СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ КОЛИБАКТЕРИОЗА ПОРОСЯТ Российский патент 2020 года по МПК A01K1/00 A61L9/14 

Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарной медицины, а именно к способам выращивания поросят с использованием дезинфекции производственных животноводческих помещений от бактериальных, вирусных и грибковых контаминаций, а также дезинфекции находящихся в них воздуха, материалов и иных объектов, включая трудно обеззараживаемые материалы.

Одной из трудноразрешимых проблем современного свиноводства являются инфекционные болезни. Этиологию этих болезней определяют патогенные или условно патогенные микроорганизмы, приобретающие вирулентные свойства при снижении резистентности и иммунобиологической реактивности организма под влиянием неблагоприятных факторов внешней среды. В научной литературе такие болезни определяют как факторные. Возбудители факторных болезней зачастую переживают в организме здоровых животных и проявляют свою патогенную активность при выраженном изменении условий обитания облигатного хозяина, которые рассматриваются как стрессовые. Придавая важное значение в борьбе с факторными инфекционными болезнями животных, созданию приемлемых для животных условий обитания, тем не менее, в прогнозируемые критические периоды проблематично обойтись без препаратов, обладающих дезинфекционным, антиинфекционным действием или повышающих неспецифическую резистентность организма. Колибактериоз свиней имеет широкое распространение и регистрируется ежегодно. За последние годы показатели эпизоотического процесса значительно уменьшились, однако эпизоотическая опасность колибактериоза сохраняется. На возрастной период 55-70 дней приходилось клиническое проявление заболевания поросят колибактериозом. Зачастую, болезнь возникала в хозяйстве на фоне 100%-й иммунизации маточного поголовья и нарождающегося молодняка против колибактериоза. Установлено, что возникновению болезни способствовало появление послеотъемных гастроэнтеритов, и колибактериоз протекал подостро или хронически с охватом 13,72% животных. Комплекс инфекционной патологии свиней включает в себя нарушение функций работы иммунной системы у поросят на стадии доращивания и откорма. Заболевание характеризуется такими клиническими признаками, как отставание в росте, вялость животных, субфебрильная лихорадка, анорексия, отдышка.

Таким образом, на основании эпизоотологических данных, сделан вывод о том, что к разряду основных болезней инфекционной бактериальной патологии, можно отнести колибактериоз свиней.

Неспецифическая профилактика инфекционных заболеваний в условиях ветеринарной организации на сегодняшний день является в большинстве случаев единственным способом эффективного предупреждения возникновения и распространения инфекций. Наличие нескольких штаммов разных микроорганизмов и их симбиоз в сочетании со способностью усиливать свои патогенные свойства в составе ассоциаций требуют принятия неотложных и эффективных мер, направленных на разрыв эпизоотической цепочки. Ключевое значение приобретает выбор технологий обеззараживания поверхностей, изделий ветеринарного назначения, оборудования, инструментов, т.е. правильных и действенных мероприятий, позволяющих добиться деконтаминации ветеринарных объектов. Основная цель осуществляемых дезинфекционных мероприятий - снижение количества возбудителей и численности их переносчиков до эпизоотологически безопасного уровня, обеспечивающего прерывание механизма передачи инфекционного агента и прекращение развития инфекционного процесса. В Национальной концепции профилактики инфекций, связанных с оказанием ветеринарной помощи, существенная роль отводится повышению эффективности дезинфекционных мероприятий, предусматривающих совершенствование средств и методов дезинфекции, разработку и внедрение новых, более эффективных и безопасных технологий, организационных форм осуществления дезинфекционных мероприятий с учетом особенностей функционирования ветеринарных организаций различного профиля.

Известно, что более перспективными в отношении безопасности окружающей среды являются способы дезинфекции, в которых в качестве дезинфектанта используется водный раствор NaCl, обработанный в так называемом диафрагменном электролизере (см. Электрохимическая активация. Очистка воды и получение полезных растворов. // Бахир В.М., Задорожний Ю.Г., Леонов Б.И. и др. ВНИИИМТ, 2001, 175 с.; RU 1341743, RU 1437400, RU 1534772, RU 1677891, RU 2157793). По этому методу повышают электропроводность воды путем внесения 0,01-1 мас.% поваренной соли, пропускают полученный раствор, через анодную камеру диафрагменного электролизера. Полученный в анодной камере активированный водный препарат, получивший наименование анолит, используют в качестве дезинфицирующего раствора, вводя его в контакт с микроорганизмами, расположенными вне электролизера.

Однако при обработке растворами анолита путем обмывания, орошения или протирки труднодоступных поверхностей и обширных помещений происходит значительный расход дезинфектанта, что увеличивает себестоимость дезинфекции и может вызвать порчу ценного оборудования. К тому же, применяемый способ имеет существенные ограничения в отношении объектов дезинфекции. В частности, использование анолита в виде жидкости не позволяет производить дезинфекцию воздуха, а также не перспективно для дезинфекции волокнистых материалов, т.к. при их обильном смачивании происходит нарушение структуры материала и ухудшение потребительских свойств и внешнего вида обрабатываемых изделий.

Известен также способ дезинфекции помещений (RU 2148414), включающий заполнение помещения аэрозолем с массовой концентрацией 50-100 мг/м³ при использовании нейтрального анолита с рН 7-8,2 и значением окислительно-восстановительного потенциала от 400 до 1000 мВ. Распыление ведут механическим дроблением нейтрального анолита при вращении диска аэрозольного генератора со скоростью не менее 20000 об/мин без смешивания дезинфектанта с воздухом до достижения дисперсности аэрозоля 5-50 мкм, причем аэрозолирование ведут не позже чем через 30 мин после получения анолита. Использование нейтрального анолита является экологически более безопасным, так как он не выделяет свободный хлор, образование которого происходит при получении аэрозолей из растворов гипохлорита натрия или кальция, однако его дезинфицирующая активность весьма ограничена. При этом в указанных условиях применения применяемый способ распыления недостаточно производителен, требует использования сложных технических устройств, а сам такой анолит недостаточно стабилен.

Для повышения эффективности дезинфектанта при лечении от заболеваний дыхательных путей и желудочно-кишечных заболеваний в его состав вводят различные добавки, например уксусную кислоту (RU 2251416) или препараты, содержащие в частности йод (Решетникова Т.И. Сравнительная характеристика дезинфицирующих средств, применяемых в присутствии животных // Свиноводство. №2. 2018 г. с. 56-59). Однако данные добавки ограничивают круг обрабатываемых объектов и не влияют на стабильность аэрозоля.

Для аэрозолирования анолита применяют, как правило, центробежные аэрозольные генераторы, в которых диспергирование осуществляют путем подачи анолита на диск аэрозольного генератора, вращающегося со скоростью не менее 20000 об/мин или при использовании насосов высокого давления (RU 2148414, RU 2258116).

Особенностью данных устройств является возможность минимизировать негативное воздействие воздуха при образовании активного аэрозоля. Недостатками таких устройств являются относительно невысокая производительность мелкой фракции, механическая ненадежность, а также невозможность получить достаточно стабильный и активный в течение длительного времени аэрозоль, что, в частности, может объясняться тем, что капли дезинфектанта при попадании в обрабатываемое помещение со скоростью более 100 м/с частично деактивируются вследствие негативного воздействия кислорода в этих условиях, а также высоким содержанием в аэрозоле, генерируемом подобным образом, крупнодисперсной фракции (размер частиц аэрозоля достигает 80 мкм).

Известен также «Способ аэрозольной дезинфекции закрытых помещений» №2379058. Способ дезинфекции заключается в распылении дезинфицирующего средства, в качестве которого используют смесь воздуха и электроактивированного раствора в весовом соотношении (3-10):1 с размером капель электроактивированного раствора менее 10 мкм, полученную с помощью вихревых эжекторных распылителей с последующим сепарированием крупнодисперсных частиц. Разработка позволяет существенно повысить качество проводимой дезинфекции, использовать при аэрозолировании электроактивированный раствор, хранящийся длительное время в жидком виде, без понижения активности аэрозоля, а также образовывать активный в течение, по крайней мере, 4 часов аэрозоль, пригодный для обработки различных материалов.

Задачей изобретения является создание более эффективного и универсального способа дезинфекции животных, воздуха и оборудования в закрытых помещениях в частности животноводческих вместе с животными при расширении излечиваемых заболеваний, с подбором оборудования для его осуществления, которые позволяют получить высокодисперсные концентрированные аэрозоли, сохраняющие активность в течение относительно длительного периода времени (превышающего продолжительность седиментации генерированного аэрозоля), обеспечивая повышение эффективности дезинфекции и при колибактериозе поросят, в том числе при обработке больших помещений, а также труднодоступных для частиц дезинфектанта зон и живых объектов при повышении эффективности животноводства не нарушая технологии выращивания поросят.

Задача решается тем, что при выявлении признаков колибактериоза у поросят проводят дополнительную санитарную обработку электроактивированной водой, причем обработку проводят Анолитом АНК+ с рН 8,5-9,0 при норме расхода 500 мл/м³ помещения в присутствии животных с периодичностью 10-14 дней, путем аэрозольного распыления Анолита АНК в виде «сухого тумана» с частицами размером 1-5 мкм при экспозиции 30 мин.

Аналит АНК + для обработки производят на установках - активатарах типа СТЭЛС-10-Н-12-01 производства НПО «Экран» г. Москва при дозе введения соли 8-10 г на литр воды, со сроком хранения Анолита до 30 суток, а для распыления препарата используют аэрозольные генераторы типа «Ультраспрейер» модели Р-60М производства ООО «РАСТЕР».

После проведения литературного и патентного поиска, лабораторных исследований и теоретического обоснования доз, сроков и периодов введения предложенных аэрозольных обработок в виде «сухого тумана» в подобранной дозе с учетом особенностей развития поросят, были проведены поисковые и производственные физиологические опыты для практического подтверждения и обоснования предложенного способа.

Экспериментальная часть работы выполнялась в производственных условиях ОАО. Применяли ЭХА (электрохимический активированный) раствор Анолит (АНК+ рН 8,5-9,0), синтезированный на установках СТЭЛ, который обладает антимикробными (бактерицидными, вирулицидными, спороцидными) и моющими свойствами. АНК (АНК+) используют для дезинфекции в соответствии с методическими указаниями.(1;2).

Сущность ЭХА заключается в том, что жидкость, протекающая через диафрагменный электролизер, при воздействии электрического поля высокого напряжения переходит в метастабильное (активированное) состояние с аномально высокими окислительными (у анолита) и восстановительными (у католита) свойствами. При этом электрическая энергия неравновесного электрохимического воздействия может накапливаться и сохраняться в жидкости в форме внутренней потенциальной энергии, которая реализуется в различных каталитических реакциях в период релаксации жидкости (переход в неактивированное состояние).

Проводили аэрозольную дезинфекцию препаратом Анолит (АНК+) в помещении для содержания поросят (возраст 30 дней) с клиникой колибактериоза в их присутствии (10 опытных поросят), где объектом исследований служил микробиологический фон воздушной среды и его влияние на биохимические показатели, клинические признаки, привесы поросят. Контрольную группу поросят (n=10) не обрабатывали АНК+. Все манипуляции с животными выполнялись в соответствии с Директивой 2010/63/EU Европейского парламента и Совета Европейского Союза «О защите животных, использующихся для научных целей». Эффективность дезинфекции определяли по наличию или отсутствию роста микроорганизмов в смывах, взятых с тест-объектов, поверхностей и воздуха до и после дезинфекции. Выращивание микроорганизмов на МПА, солевом МПА и среде Эндо проводили в термостате при температуре 37°С в течение 24-48 ч. Качество проведенной дезинфекции оценивали по принципу снижения в воздухе и на поверхностях контаминации бактерий и грибов после обработки. Для этого ставили чашки Петри с мясопептонным агаром (МПА) на 15 мин при экспозиции 30 мин и 6 ч. Повторно брали смывы с кафеля стены и пола при экспозиции 30 мин.

Серологические и гематологические исследования, проводили согласно "Перечня нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения", утвержденных Россельхознадзором от 30 июля 2009 года, №02-03-48/563.

В результате проведенных исследований смывов, отобранных до проведения профилактической дезинфекции среди поросят опытной и контрольной группы, были выделены микроорганизмы рода Enterobacteriace spp., Staphylococcus spp. и плесени. Результаты применения дезинфицирующего средства анолит (АНК+) представлены в таблицах 1 и 2. В опытах применяли ЭХА (электрохимический активированный) раствор анолит (АНК+ рН 8,5-9,0), синтезированный на установках СТЭЛ, который обладает антимикробными (бактерицидными, вирулицидными, спороцидными) и моющими свойствами. АНК(АНК+) используют для дезинфекции в соответствии с методическими указаниями. Сущность ЭХА заключается в том, что жидкость, протекающая через диафрагменный электролизер, при воздействии электрического поля высокого напряжения переходит в метастабильное (активированное) состояние с аномально высокими окислительными (у анолита) и восстановительными (у католита) свойствами. При этом электрическая энергия неравновесного электрохимического воздействия может накапливаться и сохраняться в жидкости в форме внутренней потенциальной энергии, которая реализуется в различных каталитических реакциях в период релаксации жидкости (переход в неактивированное состояние).

Проводили аэрозольную дезинфекцию препаратом Анолит (АНК+) в виде «сухого тумана» аэрозольным генератором типа «Ультраспрейер» модели Р-60М производства ООО «РАСТЕР» с применением препарата Анолит (АНК+) при норме расхода 500 мл/м помещения в присутствии животных с периодичностью 10-14 дней. Дезинфекцию применяли в помещении для содержания поросят (отъемного периода в возрасте 60 дней, в первые две недели) с клиникой колибактериоза в их присутствии (10 опытных поросят), где объектом исследований служил микробиологический фон воздушной среды и его влияние на биохимические, серологические, гематологические показатели, клинические признаки, привесы поросят. Контрольную группу (n=10) не обрабатывали Анолит АНК+. Все манипуляции с животными выполнялись в соответствии с Директивой 2010/63/EU Европейского парламента и Совета Европейского Союза «О защите животных, использующихся для научных целей». Эффективность дезинфекции определяли по наличию или отсутствию роста микроорганизмов в смывах, взятых с тест-объектов, поверхностей и воздуха до и после дезинфекции. Выращивание микроорганизмов на МПА, солевом МПА и среде Эндо проводили в термостате при температуре 37°С в течение 24-48 ч. Качество проведенной дезинфекции оценивали по принципу снижения в воздухе и на поверхностях контаминации бактерий и грибов после обработки. Для этого ставили чашки Петри с мясопептонным агаром (МПА) на 15 мин при экспозиции 30 мин и 6 ч. Повторно брали смывы со стены и пола при экспозиции 30 мин.

Гематологические, серологические, биохимические и бактериологические исследования, проводили согласно "Перечня нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения", утвержденных Россельхознадзором от 30 июля 2009 года, №02-03-48/563.

При анализе полученных данных, представленных в таблицах 1; 2 установлено, что препарат Анолит (АНК+) негативно влияет на условно-патогенную микрофлору, значительно снижая содержание микроорганизмов в воздухе помещения для содержания поросят-отъемышей.

Таким образом, энтеробактерии К88, К99 оказались менее устойчивыми к действию указанного препарата по сравнению с грамположительными кокками.

Как видно из таблицы 3 содержание глюкозы увеличивалось у поросят, обработанных Анолит АНК+, в 1,2 раза по сравнению с контролем, достоверно снижалось количество общих липидов крови. Содержание общего белка в крови поросят увеличивалось по сравнению с контрольными показателями.

Исследования проб крови от поросят-отъёмышей после введения препарата Анолит (АНК+) показали, что уровень эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина в опытной группе увеличился в 1,3-1,4 раза.

Данные, приведенные в таблице 4, позволяют предположить, что препарат АНК+ оказывает наиболее выраженное влияние на эритроциты, лейкоциты и гемоглобин.

Оценивали влияние на качество вакцинации поросят против эшерихиоза после обработки помещений препаратом Анолит (АНК+).

Обработки препаратом Анолит (АНК+) проводили через две недели после двукратной иммунизации животных против эшерихиоза вакциной поливалентной против колибактериоза поросят с адгезивными антигенами К88, К99, F41,987P.

Наблюдение за всеми животными вели в течение 28 дней. Эффективность средств оценивали по изменениям титров антител. С этой целью в самом начале эксперимента (до первой вакцинации), через 14 и 28 суток после второй иммунизации, у животных бралась кровь. Сыворотки исследовались в реакции агглютинации с соответствующими антигенами (диагностический набор тест-сывороток антиадгезивных Е. Coli K88(F4), K99(F5),F41,987P(F6).

Оценивали влияние на качество вакцинации поросят против эшерихиоза после обработки помещений препаратом Анолит (АНК+).

Результаты, представленные в таблице 5, показывают, что до введения вакцин у поросят всех групп антитела к специфическим антигенам выявлялись в титрах 1,85-1,86 log2 до вакцинации, что частично объясняется явлением иммунизирующей субинфекции. Через 14 дней после последней иммунизации против эшерихиоза в опытной и контрольной группах отмечено увеличение титра антител в 5,5 и 3,1 раза соответственно. При этом прирост титра антител в опытной группе был, в среднем, в 1,4 раза выше, чем в контроле. Исследование сывороток, проведенное через 14 дней и на 28-е сутки от завершения иммунизации животных соответствующей вакциной, выявило дополнительное увеличение титров антител в опытной группе в 1,6 раза.

Из 10 голов контрольной группы погибло заболевших 4 поросенка, в опытной группе одно животное из 10.

Результаты взвешивания показали, что масса поросят при рождении опытной группы была больше, чем у контрольных животных в 100,0 г., в четырехмесячном возрасте прирост в 12 кг. Сохранность поросят в контрольной группе составила 60%, в опытной - 90%. Таблица 6.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что препарат Анолит (АНК+) положительно влияет на организм животных и его можно рекомендовать к применению в свиноводстве в период выращивания свиней в качестве дезинфекционных, стимулирующих средств, а также при вакцинации. Данные исследования имеют научную ценность, поскольку названный препарат может быть использован для профилактики колибактериоза у поросят и увеличения протективных свойств вакцин.

Исходя из результатов исследований можно предположить, что проведенная дополнительная аэрозольная дезинфекция в виде «сухого тумана» аэрозольным генератором типа «Ультраспрейер» модели Р-60М производства ООО «РАСТЕР» с применением препарата Анолит (АНК+) указанных параметров способствует значительному снижению общего микробного фона воздушной среды помещений для содержания поросят. Рассмотренные вопросы о достоверном изменении качественного и количественного состава микрофлоры воздуха животноводческих помещений дают основание предполагать, что проводимые мероприятия могут быть эффективными для профилактической и вынужденной дезинфекции при лечении и профилактике колибактериоза поросят отъемного периода.

Новизной изобретения является использование известного препарата Анолит (АНК+) указанных параметров по новому назначению для профилактики и лечения колибактериоза поросят с неочевидным эффектом в виде прироста живой массы поросят при повышении их сохранности.

Библиографический список

1. Методические указания по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных. Департамент ветеринарии МСХ и П РФ. N 13-7-2/2117. 27.07.00 г.

2. Методические указания по лабораторной диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка животных, вызываемой патогенными энтеробактериями. Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ. N 13-7-2/175911.10.99 г.

Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарной медицины, а именно к способам выращивания поросят с использованием дезинфекции производственных животноводческих помещений. Способ повышения эффективности профилактики и лечения колибактериоза поросят, включающий иммунизацию животных против колибактериоза поливалентной вакциной с адгезивными антигенами К88, К99, F41, 987Р, отличающийся тем, что при выявлении признаков колибактериоза у поросят проводят дополнительную санитарную обработку электроактивированной водой, причем обработку проводят Анолитом АНК+ с рН 8,5-9,0 при норме расхода 500 мл/м³ помещения в присутствии животных с периодичностью 10-14 дней путем аэрозольного распыления Анолита АНК в виде «сухого тумана» с размерами частиц 1-5 мкм при экспозиции 30 мин от бактериальных, вирусных и грибковых контаминаций, а также дезинфекции находящихся в них воздуха, материалов и иных объектов, включая трудно обеззараживаемые материалы, а также может использоваться в сельском хозяйстве, здравоохранении, ветеринарии, а также смежных отраслях производства. Сущностью изобретения является то, что при выявлении признаков колибактериоза в помещении у поросят проводят дополнительную санитарную обработку электроактивированной водой, причем обработку проводят Анолитом АНК+ с потенциалом рН (8,5-9,0) при норме расхода 500 мл/м³ помещения в присутствии животных с периодичностью 10-14 дней, путем аэрозольного распыления Анолита в виде «сухого тумана» с размерами частиц 1-5 мкм, при этом Аналит АНК+ для обработки производят на установках - активатарах типа СТЭЛС-10-Н-12-01 производства НПО «Экран» г. Москва при дозе введения соли 8-10 г на литр воды, со сроком хранения Анолита до 30 сут, а для распыления препарата используют аэрозольные генераторы типа «Ультрапрайзер» модель Р-60М производства ООО «РАСТЕР». 6 табл.

Способ повышения эффективности профилактики и лечения колибактериоза поросят, включающий иммунизацию животных против колибактериоза поливалентной вакциной с адгезивными антигенами К88, К99, F41, 987Р, отличающийся тем, что при выявлении признаков колибактериоза у поросят проводят дополнительную санитарную обработку электроактивированной водой, причем обработку проводят Анолитом АНК+ с рН 8,5-9,0 при норме расхода 500 мл/м³ помещения в присутствии животных с периодичностью 10-14 дней путем аэрозольного распыления Анолита АНК в виде «сухого тумана» с размерами частиц 1-5 мкм при экспозиции 30 мин.