БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНАЯ СИНЕРГЕТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ Российский патент 2019 года по МПК A01N43/16 A01N25/04 A01P21/00 

Изобретение относится к биоактивным композициям, полученным из натуральных продуктов растительного происхождения, для экологического земледелия, в частности, к средствам для предпосевной обработки семян и послевсходовой обработки вегетирующих растений, а также может быть использовано при выращивании сельскохозяйственных культур в качестве удобрения.

Предшествующий уровень техники

Известна высокая биологическая активность флавоноидов, выделяемых из отходов переработки растительного сырья, например, коры березы, комлевой части сибирской лиственницы, косточек винограда и др., которая проявляется как регулятор транспорта ауксинов - растительных гормонов, контролирующих рост и развитие растений. Также известны антибактериальные и антигрибковые свойства биофлавоноидов, способствующие защите растений от возбудителей различных инфекционных болезней, а также свойство предохранять растения от стрессовых воздействий окружающей среды, в результате которых образуются свободные радикалы, нарушающие процессы жизнедеятельности клеток [1].

Не меньшим, чем флавоноидные препараты широким диапазоном биологической активности обладают растительные тритерпеновые гликозиды - мощные имуностимуляторы. Механизм их действия заключается в том, что он вызывает экспрессию генов, ответственных за иммунитет, и активизирует ферменты и реакции, необходимые для синтеза хлорофилла и световой реакции фотосинтеза. Важным химическим свойством тритерпеноидов является способность образовывать комплексы с фенолами, включая и флавоноиды, а также высшими спиртами. Тем самым, актуальной задачей является исследование биологической активности комбинаций представителей классов флавоноидов и тритерпеноидов, что может позволить создать новые препараты, обладающие существенно более высокой активностью по отношению к различным биологическим объектам [2].

Известна группа препаратов, в форме эмульсии микрокапсулы которых содержат в масляной фазе одно или несколько биологически активных веществ, выделенных из рыбьего жира, льняного масла, омега-3 и/или омега-6 и/или омега-9 жирных кислот, конъюгированной линолевой кислоты, терпеноидов, каротиноидов, токотриенолов, флавоноидов, гормонов, антиоксидантов. [3] Также известен способ их получения путем межфазной полимеризации эмульсии в которой модификаторами вязкости и эмульгаторами, предпочтительно, служат полисорбаты, а в качестве первичного, предпочтительно, эмульгатор на основе соевого лецитина.

Достоинствами известного изобретения является его применение в целях производства продуктов питания для человека (особенно для производства БАД) и животных, включая рыбу, а также микроорганизмов. Кроме того препараты могут быть применимы и для других целей, в частности для косметических средств, инкапсуляции аттрактантов, стерилизаторов, репеллентов, инсектицидов, гербицидов, фунгицидов, бактерицидов, противовирусных препаратов, а также для генной терапии и других аналогичных целей.

К сожалению в материалах изобретения не раскрыты ни рецептуры, относящиеся к препаратам, включающим комбинации биологически активных веществ, ни методы исследований их активности, ни способы их получения. Также отсутствуют какие либо данные относящиеся к препаратам и способам их получения в целях защиты растений от вредного воздействия окружающей среды, укрепления их корневых систем, стволов, стеблей, листьев, цветов и плодов, а также данные о влиянии препаратов на величину и качество урожая.

Известны композиции наноэмульсий с биологически активными соединениями, в качестве которых использованы биофлавоноиды: рутин, кверцетин, дигидрокверцетин и тритерпеноид бетулин [4]. Известная наноэмульсия содержит 35-80% гидрофобной фазы, 17-43% поверхностно-активного вещества, 3-7% сорастворителя и 1-15% водной фазы, в качестве гидрофобной фазы используют смеси моно-, ди- и триглицеридов с моно- и диэфирами насыщенных и ненасыщенных жирных кислот, а поверхностно-активное вещества из группы из группы сорбитанов в смеси полигидроксиалканами или одноатомными спиртами.

Достоинствами известной композиции наноэмульсий являются легкость получения, возможность использования в качестве активных элементов полифенольных, тритерпеновых соединений, витаминов и микроэлементов, а также получения рецептур с пролонгированным выделением гидрофильных активных ингредиентов. К сожалению, в предоставленных материалах отсутствуют данные о физико-химических свойствах и биологической активности композиции наноэмульсий при комбинированном использовании активных ингредиентов.

Известен способ регулирования роста зерновых культур, включающий предпосевную обработку семян и вегетирующих растений препаратом "Larixin", который представляет собой 5%-ную водную эмульсию с содержанием действующего вещества в концентрации, равной 50 мг/мл, при этом предпосевную обработку семян проводят при норме расхода препарата 100-250 мл на 1 т семян, а обработку вегетирующих растений проводят двукратно в фазу начала выхода в трубку и в фазу появления флагового листа при норме расхода препарата 30-75 мг/га [5].

Коммерческий препарат "Larixin" (ООО НПП "Биохимзащита". ЗАО "Аметис") благодаря основному действующему веществу дигидрокверцетину, способен усилить устойчивость культурных растений к болезням, вредителям и к неблагоприятным климатическим условиям, повышает (индуцирует) у культурных растений экспрессию (активность) генов защиты. Кроме того, он оказывает стимулирующее действие на иммунную систему растений, предотвращая и снижая в значительной степени поражение растений грибковыми и бактериальными болезнями. Воздействие на растение биологически активным веществом приводит к повышению активности генов стрессоустойчивости, тем самым растение синтезирует специальные вещества, функцией которых является организация связи между факторами внешней среды и активностью отдельных генов или их блоков. Применение препарата "Larixin" позволяет свести к минимуму необходимость обработки посевов фунгицидами, а также повысить урожайность сельскохозяйственных культур [6]. Однако, известный препарат все же не обладает достаточной эффективностью при защите культур от грибковых и бактериальных болезней. Также отсутствуют данные о рецептуре препарата с точки зрения вспомогательных веществ и возможности его использования для целей органического земледелия.

Доля органического сельского хозяйства имеет тенденцию роста в большинстве государств Евросоюза. В последние годы особенно примечателен рост спроса на сельскохозяйственную продукцию, произведенную в рамках реформы общей сельскохозяйственной политики, которая направлена на развитие органического земледелия [7]. При этом разработана нормативная база Сообщества, регламентирующая сектор органической продукции, преследуя цели обеспечения справедливой конкуренции и надлежащего функционирования рынка органических продуктов, а также поддержания доверия потребителей к продукции позиционируемой как органическая [8].

В этой связи, предпочтение отдается применению профилактических мер борьбы с вредителями, болезнями и сорняками. Использование пестицидов, которые могут иметь пагубные последствия на окружающую среду или присутствовать в виде остатков в сельскохозяйственной продукции, резко ограничен. Также существенно ограничен перечень биологически активных и вспомогательных веществ, которые могут применяться в качестве удобрений и средств защиты растений. Тем самым, задача разработки новых биологически активных препаратов, в рецептурах которых могут быть использованы активные и вспомогательные вещества пригодные для использования в органическом земледелии является актуальной.

Целью изобретения является создание нового биопрепарата на основе комбинации природных флавоноидов и тритерпеноидов в сочетании с допустимыми для нужд органического земледелия вспомогательными веществами обладающего более высокой биологической активностью по отношению к различным культурам.

Раскрытие изобретения.

Поставленная цель достигается тем, что водная эмульсия биологически активной синергетической композиции, включает биофлавоноидный комплекс дигидрокверцетина, аромадендрина и нарингенина, которые берут в мольном отношении 1,0:0,102-0,104:0,014-0,016, растворитель и эмульгатор, причем в водную фазу эмульсии дополнительно вводят арабиногалактан и водорастворимые тритерпеноиды в весовом отношении 1-3:5-7 в количестве 0,3-0,7% вес. от водной фазы, а биофлавоноидный комплекс распределяют между масляной и водной фазами в весовом отношении 5-10:1.

В биологически активной синергетической композиция целесообразно в качестве масляной фазы использовать раствор биофлавоноидного комплекса в пропиленгликоле и/или этаноле, а в качестве эмульгатора используют полиароматические этоксилаты и диоктил сульфосукцинат натрия в весовом отношении 8-10:5-7 или 60%-ный раствор лецитина в соевом масле взятые в количестве 15-25% от объема масляной фазы.

Другим предметом изобретения является способ получения водной эмульсии биологически активной синергетической композиции, характеризующийся раздельным приготовлением масляной и жидкой фаз, причем водную фазу готовят путем растворения арабиногалактана и тритерпеноидов в дистиллированной воде в количестве не выше 5 граммов на 1 литр в течение 4-х часов при температуре 30-40°С, после чего в раствор добавляют биологически активные компоненты, взятые в синергетическом соотношении в количестве, не превышающем 0,5 грамма на 1 литр раствора, масляную фазу готовят путем растворения биологически активных компонентов дигидрокверцетина, аромадендрина и нарингенина взятых в мольном отношении 1,0:0,102-0,104:0,014-0,016 в предварительно подогретом до температуры 33-39°C пропиленгликоле или его смеси с этанолом, с последующей добавкой эмульгатора Agrilan AEK 145 или SOPROPHOR BSU в количестве 15-25% от объема раствора активных компонентов, причем растворение ведут в течение 30-45 минут после чего добавляют стабилизатор Lankropol KРН 70 или GEROPON DOS/PG в количестве 6-9% объемных, полученный раствор выдерживают в течение 45-60 минут при температуре 30-33°С при интенсивном перемешивании, с последующим непрерывным дозированием предварительно подготовленной водной фазы в масляную фазу в течение 60-90 минут при кратности циркуляции реакционной массы 9-12 объемов в час и интенсивности перемешивания 0,016-0,024 кВт на 1 литр эмульсии с последующим охлаждением до температуры 20-25°С в течение 60-90 минут.

Еще одним предметом изобретения является способ применения биологически активной синергетической композиции путем приготовления рабочего раствора последней разбавлением эмульсии в воде до концентрации биофлавоноидного комплекса 0,05-0,25 г/л с последующим его нанесением на поверхность семян сельскохозяйственных культур или распылением на поверхность вегетирующих культурных растений на ранних стадиях вегетации.

Биологическую активность композиций различных соотношений действующих веществ изучаемых соединений проводили в лаборатории физико-химического анализа, лаборатории искусственного климата и в полевых условиях на землях Рокишкского района Литовской Республики.

В условиях физико-химической лаборатории были проведены исследования антирадикальной активности и основных элементов биофлавоноидного комплекса, таких как дигидрокверцетин (DHQ) чистотой 99,9%, аромадендрин (ARD) чистотой 98,9% и нарингенин (NAR) 97,5%, а также их различных комбинаций, амперометрическим методом с помощью хроматографа "ЦветЯуза 1-А" с амперометрическим позолоченным детектором (НПО "Химавтоматика"). Антирадикальная активность измерялась относительно эталона - Тролокса в единицах ORAC hydro value (mkmol TE/g). Активные компоненты были выделены в соответствии с изобретением "Способ получения высокоочищенного дигидрокверцетина" ("Process for Preparing of highly pure dihydroquercetin") WO 2013/172693 методом препаративной хроматографии на колонне DAU 100-700 с динамической аксиальной компрессией, заполненной обращено-фазовым сорбентом с повышенным удержанием полярных соединений с размером частиц 10-20 мкм и размером пор 120-200 А.

Количественный анализ биофлавоноидного комплекса и его активных компонентов производился методом ВЭЖХ на хроматографе масспектрометре "Shimadzu Nexera 2020" при следующих условиях: колонка (HPLC Column) - 250 мм × 4,0 мм, обратно-фазовый сорбент - YMC-Pack ODS-AQ C₁₈, I.D.S - 5 μm, аналитическая длина волны - 290 нм, подвижная фаза - ацетонитрил в 0,1%-ном водном растворе уксусной кислоты (25:75), объем инъекции (Injection Volume) - 10 мкл, скорость потока подвижной фазы - 80 мкл/мин, время записи хроматограммы - 25 минут. Обработка результатов производилась с помощью программы LabSolutions LCMS.

На основании данных по эффективности композиционных препаратов, включающих в свой состав более одного активного вещества, рассчитывается характер биологического взаимодействия активных компонентов, составляющих композицию, для оценки уровня их синергизма, антагонизма или аддитивности, т.е. простого сложения эффектов от каждого из составляющих смесевые препаративные формы.

В гербологии принято оценивать характер биологического взаимодействия с помощью математических зависимостей, предложенных Колби и Лимпелом. В соответствии с расчетными формулами Колби-Лимпела для смесевых препаратов для сравнения выбирают данные эффективности индивидуальных препаратов, примененных отдельно в конкретной дозировке, и эффективности смесевой композиции, где составляющие компоненты берутся в тех же дозировках или очень близких к ним нормам применения.

Синергетический эффект изучаемых препаратов рассчитан по формуле (1) Колби (см. Colby S.R. Calculating Synergistic and Antagonistic responses of herbicide combination Weeds. 1967. V. 15. N1. PP. 20-22): Е=Е_э-Е_о (1)

где E - синергетический эффект композиции,

Е_э - значение результата в эксперименте,

Е_о - ожидаемое значение результата в эксперименте.

Пример расчета для трехкомпонентной композиции (А+Б+В);

где Е - «ожидаемый» эффект от композиционного препарата (А+Б+В);

x - значение результата от применения компонента А индивидуально при дозировке, близкой к его содержанию в составе композиции;

y - значение результата от применения компонента B в порядке аналогичном предыдущему;

z - значение результата от применения компонента С в том же порядке.

Когда фактический эффект от смеси 2-х или более гербицидов значительно выше «ожидаемого» Е_о, рассчитанного по формулам, то можно говорить о синергизме компонентов композиции в характере биологического взаимодействия; если фактический эффект, полученный в эксперименте, заметно ниже «ожидаемого» Е_о, то наблюдают антагонизм компонентов смеси; в случае «ожидаемого» Е_о, совпадающего с результатом фактического экспериментального значения, можно судить об аддитивности взаимодействия компонентов смеси или композиции.

Проведенные исследования показали, что все три испытанных активных вещества дигидрокверцетин, аромадендрин и нарингенин как в чистом виде, так и в композициях проявляют высокую биологическую (антиоксидантную) активность.

Влияние различных соотношений дигидрокверцетин, аромадендрин и нарингенин на уровень биологической (антирадикальной) активности проиллюстрировано в Таблице 1.

Как свидетельствуют данные таблицы 1, наиболее оптимальным соотношением компонентов изучаемых композиций, проявляющим максимальную антиоксидантную активность, следует считать композицию состава: дигидрокверцетин - 0,165 моль/л, аромадендрин - 0,017 моль/л и нарингенин - 0,0025 моль/л, что соответствует мольному отношению исследованных компонентов 1,0:0,102-0,104:0,014-0,016. В области оптимальных мольных отношений, исследованный биофлавоноидный состав проявляет максимальную биологическую активность с синергетическим эффектом 12,9-16,5%.

Биологически активная синергетическая композиция в форме водной микроэмульсии содержит компоненты в следующих мольных соотношениях:

Ниже приведены характеристики поверхностно-активных веществ и растворителей, которые могут быть использованных в новой биологически активной синергетической композиции, которую условно назвали "Rokiprag".

Основной проблемой в технологии эмульсий является обеспечение физической стабильности. Эмульсиям - дисперсным системам с развитой поверхностью раздела фаз и обладающим избытком свободной поверхностной энергии свойственны следующие виды нестабильности: термодинамическая - способность сохранять во времени неизменные размеры капель дисперсной фазы и седиментационная - способность во времени сохранять неизменные распределение капель дисперсной фазы по объему системы.

Метод определения седиментационной стабильности основан на разделении эмульсии на масляную и водную фазы при центрифугировании.

Две пробирки наполняли на половину объема исследуемой эмульсией и взвешивали, результат записывают до второго десятичного знака. Разность массы пробирок с эмульсией не должна превышать 0,2 г. Пробирки помещали в водяную баню и выдерживали 20 мин при температуре 22-25°C. Пробирки вынимали насухо вытирали их с внешней стороны и устанавливали в гнезда центрифуги. Центрифугирование проводили в течение 5 минут при частоте вращении 1000 оборотов в минуту, затем пробирки вынимали и определяли стабильность эмульсии. Если в одной из пробирок наблюдали расслоение эмульсии, то испытание повторяли с новыми порциями эмульсии.

При отсутствии четкого расслоения эмульсии содержимое пробирки осторожно выливали на лист белой плотной бумаги и отмечали наличие или отсутствие расслоения эмульсии. Эмульсию считали стабильной, если после центрифугирования в пробирках наблюдали выделение не более капли водной фазы или слоя масляной фазы не более 5 мм.

Метод определения термостабильности основан на разделении эмульсии на масляную и водную фазы при повышенной температуре.

Три пробирки диаметром 14 мм высотой 120 мм или цилиндры вместимостью 25 см³ наполняют на половину объема испытуемой эмульсией, следя за тем, чтобы в эмульсии не оставалось пузырьков воздуха, закрывают пробками и помещают в термостат с температурой 40-42°C. При определении термостабильности эмульсин содержимое пробирок или цилиндров после 1 ч термостатирования осторожно перемешивали стеклянной палочкой для удаления воздуха. Эмульсин выдерживают в термостате 24 ч и затем определяли стабильность. Эмульсию считали стабильной, если после термостатирования в пробирках не наблюдали выделения водной фазы или выделение слоя масляной фазы не более 5 мм.

Термодинамическую стабильность определяли методом определения стабильности эмульсии в соответствии с патентом РФ №2464970 включающим отбор и подготовку проб также, как и при определении седиментационной стабильности. Затем проводили микроскопическое наблюдение исследуемой эмульсии и подсчет количества мицелл на площадке 1 см² при 2000-кратном увеличении с последующим сравнением с количеством мицелл n₀ в образце, не подвергнутом подготовке, считая эмульсию условно стабильной при n/n_o*100≥50. Затем образцы с условно стабильной эмульсией подвергали ускоренному старению в течение месяца в термостате при температуре 40-42°C и относительной влажности 65±2%, периодически проводя микроскопическое наблюдение образцов на площадке в 1 см² 2000-кратном увеличении. Статистическую обработку экспериментальных данных вели по уравнению , где n' - количество мицелл, шт. /см²; - время ускоренного старения, дни; , , - расчетные коэффициенты экспоненциального уравнения, полученные при обработке экспериментальных данных, при → заданное время хранения, с расчетом возможного состояния эмульсии при значении n/n_o*100 ≥50 эмульсию считают стабильной и пригодной для длительного хранения.

Первоначально, испытаниями на седиментационную и термодинамическую стабильность было подвергнуто два образца биологически активной синергетической композиции "Rokiprag", содержащими 50 г/л дигидрокверцетина, 5 г/л арома-дендрина и 0,5 г/л нарингенина. Образцы были получены на различных поверхностно-активных веществах: образец №1 содержал 90 мл/л эмульгатора Agrilan AEK145 и 60 мл/л стабилизатора Lankropol KPH 70: образец №2 содержал 120 мл/л Soya Lecithin Liquid. В обоих случаях был использован растворитель Propylene glycol в количестве достаточном для полного растворения биофлавоноидного комплекса. Оба образца показали одинаковую седиментационную стабильность - расслоения эмульсии не наблюдалось. Оба образца продемонстрировали высокую термодинамическую стабильность - значения критерия n/n_o*100 для образца Ns1 значения критерия через 24 часа n/n_o*100 составило 97%, а для образца №2 - 98%, а через 24 часа 94% и 95,5% соответственно.

Совершенно неожиданно авторы обнаружили, что при механическом воздействии, связанном транспортировкой, оба образца иногда подверглись незначительному расслоению масляной и водной фаз, причем образец №1 расслаивался несколько сильнее, чем образец №2. При этом, оказалось, что после встряхивания обоих образцов в течение 10-15 секунд первоначальное состояние обоих образцов удалось восстановить. Авторы связали наблюдаемое явление с недостатками способа получения эмульсии, в частности, с недостаточной вязкостью водной фазы эмульсии. В Таблице 2 приведены составы образцов эмульсий биологически активной синергетической композиции "Rokiprag" с измененным распределением активных компонентов между масляной и водной фазами, а также модификацией водной фазы добавками арабиногалактана (ARG) и растворимых тритерпеноидов (TTR), произведенных на стадии выделения дигидрокверцетина чистотой 99,9%.

Как это следует из таблицы 2, наивысшую седиментационную и термодинамическую стабильность продемонстрировали образцы №5 - 98,5% и №6 - 99,5%. Так же, наилучший результат продемонстрировали образцы №5 и №6 при микроскопическом исследовании среднего числа капель рабочих растворов обоих образцов при разбавлении исходных эмульсий в 100 раз при 2000-кратном увеличении - 38 капель в см² и 44 капли в см² соответственно. Совершенно неожиданный результат был получен при измерении среднего размера капель образцов №1, №3 и №5. Если средний размер капель образцов №2, №4, и №6 составил 1,2, 1,6 и 2,0 мкм, то средний размер капель образцов №1, №3 и №5 составил 0,22, 0,13 и 0,09 мкм. Кроме того, препараты №1, №3 и №5 представляют собой прозрачную жидкость темно-коричневого цвета, что позволяет отнести их к категории наноэмульсия.

В результате выполненных исследований следует заключение о целесообразности модификации водной фазы биологически активной синергетической композиции "Rokiprag" арабиногалактаном и/или водорастворимыми тритерпеноидами, а также перераспределении до 5% активных компонентов из масляной фазы в водную.

В условиях вегетационного опыта первичную оценку фитотоксичности препарата "Rokiprag" проводили в лаборатории искусственного климата (ЛИК) при следующих режимах работы камер: освещенность 20 тыс.л к в течение 14 часов, без освещения 10 часов в сутки, температура воздуха днем 18°С, ночью 12°С, относительная влажность воздуха 70%, влажность почвы в вегетационных сосудах 60% от ПВ, поддерживаемая путем ежедневного полива по весу обессоленной водой. В качестве тест-растений использовали кресс-салат (Lespidium sativilum L.) сорта "Radiata" «N. Sgaravatti & с. S.Р.А» (Италия) - однолетнее, травяное, холодостойкое, раннеспелый сорт. Период от всходов до технической спелости 20-25 дней. Растение полуприподнятого типа, хорошо облиственное, высотой 15-20 см. Листья средних размеров, узкие, лировидные, зеленые, сильнорассеченные. Края листовой пластинки зубчатые. Расположение листьев супротивное. Средняя масса одного растения 30 г. Кресс-салат обладает повышенной чувствительностью к загрязнению окружающей среды и отличается быстрым прорастанием семян, почти стопроцентной всхожестью, которая заметно уменьшается при вредном воздействии. Кроме того, побеги и корни растения подвергаются заметным морфологическим изменениям: задержке роста и искривлению побегов, уменьшению длины и массы корней, а также числа и массы семян.

Опыт проведен при проращивании семян тест-растения кресс-салат в условиях вышеуказанных режимов с использованием вегетационных сосудов разового пользования вместимостью 600 г. смеси дерново-подзолистой почвы, песка и органики в соотношении 1:1:1. В каждом сосуде оставляли по 20 обработанных семян тест-растения. Эксперимент проводился в три повторности, с выделением четырех экспериментальных на рабочих растворах образцов №5 и №6 из таблицы 2, и одной контрольной группы на питьевой воде. Число обрабатываемых семян в каждой группе - 20 шт. Все семена были взяты из одной партии.

Рабочие растворы для замачивания семян готовили путем разбавления исходных эмульсий в 10, 100 и 200 раз. Замачивание семян тест-растения производили в течении 2-х часов после чего обработанные и контрольные семена перемещали в вегетационные сосуды.

Биологическую активность оценивали через каждые 8 часов, начиная со вторых суток после обработки, в сравнении с необработанным контролем. На 5 и 10 сутки результаты оценивались по разнице сырой массы тест-растений. Результаты первичной оценки фитотоксичности препарата "Rokiprag" по отношению к кресс-салату сорта "Radiata" приведены в Таблице 3.

Как это следует из таблицы 3, препарат "Rokiprag" проявляет фитотоксичность для кресс-салата сорта "Radiata" при концентрации рабочих растворов образцов №5 и №6 -10%. Рабочий раствор образца №5 при концентрации 1% фитотоксичности не проявил, но также не проявил и стимулирования роста растений - на уровне контроля. Рабочие растворы образца №5 при концентрации 0,5 и 1% стимулировали рост растений на 15,7% и 7,3% соответственно.

Наблюдения также показали, что во всех трех повторностях наблюдается сходные результаты. Онтогенез контрольной группы проходил по стандартной схеме. В первой группе (10%-ные рабочие растворы образцов №5 и №6) было отмечено угнетение семядоли, снижение всхожести на 5% и пролонгирование фазы проростка, но в дальнейшем растения развивались по стандартной схеме, но с существенным запаздыванием. Во второй группе (10%-ные рабочие растворы образцов №5 и №6) ростовые реакции в первые и вторые сутки замедлился, но на третьи восстановился. Тем не менее, отчетливо просматривалось угнетение растений в течение первых 10 суток. В третьей группе (0,5%-ные рабочие растворы образцов №5 и №6) отмечено усиление ростовых реакций в течение всего времени наблюдения.

Таким образом, при довсходовой обработке семян кресс-салата отмечена фитотоксичность биологически активной синергетической композиции "Rokiprag" в области концентраций рабочих растворов выше 1%, а при более высокой степени разбавления, например, до 0,5% и выше, отмечается стимуляция роста растения.

Результаты аналогичных экспериментов по определению фитотоксичности и эффективности рабочих растворов биологически активной синергетической композиции "Rokiprag" в сопоставлении с препаратом "Larixin" (Эталон) при довсходовой обработке семян культурных растений приведены в Таблице 4.

Как следует из данных приведенных в Таблице 4, средний уровень фитотоксичности препарата "Rokiprag" на 19,4% выше, чем препарата "Larixin". При этом биологическая активность препарата "Rokiprag" превосходит по критерию эффективной концентрации рабочего раствора среднюю биологическую активность препарата "Larixin" на 29,8%.

Биологически активную синергетическую композицию "Rokiprag" испытывали на землях в полевых деляночных опытах.

Погодные условия вегетационного сезона 2012 г. в ряде случаев отличались от среднемноголетних показателей (нормы) приведены в Таблице 5.

Как видно из Таблицы 5, вегетационный период 2012 года по температуре воздуха существенно не отличался от среднемноголетних показателей, но в среднем май-август были теплее обычного на 0,4-2,7°С. Осадки за вегетационный сезон (с мая по август) выпадали крайне неравномерно по сравнению со среднемноголетними уровнями (дефицит дождей колебался в пределах 18,0-43,5 мм по месяцам). Так, в мае (посев сои) осадков выпало менее 18 мм от нормы, тогда как в июле (период активного роста культурных и сорных растений) количество осадков превышало среднемноголетний показатель на 26 мм. Июль был относительно засушливым, дефицит осадков составил 43 мм, а август по количеству осадков был достаточно дождливым и не отличался от среднемноголетних показателей. В целом, вегетационный сезон 2012 года по температурным условиям и уровню атмосферных осадков был достаточно благоприятным для роста и развития как культурных, так и сорных растений, и в практическом плане существенно не отличался от среднестатистических показателей.

Культура: соя сорта Бара. Норма высева семян: 100 кг/га. Дата посева: 22.05.2012 г. Время появления всходов: 02.06.2012 г. Почва опытных делянок: дерново-подзолистая, с содержанием гумуса 2,5%, рН_вод 5,8; EKO 11 мг-экв /100 г почвы.

В день проведения довсходовой обработки: 28.05.2012 г. температура воздуха: 15,6°С. Относительная влажность воздуха: 64%. Скорость ветра: менее 1,8 м/с. Время выпадения осадков после проведения обработки и их интенсивность: через 2 часа, 1,5 мм.

В день проведения первой вегетативной обработки: 28.06.2012 г. (фаза начала цветения): температура воздуха: 18,2°С. Относительная влажность воздуха: 50%. Скорость ветра: менее 1,8 м/с. Время выпадения осадков после проведения обработки и их интенсивность: нет.

В день проведения второй обработки: 15.07.2012 г.: температура воздуха: 15,3°С. Относительная влажность воздуха: 75%. Скорость ветра: менее 1,8 м/с. Время выпадения осадков после проведения обработки и их интенсивность: через 2 часа, 0,5 мм.

Экстремальные метеоусловия (град, заморозки, ливневые дожди и т.д.): не наблюдались.

Различные составы биологически активной синергетической композиции "Rokiprag" в сопоставлении с препаратом "Larixin" (Эталон) наносили на вегетирующие растения в виде водной суспензии с помощью экспериментального опрыскивателя ОД-2 конструкции ВНИИФ (Вестник Российской сельскохозяйственной академии, 1993, №3). Норма расхода водной суспензии 300 л/га. Площадь опытных делянок 25-50 м², четырехкратная повторность, размещение делянок последовательное с элементами рендомизации.

Дозы препаратов, используемых при проведении полевых деляночных экспериментов, приведены в Таблице 6.

Даты учетов исследуемых объектов: 12 июля и 02 августа. Методика проведения учетов: количественным и количественно-весовым методами на учетных площадках 0,25 м², по 4 площадки на каждой делянке. Способ уборки и учет урожая: уборка снопами с 1 м² на каждой делянке по 2 повторности. Статистическая обработка данных методом дисперсионного анализа.

Период эффективного действия препаратов: с момента опрыскивания на протяжении всего периода вегетации культуры.

Хозяйственная эффективность баковых смесей препаратов, соответствующих новой биологически активной синергетической композиции "Rokiprag" в сопоставлении с эталоном при довсходовом применении на посевах сои, приведена в Таблице 7.

Хозяйственная эффективность баковых смесей препаратов, соответствующих новой биологически активной синергетической композиции "Rokiprag" в сопоставлении с эталоном при опрыскивании в фазу начала цветения на посевах сои, приведена в Таблице 8.

Как свидетельствуют данные, представленные в таблицах 7-8, применение биологически активной синергетической композиции "Rokiprag" образец №6, при довсходовом применении и обработке опрыскиванием в фазу начала цветения привело к существенной стимуляции роста растений и существенному росту урожайности культуры сои сорта "Бара".

Также, в ходе испытаний установлено, что образцы №5 и №6 препарата "Rokiprag" показали более высокую биологическую активность не только по сравнении с контролем, но и превысили биологическую активность эталона - препарата Larixin на 22,4%. Хозяйственная эффективность применения обоих образцов синергетической композиции "Rokiprag" была выше при внекорневой обработке, чем при довсходовом применении препаратов: 19,1-20,7 ц/га защищенного урожая сои, который существенно превосходил урожай на делянке с эталонным препаратом Larixin -16,9 ц/га.

При проведении полевых деляночных исследований достаточно неожиданным оказалось, что биологически активная синергетическая композиции "Rokiprag", дополнительно содержащая арабиногалактан и тритерпеноиды в дозах 0,05-5,0 г/гл, при различных дозах применения, а также во всех исследованных фазах вегетации устойчиво проявляет тенденцию увеличения хозяйственной эффективности при стимуляции посевов сои.

Таким образом, новую биологически активную синергетическую композицию целесообразно формулировать в виде водной эмульсии типа масло в воде при мольным отношением активных веществ дигидрокверцетин, аромадендрин и нарингенин 1,0:0,102-0,104:0,014-0,016 при содержании арабиногалактана и тритерпеноидов в композиции 0,05-0,5% вес, а также перераспределении до 5% активных компонентов из масляной фазы в водную.

Формуляцию биологически активной синергетической композиции целесообразно производить следующим образом. Водную фазу готовят путем растворения арабиногалактана и тритерпеноидов в количестве не выше 5 граммов на 1 литр дистиллированной воды в течение 4-х часов при температуре 30-40°С, после чего в раствор добавляют биологически активные компоненты, взятые в синергетическом соотношении в количестве, не превышающем 0,5 грамма на 1 литр раствора. Растворение биологически активных компонентов целесообразно производить при перемешивании с использованием ультразвука. Масляную фазу готовят путем растворения биологически активных компонентов дигидрокверцетин, аромадендрин и нарингенин взятых при мольном отношении 1,0:0,102-0,104:0,014-0,016 в растворителе, например, пропиленгликоле или смеси пропиленгликоля с этанолом, предварительно подогретом до температуры 33-39°С, с последующей добавкой эмульгатора Agrilan AEK 145 или SOPROPHOR BSU в количестве 15-25% от объема раствора активных компонентов, причем растворение ведут в течение 30-45 минут после чего добавляют стабилизатор Lankropol KPH 70 или GEROPON DOS/PG в количестве 6-9% и при интенсивном перемешивании раствор выдерживают в течение 45-60 минут при температуре 30-33°С. Целесообразно в качестве эмульгатора использовать 60%-ный раствор лецитина в соевом масле (Soya Lecithin Liquid), взятый в количестве 15-25% от объема масляной фазы, который предварительно разогревают до температуры 33-39°С. Эмульсию биологически активной синергетической композиции готовят путем непрерывного дозирования предварительно подготовленной водной фазы в масляную фазу в течение 60-90 минут при кратности циркуляции реакционной массы не ниже 9-12 объемов в час и интенсивности перемешивания 0,016-0,024 кВт на 1 литр эмульсии с последующим охлаждением до температуры 20-25°С в течение 60-90 минут.

В случае приготовления масляной фазы с использования комбинации сурфактантов Agrilan AEK 145 и Lankropol KPH 70, или SOPROPHOR BSU и

GEROPON DOS/PG 75% капель масляной фазы эмульсии имеют линейный размер (диаметр) 0,09-0,22 мкм., что позволяет характеризовать биологически активную синергетическую композицию в качестве наноэмульсий.

Наилучшие варианты использования изобретения.

Пример 1.

В обогреваемый реактор с мешалкой мощностью 0,5 кВт рабочим объемом 0,3 м³ загружают 10,5 литров пропиленгликоля CAS 57-55-6 и нагревают до температуры 37°С, после чего дозируют 1490 г дигидрокверцетина CAS 207-543-4, 130 г аромадендрина CAS 480-20-6 и 63 г нарингенина CAS 480-41-1 и перемешивают при температуре 39°С до полного растворения. Затем в реактор дозируют 2700 мл эмульгатора SOPROPHOR BSU CAS 99734-09-5 и перемешивают в течение 40 минут, после чего добавляют 1800 мл стабилизатора GEROPON DOS/PG CAS 577-11-7 и перемешивают в течение 35 минут при температуре 33°С. В аналогичный реактор заливают 18 л дистиллированной воды и разогревают до температуры 39°С, добавляют 35 г арабиногалактана CAS 9036-66-2 и 30 г водорастворимых тритерпеноидов и перемешивают в течение 4 часов, после чего добавляют 100 г дигидрокверцетина CAS 207-543-4, 15 г аромадендрина CAS 480-20-6 и 7 г нарингенина CAS 480-41-1. Перемешивание ведут в течение 2 часов ультразвуком интенсивностью 150 Вт. В первый реактор с подготовленной масляной фазой со скоростью 0,3 л/мин в течение 60 минут дозируют водную фазу при мощности перемешивания 0,5 кВт и кратности циркуляции 9 единиц объема реактора в час при температуре 35°С. Образовавшуюся эмульсию в количестве 30 литров охлаждают при интенсивном перемешивании в течение 60 минут до температуры 20°С, а затем выгружают из реактора и разливают в бутыли емкостью 1 литр. Готовая эмульсия биологически активной синергетической композиции "Rokiprag" представляет собой прозрачную жидкость темно-коричневого цвета плотностью 1,085 г/см³, значение рН 1%-ной водной эмульсии препарата - 5,9. Содержание активных компонентов: дигидрокверцетин - 50,2 г/л, аромадендрин - 4,9 г/л, нарингенин - 0,7 г/л, что соответствует синергетическому мольному отношению компонентов 1,0:0,102:0,014. Диаметр частиц (50% от состава) составляет не более 2,2-3,6 мкм. Препарат стабилен в заводской упаковке в течение 2 лет со дня изготовления в интервале температур от плюс 30°С до минус 20°С. При температуре ниже минус 20°С замерзает по всему объему. После размораживания снизу наблюдается образование слоя масляной фазы высотой около 5 мм, исчезающего при перемешивании.

Водная эмульсия биологически активной синергетической композиции "Rokiprag" в дозе 0,06 л/га применяют путем сплошного наземного опрыскивания вегетирующих растений ярового ячменя сорта Московский 2 в фазе начала выхода в трубку и в фазе появления флагового листа. Используемая аппаратура - ранцевый пневматический опрыскиватель «Агротоп», оснащенный двухметровой штангой. Расход рабочей жидкости: 300 л/га.

Сравнительная оценка биологической эффективности препарата "Rokiprag", показала высокую эффективность относительно препарата "Larixin". Учет, проведенный через 30 дней после опрыскивания посевов ярового ячменя в фазу флагового листа, показал существенное опережение роста по сравнению с контролем. Анализ элементов структуры урожая показал, что на формирование урожайности ярового ячменя основное влияние оказал такой элемент структуры, как масса 1000 зерен. Во всех вариантах с применением препарата "Rokiprag" масса 1000 зерен увеличилась на 20%, в то же время препарат "Larixin" показал увеличение массы 1000 зерен лишь на 14% по сравнению с контролем.

Опрыскивание посевов в фазу начала выхода в трубку культуры в дозе 0,06 л/га способствовало повышению урожайности ярового ячменя на 120,3% и в фазу появления флагового листа л/га на 121,2% по сравнению с урожайностью на необработанном контроле (урожайность на контроле - 30,6 ц/га).

Таким образом, биологически активная синергетическая композиция "Rokiprag" обладает высокой хозяйственной эффективностью в посевах зерновых культур, существенно повышая их урожайность, а также расширяя температурный диапазон применения.

Пример 2.

В обогреваемый реактор с мешалкой мощностью 0,5 кВт рабочим объемом 0.3 м³ загружают 4 литра, пропиленгликоля CAS 57-55-6, 1 литр этанола CAS 64-17-5 и нагревают до температуры 37°С после чего добавляют, 610 г дигидрокверцетина CAS 207-543-4, 51 г аромадендрина CAS 480-20-6 и 6 г нарингенина CAS 480-41-1 и перемешивают при температуре 33°С до полного растворения. Затем в реактор дозируют 1270 мл эмульгатора Soya Lecithin Liquid CAS 8002-43- и перемешивают в течение 40 минут. В аналогичный реактор заливают 26 л дистиллированной воды и разогревают до температуры 39°С после чего добавляют 50 г арабиногалактана CAS 9036-66-2 и 70 г водорастворимых тритерпеноидов и перемешивают в течение 4 часов, после чего добавляют 145 г дигидрокверцетина CAS 207-543-4, 21 г аромадендрина CAS 480-20-6 и 10 г нарингенина CAS 480-41-1. Перемешивание ведут в течение 2 часов при температуре 30°С. В первый реактор с подготовленной масляной фазой со скоростью 0,3 л/мин в течение 90 минут дозируют водную фазу при мощности перемешивания 0,5 кВт и кратности циркуляции 12 единиц объема реактора в час при температуре 35°С. Образовавшуюся эмульсию в количестве 30 литров охлаждают при интенсивном перемешивании в течение 60 минут до температуры 20°С, а затем выгружают из реактора и разливают в бутыли емкостью 1 литр. Готовая эмульсия биологически активной синергетической композиции "Rokiprag" представляет собой прозрачную жидкость светло-коричневого цвета плотностью 1,055 г/см³, значение рН 1%-ной водной эмульсии препарата - 5,7. Содержание активных компонентов: дигидрокверцетин - 25,2 г/л, аромадендрин - 2,4 г/л, нарингенин - 0,33 г/л, что соответствует синергетическому мольному отношению компонентов 1:0,104:0,016. Диаметр частиц (50% от состава) составляет не более 2,4-3,2 мкм. Препарат стабилен в заводской упаковке в течение 2 лет со дня изготовления в интервале температур от плюс 30°С до минус 20°С. При температуре ниже минус 20°С замерзает по всему объему. После размораживания сверху наблюдается образование слоя воды высотой около 1-3 мм, исчезающего при перемешивании.

Полевые мелкоделяночные испытания водной эмульсии биологически активной синергетической композиции "Rokiprag" проведены в период сентябрь 2010 - июль 2011 года. Культура - озимая пшеница сорта Московская 39, норма высева - 230 кг/га. Дата посева -10 сентября 2010 года. Почва - выщелоченный чернозем, содержание гумуса в пахотном слое 4,8%, рН 5.8, калия и фосфора высокое. Предшественник - сидеральный горчичный пар. Обработка почвы - заделка зеленой массы горчицы белой дисковой бороной, предпосевная культивация, сев, прикатывание. Время появления всходов - 20 сентября 2010 года. Удобрения - весенняя подкормка N₆₀ разбросным способом. Фаза развития растений в момент обработки (27 мая 2011 года) - фаза кущения.

В течение всего исследования наблюдались экстремальные метеоусловия - недостаток влаги и высокие температуры в мае-июле.

В день проведения обработки температура воздуха составила 28°С, относительная влажность воздуха 64%, скорость ветра 2 м/сек. Способ применения - сплошное наземное опрыскивание вегетирующих растений в фазе кущения. Используемая аппаратура - ранцевый пневматический опрыскиватель «Агротоп», оснащенный двухметровой штангой. Расход рабочей жидкости: 300 л/га.

Даты учетов: 26 июня - через 30 дней после опрыскивания, 11 июля - через 45 дней после опрыскивания, 18 июля - при уборке. Методика проведения учетов - количественным и количественно-весовым методом на 4 учетных площадках по 0,25 м² на каждой делянке опыта. Способ уборки и учет урожая культуры: вручную, методом пробных снопов с учетной площади 1 м² на каждой опытной делянке. Дата уборки урожая -18 июля 2011 г.

С целью получения сведений о возможной токсичности эмульсии биологически активной синергетической композиции для растений озимой пшеницы были проведены систематические визуальные наблюдения за обработанными делянками. Под действием доз препарата "Rokiprag" - 0,03 и 0,06 л/га видимого угнетения вегетирующих растений озимой пшеницы сорта Московская 39 не отмечалось. Растения не отличались по окраске листьев, высоте от растений на контрольном и эталонном вариантах за исключением дозы 0,06 л/га, когда наблюдалось опережающее развитие растений.

Проведенные полевые мелкоделяночные испытания показали, что выявлена высокая эффективность применения норм расхода изучаемого препарата. Через 30 дней после обработки посевов озимой пшеницы в фазе выхода в трубку дозами препарата 0,03 и 0,06 л/га биологически активная синергетическая композиция "Rokiprag" усилила рост растений на 6 и 8%. При учете через 45 дней после опрыскивания ускорение роста растений составило 8 и 10%, а их биомасса на 7 и 9% соответственно.

Анализ элементов структуры урожая показал, что на формирование урожайности озимой пшеницы основное влияние оказал такой элемент структуры, как масса 1000 зерен. На вариантах с применением всех норм расхода препарата масса 1000 зерен увеличилась на 3,2-3,7 г, по сравнению с необработанным вариантом (масса 1000 зерен на контроле - 44,4 г).

Структура урожая озимой пшеницы сорта Московская 39 при применении препарата "Rokiprag" приведена в таблице 9.

Опрыскивание посевов в фазу выхода в трубку культуры препаратом "Rokiprag" в дозах 0,03и 0,06 л/га способствовало повышению урожайности озимой пшеницы на 16,2 и 19,5% по сравнению с урожайностью на необработанном контроле (урожайность на контроле - 36.4 ц/га).

Урожайность озимой пшеницы сорта Московская 39 при использовании препарата "Rokiprag" приведена в таблице 10.

Проведенные мелкоделяночные регистрационные испытания препарата "Rokiprag" в условиях Рязанской области на озимой пшенице показали, что опрыскивание посевов в фазу выхода в трубку не оказало отрицательного влияния на дальнейший рост и развитие культуры. Применение препарата "Rokiprag" в исследуемых дозах существенно повысило устойчивость растений зерновых к мучнистой росе, септориозу, гельминтоспориозу. Биологическая эффективность препарата "Rokiprag" против септориоза листьев в опытах составляла 61%, бурой ржавчины - 83,3%. Биологически активная синергетическая композиция "Rokiprag" в дозе 0,03 л/га показала высокую эффективность и устойчивости посевов к погодным аномалиям и повышении урожайности.

Пример 3.

В обогреваемый реактор с мешалкой мощностью 0,5 кВт рабочим объемом 0,3 м³ загружают 10,5 литров пропиленгликоля CAS 57-55-6 и нагревают до температуры 37°С, после чего дозируют 1490 г дигидрокверцетина CAS 207-543-4, 130 г аромадендрина CAS 480-20-6 и 63 г нарингенина CAS 480-41-1 и перемешивают при температуре 39°С до полного растворения. Затем в реактор дозируют 2400 мл эмульгатора Soya Lecithin Liquid CAS 8002-43- и перемешивают в течение 40 минут. В аналогичный реактор заливают 26 л дистиллированной воды и разогревают до температуры 39°С после чего добавляют 90 г арабиногалактана CAS 9036-66-2 и 25 г водорастворимых тритерпеноидов и перемешивают в течение 4 часов, после чего добавляют 145 г дигидрокверцетина CAS 207-543-4, 21 г аромадендрина CAS 480-20-6 и 10 г нарингенина CAS 480-41-1. Перемешивание ведут в течение 2 часов при температуре 30°С. В первый реактор с подготовленной масляной фазой со скоростью 0,3 л/мин в течение 90 минут дозируют водную фазу при мощности перемешивания 0,5 кВт и кратности циркуляции 12 единиц объема реактора в час при температуре 35°С. Образовавшуюся эмульсию в количестве 30 литров охлаждают при интенсивном перемешивании в течение 60 минут до температуры 20°С, а затем выгружают из реактора и разливают в бутыли емкостью 1 литр. Содержание активных компонентов: дигидрокверцетин - 50,2 г/л, аромадендрин - 4,9 г/л, нарингенин - 0,7 г/л, что соответствует синергетическому мольному отношению компонентов 1:0,103:0,015. Диаметр частиц (50% от состава) составляет 2,2-3,6 мкм. Препарат стабилен в заводской упаковке в течение 2 лет со дня изготовления в интервале температур от плюс 30°С до минус 20°С. При температуре ниже минус 20°С замерзает по всему объему. После размораживания сверху наблюдается образование слоя водной фазы высотой около 5 мм, исчезающего при перемешивании.

Полевые мелкоделяночные испытания водной эмульсии биологически активной синергетической композиции "Rokiprag" проведены в 2013 году на землях фермерских хозяйств Рокишкского района Литовской Республики.

Исследования выполнялась в пленочной грунтовой теплице. Теплица без аварийного обогрева, оборудована системой шлангового полива. Почвенный грунт - дерновоперегнойный. Почву в теплице перед посадкой растений проливали, вносили необходимое количество минеральных удобрений азофоска, доводя уровень обеспечения элементами минерального питания до N₂O - 90, Р₂О₅ - 20, K₂O - 25, Mg₇₀ Ca₉₀. Рассаду выращивали в пленочной теплице с аварийным обогревом. Посев семян проводили 15 апреля в ящики, наполненные почвосмесью (1 часть полевой почвы и 2 части опилок). Перед посевом почвосмесь проливали медным купоросом для защиты всходов от корневой и шейковой гнили. На 8-е сутки после всходов сеянцы пикировали в горшки 10/10 см, которые размещали в пленочной теплице с аварийным обогревом. Уход за рассадой включал 2 подкормки комплексным минеральным удобрением Кемира, полив, прополку, расстановку. Высадку рассады в грунтовую пленочную теплицу осуществляли 31 мая. Лунки копали по двухстрочной схеме 90×40 с расстоянием между лунками 35-40 см. Густота посадки 3,5 растения на 1 м². Растения формировали в 1 стебель, подвязывали на шпагате к шпалерам 2 м высотой. Уход за растениями осуществляли в соответствии с общепринятой технологией. Обработки растений в период вегетации проводили 10 июня, 20 июня, 1 июля.

Испытания методами опрыскивания проводились на вегетирующих культурах томатов в закрытом грунте. Площадь опытных делянок - 10 м². Площадь контрольных делянок - 5 м². Повторность опытов четырехкратная. Схема опыта:

1. Контроль - без обработки.

2. Препарат "Rokiprag" - первое опрыскивание растений в фазе начала цветения первой кисти, второе опрыскивание через 10 дней после первого, третье опрыскивание через 10 дней после второго. Расход препарата 60 - мл/га, расход рабочего раствора - 400 л/га.

3. Препарат "Larixin" - первое опрыскивание растений в фазе начала цветения первой кисти, второе опрыскивание через 10 дней после первого, третье опрыскивание через 10 дней после второго. Расход препарата 60 - мл/га, расход рабочего раствора - 400 л/га.

В ходе испытаний было отмечено ускорение роста биомассы рассады на 25-30%, наступление начала фазы цветения на 2-3 суток раньше, а также ускорение созревания плодов на 4-6 суток по сравнению с контролем. Одновременно было отмечено снижение поражения растений фитофторозом, альтернариозом, септориозом, черной бактериальной пятнистостью на 65-70% по сравнению с контролем.

Качество продукции оценивали по стандартным методикам: содержание сухого вещества - термостатновесовым методом, содержание сахаров - методом Бертрана, содержание витамина С - методом И.К. Мурри. При обработке данных использовали методы вариационной статистики (Б.А. Доспехов, 1985).

Как показали проведенные учеты, обработки регуляторами роста оказывали положительное влияние на сроки прохождения основных фенофаз. При обработках препаратом "Rokiprag", различия с контролем для фазы начала формирования и начала созревания плодов составляли 4 суток. Различия с эталоном "Larixin" не превышали 1 суток.

Влияние препарата "Rokiprag" на сроки прохождения фенофаз растений томата проиллюстрированы в Таблице 11.

Обработки растений томата препаратом "Rokiprag" оказали положительное влияние на ускорение созревания плодов и выход ранней продукции. Отмечены существенные различия с контролем по урожайности за первые недели сбора. Повышение общей урожайности плодов под влиянием обработок препаратом "Rokiprag" составило 7,1% к контролю.

Влияние препарата "Rokiprag" на урожайность томата проиллюстрировано в Таблице 12.

Изучение биохимического состава плодов томата в зависимости от вариантов опыта показало, что под влиянием обработок в плодах повышалось процентное содержание сухого вещества, сахаров и витамина С по сравнению с контролем.

Влияние препарата "Rokiprag" на биохимический состав плодов томата представлено в Таблице 13.

Содержание нитратного азота в продукции во всех вариантах опыта было значительно меньше значения ПДК, которое составляет для томатов защищенного грунта 300 мг/кг сырой массы. Отмечены высокие вкусовые качества продукции.

Таким образом, в результате проведенных опытов установлено положительное влияние препарата "Rokiprag" на выход ранней продукции, биохимический состав и вкусовые качества плодов томата.

Пример 4.

В условиях получения водной эмульсии биологически активной синергетической композиции "Rokiprag", описанном в Примере 3, в сезоне 2013 года проведены полевые мелкоделяночные испытания препарата "Rokiprag" на вегетирующих культурах винограда в погодно-климатических условиях Рокишкского района Литовской Республики. Почва - выщелоченный чернозем. Мощность гумусового горизонта превышает 150 см. Почвы богаты валовым калием; количество валового фосфора в верхних горизонтах составляет 0,18%, основная часть представлена минеральными соединениями, в верхних горизонтах на 55-65%, в нижних - более 90% от валового количества, органические фосфаты содержатся в количестве 43% в верхних и 8-10% в нижних горизонтах. Черноземы обладают высокой влагоудерживающей способностью, но характеризуются низким диапазоном активной влаги. Из общего количества почвенной влаги лишь менее 50% относится к категории активной или продуктивной влаги. Климат - район закладки опытов - неустойчиво-влажная зона. Коэффициент увлажнения 0,25-0,30. За год выпадает 500-600 мм осадков. Среднемесячная температура января - минус 5-7°С, минимальная температура минус 30-36°С, высота снежного покрова 5-7 см. В 50-70% снежный покров неустойчив. Возобновление вегетации озимых отмечается в третьей декаде марта. Безморозный период продолжается 185-220 дней. Лето жаркое с преобладанием ясной и сухой погоды. Средняя месячная температура июля - плюс 24-26°С, максимальная в отдельные дни повышается до плюс 30-33°С. Жарких дней (со среднесуточной температурой выше плюс 20°С) насчитывается за лето до 80-90. Сумма осадков за период активной вегетации составляет 250-300 мм. За лето насчитывается до 70-85 дней с суховеями. Отличительной чертой весеннего периода зоны является быстрый подъем температуры. Характерной особенностью осеннего периода являются значительные колебания температуры воздуха в течение суток от плюс 1-2°С ночью до плюс 25-26°С - днем. Погодные условия в период вегетации 2013 г. представлены в Таблице 14.

Погодные условия в период вегетации сельскохозяйственных растений отличались от средних многолетних существенно. Рано наступившая засуха и высокая температура ускорили время прохождения фаз вегетации и старение листьев, ослабили процесс формирования репродуктивных органов. Ливневые дожди, прошедшие в фазу созревания и в период уборки снизили качество сельскохозяйственной продукции.

Схема опыта:

1. Контроль - без обработки;

2. "Larixin" - опрыскивание растений: 1-е - в фазе цветения, 2-е - через 20 дней после первого (250 мл/га, 600 л/га);

3. "Rokiprag" - опрыскивание растений: 1-е - в фазе цветения, 2-е - через 20 дней после первого (250 мл/га, 600 л/га).

Учетная площадь делянок -10 м", повторность - четырехкратная.

В опыте проводили структурный анализ урожая (определяли число гроздей и их массу), урожайность ягод с куста и с гектара (по фактически убранному валу); определяли качество ягод - содержание в них сахара и титруемых кислот (Иванов И.И., 1946). Данные урожая, числа и массы гроздей обрабатывали методом дисперсионного анализа по Б.А. Доспехову (1985).

Влияние испытуемых препаратов на формирование гроздей и качество ягод винограда проиллюстрировано в Таблице 15.

Как показали исследования, двукратное опрыскивание вегетирующих растений винограда (1-е в цветение и 2-е - через 20 дней после первого) способствовало формированию большего числа (27,0-27,2 шт., в контроле - 23,6 шт. ) более крупных по массе (173,9-174,7 г, в контроле -158,8 г) гроздей. Наряду с этим повысилось качество ягод - в их соке возросли содержание сахаров (21,7-22,3, в контроле - 20,7%) и титруемых кислот (8,8-9,5 г/дм, в контроле - 7,3 г/дм³.

Следует отметить, что в варианте с применением препарата "Rokiprag", в дозе 250 мл/га количество и масса грозди было максимальным, а качество ягод - лучшим.

Влияние испытуемых препаратов на урожайность винограда проиллюстрированы в Таблице 16.

Данные таблицы 3 показывают, что за счет увеличения числа гроздей на 12,3-15,7% и массы гроздей на 4,7-10,0% урожайность винограда на кусте возросла на 19,4-19,9%, с гектара - на 20,2-21,1%. Максимальная урожайность получена в варианте с двукратной обработкой растений препаратом "Rokiprag" в дозе 250 мл/га.

Источники информации.

1. Патент РФ №2463759, A01C 1/06, A01C 1/08, 2011.

2. Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений (ВИЛФР). Колхир Владимир Карлович. Поиск и разработка фитопрепаратов содержащих тритерпеноиды и флавоноиды. Диссертация в виде доклада на соискание ученой степени доктора медицинских наук. Купавна 2002 г. http://medical-diss.com/docreader/55384/a?#?page=1

3. Международная заявка WO 2005/058476, B01J 13/16, 2005.

4. Международная заявка WO 2008/123797, A61K 9/10, A61K 9/107, A61K 31/352, A61K 31/015, A61K 36/324, A61K 33/00, A61K 8/06, A61K 9/10, A61K 47/10, A61K 47/14. 2008.

5. Патент РФ №2229213, A01G 1/00, А01 N65/00, 2002.

6. Государственный каталог пестицидов и агрохимикатов РФ. Регистрационные номера 0164-06-111-042-0-1-3-0 и 1986-10-111-042-0-1-3-1.

7. Council Regulation (ЕС) No 834/2007 of 28 June 2007 on organic production and labelling of organic products and repealing Regulation (EEC) No 2092/91. Official Journal of the European Union, L 189/1, 20.7.2007.

8. Comission Regulation (EC) No 889/2008 of 5 September 2008 laying down detailed rules for the implementation of Council Regulation (EC) No 834/2007 on organic production and labelling of organic products with regard to organic production, labelling and control. Official Journal of the European Union, L 250/1, 18.9.2008.

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Предложена биологически активная синергетическая композиция, водная эмульсия которой включает биофлавоноидный комплекс дигидрокверцетина, аромадендрина и нарингенина, которые берут в мольном отношении 1,0:0,102-0,104:0,014-0,016, растворитель и эмульгатор. Причем в водную фазу эмульсии дополнительно вводят арабиногалактан и водорастворимые тритерпеноиды в количестве 0,3 - 0,7 вес.% от водной фазы, а биофлавоноидный комплекс распределяют между масляной и водной фазами в весовом отношении 5-10:1. Изобретение предназначено для высокоэффективной предпосевной обработки семян. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 16 табл., 4 пр.

1. Биологически активная синергетическая композиция, характеризующаяся тем, что водная эмульсия ее включает биофлавоноидный комплекс дигидрокверцетина, аромадендрина и нарингенина, которые берут в мольном отношении 1,0:0,102-0,104:0,014-0,016, растворитель и эмульгатор, причем в водную фазу эмульсии дополнительно вводят арабиногалактан и водорастворимые тритерпеноиды в количестве 0,3 - 0,7 вес.% от водной фазы, а биофлавоноидный комплекс распределяют между масляной и водной фазами в весовом отношении 5-10:1.

2. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что в качестве масляной фазы используют раствор биофлавоноидного комплекса в пропиленгликоле и/или этаноле, а в качестве эмульгатора используют полиароматические этоксилаты и диоктил сульфосукцинат натрия или 60%-ный раствор лецитина в соевом масле, взятые в количестве 15 - 25% от объема масляной фазы

3. Способ получения водной эмульсии биологически активной синергетической композиции, характеризующийся следующими этапами:

(i) раздельное приготовление масляной и жидкой фаз, включающее следующие шаги:

(a) приготавливают водную фазу путем растворения арабиногалактана и тритерпеноидов в дистиллированной воде в количестве не выше 5 г на 1 литр в течение 4-х часов при температуре 30 - 40°С,

(b) после чего в раствор, полученный в шаге (а), добавляют биологически активные компоненты (дигидрокверцетин, аромадендрин и нарингенин), взятые в синергетическом соотношении 1,0:0,102-0,104:0,014-0,016 в количестве, не превышающем 0,5 г на 1 литр воды,

(c) приготавливают масляную фазу путем растворения дигидрокверцетина, аромадендрина и нарингенина, взятых в мольном отношении 1,0:0,102-0,104:0,014-0,016 в предварительно подогретом до температуры 33 - 39°С пропиленгликоле,

(d) с последующей добавкой неионогенного эмульгатора на основе полиароматического этоксилата или поли(окси-1,2-этандиил), .alpha.-[трис(1-фенилэтил)фенил]-omega.- гидроксил в количестве 15 - 25% от объема раствора активных компонентов, к раствору, полученному в шаге (с), причем растворение ведут в течение 30-45 мин,

(f) после чего добавляют стабилизатор, состоящий из диоктилсульфосукцината натрия и пропиленгликоль или диоктилнатрийсульфосукцинат в гликолевом растворе воды в количестве 6-9 об.%, в раствор, полученный в шаге (d),

(g) полученный в шаге (f) раствор выдерживают в течение 45-60 мин при температуре 30 - 33°С при интенсивном перемешивании,

(ii) непрерывное дозирование предварительно подготовленной водной фазы в масляную фазу в течение 60-90 мин при кратности циркуляции реакционной массы 9-12 объемов в час и интенсивности перемешивания 0,016-0,024 кВт на 1 литр эмульсии,

(iii) охлаждение эмульсии, полученной на этапе (ii) до температуры 20 - 25°С в течение 60-90 мин.

4. Применение композиции по пп. 1-3 для обработки семян сельскохозяйственных растений или культур на ранних стадиях вегетации путем распыления, причем композицию дополнительно растворяют в воде до концентрации биофлавоноидного комплекса 0,05 - 0,25 г/л.