Способ диагностики локального иммунодефицита слизистых оболочек Российский патент 2020 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, к стоматологии, акушерству и гинекологии, ринологии и, непосредственно, к диагностике дефицита иммунной системы слизистых оболочек.

Для оценки иммунологического состояния слизистой оболочки влагалища применяют определение в вагинальном секрете содержание иммуноглобулинов IgM, IgG, IgA, и s-IgA и по уровню содержания s-IgA оценивают локальное состояние иммунологической защиты слизистой оболочки, а по изменению уровня IgМ, IgG, IgА в исследуемом материале можно судить о компенсации иммунной системы слизистых оболочек при снижении содержания s-IgA в вагинальном секрете (Штрахер В.Л. Оптимизация методов диагностики и лечения бактериального вагиноза: дисс… канд.мед. наук.: - Алматы, 2000. - 106 с.).

Недостатками данного способа является сложность его проведения и длительное время до получения результатов.

О развитии локального иммунодефицита свидетельствует выявление «ключевых клеток» в вагинальном отделяемом, что используется при диагностике бактериального вагиноза (Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз. / Санкт-Петербург:НЕВА-Люкс, 2001. - 364 с.).

Ключевые клетки - это эпителиальные клетки, на мембране которых выявляются адгезированные микроорганизмы (Штрахер В.Л. Оптимизация методов диагностики и лечения бактериального вагиноза: дисс… канд. мед. наук.: - Алматы, 2000. - 106 с.; Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз. / Санкт-Петербург: НЕВА-Люкс, 2001. - 364 с.).

Однако само по себе определение наличия клеток, на которых адгезированы микроорганизмы, является лишь вспомогательным критерием при оценке функционального состояния иммунной системы слизистых оболочек. При этом оценивается лишь их наличие, то есть качественный параметр, а степень выраженности локального иммунного дефицита не оценивается.

Учитывая, что уже длительное время отмечается тенденция к возрастанию этиологической роли в развитии инфекционной патологии слизистых оболочек факультативной и облигатной микрофлоры, которая является представителем биотопа в норме, именно локальный иммунодефицит слизистых оболочек создает предпосылки для развития инфекционного патологического процесса.

В связи с тем, что критерием для диагностики локального иммунодефицита мы рассматриваем адгезию микроорганизмов на эпителиальных клетках:

«… представляется актуальным выявление взаимосвязи характеристик микробиоценозов и факторов мукозального иммунитета слизистых открытых полостей различной локализации в норме и при инфекционной патологии. Любой инфекционный процесс в слизистой оболочке, независимо от этиологии, развивается по одному и тому же сценарию. Первый этап - это адгезия микробов в пристеночном муцине или на эпителиальных клетках, которая обеспечивается специальными структурами возбудителя. Закрепившись, микроорганизмы начинают размножаться, что приводит к патологической колонизации слизистой - это второй этап инфекционного процесса (дисбактериоз). Следующий, третий этап инфекционного процесса -это инвазия микроорганизмов, когда они преодолевают защитный барьер слизистой оболочки и проникают в эпителиальные клетки или подлежащую ткань, вызывая при этом местную иммунную реакцию (колит, вагинит, фарингит и др.). При преодолении местного защитного барьера возможна генерализация инфекции (Патент РФ №2556958, G01N 33/48, 20.07.2015). Таким образом, первый этап начала инфекционного процесса это адгезия микроорганизмов на эпителиальных клетках, которая может протекать без выраженных клинических проявлений заболевания, но имеет большое диагностическое значение. При этом состояние общего иммунного статуса может оставаться нормальным и меняться лишь после преодоления локального (местного) защитного барьера.

Известен способ оценки состояния иммунной системы слизистых оболочек при инфекционных заболеваниях, включающий определение ключевых клеток в мазках или соскобах со слизистых оболочек, отличающийся тем, что производят подсчет количества ключевых клеток и общего количества эпителиальных клеток в исследуемом материале, затем рассчитывают коэффициент, отражающий состояние иммунной системы слизистых оболочек:

где К - коэффициент состояния иммунной системы слизистых оболочек; N_кк - количество ключевых клеток в исследуемом материале; N_ок - общее количество эпителиальных клеток в исследуемом материале и в зависимости от значения коэффициента К оценивают состояние иммунной системы слизистых оболочек (см. RU №2015129290 A, G01N 33/53, опубл. 20.01.2017, Бюл. №2) - прототип.

Недостатками данного метода является то, что выполнение подсчета общего количества ключевых клеток (эпителиальных клеток, на которых отмечается адгезия микроорганизмов) и общего количества эпителиальных клеток во всем исследуемом материале в полном объеме сложная процедура и зависит от количества исследуемого материала. При этом не указано в каких единицах происходит определение коэффициента К и не определена значимость умножения на 100. То есть отсутствуют объективные критерии и снижается эффективность диагностики локального иммунодефицита слизистых оболочек.

Задачей предлагаемого изобретения является объективизация и повышение эффективности диагностики локального иммунодефицита слизистых оболочек.

Это достигается тем, что в способе диагностики локального иммунодефицита слизистых оболочек, включающем определение адгезии микроорганизмов на эпителиальных клетках в мазках или соскобах со слизистых оболочек, в морфометрической сетке Автандилова производят определение процентного содержания эпителиальных клеток с адгезией микроорганизмов по отношению к общему количеству эпителиальных клеток в 50 полях зрения и, при их количестве, превышающем нормальные показатели для исследуемого биотопа, которые в материале из влагалища составляют 3,2±0,2%, в материале из волости рта у женщин - 4,7±0,2%, а у мужчин 4,9±0,3%, диагностируют локальный иммунодефицит слизистых оболочек.

Способ диагностики локального иммунодефицита слизистых оболочек, отличается от известного тем, что в морфометрической сетке Автандилова производят определение процентного содержания эпителиальных клеток с адгезией микроорганизмов по отношению к общему количеству эпителиальных клеток в 50 полях зрения и, при их количестве, превышающем нормальные показатели для исследуемого биотопа, которые в материале из влагалища составляют 3,2±0,2%, а в материале из полости рта у женщин - 4,7±0,2%, у мужчин 4,9±0,3%, диагностируют локальный иммунодефицит слизистых оболочек.

Авторами было проведено комплексное обследование 160 гинекологически здоровых женщин с определением у них в материале из влагалища количества эпителиальных клеток с адгезированными микроорганизмами в процентном отношении к общему количеству ключевых клеток в исследуемом материале по описанной выше методике. Было установлено, что при отсутствии инфекционной патологии влагалища содержание эпителиальных клеток с адгезией на их мембране микроорганизмов не превышало 3,2±0,2% от общего количества эпителиальных клеток при их подсчете в 50 полях зрения с применением морфометрической сетки Автандилова. В отличие от этого, при обследовании 260 больных с инфекционными воспалительными и невоспалительными заболеваниями влагалища (хронический кольпит, вагиноз),количество эпителиальных клеток с адгезией на их поверхности микроорганизмов превышало показатели, зарегистрированные у женщин с отсутствием инфекционной патологии влагалища. При этом на фоне хронического воспалительного процесса количество эпителиальных клеток с адгезией микроорганизмов на их мембране превышало показатели при бактериальном вагинозе, протекающем без воспаления.

Кроме того, мы обследовали 112 женщин и 105 мужчин при отсутствии инфекционной патологии слизистой оболочки полости рта. Установлено, что нормальное количество эпителиальных клеток с адгезией на их мембране микроорганизмов не превышало у женщин - 4,7±0,2%, у мужчин 4,9±0,3%. При обследовании 123 женщин и 78 мужчин с вялотекущими инфекционными заболеваниями слизистой оболочки ротовой полости и пародонта количество эпителиальных клеток с адгезией на их мембране микроорганизмов превышало нормальные показатели.

Особого внимания заслуживает сопоставление полученных результатов определения адгезии микроорганизмов на эпителиальных клетках с показателями s-IgА. Так, на фоне снижения уровня s-IgА параллельно отмечалось увеличение процентного содержания эпителиальных клеток с адгезией микроорганизмов в исследуемом материале.

В то же время по мере уменьшения уровня s-IgА в исследуемом материале отмечалось резкое увеличение удельного веса «ключевых клеток» в исследуемом материале даже при отсутствии патогенной микрофлоры, что свидетельствовало о зависимости поражения эпителиальных клеток микрофлорой от содержания s-IgА, то есть от наличия либо отсутствия локального иммунодефицита слизистых оболочек.

Следует отметить, что на фоне снижения уровня s-IgА компенсаторно возрастал уровень IgМ, IgG, IgА, но это не оказывало существенного влияния на адгезию микроорганизмов на эпителиальных клетках («ключевые клетки»), то есть состояние иммунной системы слизистой оболочки определялось уровнем s-IgА. При этом определение содержания s-IgА и гуморальных IgМ, IgG, IgА в исследуемом материале требует не только материальных затрат, но и длительности выполнения диагностических тестов, в то время как определение процентного содержания эпителиальных клеток с адгезией на них микроорганизмов в исследуемом материале проводится быстро, не требует дополнительного оборудования, реактивов и специальной подготовки медицинского персонала.

Необходимо учитывать то, что в различных микроэкосистемах - биотопах (различные отделы пищеварительного тракта, носоглотка, бронхи, слизистая оболочка желудка, мочевого пузыря, уретры, глаза и т.д.) нормальные значения процентного содержания эпителиальных клеток с адгезией микроорганизмов будут различными и интерпретацию надо проводить, в зависимости от исследуемого материала в соответствии с нормальными показателями для исследуемого биотопа.

Способ осуществляется следующим образом: в мазках или соскобах со слизистых оболочек определяют адгезию микроорганизмов на эпителиальных клетках и общее количество эпителиальных клеток в 50 полях зрения с использованием морфометрической сетки Автандилова, после чего рассчитывают процентное содержание эпителиальных клеток с адгезией микроорганизмов по отношению к общему количеству эпителиальных клеток, после чего сравнивают полученные результаты с нормальными показателями и при превышении в материале из влагалища 3,2±0,2%, а в материале из волости рта у женщин - 4,7±0,2% и у мужчин 4,9±0,3% диагностируют локальный иммунодефицит слизистых оболочек.

Данная методика с положительным результатом была применена у 260 больных с инфекционными воспалительными и невоспалительными заболеваниями влагалища (хронический кольпит, вагиноз), а также у 123 женщин и 78 мужчин с вялотекущими инфекционными заболеваниями слизистой оболочки ротовой полости и пародонта.

Пример 1: Больная А., 28 лет, с диагнозом: бактериальный вагиноз. Обратилась 27.03.2018 года. При исследовании мазка из половых путей в соответствии с предложенным «Способом диагностики локального иммунодефицита слизистых оболочек» количество эпителиальных клеток с адгезией микроорганизмов составило 3,5% от общего количества эпителиальных клеток в 50 полях зрения при проведении морфометрического исследования в сетке Автандилова. В соответствии с этим в комплекс лечебных мероприятий бактериального вагиноза включили заместительную местную иммунокорригирующую терапию (свечи с кипфероном).

Комментарии к примеру 1: Параллельно было выявлено снижение уровня s-Ig А, содержание остальных иммуноглобулинов - IgM, IgG, IgA в пределах нормы. При определении содержания Ig М, Ig G, Ig А в крови патологии не выявлено. То есть, имело место локальное снижение защитных свойств иммунной системы слизистой оболочки - локальный иммунодефицит. Показатели содержания IgM, G, А и s-IgA, в комментариях к примеру 1, приведены для демонстрации/подтверждения, что у данной больной имел локальный иммунодефицит слизистой оболочки половых путей (влагалища), а не как его диагностический критерий. Кроме того были положительные результаты аминового теста и смещение рН среды влагалища в щелочную сторону, что подтверждало диагноз Бактериальный вагиноз, но не являлось критерием локального иммунодефицита слизистой оболочки влагалища.

Пример 2: Больной С., 45 лет, обратился в стоматологическую клинику с явлениями хронического пародонтита. При исследовании материала из зубодесневых карманов в соответствии с предложенным «Способом диагностики локального иммунодефицита слизистых оболочек» было выявлено, что эпителиальных клеток с адгезией на них микрофлоры составило 5,3%, что превышало нормальные показатели их содержания для полости рта у мужчин 4,9±0,3%.

Лечение проводилось с учетом локального иммунодефицита слизистой оболочки полости рта и было дополнено локально иммунозаместительной терапией.

Комментарии к примеру 2: Параллельно отмечалось снижение уровня s-IgA. содержание IgM, IgG, IgA в норме. В крови уровень IgМ, IgG, IgА в пределах нормы. То есть, имело место локальное снижение защитных свойств иммунной системы слизистой оболочки полости рта. Учитывая, что количество эпителиальных клеток с адгезией миурофлоры при отсутствии инфекционного поражения слизистой оболочки полости рта превышает - 5,2% (верхняя граница нормы у мужчин), увеличение их количества до 5,3% свидетельствовало о поражении микрофлорой большего количества эпителиальных клеток слизистой оболочки ротовой полости и снижении ее резистентности к микрофлоре - локальном иммунодефиците. В данном комментарии пример 2, анализ показателей содержания IgM, G, А и s-IgA приведены для подтверждения, что у данной больной имело место снижение локальных защитных свойств слизистой оболочки ротовой полости - локальный иммунодефицит, а не как диагностический критерий.

Пример 3: Больная С., 29 лет, обратилась в стоматологическую клинику с явлениями хронического гингивита. При исследовании материала из полости рта в соответствии с предложенным «Способом диагностики локального иммунодефицита слизистых оболочек» было выявлено, что эпителиальных клеток с адгезией на них микрофлоры составило 4,97%, что превышало верхнюю границу нормальных показателей их содержания для полости рта у женщин 4,9%. Лечение проводилось с учетом локального иммунодефицита слизистой оболочки полости рта и было дополнено локально иммунозаместительной терапией.

Комментарии к примеру 3: Параллельно отмечалось снижение уровня s-IgA, содержание IgM, IgG, IgA в норме. В крови уровень IgМ, IgG, IgА в пределах нормы. То есть, имело место локальное снижение защитных свойств иммунной системы слизистой оболочки полости рта у женщин. Учитывая, что количество ключевых клеток при отсутствии инфекционного поражения слизистой оболочки полости рта превышает нормальные показатели у женщин 4,9%, увеличение их количества до 4,97% свидетельствовало о поражении микрофлорой большего количества эпителиальных клеток слизистой оболочки ротовой полости и снижении ее резистентности к микрофлоре при локальном иммунодефиците. В данном комментарии примера 3, показатели содержания IgM, G, А и s-IgA приведены для подтверждения, что у данной больной имело место снижение локальных защитных свойств слизистой оболочки ротовой полости - локальный иммунодефицит, а не как диагностический критерий.

Таким образом, способ диагностики локального иммунодефицита слизистых оболочек позволяет решить поставленную задачу - объективизацию и упрощение диагностики локального иммунодефицита слизистых оболочек.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для диагностики локального иммунодефицита слизистых оболочек. Способ включает определение адгезии микроорганизмов на эпителиальных клетках в мазках или соскобах со слизистых оболочек. В морфометрической сетке Автандилова производят определение процентного содержания эпителиальных клеток с адгезией микроорганизмов по отношению к общему количеству эпителиальных клеток в 50 полях зрения. При их количестве, превышающем нормальные показатели для исследуемого биотопа, которые в материале из влагалища составляют 3,2±0,2%, в материале из полости рта у женщин - 4,7±0,2%, а у мужчин 4,9±0,3% диагностируют локальный иммунодефицит слизистых оболочек. Использование изобретения позволяет повысить эффективность диагностики локального иммунодефицита слизистых оболочек. 3 пр.

Способ диагностики локального иммунодефицита слизистых оболочек, включающий определение адгезии микроорганизмов на эпителиальных клетках в мазках или соскобах со слизистых оболочек, отличающийся тем, что в морфометрической сетке Автандилова производят определение процентного содержания эпителиальных клеток с адгезией микроорганизмов по отношению к общему количеству эпителиальных клеток в 50 полях зрения и при их количестве, превышающем нормальные показатели для исследуемого биотопа, которые в материале из влагалища составляют 3,2±0,2%, в материале из полости рта у женщин - 4,7±0,2%, а у мужчин 4,9±0,3%, диагностируют локальный иммунодефицит слизистых оболочек.