ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИЛИ ПРОФИЛАКТИКИ ГЕСТАЦИОННОГО САХАРНОГО ДИАБЕТА Российский патент 2022 года по МПК A61K35/747 A61P3/10 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

[0001] Настоящее изобретение относится к использованию пробиотических бактерий, в частности к использованию штамма молочнокислых бактерий для лечения или профилактики гестационного сахарного диабета (ГСД). Также предлагаются способы использования бактерий и составов, содержащих бактерии.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0002] В ходе экономического развития в Новой Зеландии (НЗ)(1) и в других развитых странах, факторы образа жизни, в частности изменения в структуре потребления продуктов питания, привели к широко известным и усиливающимся проблемам с ожирением и связанными с ним заболеваниями, включая гестационный сахарный диабет (ГСД)(2).

[0003] Было показано, что избыточный вес до беременности и ожирение составляют 46% от общего количества случаев ГСД(3) из–за: избыточного увеличения веса во время беременности, предыдущего ГСД, или генетической предрасположенности к диабету, синдрома поликистозных яичников (СПКЯ), высокого возраста и большого количества родов в прошлом, что также является факторами риска(4). Сам по себе ГСД увеличивает риск преэклампсии, выкидыша, преждевременных родов, макросомии, вызывания родов искусственными методами и кесарева сечения.(2,3). ГСД также увеличивает риск дальнейшего ожирения матери и ребенка, и последующего сахарного диабета 2 типа(5).

[0004] В настоящее время отсутствует международный консенсус по диагностическим показателям ГСД. Одним из диагностических показателей Международной ассоциации групп изучения диабета и беременности (МАГИДБ) является пороговое значение перорального глюкозотолерантного теста, составляющее ≥5,1 ммоль/л (уровень глюкозы в плазме натощак) или составляющее ≥10 ммоль/л через 1 час, или ≥8,5 ммоль/л через 2 часа после приема 75 г глюкозы. В рекомендациях Министерства здравоохранения Новой Зеландии (НЗ) для ГСД указывается более высокое исходное значение глюкозотолерантного теста и его пороговое значение через 2 часа уровень глюкозы в (плазме натощак ≥5,5 ммоль/л или ≥9 ммоль/л через 2 часа после приема 75 г глюкозы.)(1).

[0005] Современное лечение или профилактика ГСД обычно основывается на поддержании здорового образа жизни пациента. Профилактика ГСД включает поддержание нормального веса и уровня сахара в крови во время беременности путем диетической терапии и регулярных физических упражнений. Лечение может также включать ежедневное тестирование уровня глюкозы в крови и инъекции инсулина. Диетическая терапия является еще одним методом, используемым в настоящее время для профилактики ГСД.

[0006] Таким образом, существует потребность в создании способов и составов для лечения или профилактики ожирения и связанных с ним заболеваний, в частности ГСД, и, в частности, способов и составов, использующих или содержащих другие штаммы молочнокислых бактерий. Также существует потребность в способах и составах для лечения или профилактики ГСД, которые не связаны с изменениями рациона питания в ходе диетической терапии. Также необходима разработка способов и составов для профилактики или уменьшения рисков, связанных с ГСД, или осложнениями ГСД.

[0007] Целью настоящего изобретения является нахождение пути к достижению одного или нескольких из этих требуемых результатов или, по меньшей мере, предоставление общественности пригодного выбора.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩЕСТВА ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0008] В первом аспекте предлагается способ лечения или профилактики ГСД у пациента, включающий введение штамма Lactobacillus rhamnosus HN001, депонированного в AGAL 18 августа 1997 г. под номером NM97/09514, нуждающемуся в этом пациенту.

[0009] В одном варианте осуществления, штамм L. rhamnosus HN001 вводят в форме состава с физиологически приемлемым разбавителем, адъювантом, веществом носителем или эксципиентом.

[0010] В одном варианте осуществления, штамм HN001 является единственной введенной пробиотической бактерией.

[0011] В одном варианте осуществления, штамм HN001 вводят с одним или несколькими пребиотиками.

[0012] В одном варианте осуществления, указанный физиологически приемлемый разбавитель, адъювант, вещество носитель или эксципиент представляет собой пищевой продукт. В одном варианте осуществления, пищевой продукт представляет собой кисломолочный продукт, йогурт, сыр, молочный напиток или сухое молоко.

[0013] В соответствии с другим вариантом осуществления, состав представляет собой лекарственный препарат, а указанный эксципиент или разбавитель представляет собой фармацевтически приемлемый разбавитель, адъювант, вещество носитель или эксципиент.

[0014] В другом аспекте предлагается способ лечения или профилактики одного или нескольких рисков, связанных с ГСД, или одного или нескольких осложнений ГСД у пациента; способ включающий введение штамма Lactobacillus rhamnosus HN001, депонированного в AGAL 18 августа 1997 г. под номером NM97/09514, нуждающемуся в этом пациенту.

[0015] В вариантах осуществления, где пациент представляет собой плод в утробе матери, способ лечения или профилактики одного или нескольких рисков, связанных с ГСД, или одного или нескольких осложнений ГСД у пациента, включает введение матери штамма L. rhamnosus HN001 или состава, содержащего штамм L. rhamnosus HN001. Следует понимать, что в таких вариантах осуществления, такое введение пациенту может рассматриваться как опосредованное введение. В одном варианте осуществления, состав представляет собой молочную смесь для беременных и кормящих или добавку в молочную смесь для беременных и кормящих.

[0016] В некоторых вариантах осуществления, где пациент представляет собой новорожденного, младенца или ребенка, способ лечения или профилактики одного или нескольких рисков, связанных с ГСД, или одного или нескольких осложнений ГСД у пациента, включает введение пациенту состава, содержащего штамм L. rhamnosus HN001. Следует понимать, что в таких вариантах осуществления, такое введение пациенту может рассматриваться как прямое введение.

[0017] В других вариантах осуществления, где пациент представляет собой новорожденного, младенца или ребенка, находящихся на грудном вскармливании, способ лечения или профилактики одного или нескольких рисков, связанных с ГСД, или одного или нескольких осложнений ГСД у пациента, включает введение матери штамма L. rhamnosus HN001 или состава, содержащего штамм L. rhamnosus HN001. Следует понимать, что в таких вариантах осуществления, такое введение пациенту может рассматриваться как опосредованное введение.

[0018] Состав может представлять собой смесь, например, молочную смесь для беременных и кормящих, молочную смесь второго уровня, молочную смесь третьего уровня или диетический продукт, включая гипоаллергенные варианты таких составов.

[0019] В предпочтительных вариантах осуществления, где пациент является взрослым субъектом, способ включает введение пациенту состава, содержащего штамм L. rhamnosus HN001. Предпочтительно состав представляет собой добавку, смесь, диетический продукт или пищевой продукт.

[0020] В некоторых вариантах осуществления, штамм L. rhamnosus HN001 находится в репродуктивно жизнеспособной форме, предпочтительно в репродуктивно жизнеспособной форме и количестве. В других вариантах осуществления, штамм L. rhamnosus HN001 убивают, лизируют, фракционируют или ослабляют.

[0021] Изобретение далее относится к штамму L. rhamnosus HN001 или его производному для лечения или профилактики ГСД, или для лечения или профилактики одного или нескольких рисков, связанных с ГСД, или одного или нескольких осложнений ГСД, и к штамму L. rhamnosus HN001 или его производному при производстве состава для лечения или профилактики ГСД, или для лечения или профилактики одного или нескольких рисков, связанных с ГСД, или одного или нескольких осложнений ГСД. Состав может представлять собой описанный ниже состав, включающий, например, пищевой продукт или лекарственное средство.

[0022] Следует понимать, что изобретением предполагается использование L. rhamnosus HN001 при производстве состава в соответствии с изобретением, например, состава для лечения или профилактики ГСД у пациента.

[0023] В одном варианте осуществления, состав пригоден для перорального введения. В другом варианте осуществления, состав пригоден для парентерального введения. В вариантах осуществления, относящихся к профилактике одного или нескольких рисков, связанных с ГСД, или одного или нескольких осложнений ГСД у плода в утробе матери, состав пригоден для перорального введения беременной матери в период беременности.

[0024] В различных вариантах осуществления, способ представляет собой способ лечения или профилактики ГСД у пациента, имеющего увеличенный риск заболевания ГСД. В одном примере, способ представляет собой способ лечения или профилактики ГСД у пациента, который ранее болел ГСД. В одном примере, способ представляет собой способ лечения или профилактики ГСД у пациента старше 35 лет, например у пациента старше 35 лет на момент зачатия. В другом примере, способ представляет собой способ лечения или профилактики ГСД у пациента, который ранее имел беременность.

[0025] В различных вариантах осуществления, пациент имеет индекс массы тела (ИМТ) менее чем 30 кг/м².

[0026] В одном варианте осуществления, способ представляет собой способ профилактики повторного возникновения ГСД у пациента, который ранее болел ГСД, причем способ включает введение нуждающемуся пациенту эффективного количества штамма HN001 или его производного.

[0027] В одном варианте осуществления, способ включает начало введения штамма HN001 после первого триместра беременности. В одном варианте осуществления, введение штамма HN001 начинается между 14 и 16 неделями беременности.

[0028] В одном аспекте изобретение относится к способу снижения средних уровней глюкозы в крови натощак у пациента; способу, включающему введение нуждающемуся пациенту эффективного количества штамма HN001 или его производного.

[0029] В одном варианте осуществления, средний уровень глюкозы в крови натощак составляет ниже 4,35 ммоль/л.

[0030] Данное изобретение в широком смысле состоит из частей, элементов и признаков, упомянутых или указанных в описании заявки по отдельности или вместе, и в любых или всех комбинациях из двух или более указанных частей, элементов или признаков и где упомянутые конкретные целые числа, которые имеют известные эквиваленты в отрасли техники, к которой относится данное изобретение, такие известные эквиваленты считаются включенными в данное описание, как если бы они были изложены по отдельности.

[0031] Термин «содержащий», используемый в этом описании, означает «состоящий, по меньшей мере, частично из». При интерпретации каждого утверждения в этом описании, которое включает термин «содержащий», могут присутствовать и другие значения, кроме тех, которые предварены этим термином. Подобные термины, такие как «содержать» и «содержит», должны интерпретироваться таким же образом.

[0032] В этом описании, где была сделана ссылка на патентные описания, другие внешние документы или другие источники информации, это сделано с целью создания контекста для обсуждения особенностей изобретения. Если специально не оговорено иное, то ссылка на такие внешние документы не должна рассматриваться как признание того, что такие документы или такие источники информации в любой юрисдикции являются известным уровнем техники или представляют часть общих знаний в отрасли техники, к которой относится данное изобретение.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0033] На фиг. 1 представлена диаграмма статуса участников в ходе исследования.

[0034] На фиг. 2 представлены взаимосвязи штамма HN001 с частотой возникновения ГСД, разделенные по: A) Возрасту ≥35 лет и <35 лет; B) ИМТ ≥ 30 кг/м² и <30 кг/м²; C) Генетической предрасположенности к ГСД; и D) Системному лечению антибиотиками на момент регистрации.

[0035] На фиг. 3 представлены графики распространенности ГСД по подгруппам. На левом графике показано влияние введения штамма HN001 на пациентов, которые ранее были беременны, по сравнению с теми, кто не имел беременности (количества родов в прошлом, слева), а на правом графике показано влияние введения штамма HN001 на пациентов старше 35 лет и на лиц моложе 35 лет (материнский возраст, справа).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0036] В настоящем изобретении впервые признается пригодное влияние введения молочнокислых бактерий штамма L. rhamnosus HN001 на частоту возникновения и тяжесть ГСД.

[0037] Соответственно, в первом аспекте предлагается способ лечения или профилактики ГСД у пациента, включающий введение штамма Lactobacillus rhamnosus HN001 или его производного, депонированного в AGAL 18 августа 1997 г. под номером NM97/09514, нуждающемуся в этом пациенту.

[0038] В дополнительном аспекте предлагается способ лечения или профилактики рисков, связанных с ГСД, или осложнений ГСД у пациента; способ включающий введение штамма Lactobacillus rhamnosus HN001 или его производного, нуждающемуся в этом пациенту. Связанные с ГСД риски у беременных пациентов, например, включают, не ограничиваясь, гипертонию, инфекции мочеполовой системы, кесарево сечение и повышенный риск возникновения диабета 2 типа. Связанные с ГСД риски или осложнения ГСД у плода в утробе матери, новорожденного, младенца, ребенка или взрослых пациентов (в частности, у пациентов, чья родная мать болела ГСД во время внутриутробного развития), представляют собой, например, не ограничиваясь, преждевременные роды, дистоцию плечиков плода, макросомию, врожденные патологии и неонатальные осложнения, в частности, гипогликемию, желтуху и респираторный дистресс–синдром, диабет 2 типа, сердечно–сосудистые заболевания, ожирение и проблемы с обменом веществ.

[0039] Хотя и предполагаются различные пути и способы введения, но в настоящее время предпочтительным является пероральное введение штамма L. rhamnosus HN001, например, в виде состава, подходящего для перорального введения. Следует понимать, что в определенных обстоятельствах могут использоваться или являться предпочтительными другие пути и способы введения. Например, парентеральный путь может использоваться с составом, содержащим убитый или ослабленный штамм L. rhamnosus HN001 или его производное.

[0040] Термин «пероральное введение» охватывает пероральное, внутриротовое, энтеральное и внутрижелудочное введение.

[0041] Термин «парентеральное введение» охватывает, не ограничиваясь, местное (включая введение в любую дермальную, эпидермальную или слизистую поверхность), подкожное, внутривенное, внутрибрюшное и внутримышечное введение.

[0042] «Пациент» представляет собой животное, предпочтительно млекопитающее, более предпочтительно млекопитающее домашнее животное или человека. Предпочтительными млекопитающими домашними животными являются кошки, собаки и лошади. В одном варианте осуществления, человек является взрослым, ребенком, младенцем, новорожденным или плодом в утробе матери. В различных вариантах осуществления, ребенок, младенец или новорожденный представляет собой ребенка, младенца или новорожденного, находящихся на грудном вскармливании.

[0043] Термин «лечение» и его производные слова следует интерпретировать в самом широком смысле. Термин не подразумевает, что пациент подвергается лечению до полного выздоровления. Соответственно, термин «лечить» в широком смысле подразумевает улучшение и/или профилактику появления симптомов или тяжести конкретного состояния.

[0044] Следует понимать, что лечение подразумевает: профилактическое лечение, например, профилактическое лечение пациента, в частности пациента, обладающего: ожидаемым или установленным повышенным риском развития ГСД; и/или пациента, пытающегося забеременеть или недавно забеременевшего; или профилактическое лечение одного или нескольких связанных с ГСД рисков или одного или нескольких осложнений ГСД у плода в утробе матери путем опосредованного введения матери состава в соответствии с изобретением.

[0045] В другом примере, профилактическое лечение одного или нескольких связанных с ГСД рисков или одного или нескольких осложнений ГСД у новорожденного, младенца или ребенка представляет собой опосредованное введение кормящей матери состава в соответствии с изобретением.

[0046] Следует понимать, что лечение подразумевает терапевтическое лечение, например, лечение ГСД или одного или нескольких симптомов или рисков, связанных с ГСД, включая, в частности, лечение новорожденного, младенца или ребенка путем опосредованного введения матери пациента состава в соответствии с изобретением.

[0047] Соответственно, изобретение относится к способу лечения или профилактики ГСД у беременного пациента; способу, включающему введение штамма L. rhamnosus HN001 или состава, содержащего штамм L. rhamnosus HN001, беременному пациенту.

[0048] В некоторых вариантах осуществления, возраст беременного пациента составляет, например, 35 лет или старше.

[0049] В некоторых вариантах осуществления, беременный пациент имеет анамнез ГСД.

[0050] В некоторых вариантах осуществления, штамм L. rhamnosus HN001 или состав, содержащий штамм L. rhamnosus HN001, вводится между 14–16 неделями беременности до родов.

[0051] В некоторых вариантах осуществления, штамм L. rhamnosus HN001 или состав, содержащий штамм L. rhamnosus HN001, вводится между 14–16 неделями беременности и 6 месяцами после родов.

[0052] Соответственно, изобретение относится к способу профилактики одного или нескольких, связанных с ГСД, рисков или одного или нескольких осложнений ГСД у плода в утробе матери; способу, включающему введение штамма L. rhamnosus HN001 или состава, содержащего штамм L. rhamnosus HN001, матери пациента.

[0053] Также изобретение относится к способу профилактики одного или нескольких, связанных с ГСД, рисков или одного или нескольких осложнений ГСД у новорожденного, младенца или ребенка; способу, включающему введение штамма L. rhamnosus HN001 или состава, содержащего штамм L. rhamnosus HN001, матери пациента.

[0054] Также предметом рассмотрения является способ лечения одного или нескольких, связанных с ГСД, рисков или одного или нескольких осложнений ГСД у младенца или ребенка, включающий введение состава, состоящего или в основном состоящего из штамма L. rhamnosus HN001.

[0055] В некоторых вариантах осуществления, возраст младенца или ребенка составляет один или несколько лет.

[0056] В некоторых вариантах осуществления, младенец или ребенок обладает пищевой аллергией.

[0057] В некоторых вариантах осуществления, считается, что младенец или ребенок подвержены одному или нескольким, связанным с ГСД, рискам или одному или нескольким осложнениям ГСД из–за предшествующей заболеваемости ГСД матери младенца или ребенка.

1 Штамм Lactobacillus rhamnosus HN001

[0058] Как описано в международной заявке на патент PCT/NZ98/00122 (опубликованной как WO 99/10476 и полностью включенной в настоящий документ), лиофилизированная культура Lactobacillus rhamnosus HN001 была депонирована 18 августа 1997 года под номером NM97/09514 в Аналитической лаборатории правительства Австралии (AGAL) и в Региональной лаборатории Нового Южного Уэльса, 1 Suakin Street, Pymble, NSW 2073, Australia. Этот депозитарий, признанный Будапештским договором о международном признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры, сейчас называется не AGAL, а называется Национальным институтом измерений Австралии (НИИА). Геномная последовательность штамма L. rhamnosus HN001 доступна в Генофонде под учетным номером: NZ_ABWJ00000000.

1.1 Морфологические свойства

[0059] Морфологические свойства штамма L. rhamnosus HN001 описываются ниже.

[0060] При выращивании в питательной среде де Мана–Рогоза–Шарпа, длина коротких или средних палочек с квадратными торцами в цепях, обычно составляет 0,7×1,1×2,0–4,0 мкм.

[0061] Каталазоотрицательные факультативные анаэробные палочки с оптимальной температурой роста 37±1°C и оптимальным pH, составляющим от 6,0 до 6,5, окрашиваются по Граму положительно, неподвижны и не образуют спор. Они являются факультативно гетероферментативными бактериями и не выделяют газ из глюкозы.

1.2 Ферментативные свойства

[0062] Для определения схемы брожения углеводов штамма L. rhamnosus HN001 использовали набор для ферментации сахара API 50 CH и получили показатель 5757177 (исходя из показателей 22 известных сахаров – см. патент PCT/NZ98/00122).

1.3 Дополнительное описание свойств

[0063] Штамм L. rhamnosus HN001 дополнительно характеризуется раскрытыми в патенте PCT/NZ98/00122 функциональными признаками, включающими его способность прилипать к эпителиальным клеткам кишечника человека, а также улучшать функции фагоцитов, ответных реакций антител, активность природных клеток–киллеров, и пролиферацию лимфоцитов, вызванную диетическим потреблением или модельными системами in vitro. Следует понимать, что специалистам в данной области техники известно и доступно множество разнообразных способов, которые можно использовать для подтверждения идентичности штамма L. rhamnosus HN001, причем примеры способов представляют собой ДНК–генотипоскопию, геномный анализ, секвенирование и соответствующие геномные и протеомные способы.

[0064] Как описано в данном документе, в некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения, используется живой штамм L. rhamnosus HN001. В других вариантах осуществления, используется производное штамма L. rhamnosus HN001.

[0065] В контексте данного документа, термин «производное» и его грамматические эквиваленты, используемые в отношении бактерии (включая использование в отношении конкретного штамма бактерии, в частности штамма L. rhamnosus HN001), подразумевает: мутантов и гомологов бактерии или полученных из бактерии; убитые или ослабленные бактерии, например, не ограничиваясь, бактерии: убитые нагреванием, лизированные, фракционированные, убитые под давлением, облученные и обработанные ультрафиолетом или светом; и вещество, полученное из бактерий, включающее, не ограничиваясь, составы клеточной оболочки бактерии, лизаты бактериальных клеток, лиофилизированные бактерии, пробиотические факторы из бактерий и тому подобное, где производное сохраняет пробиотическую активность. Способы получения таких производных, например, не ограничиваясь, одного или нескольких мутантов штамма L. rhamnosus HN001 или одного или нескольких пробиотических факторов, и, в частности, производных, пригодных для введения пациенту (например, в составе), хорошо известны в отрасли техники, к которой относится данное изобретение.

[0066] Следует понимать, что вышеописанные способы, подходящие для идентификации штамма L. rhamnosus HN001, пригодны для идентификации производных штамма L. rhamnosus HN001, включая, например, мутанты или гомологи штамма L. rhamnosus HN001 или, например, пробиотические факторы штамма L. rhamnosus HN001.

[0067] Термин «пробиотический фактор» относится к бактериальной молекуле, отвечающей за пробиотически опосредованную активность, и охватывает, не ограничиваясь, бактериальные ДНК–мотивы, поверхностные белки, малые органические кислоты, полисахариды или компоненты клеточной оболочки, в частности, липотейхоевые кислоты и пептидогликаны, или смесь любых из двух или более. Хотя, как отмечено выше, эти молекулы не были четко идентифицированы, и, не вдаваясь в теорию, данные молекулы будут присутствовать, если присутствует пробиотический организм.

[0068] Термин «пробиотическая активность» относится к способности определенных микроорганизмов стимулировать иммунную систему. Измерение типа и уровня активности пробиотического микроорганизма известно специалистам в отрасли техники, к которой относится данное изобретение: см., например, Mercenier et al. (2004), Leyer et al. (2004) или Cummings et al. (2004). Например, пробиотическая активность может оцениваться путем анализа секреции цитокинов МКПК.

[0069] Указание на сохранение пробиотической активности предназначено для того, чтобы показать, что производное пробиотического микроорганизма, например, мутант или гомолог пробиотического микроорганизма или ослабленный или убитый пробиотический микроорганизм, все еще обладает пригодной пробиотической активностью, или состав, содержащий пробиотический микроорганизм или его производное, способен сохранять пригодную пробиотическую активность. Хотя бактериальные молекулы, ответственные за опосредующую пробиотическую активность, и не были четко идентифицированы, однако молекулы, которые были предложены в качестве возможных кандидатов, представляют собой бактериальные ДНК–мотивы, поверхностные белки, малые органические кислоты, полисахариды и компоненты клеточной оболочки, в частности, липотейхоевые кислоты и пептидогликаны. Было высказано предположение, что они взаимодействуют с компонентами иммунной системы хозяина, обеспечивая иммуномодулирующее действие. Предпочтительной является остаточная активность, составляющая, по меньшей мере, около 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99 или 100% от активности необработанного (т.е. живого или не ослабленного) контрольного образца, а пригодные интервалы могут выбираться среди любых из этих значений (например, примерно от 35 до примерно 100%, примерно от 50 до примерно 100%, примерно от 60 до примерно 100%, примерно от 70 до примерно 100%, примерно от 80 до примерно 100% и примерно от 90 до примерно 100%).

[0070] Штамм L. rhamnosus HN001 можно выращивать в достаточных количествах путем использования традиционных технологий на твердой подложке и путем жидкой ферментации, хорошо известных в отрасли техники, к которой относится данное изобретение, чтобы использовать его в соответствии с настоящим изобретением. Например, штамм L. rhamnosus HN001 можно получать в массовых объемах для приготовления лекарственной формы путем использования питательной пленки или технологий выращивания методом погруженной культуры, например, в условиях, описанных в патенте WO 99/10476. Вкратце, рост осуществляется в аэробных условиях при любой температуре, достаточной для роста организма. Например, для штамма L. rhamnosus HN001 диапазон температур составляет от 30 до 40 °C, а предпочтительной является температура 37 °C. Значение РН питательной среды слабокислое, предпочтительно составляющее от 6,0 до 6,5. Времени инкубации достаточно, чтобы изолят достиг фазы стационарного роста.

[0071] Клетки штамма L. rhamnosus HN001 можно собирать способами, хорошо известными в отрасли техники, к которой относится данное изобретение, например, традиционными методами фильтрации или осаждения (напр., центрифугирование), или собирать в сухом виде с использованием циклонной системы. Клетки штамма L. rhamnosus HN001 могут использоваться немедленно или храниться необходимое время с использованием стандартных способов, предпочтительно, лиофилизированными или охлажденными, при температуре от –20 до 6 °С, предпочтительно при температуре –4 °С.

2 Составы

[0072] Состав, пригодный для использования в настоящем изобретении, может представлять собой лекарственную форму в виде: пищевого продукта, напитка, пищевой добавки, добавки к напитку, диетической добавки, питательного продукта, лечебного питания, продукта для энтерального или парентерального питания, заменителя пищи, космецевтического средства, нутрицевтика или лекарственного препарата. Соответствующие лекарственные формы могут быть получены специалистом в отрасли техники, к которой относится данное изобретение, с учетом навыка и идеи данной спецификации.

[0073] В одном варианте осуществления, составы, пригодные для использования в настоящем изобретении, представляют собой любой пищевой потребительский продукт, который способен выступать в роли вещества носителя для бактерии или производного бактерии. Примерами подходящих пищевых потребительских продуктов являются: порошки, жидкости, кондитерские изделия, включая шоколад, гели, мороженое, восстановленные фруктовые продукты, энергетические батончики, брикетированный пищевой концентрат, батончики мюсли, пастообразные смеси, соусы, соусы для макания, молочные продукты, включая йогурты и сыры, напитки, включая молочные и немолочные напитки (молочные и йогуртовые напитки), сухое молоко, спортивные добавки, в том числе спортивные добавки на молочной и немолочной основе, пищевые добавки, например протеиновые обсыпки, пищевые добавки, включая таблетки для ежедневного употребления, смеси для докорма после отъема от груди, и йогурты и смеси, например, молочную смесь для беременных и кормящих в форме порошка или жидкости, включая гипоаллергенные варианты осуществления таких составов. В этом варианте осуществления, предпочтительный состав, пригодный для использования в настоящем изобретении, может представлять собой молочную смесь для беременных и кормящих в форме порошка или жидкости. Пригодные для использования в настоящем изобретении нутрицевтические составы могут быть представлены в аналогичных формах.

[0074] Примерами смесей, в частности, смеси для беременных и кормящих в форме порошка или жидкости являются нижеуказанные смеси. Следует понимать, что следующие составы являются только ориентировочными, а изменения могут быть сделаны в соответствии с известными принципами составления таких продуктов. Например, к указанным молочным белкам могут добавляться немолочные источники белка. В равной степени могут быть предложены гипоаллергенные варианты этих продуктов, в которых источник белка полностью или частично гидролизован. Такие гидролизаты известны в отрасли техники, к которой относится данное изобретение. В одном примере молочной смеси для беременных и кормящих, пригодной для использования в настоящем изобретении, содержится (мас./мас.)

30–60% лактозы

15–35% растительных масел

0–40% сухого обезжиренного молока

0–40% сывороточного белка, в частности КСБ или ИСБ, предпочтительно 80% КСБ (КСБ80)

0,001–50% штамма L. rhamnosus HN001.

[0075] В другом примере молочной смеси для беременных и кормящих, пригодной для использования в настоящем изобретении, содержится (мас./мас.)

40–60% лактозы

20–30% растительных масел

10–15% сухого обезжиренного молока

6–8% сывороточного белка, предпочтительно КСБ80

0,001–10% штамма L. rhamnosus HN001.

[0076] В другом примере молочной смеси для беременных и кормящих, содержится (мас./мас.)

40–60% лактозы

20–30% растительных масел

10–15% сухого обезжиренного молока

6–8% сывороточного белка, предпочтительно КСБ80

0,001–5% штамма L. rhamnosus HN001.

[0077] В другом примере молочной смеси для беременных и кормящих, пригодной для использования в настоящем изобретении, содержится (мас./мас.)

40–60% лактозы

20–30% растительных масел

10–15% сухого обезжиренного молока

6–8% сывороточного белка, предпочтительно КСБ80

0,001–2% штамма L. rhamnosus HN001.

[0078] Любая из этих смесей может также содержать от 0,1 до 4 мас.%, предпочтительно от 2 до 4 мас.%, как минимум одного витаминного премикса, минерального премикса, лецитина, одного или нескольких антиоксидантов, одного или нескольких стабилизаторов или одного или нескольких нуклеотидов, или смесь любых двух или более из них. В некоторых вариантах осуществления, эти смеси детского питания составляются таким образом, чтобы обеспечить энергетическую ценность продукта от 2700 до 3000 кДж/л.

[0079] В соответствии с изобретением, примеры пищевых потребительских продуктов, например, молочные напитки (молочные и йогуртовые напитки), как правило, в дополнение к штамму L. rhamnosus HN001 или его производному, содержат и могут состоять из источника белка (источника молочного белка), источника липидов, источника углеводов. Также могут содержаться ароматизаторы, красители и другие добавки, вещества носители или эксципиенты, которые хорошо известны специалистам в отрасли техники, к которой относится данное изобретение.

[0080] Дополнительным примером пищевого потребительского продукта, пригодного для использования в настоящем изобретении, является система доставки Unistraw™ (Unistraw International Limited, Австралия), как описано в международной заявке на патент PCT/AU2007/000265 (опубликованной как WO 2007/098564) и международной заявке на патент PCT/AU2007/001698 (опубликованной как WO 2008/055296), каждая из которых полностью включена в настоящий документ. Специалистам в данной области следует понимать, что для использования в таких системах доставки штамм L. rhamnosus HN001 и его производные, необязательно, вместе с одним или несколькими дополнительными пробиотическими факторами или пробиотическими препаратами, могут наноситься на подложку (например, на водорастворимую гранулу).

[0081] В альтернативных вариантах осуществления, составы, пригодные для использования в настоящем изобретении, могут составляться таким образом, чтобы их можно было вводить пациенту по любому выбранному пути введения, включая, не ограничиваясь, пероральный прием или парентеральное введение (включая местное, подкожное, внутримышечное и внутривенное).

[0082] Например, нутрицевтический состав, для применения в соответствии с изобретением, может представлять собой диетическую добавку (напр., капсулу, мини–пакет или таблетку) или пищевой продукт (напр., молоко, сок, безалкогольный напиток, травяной чай или кондитерские изделия). Состав может также включать другие питательные вещества, например, белок, углеводы, витамины, минералы или аминокислоты. Состав может иметь форму, подходящую для перорального применения, например, таблетки, твердой или мягкой капсулы, водной или масляной суспензии или сиропа; или форму, подходящую для парентерального применения, например, водного раствора пропиленгликоля или буферного водного раствора. Количество активного ингредиента в нутрицевтическом составе в значительной степени зависит от конкретной потребности пациента. Как известно специалистам в отрасли техники, к которой относится данное изобретение, количество также зависит от пути введения и возможного совместного использования других пробиотических факторов или пробиотических препаратов.

[0083] Следует понимать, что в некоторых вариантах осуществления, составы, в соответствии с изобретением, могут составляться таким образом, чтобы иметь требуемую калорийность, например, чтобы доставлять требуемое количество калорий или рекомендуемый процент ежедневного потребления калорий. Например, можно составить пищевой потребительский продукт, содержащий примерно от 200 до 2000 кДж на порцию, или примерно от 500 кДж до 2000 кДж на порцию, или примерно от 1000 до 2000 кДж на порцию.

[0084] Таким образом, лекарственный препарат, пригодный для использования в настоящем изобретении, может быть составлен с соответствующим фармацевтически приемлемым носителем (включая эксципиенты, разбавители, вспомогательные вещества и их комбинации), выбранным с учетом предполагаемого пути введения и обычной фармацевтической практики. Например, состав, пригодный для использования в настоящем изобретении, может вводиться перорально в виде порошка, жидкости, таблетки или капсулы или местно, в виде мази, крема или лосьона. Подходящие составы могут содержать по мере необходимости дополнительные реагенты, включая эмульгирующие, антиоксидантные, ароматизирующие или красящие реагенты, и могут адаптироваться для немедленного, замедленного, модифицированного, устойчивого, импульсного или контролируемого высвобождения.

[0085] Термин «фармацевтически приемлемое вещество носитель» предназначенный для обозначения вещества носителя, охватывает, не ограничиваясь, эксципиент, разбавитель или вспомогательное вещество, где фармацевтически приемлемое вещество носитель включает: растворитель, дисперсионную среду, оболочку, антибактериальный и противогрибковый препарат, а также изотонический и задерживающий абсорбцию реагент или их смесь, которое можно вводить пациенту в качестве компонента описанного здесь состава и которое не снижает активность состава и не токсично при введении в дозах, достаточных для доставки эффективного количества соединения или состава, пригодного для использования в настоящем изобретении. Лекарственные формы можно вводить перорально, назально или парентерально (включая местное, внутримышечное, внутрибрюшинное, подкожное и внутривенное введение).

[0086] В некоторых вариантах осуществления, состав, в соответствии с изобретением, (например, нутрицевтический или лекарственный препарат по изобретению) может быть представлен в виде капсулы. Капсулы могут содержать любые типичные фармацевтически приемлемые материалы, например, желатин или целлюлозу. Таблетки составляются в соответствии с обычными процедурами путем прессования смесей активных ингредиентов с твердым носителем и скользящим веществом. Примерами твердых носителей являются крахмал и сахарный бентонит. Активные ингредиенты также вводятся в виде таблетки с твердой оболочкой или капсулы, содержащей связующее вещество, например лактозу или маннитол, обычный наполнитель и таблетирующий реагент. Лекарственные препараты могут также вводиться парентерально. Примеры парентеральных лекарственных форм включают: водные растворы, изотонический раствор или 5% раствор активного реагента в глюкозе, или другие хорошо известные фармацевтически приемлемые эксципиенты. В качестве эксципиентов для доставки терапевтического реагента могут использоваться циклодекстрины или другие солюбилизирующие агенты, хорошо известные специалистам в отрасли техники, к которой относится данное изобретение.

[0087] В некоторых вариантах осуществления, состав, в соответствии с изобретением, содержит живой штамм L. rhamnosus HN001. Способы получения таких составов хорошо известны в отрасли техники, к которой относится данное изобретение, а один из таких способов приведен здесь в качестве примера.

[0088] В других вариантах осуществления, состав, в соответствии с изобретением, содержит одно или несколько производных штамма L. rhamnosus HN001. Способы получения таких составов хорошо известны в отрасли техники, к которой относится данное изобретение, и могут использовать стандартные микробиологические и фармацевтические практики.

[0089] Следует понимать, что в такие составы могут включать широкий спектр добавок или веществ носителей, например, для улучшения или сохранения жизнеспособности бактерий или для повышения терапевтической эффективности штамма L. rhamnosus HN001 или одного или нескольких производных штамма L. rhamnosus HN001. Например, могут включаться добавки, в частности, поверхностно–активные вещества, увлажнители, смачиватели, связующие, диспергирующие вещества, стабилизаторы, пенетранты, и так называемые стрессовые добавки для улучшения жизнеспособности бактериальных клеток, роста, репликации и выживаемости (например, хлорид калия, глицерин, хлорид натрия и глюкоза), а также криопротекторы, в частности, мальтодекстрин. Добавки могут также включать составы, которые способствуют поддержанию жизнеспособности микроорганизмов при длительном хранении, например, нерафинированное кукурузное масло или «обращенные» эмульсии, содержащие смесь масел и восков сверху, а воду, альгинат натрия и бактерии внутри.

[0090] В некоторых вариантах осуществления, штамм L. rhamnosus HN001 находится в репродуктивно жизнеспособной форме и количестве.

[0091] Состав может содержать источник углеводов, в частности дисахарид, включая, например, сахарозу, фруктозу, глюкозу или декстрозу. Предпочтительно источником углеводов может быть аэробный или анаэробный источник, используемый штаммом L. rhamnosus HN001.

[0092] В таких вариантах осуществления, состав, предпочтительно, способен поддерживать репродуктивную жизнеспособность штамма L. rhamnosus HN001 в течение периода, превышающего примерно две недели, предпочтительно превышающего: примерно один месяц, примерно два месяца, примерно три месяца, примерно четыре месяца, примерно пять месяцев, а более предпочтительно превышающего примерно шесть месяцев, и наиболее предпочтительно превышающего, по меньшей мере, примерно от 2 до 3 лет или более.

[0093] В некоторых вариантах осуществления, состав для лечения или профилактики ГСД, или связанных с ГСД рисков или осложнений ГСД, содержит пробиотик, содержащий штамм L. rhamnosus HN001, и пребиотик, в частности, фруктоолигосахариды, галактоолигосахариды, олигосахариды грудного молока и их смеси.

[0094] В другом варианте осуществления, способ для лечения или профилактики ГСД, или связанных с ГСД рисков или осложнений ГСД у пациента, включает введение физическому лицу эффективного количества состава, содержащего штамм L. rhamnosus HN001 и пребиотик, в частности, фруктоолигосахариды, галактоолигосахариды, олигосахариды грудного молока и их смеси. В некоторых вариантах осуществления, состав для перорального применения выполнен таким образом, чтобы позволить введение достаточного количества штамма L. rhamnosus HN001 для формирования популяции в желудочно–кишечном тракте пациента при приеме внутрь. Сформированная популяция может быть транзиторной или постоянной популяцией.

[0095] В теории, одной колониеобразующей единицы (КОЕ) должно быть достаточно для формирования популяции штамма L. rhamnosus HN001 у пациента, но в реальных ситуациях для этого потребуется минимальное количество единиц. Следовательно, на терапевтическую эффективность лечебных механизмов, которые зависят от жизнеспособной, живой популяции пробиотических бактерий, будет влиять количество единиц, вводимых пациенту.

[0096] Заявители определили, как представлено в примерах, что доза 6 × 10⁹ КОЕ штамма L. rhamnosus HN001 в день является достаточной (но не является необходимой) для формирования популяции в желудочно–кишечном тракте пациента. Соответственно, в одном примере, состав, приготовленный для введения, будет достаточным при использовании, по меньшей мере, около 6 × 10⁹ КОЕ штамма L. rhamnosus HN001 в день.

[0097] Способы определения присутствия популяции микрофлоры кишечника, в частности штамма L. rhamnosus HN001, в желудочно–кишечном тракте пациента хорошо известны в отрасли техники, к которой относится данное изобретение, и примеры таких способов представлены здесь. В некоторых вариантах осуществления, присутствие популяции штамма L. rhamnosus HN001 может определяться непосредственно, например, путем анализа одной или нескольких проб, полученных у пациента, и определения в указанной пробе наличия или количества штамма L. rhamnosus HN001. В других вариантах осуществления, присутствие популяции штамма L. rhamnosus HN001 можно определить опосредованно, например, путем наблюдения за уменьшением симптомов ГСД или уменьшением количества другой кишечной флоры в полученной от пациента пробе. Предусматриваются и комбинации таких способов.

[0098] Эффективность состава, пригодного для использования в настоящем изобретении, может оцениваться как in vitro, так и in vivo. Смотрите приведенные ниже примеры. Вкратце, состав можно проверить на его способность лечения или профилактики ГСД или изменение толерантности к глюкозе. Для исследований in vivo состав можно давать или вводить животной модели (напр., мыши) или вводить пациентам (включая беременных женщин), а затем оценивать его влияние на частоту возникновения и тяжесть ГСД или на толерантность к глюкозе и связанные с ней состояния. На основании результатов можно определить соответствующий диапазон доз и путь введения.

[0099] Методы расчета подходящей дозы могут зависеть от природы активного вещества в составе. Например, если состав содержит живой штамм L. rhamnosus HN001, то доза может рассчитываться с учетом количества присутствующих живых бактерий. Например, как описано в примерах ниже, доза может устанавливаться с учетом количества колониеобразующих единиц (КОЕ), которые следует вводить в день. В примерах, где состав содержит одно или несколько производных штамма L. rhamnosus HN001, доза может рассчитываться с учетом количества или концентрации присутствующего производного штамма L. rhamnosus HN001. Например, для состава, содержащего клеточный лизат штамма L. rhamnosus HN001, доза может рассчитываться с учетом концентрации, присутствующего в составе, клеточного лизата штамма L. rhamnosus HN001.

[00100] В качестве общего примера, предполагается введение примерно от 1×106 КОЕ до примерно 1×1012 КОЕ штамма L. rhamnosus HN001 на кг массы тела в день, предпочтительно примерно от 1×106 КОЕ до примерно 1×1011 КОЕ/кг/день, примерно от 1×106 КОЕ до примерно 1×1010 КОЕ/кг/день, примерно от 1×106 КОЕ до примерно 1×109 КОЕ/кг/день, примерно от 1×106 КОЕ до примерно 1×108 КОЕ/кг/день, примерно от 1×106 КОЕ до примерно 5×107 КОЕ/кг/день, или примерно от 1×106 КОЕ до примерно 1×107 КОЕ/кг/день. Предпочтительно предполагается введение примерно от 5×106 КОЕ до примерно 5×108 КОЕ штамма L. rhamnosus HN001 на кг массы тела в день, предпочтительно примерно от 5×106 КОЕ до примерно 4×108 КОЕ/кг/день, примерно от 5×106 КОЕ до примерно 3×108 КОЕ/кг/день, примерно от 5×106 КОЕ до примерно 2×108 КОЕ/кг/день, примерно от 5×106 КОЕ до примерно 1×108 КОЕ/кг/день, примерно от 5×106 КОЕ до примерно 9×107 КОЕ/кг/день, примерно от 5×106 КОЕ до примерно 8×107 КОЕ/кг/день, примерно от 5×106 КОЕ до примерно 7×107 КОЕ/кг/день, примерно от 5×106 КОЕ до примерно 6×107 КОЕ/кг/день, примерно от 5×106 КОЕ до примерно 5×107 КОЕ/кг/день, примерно от 5×106 КОЕ до примерно 4×107 КОЕ/кг/день, примерно от 5×106 КОЕ до примерно 3×107 КОЕ/кг/день, примерно от 5×106 КОЕ до примерно 2×107 КОЕ/кг/день, или примерно от 5×106 КОЕ до примерно 1×107 КОЕ/кг/день.

[00101] В некоторых вариантах осуществления, периодическую дозу не следует изменять в зависимости от массы тела или других параметров пациента. В таких примерах, предполагается введение примерно от 1×106 КОЕ до примерно 1×1013 КОЕ штамма L. rhamnosus HN001 в день, предпочтительно примерно от 1×106 КОЕ до примерно 1×1012 КОЕ/день, примерно от 1×106 КОЕ до примерно 1×1011 КОЕ/день, примерно от 1×106 КОЕ до примерно 1×1010 КОЕ/день, примерно от 1×106 КОЕ до примерно 1×109 КОЕ/день, примерно от 1×106 КОЕ до примерно 1×108 КОЕ/день, примерно от 1×106 КОЕ до примерно 5×107 КОЕ/день или от 1×106 КОЕ до примерно 1×107 КОЕ/день. Предпочтительно предполагается введение примерно от 5×107 КОЕ до примерно 5×1010 КОЕ штамма L. rhamnosus HN001 на кг массы тела в день, предпочтительно примерно от 5×107 КОЕ до примерно 4×1010 КОЕ/день, примерно от 5×107 КОЕ до примерно 3×1010 КОЕ/день, примерно от 5×107 КОЕ до примерно 2×1010 КОЕ/день, примерно от 5×107 КОЕ до примерно 1×1010 КОЕ/день, примерно от 5×107 КОЕ до примерно 9×109 КОЕ/день, примерно от 5×107 КОЕ до примерно 8×109 КОЕ/день, примерно от 5×107 КОЕ до примерно 7×109 КОЕ/день, примерно от 5×107 КОЕ до примерно 6×109 КОЕ/день, примерно от 5×107 КОЕ до примерно 5×109 КОЕ/день, примерно от 5×107 КОЕ до примерно 4×109 КОЕ/день, примерно от 5×107 КОЕ до примерно 3×109 КОЕ/день, примерно от 5×107 КОЕ до примерно 2×109 КОЕ/день или примерно от 5×107 КОЕ до примерно 1×109 КОЕ/день.

[00102] Например, как показано в примерах, эффективная доза лиофилизированного штамма L. rhamnosus HN001 была определена равной 6 × 10⁹ КОЕ в день.

[00103] Следует понимать, что состав предпочтительно готовится таким образом, чтобы можно вводить эффективную дозу штамма L. rhamnosus HN001 или одного или нескольких производных. Доза вводимого состава, период введения и общий режим введения могут отличаться среди пациентов, в зависимости от таких переменных, как: тяжесть симптомов у пациента; тип патологии, подлежащий лечению; выбранный способ введения; возраст; пол и/или общее состояние здоровья пациента. Кроме того, как описано выше, подходящая доза может зависеть от природы активного вещества в составе и способа приготовления. Например, если состав содержит живой штамм L. rhamnosus HN001, то доза может рассчитываться с учетом количества присутствующих живых бактерий. Например, как описано в примерах ниже, доза может устанавливаться с учетом количества колониеобразующих единиц (КОЕ), которые следует вводить в день. В примерах, где состав содержит одно или несколько производных штамма L. rhamnosus HN001, доза может рассчитываться с учетом количества или концентрации присутствующего производного штамма L. rhamnosus HN001, подлежащего введению в день. Например, для состава, содержащего клеточный лизат штамма L. rhamnosus HN001, доза может рассчитываться с учетом концентрации, присутствующего в составе, клеточного лизата штамма L. rhamnosus HN001.

[00104] Следует понимать, что предпочтительные составы готовятся в удобной форме и количестве для обеспечения эффективной дозы. В некоторых вариантах осуществления, например, не ограничиваясь теми, где периодическая доза не должна меняться в зависимости от массы тела или других параметров пациента, состав может приготовляться в виде единицы дозирования. Следует иметь в виду, что введение может включать однократную суточную дозу или периодическое введение подходящих дробных доз. Например, как показано в примерах, эффективная доза штамма L. rhamnosus HN001 может приготовляться в виде капсулы для перорального введения.

[00105] Однако, в качестве общего примера, авторы изобретения предполагают введение состава, пригодного для использования в настоящем изобретении, в количестве примерно от 1 до примерно 1000 мг на кг массы тела в день, предпочтительно примерно от 50 до примерно 500 мг на кг в день, а в соответствии с другим вариантом примерно от 150 до примерно 410 мг/кг/день или примерно от 110 до примерно 310 мг/кг/день. В одном варианте осуществления, авторы изобретения предполагают введение состава, пригодного для использования в настоящем изобретении, в количестве примерно от 0,05 до примерно 250 мг на кг массы тела.

[00106] Здесь также представлены примеры детского питания, молочной смеси второго уровня и молочной смеси третьего уровня. Составы, подобные этим, могут готовиться таким образом, чтобы концентрация штамма L. rhamnosus HN001 в составе соответствовала эффективной дозе, которая могла быть приготовлена с использованием легко измеримого количества состава. В некоторых вариантах осуществления, в частности, где состав представляет собой детское питание, штамм L. rhamnosus HN001 используется в такой концентрации, которая достаточна для обеспечения эффективной дозы в объеме смеси, и которую можно легко измерить родителем или сиделкой в ходе приготовлении смеси для введения, например, используя мерную ложку, которая обычно предоставляется с детским питанием. Примерные, не ограничиваясь, концентрации штамма L. rhamnosus HN001 в таких составах включают примерно от 5 × 10⁵ КОЕ на грамм смеси до примерно 10⁹ КОЕ на грамм смеси или примерно от 10⁶ КОЕ на грамм смеси до примерно 10⁸ КОЕ на грамм смеси.

[00107] В одном варианте осуществления состав, пригодный для использования в настоящем изобретении, содержит, состоит по существу или состоит, по меньшей мере, из примерно 0,1, 0,2, 0,5, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60. 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99, 99,5, 99,8 или 99,9 мас.% штамма L. rhamnosus HN001 или его производного, а пригодные интервалы могут выбираться из любых значений, указанных выше, (например, примерно от 0,1 до примерно 50%, примерно от 0,2 до примерно 50%, примерно от 0,5 до примерно 50%, примерно от 1 до примерно 50%, примерно от 5 до примерно 50%, примерно от 10 до примерно 50%, примерно от 15 до примерно 50%, примерно от 20 до примерно 50%, примерно от 25 до примерно 50%, примерно от 30 до примерно 50%, примерно от 35 до примерно 50%, примерно от 40 до примерно 50%, примерно от 45 до примерно 50%, примерно от 0,1 до примерно 60%, примерно от 0,2 до примерно 60%, примерно от 0,5 до примерно 60%, примерно от 1 до примерно 60%, примерно от 5 до примерно 60%, примерно от 10 до примерно 60 от примерно 15 до примерно 60%, от примерно 20 до примерно 60%, от примерно 25 до примерно 60% от примерно от 30 до примерно 60%, примерно от 35 до примерно 60%, примерно от 40 до примерно 60%, примерно от 45 до примерно 60%, примерно от 0,1 до примерно 70%, примерно от 0,2 до примерно 70%, примерно от 0,5 до примерно 70%, примерно от 1 до примерно 70%, примерно от 5 до примерно 70%, примерно от 10 до примерно 70%, примерно от 15 до примерно 70%, примерно от 20 до примерно 70%, примерно от 25 до примерно 70%, примерно от 30 до примерно 70%, примерно от 35 до примерно 70%, примерно от 40 до примерно 70%, примерно от 45 до примерно 70%, примерно от 0,1 до примерно 80%, примерно от 0,2 до примерно 80% примерно от 0,5 до примерно 80%, примерно от 1 до примерно 80%, примерно от 5 до примерно 80%, примерно от 10 до примерно 80%, примерно от 15 до примерно 80%, примерно от 20 до примерно 80% ¸ от примерно от 25 до примерно 80%, примерно от 30 до примерно 80%, примерно от 35 до примерно 80%, примерно от 40 до примерно 80%, примерно от 45 до примерно 80%, примерно от 0,1 до примерно 90%, примерно от 0,2 до примерно 90%, примерно от 0,5 до примерно 90%, примерно от 1 до примерно 90%, примерно от 5 до примерно 90%, примерно от 10 до примерно 90%, примерно от 15 до примерно 90%, примерно от 20 до примерно 90%, примерно от 25 до примерно 90%, примерно от 30 до примерно 90%, примерно от 35 до примерно 90%, примерно от 40 до примерно 90% от примерно 45 до примерно 90%, от примерно 0,1 до примерно 99%, от примерно 0,2 до примерно 99%, от примерно 0,5 до примерно 99%, от примерно 1 до примерно 99%, от примерно 5 до примерно 99%, от примерно от 10 до примерно 99%, примерно от 15 до примерно 99%, примерно от 20 до примерно 99%, примерно от 25 до примерно 99%, примерно от 30 до примерно 99%, примерно от 35 до примерно 99%, примерно от 40 до примерно 99% и от примерно 45 до примерно 99%).

[00108] В одном варианте осуществления состав, пригодный для использования в настоящем изобретении, содержит, состоит по существу или состоит, по меньшей мере, из примерно 0,001, 0,01, 0,05, 0,1, 0,15, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 , 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 или 19 грамм штамма L. rhamnosus HN001 или его производного, а пригодные интервалы могут выбираться среди любого из указанных выше значений (например, примерно от 0,01 до примерно 1 г, примерно от 0,01 до примерно 10 г, примерно от 0,01 до примерно 19 г, примерно от 0,1 до примерно 1 г, примерно от 0,1 до примерно 10 г, примерно от 0,1 до примерно 19 г, примерно от 1 до примерно 5 грамм, примерно от 1 до примерно 10 грамм, примерно от 1 до примерно 19 грамм, примерно от 5 до примерно 10 грамм и примерно от 5 до примерно 19 грамм).

[00109] В одном варианте осуществления состав, пригодный для использования в настоящем изобретении, содержащий штамм L. rhamnosus HN001 или его производное, дополнительно содержит примерно 0,1, 0,5, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97, 99 или 99.9 мас.% свежего цельного молока или его производного, а пригодные интервалы могут выбираться среди любого из указанных выше значений (например, примерно от 0,1 до примерно 50%, примерно от 0,2 до примерно 50%, примерно от 0,5 до примерно 50%, примерно от 1 до примерно 50%, примерно от 5 до примерно 50%, примерно от 10 до примерно 50%, примерно от 15 до примерно 50%, примерно от 20 до примерно 50%¸ примерно от 25 до примерно 50%, примерно от 30 до примерно 50%, примерно от 35 до примерно 50%, примерно от 40 до примерно 50%, и примерно от 45 до примерно 50%). Производное молока предпочтительно выбирается из рекомбинированного, сухого или свежего обезжиренного молока, рекомбинированного или восстановленного цельного или обезжиренного сухого молока, концентрата обезжиренного молока, ретентата обезжиренного молока, концентрированного молока, ретентата молока, подвергнутого ультрафильтрации, концентрата молочного белка (КМБ), изолята молочного белка (ИМБ), концентрата молочного белка с пониженным содержанием кальция (КМБПСК), молока с низким содержанием жира, концентрата белка с низким содержанием жира (КМБПСЖ), казеина, казеината, молочного жира, сливок, сливочного масла, топленого масла, безводного молочного жира (БМЖ), пахты, плазмы масла, бета–сыворотки, твердых фракций молочного жира, мягких фракций молочного жира, фракций сфинголипидов, фракций шаровидных оболочек молочного жира, фракций липидных шаровидных оболочек молочного жира, фракций фосфолипидов, сложных фракций липидов, молозива, фракций молозива, белкового концентрата молозива (БКМ), сыворотки молозива, иммуноглобулиновой фракции из молозива, сыворотки (включая сладкую сыворотку, сыворотку из молочной кислоты, сыворотку из минеральной кислоты или восстановленную сухую сыворотку), изолята белка молочной сыворотки (ИБМС), концентрата сывороточного белка (КСБ), состава, полученного из любого технологического процесса обработки молока или молозива, состава, полученного из ретентата или пермеата, полученного ультрафильтрацией или микрофильтрацией любого технологического процесса обработки молока или молозива, состава, полученного из прорывной или адсорбированной фракции, полученных хроматографическим разделением (включая, не ограничиваясь, ионную и гель–проникающую хроматографию) любого технологического процесса обработки молока или молозива, экстрактов любого из этих производных молока, включая экстракты, полученные многостадийным фракционированием, дифференциальной кристаллизацией, сольвентным фракционированием, сверхкритическим фракционированием, околокритическим фракционированием, дистилляцией, центробежным фракционированием, или фракционированием с модификатором (напр., мылом или эмульгаторами), гидролизатов любого из этих производных, фракций гидролизатов и любую смесь любых из двух или более из этих производных, включая смеси гидролизованных и/или негидролизованных фракций. Следует понимать, что источник этих производных может представлять собой молоко или молозиво, или их смесь.

[00110] Очевидно, что концентрация штамма L. rhamnosus HN001 или одного или нескольких его производных в составе, приготовленном для введения, может быть меньше, чем концентрация в составе, приготовленном, например, для распределения или хранения, а концентрация в составе, приготовленном для хранения и последующего приготовления состава, подходящего для введения, должна быть достаточной, чтобы указанный состав для введения также был достаточно концентрированным, чтобы его можно было вводить в терапевтически эффективной дозе.

[00111] Составы, пригодные для использования в настоящем изобретении, могут применяться по отдельности или в смеси с одним или несколькими другими терапевтическими реагентами. Терапевтический реагент может представлять собой пищевой продукт, напиток, пищевую добавку, добавку к напитку, диетическую добавку, питательный продукт, лечебное питание, нутрицевтический состав, лекарственное препарат или лекарственное средство. Терапевтический реагент может представлять собой пробиотический препарат или пробиотический фактор и предпочтительно являться эффективным для лечения, профилактики или ослабления ГСД или одного или нескольких симптомов ГСД, или одного или нескольких связанных с ГСД рисков, или одного или нескольких осложнений ГСД.

[00112] Введение состава, пригодного для использования в настоящем изобретении, при использовании в смеси с другим терапевтическим реагентом и другого терапевтического реагента может быть одновременным или последовательным. Одновременное введение включает введение одной лекарственной формы, которая включает все компоненты, или введение отдельных лекарственных форм, по существу, в одно и то же время. Последовательное введение представляет собой введение в соответствии с различными схемами, предпочтительно таким образом, чтобы имело место перекрытие периодов, в течение которых вводится состав, пригодный для использования в настоящем изобретении, и другое терапевтическое средство.

[00113] Подходящие реагенты, с которыми можно вводить по отдельности, одновременно или последовательно составы, пригодные для использования в настоящем изобретении, включают один или несколько пробиотических реагентов, один или несколько пребиотических реагентов, один или несколько фосфолипидов, один или несколько ганглиозидов, другие подходящие реагенты, известные в отрасли техники, к которой относится данное изобретение, и их смеси. Пригодные пребиотики включают галактоолигосахариды (ГАОС), ГАОС с короткой цепью, ГАОС с длинной цепью, фруктоолигосахариды (ФОС), олигосахариды грудного молока (ОСГМ), ФОС с короткой цепью, ФОС с длинной цепью, инулин, галактаны, фруктаны, лактулозу и смесь любых двух или более из них. Некоторые пребиотики рассмотрены в работе авторов Boehm G и Moro G (Structural and Functional Aspects of Prebiotics Used in Infant Nutrition, J. Nutr. (2008) 138(9):1818S–1828S), которая включена сюда посредством ссылки. Другие пригодные реагенты могут включать пищевые волокна, в частности, полностью или частично нерастворимые или трудно перевариваемые пищевые волокна. Соответственно, в одном варианте осуществления, штамм L. rhamnosus HN001 или его производное можно вводить по отдельности, одновременно или последовательно с одним или несколькими реагентами, выбранными из одного или нескольких пробиотиков, одного или нескольких пребиотиков, одного или нескольких источников пищевых волокон, одного или нескольких галактоолигосахаридов, одного или нескольких короткоцепочечных галактоолигосахаридов, одного или нескольких длинноцепочечных галактоолигосахаридов, одного или нескольких фруктоолигосахаридов, одного или нескольких короткоцепочечных галактоолигосахаридов, одного или нескольких длинноцепочечных галактоолигосахаридов, одного или нескольких олигосахаридов человеческого молока, инулина, одного или нескольких галактанов, одного или нескольких фруктанов, лактулозы или смесь любых двух или более из них.

[00114] В одном варианте осуществления, состав, пригодный для использования в настоящем изобретении, включает или вводится одновременно или последовательно с молочными компонентами, например, сывороточным белком, фракциями сывороточного белка (включая кислотные или основные фракции сывороточного белка или их смесь), гликомакропептидом, лактоферрином, лактоферрином с препаратами железа, функциональным веществом лактоферрина, функциональным фрагментом лактоферрина, витамином D или кальцием или их смесями. Пригодные составы, содержащие молочный компонент, представляют собой: пищевой продукт, напиток, пищевую добавку, добавку к напитку, диетическую добавку, питательный продукт, лечебное питание или нутрицевтический состав. Также могут использоваться молочные фракции, обогащенные этими компонентами. Пригодные лактоферрины, фрагменты и составы описаны в международных патентных заявках WO 03/082921 и WO 2007/043900, содержание которых полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки.

[00115] Следует понимать, что перечисленные выше дополнительные терапевтические реагенты (как на основе пищевых продуктов, так и фармацевтические средства) также могут использоваться в способе согласно изобретению, где они вводятся по отдельности, одновременно или последовательно с составом, пригодным для использования в настоящем изобретении.

[00116] В одном варианте осуществления состав, пригодный для использования в настоящем изобретении, дополнительно содержит фармацевтически приемлемое вещество носитель. В другом варианте осуществления, состав представляет собой лекарственную форму в виде: пищевого продукта, напитка, пищевой добавки, добавки к напитку, диетической добавки, питательного продукта, лечебного питания, продукта для энтерального или парентерального питания, заменителя пищи, космецевтического средства, нутрицевтического состава, лекарственного препарата или лекарственного средства. В одном варианте осуществления, состав представляет собой таблетку, капсуловидную таблетку, пилюлю, твердую или мягкую капсулу или пастилку. В одном варианте осуществления, состав представляет собой крахмальную облатку, порошок, дозированный порошок, гранулы, суспензию, эликсир, жидкость или любую другую форму, которая может быть добавлена в пищу или напиток, включая, например, воду, молоко или фруктовый сок. В одном варианте осуществления, состав дополнительно содержит один или несколько компонентов (например, антиоксиданты), которые предотвращают или уменьшают деградацию состава во время хранения или после введения. Эти составы могут включать любой пищевой потребительский продукт, который способен переносить бактерии или бактериальные производные, включая: убитые нагреванием, убитые под давлением, лизированные, обработанные ультрафиолетом или светом, облученные, фракционированные, убитые иным образом или ослабленные бактерии. Примерами подходящих пищевых потребительских продуктов являются: водосодержащие продукты, хлебобулочные изделия, кондитерские изделия, включая шоколад, гели, мороженое, восстановленные фруктовые продукты, энергетические батончики, брикетированный пищевой концентрат, батончики мюсли, пастообразные смеси, соусы, соусы для макания, молочные продукты, включая йогурты и сыры, напитки, включая молочные и немолочные напитки, молоко, сухое молоко, спортивные добавки, в том числе спортивные добавки на молочной и немолочной основе, фруктовый сок, пищевые добавки, например протеиновые обсыпки, пищевые добавки, включая таблетки для ежедневного употребления, смеси для докорма после отъема от груди и йогурты и смеси, например, детское питание, молочная смесь второго уровня и молочная смесь третьего уровня в форме порошка или жидкости. Пригодные для использования в настоящем изобретении нутрицевтические составы могут быть представлены в аналогичных формах.

[00117] Следует понимать, что различные составы в соответствии с изобретением могут готовиться с учетом введения конкретной группе пациентов. Например, приготовление состава, подходящего для введения беременной матери (например, для опосредованного введения плоду в утробе матери, или новорожденному, младенцу или ребенку на грудном вскармливании), может отличаться от состава, который должен вводиться пациенту непосредственно. Следует также принимать во внимание, что приготовление состава для профилактического введения может отличаться от состава, приготовленного для введения при наличии ГСД или одного или нескольких симптомов ГСД.

[00118] В одном варианте осуществления, состав для профилактического применения может дополнительно содержать или использовать штамм L. rhamnosus HN001 в смеси с пробиотическим препаратом, например, Lactobacillus rhamnosus GG, Lactobacillus acidophilus (например, Lactobacillus acidophilus (LAVRI–A1), Lactobacillus reuteri (например, Lactobacillus reuteri ATCC 55730) или Bifidobacteria lactis (например, штамм Bifidobacteria lactis HN019 или Bifidobacterium lactis Bb12) или смесь любых двух или более из них.

[00119] В одном варианте осуществления, составы для профилактического введения и в частности для профилактического опосредованного введения, могут дополнительно содержать или использовать штамм L. rhamnosus HN001 в смеси с пробиотическим препаратом, например, Lactobacillus rhamnosus GG, Lactobacillus acidophilus (например, Lactobacillus acidophilus (LAVRI–A1), Lactobacillus reuteri (например, Lactobacillus reuteri ATCC 55730) или Bifidobacteria lactis (например, штамм Bifidobacteria lactis HN019 или смесь любых двух или более из них.

[00120] Следует понимать, что термин «профилактический» и его грамматические эквиваленты в контексте данного документа, подразумевают лечение, применение, введение и тому подобное до заболевания ГСД или появления симптомов ГСД.

[00121] В вариантах осуществления, состав для лечения пациента, заболевшего ГСД или имеющего один или несколько симптомов ГСД, может дополнительно содержать или использовать штамм L. rhamnosus HN001 в смеси с пробиотическим препаратом, например, Lactobacillus rhamnosus GG, Lactobacillus acidophilus (например, Lactobacillus acidophilus (LAVRI–A1), Lactobacillus reuteri (например, Lactobacillus reuteri ATCC 55730) или Bifidobacteria lactis (например, штамм Bifidobacteria lactis HN019 или смесь любых двух или более из них.

[00122] В контексте данного документа термин «терапевтический» и его грамматические эквиваленты в контексте данного документа, подразумевают лечение, применение или введение до заболевания ГСД или появления симптомов ГСД.

[00123] Предполагается, что ссылка на раскрытый здесь диапазон чисел, (например, от 1 до 10), также включает ссылку на все рациональные числа в этом диапазоне (например, 1; 1,1, 2, 3, 3,9, 4, 5, 6, 6,5, 7, 8, 9 и 10), а также на любой диапазон рациональных чисел в этом диапазоне (например, от 2 до 8, от 1,5 до 5,5 и от 3,1 до 4,7) и, следовательно, на все поддиапазоны всех диапазонов явно раскрытых здесь. Это лишь конкретные примеры, а все возможные перечисленные комбинации числовых значений между наименьшим значением и наивысшим значением, должны рассматриваться аналогичным образом, как явно указанные в этой заявке.

3 Гестационный сахарный диабет

[00124] В соответствии с мировыми тенденциями роста случаев ожирения, растет и частота случаев заболевания гестационным сахарным диабетом (ГСД) как в развитых, так и в развивающихся странах мира⁽¹⁰⁾. Обычно ГСД затрагивает от 9% до 26% всех беременностей в зависимости от страны и этнической группы. В некоторых случаях распространенность ГСД достигает 36%. Диагностические показатели МАГИДБ⁽¹¹⁾ подтверждают, что у 18% беременных женщин в США во время беременности⁽¹⁰⁾ развивается ГСД. За последние 20 лет наблюдается сильная тенденция к увеличению его распространенности.

[00125] ГСД связан с краткосрочными и долгосрочными неблагоприятными исходами, как для женщин, так и для младенцев, включающими гестационную гипертензию у матери, полигидрамнион, предэклампсию, роды при большом сроке беременности, оперативное родовспоможение или кесарево сечение и материнскую смерть ^{(10, 12)}.

[00126] Неблагоприятные исходы у детей представляют собой: преждевременные роды, дистоцию плечиков плода, макросомию, врожденные патологии и неонатальные осложнения, в частности, гипогликемию, желтуху и респираторный дистресс–синдром⁽¹⁰⁾. Кроме того, в более долгосрочной перспективе женщины с СГД подвергаются повышенному риску возникновения метаболического синдрома⁽¹³⁾, диабета 2 типа и сердечно–сосудистых заболеваний. У детей, рожденных женщинами с ГСД, повышен риск развития диабета, ожирения и возникновения проблем с обменом веществ, что свидетельствует об изменении секреции инсулина и липидных спектров независимо от веса ребенка⁽¹⁴⁾.

[00127] Корректировка образа жизни для профилактики ГСД, связанная с диетой, потерей веса и физическими упражнениями, часто оказывается безуспешной^{(10, 15)}, поэтому первичная профилактика ГСД способна обеспечить существенные медицинские и экономические выгоды для многих поколений.

[00128] Различные аспекты изобретения будут проиллюстрированы, не ограничиваясь, ссылками на следующие примеры.

ПРИМЕРЫ

[00129] Для определения способности пробиотика штамма Lactobacillus rhamnosus HN001 (HN001), принимаемого беременными женщинами на ранней стадии беременности, снижать распространенность ГСД на 26–28 неделе беременности, проводилось рандомизированное и параллельное исследование с двойной анонимностью и с контролем по плацебо.

Средства и методы

[00130] Беременные женщины в Окленде и Веллингтоне, НЗ, привлекались к исследованию медицинскими работниками, а информация об исследовании, вкладывалась в комплекты для беременных. Женщины признавались подходящими для исследования, если срок беременности составлял менее 16 недель, если они говорили по–английски, если намеревались кормить грудью и если у них или у биологического отца будущего ребенка в анамнезе была астма, сенная лихорадка или экзема, требующие лечения. Женщины исключались из исследования, если их возраст составлял менее 16 лет, если они планировали выходить за пределы исследовательских центров в течение срока исследования, если имели в анамнезе иммунологические расстройства или лечение, болезнь сердечного клапана, если требовали экстракорпорального оплодотворения, если имели серьезные аномалии развития плода, если использовали пробиотические напитки или добавки, если являлись участниками другого рандомизированного контролируемого клинического исследования (РКИ), если отказывались информировать свой средний медицинский персонал, если имели выброс адреналина при аллергии на коровье молоко, если имели в анамнезе пересадку органа или ВИЧ, если использовали непрерывную антибактериальную терапию в течение, по меньшей мере, 3 месяцев, если имели выкидыш между предварительным отбором и зачислением, или если иным образом считались неподходящими. Женщины, отвечающие критериям, включались в исследование при сроке беременности 14–16 недель, причем срок беременности рассчитывался исходя из самого раннего сканирования первого триместра, а при отсутствии данных, исходя из даты последней менструации.

План клинического исследования

[00131] Участвующие женщины были рандомизированы при получении капсул, содержащих либо штамм HN001 (6X10⁹ колониеобразующих единиц (КОЕ)), либо плацебо (полученный из кукурузы мальтодекстрин, идентичный пробиотику по внешнему виду и запаху), для ежедневного приема с момента зачисления в течение беременности и до шести месяцев после рождения, при кормлении грудью. Порошок штамма HN001 произведен компанией Fonterra Co–operative Group Ltd ферментацией в асептических условиях, а концентрация и сублимационная сушка осуществлялась описанным ранее способом(8). Порошок плацебо, полученный из кукурузы мальтодекстрин, произведен компанией Grain Processing Corp. Oregon, USA. Женщинам предписывалось хранить капсулы в холодильнике и не принимать их в течение 10 минут после употребления горячей пищи или жидкости.

[00132] Компания Fonterra хранила образцы капсул при 4 °С, которые проверялись ежемесячно для обеспечения жизнеспособности содержимого с течением времени. Жизнеспособность содержимого набора неиспользованных капсул, возвращаемых от участников исследования, проверялась три раза в месяц. Потеря жизнеспособности составляла менее 0,1 лог–рангового критерия и находилась в пределах неопределенности метода подсчета.

[00133] Рандомизация капсул осуществлялась специалистом по статистике из компании Fonterra, который не имел контактов с исследователями или участниками исследования. Рандомизация была стратифицирована исследовательским центром и проводилась блоками по 20 в соответствии с компьютерным графиком рандомизации и коэффициентом распределения 1:1. Исследовательский персонал провел отбор и зарегистрировал участников, а затем предоставил им контейнер с последовательными номерами капсул. Все исследователи, сотрудники лаборатории и участники были анонимны для сокрытия порядка распределения.

[00134] Собранная исходная информация содержала: возраст, этническую принадлежность, количества родов в прошлом, предыдущий синдром поликистоза яичников (ПСПЯ), индекс массы тела (ИМТ) (масса (кг)/рост (м)²), окружность талии, применение антибиотиков во время беременности, но до регистрации, и наличие сахарного диабета 2 типа у участника или ближайшего родственника. Среди женщин с предыдущей беременностью сроком более 20 недель мы также собрали анамнез предыдущего ГСД и данные по весу предыдущих детей при рождении.

Критерии оценки эффективности

[00135] Исход ГСД определялся априори главным образом как диагноз ГСД в соответствии с рекомендациями МАГИДБ(6): уровень глюкозы в плазме натощак ≥5,1 ммоль/л или после приема 75 г глюкозы ≥10 ммоль/л через 1 час, или ≥8,5 ммоль/л через 2 часа. Вторичный анализ для определения ГСД проводился с использованием пороговых значений НЗ: ≥5,5 ммоль/л натощак или ≥9 ммоль/л через 2 часа(1).

[00136] Оценка ГСД проводилась при беременности в 24–30 недель, после 12–часового ночного голодания и с использованием глюкозотолерантного теста (ГТТ), проводимого в общественной лаборатории. Для проведения ГТТ приглашались только женщины, не имевшие диабета до беременности. Женщины, которые имели диагноз ГСД исходя из ГТТ до проведения ГТТ, включались в результаты исследования, только при наличии доказательств более ранних отрицательных тестов, подтверждающих, что их диабет был гестационным. При проведении позднее во время беременности повторных ГТТ (для клинических целей), тест, завершенный через 24–30 недель беременности, определял их статус в ГСД исследовании.

[00137] По меньшей мере, через 3 месяца после родов у женщин с ГСД проверяли послеродовой HbA1c. Для указания на наличие сосуществующего сахарного диабета 2 типа проверяли уровень HbA1c после родов: ≥6,5% (48 ммоль/моль); или уровень глюкозы натощак после родов ≥7 ммоль/л; и/или уровень глюкозы ≥11,1 ммоль/л через 2 часа. В случае соответствия женщин этим критериям, они исключались из анализа ГСД.

[00138] Прочие результаты получали через 4–7 дней после родов, включая: вес матери (кг) и окружность талии (см), срок беременности (в неделях) и недоношенность (<37 недель). Младенческая оценка количества баллов по шкале Апгар за пять минут, и масса тела при рождении собиралась из медицинских карт. Длина грудного ребенка (см), весовой индекс ребенка (ВИ) (вес при рождении (кг)/рост (м)²), окружность головы (см), тип родов (вагинальный или кесарево сечение) и поступление в отделение интенсивной терапии новорожденных (ОИТН) оценивались исследователем через 4–7 дней после рождения.

Соблюдение предписанного режима терапии

[00139] В каждый флакон помещали запас капсул на более чем три месяца (n=105). Флаконы заменялись на 26–28 неделе беременности и при родах, если матери давали 2 флакона для покрытия периода до 6 месяцев после родов. Возвращенные флаконы учитывались сотрудниками, не участвующими в предусмотренных исследованием оценках, как показатель соблюдения предписанного режима терапии.

Статистическая мощность исследования

[00140] Как установлено в исследовании, проведенном в Финляндии, при предполагаемой распространенности ГСД в 15%, было зафиксировано снижение на 63% из–за пробиотика(8), а при размере выборки в 195 человек в каждой группе, исследование будет иметь 87% статистическую мощность исследования при уровне значимости 5%.

Статистический анализ

[00141] Анализ проводился с использованием программы SAS 9.3 и 9.4 (разработчик SAS Institute, Cary, NC). Все анализы подтвердили эффективность лечения. Различия между группами лечения по распространенности ГСД и дихотомическим исходам родов оценивались с использованием относительных показателей (ОП) и с доверительным интервалом 95%. Хотя это и не было заранее предустановлено, мы провели анализ ГСД стратифицированный по факторам, которые были в значительной степени связаны с ГСД (возраст матери, ИМТ, анамнез ГСД) и использованием антибиотиков во время исследования до проведения ГТТ, и с использованием обобщенной линейной модели со ссылкой на лог–ранговые критерии и биномиальное распределение. Для непрерывных величин, различия между группами лечения представлялись: в виде разности между средними значениями (с доверительным интервалом 95%) по сравнению с использованием t–критериев или соотношений геометрических средних (с доверительным интервалом 95%); по сравнению с ковариационным анализом значений скорректированных с зарегистрированными исходными показателями; а другие различия сравнивались с критериями суммы рангов Уилкоксона. Оценка количества баллов по шкале Апгар сравнивалась между группами с использованием порядковой логистической регрессии. Тесты были двусторонними, а P <0,05 считалась статистически значимой.

[00142] Отсутствующие измерения ГТТ оценивались путем множественной подстановки 1000 дополнительных данных: терапии, измерений уровня глюкозы натощак, через один и два часа, этнической принадлежности, возраста, ИМТ в момент зачисления, генетической предрасположенности к диабету у ближайших родственников, предыдущего синдрома поликистоза яичников, и комбинации предыдущего ГСД и числа предыдущих беременностей >20 недель (сгруппированных по: отсутствию предыдущих беременностей, одной предыдущей беременности с ГСД или одной предыдущей беременности без ГСД, двум или более предыдущим беременностям с ГСД или двум или более предыдущим беременностям без ГСД). Одна участница, у которой не был проведен ГТТ, потому что у нее был диагностирован ГСД и ей был назначен инсулин с самого раннего периода беременности, принималась как имеющая ГСД во всех подстановках.

[00143] Это исследование проводилось в соответствии с руководящими принципами, изложенными в Хельсинкской декларации, а все процедуры, касающиеся людей, были утверждены Межрегиональным комитетом по этике в области здравоохранения и инвалидности. От всех пациентов было получено письменное информированное согласие. Исследование было зарегистрировано в реестре клинических испытаний Австралии и НЗ: ACTRN12612000196842, https://www.anzctr.org.au/Trial/Registration/TrialReview.aspx?id=362049&isReview=true

Результаты исследования

[00144] Участники (n=423) были рандомизированы по группе штамма HN001 (n=212) или группе плацебо (n=211) в период с декабря 2012 года по ноябрь 2014 года со средним показателем 4,2 участника в неделю. Оценки гестационного диабета были завершены к февралю 2015 года, а последний ребенок родился в мае 2015 года. Число выбывших из–под последующего наблюдения было схоже среди групп, но большее число участников из группы штамма HN001 прекратили процедуру до проведения ГТТ (фиг. 1). Напротив, большинство участников, выбывших из–под последующего наблюдения, между ГТТ и родами, находилось в группе плацебо, а небольшое количество пациентов прекратило процедуру в обеих группах. В группе плацебо зарегистрирована одна смерть матери из–за cубарахноидального кровоизлияния.

[00145] Среди рандомизированных участников результаты ГТТ в период 24–30 недель беременности включали все три контрольных момента времени (натощак, через 1 час и через 2 часа, как того требуют рекомендации МАГИДБ) у 184 (87%) участников в группе штамма HN001 и у 189 (90%) участников в группе плацебо, в среднем на 27,7 (среднеквадратическое отклонение=4,6) и 28,0 (среднеквадратическое отклонение=8,6) неделе беременности, соответственно. Дополнительные 10 участников группы штамма HN001 и 11 участников группы плацебо имели только результаты ГТТ натощак и через 2–х часовой контрольный момент времени, что достаточно для диагностики ГСД по стандартным рекомендациям НЗ. В группе штамма HN001 194 (92%) участника, а в группе плацебо 200 (95%) участника, так или иначе, приняли участие в оценке ГТТ, и все они смогли внести данные в анализ на основе рекомендаций НЗ.

[00146] Между исследуемыми группами на момент зачисления отсутствовали существенные различия по каким–либо клиническим состояниям матери, включая: возраст, этническую принадлежность, количество родов в прошлом, вес, размер талии, ИМТ, использование антибиотиков во время беременности до момента зачисления, генетической предрасположенности к диабету у ближайших родственников, доход семьи, а среди тех, у кого были предыдущие роды, вес самого крупного младенца и наличие ГСД в анамнезе (Таблица 1).

Таблица 1 Характеристика исследуемой популяции на момент регистрации Штамм HN001 (N=212) Плацебо (N=211) p Предыдущая беременность 67,5% (143/212) 73,8 (155/210) 0,15^* Диабет у ближайших родственников 17,9% (38/212) 18,5% (39/211) 0,88^* Предыдущий синдром поликистоза яичников 8,1% (17/209) 10,6% (22/208) 0,39^* Возраст (лет), среднее значение выборки (межквартильный размах) 34 (30–36) (n=212) 34 (31–37) (n=210) 0,65^* Вес (кг), среднее значение выборки (межквартильный размах) 69 (63–80) (n=211) 71 (63–82) (n=210) 0,45^† Окружность талии (см) среднее значение выборки (межквартильный размах) 87 (80–94) (n=211) 87 (81–99) (n=210) 0,30^† ИМТ, среднее значение выборки (межквартильный размах) 25 (23–29) (n=211) 26 (23–30) (n=210) 0,28^† Этническая принадлежность
Маори
Страны Тихоокеанского региона
Страны Азии
Страны Европы
Прочие N=212
10,9% (23)
3,8% (8)
7,7% (15)
78,3% (166)
0,0% (0) N=211
16,6% (35)
1,9% (4)
7,6% (16)
73,5% (155)
0,5% (1) 0,27^* Системное лечение антибиотиками во время обсуждаемой беременности до момента регистрации 12,4% (25/201) 13,9% (28/202) 0,67^* Доход семьи ($НЗ)
0–49 тыс.
50–99 тыс.
100–149 тыс.
150+тыс. N=207
8,2% (17)
30,4% (63)
35,8 (74)
25,6% (53) N=204
7,8% (16)
32,4% (66)
34,8% (71)
25,0% (51) 0,98^* Среди женщин с предыдущей беременностью >20 недель (n=248) Предшествующие случаи гестационного сахарного диабета 5,0% (6/121) 7,1% (9/127) 0,48^* Вес (г) предыдущего наибольшего ребенка, среднее значение выборки (межквартильный размах) 3520 (3260–3900) (n=119) 3547 (3232–3856) (n=124) 0,62^† Макросомия (предыдущий наибольший ребенок ≥4000 г) 20,2% (24/119) 14,5% (18/124) 0,25^*

На основе кси–квадратного распределение ^†Исходные ранги

[00147] Распространенность ГСД (определенная с использованием критериев МАГИДБ) в группе штамма HN001 была ниже, чем в группе плацебо, но это различие не было статистически значимым (Таблица 2). Однако, при использовании более точной рекомендации НЗ, распространенность ГСД была значительно ниже в группе штамма HN001. Эти анализы были повторены с подстановкой для отсутствующих данных, но в оценках ОП обнаружилось мало изменений. При использовании рекомендаций МАГИДБ, подставленный для отсутствующих данных параметр ОП=0,64 (с доверительным интервалом 95% 0,36, 1,12), а при использовании рекомендаций НЗ, подставленный для отсутствующих данных параметр ОП=0,39 (с доверительным интервалом 95% 0,14, 1,07).

[00148] Средние уровни глюкозы в крови на исходном уровне и через один и два часа были немного ниже в группе штамма HN001 по сравнению с плацебо, но были значимыми только на исходном уровне (Таблица 2).

Таблица 2 Влияние лечения на распространенность (с доверительным интервалом 95%) гестационного сахарного диабета, определенного в соответствии с международными рекомендациями* и рекомендациями НЗ†, и среднее значение (с доверительным интервалом 95%) уровня глюкозы в крови. Штамм HN001 Плацебо ОП (с доверительным интервалом 95%) p Множественная подстановка
значения р МАГИДБ*
(n=373) 8,2% (15/184) (4,6%, 13,1%)
(n=184) 13,8% (26/189)
(9,2%, 19,5%)
(n=189) 0,59 (0,32, 1,08) 0,08 0,12 НЗ†
(n=394) 2,1% (4/194) (0,6%, 5,2%)
(n=194) 6,5% (13/200)
(3,5%, 10,9%)
(n=200) 0,32 (0,11, 0,96) 0,03 0,07 (ммоль/
л) (ммоль/
л) Разность между средними значениями (ммоль/л) (с доверительным интервалом 95%) Натощак 4,32 (4,27, 4,37) (n=195) 4,40 (4,34, 4,46) (n=202) –0,08(–0,15, 0,00) 0,048 0,06 Через 1 час 6,71 (6,46, 6,96) (n=185) 6,89 (6,63, 7,15) (n=189) –0,18(–0,55, 0,18) 0,31 0,42 Через 2 час 5,65 (5,47, 5,83) (n=194) 5,78 (5,57, 5,99) (n=200) –0,13(–0,41, 0,15) 0,36 0,39

МАГИДБ, Международная ассоциация групп изучения диабета и беременности

^*Натощак ≥5,1 ммоль/л, через 1 час ≥10 ммоль/л, через 2 часа ≥8,5 ммоль/л

†Натощак ≥5,5 ммоль/л, через 2 часа ≥9 ммоль/л

[00149] Среди 44 участников с диагнозом ГСД, выставленным в соответствии с рекомендациями НЗ или МАГИДБ, 40 участников имели показатель HbA1c, измеренный между первым и пятнадцатым месяцем после родов, составляющий от 5,0% (31 ммоль/моль) до 6,4% (46 ммоль/моль). Один из участников имел показатель ГТТ после родов в пределах нормальных значений. У трех участников отсутствовали показатели HbA1c после родов из–за отказа проводить процедуру, прекращения участия в исследования и смерти.

[00150] В Таблице 3 показано, что в данном исследовании возраст матери, ИМТ и наличие ГСД в анамнезе оказал значительное влияние на возникновение ГСД. Эти факторы затем использовались для стратификации анализа (фиг. 2) при использовании только рекомендации МАГИДБ для диагностики ГСД. Была обнаружена существенная неаддитивность и незначительная неаддитивность возраста при разделении его на две части ≥ 35 лет и < 35 лет (р=0,06) (в виде непрерывной величины), где (р=0,005).

[00151] В старшей группе, штамм HN001 сопряжен с трехкратным снижением распространенности ГСД по сравнению с распространенностью среди женщин в группе плацебо (ОП=0,31 (с доверительным интервалом 95% 0,12, 0,81)), р=0,009). У женщин в возрасте до 35 лет распространенность в каждой исследуемой группе была схожей (ОП=1,04 с доверительным интервалом 95% 0,45, 2,39)). Также отсутствовали значимые различия в эффекте, в зависимости от того, составлял ли ИМТ 30 кг/м² или более (ОП=0,86 (с доверительным интервалом 95% 0,37–1,96)) или менее 30 кг/м² (ОР=0,51 (с доверительным интервалом 95% 0,22–1,17)). Эффект взаимосвязи нельзя протестировать, поскольку ГСД не повторялся ни у одного из участников группы штамма HN001 с анамнезом ГСД.

[00152] Среди лиц с анамнезом ГСД, штамм HN001 имел защитное действие от повторения ГСД, ОП=0,00 (с доверительным интервалом 95% от 0,00 до 0,66), а у лиц без предшествующего ГСД, ОП=0,50 (с доверительным интервалом 95% от 0,20 до 1,27). Три женщины (20%) с ГСД в анамнезе не завершили ГТТ в соответствии с рекомендациями МАГИДБ. Во всех подстановках они были положительными на ГСД, показывая подставленный ОП=0,38 ((с доверительным интервалом 95% от 0,05 до 1,00) р=0,043 по точному критерию Барнарда). Штамм HN001 оказывал значительное воздействие на ГСД среди участников, которые не использовали антибиотики между включением в исследование и тестом ГТТ, но штамм HN001 не оказывал значительного воздействия на тех, кто использовал антибиотики в течение этого периода.

[00153] Графики распространенности, изображенные на фиг. 3, показывают статистически значимую неаддитивность между введением штамма HN001 и возрастом матери (фиг. 3, правый график), где лица старше 35 лет получали больше пользы от штамма HN001, чем молодые матери, а также неаддитивность между введением штамма HN001 и предыдущей беременностью. (фиг. 3, количество родов в прошлом, левый график), где влияние штамма HN001 на гестационный диабет значительно различалось в зависимости от того, была ли у женщины предыдущая беременность, продолжающаяся более 20 недель. У женщин, перенесших предыдущую беременность, и принимавших штамм HN001, частота появления ГД была примерно на треть ниже, чем у женщин, принимавших плацебо.

Таблица 3 Связь материнских факторов риска с гестационным сахарным диабетом после коррекции по группе лечения. N ОП (с доверительным интервалом 95%) p Материнский возраст на момент регистрации^* 372 1,11 (1,03/1,20) 0,004 Материнский ИМТ на момент регистрации† 371 1,11 (1,08, 1,15) <0,0001 Генетическая предрасположенность к диабету 67/373 1,13 (0,55, 2,33) 0,74 Этническая принадлежность 373 Страны Европы 293 1,00 Маори 46 1,49 (0,69, 3,22) 0,31 Страны Тихоокеанского региона 7 3,05 (0,92, 10,07) 0,07 Страны Азии 26 1,62 (0,62, 4,22) 0,32 Синдром поликистоза яичников 37/367 1,19 (0,50, 2,83) 0,70 Системное лечение антибиотиками на момент регистрации 49/372 1,78 (0,91, 3,49) 0,09 Предыдущая беременность (любой длительности) 259/372 1,30 (0,66, 2,56) 0,45 Среди женщин с любой предыдущей беременностью (259/372) Число выкидышей^‡ 259 1,12 (0,78, 1,62) 0,54 Предыдущая беременность>20 недель 216/372 1,24 (0,68, 2,26) 0,47 Среди женщин с предыдущей беременностью >20 недель (216/372) Предшествующие случаи гестационного сахарного диабета 12/216 6,59 (3,95, 11,01) <0,0001 Случаи макросомии^§ у ранее рожденных детей 35/213 0,66 (0,19, 2,35) 0,53

^* на каждый дополнительный год

†на каждую дополнительную единицу ИМТ; два значения > 45 усечены при 45 для обеспечения соответствия модели.

^‡ на каждый дополнительный выкидыш

^§ вес новорожденного ≥4000 грамм.

[00154] Аналогичным образом, среди тех, кто не принимал антибиотики, средние уровни глюкозы в крови натощак были значительно (p=0,001) ниже в группе штамма HN001 (4,28, с доверительным интервалом 95% от 4,23 до 4,33) по сравнению с группой плацебо (4,42, с доверительным интервалом 95% от 4,35 до 4,48). Различия в средних уровнях глюкозы через один и два часа после приема глюкозы также были ниже, но не были значительными. Через один час уровень глюкозы в крови в группе штамма HN001 составил 6,63 (с доверительным интервалом 95% от 6,37 до 6,89), а в группе плацебо составил 6,88 (с доверительным интервалом 95% от 6,6 до 7,16), при р=0,20, а через два часа уровень в группе штамма HN001 составил 5,56 (с доверительным интервалом 95% от 5,38 до 5,73) и в группе плацебо составил 5,77 (с доверительным интервалом 95% от 5,53 до 6,01), при p=0,15.

[00155] Штамм HN001 не показал достоверной связи с какими–либо антропометрическими показателями матери (после корректировки с исходными показателями), массой тела младенца при рождении, беременностью, кесаревым сечением, поступлением в ОИТН, или ростом младенца, ВИ, окружностью головы через 4–7 дней после рождения. Младенцы, чьи матери были в группе штамма HN001, имели значительно более высокую оценку количества баллов по шкале Апгар за пять минут, чем младенцы в группе плацебо (Таблица 4).

Таблица 4 Влияние лечения на исход родов Штамм HN001 Плацебо (Соотношение геометрических средних значений с доверительным интервалом 95%) p Вес матери (кг) при запоздалых родах^*
(геометрическое среднее значение с доверительным интервалом 95%) 76,7 (76,1, 77,2) (n=197) 76,8 (76,2, 77,4) (n=194) 1,00 (0,99, 1,01) 0,79 Талия матери (см) при запоздалых родах^*
(геометрическое среднее значение с доверительным интервалом 95%) 97,7 (96,8, 98,7) (n=195) 97,3 (96,4, 98,2) (n=195) 1,00 (0,99, 1,02) 0,53 ИМТ матери при запоздалых родах^*
(геометрическое среднее значение с доверительным интервалом 95%) 28,0 (27,8, 28,2) (n=197) 28,1 (27,9, 28,3) (n=194) 1,00 (0,99, 1,01) 0,69 Число недель беременности
(среднее значение выборки, межквартильный размах) 39,7 (38,7, 40,7) (n=205) 39,6 (38,7, 40,4) (n=201) –0,1 (–0,4, 0,1) 0,31^† Разность между средними значениями (с доверительным интервалом 95%) Вес новорожденного ребенка (см) (среднее значение, с доверительным интервалом 95%) 3,6 (3,5, 3,7) (n=205) 3,5 (3,4, 3,6) (n=202) 0,1(–0,1, 0,2) 0,36 Рост новорожденного ребенка (см) (среднее значение, с доверительным интервалом 95%) 51,3 (51,0, 51,7) (n=205) 51,2 (50,8, 51,5) (n=199) 0,2 (–0,3, 0,7) 0,48 Весовой индекс ребенка (среднее значение, с доверительным интервалом 95%) 25,9 (25,5, 26,2) (n=204) 25,7 (25,4, 26,1) (n=199) 0,1 (–0,4, 0,7) 0,59 Окружность головы ребенка (см) (среднее значение, с доверительным интервалом 95%) 35,3 (35,1, 35,6) (n=205) 35,4 (35,2, 35,6) (n=201) –0,1 (–0,4, 0,2) 0,67 ОП (с доверительным интервалом 95%) Макросомия (≥4000 грамм) 22,4% (46/205) 15,8% (32/202) 1,41 (0,94, 2,12) 0,10 Недоношенность (<37 недель беременности) 7,8% (16/205) 4,0% (8/201) 1,96 (0,86, 4,48) 0,10 Кесарево сечение 27,7% (57/206) 25,4% (51/201) 1,09 (0,79, 1,51) 0,60 Помещение в ОИТН 11,3% (23/203) 11,0% (22/201) 1,04 (0,60, 1,80) 0,90 Количество баллов по шкале Апгар≥7 за 5 минут 98,5% (200/203) 98,0% (198/202) ^‡1,51 (1,01, 2,27) 0,04

ОИТН, Отделение интенсивной терапии новорожденных

*Ковариационный анализ зарегистрированных значений скорректирован с зарегистрированными исходные показателями, а геометрические средние значения сопряжены с исходными геометрическими средними значениями.

^†Критерий суммы рангов Уилкоксона.

‡Соотношение неравенства при более высоком количестве баллов по шкале Апгар, количество баллов по шкале Апгар сгруппированы как 0–3, 4–6, 7, 8, 9, 10. Порядковая логистическая регрессия.

[00156] ГСД матери, определенный в соответствии с рекомендациями МАГИДБ, был сопряжен с более высоким весом матери (р=0,0002), окружностью талии (р <0,0001) и ИМТ (р <0,0001) после родов, но не был связан с какими–либо антропометрическими показателями для младенцев, беременностью, кесаревым сечением, помещением в ОИТН или количеством баллов по шкале Апгар за 5 минут (данные не показаны).

Обсуждение

[00157] Насколько известно заявителю, это первое исследование, в котором сообщается о роли пробиотиков в профилактике ГСД среди женщин, не отобранных на основании риска развития ГСД. Данные заявителя предполагают, что применение пробиотика штамма HN001 в дозе 6×10⁹ КОЕ/день способно снизить частоту возникновения ГСД с 13,8% до 8,2%, снижение на 40% с использованием рекомендаций МАГИДБ(6) или снижение на 68% с 6,5% до 2,1% с использованием рекомендаций Министерства здравоохранения Новой Зеландии.

[00158] Данное исследование показало, что при определении ГСД, воздействие штамма HN001 было сильнее при использовании более высоких пороговых значений глюкозы НЗ, чем пороговых значений МАГИДБ, с учетом предположения, что воздействие проявляет себя сильнее в профилактике более тяжелого ГСД.

[00159] Кишечная микробиота в течение трех триместров беременности претерпевает глубокие изменения в сторону менее разнообразного состояния, при этом наиболее истощенная микробная насыщенность наблюдается у женщин с ГСД(9). В отличие от кишечной микробиоты, связанной с ожирением, кишечная микробиота последнего триместра была связана с большим количеством калорий, потерянных в фекалиях, по сравнению с первым триместром, что указывает на то, что влияние изменений кишечной микробиоты на ожирение хозяина и метаболизм глюкозы в организме во время беременности необязательно идентично(9). Не вдаваясь в теорию, изобретатели считают, что добавление штамма HN001 изменило состав и функцию кишечной микробиоты в сторону улучшения чувствительности к инсулину и снижения воспалительных процессов у хозяина, что уменьшило предрасположенность к ГСД.

[00160] Отсутствие какого–либо вредного влияния на исходы родов при приеме штамма HN001 доказывает безопасность процедуры на ранних сроках беременности (14–16 недель беременности), которая также является пригодной для младенца, что отражается на оценке количества баллов по шкале Апгар. Эти сведения важны, учитывая небольшой объем данных о влиянии пробиотических процедур на ранних сроках беременности.

[00161] Использование программ контроля веса или диет для поддержания хорошего здоровья во время беременности было в значительной степени неэффективным, отчасти из–за плохого соблюдения предписанного режима терапевтических процедур. Это исследование свидетельствует о том, что использование штамма L. rhamnosus HN001 является эффективной процедурой для снижения распространенности ГСД, в частности у матерей старшего возраста и у женщин с ГСД в анамнезе.

ПРОМЫШЛЕННАЯ ПРИМЕНИМОСТЬ

[00162] Настоящее изобретение относится к использованию пробиотических бактерий, а в частности к использованию штамма Lactobacillus rhamnosus HN001 или его производных, для лечения или профилактики ГСД. Также предлагаются способы использования бактерий и составов, содержащих бактерии.

СЫЛКИ НА СПРАВОЧНУЮ ЛИТЕРАТУРУ

1. Ministry of Health (2014) Screening, diagnosis and management of gestational diabetes in New Zealand: A clinical practice guideline. Ministry of Health, Wellington.

2. American Committee of Obstetricians and Gynecologists Committee Opinion number 549 (January 2013) Obesity in pregnancy. Obstet Gynecol 121: 213–217.

3. Kim SY, England L, Wilson HG, Bish C, Satten GA, Dietz P (2010) Percentage of gestational diabetes mellitus attributable to overweight and obesity. Am J Pub Health 100: 1047–1052.

4. Ben–Haroush A, Yogev Y, Hod M (2004) Epidemiology of gestational diabetes mellitus and its association with Type 2 diabetes. Diabet Med 21: 103–113.

5. Kim C, Newton KM, Knopp RH (2002) Gestational diabetes and the incidence of type 2 diabetes. Diabetes Care 25: 1862–1868.

6. International Association of Diabetes and Pregnancy Study Groups Consensus Panel (2010) International Association of Diabetes and Pregnancy Study Groups Recomendations on the diagnosis and classification of hyperglycemia in pregnancy. Diabetes Care 33: 676–682.

7. Luoto R, Laitinen K, Nermes M, Isolauri E (2010) Impact of maternal probiotic–supplemented dietary counselling on pregnancy outcome and prenatal and postnatal growth: a double–blind, placebo–controlled study. Br J Nutr 103: 1792–1799.

8. Wickens K, Black PN, Stanley TV, et al. (2008) A differential effect of 2 probiotics in the prevention of eczema and atopy: A double–blind, randomized, placebo–controlled trial. J Allergy Clin Imunol 122: 788–794.

9. Koren O, Goodrich JK, Tyler CC, et al. (2012) Host remodelling of the gut microbiome and metabolic changes during pregnancy. Cell 150: 470–480.

10. Barrett HL, Dekker Nitert M, Conwell LS, Callaway LK. Probiotics for preventing gestational diabetes. Cochrane Database Syst Rev. 2014; Art. No.: CD009951. DOI: 10.1002/14651858.CD009951.

11. International Association of Diabetes and Pregnancy Study Groups Consensus Panel. International Association of Diabetes and Pregnancy Study Groups recommendations on the diagnosis and classification of hyperglycemia in pregnancy. Diabetes Care. 2010;33:676–82.

12. Poston L, Harthoorn LF, Van Der Beek EM. Obesity in pregnancy: Implications for the mother and lifelong health of the child. A consensus statement. Pediatr Res. 2011;69:175–80.

13. Vohr BR, Boney CM. Gestational diabetes: the forerunner for the development of maternal and childhood obesity and metabolic syndrome? J Matern Neonatal Med. 2008;21:149–57.

14. Chandler–Laney PC, Bush NC, Granger WM, Rouse DJ, Mancuso MS, Gower BA. Overweight status and intrauterine exposure to gestational diabetes are associated with children’s metabolic health. Pediatr Obes. 2011;7:44–52.

15. Nitert MD, Barrett HL, Foxcroft K, Tremellen A, Wilkinson S, Lingwood B, et al. SPRING: an RCT study of probiotics in the prevention of gestational diabetes mellitus in overweight and obese women. BMC Pregnancy Childbirth. 2013;13:50.

Группа изобретений относится к области медицины и фармацевтики и может быть использована для лечения или профилактики гестационного сахарного диабета (ГСД) или одного или нескольких рисков или осложнений, связанных с ГСД. Для этого предложены способы лечения или профилактики гестационного сахарного диабета (ГСД) у взрослого субъекта женского пола или у субъекта, представляющего собой плод в утробе матери, новорожденного, младенца или ребенка, где способ включает введение эффективного количества штамма Lactobacillus rhamnosus HN001, депонированного в AGAL 18 августа 1997 г. под номером NM97/09514, нуждающемуся в этом взрослому субъекту женского пола или беременной матери нуждающегося в этом плода в утробе матери, новорожденного, младенца или ребенка, в течение беременности. Группа изобретений относится также к применению эффективного количества указанного штамма в производстве состава или лекарственного средства для лечения или профилактики ГСД. Обеспечивается снижение среднего уровня глюкозы в крови натощак у субъекта или беременной матери субъекта до менее чем примерно 4,35 ммоль/л. 4 н. и 39 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл.

1. Способ лечения или профилактики гестационного сахарного диабета (ГСД) или одного или нескольких рисков, связанных с ГСД, или одного или нескольких осложнений ГСД у взрослого субъекта женского пола, где способ включает введение эффективного количества штамма Lactobacillus rhamnosus HN001, депонированного в AGAL 18 августа 1997 г. под номером NM97/09514, нуждающемуся в этом взрослому субъекту женского пола, где средний уровень глюкозы в крови натощак снижается у субъекта до менее чем примерно 4,35 ммоль/л.

2. Способ профилактики одного или нескольких рисков, связанных с ГСД, или одного или нескольких осложнений ГСД у субъекта, представляющего собой плод в утробе матери, новорожденного, младенца или ребенка, где способ включает введение эффективного количества штамма Lactobacillus rhamnosus HN001, депонированного в AGAL 18 августа 1997 г. под номером NM97/09514, беременной матери нуждающегося в этом плода в утробе матери, новорожденного, младенца или ребенка, в течение беременности, где средний уровень глюкозы в крови натощак снижается у субъекта, представляющего собой плод в утробе матери, новорожденного, младенца или ребенка, до менее чем примерно 4,35 ммоль/л.

3. Способ по п.1 или 2, где способ включает введение состава, содержащего штамм L. rhamnosus HN001 и физиологически приемлемый разбавитель, адъювант, вещество носитель или эксципиент.

4. Способ по любому из пп.1–3, где способ включает введение пищевого состава, содержащего штамм L. rhamnosus HN001.

5. Способ по п.4, где пищевой состав выбирается из кисломолочного продукта, йогурта, сыра, молочного напитка или сухого молока.

6. Способ по п.1 или 2, где способ включает введение фармацевтического состава, содержащего штамм L. rhamnosus HN001 и физиологически приемлемый разбавитель, адъювант, вещество носитель или эксципиент.

7. Способ по п.1 или 2, где способ включает введение состава, содержащего штамм L. rhamnosus HN001, где состав представляет собой молочную смесь для беременных и кормящих, добавку в молочную смесь для беременных и кормящих или диетический продукт.

8. Способ по любому из пп.1–7, где штамм L. rhamnosus HN001 находится в репродуктивно жизнеспособной форме.

9. Способ по любому из пп.1–7, где штамм L. rhamnosus HN001 убит, лизирован, фракционирован или ослаблен.

10. Способ по любому из пп.1–9, где взрослый субъект женского пола или мать субъекта, представляющего собой плод в утробе матери, новорожденного, младенца или ребенка, обладает увеличенным риском заболевания ГСД.

11. Способ по п.10, где взрослый субъект женского пола или мать ранее болели ГСД.

12. Способ по любому из пп.1-11, где возраст взрослого субъекта женского пола или матери превышает 35 лет.

13. Способ по любому из пп.1–12, где взрослый субъект женского пола или мать ранее имели беременность.

14. Способ по любому из пп.1–13, где способ включает введение штамма L. rhamnosus HN001 после первого триместра беременности.

15. Способ по любому из пп.1–14, где введение штамма L. rhamnosus HN001 начинается между 14–16 неделями беременности.

16. Способ по любому из пп.1–15, где способ включает введение состава, содержащего штамм L. rhamnosus HN001:

a) от 14-16 недель беременности до родов или

b) от 14-16 недель беременности до 6 месяцев после родов.

17. Способ по любому из пп.1-16, где

a) лечение представляет собой профилактическое лечение,

b) лечение представляет собой профилактическое лечение взрослого субъекта женского пола, имеющего ожидаемый или установленный повышенный риск развития ГСД,

c) лечение представляет собой профилактическое лечение взрослого субъекта женского пола, представляющего собой пытающуюся забеременеть или недавно забеременевшую,

d) лечение представляет собой профилактическое лечение субъекта, представляющего собой плод в утробе матери, посредством введения состава матери субъекта, представляющего собой плод в утробе матери, или

e) лечение представляет собой профилактическое лечение субъекта, представляющего собой новорожденного, младенца или ребенка, посредством введения состава кормящей матери данного субъекта в течение беременности.

18. Способ по любому из пп. 1 и 3-17, где

a) взрослый субъект женского пола представляет собой беременную,

b) взрослый субъект женского пола представляет собой беременную в возрасте 35 лет или старше,

c) взрослый субъект женского пола представляет собой беременную с историей ГСД или

d) взрослый субъект женского пола представляет собой беременную в возрасте 35 лет или старше, с историей ГСД.

19. Способ по любому из пп. 1-18, где способ дополнительно включает одновременное или последовательное введение пребиотика.

20. Способ по п. 19, где пребиотик включает фруктоолигосахариды, галактоолигосахариды или олигосахариды человеческого молока или их комбинацию.

21. Способ по любому из пп. 1-20, где взрослый субъект женского пола или мать имеет ИМТ менее чем 30 кг/м².

22. Применение эффективного количества штамма L. rhamnosus HN001, депонированного в AGAL 18 августа 1997 г. под номером NM97/09514, в производстве состава или лекарственного средства для лечения или профилактики ГСД или для лечения или профилактики одного или нескольких рисков, связанных с ГСД, или одного или нескольких осложнений ГСД у взрослого субъекта женского пола, где средний уровень глюкозы в крови натощак снижается у субъекта до менее чем примерно 4,35 ммоль/л.

23. Применение эффективного количества штамма L. rhamnosus HN001, депонированного в AGAL 18 августа 1997 г. под номером NM97/09514, в производстве состава или лекарственного средства для профилактики одного или нескольких рисков, связанных с ГСД, или одного или нескольких осложнений ГСД у субъекта, представляющего собой плод в утробе матери, новорожденного, младенца или ребенка, где

профилактика включает введение штамма HN001 беременной матери субъекта, представляющего собой плод в утробе матери, новорожденного, младенца или ребенка, в течение беременности; и

средний уровень глюкозы в крови натощак снижается у беременной матери субъекта, представляющего собой плод в утробе матери, новорожденного, младенца или ребенка, до менее чем примерно 4,35 ммоль/л.

24. Применение по п.22 или 23, где состав или лекарственное средство содержит штамм L. rhamnosus HN001 и физиологически приемлемый разбавитель, адъювант, вещество носитель или эксципиент.

25. Применение по любому из пп.22-24, где состав представляет собой пищевой состав, содержащий штамм L. rhamnosus HN001.

26. Применение по п.25, где пищевой состав выбирается из кисломолочного продукта, йогурта, сыра, молочного напитка или сухого молока.

27. Применение по п.22 или 23, где состав или лекарственное средство представляет собой фармацевтический состав, содержащий штамм L. rhamnosus HN001 и физиологически приемлемый разбавитель, адъювант, вещество носитель или эксципиент.

28. Применение по п.22 или 23, где состав, содержащий штамм L. rhamnosus HN001, представляет собой молочную смесь для беременных и кормящих, добавку в молочную смесь для беременных и кормящих или диетический продукт.

29. Применение по любому из пп.22–28, где штамм L. rhamnosus HN001 находится в репродуктивно жизнеспособной форме.

30. Применение по любому из пп.22–28, где штамм L. rhamnosus HN001 убит, лизирован, фракционирован или ослаблен.

31. Применение по любому из пп.22–30, где взрослый субъект женского пола или мать субъекта, представляющего собой плод в утробе матери, новорожденного, младенца или ребенка, обладает увеличенным риском заболевания ГСД.

32. Применение по п.31, где взрослый субъект женского пола или мать ранее болели ГСД.

33. Применение по любому из пп.22-32, где возраст взрослого субъекта женского пола или матери превышает 35 лет.

34. Применение по любому из пп.22–33, где взрослый субъект женского пола или мать ранее имели беременность.

35. Применение по любому из пп.22–34, где состав или лекарственное средство составлены для введения штамма L. rhamnosus HN001 после первого триместра беременности.

36. Применение по любому из пп.22–35, где состав или лекарственное средство составлены для введения штамма L. rhamnosus HN001 начиная с периода между 14–16 неделями беременности.

37. Применение по любому из пп.22–36, где состав или лекарственное средство составлены для введения

a) от 14-16 недель беременности до родов или

b) от 14-16 недель беременности до 6 месяцев после родов.

38. Применение по любому из пп.22-37, где

a) лечение представляет собой профилактическое лечение,

b) лечение представляет собой профилактическое лечение взрослого субъекта женского пола, имеющего ожидаемый или установленный повышенный риск развития ГСД,

c) лечение представляет собой профилактическое лечение взрослого субъекта женского пола, представляющего собой пытающуюся забеременеть или недавно забеременевшую,

d) лечение представляет собой профилактическое лечение субъекта, представляющего собой плод в утробе матери, посредством введения состава матери субъекта, представляющего собой плод в утробе матери, или

e) лечение представляет собой профилактическое лечение субъекта, представляющего собой новорожденного, младенца или ребенка, посредством введения состава матери данного субъекта в течение беременности.

39. Применение по любому из пп. 22-38, где

a) взрослый субъект женского пола представляет собой беременную,

b) взрослый субъект женского пола представляет собой беременную в возрасте 35 лет или старше,

c) взрослый субъект женского пола представляет собой беременную с историей ГСД или

d) взрослый субъект женского пола представляет собой беременную в возрасте 35 лет или старше, с историей ГСД.

40. Применение по любому из пп. 22-39, где состав или лекарственное средство составлены для одновременного или последовательного введения с пребиотиком.

41. Применение по п. 40, где пребиотик включает фруктоолигосахариды, галактоолигосахариды или олигосахариды человеческого молока или их комбинацию.

42. Применение по любому из пп. 22-41, где

a) субъект представляет собой плод в утробе матери и состав следует вводить матери субъекта или

b) субъект представляет собой новорожденного, младенца или ребенка и состав следует вводить матери данного субъекта в течение беременности.

43. Применение по любому из пп. 22-41, где взрослый субъект женского пола или мать имеет ИМТ менее чем 30 кг/м².