Способ оценки риска преждевременного разрыва плодных оболочек у беременных Российский патент 2021 года по МПК C12N15/00 C12Q1/68 

Изобретение относится к медицине, а именно к такой ее области, как акушерство и гинекология, и предназначено для оценки риска преждевременного разрыва плодных оболочек (ПРПО) у беременных.

Актуальность заявляемого способа определяется тем, что несвоевременное излитие околоплодных вод - часто встречаемое осложнение беременности и составляет от 2,7 до 17% случаев (1, 2). Развитие патологии приводит к высокой частоте осложнений со стороны матери: аномалиям родовой деятельности, гипо- и атоническим кровотечениям, травматизму мягких тканей родовых путей, инфекциям; со стороны плода -инфекционным осложнениям, неврологическим нарушениям (3).

Известен способ прогнозирования ПРПО с помощью определения активности нейраминидазы во влагалище. У беременной проводят забор содержимого влагалища и определяют в нем активность нейраминидазы, при величине активности фермента 2,5 ммоль/л и выше прогнозируют ПРПО (4).

Недостатком способа является низкая точность оценки риска ПРПО, т.к. фермент нейраминидаза не является специфичным для ПРПО.

Известен способ прогнозирования преждевременного излития околоплодных вод по определению в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа уровня IL-8. При его значении равном или менее 15,4 нг/мл прогнозируют ПРПО (5).

Недостатком способа является низкая специфичность, т.к. цитокины являются локальными медиаторами, исследование их в сыворотке крови менее информативно, чем определение в самом очаге.

Известен способ прогнозирования преждевременных родов по профилю экспрессии генов врожденного иммунитета в клетках цервикального канала. Сущность способа заключается в том, что у беременной женщины берут соскоб эпителия цервикального канала и с помощью ПЦР определяют соотношения уровней экспрессии мРНК генов TLR4/CD68 и TNF/GATA3 (6).

Недостатком способа является его низкая специфичность и чувствительность в отношении прогноза при ПРПО при доношенной беременности. Этот способ выбран нами в качестве прототипа.

Целью изобретения является создание способа оценки риска ПРПО у беременных в сроке гестации 37 недель и более.

Эта цель достигается тем, что у беременных при сроке гестации 37 недель и более определяют уровни экспрессии мРНК генов IL-18 и TLR-2, нормированных на референсный ген В2М; вычисляют риск преждевременного разрыва плодных оболочек P по формуле: Р=1/1+е^{-(-0,92×X1+88,2×X2)}, где X1 - значение уровня экспрессии мРНК гена Il-18 в относительных единицах; Х2 - значение уровня экспрессии мРНК гена TLR-2 в относительных единицах; при значении P большем или равном 0,5 риск оценивают, как высокий; при значении P меньше 0,5 как низкий.

Способ разработан на основании определения у 40 беременных в сроке гестации 37 недель и более в соскобе из цервикального канала с помощью ПЦР с обратной транскрипцией в режиме реального времени уровней экспрессии мРНК генов Il-6, Il-18, TLR2, PTGS, ММР9, CD68, GATA3, нормализованных по референсному гену В2М. Из них у 25 беременных был диагностирован ПРПО, а 15 вступили в роды с целым плодным пузырем.

При сравнении полученных данных с применением методов математической статистики (логистическая регрессия) построена математическая модель, с помощью которой были выявлены наиболее значимые маркеры: уровень экспрессии мРНК генов Il-18 (статистика Вальда=4,12; р=0,042), TLR2 (статистика Вальда=8,04; р=0,005), на основании которых были рассчитаны риски ПРПО для каждого случая. Расчет риска ПРПО проводится с помощью бинарной логистической регрессии, что существенно повышает точность способа.

Вычисляют риск ПРПО P по формуле:

Р=1/1+е^{-(-0,92×Х1+88,2×Х2)}, где X1 -значение уровня экспрессии мРНК гена Il-18 в относительных единицах; Х2 -значение уровня экспрессии мРНК гена TLR-2 в относительных единицах; при значении P большем или равном 0,5 риск оценивают, как высокий; при значении P меньше 0,5 как низкий.

Константы -0,92; 88,2 - коэффициенты уравнения бинарной логистической регрессии, полученные с применением пошагового исключения алгоритма Вальда на основе результатов исследования уровня экспрессии генов мРНК генов TLR-2 и Il-18. Точность модели составляет 82,5%, чуствительность (Se) - 88,0%, специфичность (Sp) - 73,3%.

Предлагаемый способ позволяет оценить риск преждевременного разрыва плодных оболочек. Сравнение предлагаемого способа с другими, известными в медицине, показало его соответствие критериям изобретения.

Изобретение реализуется следующим образом. У женщин со сроком гестации 37 недель и больше выполняют соскоб эпителия цервикального канала, оценку местного иммунного статуса на основании определения с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени уровня экспрессии мРНК генов IL-18 и TLR-2, нормированных на референсный ген В2М. На основании полученных результатов вычисляют риск преждевременного разрыва плодных оболочек P по формуле: Р=1/1+е^{-(-0,92×X1+88,2×X2)}, где X1 - значение уровня экспрессии мРНК гена Il-18 в относительных единицах; Х2 - значение уровня экспрессии мРНК гена TLR-2 в относительных единицах; при значении P большем или равном 0,5 риск оценивают, как высокий; при значении P меньше 0,5 как низкий. Способ поясняется клиническими примерами.

Пример 1: Беременная, 28 лет, в сроке беременности 39,5 недель. Данная беременность 3, в анамнезе самопроизвольный и медицинский аборт, бактериальный вагиноз, соматически здорова. По УЗИ и УЗДГ со стороны плода и плаценты отклонений не выявлено. Плод один, в головном предлежании, кардиотокограмма в норме. Взят мазок из цервикального канала на мРНК: Il-18=5 отн.ед., TLR2=0,02 отн.ед.

P=1/1+e^{-(-0.92×X1+88.2×X2)}=1/1+e^{-(-0,92×5+88,2×0,02)}=0,05 Поскольку значение P меньше 0,5 делается вывод о низком риске преждевременного разрыва плодных оболочек.

Пациентка вступила в роды без преждевременного излития околоплодных вод и в дополнительных назначениях не нуждалась, это свидетельствовало о правильном расчете риска преждевременного разрыва плодных оболочек.

Пример 2: Беременная, 24 лет, в сроке беременности 39,0 недель. Данная беременность 1, абортов, самопроизвольных выкидышей не было, соматически здорова. В анамнезе хронический сальпингоофорит, в первой половине беременности признаки угрозы прерывания, по поводу чего получала препараты прогестерона. По УЗИ и УЗДГ со стороны плода и плаценты отклонений не выявлено. Плод один, в головном предлежании, кардиотокограмма в норме. Взят мазок из цервикального канала на мРНК: Il-18=0,02 отн.ед., TLR2=2 отн.ед.

Р=1/1+е^{-(-0,92×Х1+88,2×Х2)}=1/1+е^{-(-0,92×0,02+88,2×2})=1,0. Поскольку значение P больше 0,5 делается вывод о высоком риске преждевременного разрыва плодных оболочек.

Данная пациентка была госпитализирована в стационар, взят посев на флору и чувствительность к антибиотикам, в том числе на β-гемолитический стрептококк, и начата санация влагалища, направленная на нормализацию микрофлоры. В течение суток у данной пациентки отошли околоплодные воды при наличии недостаточно зрелой шейки матки до начала родовой деятельности. Это свидетельствовало о правильном расчете риска преждевременного разрыва плодных оболочек.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет оценить риск преждевременного разрыва плодных оболочек. Изобретение целесообразно использовать в клинической практике гинекологических консультаций и стационаров для профилактики данного осложнения во время беременности и выбора оптимальной тактики ведения пациенток.

Источники информации

1. Князева Т.П. Причины и факторы риска преждевременного разрыва плодных оболочек. Дальневосточный медицинский журнал; 2016, 2, с. 128-135.

2. Sha Huang, Wei Xia, Xia Sheng, Lin Qiu, Bin Zhang, Tian Chen et al. Maternal lead exposure and premature rupture of membranes: a birth cohort study in China. BMJ Open 2018; doi:10.1136/bmjopen-2018-021565, p.1-7.

3. Prelabor rupture of membranes. ACOG Practice Bulletin No. 188. American College of Obstetricians and Gynecologists. Obstet Gynecol 2018;131:el-14.

4. Патент RU 2014601 C1 от 15.06.1994, «СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПРЕЖДЕВРЕМЕННОГО РАЗРЫВА ПЛОДНЫХ ОБОЛОЧЕК».

5. Патент RU (11) 2405453(13) С1 от 10.12.2010. «СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПРЕЖДЕВРЕМЕННОГО ИЗЛИТИЯ ОКОЛОПЛОДНЫХ ВОД У БЕРЕМЕННЫХ»

6. Патент RU 2620153(13) С1 от 23.05.2017: «ПРОГНОЗИРОВАНИЕ ПРЕЖДЕВРЕМЕННЫХ РОДОВ ПО ПРОФИЛЮ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА В КЛЕТКАХ ЦЕРВИКАЛЬНОГО КАНАЛА».

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ оценки риска преждевременного разрыва плодных оболочек у беременных, включающий выполнение соскоба эпителия цервикального канала, оценку местного иммунного статуса на основании определения с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени уровня экспрессии мРНК генов цитокинов, где у беременных при сроке гестации 37 недель и более определяют уровни экспрессии мРНК генов IL-18 и TLR-2, нормированных на референсный ген В2М; на основании полученных результатов вычисляют риск преждевременного разрыва плодных оболочек P по формуле: P=1/1+e^{-(-0,92×X1+88,2×X2)}, где X1 - значение уровня экспрессии мРНК гена Il-18 в относительных единицах; Х2 - значение уровня экспрессии мРНК гена TLR-2 в относительных единицах; при значении P, большем или равном 0,5, риск оценивают как высокий; при значении P меньше 0,5 - как низкий. Изобретение позволяет оценить риск преждевременного разрыва плодных оболочек у беременных при сроке гестации 37 недель и более. 2 пр.

Способ оценки риска преждевременного разрыва плодных оболочек у беременных, включающий выполнение соскоба эпителия цервикального канала, оценку местного иммунного статуса на основании определения с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени уровня экспрессии мРНК генов цитокинов, отличающийся тем, что у беременных при сроке гестации 37 недель и более определяют уровни экспрессии мРНК генов IL-18 и TLR-2, нормированных на референсный ген В2М; на основании полученных результатов вычисляют риск преждевременного разрыва плодных оболочек P по формуле: P=1/1+e^{-(-0,92×X1+88,2×X2)}, где X1 - значение уровня экспрессии мРНК гена Il-18 в относительных единицах; Х2 - значение уровня экспрессии мРНК гена TLR-2 в относительных единицах; при значении P, большем или равном 0,5, риск оценивают как высокий; при значении P меньше 0,5 - как низкий.