Способ диагностики скрыто протекающего воспалительного процесса в репродуктивных органах свиноматок Российский патент 2020 года по МПК A61D19/00 G01N33/48 

Изобретение относится к области ветеринарной медицины, в частности, к методам диагностики воспалительных процессов в репродуктивных органах свиноматок путем определения биохимического состава среды влагалища.

Болезни органов размножения воспалительного характера у свиноматок, проявляющиеся в острой форме в виде послеродового гнойно-катарального эндометрита и метрит-мастит-агалактии, а также в скрытой (хронической) форме имеют довольно широкое распространение среди свиноматок промышленных предприятий и фермерских хозяйств и являются одной из проблем при воспроизводстве животных. Острый гнойно-катаральный эндометрит и метрит-мастит-агалактия в разных свиноводческих сельхозпредприятиях регистрируются соответственно у 40-42% и 15-21% опоросившихся свиноматок [Коцарев В.Н Профилактика послеродовых болезней у свиноматок с использованием клатрапростина /В.Н. Коцарев // Свиноводство. - 2005. - №5 - С. 26-28. Филатов А.В. Послеродовой эндометрит и синдром ММА у свиноматок: профилактика и лечение /А.В. Филатов, В.П. Хлопицкий, Л.М. Ушакова, Ю.Н. Бригадиров, В.Н. Коцарев //Свиноводство. - 2018. - №3. - С. 51-54.]. Клинически они проявляются изменением общего состояния животных, снижением или отсутствием аппетита, повышением температуры тела, выделением из половых путей гнойно-слизистого экссудата в количестве от 20-25 мл до 100-130 мл [Коцарев В.Н. К вопросу этиологии, диагностики, профилактики и терапии послеродовых гнойно-воспалительных заболеваний половых органов у свиноматок /В.Н. Коцарев, Н.И. Шумский, А.Г. Нежданов, В.Ю. Боев //Вестник Воронежского государственного аграрного университета. - 2014. - №4 (39). - С. 225-229.]. Хронический (скрытый) эндометрит у свиноматок протекает без видимых клинических признаков, и регистрируют его в стадию возбуждения полового цикла при проявлении феномена «течка» по наличию незначительных истечений из половых путей, как правило, без примесей гноя или их отсутствии [Бригадиров Ю.Н. Диагностика скрытого эндометрита у свиноматок /Ю.Н. Бригадиров, В.Н. Коцарев, Ю.Н. Масьянов, И.Т. Шапошников, Е.В. Михайлов, А.В. Мануйлов, Н.И. Шумский, М.С. Филиппова // Ветеринарный врач. - 2015. - №2. - С. 43-46]. Поэтому выявление скрытого эндометрита у свиноматок визуальным способом невозможно и для его диагностики необходимо проведение лабораторных исследований, требующее получение у животных биологического материла (цервикально-маточной слизи) в достаточном для проведения исследований объеме.

При анализе патентной и научной литературы выявлен ряд способов диагностики скрыто протекающих воспалительных процессов в репродуктивных органах коров, осуществляемых путем проведения лабораторных исследований цервикально-маточной слизи, полученной у животных во время течки. Так, методика постановки диагноза на скрытый эндометрит по И.И. Нагорнову основана на определении плотности образования осадка муцина при внесении в пробирку равного количества цервикальной слизи и 1%-ного раствора уксусной кислоты или 0,1%-ного раствора этакридина лактата и ее подогреве в водяной бане до температуры, близкой к кипению [Хронический скрытый эндометрит (Endometritis latens chronica) [Электронный ресурс] /Болезни животных / Акушерство и гинекология /Московский Ветеринарный WEB-Центр Copyright, 2009. - Режим доступа: http://webmvc.com/bolezn/livestock/tocology/endom3.php.]. При образовании в пробирке сгустка муцина, не разбивающегося при ее встряхивании, и прозрачности жидкости, реакция считается отрицательной. В случае помутнения жидкости при легком встряхивании, реакция будет считаться положительной.

По методике Попова Ю.Н предусмотрено выявление в цервикальной слизи лейкоцитов по изменению цвета жидкости при добавлении к ней аналогичного количества 4% раствора едкого натра и доведении до кипения с последующим охлаждением. Если жидкость остается бесцветной или приобретает соломенно-желтый цвет, реакция считается отрицательной. При приобретении жидкостью лимонно-желтого, серого или черного оттенка реакция считается положительной [Попов Ю.Н. Диагностика скрытого эндометрита у коров [Текст] /Ю.Н. Попов //Ветеринария. - 1969. - №4. - С. 85-87.].

Диагностика скрытого эндометрита у коров по методике Г.Г. Козлова основана на обнаружении в слизи лейкоцитов сгустка при смешивании ее с равным или меньшим количеством 5% раствора димастина [Козлов Г.Г. Сравнительная оценка методов диагностики скрытого эндометрита [Текст] /Г.Г. Козлов //Актуальные вопросы акушерско-гинекологической и хирургической патологии с. -х. животных. - М., 1982. - С. 43-44.].

Методика диагностики скрытого эндометрита у коров по Г.М. Калиновскому основана на выявлении в слизи серосодержащих аминокислот, появляющихся в ней при воспалении. Для этого в пробирку вносят 4 мл 0,5%-ного раствора свинца уксуснокислого, к которому по каплям добавляют 20%-ный раствор едкого натрия до образования осадка (гидрата окиси свинца). Через 15-20 секунд в пробирку снова добавляют раствор едкого натрия до исчезновения осадка, после чего в нее вносят 1,5-2,0 мл течковой слизи, легко встряхивают и нагревают, не доводя до кипения. При наличии скрытого эндометрита смесь приобретает цвет крепко заваренного чая [Калиновский Г.Н. Экспресс-метод диагностики скрытого эндометрита у коров [Текст] /Г.Г. Калиновский, Г.И. Подопригора //Информационное письмо. - Киев, 1987. - 1 с.].

Исследования цервикально-маточной слизи свиноматок, полученной у них во время «течки», на скрытый эндометрит по тестам И.С. Нагорного, Ю.А. Попова, Г.Г. Козлова, Г.М. Калиновского дают значительный разброс по показателям положительной, сомнительной и отрицательной реакциям [Бригадиров Ю.Н. Диагностика скрытого эндометрита у свиноматок [Текст] Ю.Н. Бригадиров, В.Н. Коцарев, Ю.Н. Масьянов и др. //Ветеринарный врач. - 2015, - №2. - С. 43-46.]. При использовании теста Г.М. Калиновского в сравнении с другими методами получено наименьшее количество сомнительных реакций, а величины положительных и отрицательных реакций имеют промежуточные значения, что позволяет его считать наиболее приемлемым для диагностики скрытого эндометрита у свиноматок. Однако данный тест диагностики скрытого эндометрита, как и другие выше упомянутые, имеет недостатки. Он относительно трудоемок в выполнении, основан на постановке качественной реакции, требующей визуальной оценки по ходу ее выполнения, что накладывает субъективный оттенок на полученные результаты.

Известен способ диагностики скрытого эндометрита у свиноматок путем определения показателя активности фермента гамма-глутамилтрансферазы (ГГТ) в цервикально-маточной слизи, полученной во время феномена «течка» при наступлении стадии возбуждения полового цикла (принят за прототип). Скрытый эндометрит у свиноматок диагностируется при показателе активности ГГТ равном 900 Е/л и более. [Бригадиров Ю.Н. Диагностика скрытого эндометрита у свиноматок [Текст] Ю.Н. Бригадиров, В.Н. Коцарев, Ю.Н. Масьянов и др. //Ветеринарный врач. - 2015, №2. - С. 43-45.].

Недостатком данного способа является необходимость получения цервикально-маточной слизи в достаточном количестве для проведения исследований, трудоемкость выполнения: подготовки полученной слизи к исследованию (центрифугирование, разведение, фильтрование), использования приборной техники с наборами реактивов.

В гинекологии гуманной медицины для диагностики воспалительных процессов в половых органов проводят рН-метрию влагалища с помощью бумажных или пластиковых лакмусовых тестовых полосок. В одном случае используют тест-полоски «Кальпо-тест рН» [Инструкция по применению полосок индикаторных для определения рН влагалищной жидкости (Кольпо-тест рН) [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.biosensoran.ru/Bios_ankolpo_instr.htm]. В другом случае для определения рН влагалища используют тест полоски «Тест рН-баланс» [Тест рН-баланс для диагностики влагалищной кислотности Premium Diagnostics [Электронный ресурс]. - Режим доступа: https://medmir24.ru/akusherstvo-i-ginekologiya/ekspress-testy/test-ph-balans-5]. С этой целью применяют также приборную технику [Кира Е.Ф., Семенова К.Е., Маркарян A.M. Роль рН-метрии в диагностике вагинальных инфекций //Гинекология. - 2014. - Т. 16, №2. - С. 9-14.].

Проведение рН-метрии влагалища свиноматок в целях диагностики скрыто протекающего воспалительного процесса в репродуктивных органах свиноматок в доступной литературе мы не нашли.

Технический результат изобретения - разработка способа диагностики скрыто протекающего воспалительного процесса в репродуктивных органах свиноматок путем определения рН влагалища.

Для достижения технического результата в способе диагностики скрыто протекающего воспалительного процесса в репродуктивных органах свиноматок, согласно изобретению, у свиноматок при наступлении стадии возбуждения полового цикла во время феномена «течка» определяют рН влагалища и диагностируют скрытый эндометрит при показателе рН равном 7,2 единиц и более.

Способ осуществляют следующим образом.

Проводят санитарную обработку наружных половых органов свиноматки. Во влагалище вставляют продезинфицированное влагалищное зеркало и вводят зонд с рН-активным текстильным материалом (например, рН-активным целлюлозосодержащим текстильным материалом, окрашенным индикаторным красителем в соответствии с патентом №2626352) до упора в шейку матки и выдерживают его в нем не менее 5 секунд. Затем из влагалища в последовательности извлекают зонд с рН-активным материалом и влагалищное зеркало. Проводят определение значений рН влагалища путем визуального сравнения цвета и интенсивности окраски рН-активного текстильного материала, извлеченного из влагалища свиноматки, с соответствующим цветовым полем эталонного рН-активного материала, пропитанного буферными растворами. По совпадению цвета и интенсивности окраски сенсорного материала зонда с окраской рН активного материала, взятого в качестве эталона, определяют показатель рН влагалища.

Таким образом, путем определения рН влагалища у свиноматок можно провести диагностику воспалительного процесса в репродуктивных органах.

Сущность изобретения поясняется примерами.

Пример 1. В опыт было включено 27 свиноматок, у которых при наступлении стадии возбуждения полового цикла во время феномена «течка» определяли рН влагалища с использованием предлагаемого способа и получали цервикально-маточную слизь с помощью «Комплекта для получения цервикально-маточной слизи у свиноматок» с последующей ее оценкой на скрытый эндометрит по тесту Г.М. Калиновского. При определении рН влагалища свиноматок использовали текстильный материал с рН активностью 6,5-9,0 единиц, интенсивность окраски которого после извлечения из влагалища свиноматок, сравнивали с цветовым полем пяти эталонных материалов, пропитанных буферными растворами, рН которых составляла соответственно 6,6; 7,0; 7,4; 7,6; 8,0. В случаях, когда интенсивность окраски текстильного материала была менее выражена, чем эталонного с рН 6,6 мы ставили рН<6,6. Показатели рН влагалища свиноматок сравнивали с результатами оценка цервикально-маточной слизи на скрытый эндометрит по тесту Г.М. Калиновского.

При сопоставлении значений рН влагалища свиноматок с результатами теста Г.М. Калиновского было установлено следующее (таблица 1).

Из 15 свиноматок, показатель рН влагалища которых составил до 6,8 ед., у 13 (86,7%) животных пробы цервикально-маточной слизи имели отрицательную реакцию и 2 (13,3%) пробы положительную реакцию на скрытый эндометрит по тесту Г.М. Калиновского. Из 12 свиноматок с рН влагалища 7,2 ед. и выше, отрицательная реакция на скрытый эндометрит по тесту Г.М. Калиновского получена в 3 (25,0%) случаях и положительная реакция - в 9 (75,0%) случаях. Совпадение показателя рН влагалища до 6,8 ед. с отрицательными результатами оценки цервикально-маточной слизи по тесту Г.М. Калиновского имело место в 13 (48,1%) случаях и показателя рН влагалища 7,2 ед. и более с положительными результатами теста Г.М. Калиновского - в 9 (33,3%) случаях с общим количеством совпадений равным 22 (81,5%), что позволяет использовать показатель рН влагалища равный 7,2 ед. и более в качестве критерия диагностики скрыто протекающего воспалительного процесса в репродуктивных органах (скрытого эндометрита) у свиноматок.

Показатели чувствительности, специфичности и точности заявляемого способа диагностики воспалительных процессов в репродуктиых органах свиноматок путем определения рН влагалища рассчитаны согласно соответствующей методики [Васильев А.Ю., Малый А.Ю., Серов Н.С.//3 учебное пособие. - 2008. [Электронный ресурс] - Режим доступа: htth//vmede.org/sait/?id=Onkologiya_analiz_vasilev_2008&menu=Onkologiya_analiz_vasilev_2008&page=3.] по формулам:

Ч=ИП:(ИП+ЛО)⋅100%, где

Ч - чувствительность,

ИП - число пометов с истинно положительным результатом,

ЛО - число пометов с ложно отрицательным результатом.

Ч=9:(9+2)⋅100=81,8%

С=ИО:(ИО+ЛП)⋅100%, где

С - специфичность,

ИО - число пометов с истинно отрицательным результатом,

ЛП - число пометов с ложно положительным результатом.

С=13:(13+3)⋅100=81,3%

Т=(ИП+ИО):N⋅100%, где

Т - точность,

ИП - число пометов с истинно положительным результатом,

ИО - число пометов с истинно отрицательным результатом,

N - число свиноматок в опыте.

Т=(9+13):27⋅100=81,5%

Итого: Чувствительность заявленного способа - 81,8%

Специфичность заявленного способа - 81,3%

Точность заявленного способа - 81,5%

Пример 2.

У свиноматок во время феномена «течка» определяли рН влагалища аналогично примеру 1 и получали цервикально-маточную слизь для определения содержания ГГТ. В последующем проводили сравнение показателей рН влагалища со значениями содержания ГГТ в цервикально-маточной слизи (таблица 2).

Из 18 свиноматок, показатель рН влагалища которых составил до 6,8 ед., у 16 (88,9%) животных пробы цервикально-маточной слизи имели отрицательную реакцию на скрытый эндометрит по показателю активности фермента ГГТ (800 Е/л и менее) и 2 (11,1%) пробы - положительную реакцию по показателю активности фермента ГГТ (900 Е/л и более). Из 13 свиноматок с рН влагалища 7,2 ед. и выше отрицательная реакция по ГГТ получена в 3 (23,1%) случаях и положительная реакция оценки цервикально-маточной слизи по показателю активности фермента ГГТ - в 10 (76,9%) случаях. Совпадение показателя рН влагалища до 6,8 ед. с отрицательными результатами по ГГТ составило 16 (51,6%) случаев и показателя рН влагалища 7,2 ед. и более с положительными результатами по ГГТ - 10 (32,3%) случаев с общим количеством совпадений равным 26 (83,9%), что также является основанием использовать показатель рН влагалища равный 7,2 ед. и более в качестве критерия диагностики скрыто протекающего воспалительного процесса в репродуктивных органах свиноматок.

Показатели чувствительности, специфичности и точности заявляемого способа диагностики воспалительных процессов в репродуктиых органах свиноматок путем определения рН влагалища в данном примере следующие.

Проведение расчета чувствительности:

Ч=10:(10+2)⋅100%=83,3%

Проведение расчета специфичности:

С=16:(16+3)⋅100%=84,2%

Проведение расчета точности:

Т=(10+16):31⋅100=83,9%

Итого: Чувствительность заявленного способа - 83,3%

Специфичность заявленного способа - 84,2%

Точность заявленного способа - 83,9%.

Заявляемый способ по чувствительности, специфичности и точности не имеет существенной разницы со сравниваемыми методами диагностики скрытого эндометрита у свиноматок, намного проще в выполнении, не требует использования приборной техники и проведения лабораторных исследований.

Изобретение относится к области ветеринарии. Способ диагностики скрыто протекающего воспалительного процесса репродуктивных органов свиноматок предусматривает определение при наступлении стадии возбуждения полового цикла во время феномена «течка» показателя рН влагалища и при выявлении показателя, составляющего 7,2 единицы и более, диагностируют скрыто протекающий воспалительный процесс в репродуктивных органах. Использование предлагаемого способа диагностики позволяет оперативно и точно выявлять воспалительный процесс в репродуктивных органах свиноматок без использования приборной техники и необходимости проведения лабораторных исследований. 2 табл., 2 пр.

Способ диагностики скрыто протекающего воспалительного процесса в репродуктивных органах свиноматок, отличающийся тем, что у свиноматок при наступлении стадии возбуждения полового цикла во время феномена «течка» определяют рН влагалища и диагностируют скрытый эндометрит при показателе рН, равном 7,2 единиц и более.