Способ прогнозирования преждевременного разрыва плодных оболочек в сроке до 28 недель беременности Российский патент 2021 года по МПК G01N33/58 G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования риска сверхранних преждевременных родов.

Преждевременный разрыв плодных оболочек (ПРПО) в сроке до 37 недель, осложняющий течение примерно 5% всех беременностей, продолжает оставаться объектом пристального изучения по сей день, при этом самые неблагоприятные исходы имеют беременные с ПРПО до 28 недель.

Принципиально разные механизмы, лежащие в основе преждевременных родов, вызванных ПРПО и вызванных повышенной контрактильной активностью матки с целыми плодными мембранами, позволяют рассматривать этот вид преждевременных родов как самостоятельную нозологическую единицу.

Частота преждевременного разрыва плодных оболочек составляет 2-20% всех беременностей и сочетается с 18-20% перинатальной смертности. ПРПО при недоношенной беременности (до 36 недель 6 дней) повышает перинатальную смертность в 4 раза, а неонатальную заболеваемость в 3 раза. (Баев О.Р., Васильченко О.Н., Кан Н.Е. и др. «Преждевременный разрыв плодных оболочек». Клиническое руководство - Москва. - 2013).

В нашей стране актуальность этой проблемы значительно возросла в связи с переходом с апреля 2012 г. на критерии живорождения ВОЗ [Приказ МЗ РФ №1687Н от 27.12.11 «О медицинских критериях рождения, форме документа о рождении и порядке его выдачи».].

В то время как для диагностики факта ПРПО разработаны и внедрены в практическую деятельность достоверные тесты, до сих пор не существует метода, позволившего бы надежного предсказать высокую вероятность разрыва мембран еще на этапе интактной беременности.

В сроке от 22 нед до 33 нед 6 дней при удовлетворительном состоянии беременной и плода, сохранении нормального уровня околоплодных вод и отсутствии данных о продолжающемся подтекании вод, беременность может быть пролонгирована до доношенного срока. При продолжающемся подтекании вод, но сохранении постоянного уровня околоплодных вод и индекса амниотической жидкости более 3-4 см, при удовлетворительном состоянии плода и матери, отсутствии воспалительного процесса и активации родовой деятельности, можно пролонгировать беременность на 1-3 нед (реже на больший срок).

И таким образом, выбрать адекватную тактику ведения таких пациенток с целью снижения неблагоприятных исходов беременности. Немаловажным является вопрос выбора тактики ведения недоношенной беременности в сроки до 28 недель при ПРПО, поскольку пролонгация беременности с одной стороны повышает гестационный возраст плода и, соответственно, его жизнеспособность, с другой стороны, сопровождается риском антенатальной гибели плода и гнойно-септических осложнений новорожденного.

Из существующего уровня техники известен способ прогнозирования преждевременного излития околоплодных вод у беременных путем исследования биологического материала, отличающийся тем, что у женщин в сроке гестации 32-36 недель в сыворотке крови определяют уровень IL-8 и при его значении, равном или менее 15,4 нг/мл, прогнозируют преждевременное излитие околоплодных вод (патент РФ№2405453, опубл. 10.12.2010).

Недостатком данного технического решения является то, что прогноз ПРПО путем исследования периферической венозной крови у беременных женщин осуществляется в сроке гестации 32-36 недель, и таким образом, не позволяет прогнозировать сверхранние и ранние преждевременные роды. Что значительно снижает значение данного метода для выбора акушерской тактики именно в данный период беременности.

Известен Способ прогнозирования преждевременных родов путем совместного определения внеклеточной ДНК и интерлейкина-8 в плазме периферической крови, отличающийся тем, что в данном методе используют одновременное измерение общего количества внеклеточной ДНК методом полимеразной цепной реакции в реальном времени и IL-8 иммуноферментным методом в плазме крови у беременных женщин на 22-36 неделях гестации для определения переменной Р по формуле:

Р=1/(1+ехр(-(-4,1+4×Х1+0,0001×Х2))), где

X1 - концентрация IL-8 в плазме периферической крови, выраженная в пг/мл;

Х2 - концентрация ДНК в плазме периферической крови, выраженная в ГЕ/мл,

при Р>0,5 преждевременные роды произойдут; при Р≤0,5 преждевременные роды не произойдут (патент РФ№2682713, опубликован 21.03.2019).

Недостатком данного технического решения является то, что прогноз ПРПО осуществляется в сроке гестации 32-36 недель, и таким образом, не позволяет прогнозировать сверхранние и ранние преждевременные роды. Что значительно снижает значение данного метода для выбора акушерской тактики именно в данный период беременности.

Известен Способ прогнозирования преждевременных родов у женщин с угрозой прерывания беременности, включающий исследование крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови беременной в 18-22 нед определяют иммуноферментным методом уровень ИЛ-33 и при его значении выше 0,98 пг/мл прогнозируют исход беременности в виде преждевременных родов (патент №2710244, опубликован 25.12.2019).

Недостатком данного технического решения является то, что выполняется прогноз преждевременных родов без указания срока наступления, что является важным в дальнейшей акушерской тактике ведения.

Известен Способ прогнозирования продолжительности латентного периода при сверхранних и ранних преждевременных родах, осложненных разрывом околоплодных оболочек, отличающийся тем, что в качестве предикторов используются показатели высокочувствительного С-реактивного белка - XhsCRP и противовоспалительного цитокина ИЛ-6 - ХИЛ6, которые определяют в сыворотке венозной крови и по формуле: Yдлп=450,1-14,84*XhsCRP-14,54*ХИЛ6 рассчитывают продолжительность латентного периода в часах (патент №2716973, опубликован 17.03.2020).

Недостатком данного технического решения является то, что прогнозируется только возможная длительность пролонгирования беременности после констатации наступления преждевременного разрыва плодных оболочек (ПРПО), а сам факт наступления ПРПО не прогнозируется при интактных плодных оболочках.

Наиболее близким к заявленному техническому решению является способ прогнозирования преждевременного излития околоплодных вод у беременных путем исследования биологического материала, отличающийся тем, что у женщин в сроке гестации 32-36 недель в сыворотке крови определяют уровень IL-8 и при его значении, равном или менее 15,4 нг/мл, прогнозируют преждевременное излитие околоплодных вод (патент РФ№2405453, опубл. 10.12.2010)., принятый нами за прототип.

Недостатки прототипа устраняются заявляемым изобретением.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение является оптимизация тактики ведения недоношенной беременности, обусловленной преждевременным разрывом плодных оболочек за счет своевременного прогнозирования ПРПО с учетом системного и локального цитокинового профиля.

Данная задача решается за счет того, что способ прогнозирования преждевременного разрыва плодных оболочек в сроке до 28 недель беременности включает исследование биологического материала, отличающийся тем, что у женщин в сроке гестации до 28 недель в сыворотке крови определяют полиморфизм провоспалительного цитокина IL18: -137 G>C, а также концентрации в сыворотке крови провоспалительных и противовоспалительных цитокинов IL-1β, IL-8, IL-10, IFN-γ и по формуле рассчитывают вероятность преждевременного разрыва плодных оболочек в сроки до 28 недель беременности р:

р=1/(1+e^-z)*100%, где

е - константа Эйлера ≈2.718281,

z=-3,08+1,07*X₁-0,177*X₂+0,186*X₃+0,296*X₄-0,318*X₅, где

X₁ - IL18: -137 G>C - полиморфизм ИЛ 18: -137 G>C, может принимать три возможных значения: 3-генотип СС-мутантная гомозигота, 2-GC-гетерозигота, 1-генотип-GG-нормальная гомозигота - в формулу подставляется закодированный вариант носительства, а именно цифра 1, 2 или 3.

Х₂ - IL-1β - концентрации в сыворотке крови цитокина IL-1β единица измерения - пг/мл,

Х₃ - IL-8 - концентрации в сыворотке крови цитокина IL-8, единица измерения - пг/мл,

Х₄ - IL-10 - концентрации в сыворотке крови цитокина IL-10, единица измерения - пг/мл,

Х₅ - IFN-γ - концентрации в сыворотке крови цитокина IFN-γ, единица измерения - пг/мл.

Если р больше или равно 0,5, то прогнозируют ПРПО в срок до 28 нед. беременности.

Техническим результатом предлагаемого способа является повышение точности прогнозирования ПРПО независимо от разнообразных клинических проявлений данного осложнения беременности с возможностью выбора адекватного профилактического лечения.

Технический результат направлен на расширение арсенала методов прогнозирования ПРПО в широком диапазоне гестационного срока (22-28 недели). Метод позволит выбрать правильную тактику ведения беременности и снизить риск развития патологии матери и плода.

Значимая роль в развитии ПРПО при недоношенной беременности отводится механо-биологическим свойствам плодных оболочки триггерам, их повреждающим ( Т., PierardG.E., 2018; WangX.J., LiL., CuiS.H., 2019). Индуцирование апоптоза, ремоделирование коллагена и компонентов межклеточного матрикса плодных оболочек вероятнее всего являются полиэтиологическими и, воздействуя перекрестно, ведут к запуску патологического каскада образования воспалительных медиаторов, приводя к истончению плодных оболочек и их преждевременному разрыву.

Биосинтез медиаторов воспаления является частью физиологического защитного механизма организма матери в ответ на вторжение патогенных микроорганизмов. Широко изучается роль простагландинов, цитокинов (интерлейкины (IL), фактора некроза опухоли (TNF)), протеиназ (матричной металлопротеиназы (ММР), эластазы, катепсинов), в процессе истончения плодных оболочек и апоптоза (GeorgeR.B., KalichJ., YonishB., MurthaA.P., TchirikovM., Schlabritz-LoutsevitchN.,2018,MusilovaI., 2018).

Точный триггер, секретируемый хориальными и амниотическими клетками для индукции экспрессии различных ММР, сложно выделить, но бактериальные продукты и/или провоспалительные цитокины, IL-1β и фактор некроза опухоли (TNF-α) могут действовать как паракринные или аутокринные сигналы для металлопротеаз во время беременности при их инициации (AthaydeN., EdwinS.S., RomeroR., Шадрина А.С, Плиева Я.З.,2018, Maymon Е et al. 2018), большой вклад в развитие ПРПО вносит именно генетика.

В популяции у всех беременных при беременности часто встречаются бактериальные вагинозы (дисбактериозы), это является фактором риска ПРПО, но не у всех беременных данные нарушения баланса микрофлоры запускают воспалительную реакцию в организме и тем самым вызывают расплавнение плодных оболочек и ПРПО. Поэтому большой вклад в риск развития ПРПО вносит носительство мутантного варианта гена IL18: -137 G>C. Полиморфизм мутантного гена ИЛ 18: -137 G>C, может принимать три возможных значения: 3-генотип СС-мутантная гомозигота, 2-GC-гетерозигота, 1-генотип-GG-нормальная гомозигота.

Наличие мутантного гена влияет на риск развития ПРПО, а в совокупности с повышением или снижением цитокинов (концентрация в сыворотке цитокинов), мы можем рассчитать объективный показатель риска ПРПО. Этот мутантный ген регулирует выработку цитокинов и соответственно при наличии его и активации его, будут изменяться концентрации цитокинов и тогда повышается риск ПРПО, но активация данного гена может не произойти, и тогда цитокины в крови не будут меняться и тогда по формуле будет низкий риск ПРПО.

Поэтому важно знать не только о наличии мутантного гена ИЛ 18: -137 G>C, но и изменения концентрации определенных цитокинов, которое происходит под действием данного гена.

С целью выявления генетических маркеров сверхранних преждевременных родов, ассоциированных с ПРПО, проведено исследование полиморфизмов провоспалительных и противовоспалительных цитокинов: IFNG: 874 Т>А, IL10: -1082 G>A, IL10: -592 А>С, IL10: -819 С>Т, IL12B: -1188 С>А, IL18: -137 G>C, IL18: -607 G>T, IL18: -656 А>С, IL1β: -31 Т>С, IL1β: 3953 C>Т, IL1β: -511 С>Т, IL6: -174 G>C, IL8: -251 А>Т, TNF: -238 G>A, TNF: -308 G>A.

По данным нашего исследования в группе беременных с ПРПО в 22-28 недель статистически значимо чаще встречалось носительство мутантной гомозиготы ИЛ 18 в позиции -137 G>C - 67% в 1 группе и 27% во 2 группе.

Для построения модели использовали метод логистической регрессии с пошаговым исключением (метод Вальда). Всего при анализе было получено 17 шагов, после чего нами была выбрана наиболее оптимальная модель.

Нами установлено, что наблюдаемая зависимость (определение того, к какой группе будет относиться беременная) описывается уравнением:

p=1/(1+e^-z)*100%, где

р - вероятность развития ПРПО в сроки до 28 нед. беременности,

е - константа Эйлера ≈2.718281,

z=-3,08+1,07*Х₁-0,177*Х₂+0,186*Х₃+0,296*Х₄-0,318*Х₅, где

X₁ - IL18: -137 G>C - полиморфизм ИЛ 18-137 G>C, может принимать три возможных значения: 3-генотип СС-мутантная гомозигота, 2-GC-гетерозигота, 1-генотип-GG-нормальная гомозигота,

Х₂ - IL-1β - концентрации в сыворотке крови цитокина IL-1β, единица измерения - пг/мл,

Х₃ - IL-8 - концентрации в сыворотке крови цитокина IL-8, единица измерения - пг/мл,

Х₄ - IL-10 - концентрации в сыворотке крови цитокина IL-10, единица измерения - пг/мл,

Х₅ - IFN-γ - концентрации в сыворотке крови цитокина IFN-γ, единица измерения - пг/мл.

Пороговое значение логистической функции р составило 0,5. При значениях Р<0,5 прогнозировался низкий риск наступления преждевременного разрыва плодных оболочек (ПРПО) до 28 недель. При значения Р≥0,5 - высокий риск наступления ПРПО в сроке до 28 недель беременности.

Таким образом, знание вероятности риска развития ПРПО, позволяет осуществить оптимизацию тактики ведения недоношенной беременности, обусловленной преждевременным разрывом плодных оболочек за счет своевременного прогнозирования ПРПО с учетом системного и локального цитокинового профиля.

Подробное описание способа и примеры его конкретного выполнения.

Критерии включения в исследование беременных женщин: срок беременности 22-28 недель, одноплодная беременность. Критерии исключения из исследования: хромосомные аномалии (молекулярное кариотипирование - биопсия хориона, ДОТ-тест во время беременности; подтвержденные наследственные заболевания; врожденные пороки плода, установленные в течение беременности; многоплодная беременность; онкологические заболевания; тяжелая экстрагенитальная патология; ИППП (острая фаза воспаления); беременность вследствие ВРТ.

Всем беременным выполнены лечебные и диагностические мероприятия в объеме, предусмотренном приказом Министерства Здравоохранения РФ от 1 ноября 2012 г. №572н "Об утверждении Порядка оказания медицинской помощи по профилю «акушерство и гинекология (за исключением использования вспомогательных репродуктивных технологий)»", и письма Минздрава России от 17 декабря 2013 г. №15-4\10\2-9480 «Преждевременные роды».

У беременных в сроке гестации до 28 недель в сыворотке крови определяют полиморфизм провоспалительного цитокина IL18: -137 G>C, а также концентрации в сыворотке крови провоспалительных и противовоспалительных цитокинов IL-1β, IL-8, IL-10, IFN-γ.

Образцы крови, забранные в вакуумные пробирки с активатором свертывания (кремнезем (SiO2)), центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 мин. при температуре 25°С. Полученную сыворотку аликвотировали и хранили при -70°С. После однократного размораживания методом иммуноферментного анализа определяли концентрацию: IL-1β, IL-8, IL-10 и IFN-γ в сыворотке крови коммерческими наборами (АО "Вектор Бест", Россия) с использованием анализатора Wallac 1420 Multilaber Counter (Victor-2) ("PerkinElmer", Финляндия).

Выделение геномной ДНК из периферической венозной крови, стабилизированной ЭДТА, проводили с помощью комплекта реагентов "ПРОБА-ГС-ПЛЮС" ("ДНК-Технология", Россия). Коммерческими наборами ("ДНК-Технология", Россия) определяли однонуклеотидные полиморфизмы: -137 G>C (rs187238) гена IL18 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени, с помощью детектирующего амплификатора "ДТлайт" ("ДНК-Технология", Россия).

X₁ - IL18: -137 G>C - полиморфизм ИЛ 18:-137 G>C, может принимать три возможных значения: 3-генотип СС-мутантная гомозигота, 2-GC-гетерозигота, 1-генотип-GG-нормальная гомозигота,

Х₂ - IL-1β - концентрации в сыворотке крови цитокина IL-1β, единица измерения - пг/мл,

Х₃ - IL-8 - концентрации в сыворотке крови цитокина IL-8, единица измерения - пг/мл,

Х₄ - IL-10 - концентрации в сыворотке крови цитокина IL-10, единица измерения - пг/мл,

Х₅ - IFN-γ - концентрации в сыворотке крови цитокина IFN-γ, единица измерения - пг/мл.

По формуле рассчитывают вероятность преждевременного разрыва плодных оболочек в сроки до 28 недель беременности р:

р=1/(1+e^-z)*100%, где

е - константа Эйлера ≈2.718281,

z=-3,08+1,07*Х₁-0,177*Х₂+0,186*Х₃+0,296*Х₄-0,318*Х₅.

Если р больше или равно 0,5, то прогнозируют преждевременный разрыв плодных оболочек в срок до 28 недель беременности, и назначают адекватную акушерскую тактику ведения беременной.

Работоспособность заявляемого способа подтверждается следующими клиническими примерами:

Пример 1

Пациентка Х-ова, 1980 года рождения, повторно (3) беременная, повторно (2) родящая. Срок беременности на момент забора материала - 23 недели 4 дня. Значения исследуемых признаков: носительство генотипа СС полиморфизма гена IL18: -137 G>C (мутантная гомозигота, соответствует закодированному в форме значению = 3), концентрация в сыворотке крови IL-1β - 5,2 пг/мл, IL-8 - 6,0 пг/мл, IL-10 - 23,3 пг/мл, IFN-γ - 9,5 пг/мл.

Рассчитываем z=-3,08+l,07*3-0,177*5,2+0,186*6,0+0,296*23,3-0,318*9,5.

Расчет по формуле р=1/(1+e^-z)*100%, р=0,98544, что согласно заявляемому методу соответствует высокому риску преждевременного разрыва плодных оболочек в сроке 22-28 недель беременности. У данной пациентки исход беременности: Роды 3-й сверхранние преждевременные в сроке 24,0 недель, оперативные. Преждевременный разрыв плодных оболочек. Выраженное маловодие. Длительный безводный период. Выпадение петель пуповины плода, родился новорожденный женского пола 3-3-3 балла по шкале Апгар, 490 грамм, 24 см.

Пример 2

Пациентка С-ева, 1986 года рождения, повторно (2) беременная, повторно (2) родящая. Срок беременности на момент забора материала - 25 недель 5 дня. Значения исследуемых признаков: носительство генотипа СС полиморфизма гена IL18: -137 G>C (мутантная гомозигота, соответствует закодированному в форме значению = 3), концентрация в сыворотке крови IL-1β - 0,6 пг/мл, IL-8 - 4,8 пг/мл, IL-10 - 4,8 пг/мл, IFN-γ - 0,9 пг/мл.

Рассчитываем z=-3,08+1,07*3-0,177*0,6+0,186*4,8+0,296*4,8-0,318*0,9.

Расчет по формуле р=1/(1+e^-z)*100%, р=0,88758, что согласно заявляемому методу соответствует высокому риску преждевременного разрыва плодных оболочек в сроке 22-28 недель беременности. У данной пациентки исход беременности: Роды 2-ые преждевременные в сроке 28 недель 2 дня, оперативные. Преждевременный разрыв плодных оболочек. Длительный безводный период. Поперечное положение плода. Рубец на матке после одной операции кесарева сечения, родился новорожденный женского пола 5-6 балла по шкале Апгар 1300 грамм, 36 см.

Пример 3

Пациентка Б-ова, 1989 года рождения, первобеременная, первородящая. Срок беременности на момент забора материала - 25 недель 0 дня. Значения исследуемых признаков: носительство генотипа GG полиморфизма гена IL18: -137 G>C (нормальная гомозигота, соответствует закодированному в форме значению = 1), концентрация в сыворотке крови IL-1β - 1,25 пг/мл, IL-8 - 9,7 пг/мл, IL-10 - 7,5 пг/мл, IFN-γ - 7,2 пг/мл.

Рассчитываем z=-3,08+1,07*1-0,177*1,25+0,186*9,7+0,296*7,5-0,318*7,2.

Расчет по формуле р=1/(1+e^-z)*100%, р=0,37805, что согласно заявляемому методу соответствует низкому риску преждевременного разрыва плодных оболочек в сроке 22-28 недель беременности. У данной пациентки исход беременности: Роды 1-ые в сроке 40 недель 4 дня, родился новорожденный женского пола с оценкой по Апгар 9-10 баллов, 3400 грамм, 50 см.

Пример 4

Пациентка З-ева, 1991 года рождения, повторно(2)беременная, первородящая. Срок беременности на момент забора материала - 24 недели 2 дня. Значения исследуемых признаков: носительство генотипа GC полиморфизма гена IL18: -137 G>C (гетерозигота, соответствует закодированному в форме значению = 2), концентрация в сыворотке крови IL-1β - 1,75 пг/мл, IL-8 - 5,5 пг/мл, IL-10 - 3,6 пг/мл, IFN-γ - 6,9 пг/мл.

Рассчитываем z=-3,08+1,07*2-0,177*1,75+0,186*5,5+0,296*3,6-0,318*6,9.

Расчет по формуле р=1/(1+e^-z)*100%, р=0,20632, что согласно заявляемому методу соответствует низкому риску преждевременного разрыва плодных оболочек в сроке 22-28 недель беременности. У данной пациентки исход беременности: Роды 1-ые в сроке 39 недель 5 дней, родился новорожденный женского пола с оценкой по Апгар 8-8 баллов, 2780 грамм, 48 см.

Пример 5

Пациентка Ш-ева, 1992 года рождения, первобеременная, первородящая. Срок беременности на момент забора материала - 23 недели 5 дней. Значения исследуемых признаков: носительство генотипа GC полиморфизма гена IL18: -137 G>C (гетерозигота, соответствует закодированному в форме значению = 2), концентрация в сыворотке крови IL-1β - 10,8 пг/мл, IL-8 - 5,6 пг/мл, IL-10 - 10,0 пг/мл, IFN-γ - 2,9 пг/мл.

Рассчитываем z=-3,08+1,07*2-0,177*10,8+0,186*5,6+0,296*10,0-0,318*2,9.

Расчет по формуле р=1/(1+e^-z)*100%, р=0,55795, что согласно заявляемому методу соответствует высокому риску преждевременного разрыва плодных оболочек в сроке 22-28 недель беременности. У данной пациентки исход беременности: Роды 1-ые сверхранние преждевременные в сроке 24.0 недель. Преждевременный разрыв плодных оболочек. Длительный безводный период. Интранатальная гибель плода, родился мертвый новорожденный мужского пола 650 грамм, 35 см.

Пример 6

Пациентка Б-ян, 1987 года рождения, повторно (2) беременная, повторно (2) родящая. Срок беременности на момент забора материала - 24 недели 5 дней. Значения исследуемых признаков: носительство генотипа СС полиморфизма гена IL18: -137 G>C (мутантная гомозигота, соответствует закодированному в форме значению = 3), концентрация в сыворотке крови IL-1β - 17,4 пг/мл, IL-8 - 9,4 пг/мл, IL-10 - 6,0 пг/мл, IFN-γ - 7,2 пг/мл.

Рассчитываем z=-3,08+1,07*3-0,177*17,4+0,186*9,4+0,296*6,0-0,318*7,2.

Расчет по формуле р=1/(1+e^-z)*100%, р=0,15427, что согласно заявляемому методу соответствует низкому риску преждевременного разрыва плодных оболочек в сроке 22-28 недель беременности. У данной пациентки исход беременности: Роды 2-ые в сроке 39 недель. Разрыв задней стенки влагалища, ушит, родился живой новорожденный мужского пола 3680 грамм, 52 см, с оценкой по Апгар 9-9 баллов. Данный пример наглядно показывает, что несмотря на носительства мутантной гомозиготы, если при этом цитокины крови имеют нормальные значения, а по формуле р=1/(1+e^-z)*100% вычисляется низкий риск ПРПО, то мы предполагаем, что не произошла активация мутантного гена и женщина донашивает беременность.

Исследование выполнено в 2017-2019 годах в ФГБОУ ВО РостГМУ Министерства здравоохранения Российской Федерации, набор материала осуществлялся в отделении поликлиники и отделении патологии ГБУ РО «Перинатальный центр», лабораторные исследования выполнены в ЦНИЛ ФГБОУ ВО РостГМУ.

В исследование включено 120 беременных женщин в сроке беременности 22-28 недель. I группу составили 80 беременных с ПРПО в сроке 22-28 недель, во 2 группу вошли 40 беременных с физиологически протекающей беременностью, без ПРПО. Обе группы были сопоставимы по количеству перво- и повторно-родящих. Критериями диагностики ПРПО явились: подтекание околоплодных вод при осмотре в стерильных зеркалах, положительный нитрозиновый тест, определение индекса амниотической жидкости путем ультразвукового исследования.

Критерия включения в исследование: срок беременности 22-28 недель, одноплодная беременность. Критерии исключения из исследования: хромосомные аномалии (молекулярное кариотипирование - биопсия хориона, ДОТ-тест во время беременности; подтвержденные наследственные заболевания; врожденные пороки плода, установленные в течение беременности; многоплодная беременность; онкологические заболевания; тяжелая экстрагенитальная патология; ИППП (острая фаза воспаления); беременность вследствие ВРТ.

Всем пациенткам, включенным в исследование, выполнены лечебные и диагностические мероприятия в объеме, предусмотренном приказом Министерства Здравоохранения РФ от 1 ноября 2012 г. №572н "Об утверждении Порядка оказания медицинской помощи по профилю «акушерство и гинекология (за исключением использования вспомогательных репродуктивных технологий)»", и письма Минздрава России от 17 декабря 2013 г. №15-4\10\2-9480 «Преждевременные роды».

Из числа специальных методов были применены:

Молекулярно-генетическое исследование полиморфизмов генов про и противовоспалительных цитокинов (IL-1β, IL-6, IL-8, IL-2, IFN-γ, IL-10, IL12P, IL18.TNF)

Изучение системного воспалительного ответа (в крови - уровень провоспалительных цитокинов - IL-1β, IL-8, IFN-γ, IFN-α, IL-18, уровень противовоспалительных цитокинов - IL-10, метод ИФА)

Установлено, что беременность, осложненная ПРПО в сроке 22-28 недель, характеризуется повышенным уровнем провоспалительного цитокина в крови ИЛ 18 и низким уровнем интерферона IFN-γ.

Статистическая обработка полученных данных проведена с помощью пакета прикладных программ IBM SPSS Statistics 23. С использованием следующих критериев: непараметрический U-критерий Манна-Уитни, критерий χ2-Пирсона, точный двусторонний критерий Фишера, логистическая регрессия с расчетом относительного риска и отношения шансов.

Пороговое значение логистической функции Р составило 0,5. При значениях Р<0,5 прогнозировался низкий риск наступления преждевременного разрыва плодных оболочек (ПРПО) до 28 недель. При значения Р>0,5 - высокий риск наступления ПРПО в сроке до 28 недель беременности.

Полученная регрессионная модель является статистически значимой (р<0,0001).

Чувствительность составила 65,2%.

Специфичность составила 93%.

Диагностическая эффективность составила 83,3%.

Преимущества заявляемого способа.

1. Высокая точность - 94%, чувствительность - 65,2%. и специфичность - 93%.

2. Хорошая воспроизводимость метода.

3. Простота и доступность выполнения методики.

4. Простота в интерпретации результатов обследования.

5. Способ позволяет в ранние сроки гестации (до 28 недель) прогнозировать преждевременное излитие околоплодных вод, что дает возможность профилактировать данное осложнение беременности и предотвратить возникновение как осложнений родовой деятельности, так и перинатальной патологии.

Заявляемый способ прогнозирования преждевременного разрыва плодных оболочек в сроке до 28 недель беременности апробирован на достаточном по количеству клиническом материале и может быть рекомендован к широкому использованию в акушерских стационарах и женских консультациях.

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству и гинекологии, и предназначено для прогнозирования преждевременного разрыва плодных оболочек (ПРПО) в сроке до 28 недель беременности. У женщин в сроке гестации до 28 недель в сыворотке крови определяют полиморфизм провоспалительного цитокина IL18 в позиции -137 G>C, а также концентрации в сыворотке крови провоспалительных и противовоспалительных цитокинов IL-1β, IL-8, IL-10, IFN-γ и рассчитывают вероятность преждевременного разрыва плодных оболочек в сроки до 28 недель беременности по формуле: р=1/(1+e^-z)*100%. Если р больше или равно 0,5, прогнозируют преждевременный разрыв плодных оболочек в срок до 28 недель беременности. Изобретение обеспечивает повышение точности прогнозирования ПРПО независимо от разнообразных клинических проявлений данного осложнения беременности с возможностью выбора адекватного профилактического лечения. 6 пр.

Способ прогнозирования преждевременного разрыва плодных оболочек в сроке до 28 недель беременности путем исследования биологического материала, отличающийся тем, что у женщин в сроке гестации до 28 недель в сыворотке крови определяют полиморфизм провоспалительного цитокина IL18 в позиции -137 G>C, а также концентрации в сыворотке крови провоспалительных и противовоспалительных цитокинов IL-1β, IL-8, IL-10, IFN-γ и по формуле рассчитывают вероятность преждевременного разрыва плодных оболочек в сроки до 28 недель беременности р:

р=1/(1+e^-z)*100%, где

е - константа Эйлера ≈2.718281,

z=-3,08+1,07*X₁-0,177*X₂+0,186*X₃+0,296*X₄-0,318*X₅, где

X₁ - IL18: -137 G>C - полиморфизм ИЛ 18: -137 G>C, может принимать три возможных значения: 3-генотип СС-мутантная гомозигота, 2-GC-гетерозигота, 1-генотип-GG-нормальная гомозигота,

Х₂ - IL-1β - концентрации в сыворотке крови цитокина IL-1β единица измерения - пг/мл,

Х₃ - IL-8 - концентрации в сыворотке крови цитокина IL-8, единица измерения - пг/мл,

Х₄ - IL-10 - концентрации в сыворотке крови цитокина IL-10, единица измерения - пг/мл,

Х₅ - IFN-γ - концентрации в сыворотке крови цитокина IFN-γ, единица измерения - пг/мл,

если р больше или равно 0,5, то прогнозируют преждевременный разрыв плодных оболочек в срок до 28 недель беременности.