СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РИСКА РАЗВИТИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ПРИ АТОПИЧЕСКОМ ДЕРМАТИТЕ Российский патент 2019 года по МПК G01N33/533 

Изобретение относится к медицине, в частности к дерматовенерологии, и может быть использовано для прогнозирования развития инфекционных осложнений при атопическом дерматите.

Присоединение вторичной инфекции - бактериальной, грибковой или вирусной, часто осложняет течение атопического дерматита, пролонгирует длительность заболевания и способствует инвалидизации пациента. Именно поэтому своевременное выявление риска присоединения вторичной инфекции может обеспечить эффективность лечения атопического дерматита, пролонгирование периода ремиссии и улучшение качества жизни пациента [1, 2].

Известен способ прогнозирования течения атопического дерматита, при котором выделяют эпителиоциты в браш-биоптатах слизистой ротоглотки, исследуют электрокинетическую активность ядер буккальных эпителиоцитов (ЭлА) индекс инфицирования (ИИ), индекс адгезии (ИА), берут смывы с воспалительных участков кожи площадью 2 см², в которых определяют количество КОЕ/см² S. aureus и при значении ИИ>70%, ИА>100-150 микробных клеток на эпителиоцит, КОЕ>200/см² и ЭлА<20% - прогнозируют тяжелое (осложненное) течение атопического дерматита, а при ИИ<30%, ИА<50 микробных клеток на эпителиоцит, КОЕ<50/см² и ЭлА>30% прогнозируют легкое (не осложненное) течение атопического дерматита [3].

Основным недостатком данного аналога является сложность способа за счет необходимости проведения большого числа диагностических исследований.

Известен способ прогнозирования развития осложненных форм атопического дерматита, при котором определяют факторы риска: наличие семейной отягощенности по аллергическим заболеваниям и очагов хронической инфекции, неонатальные, антенатальные, алиментарные, микроэкологические, макроэкологические. По конкретным данным проводят расчет значений дискриминантных функций (fb f2, fs) на основе экспериментально определенных коэффициентов с помощью IBM PC. При наибольшем ее значении прогнозируют вероятность развития атопического дерматита у детей и его осложненных форм вторичной инфекцией бактериальной и грибковой этиологии [4].

Основным недостатком данного аналога является недостаточная точность, так как исследуют факторы риска, которые не всегда приводят к развитию инфекционных осложнений [5].

Наиболее близким аналогом - прототипом - является способ прогнозирования развития инфекционных осложнений атопического дерматита у взрослых, согласно которому проводят иммунологическое исследование периферической крови больных атопическим дерматитом и определяют содержание субпопуляций лимфоцитов CD3⁺, CD4⁺, CD8⁺, CD16⁺, CD72⁺, γδT и CD8αα и при повышении числа CD3⁺, CD4⁺, CD72⁺ лимфоцитов на фоне уменьшения содержания CD8⁺, CD16⁺, γδТ и CD8αα-лимфоцитов прогнозируют формирование инфекционных осложнений атопического дерматита [6].

Основным недостатком данного аналога является недостаточная точность способа за счет низкой специфичности маркеров, так как увеличение или уменьшение числа субпопуляций лимфоцитов CD3⁺, CD4⁺, CD8⁺, CD16⁺, CD72⁺, γδT и CD8αα может наблюдаться при других патологиях, не связанных с кожными заболеваниями.

Для повышения точности способа прогнозирования риска развития инфекционных осложнений при атопическом дерматите в сыворотке крови у пациентов определяют уровень экспрессии Тоll-2 рецепторов на моноцитах и при содержании Тоll-2 рецепторов более 216 Cell/uL прогнозируют высокий риск развития инфекционных осложнений, при содержании Тоll-2 рецепторов менее 216 Cell/uL прогнозируют низкий риск развития инфекционных осложнений у пациентов с атопическим дерматитом.

Способ осуществляют следующим образом. Производят забор венозной крови натощак, центрифугируют. В сыворотке крови метят моноциты анти-СD14 МАТ для наложения оптимального окна дискриминации (гейта) для моноцитов/макрофагов на точечном графике прямого и бокового светорассеяния. При анализе, моноцитарно-макрофагальный гейт включает не менее 93-96% клеток с фенотипом CD14⁺. В каждом образце анализировали не менее 10⁴ клеток. Для удаления эритроцитов пробоподготовку проводят с использованием лизирующего раствора Opti Lise С фирмы Immunotex (Франция) по прилагаемому протоколу. Определяют экспрессию Тоll-2 рецепторов на моноцитах методом четырехпараметрического фенотипирования, используя комбинации моноклональных антител (МАТ) к дифференцировочным (CD 14) и активационным маркерам (CD282, CD284, HLADR). Результаты фиксируют на проточном цитофлюориметре Beckman Coulter FC-500 (США), используя стандартные протоколы.

Примечание: * - различия от группы контроля при р<0,05; ** - различия от группы контроля при р<0,001. Р1 = Манна-Уитни по сравнению с контролем, Р2 = Манна-Уитни сравнение между группами, Р3 = Вилкоксона сравнение между ремиссией и обострением

В качестве показателя для прогнозирования атопического дерматита взят Тоll-2 рецептор. Известно, что кожа является барьером между внутренней средой и окружающим пространством, выполняя защитную функцию. Это первый барьер нашего организма, сталкивающийся с инфекционными агентами, где возникает воспалительный процесс, реализующийся через Toll-подобные рецепторы. От площади кожного покрова, вовлеченного в патологический процесс, зависит распределение и активность данных рецепторов. Для Тоll-2 рецептора основным лигандом являются Staphylococcus aureus, Candida albicans, которые по современным данным, активно персистируют на коже пациентов с атопическим дерматитом [7, 8, 9]. Следовательно, учитывая уровень экспресии Тоll-2 рецептора моноцитами, можно использовать данный показатель в качестве прогностического критерия развития осложнений при атопическом дерматите.

Примеры конкретного применения способа.

ПРИМЕР №1.

Пациент А., 18 лет. Обратился с жалобами на высыпания и выраженный кожный зуд. Болеет с детства. Наследственность не отягощена. Объективно: Дыхание в легких везикулярное хрипов нет. ЧДД 19 в минуту Тоны сердца ясные ритмичные. Пульс 70 в минуту. АД 110/70 мм рт.ст. Локальный статус: Кожный процесс распространенного характера, локализуется на коже лица, верхних и нижних конечностей в виде множественных папулезных элементов, экскориаций, выраженной лихенификации. Выставлен диагноз: атопический дерматит, взрослый период, распространенная форма, стадия обострения. Пациенту назначена базовая стандартная терапия. Определили уровень Тоll-2 рецепторов в сыворотке крови. Абсолютный показатель составил 301, что соответствует высокому риску развития инфекционных осложнений. К базовому лечению добавили антибактериальную терапию, через 10 дней пациент выписан с выздоровлением.

ПРИМЕР №2.

Пациент Е., 21 год. Обратился с жалобами на высыпания, кожный зуд и сухость кожи. Болеет в течении 10 лет. Наследственность не отягощена. Объективно: Дыхание в легких везикулярное хрипов нет. ЧДД 18 в минуту Тоны сердца ясные ритмичные. Пульс 68 в минуту. АД 110/70 мм рт.ст. Локальный статус: Кожный процесс распространенного характера, локализуется на коже лица, груди, спины, сгибательной поверхности верхних и нижних конечностей в виде эритематозно-папулезных элементов, множественных экскориаций, геморрагических корочек, выраженной лихенификации. Выставлен диагноз: атопический дерматит, взрослый период, распространенная форма, стадия обострения. Назначена базовая терапия атопического дерматита. Определили уровень TLR-2 рецепторов в сыворотке крови, абсолютный показатель составил 412, что соответствует высокому риску развития инфекционных осложнений. К базовой терапии добавлен антибактериальный препарат, от приема которого пациент отказался, мотивируя возникновением побочных эффектов при приеме лекарственного препарата. Через 5 суток у пациента появились клинические симптомы стрептококковой инфекции, терапия была пролонгирована за счет этиотропного лечения пиодермии. Пациент выписан с улучшением на 14 сутки.

ПРИМЕР №3.

Пациент О., 27 лет. Обратился с жалобами на высыпания и кожный зуд. Болеет с 10 лет. Наследственность не отягощена. Объективно: Дыхание в легких везикулярное хрипов нет. ЧДД 16 в минуту Тоны сердца ясные ритмичные. Пульс 72 в минуту. АД 120/80 мм рт.ст. Локальный статус: Кожный процесс распространенного характера, локализуется на коже лица, груди, спины, разгибательной поверхности верхних конечностей в виде эритематозно-папулезных элементов, экскориаций, лихенификации. Выставлен диагноз: атопический дерматит, взрослый период, распространенная форма, стадия обострения. Назначена базовая терапия атопического дерматита. Определили уровень Toll-2 рецепторов в сыворотке крови, абсолютный показатель составил 201, что соответствует низкому риску развития инфекционных осложнений. Пациент получил стандартную базовую терапию, через 10 суток выписан с выздоровлением.

Данный способ прогнозирования риска развития инфекционных осложнений использовали у 56 пациентов с атопическим дерматитом. Точность диагностики - 91%.

Литература

1. Текучева, Л.В. Мониторинг стафилококковой микрофлоры у больных атопическим дерматитом / Л.В. Текучева, Е.В. Зайцева, В.Г. Арзуманян // Вестн. дерматол. и венерол. 2006. - №5. - С. 69-72.

2. Баткаев, Э. Лечение атопического дерматита у детей с измененным микробиоценозом кожи / Э. Баткаев, И. Попов // Врач. - 2017. - №12. - 40-47.

3. RU 2310195, G01N 33/48 –аналог.

4. RU 2297797, А61В 10/00 – аналог.

5. Клиническая аллергология. Руководство для практических врачей / под ред. Р.М. Хаитова. - М. - МЕДпресс-информ. - 2002. - 624 с.

6. RU 2350960, G01N 33/53 – прототип.

7. Сорокина, Е.В. Роль Toll-подобных рецепторов в патогенезе некоторых дерматозов / Е.В. Сорокина, С.А. Масюкова // Клиническая дерматология и венерология. - 2011. - №5. - С. 13-16.

8. Кожа как орган иммунной системы. / Т.Э. Боровик [и др.] // Педиатрия. - 2010. - №2. - С. 10-18.

9. Катунина, О.Р. Функции Toll-подобных рецепторов как компонента врожденного иммунитета и их участие в патогенезе дерматозов различной этиологии / О.Р. Катунина // Вестн. дерматол. и венерол. -2011.-№2. - С. 18-25.

Изобретение относится к медицине, в частности к дерматовенерологии, и раскрывает способ прогнозирования риска развития инфекционных осложнений при атопическом дерматите на основании уровня экспрессии TLR-2 рецепторов моноцитами периферической крови. Способ характеризуется тем, что в ходе биохимического исследования крови определяют уровень экспрессии Toll-2 рецепторов на моноцитах и при содержании Тоll-2 рецепторов более 216 Cell/uL прогнозируют высокий риск развития инфекционных осложнений, при содержании Тоll-2 рецепторов менее 216 Cell/uL прогнозируют низкий риск развития инфекционных осложнений. Эффективность способа прогнозирования риска развития инфекционных осложнений при атопическом дерматите обусловлена высокой точностью диагностики, способствующей улучшению качества жизни пациентов. Изобретение отличается высокой точностью диагностики (91%) и может быть использовано для прогнозирования риска развития инфекционных осложнений при атопическом дерматите. 1 табл., 3 пр.

Способ прогнозирования риска развития инфекционных осложнений при атопическом дерматите, включающий биохимическое исследование крови, отличающийся тем, что определяют уровень экспрессии Toll-2 рецепторов на моноцитах и при содержании Тоll-2 рецепторов более 216 Cell/uL прогнозируют высокий риск развития инфекционных осложнений, при содержании Тоll-2 рецепторов менее 216 Cell/uL прогнозируют низкий риск развития инфекционных осложнений.