КОМПОЗИЦИЯ ГЛАЗНЫХ КАПЕЛЬ Российский патент 2021 года по МПК A61K9/08 A61K31/522 A61K47/40 A61P27/02 A61P31/22 

Область техники

Настоящее изобретение относится к композиции глазных капель и к ее применению для диагностики и лечения глазных инфекций у животных.

Предшествующий уровень техники

Диагностика глазных инфекций у животных может быть проблематичной. Например, диагностика вируса кошачьего герпеса 1 типа (FHV-1) обычно основана на клинических признаках и на подтверждении присутствия вирусной ДНК методом ПЦР. Однако эта диагностика осложняется тем, что возможны ложные отрицательные результаты ПЦР, и тем, что положительные результаты ПЦР также могут отражать низкий уровень распространенности вируса и даже латентную инфекцию. Поэтому часто невозможно доказать, что наблюдаемые клинические признаки действительно связаны с присутствием ДНК вируса FHV-1. Точная и быстрая диагностика является важной для эффективного лечения и исключения избыточного лекарственного лечения.

Известны различные противовирусные соединения для лечения инфекций вируса герпеса. Соединение 2-амино-9-[[(1S,2R)-1,2-бис(гидроксиметил)-циклопропил]метил]-1,9-дигидро-6H-пурин-6-он (также известное как “A-5021”) является сильным ингибитором репликации вируса герпеса (Neyts et al., Antiviral Research 2001, 49, 115-120; Iwayama et al., Antimicr. Agents Chemother. 1998, 42, 1666-1670). Например, сообщалось, что A-5021 является сильным и селективным противовирусным агентом против вируса простого герпеса 1 типа (HSV-1), вируса простого герпеса 2 типа (HSV-2) и вируса варицелла-зостер (VZV) in vivo. Однако медицинское и ветеринарное применение A-5021 затрудняется его низкой растворимостью. Растворимость A-5021 до фармакологически активных концентраций сильно зависит от рН, и получение стабильного раствора, содержащего более 1 мг/мл A-5021 (или растворов A-5021 с концентрацией 0,1% масс./об.), обычно требует значений рН либо ниже 4, либо выше 10. О композициях глазных капель, имеющих значение рН около 7 и содержащих более 1 мг/мл A-5021, сообщалось в работе Itahashi et al. (Cornea 2008, 27, 334-338), однако эти композиции имеют слабую стабильность и поэтому не могут использоваться на практике. Поэтому получение стабильных фармацевтических препаратов растворенного A-5021 не является простым.

Существует потребность в улучшенных способах диагностики вирусных инфекций и в композициях, которые эффективно лечат (глазные) герпетические инфекции, которые решают по меньшей мере одну из проблем, указанных выше.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение раскрывает способ растворения A-5021 в изотонических и рН-нейтральных условиях в концентрациях 1-10 мг/мл (0,1-1% масс./об.), что позволяет использовать A-5021 в стабильных жидких композициях, таких как глазные капли. Такие глазные капли особенно полезны в лечении и диагностике глазных инфекций у животных.

В первом аспекте настоящее изобретение относится к композициям, содержащим А-5021 в концентрации по меньшей мере 0,1% масс./об., которые являются стабильными. Более конкретно, композиции стабильны в том, что А-5021 не выпадает в осадок, а более конкретно, осаждения не наблюдается в течение 1-48 часов, предпочтительно в течение 1 недели, более предпочтительно в течение 1 месяца и наиболее предпочтительно в течение 3 или более месяцев после изготовления композиции. Более конкретно, композиции согласно настоящему изобретению включают:

- по меньшей мере 0,1 % масс./об. A-5021 и

- по меньшей мере 10 % масс./об. циклодекстрина.

В частных вариантах осуществления изобретения композиция представляет собой водный раствор. В некоторых вариантах осуществления изобретения композиция представляет собой офтальмологический раствор. В конкретных вариантах осуществления изобретения циклодекстрин, используемый в композициях согласно настоящему изобретению, представляет собой гидроксипропил-бета-циклодекстрин. В некоторых вариантах композиция дополнительно содержит по меньшей мере 0,008% масс./об. тиомерсала.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к композиции, как описано выше, для применения в качестве диагностической и/или терапевтической композиции.

В некоторых вариантах осуществления композиции предназначены для применения в способе лечения глазной герпетической инфекции. В конкретных вариантах осуществления изобретения глазная инфекция, подлежащая лечению, представляет собой глазную инфекцию домашнего животного. В некоторых вариантах осуществления изобретения домашнее животное является животным семейства кошачьих. В конкретных вариантах осуществления изобретения глазная инфекция, подлежащая лечению с использованием композиций согласно настоящему изобретению, представляет собой глазную инфекцию у животного семейства кошачьих. В конкретных вариантах осуществления изобретения предусмотренные способы лечения включают введение композиции согласно изобретению в глаз два или три раза в день в течение по меньшей мере семи дней.

В некоторых вариантах осуществления изобретения композиции согласно настоящему изобретению предусмотрены для применения в способе диагностики глазной герпетической инфекции. В конкретных вариантах осуществления изобретения глазная инфекция является глазной инфекцией у домашнего животного. В конкретных вариантах осуществления изобретения домашнее животное представляет собой животное семейства кошачьих. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные способы диагностики включают введение композиции согласно изобретению в глаз два или три раза в день в течение от одного до семи дней, и определение, уменьшились или нет клинические симптомы глазной инфекции, где снижение клинических симптомов свидетельствует о том, что глазная инфекция является глазной герпетической инфекцией.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способам получения стабильных офтальмологических растворов, содержащих A-5021. В частности, способы включают в себя стадии, на которых:

a) получают раствор, содержащий по меньшей мере 10 % масс./об. циклодекстрина;

b) к этому раствору добавляют A-5021;

c) растворяют A-5021, добавленное на стадии b);

d) повторяют стадии b) и c) до получения в растворе концентрации A-5021 по меньшей мере 1 мг/мл;

e) при необходимости, добавляют по меньшей мере 0,08 мг/мл тиомерсала.

В определенных вариантах осуществления изобретения циклодекстрин на стадии a) представляет собой гидроксипропил-бета-циклодекстрин.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение будет описано со ссылкой на конкретные варианты осуществления, но настоящее изобретение ограничено только формулой изобретения, а не этими вариантами. Любые цифровые обозначения в формуле изобретения не должны толковаться как ограничивающие его объем.

Используемые в данном описании формы единственного числа включают в себя как формы единственного числа, так и формы множественного числа, если из контекста явно не следует иное.

Термины "содержащий", "содержит" и "состоит из", используемые здесь, являются синонимами терминов "включающий", "включает" или "содержащий", "содержит", и являются инклюзивными или открытыми и не исключают дополнительных, не перечисленных компонентов, элементов или стадий способа. Термины "содержащий", "содержит" и "состоит из", когда речь идет о перечисленных компонентах, элементах или стадиях способа, также включают варианты осуществления, которые "состоят из" указанных перечисленных компонентов, элементов или стадий способа.

Кроме того, термины первый, второй, третий и т.п. в описании и в формуле изобретения используются для различения подобных элементов и не обязательно для описания последовательного или хронологического порядка, если не указано иное. Следует понимать, что термины, используемые таким образом, являются взаимозаменяемыми при соответствующих обстоятельствах, и что варианты осуществления изобретения, описанные здесь, способны работать в других последовательностях, чем описанные или проиллюстрированные в данном описании.

Значения, которые используются в отношении измеряемой величины, такие как параметр, количество, временная продолжительность и т.п., предназначены для охвата отклонений +/-10% или менее, предпочтительно +/-5% или менее, более предпочтительно +/-1% или менее, еще более предпочтительно +/-0,1% или менее, от указанного значения, в той мере, в какой такие отклонения являются подходящими для выполнения в описанного изобретения. Следует понимать, что каждое значение, как используется здесь, считается также конкретно и предпочтительно раскрытым.

Раскрытие числовых диапазонов с конечными значениями включает в себя все числа и субдиапазоны, входящие в соответствующие диапазоны, а также указанные конечные значения.

Все документы, цитируемые в настоящем описании, включены в данное описание посредством ссылки во всей их полноте.

Если не указано иное, все термины, используемые в раскрытии изобретения, в том числе технические и научные термины, имеют значение, которое обычно понимается специалистом средней квалификации в области, к которой это изобретение относится. С помощью дополнительных указаний определения терминов, используемых в описании, включены для лучшего понимания данного изобретения. Термины и определения, используемые в данном документе, приводятся исключительно для помощи в понимании изобретения.

Термин “масс./об.”, используемый здесь, означает масса/объем. Если указано, что раствор содержит определенное соединение в концентрации x % масс./об., это означает, что 1 литр раствора содержит 10 г соединения.

Термин «сульфо», используемый отдельно или как часть другого заместителя, означает группу -SO₃H или ее соль.

Ссылка в данном описании на «один вариант осуществления» или «вариант осуществления» означает, что конкретный признак, структура или характеристика, описанные в связи с вариантом осуществления, включены в по меньшей мере один вариант осуществления настоящего изобретения. Таким образом, фразы "в одном варианте" или "в варианте" в различных местах по всему данному описанию не обязательно относятся к одному и тому же варианту. Кроме того, конкретные признаки, структуры или характеристики могут быть объединены любым подходящим способом, как должно быть очевидно специалистам в данной области техники из этого описания, в одном или нескольких вариантах осуществления. Кроме того, в то время как некоторые варианты осуществления, описанные здесь, включают некоторые признаки, но не другие признаки, включенные в другие варианты осуществления, комбинации признаков различных вариантов осуществления находятся в пределах объема настоящего изобретения и образуют различные варианты осуществления, как будет понятно специалистам в данной области. Например, в прилагаемой формуле изобретения любой из признаков заявленных вариантов изобретения может быть использован в любой комбинации.

Настоящее изобретение предлагает жидкие композиции, содержащие соединение A-5021 (т.e. 2-амино-9-[[(1S,2R)-1,2-бис(гидроксиметил)циклопропил]-метил]-1,9-дигидро-6H-пурин-6-он), представленное формулой (I):

В отличие от других нуклеозидных аналогов соединение А-5021 плохо растворимо в воде. Хотя, учитывая структурные сходства между A-5021 и известным лекарством против герпеса пенцикловиром (т.е. 2-амино-9-[4-гидрокси-3-(гидроксиметил)бутил]-3Н-пурин-6-он), вполне вероятно, что оно может быть приготовлено в виде композиции гидрата натриевой соли, такая композиция является сильно щелочной и, следовательно, не совместима с применениями, когда требуется физиологическая композиция.

Таким образом, конкретные применения A-5021 были затруднены из-за невозможности получения достаточно высокой концентрации активного ингредиента в физиологически совместимой жидкой композиции.

Например, подходящая композиция глазных капель должна иметь нейтральное рН (т.е. рН 7) или близкое к нейтральному рН. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что только циклодекстрины, такие как гидроксипропил-бета-циклодекстрин (Kleptose® HPB), пригодны для физиологических жидких композиций A-5021, поскольку только использование таких агентов приводит к получению раствора с концентрацией от 0,1% до 1% масс./об., который хорошо переносится здоровыми глазами и глазами, инфицированными вирусом герпеса (см. пример а1). Кроме того, композиция должна быть стабильной, что позволяет ее использовать повторно с интервалом в несколько часов, предпочтительно в течение нескольких дней или недель, без образования осадков в композиции.

Соответственно, в первом аспекте настоящее изобретение относится к композиции, содержащей

- по меньшей мере 0,1 % масс./об. A-5021; и

- циклодекстрин.

Получение физиологически приемлемого раствора активного ингредиента в концентрации 0,1% масс./об. или более позволяет приготовить его композиции в различных формах, таких как водные растворы (которые могут быть применены в виде спреев или капель), водные гели и т.п.

В определенных вариантах осуществления изобретения композиция представляет собой глазной раствор.

В определенных вариантах осуществления изобретения композиция дополнительно содержит один или более растворителей, например, воду. В некоторых вариантах осуществления композиция представляет собой водный раствор. Термин "водный", используемый здесь, означает, что вода составляет более 50 объемных процентов растворителя.

В определенных вариантах осуществления изобретения композиция согласно настоящему изобретению состоит из растворителя, по меньшей мере 0,1% масс./об. A-5021 и циклодекстрина. В определенных вариантах осуществления композиция согласно настоящему изобретению состоит из по меньшей мере 0,1% масс./об. A-5021 и циклодекстрина.

Концентрация А-5021 0,1% масс./об. обеспечивает минимальный достаточный терапевтический эффект композиции для лечения инфекций вируса герпеса у домашних животных или других видов животных, больших, чем грызуны. Тем не менее, в определенных вариантах осуществления изобретения более высокая концентрация А-5021 может привести к усилению терапевтического эффекта композиции. Соответственно, в определенных вариантах осуществления композиция содержит по меньшей мере 0,10%, 0,15%, 0,2%, 0,25%, 0,3%, 0,35%, 0,4%, 0,45%, 0,5%, 0,55%, 0,6%, 0,65%, 0,7%, 0,75%, 0,8%, 0,85%, 0,9%, 0,95% или 1% A-5021 (проценты представляют собой % масс./об.).

Применение циклодекстрина позволяет получить стабильные композиции, содержащие A-5021 в концентрации по меньшей мере 0,1% масс./об., например, 0,2% масс./об. или 0,5% масс./об., которые хорошо переносятся при использовании по назначению, когда требуются физиологически приемлемые растворы, такому как введение в глаз и/или в рану. Более высокая концентрация циклодекстрина обычно позволяет получить более высокую концентрацию A-5021. В определенных вариантах осуществления изобретения композиция содержит по меньшей мере 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 99% циклодекстрина (проценты представляют собой % масс./об.).

Циклодекстрин может включать один или более из бета-циклодекстрина, гамма-циклодекстрина или альфа-циклодекстрина. В определенных вариантах осуществления циклодекстрин содержит бета-циклодекстрин. В других вариантах осуществления циклодекстрин включает модифицированный или замещенный циклодекстрин. Например, циклодекстрин может содержать один или более заместителей, выбранных из гидроксипропила (например 2-гидроксипропила), сульфобутила и метила. В определенных вариантах осуществления циклодекстрин представляет собой гидроксипропил(бета-)циклодекстрин (например Kleptose® HPB), более конкретно, 2-гидроксипропил-(бета-)циклодекстрин. Гидроксипропил-бета-циклодекстрин значительно повышает растворимость A-5021 и хорошо переносится при введении в глаз. В определенных вариантах осуществления изобретения циклодекстрин содержит метил-циклодекстрин, например, рандомизированно метилированный бета-циклодекстрин. В определенных вариантах осуществления циклодекстрин представляет собой сульфобутилэфир-циклодекстрин, например, сульфобутилэфир-бета-циклодекстрин (например Captisol®).

В определенных вариантах осуществления изобретения композиции согласно настоящему изобретению дополнительно содержат один или более консервантов. Действительно, многодозовые фармацевтические композиции обычно содержат консерванты, что позволяет использовать их многократно в течение суток и/или нескольких дней после открытия упаковки. Однако такие консерванты не должны нарушать физиологическую переносимость композиции, обеспечивая при этом стабильность композиции в течение продолжительного периода времени.

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что тиомерсал является наиболее эффективным в испытаниях по консервирующей эффективности, при этом не вызывая неблагоприятных последствий. Соответственно, в определенных вариантах осуществления изобретения композиция согласно настоящему изобретению дополнительно содержит тиомерсал (т.е. (2-карбоксилатофенил)сульфанилэтилртуть натрия; также известный как тимеросал), который представлен соединением формулы (II):

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что тиомерсал в концентрации 0,005% масс./об. или более (например 0008%, 0,01% или 0,02% масс./об.) является особенно эффективным для противомикробного консервирования (см. пример а1). Соответственно, в определенных вариантах осуществления изобретения композиция согласно настоящему изобретению содержит по меньшей мере 0005, 0008, 0,01, 0,015 или 0,02% масс./об. тиомерсала.

В определенных вариантах осуществления изобретения композиция содержит по меньшей мере 0,01% масс./об. тиомерсала и по меньшей мере 0,2% масс./об. А-5021. Максимальная допустимая концентрация тиомерсала регулируется в различных странах. Таким образом, концентрация тиомерсала составляет предпочтительно не более 0,02% масс./об., например, 0,01, 0,015, 0,018, или 0,02% масс./об.

Для того, чтобы можно было использовать композиции согласно настоящему изобретению в случаях, когда требуется строгая физиологическая переносимость, например, в офтальмологических применениях, рН композиции должно быть в пределах диапазона глазного комфорта. Соответственно, рН композиций согласно настоящему изобретению предпочтительно находится в диапазоне между 5 и 8,5, в частности от 6 до 8 и, в частности, от 6,4 и 7,8, наиболее предпочтительно между 6,6 и 7,4. В определенных вариантах осуществления изобретения композиции согласно настоящему изобретению могут дополнительно содержать один или более буферных агентов, таких как фосфатный буфер, например фосфат натрия. В определенных вариантах осуществления композиции согласно настоящему изобретению могут дополнительно содержать один или более регуляторов pH, таких как гидроксид натрия, соляная кислота или их комбинации.

Авторами настоящего изобретения было обнаружено, что использование циклодекстрина не требует использования солюбилизирующих агентов с повышенным рН.

Кроме того, физиологическая переносимость композиций согласно настоящему изобретению предполагает минимальное отличие от локального осмотического давления. В определенных вариантах осуществления, когда композиции предназначены для офтальмологического применения, композиции предпочтительно имеют осмотическое давление или осмолярность, которые равны или почти равны этим характеристикам слезной жидкости (т.е. приблизительно 300 мОсм/л), предпочтительно от 200 до 400 мОсм/л. В некоторых вариантах осуществления композиции согласно настоящему изобретению могут дополнительно содержать один или более агентов, регулирующих тоничность, например, выбранных из группы, состоящей из декстрозы, глицерина, маннита, хлорида калия, хлорида натрия и фосфатных буферов. Агенты, регулирующие тоничность, могут быть использованы для изменения осмотического давления или осмолярности композиции.

Специалисту в данной области будет дополнительно понятно, что композиции согласно настоящему изобретению предпочтительно являются стерильными и не содержащими экзогенных частиц.

Таким образом, как указано выше, композиции согласно настоящему изобретению могут содержать, в дополнение к активному ингредиенту A-5021 и циклодекстрину, один или более консервантов и/или буферных агентов. В определенных вариантах осуществления изобретения композиции согласно настоящему изобретению состоят по существу из активного ингредиента и циклодекстрина, и водного раствора, такого как буфер. В определенных вариантах осуществления изобретения композиции не содержат солюбилизирующего агента с повышенным рН.

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что композиции согласно настоящему изобретению особенно полезны для диагностики и лечения герпетических инфекций. Соответственно, в дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к композиции, как описано выше, для применения в медицине, в частности, для применения в качестве терапевтической и/или диагностической композиции.

В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к композиции, как описано выше, для применения в способе лечения герпетической инфекции. В определенных вариантах осуществления герпетическая инфекция является глазной герпетической инфекцией. Глазные инфекции вируса герпеса были отмечены у различных животных, включая кошек (например, примеры b1, b2 и b3 ниже), собак (например, Ledbetter et al., Veterinary Microbiology 2009, 138, 98-105) и лошадей (например, Kershaw et al., Virus Research 2001, 80, 93-99). Соответственно, в определенных вариантах осуществления изобретения инфекция является инфекцией у животного, например, выбранного из семейства кошачьих, псовых и лошадиных.

В определенных вариантах осуществления изобретения композиции предусмотрены для лечения инфекции у домашнего животного, в частности, у животного семейства кошачьих и, еще более конкретно, у кошки. Таким образом, в определенных вариантах осуществления изобретения инфекция является инфекцией вируса кошачьего герпеса. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что композиции согласно настоящему изобретению очень эффективно лечат глазные герпетические инфекции у домашних животных, таких как животные семейства кошачьих, например, кошки.

Кроме того, авторы изобретения обнаружили, что лечение герпетических глазных инфекций с использованием композиций согласно настоящему изобретению является особенно успешным, когда композицию вводят в (инфицированный) глаз два или три раза в день. Оптимальная частота применения может зависеть от таких факторов, как степень тяжести инфекции и концентрация A-5021 в композиции. В определенных вариантах осуществления изобретения композиции, содержащие приблизительно 0,5% масс./об. А-5021, вводят два раза в день. В определенных вариантах осуществления композиции с более низкими концентрациями, например, приблизительно 0,2% масс./об., вводят три раза в день. В определенных вариантах осуществления изобретения композицию вводят в (инфицированный) глаз два или три раза в день в течение по меньшей мере одной, двух, трех или четырех недель. В определенных вариантах осуществления лечение продолжают 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более дней после исчезновения клинических симптомов.

Композиции согласно изобретению для применения в лечении глазных инфекций, как правило, вводят непосредственно в глаз, в частности, наносят на роговицу. Тем не менее, также предусмотрены другие средства введения, например, внутриглазная инъекция.

Вирус кошачьего герпеса является одним из наиболее распространенных инфекционных заболеваний у кошек. Соответственно, настоящее изобретение обеспечивает терапевтические композиции для применения в лечении глазных инфекций кошек. В определенных вариантах осуществления изобретения схема лечения является такой, как описано выше. Таким образом, в конкретных вариантах осуществления схема лечения композицией, содержащей от 0,1 до 1% масс./об. А-5021, включает два или три введения в день. Как правило, глазные инфекции характеризуются одним или более симптомов, таких как глазные выделения, конъюнктивит, кератит, дендритные язвы, географические язвы, секвестр роговицы, отек роговицы, васкуляризация, слепота, эозинофильный конъюнктивит, эозинофильный кератит, стромальный кератит, увеит и сухость глаз. Глазным симптомам обычно предшествует история респираторных признаков.

Кроме того, авторы настоящего изобретения обнаружили, что композиции согласно настоящему изобретению исключительно хорошо переносятся животными, страдающими от клинических симптомов глазной инфекции, которые увеличивают чувствительность в глазах, таких как выделения из глаз, конъюнктивит, кератит, дендритные язвы, географические язвы, секвестр роговицы, отек роговицы, васкуляризация, слепота, эозинофильный конъюнктивит, эозинофильный кератит, стромальный кератит, увеит, сухость глаз или другие клинические симптомы. Таким образом, в конкретных вариантах осуществления композиции согласно настоящему изобретению предназначены для применения в лечении глазных инфекций, характеризующихся одним или более симптомов, описанных выше.

В определенных вариантах осуществления композиции согласно настоящему изобретению используют для лечения глазных инфекций, которые были диагностированы как инфекции вируса герпеса. Например, дендритные и географические язвы (кошачий язвенный кератит) считаются патогномоничным клиническим симптомом FHV-1. Таким образом, в определенных вариантах осуществления изобретения композиции используются для лечения глазной инфекции у кошек, страдающих от дендритной или географической язвы.

Кроме того, как описано выше, наличие герпетической инфекции можно определить вирусологически. Таким образом, в определенных вариантах осуществления изобретения композиции используются для лечения глазной инфекции у кошачьих, у которых диагностировали заражение вирусом кошачьего герпеса 1 типа (FHV-1).

В соответствии с вышеизложенным настоящее изобретение относится к применению композиций, как описано выше, для изготовления лекарственного средства для лечения глазной инфекции, более конкретно, глазной герпетической инфекции, как описано здесь. Кроме того, настоящее изобретение относится к способам лечения глазной инфекции, включающим введение композиции, как описано выше в (инфицированный) глаз, в частности, два или три раза в день, как описано выше.

Было замечено, что лечение глазных инфекций вируса герпеса композициями согласно настоящему изобретению приводит к значительному улучшению клинических симптомов в течение одной недели и даже через один или два дня. С учетом этой удивительной эффективности композиции согласно настоящему изобретению дополнительно пригодны в способах диагностики глазных инфекций, более конкретно, глазных инфекций у кошачьих. Более конкретно, авторы изобретения обнаружили, что композиции согласно настоящему изобретению могут быть использованы в качестве диагностического средства для подтверждения или исключения вируса кошачьего герпеса 1 типа (FHV-1) в качестве причины глазных инфекций у кошачьих.

В самом деле, глазные инфекции вируса герпеса, как правило, приводят к разнообразию различных и часто неспецифичных клинических симптомов, среди которых глазные выделения, конъюнктивит, кератит, секвестр роговицы, эозинофильный конъюнктивит, эозинофильный кератит, стромальный кератит, увеит и сухость глаз. В случае глазного заболевания у кошачьих, другие вирусные, бактериальные и грибковые патогены могут вызвать подобное клиническое заболевание. Более конкретно, было описано, что причиной одного или более из этих клинических глазных симптомов могут быть: кошачий кальцивирус, вирус иммунодефицита кошачьих, вирус лейкемии кошачьих, Chlamydophila felis, Mycoplasma spp. (M. felis и M. gatae) и даже иммуноопосредованные заболевания.

Следовательно, клинический диагноз FHV-1 является сложной задачей и часто требуется лабораторное подтверждение. Тем не менее, большинство вирусологических способов обнаружения FHV-1 относительно нечувствительно и часто является источником ложноотрицательных и ложноположительных результатов. В настоящее время полимеразная цепная реакция (ПЦР) считается наиболее чувствительным способом обнаружения ДНК FHV-1 в тканях глаза. Однако результаты ПЦР испытаний оказываются противоречивыми, в результате чего многие ветеринарные офтальмологи отказываются от ПЦР испытания в качестве средства диагностики и полагаются только на историю болезни и осмотр пациента.

Поскольку А-5021 является высоко специфичным лекарством против герпеса, которое является неэффективным против бактериальных и грибковых инфекций, и других вирусов, отличных от вирусов герпеса (например, FHV-1), которые могут вызвать подобные симптомы (например, против кошачьего кальцивируса, вируса лейкоза кошачьих и вируса иммунодефицита кошачьих), быстрый ответ на лечение композицией согласно настоящему изобретению позволяет использовать ее в качестве диагностического средства, более конкретно, в качестве диагностического лечебного средства. Поэтому, в случае глазных инфекций у кошачьих неизвестной этиологии, ответ на лечение с помощью композиции согласно настоящему изобретению позволяет поставить диагноз глазной инфекции первой линии, в частности, позволяет определить, является ли инфекция герпетической или негерпетической.

Соответственно, настоящее изобретение дополнительно относится к композициям, как описано выше, для применения в способе диагностики глазной инфекции, в частности, глазной инфекции у домашнего животного. Более конкретно, способы диагностики, предусмотренные в данном контексте, включают стадии, на которых а) вводят композицию согласно настоящему изобретению, имеющую состав и в дозе, как описано выше, и б) определяют в течение определенного периода, улучшились или нет клинические симптомы, где улучшение клинических симптомов является показателем наличия инфекции вируса герпеса. В дополнительных конкретных вариантах осуществления способы согласно настоящему изобретению включают введение композиции согласно изобретению ежедневно и определение в течение от 1 до 7 дней, например в течение 1-2 дней, в течение 2-4 дней или в течение 5-7 дней, есть ли улучшение клинических симптомов инфекции. В определенных вариантах осуществления изобретения, с учетом эффективности лечения, способы включают определение того, есть ли улучшение в течение 1-4 или даже 1-2 дней.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к способам получения растворимой и стабильной композиции А-5021 с концентрацией по меньшей мере 1 мг/мл. В самом деле, как описано выше, авторы настоящего изобретения определили способы получения стабильных растворов с повышенной концентрацией этого активного ингредиента, которые совместимы с прямым введением в глаз и/или в пораненную ткань. В частности, композиции согласно настоящему изобретению являются стабильными в том, что они не выпадают в осадок, что позволяет повторно использовать одну и ту же дозу вещества в течение от нескольких дней до нескольких недель.

В частности, способы согласно настоящему изобретению включают стадии:

a) получения раствора, содержащего по меньшей мере 10% масс./об. циклодекстрина, например, гидроксипропил-бета-циклодекстрина;

b) добавления к этому раствору A-5021;

c) растворения A-5021, добавленного на стадии b);

d) повторения стадий b) и c) до получения концентрации A-5021 в растворе по меньшей мере 1 мг/мл;

e) при необходимости, добавления по меньшей мере 0,08 мг/мл тиомарсала.

В определенных вариантах осуществления изобретения раствор, полученный на стадии а), представляет собой водный раствор. Следует иметь в виду, что повторение стадий b) и c) необходимо только в том случае, если концентрация 1 мг/мл не была достигнута после первого выполнения стадий b) и c). В определенных вариантах осуществления изобретения А-5021 добавляют в несколько стадий, например в 2-5 стадий.

Стадию растворения A-5021, как правило, осуществляют путем смешивания, например с использованием водоворота. В определенных вариантах осуществления изобретения стадия с) включает нагревание смеси, полученной на стадии b), предпочтительно до температуры между 45 и 60°C. Специалисту будет понятно, что эту стадию можно осуществлять без необходимости конкретного действия, особенно, когда добавляют ограниченное количество активного ингредиента.

Как указано выше, авторами настоящего изобретения было обнаружено, что использование циклодекстрина не требует использования солюбилизирующих агентов с повышенным рН. Таким образом, в определенных вариантах осуществления изобретения способы согласно изобретению не включают добавления растворителя, имеющего рН более 7,9.

Следующие неограничивающие примеры иллюстрируют настоящее изобретение.

Примеры

Следующие примеры приведены с целью иллюстрации настоящего изобретения и никоим образом не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения, и их в коей мере не следует интерпретировать как ограничивающие объем настоящего изобретения.

a) Растворение A-5021 до фармакологически активных концентраций

Пример a1 – Испытания на растворение

Для определения растворимости A-5021 (т.e. 2-амино-9-[[(1S,2R)-1,2-бис(гидроксиметил)циклопропил]метил]-1,9-дигидро-6H-пурин-6-она) сначала была проведена первая серия испытаний из 33 экспериментов с суспензией. В рамках этих экспериментов было рассмотрено 33 различных системы (отличавшихся с точки зрения буферов, сорастворителей, солюбилизирующих агентов). Использовали следующие 6 буферов: буфер HCl (pH 2), фосфатный буфер (pH 6,8 и 7,4), трис(гидроксиметил)аминоэтановый буфер (pH 9), карбонат натрия/бикарбонат натрия (pH 10,8) и дигидрофосфат калия (pH 12). В качестве сорастворителей использовали диметилсульфоксид (DMSO), диметилацетамид (DMA), N-метилпирролидон (NMP), этанол (EtOH) и пропиленгликоль с различными концентрациями. Используемыми солюбилизирующими агентами были пропиленгликоль, глицерин, солютол HS 15, полисорбат 80, бета-циклодекстрин, гидроксипропил-бета-циклодекстрин (Kleptose® HPB), кремофор EL, кремофор RH 60, полиэтиленгликоль (ПЭГ) 300, ПЭГ 400 и сульфобутилэфир-бета-циклодекстрин (например Captisol®). Растворимость определяли путем фильтрации суспензий через 24 часа уравновешивания. Концентрацию A-5021 в фильтратах анализировали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), из результатов которой рассчитывали соответствующую растворимость.

Было обнаружено, что добавление органического сорастворителя в растворы, буферизованные до pH 12, не улучшило растворимость. Однако добавление солюбизирующих агентов, таких как гидроксипропил-β-циклодекстрин, Captisol® и пропиленгликоль (использованных в концентрации до 80 об.%), в буферные системы с pH более 11, действительно улучшило растворимость. Наибольшая растворимость A-5021 (8,64 мг/мл) была получена в 80 об.% пропиленгликоля в 20 об.% буфера (pH 11,3).

На основании этих результатов было проведено 10 дополнительных экспериментов на растворимость с рассмотрением различных значений pH, чтобы определить влияние рН на профиль растворимости A-5021. Были рассмотрены две различные буферные системы, сорастворители и солюбилизирующие агенты с фокусом на системы, которые дали наилучшие результаты, описанные выше. Растворимость снова определяли путем фильтрации суспензий через 24 часа уравновешивания. Концентрацию A-5021 в фильтратах анализировали с помощью в ВЭЖХ, из результатов которой рассчитывали соответствующую растворимость. В целом, не было обнаружено больших значений растворимости, чем описано выше. При использовании кислого рН (то есть рН 2,8) по сравнению с ранее используемым рН 11,3 растворимость при комнатной температуре A-5021 немного уменьшается от 8,64 мг/мл до 8,5 мг/мл. Близко к нейтральному значению рН буферной системы (80% об./об. пропиленгликоля и 20% об./об. фосфатного буфера при рН 7,4), что представляет интерес для разработки глазных растворов (с учетом местного применения A-5021 для глаз, инфицированных вирусом герпеса), можно было растворить A-5021 в концентрации 8,18 мг/мл. При использовании 2-гидроксипропил-бета-циклодекстрина (HPBC) в качестве солюбилизирующего агента вместо пропиленгликоля растворимость A-5021 уменьшилась по сравнению с пропиленгликолевыми буферными системами. При использовании 60% об./об. HCl-буфера и 40% масс./об. HPBC растворимость A-5021 составила 6,76 мг/мл и 4,91 мг/мл при рН 2,2 и рН 7, соответственно. Дальнейшее снижение растворимости A-5021 отмечалось, когда в качестве солюбилизирующего агента использовали captisol® (30% масс./об. captisol® и 70% масс./об. буфера). При дальнейшем увеличении количества пропиленгликоля до 5,7-33,34% об./об. в системе, которая уже содержит 33,33-40% масс./об./об. HPBC и 33,34-54,3% об./об. буфера, наблюдалось снижение растворимости A- 5021 (при рН 7,0-7,4 растворимость A-5021 составила 3,28-4,05 мг/мл).

На основании указанных выше результатов и для получения композиции A-5021 с фармакологически активными концентрациями (предпочтительно приблизительно 0,5 мг/мл) было решено исследовать дополнительные солюбилизирующие агенты и/или поддержать высокие количества пропиленгликоля при нейтральном рН. В общей сложности было испытано 28 кандидатов носителей для растворения A-5021 при концентрации 5 мг/мл при нейтральном рН: пропиленгликоль в концентрации от 20% до 80% масс./об., гликофурол в концентрации от 5% до 50% масс./об., глицерин в концентрации от 15% до 50% масс./об., 15% масс./об. глицерина + 15 масс./об. гликофурола, 25% масс./об. пропиленгликоля + 25% масс./об. гликофурола, пропиленгликоль (диапазон: 15%-60% масс./об.) + глицерин (диапазон: 5%-15% масс./об.), 25% масс./об. Kleptose® HPB + 25% пропиленгликоля, кремофор RH 40, кремофор EL, солютол HS 15, 40-50% Kleptose® HPB, миглиол 812N, жидкий парафин, поливинилпирролидон K12.

Только четыре носителя позволили растворить A-5021 с концентрацией 5 мг/мл (0,5 % масс./об.) при рН, близком к нейтральному (pH в диапазоне 6,98 – 7,11). Этими носителями были следующие (% масс./об. в воде):

(i) 80% масс./об. пропиленгликоля;

(ii) 50% масс./об. Kleptose® HPB;

(iii) 60% масс./об. пропиленгликоля + 15% масс./об. глицерина;

(iv) 60% масс./об. пропиленгликоля + 10% масс./об. глицерина.

Осмотическое давление пропиленгликоля, содержащегося в композиции/растворе, показало гипертоничность (высокую осмолярность, нефизиологическую). Наблюдались значения от 6925 мОсм до 11725 мОсм, что указывает на необходимость проверить местную переносимость.

При тестировании на глазах здоровых кроликов, мышей и кошек местная переносимость растворов, содержащих пропиленгликоль, была хорошей. Однако, когда офтальмологические растворы, содержащие пропиленгликоль, закапывали в глаза мышей и кошек, инфицированные вирусом герпеса, наблюдалось тяжелая непереносимость. Наблюдаемые клинические проявления местной непереносимости сразу после введения дозы включали следующие: закрытие глаз/зажмуривание (у кошек и мышей), вокализация (у кошек и мышей), слюнотечение (у кошек), скребущие движения (у кошек), царапание глаз (у кошек) и тряска головой (у кошек и мышей). Тяжесть симптомов колебалась от слабой до сильной. Симптомы были аналогичными у животных, обработанных носителями (i), (iii) или (iv) (растворы на основе пропиленгликоля с глицерином или без глицерина, не содержащие A-5021, и растворы на основе пропиленгликоля с глицерином или без глицерина, содержащие A-5021), указывая на то, что непереносимость не была напрямую связана с наличием A-5021. Следовательно, Kleptose® HPB (гидроксипропил-бета-циклодекстрин) является единственным солюбилизирующим агентом, который подходит для приготовления офтальмологических растворов, содержащих А-5021 в концентрации от 0,1% до 1% масс./об., например, от 0,2% до 0,5% масс./об.; pH раствора, содержащего Kleptose® HPB в концентрации от 0,2% до 0,5% масс./об., составило 6,0 – 8,0 с осмотическим давлением приблизительно 350 мОсм.

Поскольку композиция на основе Kleptose® HPB является многофункциональным раствором для офтальмологического применения для глаз, инфицированным герпесом, композиция на основе Kleptose® HPB должна быть проверена на эффективность сохранности против микробов. С этой целью были протестированы серии из девяти композиций на основе Kleptose® HPB с различными антимикробными консервантами:

- без консерванта;

- 0,01% хлорида бензалкония (BAK);

- 0,02% BAK;

- 0,01% BAK + 0,01% этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA);

- 0,008% тиомерсала;

- 0,01% тиомерсала;

- 0,02% тиомерсала;

- 1,5% бензилового спирта;

- 0,15% метил-пара-гидроксибензоата (PHBM) + 0,05% пропил-пара-гидроксибензоата (PHBP).

Были проведены испытания эффективности консервантов (критерии эффективности основаны на критериях Европейской Фармакопеи). Композиции заражали S. aureus, P. aeruginosa, C. albicans, A. brasiliensis (т.е. дрожжами, плесенью и бактериями) и тестировали в различные моменты времени после заражения (через 6 часов, 24 часа, 7 дней, 14 дней и 28 дней). Композиция A-5021 на основе Kleptose® HPB без консерванта не соответствовала критериям А или B из Европейской Фармакопеи, что оправдывает включение антимикробного консерванта. Композиции A-5021 на основе Kleptose® HPB с 0,01% - 0,02% BAK или 1,5% бензилового спирта, или 0,15% PHBM + 0,05% PHBP не соответствовали критериям A или B. Композиция A-5021 на основе Kleptose® HPB с 0,01% BAK + 0,01% EDTA не соответствовала критериям А или B. Таким образом, из девяти испытанных композиций только три композиции, содержащие тиомерсал (с концентрацией 0,008 % масс./об., 0,01 % масс./об. и 0,02 % масс./об.) были определены как достаточно эффективные для растворов A-5021 на основе Kleptose® HPB (на 0,2% и 0,5% масс./об.). Высокая концентрация Kleptose® HPB (т.е. гидроксипропил-бета-циклодекстрина) может быть ответственной за ингибирование других консервантов.

Таким образом, в качестве глазных продуктов для лечения заболеваний глаз у домашних животных, инфицированных герпесом, остались следующие композиции A-5021, так как эти композиции совместимы с местным закапыванием в глаза: 0,2-0,5% масс./об. A-5021 в 20-50% масс./об. Kleptose® HPB с использованием 0008-0,02% масс./об. тиомерсала в качестве антимикробного консерванта (добавление воды до нужного объема).

Пример a2 – Композиция с концентрацией A-5021 0,5% масс./об. (композиция A)

В общей сложности растворяли 5 мг/мл А-5021 в растворе 50% масс./об. Kleptose® HPB в воде, затем перемешивали и нагревали до температуры между 45 и 60°C. После этого никакой кристаллизации не наблюдалось в течение нескольких дней после хранения при комнатной температуре и при температуре от 2°С до 8°C. Композиция имела осмотическое давление 350 мОсм и рН 7,03.

В качестве консерванта добавляли тиомерсал в концентрации 0,01% масс./об. Было проведено испытание эффективности консерванта в соответствии с общим способом Европейской фармакопеи. Отбор проб производили через 6 часов, 7 дней, 14 дней и 28 дней после заражения. Было отмечено снижение 3,2 log₁₀ в содержании S. aureus и снижение 1,5 log₁₀ в содержании P. aeruginosa через 6 часов после заражения. После этого восстановления S. aureus и P. aeruginosa не наблюдалось. Ни в один из моментов времени отбора проб не наблюдалось восстановления S. aureus и P. aeruginosa (через 7 дней, 14 дней и 28 дней после заражения).

Оценивали стабильность композиции, содержащей 0,5% масс./об. A-5021 и 0,01% масс./об. тиомерсала в 50% масс./об. Kleptose® HPB, с использованием ускоренного теста на стабильность, в котором композицию выдерживали 3 месяца при 40°C и 75% относительной влажности. Не наблюдалось никакого снижения относительно теоретического содержания A-5021. Не наблюдалось признаков продуктов разложения выше 0,3% порогового значения. Содержание тиомерсала считали приемлемым по отношению к различиям в способах анализа и изготовления.

Пример a3 - Композиция с концентрацией A-5021 0,2% масс./об. (композиция B)

В общей сложности растворяли 2 мг/мл А-5021 в 20% масс./об. Kleptose® HPB (добавляли воду до нужного объема), затем перемешивали и нагревали до температуры между 45 и 55°C. Добавляли тиомерсал в концентрации 0,01% масс./об. Композиция имела рН 6,4. Было проведено испытание эффективности консерванта в соответствии с общим способом Европейской фармакопеи. Было отмечено снижение 2,1 log₁₀ в содержании S. aureus через 6 часов после заражения. После этого восстановления S. aureus не наблюдалось (последний отбор проб был через 7 дней после заражения). Было отмечено снижение 1,7 log₁₀ в содержании P. aeruginosa через 6 часов после заражения. После этого восстановления P. aeruginosa не наблюдалось (последний отбор проб был через 7 дней после заражения).

Не наблюдалось восстановления C. albicans или A. Brasiliensis через 7 дней, 14 дней и 28 дней после заражения. Испытание эффективности консервантов было остановлено на 7 день после заражения, так как терапевтическая эффективность композиции была продемонстрирована уже на 7 день.

Оценивали стабильность раствора, содержащего 0,2% масс./об. A-5021, в 20% масс./об. Kleptose® HPB и 0,01% масс./об. тиомерсала с использованием ускоренного теста на стабильность, в котором композицию выдерживали 1 месяц при 40°C и 75% относительной влажности. Не наблюдалось никакого снижения относительно теоретического содержания A-5021. Не наблюдалось признаков продуктов разложения выше 0,3% порогового значения.

b) Лечение герпетических инфекций

Для лечения различных кошек с клиническими признаками, вызванными острой инфекцией FHV-1, использовали офтальмологические растворы композиций A и B, как описано выше.

Пример b1 – лечение 3 раза в день композицией, содержащей 0,5% масс./об. A-5021

Кот породы Шартрез возрастом 15 лет с историей заболевания герпесом глаз FHV-1 (с повторениями) был представлен ветеринарному офтальмологу после новой фазы острой герпетической инфекции. Был поражен правый глаз и были отмечены различные дендритные язвы (с помощью окрашивания флуоресцеином и визуализации в кобальтово-синем свете). Кота обрабатывали три раза в день композицией А, как описано выше. После 10 дней лечения глаз кошки был снова показан ветеринарному офтальмологу. Правый глаз был полностью открыт. Хотя флуоресцеиновый тест показал две маленькие оставшиеся эпителиальные ветви, язвы почти полностью зажили. Кроме того, лечение очень хорошо переносилось, так как обработка не вызывает боль, дискомфорт или раздражение. Лечение продолжали в течение 10 дней, после чего кот полностью выздоровел.

Пример b2 – лечение 3 раза в день композицией, содержащей 0,2% масс./об. A-5021

Помет из двух 5-недельных европейских короткошерстных котят (одна самка и один самец) были заражены FHV-1. FHV-1 является типичным заболеванием у новорожденных котят, приводящим к респираторным заболеваниям, лихорадке, чиханию или кашлю, выделениям из носа и часто к симблефарону (т.е. частичному или полному прилипанию глазной конъюнктивы век к бульбарной конъюнктиве глазного яблока). При рождении весь помет котят до некоторой степени заражается.

Двое котят были представлены ветеринарному офтальмологу; с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции) был подтвержден положительный результат на FHV-1 на образцах мазков с конъюнктивы. На левом глазу котенка-самца имелись признаки типичного FHV-1-индуцированного конъюнктивита. Также были подозрения на дендритные язвы, но их подтверждение было затруднено из-за отека конъюнктивы.

Кошечка была заражена еще более серьезно, имелся отек роговицы на левом глазу и серьезный симблефарон на правом глазу, с третьего века, охватывающий весь правый глаз. Обоих котят обрабатывали три раза в день офтальмологическим раствором композиции B, как описано выше. Через семь дней глазных инстилляций котенок был полностью исцелен, а кошечка уже не была инфицирована, как было подтверждено отрицательным результатом ПЦР на FHV-1 (мазки с конъюнктивы).

Пример b3 – Лечение композицией, содержащей 0,2% масс./об. A-5021, два раза в день

6-недельный Европейский короткошерстный котенок-самец был представлен ветеринарному офтальмологу с респираторными симптомами. Левый глаз оставался закрытым, имелись отек роговицы и маленькие кровеносные сосуды, которые сформировали небольшую гранулему роговицы. Котенку был поставлен диагноз вируса герпеса. Котенка обрабатывали дважды в день офтальмологической композицией B, как описано выше, и его состояние улучшилось в течение 7 дней лечения: левый глаз был более открытым, уменьшилась гранулема роговицы и втянулись кровеносные сосуды. Остался некоторый остаточный отек. Лечение продолжали с той же частотой два раза в день до тех пор, пока котенок не был полностью исцелен.

c) Диагностика и лечение герпетических инфекций

Пример c1

Европейский короткошерстный кот в возрасте 1 года был представлен ветеринарному офтальмологу со следующими клиническими признаками: чихание и серьезный конъюнктивит правого глаза. Коту был поставлен диагноз интерстициальный кератит. Язв роговицы или дендритных язв не наблюдалось, поэтому нельзя было поставить определенный клинический диагноз FHV-1. Тем не менее, предположили, что причиной может быть FHV-1, и взяли мазки с конъюнктивы для ПЦР анализа на FHV-1. Результаты ПЦР на FHV-1 были отрицательными. Следовательно, вирусологический диагноз FHV-1 не мог быть поставлен. Было начато лечение с помощью офтальмологической композиции А, как описано выше; никаких других лекарств или кортикостероидов не вводили. Было отмечено заметное улучшение в первую неделю лечения. После двух недель лечения были хорошо видны роговица и передняя камера глаза. Воспалительная реакция, которая наблюдалась на первом приеме, регрессировала. Таким образом, диагноз FHV-1 заболевания может быть основан на успешном лечении офтальмологическим раствором A-5021 с заметным улучшением в течение первой недели лечения. Это было подтверждено дальнейшим успешным лечением и клиническим улучшением, отмеченным на 16 день после начала лечения. Кот был снова осмотрен через 103 дня после лечения, было обнаружено, что роговица является спокойной и не имеет никаких последствий заболевания.

Пример c2

Европейский короткошерстный кот в возрасте 4 лет был представлен ветеринарному офтальмологу со следующими клиническими признаками: правый глаз закрыт с наличием нескольких интерстициальных сосудов роговицы. Коту был поставлен диагноз интерстициальный кератит, имеющий принципиально сосудистую реакцию. Язв роговицы или дендритных язв не наблюдалось у этого взрослого кота, поэтому нельзя было поставить определенный клинический диагноз FHV-1. Были взяты мазки с конъюнктивы для ПЦР анализа на FHV-1. Результаты ПЦР на FHV-1 были отрицательными. Следовательно, вирусологический диагноз FHV-1 не мог быть поставлен. Было начато предварительное лечение с помощью офтальмологической композиции А, как описано выше; никаких других лекарств или кортикостероидов не вводили. Было отмечено заметное улучшение в первую неделю лечения. После трех недель лечения кот чувствовал себя значительно лучше, глаз был более ясным, сосуды роговицы существенно регрессировали. Таким образом, диагноз FHV-1 заболевания был основан на успешном лечении офтальмологическим раствором A-5021 с заметным улучшением в течение первой недели лечения. Диагноз был подтвержден дальнейшим успешным лечением и клиническим улучшением, отмеченным на 21 день после начала лечения.

Пример c3

Было отобрано в общей сложности 20 полевых кошек разных пород и возрастов с различными глазными проявлениями, основной причиной которых считали FHV-1 (по мнению дипломанта Европейского колледжа ветеринарной офтальмологии), взяты мазки из глаз для ПЦР анализа на FHV-1, кошек обрабатывали различными композициями А-5021 (в концентрации 0,2% и 0,5%). Лечение проводили местно в виде закапывания глазных капель в пораженные глаза с частотой 2 или 3 раза в день. Положительные результаты ПЦР на FHV-1 были получены в 60% этих случаев (12 из 20 кошек), отрицательные результаты на FHV-1 были получены в 25% случаев, и в 15% случаев никаких результатов ПЦР не было получено (например, в связи с ошибкой экстракции ДНК). Из случаев с отрицательными результатами ПЦР на FHV-1, все кошки быстро ответили на лечение со значительным клиническим улучшением, уже наблюдавшимся в первую неделю лечения (ложные отрицательные результаты на основе ПЦР). В отличие от этого, одна кошка, результат для которой был положительным на ДНК FHV-1 на основе ПЦР, не отвечала на лечение (ложный положительный результат на основе ПЦР и клинического диагноза).

Следовательно, специфичное лекарство A-5021 против герпеса, приготовленное в виде офтальмологического продукта, является быстрым диагностическим лекарственным средством для глаз, зараженных герпесом.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и предназначена для применения при лечении глазных инфекций у животных. Офтальмологический раствор содержит по меньшей мере 0,1 % масс./об. 2-амино-9-[[(1S,2R)-1,2-бис(гидроксиметил)циклопропил]метил]-1,9-дигидро-6H-пурин-6-она и по меньшей мере 15 % масс./об. циклодекстрина. Также представлен способ получения указанного раствора, включающий следующие стадии: a) получают раствор, содержащий по меньшей мере 15 % масс./об. циклодекстрина; b) к этому раствору добавляют 2-амино-9-[[(1S,2R)-1,2-бис(гидроксиметил)-циклопропил]метил]-1,9-дигидро-6H-пурин-6-он; c) растворяют 2-амино-9-[[(1S,2R)-1,2-бис(гидроксиметил)-циклопропил]метил]-1,9-дигидро-6H-пурин-6-он, добавленный на стадии b); и d) повторяют стадии b) и c) до получения в растворе концентрации 2-амино-9-[[(1S,2R)-1,2-бис(гидроксиметил)циклопропил]-метил]-1,9-дигидро-6H-пурин-6-она по меньшей мере 1 мг/мл. Использование группы изобретений обеспечивает раствор с улучшенной стабильностью, что позволяет его использовать повторно с интервалом в несколько часов в течение нескольких дней или недель без образования осадков, а также хорошую переносимость здоровыми и инфицированными глазами. 2 н. и 12 з.п. ф-лы, 9 пр.

1. Офтальмологический раствор, содержащий:

по меньшей мере 0,1 % масс./об. 2-амино-9-[[(1S,2R)-1,2-бис(гидроксиметил)циклопропил]метил]-1,9-дигидро-6H-пурин-6-она и

по меньшей мере 15 % масс./об. циклодекстрина.

2. Офтальмологический раствор по п. 1, который представляет собой водный раствор.

3. Офтальмологический раствор по п. 1 или 2, в котором циклодекстрин представляет собой гидроксипропил-бета-циклодекстрин.

4. Офтальмологический раствор по любому из пп. 1-3, дополнительно содержащий по меньшей мере 0,008 % масс./об. тиомерсала.

5. Офтальмологический раствор по любому из пп. 1-4 для применения в способе лечения глазной герпетической инфекции.

6. Офтальмологический раствор по п. 5, где глазная инфекция представляет собой глазную инфекцию домашнего животного.

7. Офтальмологический раствор по п. 6, где домашнее животное является животным семейства кошачьих.

8. Офтальмологический раствор по любому из пп. 5-7, где способ включает введение композиции в глаз два или три раза в день в течение по меньшей мере семи дней.

9. Офтальмологический раствор по любому из пп. 1-4 для применения в способе диагностики глазной герпетической инфекции.

10. Офтальмологический раствор по п. 8 или 9, где глазная инфекция представляет собой глазную инфекцию домашнего животного.

11. Офтальмологический раствор по п. 10, где домашнее животное является животным семейства кошачьих.

12. Способ получения офтальмологического раствора по п. 1, включающий стадии, на которых:

a) получают раствор, содержащий по меньшей мере 15 % масс./об. циклодекстрина;

b) к этому раствору добавляют 2-амино-9-[[(1S,2R)-1,2-бис(гидроксиметил)-циклопропил]метил]-1,9-дигидро-6H-пурин-6-он;

c) растворяют 2-амино-9-[[(1S,2R)-1,2-бис(гидроксиметил)-циклопропил]метил]-1,9-дигидро-6H-пурин-6-он, добавленный на стадии b); и

d) повторяют стадии b) и c) до получения в растворе концентрации 2-амино-9-[[(1S,2R)-1,2-бис(гидроксиметил)циклопропил]-метил]-1,9-дигидро-6H-пурин-6-она по меньшей мере 1 мг/мл.

13. Способ по п. 12, где циклодекстрин представляет собой гидроксипропил-бета-циклодекстрин.

14. Способ по п. 13, дополнительно включающий стадию е) добавления по меньшей мере 0,008 мг/мл тиомерсала.