Способ прогнозирования анемии у беременных при цитомегаловирусной инфекции Российский патент 2019 года по МПК G01N33/48 

Область применения: изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству, а также к области научных исследований - патологической физиологии, и предназначено для прогнозирования риска развития анемии при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией.

Уровень техники

Цитомегаловирусная (ЦМВ) инфекция продолжает оставаться одной из наиболее распространенных причин патологии в акушерской практике, часто приводя к нарушениям беременности, а также к перинатальной патологии [2].

Обострение ЦМВ инфекции в период гестации ассоциировано с активацией процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ), с избыточным накоплением вторичных продуктов, в том числе, малонового диальдегида [7], который оказывает негативное воздействие на ферменты, тем самым подавляя процессы тканевого дыхания. Активные формы кислорода, обладая токсическим действием на клетки, обеспечивают повышение содержания фактора некроза опухолей в организме женщины, в результате чего увеличивается выраженность деструктивных и воспалительных процессов в тканях, выделяется много веществ, способствующих развитию эндогенной интоксикации. В дополнение к вышеизложенному, ПОЛ приводит к нарушению стабильного состояния мембран эритроцитов за счет изменения их липидного состава [8].

Ранее мы установили, что в условиях ЦМВ инфекции угнетается антиоксидантный потенциал организма беременной женщины, как за счет ферментативного звена (уменьшение активности эритроцитарной супероксиддисмутазы), так и неферментных антиоксидантов (уменьшение уровня α-токоферола) [1].

Следовательно, развивающийся окислительный стресс у беременных с обострением ЦМВ инфекции может быть причиной развития анемии, что объясняется наличием вторичных продуктов ПОЛ и свободных жирных кислот, которые способствуют повреждению эритроцитов [20], вызывая кластеризацию мембраны и окислительную модификацию гемоглобина [17].

На современном этапе развития медицины диагностика анемии строится на основе определения двух основных параметров: количества гемоглобина и эритроцитов в крови. Действительно, эти параметры должны лежать в основе диагностики анемии, так как уменьшение количества гемоглобина в эритроцитах крови лимитирует возможность транспорта кислорода к органам и тканям. Однако известно, что анемия мультифакторное заболевание, причинами которого является нарушение эритропоэза, недостаток железа или гемолиз эритроцитов [4, 16]. То есть использование двух параметров для постановки диагноза анемии является недостаточным.

По результатам зарубежных исследователей установлено, что высокая концентрация продуктов пероксидации липидов, арахидоновой кислоты вызывает реакции окислительного стресса, повреждая эритроциты и гемоглобин [14, 15]. Также отмечено, что развитие анемии тесно связано с формированием окислительного стресса и снижением антиоксидантной защиты [18, 19].

Первичные продукты ПОЛ, будучи веществами, весьма нестойкими, довольно быстро разрушаются с образованием вторичных продуктов: альдегидов, кетонов, спиртов и эпоксинов. Среди них наиболее известен малоновый диальдегид (МДА), определяемый по реакции с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) и поэтому составляющий основной компонент группы, так называемых ТБК-активных веществ. МДА оказывает повреждающее действие, прежде всего, на мембраны клеток, изменяя физические и биологические свойства мембран (микровязкость, текучесть, гидрофильность), способствуя развитию эндотелиальной интоксикации [9]. Повышение содержания продуктов ПОЛ приводит к нарушению проницаемости и биофизических свойств мембран клеток [11], разрушению веществ, обладающих антиоксидантной способностью - витамины, стероидные гормоны, убихинон и др.

Помимо этого, ТБК-активные продукты реагируя с SH- и СН₃-группами белков, изменяют активность ферментов: цитохромоксидазы (подавляя тем самым тканевое дыхание), гидролазы, осуществляющей превращение холестерола в желчные кислоты [10].

Вышеизложенные данные о патогенетической роли продуктов пероксидации липидов, свободных жирных кислот в развитии анемических состояний, определяют необходимость разработки способов прогнозирования анемии с целью определения факторов риска угрожающего течения беременности.

Наибольшую прогностическую ценность имеют способы, позволяющие проводить оценку угрожающих состояний беременности, связанных с развитием анемии, в том числе инфекционного генеза.

Известны способы выявления в периферической крови беременных концентрации арахидоновой кислоты [5, 12, 13], ТБК-активных продуктов, арахидоновой кислоты, лизофосфатидилхолина, гемоглобина и его дериватов [6]

Основными недостатком данных способов является:

- не применим для прогнозирования анемии у беременных женщин при цитомегаловирусной инфекции в период беременности.

Указанные недостатки могут быть устранены в заявленном способе.

Техническим результатом, достигаемым при осуществлении предлагаемого изобретения, является повышение точности прогнозирования анемии при цитомегаловирусной инфекции в период беременности.

Заявляемый технический результат достигается тем, что у беременных женщин с выявленной цитомегаловирусной инфекцией, определяют (в %) содержание арахидоновой кислоты (АК) методом газожидкостной хроматографии, концентрацию продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-АП) (ммоль/л) спектрофотометрическим методом по В.Б. Гаврилову и соавт.(1987) [3], концентрацию общего гемоглобина (Hb) (г/л) методом фотометрии на гематологическом анализаторе «Medonic М» (Швейцария) в эритроцитах крови. Затем прогнозируют анемию при цитомегаловирусной инфекции в период беременности с помощью дискриминантного уравнения

D=-153,998-17,62×АК+11,418×ТБК-АП+0,555×Hb,

где D - дискриминантная функция, граничное значение которой 51,341.

При D равной или больше граничного значения, прогнозируют риск развития анемии при цитомегаловирусной инфекции в период беременности. При D меньше граничного значения прогнозируют отсутствие риска анемии при цитомегаловирусной инфекции в период беременности.

Новизна заявляемого способа заключается в определении с учетом значений арахидоновой кислоты, ТБК-активных продуктов и концентрации общего гемоглобина в эритроцитах крови у беременных женщин с выявленной цитомегаловирусной инфекцией, дискриминантной функции D, по отношению которой к граничному значению дискриминантной функции прогнозируют риск развития анемии при цитомегаловирусной инфекции в период беременности.

Ранее совокупность указанных признаков в прогнозировании анемии при цитомегаловирусной инфекции у беременных не использовалась.

Способ содержит следующие приемы:

- у беременных женщин с выявленной цитомегаловирусной инфекцией в эритроцитах крови, взятой из локтевой вены утром натощак, определяют (в %) содержание арахидоновой кислоты методом газожидкостной хроматографии с помощью программно-аппаратного комплекса Хроматэк Аналитик 2,5 (Россия) по времени удерживания с использованием стандартов жирных кислот фирмы «Supelco» (США);

- измеряют концентрацию ТБК-активных продуктов (ммоль/л) спектрофотометрическим методом по В.Б. Гаврилову и соавт.(1987);

- измеряют содержание общего гемоглобина (г/л) методом фотометрии на гематологическом анализаторе «Medonic М» (Швейцария);

- с помощью дискриминантного уравнения определяют величину дискриминантной функции

D=-153,998-17,62×АК+11,418×ТБК-АП+0,555×Hb,

где D - дискриминантная функция, граничное значение которой 51,341;

- определяют риск развития анемии при цитомегаловирусной инфекции в период беременности: при D равной или больше граничного значения, прогнозируют риск развития анемии, при D меньше граничного значения - прогнозируют отсутствие риска анемии.

Вероятность правильного прогноза составляет 90%.

Пример 1. Беременная К., 24 г., находилась на стационарном лечении в гинекологическом отделении Городской клинической больницы (г. Благовещенск). Проведен общий анализ крови и анализ на TORCH-инфекции. По ИФА выявлены антитела IgM к цитомегаловирусу, титр антител IgG составил 1600, индекс авидности - 85%. Количество эритроцитов в крови 4,0×10¹² /л.

Диагноз: Беременность 9-10 недель. Хроническая цитомегаловирусная инфекция, стадия обострения.

По заявленному способу содержание в эритроцитах крови арахидоновой кислоты составило 3,50%, ТБК-активных продуктов - 18,18 ммоль/л и общего гемоглобина - 108 г/л.

Дискриминантная функция составила 51,85. Прогнозировалась анемия.

Проведено дополнительное исследование крови на содержание оксигемоглобина. Его значения составили 90%, что ниже нормы (100%).

Прогноз по заявленному способу подтвердился.

Пример 2. Беременная С, 22 г., находилась на стационарном лечении в гинекологическом отделении Городской клинической больницы (г.Благовещенск). Гинекологический анамнез осложнен: 1 медицинский аборт без осложнений. Проведен общий анализ крови и анализ на TORCH-инфекции. По ИФА титр антител IgG - 800, индекс авидности - 95%.

Количество эритроцитов в крови 4,2×10¹² /л.

Диагноз: Беременность 14-15 недель. Хроническая цитомегаловирусная инфекция, латентная стадия.

По заявленному способу содержание в эритроцитах крови арахидоновой кислоты составило 2,85%, ТБК-активных продуктов 7,80 ммоль/л и общего гемоглобина - 115 г/л.

Дискриминантная функция составила -55,215. Отсутствие риска анемии в период беременности.

Дополнительное исследование крови на содержание оксигемоглобина показало, что его значения (99%) не отличаются от нормативных показателей (100%).

Прогноз по заявленному способу подтвердился.

Приведенные примеры наглядно показывают точность оценки риска анемии у беременных женщин с цитомегаловирусной инфекцией в период беременности.

Способ прошел клиническую апробацию. С его помощью проведено прогнозирование анемии у 62 беременных женщин с цитомегаловирусной инфекцией в период беременности. Правильный прогноз определялся в 90% случаев, что подтверждает высокую эффективность заявляемого способа.

Используемые источники

1. Андриевская И.А., Ишутина Н.А., Кутепова О.Л. Свободнорадикальное окисление и оксигенация гемоглобина при обострении цитомегаловирусной инфекции во втором триместре беременности // Acta biomedica scientifica. 2018. Т. 3, №4. С. 9-14.

2. Беляева Н.Р. Цитомегаловирусная инфекция и репродукивное здоровье женщин // журнал акушерства и женских болезней. 2016. Т. 65, №4. С. 24-33.

3. Гаврилов В.Б., Гаврилова А.Р., Мажуль Л.М. Анализ методов определения продуктов перекисного окисления липидов в сыворотке крови по тесту с тиобарбитуровой кислотой // Вопросы медицинской химии. 1987. №1. С. 118-122.

4. Даниялова Х.М., Умаханова М.М., Доронин Г.Л., Мазуркевич М.В., Хасикова З.В. Железодефицитная анемия у беременных. Клиника, диагностика, профилактика и лечение // Проблемы женского здоровья. 2013. Т. 8, №1. С. 58-62.

5. Ишутина Н.А. Взаимосвязь изменений ω-3 и ω-6 полиненасыщенных жирных кислот при беременности, осложненной герпес-вирусной инфекцией // Фундаментаальные исследования. 2010. 32(24). С. 98-100.

6. Ишутина Н.А., Андриевская И.А., Кутепова О.Л., Мироненко А.Г. Влияние процессов перекисного окисления липидов на кислородтранспортные свойства гемоглобина в эритроцитах периферической крови беременных с цитомегаловирусной инфекцией // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. 2014. №2(96). С.

7. Ишутина Н.А., Дорофиенко Н.Н. Пероксидация липидов при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2014. Вып. 54. С. 66-69.

8. Каткова Н.Ю. Исследование антиоксидантного статуса у беременных с фетоплацентарной недостаточностью из групп риска по внутриутробному инфицированию // Профилактическая и клиническая медицина. 2008. №4. С. 60-63.

9. Кокоева Ф.Б., Торчинов A.M., Цахилова С.Г., Балиос Л.В., Кузнецов B.П., Сахарова Д.Х. Роль окислительного стресса в патогенезе преэклампсии (обзор литературы) // Проблемы репродукции. 2014. №4. С. 7-10.

10. Маржохова М.Ю., Афашагова М.М., Маржохова А.Р. Малоновый диальдегид и фактор некроза опухолей а как показатели синдрома интоксикации при рожистом воспалении // Клин. лаб. диагностика. 2011. №5. C. 20-22.

11. Тугушева Ф.А. Процессы перекисного окисления липидов и защитная роль антиоксидантной системы в норме и у больных с хроническим гломерулонефритом // Нефрология. 2001. №5(1). 19-22.

12. Berberovic Е., Ivanisevic М., Juras J., Horvaticek М., Delas I., Djelmis J. Arachidonic and docosahexaenoic acid in the blood of a mother and umbilical vein in diabetic pregnant women // J. Matern. Fetal. Neonatal. Med. 2013; 26(13): 1287-1291.

13. Ghebremeskel K., Min Y., Crawford M.A., Nam J.H., Kim A., Koo J.N., Suzuki H. Blood fatty acid composition of pregnant and nonpregnant Korean women: red cells may act as a reservoir of arachidonic acid and docosahexaenoic acid for utilization by the developing fetus // Lipids. 2000; 35(5): 567-574.

14. Yuan Т., Cong Y, Meng J., Qian H., Ye W., Sun W.S., Zhao J.N., Bao N.R. Arachidonic acid causes hidden blood loss-like red blood cell damagethrough oxidative stress reactions // Surg Res. 2017; 211:14-20.

15. Yuan Т., Zhao J.N., Meng J., Cong Y., Chen S.S., Bao N.R. Association of red blood cell damage with arachidonic acid // Zhongguo Gu Shang. 2016; 29(2): 179-183.

16. Lopez A., Cacoub P., Macdougall I.C., Peyrin-Biroulet L. Iron deficiency anaemia // Lancet. 2016; 387(10021): 907-916.

17. Revin V.V., Filatova S.M., Syusin I.V. Study of con-elation between state and composition of lipid phase and change in erythrocytes structure under induction of oxidative processes // Int J Hematol. 2015; 101(5): 487-496.

18. Tiwari A.K., Mahdi A.A., Zahra F., Chandyan S., Srivastava V.K., Negi M.P. Evaluation of oxidative stress and antioxidant status in pregnant anemic women // Indian J. Clin. Biochem. 2010; 25(4): 411-418.

19. Tiwari A.K., Mahdi A.A., Zahra F., Sharma S., Negi M.P. Evaluation of Low Blood Lead Levels and Its Association with Oxidative Stress in Pregnant Anemic Women: A Comparative Prospective // Indian J. Clin. Biochem. 2012; 27(3): 246-252.

20. Weiss G., Goodnough L.T. Anemia of chronic disease // N. Engl. J. Med. 2005; 352: 1011-1023.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и патологической физиологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития анемии при цитомегаловирусной инфекции у беременных. Для этого у беременных женщин с выявленной цитомегаловирусной инфекцией проводят определение в эритроцитах крови (в %) содержания арахидоновой кислоты (АК) методом газожидкостной хроматографии, концентрацию продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-АП) (ммоль/л) спектрофотометрическим методом и общего гемоглобина (г/л) методом фотометрии. Затем с помощью дискриминантного уравнения вычисляют дискриминантную функцию D, граничное значение которой 51,341. При D, равной или больше граничного значения, прогнозируют риск развития анемии при цитомегаловирусной инфекции в период беременности. При D меньше граничного значения прогнозируют отсутствие риска развития анемии при цитомегаловирусной инфекции в период беременности. Способ позволяет повысить точность прогнозирования риска развития анемии при цитомегаловирусной инфекции в период беременности. 2пр.

Способ оценки риска развития анемии при цитомегаловирусной инфекции у беременных путем определения в эритроцитах крови (в %) содержания арахидоновой кислоты (АК) методом газожидкостной хроматографии, концентрации продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-АП) (ммоль/л) спектрофотометрическим методом, и общего гемоглобина (г/л) методом фотометрии, а затем прогнозируют анемию при цитомегаловирусной инфекции в период беременности с помощью дискриминантного уравнения

D=-153,998-17,62×AK+11,418×TBK-АП+0,555×Hb,

где D - дискриминантная функция, граничное значение которой 51,341, при D, равной или больше граничного значения, прогнозируют анемию при цитомегаловирусной инфекции в период беременности, при D меньше граничного значения прогнозируют отсутствие риска развития анемии при цитомегаловирусной инфекции в период беременности.