Способ прогнозирования развития рестеноза зоны реконструкции после эндоваскулярных вмешательств на магистральных артериях нижних конечностей Российский патент 2022 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к сосудистой хирургии, и может быть использовано при лечении облитерирующего атеросклероза артерий нижних конечностей (ОААНК).

ОААНК является одним из широко распространенных заболеваний во всем мире, которому подвержено от 3 до 10% общей численности населения [1].

В настоящее время эндоваскулярные вмешательства являются равноправным методом выбора оперативного лечения на магистральных артериях нижних конечностей.

Однако возникновение послеоперационных осложнений ограничивает успех проведенных оперативных вмешательств и требует дополнительных материальных затрат на проведение повторных реконструкций. Одним из наиболее часто встречаемых осложнений является рестеноз зоны вмешательства в основе которого лежит развитие гиперплазии неоинтимы [2].

Одним из способов прогнозирования рестеноза в раннем послеоперационном периоде является оценка иммунно-воспалительного ответа путем определения динамики экспрессии цитокина интерлейкина - 1 [3].  Другим способом является комплексная биохимическая оценка параметров про- и антиоксидантной системы, а также уровня оксида азота в крови пациентов с ОАННК [4]. Можно также оценивать риск развития данного осложнения с учетом генетического статуса пациента. Выявление присутствия аллеля 298Asp полиморфизма Glu298Asp гена eNOS и аллеля 198Leu полиморфизма Prol98Leu гена GPx-1 прогнозируют высокий риск развития рестеноза [5]. Расчет по математической формуле, которая учитывая диаметр артерии после стентирования, протяженность пораженного сегмента позволяет выявить пациентов с повышенном риском развития рестеноза зоны реконструкции [6].

Согласно современным представлениям система апоптоза может играть важную роль в развитии гиперплазии неоинтимы. В сосудистой стенке существует тонкий баланс между пролиферацией клеток и апоптозом. Сдвиги в этом соотношении способствуют распространению гладкомышечных клеток из медии в интиму и синтезу внеклеточного матрикса, что является основным признаком гиперплазии интимы. Каскад апоптоза запускается двумя основными способами: через внутренний – семейство белков Всl2 (B-cell lymphoma 2) и через внешний рецепторный путь -Fas- FasL (Fas лигандом). Одним из основных представителей семейства Всl2 является проапоптотический белок Вах (Bcl-2-associated X protein). Маркером рецепторного пути является растворимый sFasR (soluble Fas рецептор), который является естественным ингибитором апоптоза, путем блокирования взаимодействия FasL c FasR [7, 8].

Современные методы диагностики (световая микроскопия, проточная цитометрия и др.) позволяют определять морфологические признаки апоптоза – уменьшение размера клетки, сморщивание цитоплазматической мембраны, конденсация ядра, разрывы нитей ядерной ДНК и др. Но более информативным способом является выявление биохимических маркеров апоптоза, которое могут быть предикторами развития рестеноза зоны реконструкции в послеоперационном периоде [9].

Техническим результатом настоящего изобретения является разработка эффективного способа прогнозирования развития рестеноза после эндоваскулярных вмешательств на магистральных артериях нижних конечностей.

Осуществление изобретения

В исследование были включены 30 пациентов с ОААНК III стадией заболевания по классификации А.В. Покровского-Фонтейна. Всем пациентам было выполнено эндоваскулярное вмешательство на магистральных артериях нижних конечностей. У пациентов были взяты образцы крови непосредственно перед вмешательством, в первые часы, на 1, 7, 21, 30 сутки после операции. Определение количества маркеров Вах, sFasR в сыворотке крови производилось с помощью иммуноферментного анализа коммерческими наборами. Количество протеина Bcl2 Associated X Protein (BAX) – с помощью набора «Cloud-Clone Corporation» (Китай), sFasR – с помощью набора «Invitrogene Thermo Fisher» (США) в соответствии с инструкциями производителя.

Последующие наблюдение за пациентами было проведено через 3, 6 и 12 месяцев.

Статистический анализ данных проводился с использованием пакета статистических программ STATISTICA 10.0. В связи с нормальным распределением данных (использовался критерий Шапиро-Уилка, р>0.05) для дальнейшего анализа применялись параметрические тесты. Для оценки статистической значимости различий внутри групп применялся дисперсионный анализ повторных измерений (ANOVA), попарные сравнения выполнялись с помощью критерия Ньюмена-Кейсла. Межгрупповые различия (пациенты с рестенозом зоны реконструкции и пациенты без данного осложнения) оценивали с помощью t-критерия Стьюдента. Принятый уровень статистической значимости – р <0,05. Числовые данные представлены как среднее арифметическое и стандартное отклонение.

Все пациенты были разделены на две группы: пациенты у которых развился рестеноз зоны реконструкции и пациенты без данного осложнения.

Было показано, что у пациентов без рестеноза зоны реконструкции исходный уровень белка Вах составил 19,7±4,6нг/мл, sFas – 0,9±0,43 нг/мл. В первый час после операции произошло повышение количества белка Вах до 26,9±5,9 (р=0,003). До конца первых суток количество белка Вах сохранялось повышенным – 25,1±5,1 нг/мл (р=0,598) по сравнению с количеством в первый час с последующим снижением к 7 суткам – 20,7± 5,7 (р=0,002) в сравнении с количеством на 1 сутки. Уровень ингибитора рецепторного пути апоптоза – sFasR достоверно не отличался в указанные промежутки времени: к первому часу составил 0,77±0,41 нг/мл (р=0,774), к 1 суткам -0,9 нг/мл (р=0,608) и к 7 суткам – 0,92 (р=0,996). На 21 сутки произошло максимальное снижение количества sFasR до 0,24±0,16 (р=0,003) при статистически незначимом повышении количества Вах 24,4±9,1нг/мл (р=0,456) по сравнению с их количеством на 7 сутки. К концу 1 месяца уровень Вах снизился до 23,3±8,4нг/мл (р=0,488) при повышении sFasR до 0,73±0,3(р=0,001) по сравнению с их количеством на 21 сутки.

По результатам обследования у 10 (33%) пациентов через 9-12 месяцев после эндоваскулярного вмешательства выявлен рестеноз зоны реконструкции с возвратом ишемии конечности. Данные пациенты по исходным показателям Вах -21,5±7,5 (р=0,413), sFasR – 1,1±0,3 (р=0,227) не отличались от значений пациентов без рестеноза зоны реконструкции. Количество белка Вах в первый час после операции составило 34,8± 7,7нг/мл (р=0,004), на 1 сутки - 32,2±5,2нг/мл (р=0,001), что превышало количество данных показателей у пациентов без рестеноза зоны реконструкции на 30% и 28% соответственно. Количество sFasR на 21 сутки составило 0,58±0,24нг/мл (р=0,0001), что превышало в 2,4 раза его значения у пациентов без рестеноза.

Таким образом, повышение количества белка Вах до 34,8±7,7нг/мл в первый час и до 32,2±5,2нг/мл в первые сутки, и увеличение количества sFasR до 0,58±0,24нг/мл на 21 сутки после эндоваскулярных вмешательств на магистральных артериях нижних конечностей свидетельствует о развитии рестеноза зоны реконструкции через 9-12 месяцев после операции. Учитывая результаты, полученные в этом исследовании, существует прогностическая значимость послеоперационного определения количества белка Вах и sFasR у пациентов с ОААНК.

Источники информации, принятые во внимание

1. Dua A, Lee CJ. Epidemiology of Peripheral Arterial Disease and Critical Limb Ischemia. Tech Vasc Interv Radiol. 2016; 19(2):91-5. doi: 10.1053/j.tvir.2016.04.001.

2. Самко А.Н., Меркулов Е.В., Власов В.М. и др. Рестеноз: причины и механизмы развития при различных видах эндоваскулярного лечения. Атеросклероз и дислипедемия. 2014; 1:1-8.

3. Тепляков А.Т., Рыбальченко Е.В., Суслова Т.Е., Груздева О.В. Способ прогнозирования рестенозов стентов в коронарных артериях в ранние сроки после эндоваскулярной реваскуляризации миокарда. Ru 2349 919 C1.

4. Калинин Р.Е. Способ прогнозирования развития рестенотического процесса после оперативных вмешательств на магистральных артериях у больных облитериющим атеросклерозом артерий нижних конечностей. RU 2319 452.

5. Каминный А.И., Мешков А.Н., Шувалова Ю.А. Способ прогнозирования развития рестеноза после стентирования коронарных артерий стентами без лекарственного покрытия. RU 2395 091.

6. Пирадов М.А., Танашян М.М., Процкий С.В., Гуща А.О., Метелкина Л.П., Давыденко И.С. Способ прогнозирования возникновения острого тромбоза или рестеноза магистральных артерий головы после эндоваскулярной ангиопластики со стентированием. RU 2595485С1.5C1

7. Калинин Р.Е., Сучков И.А., Климентова Э.А., Егоров А.А. К вопросу о роли апоптоза в развитии атеросклероза и рестеноза зоны реконструкции. Новости хирургии. 2020;28(4):418-427.

8. Калинин Р.Е., Сучков И.А., Климентова Э.А., Егоров А.А. Маркеры апоптоза и пролиферации клеток при воспалительно-фибропролиферативных заболеваниях сосудистой стенки (обзор). Современные технологии в медицине. 2020;12(4):119-128.

9. Banfalvi G. Methods to detect apoptotic cell death. Apoptosis. 2017;22(2):306-323. doi: 10.1007/s10495-016-1333-3.

Изобретение относится к медицине, а именно к сосудистой хирургии, и может быть использовано при лечении облитерирующего атеросклероза артерий нижних конечностей. Способ включает определение белков Вах и sFas в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа. При повышении количества белка Вах до 34,8±7,7 нг/мл в первый час и до 32,2±5,2 нг/мл в первые сутки и увеличении количества sFas до 0,58±0,24 нг/мл на 21 сутки после эндоваскулярных вмешательств на магистральных артериях нижних конечностей прогнозируют развитие рестеноза зоны реконструкции через 9-12 месяцев после операции. Использование изобретения позволяет разработать эффективный способ прогнозирования развития рестеноза после эндоваскулярных вмешательств на магистральных артериях нижних конечностей.

Способ прогнозирования развития рестеноза после эндоваскулярных вмешательств на магистральных артериях нижних конечностей у пациентов с облитерирующим атеросклерозом артерий нижних конечностей, включающий определение белков Вах и sFas в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа, отличающийся тем, что при повышении количества белка Вах до 34,8±7,7 нг/мл в первый час и до 32,2±5,2 нг/мл в первые сутки и увеличении количества sFas до 0,58±0,24 нг/мл на 21 сутки после эндоваскулярных вмешательств на магистральных артериях нижних конечностей прогнозируют развитие рестеноза зоны реконструкции через 9-12 месяцев после операции.