep/EtOAc. Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Выход: 431 мг.

(ii) трет-Бутил-N-[4-(3-циано-4-метилсульфанил-2-оксо-3H-пиридин-6-ил)фенил]карбамат

К 3,5 мл iPrOH добавляли 56 мг гидрида натрия (60% в минеральном масле). После выдерживания в течение 10 мин при КТ добавляли 431 мг трет-бутил-N-[4-[3,3-бис(метилсульфанил)проп-2-еноил]фенил]карбамата и 107 мг 2-цианоацетамида и смесь кипятили с обратным холодильником в течение 4 ч. Затем, после охлаждения до КТ, добавляли воду и реакционную смесь нейтрализовывали путем добавления разбавленной хлористоводородной кислоты. Осадившийся продукт собирали фильтрованием и сушили при пониженном давлении. Выход: 386 мг.

(iii) 3-Амино-6-(4-аминофенил)-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-олгидрохлорид

К раствору 386 мг трет-бутил-N-[4-(3-циано-4-метилсульфанил-2-оксо-3H-пиридин-6-ил)фенил]карбамата в 2 мл iPrOH добавляли 2 мл раствора гидразина (35% в iPrOH) и реакционную смесь нагревали в течение 40 мин при 110°C с помощью микроволнового излучения (аппарат Biotage^® Initiator). Реакционную смесь охлаждали до КТ и разбавляли уксусной кислотой (20%). Осадившийся промежуточный продукт, трет-бутил-N-[4-(3-амино-4-гидрокси-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-6-ил)фенил]карбамат, собирали фильтрованием, сушили при пониженном давлении и растворяли в 10 мл этанольного раствора хлористоводородной кислоты (8M). После перемешивания в течение 30 мин при КТ реакционную смесь разбавляли толуолом (100 мл) и растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток еще 2 раза перегоняли с толуолом. После сушки при пониженном давлении продукт являлся достаточно чистым для следующей стадии реакции. Выход: 319 мг.

(iv) N-[4-(3-Амино-4-гидрокси-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-6-ил)фенил]-5-хлор-2,4-дифторбензолсульфонамид

К раствору 166 мг 3-амино-6-(4-аминофенил)-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-4-олгидрохлорида в 5 мл ДХМ и 145 мкл пиридина добавляли 148 мг 5-хлор-2,4-дифторбензолсульфонилхлорида. После перемешивания реакционной смеси в течение 16 ч при КТ растворители удаляли при пониженном давлении. Этот неочищенный продукт очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистое искомое соединение в виде его соли с трифторуксусной кислотой. Выход: 17 мг.

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=6,35 (с, 1H), 7,17 (д, J=8,7 Гц, 2H), 7,62 (д, J=8,7 Гц, 2H), 7,85 (т, J=7,2, 1H), 8,09 (т, J=7,2 Гц, 1H), 11,16 (с, 1H).

МС (ES-): m/e=450,1 (M-H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 550: N-[4-(3-Амино-4-гидрокси-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-6-ил)фенил]-2,5-дихлорбензолсульфонамид

Искомое соединение получали по методике, аналогичной описанной в примере 549, с использованием 2,5-дихлорбензолсульфонилхлорида вместо 5-хлор-2,4-дифторбензолсульфонилхлорида.

МС (ES+): m/e=450,1 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 551: 2,5-Дихлор-N-[6-[4-[(2,5-дихлорфенил)сульфониламино]фенил]-4-гидрокси-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-3-ил]бензолсульфонамид

Искомое соединение выделяли в качестве дополнительного продукта в примере 550.

МС (ES-): m/e=656,2, (M-H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 552: N-[4-(3-Амино-4-гидрокси-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-6-ил)фенил]-5-хлор-2-цианобензолсульфонамид

Искомое соединение получали по методике, аналогичной описанной в примере 549, с использованием 5-хлор-2-цианобензолсульфонилхлорида вместо 5-хлор-2,4-дифторбензолсульфонилхлорида.

МС (ES+): m/e=441,1 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 553: N-[4-(3-Амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-6-ил)фенил]-2-циано-5-метилбензолсульфонамид

(i) трет-Бутил-N-[4-(4-хлор-5-циано-2-пиридил)фенил]карбамат

Раствор 1,0 г 4,6-дихлорпиридин-3-карбонитрила, 1,8 г трет-бутил-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фенил]карбамата и 5,6 г карбоната цезия в 35 мл ДИОКС и 6 мл воды продували аргоном. Затем добавляли 338 мг БДФП и реакционную смесь нагревали при 100°C. Через 5 ч реакционную смесь охлаждали до КТ и разбавляли водой. После фильтрования через картридж Chem Elut^® при элюировании с помощью EtOAc растворители удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле при элюировании в градиентном режиме с помощью Hep/EtOAc. Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Выход: 2,1 г.

(ii) 6-(4-Аминофенил)-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-3-амингидрохлорид

К раствору 2,1 г трет-бутил-N-[4-(4-хлор-5-циано-2-пиридил)фенил]карбамата в 20 мл iPrOH добавляли 19,4 мл раствора гидразина (35% в iPrOH) и реакционную смесь нагревали в течение 25 мин при 80°C с помощью микроволнового излучения (аппарат Biotage^® Initiator). Реакционную смесь охлаждали до КТ и разбавляли уксусной кислотой (20%). Осадившийся промежуточный продукт, трет-бутил-N-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-6-ил)фенил]карбамат, собирали фильтрованием, сушили при пониженном давлении и растворяли в 10 мл этанольного раствора хлористоводородной кислоты (8M). После перемешивания в течение 30 мин при КТ реакционную смесь разбавляли толуолом (100 мл) и растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток еще 2 раза перегоняли с толуолом. После сушки при пониженном давлении продукт являлся достаточно чистым для следующей стадии реакции. Выход: 1,7 г.

(iii) N-[4-(3-амино-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-6-ил)фенил]-2-циано-5-метилбензолсульфонамид

К раствору 150 мг 6-(4-аминофенил)-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-3-амингидрохлорида в 3 мл ДХМ и 138 мкл пиридина добавляли 123 мг 2-циано-5-метилбензолсульфонилхлорида. После перемешивания реакционной смеси в течение 16 ч при КТ растворители удаляли при пониженном давлении. Этот неочищенный продукт очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистое искомое соединение. Выход: 22 мг.

МС (ES+): m/e=405,2 (M+H).

По методике, аналогичной описанной в примере 553, соединения примеров формулы Ie

приведенные в таблице 5 синтезировали, с использованием соответствующего сульфонилхлорида вместо 2-циано-5-метилбензолсульфонилхлорида. Методикой ионизации при исследовании с помощью МС являлась ES+. CP означает данные для содержащего хлор фрагмента в масс-спектре.

Таблица 5.
Соединения примеров формулы Ie Пример № Ar МС (m/e) 554 5-хлор-2-цианофенил 425,3 (M+H), CP 555 5-хлор-2,4-дифторфенил 436,1 (M+H), CP 556 2,5-дихлорфенил 434,1 (M+H), CP 557 2-хлор-3,5-дифторфенил 436,1 (M+H), CP 558 2,5-дихлортиофен-3-ил 440,1 (M+H), CP 559 5-хлор-2-фторфенил 418,1 (M+H), CP

Пример 560: 2,5-Дихлор-N-[6-[4-[(2,5-дихлорфенил)сульфониламино]фенил]-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-3-ил]бензолсульфонамид

Искомое соединение выделяли в качестве дополнительного продукта в примере 556.

МС (ES+): m/e=642,0 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 561: 2-Циано-5-метил-N-[4-(3-метил-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-6-ил)фенил]бензолсульфонамид

(i) трет-Бутил-N-[4-(5-ацетил-4-хлор-2-пиридил)фенил]карбамат

Раствор 200 мг 1-(4,6-дихлор-3-пиридил)этанон, 335 мг трет-бутил-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фенил]карбамата и 1,0 г карбоната цезия в 6 мл ДИОКС и 1 мл воды продували аргоном. Затем добавляли 62 мг БДФП и реакционную смесь нагревали при 100°C. Через 2 ч реакционную смесь охлаждали до КТ и разбавляли водой. После фильтрования через картридж Chem Elut^® при элюировании с помощью EtOAc растворители удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле при элюировании в градиентном режиме с помощью Hep/EtOAc. Фракции, содержащие продукт, объединяли и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Выход: 290 мг.

(ii) 4-(3-Метил-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-6-ил)анилингидрохлорид

К раствору 290 мг трет-бутил-N-[4-(5-ацетил-4-хлор-2-пиридил)фенил]карбамата в 3 мл iPrOH добавляли 2,8 мл раствора гидразина (35% в iPrOH) и реакционную смесь нагревали в течение 15 мин при 80°C с помощью микроволнового излучения (аппарат Biotage^® Initiator). Реакционную смесь охлаждали до КТ и разбавляли уксусной кислотой (20%). Осадившийся промежуточный продукт, трет-бутил-N-[4-(3-метил-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-6-ил)фенил]карбамат, собирали фильтрованием, сушили при пониженном давлении и растворяли в 5 мл этанольного раствора хлористоводородной кислоты (8M). После перемешивания в течение 1 ч при КТ реакционную смесь разбавляли толуолом (100 мл) и растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток еще 2 раза перегоняли с толуолом. После сушки при пониженном давлении продукт являлся достаточно чистым для следующей стадии реакции. Выход: 170 мг.

(iii) 2-Циано-5-метил-N-[4-(3-метил-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-6-ил)фенил]бензолсульфонамид

К раствору 170 мг 6-(4-аминофенил)-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-3-амингидрохлорида в 4 мл ДХМ и 180 мкл пиридина добавляли 140 мг 2-циано-5-метилбензолсульфонилхлорида. После перемешивания реакционной смеси в течение 16 ч при КТ растворители удаляли при пониженном давлении. Этот неочищенный продукт очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистое искомое соединение. Выход: 44 мг.

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=2,48 (с, 3H), 2,57 (с, 3H), 7,23 (д, J=8,9 Гц, 2H), 7,65 (д, J=8,9 Гц, 1H), 7,86 (с, 1H), 7,96 (д, J=8,9 Гц, 2H), 8,02 (д, J=8,9 Гц, 2H), 9,12 (с, 1H), 10,98 (с, 1H).

МС (ES+): m/e=404,2 (M+H).

Пример 562: 5-Хлор-2-циано-N-[4-(3-метил-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-6-ил)фенил]бензолсульфонамид

Искомое соединение получали по методике, аналогичной описанной в примере 561, с использованием 5-хлор-2-цианобензолсульфонилхлорида вместо 2-циано-5-метилбензолсульфонилхлорида.

МС (ES+): m/e=424,1 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 563: 2,5-Дихлор-N-[4-(1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-6-ил)фенил]бензолсульфонамид

(i) 2,5-Дихлор-N-[4-(4-хлор-5-формил-2-пиридил)фенил]бензолсульфонамид

Раствор 60 мг 4,6-дихлорпиридин-3-карбальдегида, 146 мг 2,5-дихлор-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фенил]бензолсульфонамида и 333 мг карбоната цезия в 2 мл ДИОКС и 0,3 мл воды продували аргоном. Затем добавляли 20 мг БДФП и реакционную смесь нагревали при 100°C. Через 2 ч реакционную смесь охлаждали до КТ и разбавляли водой. После фильтрования через картридж Chem Elut^® при элюировании с помощью EtOAc растворители удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки. Выход: 190 мг.

(ii) 2,5-Дихлор-N-[4-(1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-6-ил)фенил]бензолсульфонамид

К раствору 190 мг 2,5-дихлор-N-[4-(4-хлор-5-формил-2-пиридил)фенил]бензолсульфонамида в 3 мл iPrOH добавляли 1,45 мл раствора гидразина (35% в iPrOH) и реакционную смесь нагревали в течение 40 мин при 120°C с помощью микроволнового излучения (аппарат Biotage^® Initiator). Реакционную смесь охлаждали до КТ и разбавляли уксусной кислотой (20%). Осадок собирали фильтрованием и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистое искомое соединение в виде его соли с трифторуксусной кислотой. Выход: 12 мг.

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=7,30 (д, J=8,7 Гц, 2H), 7,70 (д, J=8,7 Гц, 1H), 7,74 (м, 2H), 7,96 (д, J=8,7 Гц, 2H), 8,03 (с, 1H), 8,12 (с, 1H), 8,40 (с, 1H), 9,33 (с, 1H), 10,98 (с, 1H).

МС (ES+): m/e=419,1 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 564: 5-Циано-2-метил-N-[4-(1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-6-ил)-фенил]-бензолсульфонамид

Искомое соединение получали по методике, аналогичной описанной в примере 563, с использованием 5-циано-2-метил-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-фенил]-бензолсульфонамида вместо 2,5-дихлор-N-[4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фенил]бензолсульфонамида.

МС (ES+): m/e=390,2 (M+H).

Пример 565: 1-[(4-Хлорфенил)метил]-3-[6-[4-[(2,5-дихлорфенил)сульфониламино]фенил]-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-ил]мочевина

К раствору 80 мг N-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2,5-дихлорбензолсульфонамида в 2 мл ДИОКС добавляли 31 мг 1-хлор-4-изоцианатометилбензола и 21 мг 1,3-диметилимидазолидин-2-она и реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при КТ. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и неочищенный продукт очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистое искомое соединение в виде его соли с трифторуксусной кислотой. Выход: 102 мг.

МС (ES+): m/e=602,1 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 566: 1-[6-[4-[(2,5-Дихлорфенил)сульфониламино]фенил]-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-ил]-3-(тетрагидропиран-4-илметил)мочевина

Искомое соединение получали по методике, аналогичной описанной в примере 565.

МС (ES+): m/e=576,2 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 567: 2,5-Дихлор-N-[4-[3-(диэтиламино)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил]фенил]бензолсульфонамид

К раствору 80 мг N-[4-(3-амино-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-2,5-дихлорбензолсульфонамида при КТ добавляли 41 мг ацетальдегида в 5 мл 1,2-дихлорэтана, 22 мг триацетоксиборогидрида натрия и 2 мкл уксусной кислоты. После перемешивания в течение 16 ч добавляли воду и реакционную смесь фильтровали через картридж Chem Elut^® при элюировании с помощью EtOAc. После удаления растворителей при пониженном давлении остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистое искомое соединение в виде его соли с трифторуксусной кислотой. Выход: 15 мг.

МС (ES+): m/e=491,1 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

Пример 568: N-[4-(3-Амино-4-трифторметил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2-фторбензолсульфонамид

(i) Этил-2-циано-4,4,4-трифтор-3-гидроксибут-2-еноат

К раствору 19,2 мл ангидрида трифторуксусной кислоты в 300 мл ДХМ добавляли 12,3 мл цианоксусной кислоты этилового эфира. Затем при 0°C по каплям добавляли 40 мл триэтиламина и реакционной смеси давали нагреться до КТ и ее перемешивали в течение 1 ч. Реакционную смесь подкисляли разбавленным вдвое концентрированным водным раствором хлористоводородной кислоты до pH 1 и смесь экстрагировали с помощью ДХМ (3×200 мл). Объединенные органические слои промывали водой, сушили над сульфатом магния и растворители удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт использовали на следующей стадии реакции. Выход: 30 г.

(ii) Этил 3-хлор-2-циано-4,4,4-трифторбут-2-еноат

К раствору 30 г этил-2-циано-4,4,4-трифтор-3-гидроксибут-2-еноата в 300 мл ДХМ при 0°C по каплям медленно добавляли 64 мл оксалилхлорида. Затем реакционной смеси давали нагреться до КТ, ее перемешивали в течение 1 ч и добавляли 0,3 мл пиридина. Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 4 ч, затем охлаждали до КТ и выливали в 500 мл воды со льдом. Органическую фазу отделяли и водную фазу экстрагировали с помощью ДХМ (2×100 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и растворители удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт использовали на следующей стадии реакции. Выход: 28 г.

(iii) 4-Гидрокси-2-(4-нитрофенил)-6-(трифторметил)-пиримидин-5-карбонитрил

К смеси 21 г этил 3-хлор-2-циано-4,4,4-трифторбут-2-еноата и 7,6 г 4-нитробензимидамида в 300 мл воды добавляли 31 мл водного раствора гидроксида натрия (2M). Реакционную смесь перемешивали при КТ в течение 4 ч, затем разбавляли с помощью 200 мл воды, подкисляли разбавленным вдвое концентрированным водным раствором хлористоводородной кислоты до pH 3 и экстрагировали с помощью EtOAc (3×500 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и растворители удаляли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали с помощью хроматографии на силикагеле при элюировании в градиентном режиме с помощью EtOAc/метанол. Выход: 2,7 г.

(iv) 4-Хлор-2-(4-нитрофенил)-6-(трифторметил)-пиримидин-5-карбонитрил

К раствору 660 мг 4-гидрокси-2-(4-нитрофенил)-6-(трифторметил)-пиримидин-5-карбонитрила в 2,92 мл оксихлорида фосфора добавляли 0,3 мл диметилфениламина. Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 30 мин, затем охлаждали до КТ и концентрировали при пониженном давлении. После добавления воды со льдом и разбавления с помощью ДХМ добавляли насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия и смесь экстрагировали с помощью ДХМ (3×100 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и растворители удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт использовали в следующей реакции без дополнительной очистки. Выход: 700 мг.

(v) 6-(4-Нитрофенил)-4-(трифторметил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-амин

К раствору 700 мг 4-хлор-2-(4-нитрофенил)-6-(трифторметил)-пиримидин-5-карбонитрила в 10 мл iPrOH добавляли 2,4 мл гидразингидрата (64% в воде) и реакционную смесь нагревали в течение 4 ч при 100°C. Реакционную смесь охлаждали до КТ и разбавляли уксусной кислотой (20%). Осадившийся продукт собирали фильтрованием и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистое искомое соединение в виде его соли с трифторуксусной кислотой. Выход: 85 мг.

(vi) трет-Бутил-3-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-6-(4-нитрофенил)-4-(трифторметил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-карбоксилат

К суспензии 85 мг 6-(4-нитрофенил)-4-(трифторметил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-амина в 30 мл ДХМ добавляли 2 г ди-трет-бутилдикарбоната, 0,1 мл триэтиламина и 3 мг диметилпиридин-4-иламина. Смесь перемешивали в течение 16 ч при КТ, затем реакцию останавливали путем добавления воды и разбавляли с помощью ДХМ. После отделения органического слоя водный слой экстрагировали с помощью ДХМ (3×200 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и растворители удаляли при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт использовали без дополнительной очистки в следующей реакции. Выход: 170 мг.

(vii) трет-Бутил-6-(4-аминофенил)-3-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-4-(трифторметил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-карбоксилат

К раствору 170 мг трет-бутил-3-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-6-(4-нитрофенил)-4-(трифторметил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-карбоксилата, полученного на предыдущей стадии, в 40 мл EtOAc в атмосфере аргона добавляли 30 мг Pd/C (10%) и суспензию перемешивали в атмосфере водорода (2 бар) в течение 1 ч. Суспензию фильтровали через слой целита^® и промывали с помощью EtOAc. Неочищенный продукт после выпаривания растворителя получали в виде коричневого твердого вещества и сушили при пониженном давлении. Выход: 160 мг.

(viii) N-[4-(3-Амино-4-трифторметил-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-6-ил)-фенил]-5-хлор-2-фторбензолсульфонамид

К раствору 160 мг трет-бутил-6-(4-аминофенил)-3-(бис(трет-бутоксикарбонил)амино)-4-трифторметил)-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-карбоксилата в 5 мл ДХМ и 43 мкл пиридина добавляли 63 мг 5-хлор-2-фторбензолсульфонилхлорида. После перемешивания реакционной смеси в течение 16 ч при КТ растворители удаляли при пониженном давлении. Остаток растворяли в 10 мл ДХМ и 1 мл ТФК и перемешивали в течение 2 ч при КТ. Затем добавляли толуол и растворители удаляли при пониженном давлении и получали коричневое твердое вещество. Этот неочищенный продукт очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка C18 с обращенной фазой, элюирование смесью вода/MeCN в градиентном режиме с добавлением 0,1% ТФК). Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали и получали чистое искомое соединение в виде его соли с трифторуксусной кислотой. Выход: 23 мг.

МС (ES+): m/e=487,0 (M+H), данные для содержащего хлор фрагмента.

По методике, аналогичной описанной в примере 568, синтезировали соединения примеров формулы If

приведенные в таблице 6, с использованием соответствующего сульфонилхлорида вместо 5-хлор-2-фторбензолсульфонилхлорида. Методикой ионизации при исследовании с помощью МС являлась ES+. CP означает данные для содержащего хлор фрагмента в масс-спектре.

Таблица 6.
Соединения примеров формулы If Пример № Ar МС (m/e) 569 2-циано-5-метилфенил 474,1 (M+H) 570 5-хлор-2-цианофенил 494,0 (M+H), CP 571 2-циано-5-метоксифенил 490,1 (M+H) 572 2,5-дихлортиофен-3-ил 508,9 (M+H), CP 573 2,3,5-трифторфенил 489,1 (M+H) 574 5-хлор-2,4-дифторфенил 505,0 (M+H), CP 575 2-фторфенил 453,1 (M+H)

576 2-хлор-3,5-дифторфенил 505,0 (M+H), CP 577 2-хлор-4-фторфенил 487,0 (M+H), CP 578 3-хлор-2-фторфенил 487,0 (M+H), CP 579 2,5-дихлорфенил 503,0 (M+H), CP 580 2-фтор-5-метилфенил 467,1 (M+H) 581 2-хлор-5-метоксифенил 499,0 (M+H), CP 582 2,5-дифторфенил 471,0 (M+H) 583 2-хлорфенил 469,0 (M+H), CP 584 2,4,5-трифторфенил 489,1 (M+H)

По методикам, аналогичным описанным в приведенных выше примерах, синтезировали соединения примеров формулы Ib

приведенные в таблице 7. В формулах групп -Z-R3 в таблице 7 линия, пересеченная значком , означает свободную связь, с помощью которой группа -Z-R3 связана с атомом углерода, находящимся в положении 4 пиразоло[3,4-d]пиримидиновой кольцевой системы. Т.е. в формуле полной молекулы конечная точка линии, пересеченной указанным значком, находится на атоме углерода, находящемся в положении 4 пиразоло[3,4-d]пиримидиновой кольцевой системы. В столбце "Синтез" номер примера указан по аналогии с тем, в котором проводили синтез. Методикой ионизации при исследовании с помощью МС являлась ES+. CP означает данные для содержащего хлор фрагмента в масс-спектре.

Таблица 7.
Соединения примеров формулы Ib Пример № Ar R1 Синтез Выход (%) МС (m/e) 585 2-фторфенил CH₃ 3
(a) 31 523,2 (M+H) 586 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 6 544,2 (M+H) 587 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3
(a) 29 545,1 (M+H), CP 588 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 7 557,1 (M+H), CP 589 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 25 525,1 (M+H)

590 2,5-дихлорфенил CH₃ 3
(a) 18 561,0 (M+H), CP 591 2-фторфенил CH₃ 3
(a) 22 511,1 (M+H) 592 2,5-дифторфенил CH₃ 3
(a) 24 529,1 (M+H) 593 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 21 541,1 (M+H) 594 5-хлор-2,4-дифторфенил NH₂ 7 28 495,0 (M+H), CP 595 2-фтор-5-метилфенил NH₂ 7 29 457,1 (M+H)

596 2-фтор-5-метилфенил NH₂ 7 24 443,1 (M+H) 597 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3
(a) 13 527,0 (M+H), CP 598 2-фторфенил CH₃ 3
(a) 10 493,0 (M+H) 599 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 9 539,0 (M+H), CP 600 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 7 507,1 (M+H) 601 2,5-дихлорфенил CH₃ 3
(a) 5 543,2 (M+H), CP

602 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 15 523,3 (M+H) 603 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 8 514,1 (M+H) 604 2,5-дифторфенил CH₃ 3
(a) 13 511,2 (M+H) 605 2-хлор-4,5-дифторфенил NH₂ 7 34 495,0 (M+H), CP 606 2-фторфенил NH₂ 7 22 429,0 (M+H) 607 2-фторфенил NH₂ 7 32 443,1 (M+H) 608 2-фтор-5-метоксифенил NH₂ 7 33 459,2 (M+H)

609 2-фтор-5-метоксифенил NH₂ 7 29 473,3 (M+H) 610 2-хлор-5-метоксифенил NH₂ 7 36 475,3 (M+H), CP 611 2-хлор-5-метоксифенил NH₂ 7 34 489,2 (M+H), CP 612 2,4,5-трифторфенил NH₂ 7 32 465,0 (M+H) 613 2,4,5-трифторфенил NH₂ 7 46 479,0 (M+H) 614 2-хлор-4,5-дифторфенил NH₂ 7 35 481,1 (M+H), CP 615 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3
(a) 37 518,2 (M+H), CP

616 2-фторфенил CH₃ 3
(a) 53 484,2 (M+H) 617 2,5-дихлорфенил CH₃ 3
(a) 24 534,2 (M+H), CP 618 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3
(a) 29 587,3 (M+H), CP 619 2-фторфенил CH₃ 3
(a) 36 553,4 (M+H) 620 2,5-дихлорфенил CH₃ 3
(a) 36 603,3 (M+H), CP

621 2,5-дифторфенил CH₃ 3
(a) 36 571,3 (M+H) 622 2,5-дифторфенил CH₃ 3
(a) 28 525,2 (M+H) 623 2,5-дихлорфенил CH₃ 3
(a) 10 557,2 (M+H), CP 624 2-фторфенил CH₃ 3
(a) 37 507,3 (M+H) 625 2,5-дифторфенил CH₃ 3
(a) 54 502,2 (M+H)

626 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3
(a) 5 573,3 (M+H), CP 627 2-фторфенил CH₃ 3
(a) 4 539,3 (M+H) 628 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 9 585,3 (M+H), CP 629 2,5-дихлорфенил CH₃ 3
(a) 41 589,3 (M+H), CP

630 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 3 569,4 (M+H) 631 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 37 567,4 (M+H) 632 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 36 599,4 (M+H), CP 633 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 31 583,4 (M+H)

634 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3
(a) 2 541,2 (M+H), CP 635 2,5-дихлорфенил CH₃ 3 23 587,2 (M+H), CP 636 5-хлор-2,4-дифторфенил CH₃ 3 25 589,3 (M+H), CP 637 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3 24 571,3 (M+H), CP 638 2-хлор-3,5-дифторфенил CH₃ 3 22 589,3 (M+H), CP 639 2,4,5-трифторфенил CH₃ 3 28 573,3 (M+H)

640 2-хлор-4,5-дифторфенил CH₃ 3 30 589,3 (M+H), CP 641 2-циано-5-метоксифенил CH₃ 3 12 574,3 (M+H) 642 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3 23 567,3 (M+H) 643 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3 17 583,3 (M+H), CP 644 2,5-дифторфенил CH₃ 3
(a) 28 557,3 (M+H)

645 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 9 574,3 (M+H) 646 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3
(a) 12 559,3 (M+H), CP 647 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 8 560,4 (M+H) 648 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 12 553,4 (M+H) 649 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3
(a) 12 530,2 (M+H), CP

650 2,5-дихлорфенил CH₃ 3
(a) 21 546,2 (M+H), CP 651 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 12 553,3 (M+H), CP 652 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 4 528,3 (M+H) 653 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 9 537,3 (M+H) 654 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 13 521,3 (M+H) 655 2-фторфенил CH₃ 3
(a) 3 493,2 (M+H)

656 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 6 507,2 (M+H) 657 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 5 514,3 (M+H) 658 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 4 555,3 (M+H) 659 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 7 546,3 (M+H) 660 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 26 571,3 (M+H), CP

661 2,5-дифторфенил CH₃ 3
(a) 2 543,3 (M+H) 662 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 4 458,3 (M+H) 663 2-фторфенил CH₃ 3
(a) 9 428,3 (M+H) 664 2,5-дихлорфенил CH₃ 3
(a) 4 478,2 (M+H), CP 665 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 33 537,3 (M+H) 666 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3
(a) 21 541,3 (M+H), CP

667 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 12 528,4 (M+H) 668 2,5-дифторфенил CH₃ 3
(a) 34 525,3 (M+H) 669 2,5-дихлорфенил CH₃ 3
(a) 3 557,2 (M+H), CP 670 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 3 553,3 (M+H), CP 671 2-фторфенил CH₃ 3
(a) 4 505,4 (M+H)

672 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 4 519,4 (M+H) 673 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 3 449,3 (M+H) 674 2,5-дифторфенил CH₃ 3
(a) 2 446,2 (M+H) 675 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 5 474,2 (M+H), CP 676 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3
(a) 6 462,2 (M+H), CP 677 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 4 442,2 (M+H)

678 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 35 522,2 (M+H) 679 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3
(a) 30 526,2 (M+H), CP 680 2-фторфенил CH₃ 3
(a) 28 492,2 (M+H) 681 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 36 538,2 (M+H), CP 682 2,5-дифторфенил CH₃ 3
(a) 17 510,2 (M+H) 683 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 34 506,2 (M+H)

684 2,5-дихлорфенил CH₃ 3
(a) 12 542,2 (M+H), CP 685 2-циано-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 20 513,3 (M+H) 686 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 37 513,3 (M+H) 687 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3
(a) 21 533,2 (M+H), CP 688 2-фторфенил CH₃ 3
(a) 46 499,3 (M+H) 689 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 25 545,3 (M+H), CP

690 2,5-дихлорфенил CH₃ 3
(a) 26 549,2 (M+H), CP 691 2,5-дифторфенил CH₃ 3
(a) 54 517,2 (M+H) 692 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 37 529,3 (M+H) 693 2-фтор-5-метилфенил CH₃ 3
(a) 28 534,3 (M+H) 694 5-хлор-2-фторфенил CH₃ 3
(a) 40 554,2 (M+H), CP 695 2-фторфенил CH₃ 3
(a) 60 520,2 (M+H)

696 2,5-дихлорфенил CH₃ 3
(a) 39 570,2 (M+H), CP 697 2,5-дифторфенил CH₃ 3
(a) 43 538,2 (M+H) 698 2-фтор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 55 550,2 (M+H) 699 2-хлор-5-метоксифенил CH₃ 3
(a) 49 566,2 (M+H), CP

(a) На стадии (ii) методики примера 3 гидроксид калия и диметилсульфоксид использовали вместо гидрида натрия и тетрагидрофурана.

Типичные данные ЯМР для соединений примеров

Пример 597

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=2,54 (с, 1H), 2,60 (с, 3H), 6,44-6,50 (м, 1H), 7,22 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,49 (т, J=9,5 Гц, 1H), 7,60-7,67 (м, 2H), 7,74-7,79 (м, 1H), 7,87 (дд, J=2,7, 6,0 Гц, 1H), 8,08 (д, J=8,8 Гц, 2H), 11,11 (с, 1H), 13,63 (с, 1H).

Пример 600

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=2,32 (с, 3H), 2,54 (с, 1H), 2,60 (с, 3H), ), 6,44-6,49 (м, 1H), 7,20 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,27 (дд, J=8,4, 10,3 Гц, 1H), 7,44-7,48 (м, 1H), 7,60-7,65 (м, 2H), 7,71 (дд, J=2,1, 6,9 Гц, 1H), 8,05 (д, J=8,8 Гц, 2H), 10,92 (с, 1H), 13,61 (с, 1H).

Пример 646

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=1,70-1,91 (м, 2H), 1,94-2,14 (м, 2H), 2,05 (с, 3H), 2,51 (с, 3H), 3,48-3,72 (м, 4H), 5,69-5,76 (м, 1H), 7,27 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,51 (т, J=9,2 Гц, 1H), 7,76-7,82 (м, 1H), 7,87 (дд, J=2,6, 6,0 Гц, 1H), 8,31 (д, J=8,8 Гц, 2H), 11,10 (с, 1H), 13,42 (шир., 1H).

Пример 658

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=1,70-1,90 (м, 2H), 1,95-2,12 (м, 2H), 2,05 (с, 3H), 2,52 (с, 3H), 3,49-3,72 (м, 4H), 3,78 (с, 3H), 5,68-5,75 (м, 1H), 7,20-7,25 (м, 1H), 7,26 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,31-7,38 (м, 2H), 8,29 (д, J=8,8 Гц, 2H), 10,96 (с, 1H), 13,41 (шир., 1H).

Пример 661

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆): δ (част./млн)=1,70-1,90 (м, 2H), 1,95-2,13 (м, 2H), 2,05 (с, 3H), 2,51 (с, 3H), 3,50-3,72 (м, 4H), 5,69-5,75 (м, 1H), ), 7,27 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,52 (дт, J=4,2, 9,2 Гц, 1H), 7,56-7,63 (м, 1H), 7,69-7,74 (м, 1H), 8,29 (д, J=8,8 Гц, 2H), 11,10 (с, 1H), 13,42 (с, 1H).

Фармакологические исследования

Способность соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, ингибировать SGK-1 определяли путем исследования ферментативной активности путем изучения их влияния на способность изолированного фермента SGK катализировать перенос фосфата от аденозинтрифосфата (АТФ) к серин/треониновым остаткам меченого субстратного пептида и путем исследования с использованием клеток для изучения их влияния на функцию клеток. В одном из исследований с использованием клеток изучали зависимое от SGK-1 фосфорилирование гликогенсинтазыкиназы 3beta (GSK3beta) в клетках U2OS, в другом, функциональном электрофизиологическом исследовании, изучали зависимую от SGK-1 активацию токов эпителиального Na⁺ канала (ENaC) в монослоях клеток A6 и в еще одном изучали гипертрофическую дифференциацию хондроцитов в хондрогенных клетках ATDC5 мышей.

A) Исследование ферментативной активности

Ингибирующую активность соединений по отношению к сывороточной и регулируемой глюкокортикоидами киназе 1 (SGK-1) изучали путем исследования фосфорилирования субстрата, предназначенного для определения способности изолированного фермента катализировать перенос фосфата от АТФ к серин/треониновым остаткам меченого флуоресцеином субстратного пептида с использованием рекомбинантного фермента SGK-1 человека, полученного в бакуловирусной системе (Biomol, Hamburg, Germany, Cat. No. 4-331). Синтезированный меченый флуоресцеином субстратный пептид содержал (5(6)-карбоксифлуоресцеин)-RPRAATF-NH₂. Фосфорилированный субстратный пептид и нефосфорилированный субстратный пептид разделяли с помощью использующей чипы технологии фирмы Caliper life science, основанной на микропотоках жидкостей. Все потоки жидкостей вводили в чипы с помощью вакуума порядка нескольких фунт-сила/дюйм², действующего на канал, подающий жидкость из различных источников через взаимосвязанные каналы. Поскольку фосфорильные группы обладают зарядом, равным -2, под действием приводимого в действие давлением гидродинамического потока и приводимого в действие напряжением потока в электрическом поле пептидный субстрат, содержащий флуоресцентную метку, и продукт его фосфорилирования в период регистрации появляются в положении регистрации в разные моменты времени. Таким образом метаболизм субстрата можно определить, как отношение площади пика продукта к сумме площади пика субстрата и площади пика продукта.

Реакцию фермента проводили в буфере, содержащем 25 мМ Tris-HCl (pH 7,4), 5 мМ MgCl₂, 2 мМ MnCl₂, 2 мМ ДТТ (дитиотреитол) и 0,03% бычьего сывороточного альбумина. Фермент предварительно инкубировали с исследуемым соединением в течение 30 мин при 24°C. Реакцию киназы инициировали путем добавления смеси субстрата, содержащей субстратный пептид (конечная концентрация 1 мкМ) и АТФ (конечная концентрация 10 мкМ). После инкубирования в течение 60 мин при 37°C реакцию фермента останавливали путем добавления буфера, содержащего 100 мМ Hepes (pH 7,4) и 35 мМ ЭДТУ (этилендиаминтетрауксусная кислота).

Для определения ответа на дозу соединения 10 мМ исходный раствор ДМСО разводили и исследовали с помощью проводимой дважды группы исследований при 10 значениях с трехкратным разведением, начиная с конечной концентрации, равной 30 мкМ. Данные анализировали путем четрыхпараметрической аппроксимации зависимости с фиксированным минимумом и максимумом, экспериментально определенным, как среднее значение для положительного и отрицательного контролей для каждого планшета. Значения IC₅₀ (в мкМ (микромоль/л)) для ингибирования SGK-1, полученные в этом исследовании, приведены в таблице 8.

Таблица 8.
Значения IC₅₀ для ингибирования ферментативной активности SGK-1 приведенными в качестве примеров соединениями Пример № IC₅₀ [мкМ] 1 <0,0012 2 0,0057 3 <0,0012 4 <0,0015 5 <0,0012 6 0,0065

7 <0,0015 8 0,0089 10 <0,0012 11 0,0019 12 0,051 13 0,0064 14 0,0063 15 <0,0012 16 <0,0012 17 <0,0012 19 0,0091 20 0,039 21 0,0015 22 0,080 23 <0,0012 24 <0,0012 25 <0,0012 26 <0,0012 27 <0,0012 31 0,0023 32 0,0051 34 0,0036 35 0,0032 36 <0,0012 37 0,0045 39 <0,0012 40 <0,0012

41 <0,0012 42 0,0014 43 <0,0015 44 0,0079 45 0,0025 46 <0,0012 47 0,020 48 0,0042 49 0,19 50 <0,0012 51 <0,0012 52 <0,0012 53 0,0034 54 0,014 55 0,0024 56 0,032 57 0,0083 58 0,0071 59 0,12 60 0,0040 61 <0,0012 62 <0,0012 63 <0,0012 64 0,0042 65 0,074 66 0,018 67 0,014

68 0,017 69 0,016 70 0,058 71 0,16 72 0,083 73 0,0067 74 0,0055 75 0,0048 76 0,0057 77 0,0039 78 0,0036 79 <0,0015 80 <0,0015 81 0,011 82 0,012 83 0,0020 84 0,0032 85 0,0041 86 0,011 87 0,0068 88 0,0067 89 <0,0015 90 0,0022 91 <0,0015 92 0,0021 93 2,4 94 8,1

95 <0,0015 96 <0,0015 97 0,0020 98 0,0017 99 0,0014 100 0,0011 101 0,0021 102 0,0017 103 0,0023 104 0,085 105 0,14 106 2,7 107 0,0025 108 0,025 109 0,016 110 0,014 111 0,029 112 0,0033 113 0,0030 114 0,0077 115 0,0037 116 <0,0015 117 0,0023 118 0,0025 119 <0,0015 120 <0,0015 121 <0,0015

122 <0,0015 123 0,0099 124 0,024 125 0,0020 126 0,046 127 0,0043 128 0,0027 129 <0,0015 130 0,013 131 0,0049 132 0,017 133 <0,0015 134 <0,0015 135 0,012 136 0,041 137 0,018 138 0,044 139 0,082 140 0,0015 141 0,0065 142 0,0012 143 0,010 144 0,0035 145 0,0041 146 0,047 147 0,0015 148 0,017

149 <0,0015 150 <0,0015 151 <0,0015 152 <0,0015 153 <0,0015 154 0,0016 155 <0,0015 156 <0,0015 157 <0,0015 158 0,0074 159 0,0061 160 0,010 161 0,019 162 0,018 163 0,0085 164 0,040 165 0,11 166 4,5 167 2,7 168 0,38 169 0,11 170 0,054 171 0,040 172 0,86 173 0,33 174 0,46 175 0,019

176 2,1 178 0,35 179 2,2 181 23 182 2,1 183 6,5 184 1,2 185 0,87 186 1,9 187 6,2 188 0,0034 189 0,0051 190 0,0047 191 0,021 192 0,0028 193 0,0020 194 0,0023 195 0,0054 196 0,0046 197 0,0030 198 <0,0015 199 0,026 200 27 202 15 203 <0,0015 204 <0,0015 205 0,70

206 1,1 207 <0,0015 208 0,0082 209 <0,0015 210 <0,0015 211 0,0023 212 <0,0015 213 0,0064 214 0,069 215 <0,0015 216 1,9 217 0,0091 218 <0,0015 219 <0,0015 220 <0,0015 221 <0,0015 222 0,0027 223 <0,0015 224 <0,0015 225 0,0026 226 0,0025 227 <0,0015 228 0,0031 229 1,0 230 0,0052 231 1,3 232 0,0095

233 0,00085 234 <0,00051 235 0,016 236 0,0050 237 0,016 238 0,18 239 0,0048 240 0,027 241 0,072 242 0,0034 243 0,0034 244 0,0029 245 0,0037 246 0,0068 247 0,0065 248 0,0041 249 0,0030 250 0,026 251 0,0021 252 0,0011 253 0,0017 254 0,0015 255 0,0019 256 0,0013 257 0,0015 258 0,0028 259 0,0013

260 0,0029 261 0,00076 262 0,055 263 0,099 264 0,0012 265 0,00059 266 0,0032 287 0,0045 288 0,0023 289 0,023 290 0,0033 291 0,0025 292 0,014 293 0,0032 294 0,0035 295 0,0026 296 0,0027 297 0,0018 298 0,0023 299 0,0033 300 0,0011 301 0,0015 302 0,0019 303 0,0022 304 0,0023 305 0,010 306 0,0071

307 0,58 308 0,0062 309 0,0028 310 0,13 311 0,24 312 0,0060 313 0,0020 314 0,0045 315 0,0079 316 0,48 317 0,011 318 0,95 319 0,0045 320 0,0037 321 0,0069 322 0,0026 323 0,012 324 0,33 325 1,1 326 0,0091 327 0,42 328 0,17 329 0,69 330 0,10 331 0,29 332 0,027 333 0,014

334 0,020 335 0,0083 336 0,0055 337 1,4 338 0,0016 339 0,0013 340 0,0043 341 0,0049 342 0,0060 343 0,0038 344 0,0050 345 0,0048 346 0,0032 347 0,0034 348 0,0081 349 0,0084 350 0,0049 351 0,0038 352 0,011 353 0,0038 354 0,11 355 0,013 357 0,0036 358 0,0027 359 0,0024 360 0,11 361 0,0018

362 0,0038 363 0,034 364 0,0065 365 0,0027 366 0,022 367 0,0055 368 0,0021 369 0,0023 370 0,020 371 0,0039 372 0,049 373 0,0061 374 0,0046 375 0,010 376 0,0057 377 0,0053 378 0,0058 379 0,0028 380 0,012 381 5,6 382 0,27 383 0,86 385 0,24 386 0,27 387 0,080 388 0,087 389 0,20

390 0,12 391 0,0096 392 0,0069 393 1,0 394 0,12 396 0,39 397 0,0082 398 0,025 399 0,0042 400 0,0086 401 0,0053 402 0,013 403 0,0057 404 0,0047 405 0,0041 406 0,0047 407 0,011 408 0,0063 417 0,0086 418 0,040 419 0,026 420 0,74 421 0,028 422 0,040 423 0,66 424 0,013 425 0,048

426 0,011 434 0,0018 435 0,092 436 0,13 437 0,10 438 0,085 439 0,0025 440 <0,0015 441 0,021 442 0,029 443 0,094 444 0,0034 445 0,0016 446 0,0016 447 <0,0015 448 <0,0015 449 0,0018 450 0,012 451 0,00057 452 0,0020 453 0,0016 454 0,14 455 <0,0015 456 0,0062 457 0,14 458 0,0068 459 0,0067

460 2,7 461 <0,0015 462 0,0047 463 0,0025 464 <0,0012 465 <0,0015 466 <0,0015 467 <0,0015 468 <0,0015 469 0,091 470 0,011 471 0,097 472 0,0015 473 0,032 474 0,012 475 3,1 476 0,0039 477 0,0048 478 <0,0015 479 0,016 480 <0,0015 481 0,0031 482 0,0037 483 0,0027 484 <0,0015 485 <0,0015 486 <0,0015

487 <0,0015 488 <0,0015 489 <0,0015 490 0,088 491 0,0018 492 0,0038 493 0,18 494 0,32 495 0,065 496 0,0062 497 0,020 499 0,0089 500 0,0027 501 0,040 502 0,018 503 0,029 504 0,012 505 0,047 506 0,11 507 1,5 508 15 509 0,31 510 1,5 511 1,3 512 1,5 513 0,068 514 0,25

515 0,35 516 0,30 517 0,42 518 3,6 519 0,19 520 <0,0015 521 0,065 522 0,0024 523 1,9 524 0,40 525 0,025 526 0,41 527 <0,00051 528 0,0051 529 0,0047 530 1,6 531 2,1 532 2,2 533 0,0014 534 <0,0015 536 0,0020 537 0,0011 538 0,0030 539 0,0092 540 0,011 541 0,0022 542 0,0068

543 0,027 544 0,0030 545 0,0016 546 0,013 547 0,021 548 0,65 549 0,0077 550 0,0055 551 0,029 552 2,2 553 0,0041 554 0,017 555 <0,0015 556 0,0017 557 0,096 558 0,013 559 0,019 560 0,034 561 0,0078 562 0,015 563 0,052 564 1,4 565 0,015 566 0,015 568 0,0015 569 0,0017 570 0,0020

571 <0,0015 572 0,0052 573 0,71 574 0,0036 575 0,10 576 0,43 577 0,13 578 0,43 579 0,0038 580 0,0027 581 0,0024 582 0,085 583 0,045 584 0,16 585 0,0025 586 0,0013 587 0,0052 588 0,0067 589 <0,0005 590 0,0054 591 0,0025 592 0,0020 593 0,0057 594 0,0015 595 0,0063 596 <0,0005 597 0,0021

598 0,0055 599 0,0026 600 0,0021 601 0,0023 602 0,0024 603 0,0040 604 0,0056 605 0,023 606 0,0071 607 0,0094 608 0,0017 609 0,0026 610 0,0032 611 0,0047 612 0,012 613 0,019 614 0,097 615 0,0046 616 0,012 617 0,0073 618 0,0024 619 0,0035 620 0,0039 621 0,0035 622 0,037 623 0,066 624 0,037

625 0,0060 626 0,0029 627 0,0055 628 0,0029 629 0,0018 630 0,0046 631 0,0041 632 0,0037 633 0,0018 634 0,023 635 0,0035 636 0,0028 637 0,0029 638 0,011 639 0,0069 640 0,0054 641 0,0032 642 0,0022 643 0,0037 644 0,0050 645 0,0054 646 0,011 647 0,0040 648 0,0039 649 0,0049 650 0,0071 651 0,025

652 0,017 653 0,030 654 0,037 655 0,0051 656 0,0019 657 0,0029 658 0,0058 659 0,0032 660 0,0058 661 0,0028 662 0,0095 663 0,026 664 0,013 665 0,0070 666 0,025 667 0,011 668 0,061 669 0,031 670 0,025 671 0,067 672 0,021 673 0,0081 674 0,021 675 0,015 676 0,023 677 0,0080 678 0,0023

679 0,0044 680 0,0059 681 0,0066 682 0,0073 683 0,0030 684 0,0060 685 0,0026 686 0,011 687 0,015 688 0,092 689 0,013 690 0,014 691 0,033 692 0,0065 693 0,029 694 0,025 695 0,045 696 0,060 697 0,026 698 0,010 699 0,025

B) Исследование влияния на зависимое от SGK-1 фосфорилирование GSK3beta в клетках U2OS

Показано, что гликогенсинтазакиназа 3beta (GSK3beta) является мишенью фосфорилирования для SGK-1 (Sakoda, H. et al., Differing Roles of Akt and Serum- and Glucocorticoid-regulated Kinase in Glucose Metabolism, DNA Synthesis, and Oncogenic Activity, J. Biol. Chem. 2003, 278, 25802-25807). Способность соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, ингибировать ферментативную активность сывороточной и регулируемой глюкокортикоидами киназы 1 (SGK-1) определяли путем исследования с использованием клеток, в котором изучали зависимое от SGK-1 фосфорилирование GSK3beta в клетках U2OS (ATCC HTB-96), сверхэкспрессирующих рекомбинантную SGK-1 и GSK3beta после трансфекции рекомбинантными вирусами BacMam.

Клетки U2OS выращивали в смеси 1:1 модифицированная по методике Дульбекко среда Игла/Ham's F12 и с добавлением 10% термически инактивированной фетальной телячьей сыворотки (FCS Gold) при 37°C, 7% CO₂ и относительной влажности, равной 95%. Клетки собирали и смешивали с вирусами BacMam, содержащими конструкции экспрессирования для SGK-1 человека (аминокислоты S61 - L431 с заменой серина 422 на аспартат) при MOI (множественность заражения), равной 50, и вирусы BacMam содержали конструкции экспрессирования для GSK3beta человека при MOI, равной 125. Суспензию клеток, смешанную с вирусами BacMam, высевали в 96-луночные планшеты µCLEAR (Greiner) по 3×10⁴ клеток/лунка в 250 мкл среды. Для уменьшения фонового фосфорилирования GSK3beta с помощью AKT добавляли 1 мкл селективного ингибитора Akt (конечная концентрация 2 мкМ). Добавляли 1 мкл раствора исследуемого соединения при 250×конечная концентрация. Клетки инкубировали при 37°C, 7% CO₂ и относительной влажности, равной 95%. Через 6 ч среду отсасывали и в течение 10 мин добавляли 50 мкл фиксирующего раствора (3,7% параформальдегида в забуференном фосфатом физиологическом растворе (PBS)). После удаления фиксирующего раствора клетки делали проницаемыми путем добавления 200 мкл PBT (0,2% Triton X-100 в PBS) на лунку с выдерживанием в течение 5 мин. После удаления PBT клетки блокировали путем добавления 200 мкл блокирующего раствора (1% бычьего сывороточного альбумина в PBS) на лунку. Блокирующий раствор удаляли и в течение 1 ч добавляли 50 мкл первичных антител (мышиные анти-phospho-GSK-3beta (Ser9) и мышиные анти-GSK-3beta). После трехкратной промывки клеток с помощью PBS добавляли 50 мкл вторичных антител (Alexa Fluor 594 козий анти-кроличий IgG и Alexa Fluor 488 козий анти-мышиный IgG) и инкубировали в течение 1 ч в темноте. После трехкратной промывки клеток с помощью PBS добавляли 200 мкл PBS. Сигналы флуоресценции измеряли с помощью ImageXpress MICRO (Molecular Devices). Значения IC₅₀ (в мкМ (микромоль/л))рассчитывали с использованием отношения количества фосфорилированного GSK3beta к полному количеству GSK3beta для компенсации неспецифических эффектов и они приведены в таблице 9.

Таблица 9.
Значения IC₅₀ для ингибирования зависимого от SGK-1 фосфорилирования GSK3beta в клетках U2OS приведенными в качестве примеров соединениями Пример № IC₅₀ [мкМ] 1 0,83 3 0,67 4 0,11 6 2,6 10 0,43 15 0,87 16 0,95 17 0,81 26 2,6 27 1,9 35 5,7 57 0,50 60 0,48 61 0,43 62 0,45

63 0,28 64 0,56 70 0,42 73 2,4 74 1,2 75 0,25 76 3,0 77 3,6 78 2,6 79 0,12 80 0,45 81 1,7 82 2,1 83 2,1 84 1,2 85 1,5 86 1,8 87 4,1 88 4,5 89 0,10 90 0,20 91 0,18 92 0,18 93 3,3

95 4,6 96 0,74 97 1,6 98 1,7 99 0,76 100 0,98 101 0,43 102 0,38 103 9,1 107 3,7 109 4,6 110 5,1 112 3,9 113 3,6 116 4,8 117 6,8 119 11 122 5,5 123 30 125 12 128 3,6 129 0,17 131 2,6 133 0,26

134 0,64 135 1,9 136 1,7 137 1,4 138 3,5 139 5,5 140 0,050 141 0,15 142 0,14 143 0,10 144 0,055 145 0,35 146 11 147 0,059 164 0,60 165 0,97 168 2,4 169 0,25 170 0,51 171 0,87 173 0,60 174 0,89 175 0,52 178 0,80

188 0,90 189 0,11 190 0,12 191 2,7 192 0,14 193 0,16 194 0,10 195 0,21 196 0,33 197 0,065 198 0,51 199 0,64 203 0,16 204 0,13 207 0,14 209 0,10 210 0,098 211 0,080 212 0,11 213 0,19 214 0,13 217 0,19 218 0,085 219 0,23

220 0,17 287 0,021 288 0,061 289 0,20 290 0,015 291 0,076 292 0,93 293 0,63 294 0,27 295 0,025 296 0,060 297 0,080 298 0,043 299 0,41 300 0,092 301 0,060 302 0,086 303 0,057 304 0,13 305 0,089 306 0,019 308 0,010 309 0,16 310 0,22

311 0,092 312 0,13 313 0,047 314 0,25 315 0,60 316 0,27 317 0,21 319 0,031 320 0,057 321 0,038 322 0,026 323 0,10 324 0,33 326 0,16 327 0,43 328 0,15 330 0,23 331 0,24 332 0,19 333 1,3 334 0,72 335 0,35 336 0,19 338 0,044

339 0,045 340 0,010 341 0,063 342 0,28 343 0,068 434 3,5 437 1,8 438 7,8 439 0,11 440 0,24 441 11 442 1,3 443 0,32 444 0,05 445 0,34 446 3,7 447 0,34 449 4,9 452 0,98 453 2,1 455 0,39 456 8,9 458 3,5 459 4,0

461 0,26 463 0,12 465 1,2 466 0,26 467 0,15 468 0,23 470 2,0 472 0,33 473 8,2 474 11 476 3,0 477 4,5 478 1,1 479 0,28 491 2,0 492 4,2 496 7,0 499 8,8 500 0,25 501 0,45 502 0,42 503 0,63 504 0,30 505 0,62

506 0,67 509 2,5 513 0,30 514 0,27 515 0,53 516 0,64 517 0,17 519 0,26 520 0,061 521 0,48 522 0,29 533 1,8 534 0,35 536 3,1 545 0,073 546 1,1 547 4,0 553 6,4 555 3,8 556 1,7 558 0,52 559 0,39 561 2,7 568 0,17

C) Функциональное электрофизиологическое исследование для изучения зависимой от SGK-1 активации токов ENaC в монослоях клеток A6

SGK-1 подвергается повышающей регуляции в клетках A6 в ответ на индуцирование гипоосмотического шока (Alvarez de la Rosa, D. et al.; Mechanisms of Regulation of Epithelial Sodium Channel by SGK1 in A6 Cells, J. Gen. Physiol. 2004, 124, 395-407). Вследствие индукции SGK-1 функция ENaC в плазме мембраны подвергнута повышающей регуляции и влияние ингибиторов SGK-1 на функциональную экспрессию ENaC на поверхности можно исследовать по технологии камеры Уссинга.

Материалы и методики для исследования клеток A6 в камере Уссинга: Для экспериментов использовали линию клеток почек Xenopus laevis A6 (Rafferty, K. A.; Mass culture of amphibia cells: methods and observations concerning stability of cell type. In: Biology of Amphibian Tumors, edited by M. Mizell. New York: Springer-Verlag, 1969, p. 52-81). Клетки выращивали в матрацах для клеточных культур (Nunc) при 28°C в увлажненной атмосфере, содержащей 4% CO₂. Культуральная среда содержала смесь 7:3 сред Leibovitz's L-15 (Sigma-Aldrich)/Coon's (Sigma-Aldrich) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (PAA), 20% стерильной воды, 25 мМ NaHCO₃ (Sigma-Aldrich), 100 Ед/мл пенициллина (PAA) и 100 мкг/мл стрептомицина (PAA). Осмоляльность среды составляла 270 мосм/кг H₂O). Клетки отделяли с помощью аккутазы (PAA) и для проведения электрофизиологических исследований высевали в фильтрующие вставки Transwell® (сложный полиэфир с порами размером 0,4 мкм, Corning) при плотности, равной 0,4×10⁶ клеток/фильтр. Клетки выращивали в течение 7-10 дней и слитые монослои клеток A6 идентифицировали с помощью повторяющихся измерений сопротивления в клеточной культуральной среде с помощью омметра EVOM² (World Precision Instruments). Монослои, обладающие сопротивлением, равным >10 кОм, считали слитыми. Фильтры со слитыми клетками A6 переносили в непрерывно перфузируемую камеру Уссинга и электрофизиологические параметры измеряли в разомкнутом контуре с помощью трансэпителиального усилителя с фиксацией уровня (EP Design). Ток короткого замыкания (I'sc) рассчитывали по закону Ома. Раствор Рингера для исследований с помощью камеры Уссинга содержал: 122 ммоль/л (изоосмотический=260 мосм/кг H₂O) или 82 ммоль/л (гипоосмотический=180 мосм/кг H₂O); KHCO₃: 2,5 ммоль/л; CaCl₂: 1 ммоль/л; MgCl₂: 1 ммоль/л; глюкозу: 5 ммоль/л. Значение pH доводили до 8,2. Все измерения проводили при комнатной температуре. Амилорид, ингибитор (ENaC)-зависимого переноса ионов эпителиального Na⁺ канала использовали при концентрации, равной 25 мкМ.

Для изучения влияния ингибиторов SGK на опосредуемые с помощью ENaC трансэпителиальные токи монослои A9 сначала в течение 5 мин приводили в равновесие с изоосмотическим раствором Рингера и с люминальной, и с базилатеральной стороной слоя клеток. Амилорид наносили на люминальную сторону для определения базального зависимого от ENaC тока (I'sc_basal). Затем слои клеток с базилатеральной стороны в течение 10 мин перфузировали соединениями в изотоническом буфере или контрольным изотоническим буфером. Передачу сигналов SGK, приводящую у повышенной активности ENaC и последующему увеличению I'sc, стимулировали с помощью гипоосмотического раствора Рингера, в течение 45 мин воздействующего на обе стороны слоя клеток A6. Зависимые от ENaC I'sc после гипоосмотического шока (I'sc_hypo) определяли путем воздействия амилорида в конце эксперимента. Полные изменения чувствительного к амилориду Isc рассчитывали по формуле ΔI'sc=I'sc_hypo - I'sc_basal. Экспериментальный протокол позволял выявлять и исключать соединения, оказывающие собственное влияние на ENaC, однако исследуемые соединения не оказывали прямое влияние на ENaC. Подавление ΔI'sc исследуемыми соединениями определяли относительно ΔI'sc, измеренного с контрольными монослоями, которые не обрабатывали исследуемым соединением. Значения IC₅₀ (в мкМ (микромоль/л)) определяли путем аппроксимации данных общим уравнением доза-ответ и они приведены в таблице 10.

Таблица 10.
Значения IC₅₀ для ингибирования зависимой от SGK-1 активации активации токов ENaC в монослоях клеток A6 приведенными в качестве примеров соединениями Пример № IC₅₀ [мкМ] 3 3,4 4 3,2 61 1,4 83 1,9 310 10 317 10 346 2,0 349 3,2 446 0,19 447 0,060 461 0,18 467 0,16 468 0,61 492 1,1 519 1,1 520 0,50 555 0,60 556 2,0

D) Исследование влияния на гипертрофическую дифференциацию хондроцитов в хондрогенных клетках ATDC5 мышей

Исследование клеток ATDC5 использовали в качестве модели in vitro для изучения влияния соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, на гипертрофическую дифференциацию хондроцитов путем мониторинга степени экспрессии коллагена типа X (Col10a1) в качестве специфического маркера гипертрофии хондроцитов.

Основные положения: Клетки ATDC5 представляют собой клональную линию клеток эмбрионов мышей, полученную из мультипотентных клеток тератокарциномы AT805 (Atsumi, T. et al., A chondrogenic cell line derived from a differentiating culture of AT805 тератокарцинома cells, Cell Differ. Dev. 1990, 30, 109-116). Клетки могут подвергаться инсулин-зависимой дифференциации хондрогенных клеток, в культуре in vitro приводящей в течение 45 дней к выраженным стадиям дифференциации, начинающихся от недифференцированной субконфлюэнтной стадии и включающих последующие стадию конденсации, стадию образования узелков хряща и стадию кальцификации. Хондрогенную дифференциацию можно продемонстрировать путем определения экспрессии главного коллагена (Col2a1) и агрекана (AGC1) хряща и окрашивания глюкозаминогликана альциановым синим не позже, чем через 2 недели после инициированной инсулином дифференциации и за гипертрофической дифференциацией можно следить по экспрессии коллагена типа X (Col10a1), специфического маркера гипертрофии хондроцитов в течение 21 дней в культуре in vitro. (Shukunami, C. et al., Chondrogenic Differentiation of Clonal Mouse Embryonic Cell Lne ATDC5 In Vitro: Differentiation-dependent Gene Expression of Parathyroid hormone (PTH)/PTH-related Peptide Receptor, J. Cell Biol. 1996, 133, 457-468). Известно, что фактор роста BMP-2 стимулирует дифференциацию клеток и может стимулировать раннюю и позднюю фазу дифференциации ATDC5 (Shukunami, C. et al., Sequential Progression of the Differentiation Program by Bone Morphogenetic Protein-2 in Chondrogenic Cell Line ATDC5, Exp. Cell Res. 1998, 241, 1-11). Тиреоидный гормон трийодтиронин (T3) стимулирует гипертрофическую дифференциацию хондроцитов ростковой пластинки (Robson, H. et al., Thyroid hormone Acts Directly on Growth Plate Chondrocytes to Promote Hypertrophic Differentiation and Inhibit Clonal Expansion and Cell Proliferation, Endocrinology 2000, 141, 3887-3897). Добавление BMP2 и T3 может ускорять гипертрофическую дифференциацию ATDC5, что приводит к сильной индукции экспрессии Col10a1 в период 10-14 дней. Ингибиторы SGK, добавленные к дифференцирующимся клеткам ATDC5 в течение 14 дней, и экспрессию гена Col10a1 исследовали количественно для изучения влияния на гипертрофическую дифференциацию хондроцитов.

Описание исследования с помощью клеток: Клетки ATDC5 помещали в матрацы для клеточных культур площадью 300 см² в среду DMEM/Ham's F12+5% ФТС с добавлением 10 мкг/мл трансферрина человека, 30 нМ селенита натрия, 50 мкг/мл канамицина и выращивали при 37°C в среде, содержащей 5% CO₂ и 95% воздуха. Для инициирования дифференциации клеток 9,9×10⁴ клеток помещали в 24-луночные планшеты и выращивали в течение 2 дней. Среду заменяли на DMEM/Ham's F12+5% ФТС с добавлением 10 мкг/мл трансферрина человека, 30 нМ селенита натрия, 50 мкг/мл аскорбиновой кислоты и 1 мкг/мл BMP2. Исследования повторяли трижды, соединения добавляли в 10% ДМСО и среду заменяли каждые 2-3 дня, включая добавляемые соединения. В день 7 после инициирования дифференциации клеток в качестве дополнительной добавки к культуре клеток использовали 1 мкМ T3.

Через 2 недели из культуры клеток выделяли РНК и превращали в кДНК (комплементарная ДНК) для изучения экспрессии генов с помощью ПЦР (полимеразная цепная реакция) в реальном масштабе времени. Клетки подвергали лизису в 600 мкл буфера RLT (Qiagen) и полную РНК выделяли с помощью набора для выделения RNA-easy Mini RNA (Qiagen), который использовали в системе Qiacube (Qiagen) в соответствии с инструкциями поставщика. РНК выделяли в 30 мкл чистой воды и содержание РНК определяли с помощью УФ-спектроскопии (Nanodrop, Peqlab). Для синтеза кДНК 50 нг полной РНК подвергали обратной транскрипции с помощью набора для высокопроизводительной обратной транскрипции кДНК (Applied Biosystems, Product Number 4368813) в соответствии с инструкциями изготовителя. Вкратце, методика заключалась в следующем: готовили 20 мкл реакционной смеси, содержащей 4 мМ dNTPs, случайные праймеры, ингибитор РНКазы и 1 мкл обратной транскриптазы MultiScribe, и инкубировали в течение 10 мин при 25°C, 120 мин при 37°C, 5 мин при 85°C.

Количественная ПЦР в реальном масштабе времени: Реакцию Taqman Fast PCR проводили в объеме, равном 20 мкл, с использованием Taqman Fast Advanced Master Mix (Applied Biosystems, product number 4444965) и Taqman Gene expression assays для RPL37a (Applied Biosystems, product number Mm01253851_g1) в качестве гена "домашнего хозяйства" и Col10a1 (Applied Biosystems, product number Mm00487041_m1) для экспрессии коллагена типа X. Вкратце, методика заключалась в следующем: 2 мкл продукта реакции кДНК объединяли с 10 мкл 2× Taqman Fast Advanced Master Mix, 1 мкл Taqman Gene Expression Assay, содержащего праймеры и меченого с помощью 5'-Fam зонда Taqman для малой бороздки в соответствии с инструкциями изготовителя в 96-луночных планшетах с быстрым циклическим изменением температуры. 40 Циклов амплификации проводили в системе Viaa7 Real Time PCR System (Applied Biosystems) в течение 1 с при 95°C для денатурации и 20 с при 60°C для ренатурации/удлинения. Данные по флуоресценции собирали и преобразовывали в значения Ct характеристики экспрессии рассчитывали на основе сравнительной методики Ct (Schmittgen, T.D. et al., Analyzing real-time PCR data by the comparative C(T) method, Nature Protocols 2008, 3, 1101-1108). Значения IC₅₀ (в мкМ (микромоль/л)) определяли путем аппроксимации данных общим уравнением доза-ответ и они приведены в таблице 11.

Таблица 11.
Значения IC₅₀ для ингибирования экспрессии коллагена типа X в хондрогенных клетках ATDC5 мышей приведенными в качестве примеров соединениями Пример № IC₅₀ [мкМ] 3 0,052 4 0,0090 32 0,28

61 0,036 79 0,025 83 0,13 96 0,033 100 0,061 321 0,68 322 0,0080 328 0,094 344 0,016 346 0,066 349 0,38 351 0,043 353 0,021 357 0,061 378 0,057 380 0,12 390 0,36 391 0,12 393 0,58 394 0,29 395 0,12 397 0,092 398 0,0072 409 0,10

410 0,034 411 0,018 413 0,022 415 0,045 416 0,019 418 0,030 422 0,11 424 0,062 425 0,14 426 0,060 428 0,11 429 0,047 430 0,036 439 0,044 440 0,081 446 0,55 447 0,33 451 0,01 453 0,55 465 0,70 467 0,053 468 0,87 492 0,66 496 0,14

519 0,26 520 0,030 589 0,081 599 0,090 609 0,011 610 0,010 611 0,037 618 0,054 635 0,45 636 0,29 637 0,027 641 0,024 642 0,021 643 0,088 646 0,34 659 0,12 660 0,016 661 0,043 662 0,27