КОМПЛЕКС ЛИПИДОВ МИЕЛИНА ЦЕНТРАЛЬНОЙ И ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ ЖИВОТНЫХ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ НЕЙРОДЕГЕНЕРАТИВНЫХ ДЕМИЕЛИНИЗИРУЮЩИХ НАРУШЕНИЙ И СПОСОБЫ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2021 года по МПК A61K35/30 A61K35/32 A61P25/28 A61K47/44 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к медицине, в частности к неврологии, и раскрывает средство для лечения или профилактики нейродегенеративных демиелинизирующих процессов центральной и периферической нервной систем, представляющее собой комплекс липидов миелина нервной ткани животных, состоящий из липидных метаболитов, холестерола, фосфолипидов, факторов роста и дифференцировки, незаменимых жирных кислот. Раскрыты фармацевтическая композиция и способ применения заявленной композиции для лечения и профилактики нейродегенеративных демиелинизирующих процессов. Заявленный комплекс может быть использован перорально для лечения и профилактики рассеянного склероза (патология центральной нервной системы (ЦНС)), синдрома Гийена-Барре, лепрозной нейропатии (патологии периферической нервной системы (ГШС)). Кроме того комплекс может быть использован и при таких заболеваниях, как различные типы склероза, и других нейродегенеративных расстройствах, связанных с «демиелинизацией», общим последствием которых является потеря липидов в оболочке аксонов нейронов с нарушением процесса проведения электрических сигналов.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

На сегодняшний день эффективного патогенетически обоснованного способа лечения и профилактики нейродистрофических демиелинизирующих заболеваний не существует. Применяемые в настоящее время средства в процессе лечения не устраняют причину данных заболеваний и обладают многими неблагоприятными побочными эффектами, вследствие чего эти заболевания приобретают длительное хроническое течение, и у значительной части больных развивается инвалидность.

Так, современные терапевтические средства для лечения демиелинизирующих состояний (интерферон, глатирамера ацетат, финголимод) эффективны лишь частично. Полезность продолжительных лечебных курсов является неопределенной и, как сообщается, часто сопровождаются летальными побочными эффектами. Например, это относится к моноклональным антителам, таким как Tysabri.

Современная химиотерапия и иммуносупрессивная терапия характеризуются использованием цитотоксических средств или иммунодепрессантов. Несмотря на свою эффективность, эти средства являются неспецифическими и, особенно в случае длительных курсов, токсичными для нормальных и быстро делящихся клеток. Более того их использование может быть ограничено присущими им неблагоприятными свойствами, среди которых острая миелосупрессия, нефротоксичность, кардиотоксичность, нейротоксичность, токсическое действие на желудочно-кишечный тракт, мочевой пузырь и легкие, которые могут привести к ухудшению состояния пациента на длительный срок.

Известна стимулирующая роль липидов в регенеративных процессах нервной ткани. В живых организмах липиды выполняют энергетическую и структурную функции: в жировых клетках сохраняется энергетический запас организма, а в тканях липиды являются основным компонентом клеточных мембран. Нервная ткань характеризуется высоким содержанием липидов, участвующих в функционировании клеточных мембран, которые не синтезируются организмом, и их потребность обеспечивается диетой. Развитие нервных клеток генетически запрограммировано; поэтому нервные клетки нуждаются в обеспечении адекватной поставки липидов во время их пролиферации и дифференцировки.

Миелин представляет собой жировой слой, который окружает аксоны многих нейронов и который образован рядом спиральных складок плазматической мембраны глиальных клеток (клеток Шванна). Липиды миелиновой мембраны играют важную роль мишеней в развитии нейродегенеративных и восстановительных процессов. Особенно важно обеспечить клетки липидами при нейродегенеративных состояниях, когда потребность в них возрастает для регенерации, особенно миелина. Химическая гетерогенность как липидного, так и белкового состава миелина предполагает, что олигодендроциты (глия) и Шванновские клетки в разных отделах центральной и периферической нервной системы способны формировать различные молекулярные типы миелина, отличающиеся не только молекулярной архитектоникой, но и функциональными и иммунохимическими свойствами. Это подтверждают и патологические (демиелинизирующие) процессы, характерные только для центральной нервной системы или только для периферической нервной системы. Так, при рассеянном склерозе иммунная система организма атакует нервы центральной нервной системы, разрушая миелин головного и спинного мозга, в то время как при синдроме Гийена-Барре и лепрозной нейропатии иммунная атака направлена на миелиновую (клетки Шванна) оболочку периферических нервов, не затрагивая мозг. Следовательно, при разработке патогенетически обоснованных лечебных средств нервной системы необходимо учитывать специфичность ткани-мишени.

Демиелинизирующие нейродистрофические процессы затрагивают многие компоненты миелина: фосфатидилхолин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилинозитол, фосфатидилглицерол, фосфатидилсерин, фосфатидную кислоту, сфингомиелин, сульфатид, цереброзиды, церамид и лизофосфатидилхолин. Например, мишенью для аутоантител при рассеянном склерозе является фосфатная группа у фосфатидилсерина и окисленные производные фосфатидилхолина. Установлено, что пероральный прием указанных липидов смягчает экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит, подавляя активацию и индуцируя апоптоз аутореактивных Т-клеток. Следовательно, прием с пищей комплекса липидов, близких по характеристике миелиновым липидам клеток центральной или периферической нервной систем, является патогенетически обоснованным воздействием на процессы регенерации нервных тканей. Структурные особенности миелина и клиническое разнообразие демиелинизирующих процессов в центральной и периферической нервной системах обусловливают выбор действующих компонентов композиции. Так, заявленная фармацевтическая композиция для лечения демиелинизирующих состояний центральной нервной системы (например, рассеянный склероз) содержит липидный комплекс миелина центральной нервной системы (спинного мозга) животных. В то же время для лечения демиелинизирующих состояний периферической нервной системы (например, синдром Гийена-Барре, лепрозная нейропатия) в состав фармацевтической композиции входит липидный комплекс миелина периферической нервной системы.

В литературе отсутствуют сведения о наличии лечебных и/или профилактических свойств у липидного комплекса миелина центральной и периферической нервной системы животных.

Без намерения быть ограниченными какой-либо теорией, изобретатели полагают, что заявленная композиция подавляет активность аутореактивных Т и В клеток, вызванное ими воспаление и удовлетворяет повышенную потребность организма в липидах в процессе регенерации нервных тканей.

Известна стимулирующая роль полиненасыщенных жирных кислот - PUFA, а именно омега-3 и/или омега-6 жирных кислот в сочетании с уридином или солями холина в отношении увеличения синтеза синаптических белков в синаптических мембранах нервной клеткой при возрастном расстройстве памяти (RU 2436571). Полиненасыщенные жирные кислоты предложено использовать для задержки начала деменции или уменьшения ее тяжести (RU 2444356). В WO 2012/131493 раскрыты композиции, содержащие длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты (PUFA), иные омега-3 PUFA и мононенасыщенные жирные кислоты. Указанные композиции предназначены для лечения неврологических нарушений. RU 2513995 описывает применение производных полиненасыщенных жирных кислот, в частности, 2-гидроксипроизводных, для лечения, помимо прочего, неврологических или нейродегенеративных расстройств. В RU 2507742 раскрыто применение композиций, содержащих длинноцепочечные полиненасыщенные жирные кислоты, соединения, высвобождающие монооксид азота, и среднецепочечные триглицериды, для усиления когнитивной функции, уменьшения или предупреждения снижения социального поведения, уменьшения или предупреждения связанных с возрастом изменений поведения, улучшения обучаемости, поддержания оптимальной функции головного мозга, облегчения обучения и запоминания, уменьшения потери памяти, замедления старения головного мозга, предупреждения или лечения инсультов и предупреждения или лечения деменции. Таким образом, качественный состав упомянутых выше средств ограничен, в основном, полиненасыщенными жирными кислотами, что снижает лечебную ценность и, соответственно, ограничивает широту применения этих средств. При этом фармакологическая активность соединений PUFA невысока.

С учетом изложенного выше в данной области техники существует потребность в разработке новых эффективных базовых лечебных средств, лишенных недостатков используемых в настоящее время лекарственных средств, в частности, не вызывающих нежелательного побочного действия и не имеющих ограничений в использовании.

РАСКРЫТИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Задача, решаемая изобретением, состоит в создании нового патогенетически обоснованного средства для лечения и профилактики нейродегенеративных демиелинизирующих состояний центральной и периферической нервной системы, лишенного нежелательных побочных действий и ограничений в использовании.

В своем первом аспекте предложенное изобретение относится к средству для лечения или профилактики нейродегенеративных демиелинизирующих повреждений нервной ткани, представляющего собой комплекс липидов миелина животных, содержащий липидные метаболиты, холестерол, фосфолипиды, факторы роста и дифференцировки нервной ткани, незаменимые жирные кислоты. При этом в одном из предпочтительных воплощений комплекс липидов миелина животных происходит из центральной нервной системы. В другом предпочтительном воплощении комплекс липидов миелина животных происходит из периферической нервной системы.

Заявленное средство обладает способностью подавлять демиелинизирующую воспалительную реакцию и, являясь источником липидных метаболитов, стимулирует процесс регенерации миелиновой оболочки клеток.

В следующем аспекте заявленное изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения или профилактики нейродегенеративных демиелинизирующих повреждений нервной ткани, содержащей терапевтически эффективное количество комплекса липидов миелина животных, включающего липидные метаболиты, холестерол, фосфолипиды, факторы роста и дифференцировки нервной ткани, незаменимые жирные кислоты, и фармацевтически приемлемый носитель.

В одном из предпочтительных воплощений фармацевтической композиции комплекс липидов миелина происходит из центральной нервной системы животных. В другом предпочтительном воплощении фармацевтической композиции комплекс липидов миелина происходит из периферической нервной системы животных.

В следующем предпочтительном воплощении фармацевтической композиции фармацевтически приемлемый носитель содержит жировую основу. В более предпочтительном воплощении жировая основа включает топленый курдючный жир.

В еще одном предпочтительном воплощении фармацевтическая композиция содержит:

а) комплекс липидов миелина центральной нервной системы животных и топленый курдючный жир в массовом соотношении 1:1, или

б) комплекс липидов миелина периферической нервной системы животных и топленый курдючный жир в массовом соотношении 1:1.

В следующем предпочтительном воплощении фармацевтическая композиция выполнена в виде жировой массы в капсулах для перорального применения.

В еще одном аспекте заявленное изобретение относится к способу лечения острого демиелинизирующего состояния у пациента, нуждающегося в этом, причем способ включает пероральное введение пациенту предложенной в настоящем изобретении фармацевтической композиции в количестве 250-500 мг в расчете на комплекс липидов миелина нервной системы животных 4 раза в день в течение 6 месяцев, необязательно в комбинации с дополнительным средством для лечения острого демиелинизирующего состояния. В качестве указанного дополнительного средства могут быть использованы, в частности, стероидные противовоспалительные средства (как, например, преднизолон, метилпреднизолон и т.д.), нестероидные противовоспалительные средства (как, например, ацетилсалициловая кислота и т.д.).

В одном из предпочтительных воплощений заявленный способ предназначен для лечения острого демиелинизирующего состояния центральной нервной системы, причем пациенту вводят фармацевтическую композицию, содержащую комплекс липидов миелина центральной нервной системы животных. В более предпочтительном воплощении острое демиелинизирующее состояние центральной нервной системы представляет собой рассеянный склероз.

В другом предпочтительном воплощении заявленный способ предназначен для лечения острого демиелинизирующего состояния периферической нервной системы, причем пациенту вводят фармацевтическую композицию, содержащую комплекс липидов миелина периферической нервной системы животных. В более предпочтительном воплощении острое демиелинизирующее состояние периферической нервной системы представляет собой синдром Гийена-Барре или лепрозную нейропатию.

В еще одном из аспектов заявленное изобретение касается способа профилактики нейродегенеративных обострений у пациента, нуждающегося в этом, причем способ включает пероральное введение пациенту заявленной фармацевтической композиции в количестве 250-500 мг в расчете на комплекс липидов миелина нервной системы животных 4 раза в день в течение 3-12 месяцев.

В одном из предпочтительных воплощений заявленный способ предназначен для профилактики нейродегенеративных обострений центральной нервной системы, причем пациенту вводят фармацевтическую композицию, содержащую комплекс липидов миелина центральной нервной системы животных. В более предпочтительном воплощении обострение нейродегенеративных заболеваний центральной нервной системы представляет собой рассеянный склероз.

В другом предпочтительном воплощении заявленный способ предназначен для профилактики нейродегенеративных обострений периферической нервной системы, причем пациенту вводят фармацевтическую композицию, содержащую комплекс липидов миелина периферической нервной системы животных. В более предпочтительном воплощении обострение нейродегенеративных заболеваний периферической нервной системы представляет собой синдром Гийена-Барре или лепрозную нейропатию.

Техническим результатом является новое, патогенетически обоснованное лечебное средство, обладающее восстанавливающим действием на демиелинизирующие повреждения нервной ткани и обеспечивающее профилактику обострений, без нежелательных побочных реакций и ограничений в использовании.

ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Средство для лечения или профилактики нейродегенеративных демиелинизирующих процессов центральной и периферической нервной ткани согласно изобретению представляет собой комплекс липидов миелина нервной ткани животных, состоящий из липидных метаболитов, холестерола, фосфолипидов, факторов роста и дифференцировки, незаменимых жирных кислот. Для получения указанного комплекса могут быть использованы как нервные ткани ЦНС, так и нервные ткани ПНС. В качестве источника нервных тканей может служить, например, крупный и мелкий рогатый скот, свиньи. Биологический материал может быть получен от мясоперерабатывающих предприятий.

Способы выделения общей липидной фракции хорошо известны специалистам в данной области техники и включают, в частности, экстракцию органическими растворителями. Так, например, для выделения комплекса липидов может быть использована смесь хлороформ-метанол (J. Folch, М. Lees G.H. Sloane Stanley, A Simple Method for the Isolation and Purification of Total Lipides from Animal Tissues, J. Biol. Chem., 1957, Vol. 226, p. 497-509). Также могут быть использованы такие растворители, как гексан, смесь гексан-дихлорметан (RU 2505592), а также ацетон, изопропанол и трет-бутанол (RU 2236441). Предпочтительным способом выделения комплекса липидов миелина нервной ткани животных является метод сверхкритической жидкостной экстракции, в частности, с использованием CO₂. При необходимости при использовании сверхкритического диоксида углерода в качестве растворителя к нему добавляют этанол (Роберте С. Динамическое программирование в процессах химической технологии и методы управления. М.: Мир, 1965, с. 496).

В составе фармацевтической композиции активный ингредиент - комплекс липидов миелина нервной ткани животных - находится в смеси с фармацевтически приемлемыми носителями. Учитывая липофильный характер активного ингредиента, в качестве носителя могут быть использованы различные липофильные соединения, такие как, например, жиры и масла, которые могут быть животного, растительного или синтетического происхождения. Примерами таких носителей являются арахисовое масло, соевое масло, оливковое масло, подсолнечное масло, масло из печени рыб, масло, полученное из других морских животных или растений т.д. В качестве предпочтительного носителя в составе фармацевтической композиции может быть использован курдючный жир.

Фармацевтическая композиция может быть составлена в различные лекарственные формы, включая капсулы, мягкие желатиновые капсулы, твердые желатиновые капсулы, эмульсии типа вода-в-масле или масло-в-воде, пасту в тубе.

Фармацевтическая композиция, помимо указанных фармацевтически приемлемых носителей, может дополнительно содержать фармацевтически приемлемые растворители, наполнители и другие вспомогательные вещества, хорошо известные специалистам в данной области техники. В частности, фармацевтическая композиция при необходимости может содержать различные неиногенные поверхностно-активные вещества (например, ТВИН-80) или ионогенные поверхностно-активные вещества (например, полиглицерин стеарат), как описано, например, в RU 2392949.

Предпочтительная лекарственная форма, в которую может быть составлена композиция настоящего изобретения, представляет собой капсулу для перорального применения, содержащую жировую массу. Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут вводиться перорально, а также через желудочный зонд.

Фармацевтические композиции настоящего изобретения содержат активный ингредиент - комплекс липидов миелина нервной системы животных - в терапевтически эффективном количестве. В предпочтительном воплощении фармацевтическая композиция может быть составлена так, чтобы доставлять 250-500 мг активного начала при приеме единичной лекарственной формы, такой как, например, капсула. Прием по одной такой капсуле 4 раза в день будет обеспечивать терапевтически или профилактически эффективную дозу активного ингредиента.

Пищевые композиции настоящего изобретения включают продукты, предназначенные для удовлетворения потребностей человека в питательных веществах. Пищевые композиции могут быть в различных формах, включая твердую, жидкую и полутвердую. Твердые формы пищевых композиций могут быть приготовлены, в частности, в виде батончика (типа питательного батончика), чипсов, хлебобулочного изделия, крекера. Жидкие формы могут включать напитки, выполненные в форме суспензий, эмульсий, растворов. Полутвердые формы пищевых продуктов могут быть представлены, в частности, пастами, кремами, муссами, мороженым, жевательными продуктами на основе желатина.

Пищевые композиции настоящего изобретения содержат эффективное количество комплекса липидов миелина нервной системы животных и пищевой компонент. По существу пищевая композиция согласно изобретению представляет собой любой продукт питания, обогащенный комплексом липидов миелина нервной системы животных.

Пищевая добавка означает питательную композицию, которая, как правило, удовлетворяет потребности человека в отдельных питательных веществах, но не вносит существенный вклад в удовлетворение общих потребностей человека в питательных веществах. Пищевые добавки могут быть обеспечены в различных формах, например, в форме пилюли, таблетки. Пищевая добавка настоящего изобретения содержит в качестве основного компонента комплекс липидов миелина нервной системы животных.

Приведенные ниже примеры служат для иллюстрации отдельных наиболее предпочтительных воплощений заявленного изобретения, но не предназначены для ограничения объема притязаний, который определяется приведенной ниже формулой изобретения.

Пример 1. Получение комплекса липидов миелина нервной системы животных.

Средство настоящего изобретения вырабатывают из ткани крупного рогатого скота, свиней. Спинной мозг (для комплекса липидов миелина ЦНС), нервы седалищного, грудного сплетения (для комплекса липидов миелина ПНС) выделяют от забитых здоровых животных на бойнях. После отделения соединительнотканных, сосудистых оболочек ткани измельчают пропусканием через мясорубку и при необходимости хранят до дальнейшего использования в замороженном виде при - 20°С. Затем ткани подвергают сушке в замороженном виде под вакуумом. Для облегчения экстракции фосфолигшдов к высушенной ткани добавляют 70 % этиловый спирт в количестве 10 % по объему. Далее проводят экстракцию общих липидов методом суперкритической экстракции СО₂ (680-800 бар при 80°С). Полученный экстракт смешивают с растопленным курдючным жиром (180°С) в соотношении 1:1. После охлаждения до 50°С расфасовывают в желатиновые капсулы.

Пример 2. Оценка нейрозащитной активности комплекса липидов миелина периферической нервной системы (ЛАОШВАНН) на модели экспериментального аутоиммунного неврита крыс (ЭАН)

Комплекс миелиновых липидов периферической нервной системы (ЛАОШВАНН) исследовали на лабораторной модели синдрома Гийена-Барре - экспериментальном аутоиммунном неврите (Hahn AF, et al., Experimental allergic neuritis (EAN) as a model for the immune-mediated demyelinating neuropathies. Rev. Neurol. (Paris). 1996, May; 152(5):328-32).

Самки крыс линии Вистар массой 200 - 230 г. из Питомника РАН взяты в исследование после 2-недельного карантина и распределены на следующие группы:

1. Контрольная группа - 12 голов (К₁), принимающие «плацебо» (кукурузное масло) с 1-го дня.

2. Контрольная группа - 8 голов (К₂), принимающие «плацебо» с начала развития симптомов ЭАН.

3. Опытная - профилактическая группа - 12 голов (О₃), принимающие ЛАОШВАНН с 1-го дня иммунизации.

4. Опытная - лечебная группа - 12 голов (О₄), принимающие ЛАОШВАНН с начала развития симптомов ЭАН.

В 1-й день животным под анестезией ввели п/к в задние лапы 200 мкл смеси 6 мг миелина периферических нервов быка в 100 мкл фосфатного буфера (ФБ), эмульгированного с 100 мкл полного адъюванта Фрейнда («Дифко»), содержащего 1 мг/мл инактивированных микобактерий туберкулеза (H37Ra). Дополнительно ввели внутривенно 3 мкг коклюшного токсина в ФБ на 3-й день после иммунизации. Все животные были размещены в клетках по 4 головы и обеспечены свободным доступом к корму и воде. Животные были взвешены, и проводился ежедневный осмотр клинических признаков заболевания. Все эксперименты проведены согласно регламенту РФ для экспериментов на животных.

Использована шкала оценки ЭАН: 0 = нет симптомов болезни, 1+ = вялость хвоста, 2+ = умеренный парез конечностей, 3+ = тяжелый парез, 4+ = тетрапарез, 5+ = смерть в результате развития невропатии.

Для оценки профилактического действия опытная группа из 12 крыс (с индуцированным ЭАН) получала 50 мг ЛАОШВАНН через желудочный зонд каждый день, начиная с 1-го дня иммунизации. Контрольная группа - К₁ из 12 крыс получала то же количество плацебо (кукурузное масло). Для оценки терапевтического действия 12 крыс получали ЛАОШВАНН после начала развития клинических симптомов, т.е. с 13 дня после иммунизации. Контрольная группа - К₂ из 8 животных получала то же количество плацебо после начала развития симптомов ЭАН.

Результаты

Через две недели (на 13-14 день) у всех 12 животных контрольной - К₁ группы (плацебо) развились признаки ЭАН: начиная от вялости хвостов и вплоть до развития парезов к 18 дню, одно животное пало на 20 день, (симптомы группы 3,08±0,93), а у оставшихся животных острота симптомов стала стихать к 30 дню наблюдения (симптомы группы 2.36±0.48). Отмечена потеря массы тела на 10 %.

Все 12 крыс опытной группы - О₃, получавшие профилактически ЛАОШВАНН с 1-го дня иммунизации, оказались защищенными от развития клинических симптомов ЭАН до конца периода наблюдения (до 30 дня). Было отмечено лишь отставание в наборе массы тела на 5 %.

В группе - О₄ опытных животных, получавших ЛАОШВАНН с начала развития клинических симптомов, т.е. терапевтически, у 1 крысы патологический процесс ЭАН прогрессировал с 14 дня, и животное пало на 28 день с признаками тетрапареза. У остальных 11 крыс ЭАН протекал в легкой форме 1+ (вялость хвостов) с 14 дня и закончился заметным улучшением на 30 день. Симптомы группы к 30 дню 1.09±0.5.

В группе - К₂ контрольных животных, получавших плацебо с начала развития клинических симптомов, процесс прогрессировал с 13 дня до 20 дня. Симптомы группы к 30 дню 3.25±0.49. Одна крыса из 8 пала на 20 день.

Выводы: Результаты плацебо-контролируемого исследования ЛАОШВАНН на лабораторных животных с ЭАН показали достоверно выраженную нейрозащитную эффективность. Липидный комплекс оказывал тормозящее действие на развитие симптомов экспериментального неврита, как при профилактическом (до развития симптомов ЭАН), так и терапевтическом (с начала развития симптомов ЭАН) приеме внутрь, без нежелательных побочных реакций.

Пример 3. Оценка нейрозащитной активности комплекса липидов миелина центральной нервной системы (ЛАОГЛИЯ) на модели экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (ЭАЭ) крыс.

Комплекс миелиновых липидов центральной нервной системы (ЛАОГЛИЯ) исследовали на лабораторной модели рассеянного склероза - экспериментальном аутоиммунном энцефаломиелите (ЭАЭ) Kpbic. (Cris S. Constantinescu et al., Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) as a model for multiple sclerosis (MS), Br. J. Pharmacol. 2011 Oct; 164(4): 1079-1106).

В опытах использованы самки крыс линии Вистар из Питомника РАН. После 2-недельного содержания в карантине животные распределены на следующие группы.

1. Контрольная группа - 12 голов (К₁), принимающие «плацебо» (кукурузное масло) с 1-го дня.

2. Контрольная группа - 8 голов (К₂), принимающие «плацебо» с начала развития симптомов ЭАЭ

3. Опытная - профилактическая группа - 12 голов (О₃), принимающие ЛАОГЛИЯ с 1-го дня иммунизации.

4. Опытная - лечебная группа - 12 голов (О₄), принимающие ЛАОГЛИЯ с начала развития симптомов ЭАЭ.

В 1-й день животным под анестезией ввели п/к в задние лапы 200 мкл смеси 6 мг миелина спинного мозга быка в 100 мкл фосфатного буфера (ФБ), эмульгированного с 100 мкл полного адъюванта Фрейнда («Дифко»), содержащего 1 мг/мл инактивированных микобактерий туберкулеза (H37Ra). Дополнительно ввели внутривенно 3 мкг коклюшного токсина в ФБ на 3-й день после иммунизации. Все животные были размещены в клетках по 4 головы и обеспечены свободным доступом к корму и воде. Животные были взвешены, и проводился ежедневный осмотр клинических признаков заболевания. Все эксперименты проведены согласно регламенту РФ для экспериментов на животных.

Использована шкала оценки симптомов ЭАЭ: 0 = нет симптомов болезни, 1+ = вялость хвоста, 2+ = умеренный парез конечностей, 3+ = тяжелый парез, 4+ = тетрапарез, 5+ = смерть в результате развития невропатии.

Для оценки профилактического действия опытная группа из 12 крыс (с индуцированным ЭАЭ) получала 50 мг ЛАОГЛИИ через желудочный зонд, каждый день, начиная с 1-го дня иммунизации. Контрольная группа - К₁ из 12 крыс получала то же количество плацебо (кукурузное масло). Для оценки терапевтического действия 12 крыс получали ЛАОГЛИЮ после начала развития клинических симптомов, т.е. с 10 дня после иммунизации. Контрольная группа - К₂ из 8 животных получала то же количество плацебо после начала развития симптомов ЭАЭ.

Результаты

Через 10-11 день у всех 12 животных контрольной - К₁ группы (плацебо) развились признаки ЭАЭ: начиная от умеренного пареза и вплоть до развития тетрапарезов к 18 дню, 3 животных пали на 24 день, (симптомы группы 3.41±0.51), а у оставшихся животных острота симптомов стала стихать незначительно. К 30 дню наблюдения симптомы группы из 9 крыс 3.1±1.1. Отмечена потеря массы тела на 15 %.

Все 12 крыс опытной группы - О₃, получавшие профилактически ЛАОГЛИЮ с 1-го дня иммунизации, оказались защищенными от развития клинических симптомов ЭАЭ до конца периода наблюдения (до 30 дня). Было отмечено лишь отставание в наборе массы тела на 15 %.

В группе - О₄ опытных животных, получавших ЛАОГЛИЮ с начала развития клинических симптомов, т.е. терапевтически, патологический процесс ЭАЭ прогрессировал с 10-го по 15 день. Симптомы достигли максимальных показателей к 15 дню (3.0±0.66) и стали медленно стихать. Симптомы группы к 30 дню 1.83±0.73.

В группе - К₂ контрольных животных, получавших плацебо с начала развития клинических симптомов, процесс прогрессировал с 13 дня до 20 дня. Симптомы группы к 30 дню 3.50±0.54. Две крысы из 8 пали на 20 день.

Выводы: Результаты плацебо-контролируемого исследования ЛАОГЛИИ на лабораторных животных с ЭАЭ показали достоверно выраженную нейрозащитную эффективность. Липидный комплекс оказывал тормозящее действие на развитие симптомов экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита, как при профилактическом (до развития симптомов ЭАЭ), так и терапевтическом (с начала развития симптомов ЭАН) приеме внутрь, без нежелательных побочных реакций.

Пример 4. Схема комбинированного лечения с использованием дополнительных противовоспалительных средств.

Для лечения обострения нейродегенеративного процесса - лепрозной узловатой эритемы (реакция Типа-2) может быть использована следующая схема.

1. Метилпреднизолон 250 мг в день внутривенно 3 дня подряд.

2. Преднизолон в таблетках 40 мг в день, начиная с 4-го дня со ступенчатым снижением дозы до 5 мг.

3. Аспирин в таблетках 100 мг в день.

4. Комплекс липидов миелина периферической нервной системы (ЛАОШВАНН) в капсулах по 250 мг 4 раза в день в течение 3 месяцев.

Пример 5. Применение комплекса липидов миелина для профилактики прогрессирования лепрозной нейропатии.

Для защиты от обострений нейродегенеративного процесса - (реакции Типа-1 и Типа-2) в процессе проведения специфической комбинированной антимикобактериальной терапии больных лепрой может быть использована следующая схема.

1. Даспон 100 мг в день (6 месяцев для ТТ форм и 12 месяцев для ЛЛ форм).

2. Рифампицин 600 мг 1 раз в месяц (6 месяцев для ТТ форм и 12 месяцев для ЛЛ форм).

3. Комплекс липидов миелина периферической нервной системы (ЛАОШВАНН) в капсулах по 250 мг 4 раза в день (6 месяцев для ТТ форм и 12 месяцев для ЛЛ форм).

Способы и композиции, раскрытые в данном описании, не ограничиваются конкретными методиками, процедурами и реагентами, приведенными в данном описании, поскольку, как будет понятно специалисту в данной области техники, их можно изменять. Кроме того, терминология, используемая в данном описании, имеет целью только описание определенных воплощений и не предназначена для ограничения объема притязаний, который определяется формулой изобретения.

Если не указано иное, все научно-технически термины и сокращения, используемые в данном описании, имеют значения, которые им обычно придают специалисты в области техники, к которой относится изобретение, или в области техники, в которой указанные термин или сокращение применяются. В данном описании представлены предпочтительные композиции, способы, изготовленные изделия или другие средства или материалы, при этом должно быть понятно, что при осуществлении данного изобретения могут быть использованы иные композиции, способы, изготовленные изделия или иные средства или материалы, подобные или эквивалентные описанным в данном описании, оставаясь при этом в объеме притязаний, определяемом формулой изобретения.

Все патенты, заявки на патенты, научно-технические и иные публикации, цитированные в данном описании, включены в него посредством отсылки. При этом не предполагается, что они составляют уровень техники в отношении заявленного изобретения.

Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению комплекса липидов миелина животных для изготовления лекарственного средства для лечения или профилактики нейродегенеративных демиелинизирующих повреждений нервной ткани, к фармацевтической композиции, а также к способу лечения или профилактики нейродегенеративных демиелинизирующих повреждений нервной ткани. Применение комплекса липидов миелина животных, включающего липидные метаболиты, холестерол, фосфолипиды, факторы роста и дифференцировки нервной ткани, незаменимые жирные кислоты, полученного путем сушки тканей центральной или периферической нервной системы животных в замороженном виде под вакуумом, добавления 70 % этилового спирта в количестве 10 % по объему с последующей экстракцией методом суперкритической экстракции СО₂ при давлении 680-800 бар и температуре 80°С для изготовления лекарственного средства для лечения или профилактики нейродегенеративных демиелинизирующих повреждений нервной ткани. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики нейродегенеративных демиелинизирующих повреждений нервной ткани, содержащая терапевтически эффективное количество комплекса липидов миелина животных и фармацевтически приемлемый носитель, содержащий жировую основу. Способ лечения или профилактики острого нейродегенеративного демиелинизирующего повреждения нервной ткани у пациента. Вышеописанная группа позволяет эффективно лечить и профилактировать острые нейродегенеративные демиелинизирующие повреждения нервной ткани у пациента, без нежелательных побочных реакций и ограничений в использовании. 4 н. и 19 з.п. ф-лы, 5 пр.

1. Применение комплекса липидов миелина животных, включающего липидные метаболиты, холестерол, фосфолипиды, факторы роста и дифференцировки нервной ткани, незаменимые жирные кислоты, полученного путем сушки тканей центральной или периферической нервной системы животных в замороженном виде под вакуумом, добавления 70 % этилового спирта в количестве 10 % по объему с последующей экстракцией методом суперкритической экстракции СО₂ при давлении 680-800 бар и температуре 80°С для изготовления лекарственного средства для лечения или профилактики нейродегенеративных демиелинизирующих повреждений нервной ткани.

2. Применение по п. 1, где комплекс липидов миелина происходит из центральной нервной системы животных.

3. Применение по п. 1, где комплекс липидов миелина происходит из периферической нервной системы животных.

4. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики нейродегенеративных демиелинизирующих повреждений нервной ткани, содержащая терапевтически эффективное количество комплекса липидов миелина животных, включающего липидные метаболиты, холестерол, фосфолипиды, факторы роста и дифференцировки нервной ткани, незаменимые жирные кислоты, полученного путем сушки тканей центральной или периферической нервной системы животных в замороженном виде под вакуумом, добавления 70 % этилового спирта в количестве 10 % по объему с последующей экстракцией методом суперкритической экстракции СО₂ при давлении 680-800 бар и температуре 80°С, и фармацевтически приемлемый носитель, содержащий жировую основу.

5. Фармацевтическая композиция по п. 4, в которой комплекс липидов миелина происходит из центральной нервной системы животных.

6. Фармацевтическая композиция по п. 4, в которой комплекс липидов миелина происходит из периферической нервной системы животных.

7. Фармацевтическая композиция по п. 4, в которой жировая основа включает топленый курдючный жир.

8. Фармацевтическая композиция по п. 7, содержащая:

а) комплекс липидов миелина центральной нервной системы животных и топленый курдючный жир в массовом соотношении 1:1, или

б) комплекс липидов миелина периферической нервной системы животных и топленый курдючный жир в массовом соотношении 1:1.

9. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 4-8, выполненная в виде жировой массы в капсулах для перорального применения.

10. Способ лечения острого нейродегенеративного демиелинизирующего повреждения нервной ткани у пациента, нуждающегося в этом, включающий пероральное введение пациенту фармацевтической композиции по любому из пп. 4-9 в количестве 250-500 мг в расчете на комплекс липидов миелина нервной системы животных 4 раза в день в течение 6 месяцев.

11. Способ по п. 10, где указанное нейродегенеративное демиелинизирующее повреждение нервной ткани у пациента представляет собой нейродегенеративное демиелинизирующее повреждение центральной нервной системы, для лечения которого пациенту вводят фармацевтическую композицию, содержащую комплекс липидов миелина центральной нервной системы животных.

12. Способ по п. 11, где указанное нейродегенеративное демиелинизирующее повреждение центральной нервной системы представляет собой рассеянный склероз.

13. Способ по п. 10, где указанное нейродегенеративное демиелинизирующее повреждение нервной ткани у пациента представляет собой нейродегенеративное демиелинизирующее повреждение периферической нервной системы, для лечения которого пациенту вводят фармацевтическую композицию, содержащую комплекс липидов миелина периферической нервной системы животных.

14. Способ по п. 13, где указанное нейродегенеративное демиелинизирующее повреждение периферической нервной системы представляет собой синдром Гийена-Барре или лепрозную нейропатию.

15. Способ по п. 10, дополнительно включающий введение дополнительного средства для лечения острого нейродегенеративного демиелинизирующего повреждения нервной ткани.

16. Способ по п. 15, в котором дополнительное средство для лечения острого нейродегенеративного демиелинизирующего повреждения нервной ткани выбрано из группы, включающей стероидные противовоспалительные средства и нестероидные противовоспалительные средства.

17. Способ по п. 16, в котором стероидное противовоспалительное средство выбрано из группы, включающей метилпреднизолон и преднизолон.

18. Способ по п. 16, в котором нестероидное противовоспалительное средство включает ацетилсалициловую кислоту (аспирин).

19. Способ профилактики обострений нейродегенеративного демиелинизирующего повреждения нервной ткани у пациента, нуждающегося в этом, включающий пероральное введение пациенту фармацевтической композиции по любому из пп. 4-9 в количестве 250-500 мг в расчете на комплекс липидов миелина нервной системы животных 4 раза в день в течение 3-12 месяцев.

20. Способ по п. 19, где указанное нейродегенеративное демиелинизирующее повреждение нервной ткани у пациента представляет собой нейродегенеративное демиелинизирующее повреждение центральной нервной системы, для профилактики обострения которого пациенту вводят фармацевтическую композицию, содержащую комплекс липидов миелина центральной нервной системы животных.

21. Способ по п. 20, где указанное нейродегенеративное демиелинизирующее повреждение центральной нервной системы представляет собой рассеянный склероз.

22. Способ по п. 19, указанное нейродегенеративное демиелинизирующее повреждение нервной ткани у пациента представляет собой нейродегенеративное демиелинизирующее повреждение периферической нервной системы, для профилактики обострения которого пациенту вводят фармацевтическую композицию, содержащую комплекс липидов миелина центральной нервной системы животных.

23. Способ по п. 22, где указанное нейродегенеративное демиелинизирующее повреждение периферической нервной системы представляет собой синдром Гийена-Барре или лепрозную нейропатию.