ПРИМЕНЕНИЕ ПРОБИОТИКОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И/ИЛИ ПРОФИЛАКТИКИ ПСОРИАЗА Российский патент 2022 года по МПК A61K35/745 A61K35/747 A23L33/135 A61P17/06 

Настоящее изобретение относится к применению пробиотической композиции для лечения и/или профилактики вспышек псориаза и/или самого псориаза. Следовательно, данное изобретение можно отнести к области медицины, в особенности к лечению кожных заболеваний.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Псориаз представляет собой воспалительное и пролиферативное системное заболевание, характеризующееся появлением типичных повреждений кожи в виде многочисленных эритематозных бляшек с четко выраженными краями, покрытых шелушащимися (чешуйчатыми) участками, и в основном, но не исключительно, расположенных на разгибательных поверхностях конечностей и в области волосяного покрова. Следовательно, при этом имеется гиперпролиферативный компонент, затрагивающий эпидермис, связанный с воспалительным компонентом, затрагивающим дермис. Диагноз псориаза является клиническим, в большинстве случаев не требующим гистологического подтверждения. Это заболевание не позволяет получить характерные лабораторные данные. Патогенез псориаза полностью не известен, и большая часть авторов полагает, что он является генетически определенным заболеванием кожи, которое провоцируется различными внешними факторами, в результате вызывающими лимфоцитарный инфильтрат и, в конце концов, приводящими к типичным повреждениям кожи, вызванным этим заболеванием.

В целом, считают, что в развитых странах псориаз поражает от одного процента (1%) до трех процентов (3%) населения, хотя среди европейских стран наблюдается колебания. В любом случае психологическое, социальное и экономическое влияние на население при этом является значительным и сравнимым с другими хорошо известными хроническими заболеваниями, такими как хронический бронхит, сахарный диабет или депрессивные расстройства.

Благодаря предполагаемой иммунной теории происхождения псориаза его лечение годами основывалось на применении иммунодепрессантов, или топическом, или системном, с целью блокировки иммунного компонента заболевания и подавления симптомов последнего. Это заболевание характеристически показывает повышение уровня маркеров воспаления, таких как фактор некроза опухоли (TNF) и интерлейкины IL-12 и IL-23. В последние годы был достигнут заметный прогресс в лечении псориаза путем разработки иммуномодулирующих лекарственных средств, таких как анти-ФНО и моноклональные антитела к IL-23. Эти лекарственные средства в общем являются более эффективными, чем топические или классические системные средства, такие как циклоспорин или кортикостероиды, применение которых может вызывать появление побочных эффектов у принимающих их пациентов, в том числе, начало латентных инфекционных заболеваний, таких как туберкулез и вирусный гепатит В, что препятствует назначению и применению этих лекарств в некоторых случаях тяжело протекающего псориаза. Более того, через некоторое время во многих случаях возникает явление: антитела против этих лекарств, когда эти лекарства перестают быть эффективными при контролировании развития псориаза.

Следовательно, ознакомление с предшествующим уровнем техники показывает, что необходимо создание новых соединений, полезных при лечении псориаза, являющихся эффективными и не вызывающими типичных побочных эффектов, характерных для классических лекарств, применяемых при лечении псориаза.

ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Авторы настоящего изобретения заметили, что пациенты со вспышками псориаза неожиданно характеризуются разнообразием микробиоты кишечника, которая сильно отличается от микробиоты здоровых людей. Основываясь на этом наблюдении, изобретатели обнаружили, что введение пробиотической композиции, которая модифицирует микробиоту кишечника у пациента, страдающего псориазом, неожиданно обеспечивает ремиссию и/или улучшение процесса постепенного возникновения вспышек псориаза пациента. Как показано в примерах, приведенных в данном описании, когда пробиотическая композиция (содержащая микроорганизмы видов Bifidobacterium sp. и Lactobacillus sp.) вводится при обычном лечении пациентов, страдающих от вспышек псориаза, наблюдаются дополнительные тридцать процентов (30%) случаев с полным улучшением по сравнению с пациентами, больными псориазом (или псориазными пациентами), получающими регулярное постоянное лечение, но без введения указанной выше пробиотической композиции.

В дополнение к этому положительному действию на развитие заболевания у пациентов со вспышками активного псориаза было также отмечено, что в течение месяцев после прекращения лечения указанной выше пробиотической композицией у пациентов, которые подвергались лечению такой композицией, возникало меньшее количество вспышек и, следовательно, у них наблюдалось более длительное время жизни без болезни, чем у тех пациентов, которые не получали такого лечения.

Таким образом, показано применение пробиотической композиции, описанной в данной заявке, для лечения и/или профилактики вспышек псориаза или псориаза.

На основании установленного явления был разработан ряд аспектов изобретения, которые будут подробно описаны ниже.

Применение первой пробиотической композиции по данному изобретению для лечения вспышек псориаза и/или псориаза.

Согласно одному аспекту настоящее изобретение относится к пробиотической композиции для применения при лечении и/или профилактике вспышек псориаза и/или псориаза, при этом пробиотическая композиция содержит микроорганизмы Bifidobacterium animalis subs, lactis (далее В. lactis), Bifidobacterium longum и Lactobacillus rhamnosus.

В соответствии с данным изобретением термин "пробиотическая композиция" означает такую композицию, которая содержит по меньшей мере один микроорганизм (штамм микроорганизма), который при усвоении участвует в метаболическом процессе субъекта и обеспечивает появление положительного эффекта в организме. Согласно настоящему изобретению пробиотическая композиция содержит микроорганизмы В. lactis, В. longum и L. rhamnosus, далее она называется "первой пробиотической композицией по изобретению".

В. lactis представляет собой семейство бактерий, обычно используемых в основном в составе йогурта и других молочных продуктов, включая смеси для вскармливания младенцев. Научная классификация В. longum: Великобритания: систематика Bacteria: класс Firmicutes: Actinobacteria, порядок: Bifidobacteria, семейство: Bifidobacteriaceae, род: Bifidobacterium, подвид: Bifidobacterium animalis subsp. lactis.

L. rhamnosus представляет собой семейство бактерий, обычно используемых в качестве пробиотиков, в основном содержащихся в йогурте и других молочных продуктах, включая смеси для вскармливания младенцев. Научная классификация L. rhamnosus: Великобритания: систематика Bacteria: класс Firmicutes: порядок Bacilli: Lactobacillales, семейство: Lactobacillaceae, род: Lactobacillus, подвид: Lactobacillus rhamnosus.

Более того, бифидобактерии В. longum являются грамотрицательными, каталаза-отрицательными бактериями, имеющими округлую форму, находящимися в желудочно-кишечном тракте, где они продуцируют молочную кислоту. Научная классификация В. longum: Великобритания: систематика Bacteria: класс Firmicutes: Actinobacteria, порядок: Bifidobacteria, семейство: Bifidobacteriaceae, род: Bifidobacterium, подвид: Bifidobacterium longum.

Согласно конкретному варианту первая пробиотическая композиция по изобретению содержит В. lactis СЕСТ 8145 (и/или их штаммы), В. longum ES1 СЕСТ 7347 (и/или их штаммы) и/или L. rhamnosus СЕСТ 8361 (и/или их штаммы).

Штамм В. lactis СЕСТ 8145 был выделен из каловой массы здорового грудного ребенка в возрасте менее трех (3) месяцев. Этот штамм был депонирован 14 мая 2012 г. в соответствии с Будапештским договором в Испанской коллекции типовых культур в качестве международного депозитария (расположенной по адресу Building 3 CUE, Pare Universitat de Valencia, Escardino, 9, 46980 Paterna (Valencia) SPAIN). Штамму был присвоен депозитарный номер СЕСТ 8145.

Штамм L. rhamnosus СЕСТ 8361 был выделен из каловой массы здорового грудного ребенка в возрасте менее трех (3) месяцев. Этот штамм был депонирован 27 мая 2013 г. в соответствии с Будапештским договором в Испанской коллекции типовых культур в качестве международного депозитария (расположенной по адресу Building 3 CUE, Pare Universitat de Valencia, Escardino, 9, 46980 Paterna (Valencia) SPAIN). Штамму был присвоен депозитарный номер СЕСТ 8361.

Штамм В. longum strain СЕСТ 7347 был выделен из каловой массы здорового грудного ребенка в возрасте менее трех (3) месяцев и депонирован 20 декабря 2007 г. в соответствии с Будапештским договором в Испанской коллекции типовых культур в качестве международного депозитария (расположенной по адресу Building 3 CUE, Pare Universitat de Valencia, Escardino, 9, 46980 Paterna (Valencia) SPAIN). Штамму был присвоен депозитарный номер СЕСТ 7347.

Настоящее изобретение охватывает также такие микроорганизмы или бактерии, которые относятся к микроорганизмам В. lactis, В. longum и L. rhamnosus (или их соответствующим штаммам В. lactis СЕСТ 8145, L. rhamnosus СЕСТ 8361 и В. longum СЕСТ 7347), и они могут быть частью первой пробиотической композиции по изобретению, поскольку они сохраняют способность уменьшать и/или улучшать процесс постепенного развития вспышек псориаза или псориаза у субъекта. Примерами штаммов или микроорганизмов из этих штаммов, содержащихся в первой пробиотической композиции по изобретению, могут быть мутанты и генетически модифицированные организмы, которые характеризуются изменениями в их геноме по сравнению с геномом штаммов по изобретению, но которые не влияют на способность штаммов уменьшать и/или улучшать процесс постепенного развития вспышек псориаза или псориаза у субъекта. Штаммы, относящиеся к В. lactis, В. longum и L. rhamnosus или полученные из штаммов В. lactis СЕСТ 8145, L. rhamnosus СЕСТ 8361 и В. longum СЕСТ 7347, могут быть продуцированы естественным путем или целенаправленно методами мутагенеза, известными из предшествующего уровня техники, такими как, например, но без ограничения, выращивание родительского штамма в присутствии мутагенных агентов или стресс-факторов, или генно-инженерный метод, направленный на модификацию, делецию и/или инсерцию специфических генов. Таким образом, как указано выше, настоящее изобретение охватывает также генетически модифицированные организмы, полученные из В. lactis, В. longum и L. rhamnosus или из штаммов В. lactis СЕСТ 8145, L. rhamnosus СЕСТ 8361 и В. longum СЕСТ 7347, которые сохраняют способность уменьшать и/или улучшать процесс постепенного развития вспышек псориаза у субъекта и, следовательно, могут быть использованы при лечении псориаза. Примером теста проверки, обладает ли организм способностью уменьшать и/или улучшать процесс постепенного развития вспышек псориаза у субъекта является тест, описанный в имеющихся в данной заявке примерах.

Кроме того, данное изобретение охватывает также компоненты клеток, метаболиты и молекулы, секретированные бактериями В. lactis, В. longum и L. rhamnosus или их соответствующими штаммами В. lactis СЕСТ 8145, L. rhamnosus СЕСТ 8361 и/или В. longum СЕСТ 7347, а также композиции, содержащие указанные компоненты, и их применение для лечения и/или профилактики вспышек псориаза и/или псориаза. Компоненты бактериальных клеток могут включать компоненты клеточной стенки (такие как, но без ограничения, пептидогликан), нуклеиновые кислоты, компоненты мембраны и другие компоненты, такие как белки, липиды и углеводы, и их комбинации (такие как липопротеины, гликолипиды или гликопротеины). Метаболиты включают любые молекулы, полученные или модифицированные при помощи бактерий в результате их метаболической активности в процессе роста, их использования в технологических процессах или во время хранения продукта (первой пробиотической композиции по изобретению). Примеры таких метаболитов включают, но без ограничения, органические и неорганические кислоты, белки, пептиды, аминокислоты, ферменты, липиды, углеводы, липопротеины, гликолипиды, гликопротеины, витамины, соли, минералы или нуклеиновые кислоты. Секретированные молекулы включают любую молекулу, секретированную или высвобожденную наружу бактерией в процессе роста, при ее применении в технологических процессах (например, при переработке пищевых продуктов или обработке лекарственных средств) или во время хранения продукта. Примеры этих молекул включают, но без ограничения, органические и неорганические кислоты, белки, пептиды, аминокислоты, ферменты, липиды, углеводы, липопротеины, гликолипиды, гликопротеины, витамины, соли, минералы или нуклеиновые кислоты.

Как очевидно специалистам в данной области техники, первая пробиотическая композиция по изобретению может составляться для фармацевтического применения, то есть, образовывать часть фармацевтических продуктов, которые нужно ввести субъекту (перорально или топически и т.д.) и/или для введения в пищевые продукты, то есть, образовывать часть пищевых продуктов, потребляемых при питании субъектом. Следовательно, согласно конкретному варианту первая пробиотическая композиция по изобретению представляет собой фармацевтическую композицию и/или питательную композицию.

Фармацевтическая композиция для применения при лечении и/или профилактике вспышек псориаза и/или псориаза представляет собой набор компонентов, который образован по меньшей мере микроорганизмами В. lactis, L. rhamnosus и В. longum, в частности, штаммами В. lactis СЕСТ 8145, L. rhamnosus СЕСТ 8361 и/или В. longum СЕСТ 7347 (или производными штаммами) при любой концентрации и который дополнительно может содержать один или более компонентов или одно или более соединений, обладающих любой биологической, фармакологической и/или ветеринарной активностью, пригодной для профилактики и/или лечения вспышек псориаза и/или псориаза; и/или может содержать один или более компонентов, которые после введения субъекту могут дополнительно увеличивать, усиливать и/или промотировать активность штаммов, включенных в состав первой пробиотической композиции по изобретению. Как очевидно специалисту в данной области, дополнительные компоненты или соединения должны быть совместимыми со штаммами первой пробиотической композиции по изобретению. В контексте настоящего изобретения термин "фармацевтическая композиция" охватывает также ветеринарные композиции.

Компоненты или соединения, пригодные для лечения вспышек псориаза и/или псориаза, которые могут быть частью фармацевтической композиции, включают, но без ограничения, соединения, регулирующие иммунный ответ, такие как метотрексат или циклоспорин, ретиноиды или такие соединения, как витамин D или витамин А, анти-TNF биологические лекарственные препараты, рекомбинантные интерлейкины или адъюванты, пригодные для лечения псориаза в сочетании с фототерапией.

Согласно конкретному варианту фармацевтическая композиция содержит также фармацевтически приемлемый носитель и/или эксципиент.

Термин "эксципиент" относится к веществу, которое способствует абсорбции любых компонентов или соединений, входящих в состав первой пробиотической композиции по изобретению, а именно, штаммов по изобретению, или стабилизирует компоненты или соединения, и/или содействует приготовлению фармацевтической композиции в смысле придания ей нужной консистенции или вкуса, чтобы сделать ее более приятной. Так, эксципиенты могут выполнять функцию, например, но без ограничения, связывания компонентов (например, крахмалы, сахара или целлюлоза), придания сладкого вкуса, окрашивания, защиты активного ингредиента (например, для изоляции его от воздействия воздуха и/или влаги), заполнения пилюли, капсулы или любую другую функцию представления или дезинтеграции для облегчения растворения компонентов без исключения других эксципиентов, не перечисленных в этом параграфе. Следовательно, термин "эксципиент" определяется как материал, который, будучи включенным в галеновые формы, добавляется к активным ингредиентам или их ассоциациям, способствует их приготовлению и стабильности, модифицирует их органолептические свойства или определяет физико-химические свойства фармацевтической композиции и ее биодоступность. "Фармацевтически приемлемый" эксципиент должен обеспечивать активность компонентов или соединений фармацевтической композиции, то есть, быть совместимым со штаммами по изобретению.

"Галеновая форма" или "фармацевтическая форма" является такой формой, к которой адаптируются активные ингредиенты и эксципиенты для получения фармацевтической композиции или лекарства. Это определяется комбинацией формы, в которой фармацевтическая композиция предоставлена производителем, и формы, в которой она вводится.

Термин "разбавитель" или "носитель" обозначает предпочтительно инертное вещество. Функции носителя заключаются в облегчении введения других компонентов или соединений, в лучшей дозировке и лучшем введении и/или обеспечении консистентности и формы фармацевтической композиции. Следовательно, носитель является веществом, используемым в лекарственном средстве для разбавления любого из компонентов или соединений фармацевтической композиции по данному изобретению до данного объема или веса; или веществом, которое даже без разбавления этих компонентов или соединений способно обеспечить лучшую дозировку и лучшее введение и/или придать нужные консистентность и форму лекарственному средству. Когда композиция представляет собой жидкость, фармацевтически приемлемый носитель является разбавителем. Носитель может быть природного или не природного происхождения. Примеры фармацевтически приемлемых носителей включают, без ограничения, воду, солевые растворы, спирт, растительные масла, полиэтиленгликоли, желатин, лактозу, крахмал, амилозу, стеарат магния, тальк, поверхностно-активные вещества, кремниевую кислоту, вязкий парафин, парфюмерное масло, моноглицериды и диглицериды жирных кислот, сложные эфиры жирных кислот на основе нефтепродуктов, гидроксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидон и т.п.

Кроме того, эксципиент и носитель должны быть фармакологически приемлемыми, то есть, эксципиент и носитель оцениваются и допускаются, если они не причиняют вреда субъекту, которому они вводятся.

В каждом случае форма выпуска фармацевтической композиции будет адаптироваться к используемому методу ее введения. Так, эта композиция может быть составлена в виде растворов или любой другой формы клинически допустимого введения в терапевтически эффективном количестве. Фармацевтическая композиция может быть изготовлена в виде твердого, полутвердого или жидкого препаратов, таких как таблетки, капсулы, порошки, гранулы, растворы, суппозитории, гели или микросферы. В соответствии с конкретным вариантом фармацевтическая композиция изготавливается для введения в виде жидкой формы или твердой формы.

Согласно другому конкретному варианту твердая форма выбирается из группы, состоящей из таблеток, леденцов для рассасывания, сладких подушечек, жевательных таблеток, жевательных резинок, капсул, саше, порошков, гранул, частиц с покрытием или таблеток с покрытием, пилюль, драже, троше, таблеток, покрытых кишечнорастворимой оболочкой, и капсул и диспергируемых плоских полосок и пленок.

В соответствии с другим конкретным вариантом жидкая форма выбирается из группы, состоящей из пероральных растворов, суспензий, эмульсий и сиропов.

Кроме того, известны различные системы, которые могут быть использованы для введения первой пробиотической композиции по изобретению с пролонгированным высвобождением, включая, например, инкапсулирование в липосомы, микропузырьки, микрочастицы или микрокапсулы и т.п. Подходящие лекарственные формы с пролонгированным высвобождением, а также материалы и способы их приготовления хорошо известны в предшествующем уровне техники. Так, вводимая перорально форма первой пробиотической композиции по изобретению представляет собой форму с пролонгированным высвобождением, содержащую дополнительно по меньшей мере одно покрытие или матрицу. Покрытие или матрица с пролонгированным высвобождением включает, без ограничения, природные, полусинтетические или синтетические полимеры, не растворимые в воде или модифицированные, воски, жиры, жирные спирты, жирные кислоты, природные, полусинтетические или синтетические пластификаторы, или комбинацию двух или более указанных веществ. Кишечнорастворимые покрытия могут наноситься с использованием традиционных способов, известных специалистам в данной области.

В дополнение к тому, что было описано выше, настоящее изобретение также охватывает вариант, когда первая пробиотическая композиция по изобретению может вводиться субъекту вместе с другими компонентами или соединениями, хотя эти соединения не являются частью первой пробиотической композиции по изобретению. Примеры таких компонентов или соединений упомянуты в предыдущих параграфах.

В том случае, когда первая пробиотическая композиция по изобретению составляется как питательная композиция, указанная питательная композиция может быть пищевой или вводиться в пищу или в пищевой продукт, предназначенные для потребления как людьми, так и животными. Таким образом, согласно конкретному варианту питательная композиция выбирается среди пищевого продукта (который может служить пищей для специальных питательных целей или как медицинский пищевой продукт) и питательной добавки.

Согласно настоящему изобретению термин "питательная композиция" относится к такому пищевому продукту, который независимо от введения питательных веществ субъекту, который его потребляет, благоприятно влияет на одну или несколько функций организма, обеспечивая хорошее здоровье и лучшее качество жизни. Согласно данному изобретению указанная питательная композиция предназначена для облегчения, уменьшения, лечения и/или профилактики вспышек псориаза и/или псориаза.

Термин "добавка", являющийся синонимом любого из терминов "диетическая добавка", "питательная добавка", "пищевая добавка", или "алиментарная добавка", или "алиментарный комплемент", относится к продуктам или препаратам, цель которых состоит в дополнении обычного питания, состоящего из источников концентрированных питательных веществ или других веществ с питательным или физиологическим действием. В соответствии с данным изобретением термин "вещество", которое обладает питательным или физиологическим действием на субъекта, когда алиментарный комплемент усваивается, обозначает микроорганизмы В. lactis, L. rhamnosus и В. longum, в частности штаммы В. lactis СЕСТ 8145, L. rhamnosus СЕСТ 8361 и/или В. longum СЕСТ 7347, которые являются частью первой пробиотической композиции по изобретению. Пищевая добавка может вводиться в отдельности или в комбинированной форме и продаваться в виде лекарственной формы, то есть, в виде капсул, пилюль, таблеток и других аналогичных форм, саше с порошками, в ампулах с жидкостями и во флаконах, дозирующих капли, и в виде других похожих форм с жидкостями и порошками, предназначенных для приема однократной дозы.

Имеется большое количество питательных веществ (нутриентов) и других элементов, которые могут входить в состав алиментарных комплементов, включая, наряду с прочими, витамины, минералы, аминокислоты, незаменимые жирные кислоты, клетчатку, ферменты, растения и растительные экстракты. Поскольку их роль заключается в дополнении подачи питательных веществ в пищевые продукты, они не должны быть использованы как заменители для сбалансированного питания, и их потребление не должно превышать дневную дозу, однозначно рекомендуемую врачом или нутриционистом. Первая пробиотическая композиция может также быть частью так называемой "пищи для особых групп", то есть, пищевых продуктов, которые отвечают особым требованиям к питательным веществам.

Примеры пищевых продуктов, которые могут содержать первую пробиотическую композицию по изобретению (микроорганизмы В. lactis, L. rhamnosus и В. longum, в частности, штаммы В. lactis СЕСТ 8145, L. rhamnosus СЕСТ 8361 и/или В. longum СЕСТ 7347 (или их производные штаммы)) включают, но без ограничения, пищевые продукты, молочные продукты, растительные продукты, мясные продукты, снеки, шоколад, напитки, детское питание, хлеб, жареную пищу, промышленные хлебобулочные изделия и бисквиты. Примеры молочных продуктов включают, но без ограничения, продукты, полученные из ферментированного молока (например, но без ограничения, йогурт или сыр) или из неферментированного молока (например, но без ограничения, мороженое, масло, маргарин или сыворотка). К растительным продуктам относятся, например, но без ограничения, хлеб, полученный в любой форме, ферментированный (например, на соевом йогурте, овсяном йогурте и т.п.) или неферментированный, и снеки. Напитком может быть, но без ограничения, неферментированное молоко. Согласно конкретному варианту пищевой продукт или пища выбирается из группы, состоящей из фруктовых или овощных соков, мороженого, детских смесей, молока, йогурта, сыра, ферментированного молока, порошкового молока, круп, хлебобулочных изделий, молочных продуктов, мясных продуктов и напитков.

Первая пробиотическая композиция по изобретению дополнительно может содержать другие микроорганизмы помимо В. lactis, L. rhamnosus и В. longum, в частности, штаммов В. lactis СЕСТ 8145, L. rhamnosus СЕСТ 8361 и/или В. longum СЕСТ 7347. Так, согласно конкретному варианту первая пробиотическая композиция по изобретению содержит также микроорганизм, выбранный из группы, состоящей из Lactobacillus sp., Streptococcus sp., Bifidobacterium sp., Saccharomyces sp., Kluyveromyces sp. и их комбинаций.

Согласно другому более конкретному варианту Lactobacillus sp. представляет собой L. rhamnosus, L. delbrueckii subsp. bulgaricus, L. kefir, L. parakefir, L. brevis, L. casei, L. plantarum, L. fermentum, L. paracasei, L. acidophilus, L. paraplantarum или L. reuteri; Streptococcus sp. представляет собой St. thermophilus; Bifidobacterium sp.представляет собой В. longum, В. breve, В. bifidum, В. catenulatum, В. adolescentis или В. pseudocatenulatum; Saccharomyces представляет собой S. cerevisiae или S. boulardii; и Kluyveromyces sp.представляет собой K. lactis или K. marxianus.

В соответствии с другим конкретным вариантом композиция по изобретению вводится субъекту с пищей.

Как очевидно специалисту в данной области, микроорганизмы В. lactis, L. rhamnosus и В. longum, в частности, штаммы В. lactis СЕСТ 8145, L. rhamnosus СЕСТ 8361 и/или В. longum СЕСТ 7347, должны быть представлены в пробиотической композиции по изобретению в терапевтически эффективном количестве, чтобы они могли проявить свое действие облегчения, уменьшения, лечения и/или профилактики вспышек псориаза.

Согласно настоящему изобретению термин "терапевтически эффективное количество" обозначает то количество компонента или соединения в фармацевтической композиции, которое при введении субъекту является достаточным для получения желаемого эффекта. Указанный компонент или соединение в фармацевтической композиции относится к микроорганизмам В. lactis, L. rhamnosus и В. longum, в частности, к штаммамт В. lactis СЕСТ 8145, L. rhamnosus СЕСТ 8361 и/или В. longum СЕСТ 7347. Терапевтически эффективное количество будет меняться, в зависимости от, например, возраста, веса пациента, общего состояния здоровья, пола и пищевого рациона субъекта, а также, наряду с другими факторами, в зависимости от способа и времени введения, интенсивности экскреции или комбинации лекарств.

Так, согласно конкретному варианту общая концентрация микроорганизмов В. lactis, L. rhamnosus и В. longum, в частности, штаммов В. lactis СЕСТ 8145, L. rhamnosus СЕСТ 8361 и/или В. longum СЕСТ 7347, в композиции составляет величину между 10³ и 10¹² КОЕ, предпочтительно, 10⁹ КОЕ. В соответствии с другим конкретным вариантом изобретения доза введения микроорганизмов В. lactis, L. rhamnosus и В. longum, в частности штаммов В. lactis СЕСТ 8145, L. rhamnosus СЕСТ 8361 и/или В. longum СЕСТ 7347 в композицию составляет величину между 10⁶ и 10¹² КОЕ/день, предпочтительно, 10⁹ КОЕ/день, и согласно более конкретному варианту схема введения включает введение по меньшей мере один раз в день, в частности, два раза ежедневно, и более конкретно, три раза в день, каждый раз вместе с приемом пищи (во время завтрака, обеда и ужина).

Согласно другому конкретному варианту первой пробиотической композиции по изобретению концентрация В. longum, в частности, штамма В. longum СЕСТ 7347, равна по меньшей мере тридцать процентов (30%) в расчете на общую концентрацию микроорганизмов, содержащихся в композиции, предпочтительно по меньшей мере 31%, 32%, 33%, 34% или 35% в расчете на общую концентрацию микроорганизмов, содержащихся в первой пробиотической композиции по изобретению.

Согласно еще более конкретному варианту концентрация В. longum составляет по меньшей мере 35% в расчете на общую концентрацию микроорганизмов, содержащихся в первой пробиотической композиции по изобретению, концентрация В. lactis составляет по меньшей мере 35% в расчете на общую концентрацию микроорганизмов, содержащихся в первой пробиотической композиции по изобретению, и концентрация L. rhamnosus составляет по меньшей мере 30% в расчете на общую концентрацию микроорганизмов, содержащихся в первой пробиотической композиции.

Благодаря способности первой пробиотической композиции по изобретению уменьшать и/или улучшать постепенное развитие вспышек псориаза у пациента, а также ослаблять процесс постепенного развития псориаза, когда прием пробиотической композиции приостановлен, настоящее изобретение предусматривает применение пробиотической композиции по изобретению для профилактики и/или лечения вспышек псориаза и/или псориаза.

Согласно данному изобретению термин "субъект" является эквивалентом термина "пациент"; поэтому оба термина в данной заявке могут быть использованы как взаимозаменяемые. Термин "субъект" означает в дополнение к любому пациенту-человеку любое животное, относящиеся к любому виду. Примеры субъектов включают, но без ограничения, животных, представляющих коммерческий интерес, таких как птицы (куры, страусы, цыплята, гуси, куропатки и т.д.), кроликов, зайцев, домашних животных (собак, кошек и т.д.), овец, семейство козлиных (коз и пр.), свиней (кабанов, домашних свиней и пр.), семейство лошадиных (лошади, пони и т.д.), крупный рогатый скот (быков, коров, буйволов и т.д.); охотничьих животных, таких как изюбры, олени, северные олени и т.д.; и людей. Однако согласно конкретному варианту субъект представляет собой млекопитающее, предпочтительно, млекопитающее является человеком любой расы, любого пола или возраста.

Согласно данному изобретению термин "профилактика" означает предупреждение возникновения заболевания или патологического состояния у субъекта, в особенности, когда у такого субъекта есть предрасположенность к патологическому состоянию, но когда диагноз еще не был поставлен. Согласно настоящему изобретению заболевание или патологическое состояние является вспышкой псориаза или псориазом.

Согласно настоящему изобретению термин "лечить" или "лечение" означает ингибирование заболевания или патологического состояния, то есть, остановку их развития; облегчение заболевания или патологического состояния, то есть, вызывание (индукцию) ремиссии заболевания или патологического состояния; и/или стабилизацию заболевания или патологического состояния у пациента. Согласно настоящему изобретению заболевание или патологическое состояние является вспышкой псориаза или псориазом.

Согласно данному изобретению термин "псориаз" означает хронический воспалительный дерматоз, который вызывает вспышки болезни, изначальным очагом повреждения которого является эритема как проявление лежащего в основе воспалительного процесса и эпидермальной гиперпролиферации вследствие репликации эпидермальных клеток, которая приводит к появлению на коже гиперкератоза или скопления чешуек на поверхностном слое кожи.

Псориаз может проявляться во многих формах и местах, отличных от кожи. Так, в соответствии с конкретным вариантом псориаз выбран из группы, состоящей из пятнистого псориаза, ладонно-подошвенного псориаза (пальмо-плантарного псориаза), псориаза волосистой части головы, обратного (инверсионного) псориаза, поражающего кожные складки, каплевидного псориаза или псориаза, сопровождающегося сыпью, псориаза ногтей и артропатического псориаза. Субъект может одновременно страдать от одного или более этих проявлений псориаза.

Согласно настоящему изобретению термин "вспышки псориаза" относится к повторному появлению типичных эритематозных чешуйчатых очагов псориаза после периода отсутствия клинических признаков псориаза.

Вторая пробиотическая композиция по изобретению

Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к пробиотической композиции, содержащей микроорганизмы Bifidobacterium animalis subs, lactis (далее В. lactis), Bifidobacterium longum и Lactobacillus rhamnosus, причем концентрация В. longum в расчете на общую концентрацию микроорганизмов, содержащихся в композиции, составляет по меньшей мере 30%.

Термин "пробиотическая композиция" был определен ранее и применяется согласно этому аспекту изобретения. Далее термин "вторая пробиотическая композиция по изобретению" означает пробиотическую композицию, содержащую микроорганизмы В. lactis, В. longum и L. rhamnosus, причем концентрация В. longum в расчете на общую концентрацию микроорганизмов, содержащихся во второй композиции, составляет по меньшей мере 30%, предпочтительно по меньшей мере 35%. Согласно конкретному варианту каждый микроорганизм содержится в количестве по меньшей мере 30% в расчете на общую концентрацию микроорганизмов, содержащихся во второй пробиотической композиции по изобретению.

Согласно конкретному варианту концентрация В. longum по отношению к общей концентрации микроорганизмов, представленных в композиции, составляет по меньшей мере 31%, 32%, 33%, 34% или 35%.

В более конкретном варианте второй пробиотической композиции концентрация В. longum составляет по меньшей мере 35% от общего количества микроорганизмов, присутствующих во второй пробиотической композиции по изобретению, концентрация В. lactis составляет по меньшей мере 35% от общего количества микроорганизмов, присутствующих во второй пробиотической композиции по изобретению и концентрация L. rhamnosus составляет по меньшей мере 30% от общего количества микроорганизмов, присутствующих во второй пробиотической композиции по изобретению.

Как объясняется в предыдущем аспекте изобретения, В. lactis и L. rhamnosus представляют собой бактерии, обычно используемые в качестве пробиотиков, которые обнаруживаются главным образом в йогуртах и в других молочных продуктах, включая детские смеси. При этом В. longum представляет собой грамотрицательную, каталазаотрицательную бактерию, округлую по форме, находящуюся в желудочно-кишечном тракте, где она продуцирует молочную кислоту. Согласно конкретному варианту изобретения вторая пробиотическая композиция по изобретению включает штаммы В. lactis СЕСТ 8145, B. longum ES1 СЕСТ 7347 и/или Lactobacillus rhamnosus СЕСТ 8361. Больше ссылок на эти штаммы можно найти в предыдущем аспекте изобретения.

Также все конкретные варианты, описанные для первой пробиотической композиции, применимы ко второй пробиотической композиции изобретения, например, но без ограничения, следующие:

- Пробиотическая композиция представляет собой фармацевтическую композицию или питательную композицию, причем фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый носитель и/или эксципиент, она приготовлена для применения в жидком или твердом виде, а питательная копозиция представляет собой биоактивную пищевую добавку.

- Пробиотическая композиция содержит дополнительные микроорганизмы, такие как Lactobacillus sp., Streptococcus sp., Bifidobacterium sp., Saccharomyces sp., Kluyveromyces sp. или их комбинации.

- Общая концентрация микроорганизмов штаммов В. lactis, L. rhamnosus и В. longum в композиции составляет между 10³ и 10¹² КОЕ, предпочтительно, 10⁹ КОЕ.

- Вводимая доза микроорганизмов В. lactis, L. rhamnosus и В. longum, в частности В. lactis СЕСТ 8145, L. rhamnosus СЕСТ 8361 и/или В. longum СЕСТ 7347 в композиции составляет между 10⁶ и 10¹² КОЕ / день, предпочтительно, 10⁹ КОЕ / день.

- Схема введения включает введение по меньшей мере один раз в день, в частности, дважды в день, три раза в день, при каждом приеме пищи (во время завтрака, обеда и ужина).

В другом аспекте настоящее изобретение относится ко второй пробиотической композиции по изобретению для применения в качестве лекарственного средства.

В другом аспекте настоящее изобретение относится ко второй пробиотической композиции по изобретению для применения для лечения и/или предупреждения вспышек псориаза и/или псориаза.

Способ лечения и/или предупреждения воспалительных кожных заболеваний

Согласно другому аспекту изобретение относится к способу лечения вспышек псориаза или псориаза у субъекта, см. далее в данной заявке, причем этот способ лечения включает введение пробиотической композиции субъекту, у которого наблюдается воспалительное кожное заболевание, при этом пробиотическая композиция содержит штаммы В. lactis, в частности, В. lactis СЕСТ 8145, L. rhamnosus, в частности, L. rhamnosus СЕСТ 8361 и В. longum, в частности, В. longum СЕСТ 7347.

Все конкретные термины, определения и варианты, относящиеся к предыдущим аспектам изобретения, применимы к способу лечения по изобретению.

На протяжении всего описания и в формуле изобретения не предполагается, что слово "содержать" и его варианты исключают другие технические характеристики, добавки, компоненты или стадии. Специалистам в данной области техники другие цели, преимущества и особенности изобретения станут очевидными частично из описания и частично в результате применения изобретения на практике. Нижеприведенные примеры и фигуры даются в качестве иллюстрации и не претендуют на ограничение объема настоящего изобретения.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

На Фигуре 1 представлена диаграмма, показывающая анализ основных компонентов микробиологических профилей образцов псориазных пациентов, с транслокацией (показано буквой "х" и серым цветом) и без транслокации (показано буквой "о" и черным цветом).

На Фигуре 2 представлена диаграмма, показывающая анализ основных компонентов микробиологических профилей образцов псориазных пациентов, с транслокацией (показано буквой "х" и серым цветом) и без транслокации (показано буквой "о" и черным цветом) по сравнению со здоровыми субъектами.

На Фигуре 3 представлена диаграмма, показывающая анализ изменчивости образцов псориазных пациентов, с транслокацией и без транслокации, по сравнению с образцами популяции здоровых людей. На фигуре показаны уровни статистической значимости после применения критерия Уилкоксона (Вилкоксона).

На Фигуре 4 представлена диаграмма, показывающая анализ основных компонентов псориазных пациентов, с транслокацией и без транслокации, принадлежащих к энтеротипу 1 или классифицированных как энтеротип 1. Микроорганизмы наиболее широко представленных в образцах родов, расположенные на фигуре наверху справа, показаны черным цветом, а родов, представленных в тех же самых образцах в наименьшей степени, показаны серым цветом. И, напротив, в образцах, расположенных в нижнем левом углу, микроорганизмы родов, отмеченных черным цветом, встречаются реже, а родов, отмеченных серым цветом, являются более распространенными.

На Фигуре 5 представлена диаграмма, показывающая анализ основных компонентов псориазных пациентов, с транслокацией и без транслокации, принадлежащих к энтеротипу 2 или классифицированных как энтеротип 2. Микроорганизмы наиболее широко представленных в образцах родов, расположенные на фигуре наверху справа, показаны черным цветом, а родов, представленных в тех же самых образцах в наименьшей степени, показаны серым цветом. И, напротив, в образцах, расположенных в нижнем левом углу, микроорганизмы родов, отмеченных черным цветом, встречаются реже, а родов, отмеченных серым цветом, являются более распространенными.

На Фигуре 6 представлена диаграмма, показывающая анализ основных компонентов псориазных пациентов, с транслокацией и без транслокации, принадлежащих к энтеротипу 3 или классифицированных как энтеротип 3. Микроорганизмы наиболее широко представленных в образцах родов, расположенные на фигуре наверху справа, показаны черным цветом, а родов, представленных в тех же самых образцах в наименьшей степени, показаны серым цветом. И, напротив, в образцах, расположенных в нижнем левом углу, микроорганизмы родов, отмеченных черным цветом, встречаются реже, а родов, отмеченных серым цветом, являются более распространенными.

На Фигуре 7 представлен график, показывающий процентную долю пациентов, у которых наблюдается частичный ответ на лечение, в двух группах: в группе а, пролеченной пробиотической композицией; группе b, пролеченной плацебо.

На Фигуре 8 представлен график, показывающий процентную долю пациентов, у которых наблюдается ответ на лечение, в двух группах: в группе а, пролеченной пробиотической композицией; группе b, пролеченной плацебо.

На Фигуре 9 представлен график, показывающий процентную долю пациентов, у которых наблюдается отсутствие эффекта лечения (ответа на лечение), в двух группах: в группе а, пролеченной пробиотической композицией; группе b, пролеченной плацебо.

На Фигуре 10 представлен график, показывающий число пациентов с новой вспышкой псориаза после последующего наблюдения в течение шести (6) месяцев (срединное значение): в группе а, пролеченной пробиотической композицией; в группе b, пролеченной плацебо.

На Фигуре 11 представлен график, показывающий процентную долю случаев рецидива после лечения в течение трех (3) месяцев пробиотической композицией по сравнению с плацебо: в группе а, пролеченной пробиотической композицией; в группе b, пролеченной плацебо.

ПРИМЕРЫ

Ниже данное изобретение иллюстрируется с помощью тестов, осуществленных авторами изобретения, которые показывают свойства пробиотической композиции по изобретению.

Пример 1 - Определение бактериальной микробиоты у пациентов с псориазом.

1.1 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Используя образцы кала псориазных пациентов с транслокацией и без транслокации, осуществляли экстракцию генетического материала (DNA, ДНК) посредством комбинации механических и ферментативных методов разрушения клеточных стенок и мембран с целью повысить выход процесса экстракции и избежать систематической ошибки при определении наличия бактерий с клеточной стенкой (Грам+), количество которых может быть уменьшено вследствие недостаточного разрушения стенки обычными методами экстракции. Этот генетический материал, полученный с помощью экстракции, качественно и количественно можно определять, используя спектрофотометр Nanodrop 2000 ThermoScientific, чтобы внимательно изучить соотношения 260 нм / 280 нм и 260 нм / 230 нм, которые отмечают качество экстракции (присутствие ПЦР (PCR) ингибиторов, пигмента и т.д.). Затем, после проверки качества генетического материала образцов, используя библиотеки массивного секвенирования, проводили захват гипервариабельной области v3-v4 бактериального гена 16S рибосомальной РНК (rRNA) (согласно Klindworth A, et al. (2013) Nucleic Acids Res 41: el) в соответствии с протоколом, описанным в технологии компании Illumina для анализа микробиологической композиции на основе захвата 16S rRNA. Каждую библиотеку характеризовали количественно с помощью наборов Quant-iT PicoGreen компании Invitrogen и смешивали в эквимолярном соотношении для последующего секвенирования.

Образцы секвенировали на платформе MiSeq, проводя 300 циклов секвенирования "спаренных-концевых" фрагментов. Полученные файлы форматов FASTQ обрабатывали, чтобы гарантировать высококачественный анализ последовательностей. Для этой цели проводили контроль качества, состоящий из:

1. Соединения концов для реконструирования уникальных последовательностей с использованием программы 'pear' v0.9.6. (Zhang J, et al (2014) Bioinformatics 30 (5):614-20).

2. Элиминирования адаптеров для секвенирования и праймеров для захвата из гипервариабельных областей V3 и V4 с использованием программы Cutadapt версия 1.9.1. (Martin М (2011) EMBnet.journal [S.L.], 17 (1): 10-12. ISSN 2226-6089).

3. Элиминирования "низкокачественных" последовательностей с применением пакета FASTX-ToolKit версия 0.91.

4. Элиминирования химер, полученных в результате ПЦР (PCR), с использованием программы UCHIME (Dec 2015) (Edgar RC, et al (2011) Aug 15; 27 (16): 2194-200) и последней базы данных химер.

Полученные в результате образцы сравнивали с базой данных 16S rRNA (NCBI), используя локальное выравнивание в соответствии с программой BLAST (Altschul SF, et al (1990) J. Mol Biol. 215: 403-410).

Для каждой последовательности, для которой полученная оценка идентичности составляла 95%, внимательно изучали тип, семейство, род и вид титров (уровней, количеств) различной таксономической принадлежности.

R, пакет программ обработки статистических данных, был использован для толкования статистических данных и построения графиков для анализа главных компонентов (Метод главных компонент) (РСА).

1.2 РЕЗУЛЬТАТЫ

С использованием образцов кала пациентов, страдающих псориазом, проводили исследование микробной композиции кишечника с целью определить:

1. Действительно ли микробная композиция кишечника псориазных пациентов с транслокацией бактериальной ДНК из кишечника в образцах периферической крови аналогична, или наблюдаются различия по сравнению с псориазными пациентами без транслокации бактериальной ДНК из кишечника.

2. Действительно ли композиция микробиома кишечника псориазных пациентов отличается от композиции микробиома кишечника у здоровой популяции.

Данное исследование основано на захвате гипервариабельной области v3-v4 гена бактериальной 16S rRNA, как указано выше, и последующем секвенировании на платформе MiSeq Illumina (Metagenomic Sequencing Library Preparation Protocol). (ILLUMINA).

В целом микробиологические профили образцов, взятых у пациентов с транслокацией и без транслокации, по-видимому, не имеют значительных различий, как можно видеть на Фигуре 1, где пациенты с транслокацией (показаны буквой "х" и серым цветом) и без транслокации (показаны буквой "о" и черным цветом) распределены равномерно.

На Фигуре 1 показано, что в образцах, расположенных ближе к правой стороне графика, наблюдается повышенное содержание микроорганизмов рода Ruminococcus и рода Gemmiger и пониженное содержание микроорганизмов Akkermansia, Bacteroides и Prevotella, тогда как образцы в верхней части графика имеют повышенное содержание Bacteroides и Faecalibacterium и пониженное содержание Akkermansia и Prevotella; следовательно, может быть подтверждено существование собственного микробиома у псориазных пациентов.

При сравнении данных, полученных для этих псориазных пациентов, с данными для микробной композиции здоровой популяции было обнаружено, что между здоровыми субъектами и пациентами с псориазом имеется различие, как видно на Фигуре 2. В основном различия наблюдаются между данными для здоровой популяции и данными для пациентов с псориазом, хотя имеются данные для здоровой популяции, идентичные или близкие к данным некоторых пациентов, страдающих псориазом, но в целом наблюдаются различия в составе бактерий, присутствующих в пищевом тракте.

Более наглядно это можно видеть, когда вариабельность (изменчивость, вариативность) бактериальных популяций между здоровой популяцией и псориазными пациентами анализируют с использованием индекса Шеннона (Фигура 3). Если мы сравниваем здоровую популяцию в целом с пациентами с псориазом с транслокацией, последняя имеет большую вариабельность (изменчивость) (значение р=0.003). Аналогично, для пациентов с псориазом без транслокации также наблюдается более высокая вариабельность (изменчивость) по сравнению со здоровой популяцией (значение р=0.0000002), в этом случае разнообразие среди пациентов с транслокацией несколько выше. Когда мы сравниваем разнообразие среди пациентов с транслокацией и пациентов без транслокации, оно не является значимым, хотя приближается к пределу значимости (значение р=0.054).

Хотя в микрофлоре пищеварительного тракта каждого субъекта существует высокая вариативность, эпидемиологические исследования говорят о том, что микробиоту почти всех из них можно классифицировать как относящуюся к трем отдельным категориям, известным как энтеротипы (Arumugam et al., (2011) Nature 473:174-180). Эта классификация основана на преобладании в каждом из этих трех энтеротипов представителей рода Bacteroides, Prevotella или Ruminococcus. Энтеротип 1 означает, что преобладающими являются микроорганизмы рода Bacteroides, энтеротип 2 относится к варианту, когда преобладающими являются представители рода Prevotella, и энтеротип 3 относится к варианту, когда преобладающими являются представители рода Ruminococcus (Dave et al., (2012). Trans. Res. 160, 246-257).

Согласно такому способу расслоения данных пациентов с псориазом классифицировали в соответствии с преобладанием Bacteroides (ent1), Prevotella (INT2) или Ruminococcus (Ent3) с целью выяснить, действительно ли имелись различия между пациентами с транслокацией бактериальной ДНК в крови и пациентами без транслокации. На Фигуре 4 показаны различия, касающихся пациентов, классифицированных как пациенты с энтеротипом 1. Как уже отмечалось, четкие различия между пациентами с транслокацией и без транслокации отсутствуют.

На Фигуре 5 показано то же, что и на Фигуре 4, но касательно классификации пациентов с энтеротипом 2. В данном случае видна четкая тенденция к преобладанию пациентов с псориазом с транслокацией, так как из шести человек с псориазом, классифицируемых как пациенты с энтеротипом 2, все, кроме одного, имеют транслокацию бактериальной ДНК.

Так же как и в случае энтеротипа 1, применительно к пациентам, классифицированным как пациенты с энтеротипом 3 (Фигура 6), нет различий в преобладании между пациентами с транслокацией бактериальной ДНК в крови и пациентами без транслокации, хотя отмечается, что пациенты с транслокацией проявляют более высокую вариабельность (изменчивость, вариативность), чем пациенты без транслокации.

1.3 ВЫВОДЫ

- Кишечная микробная композиция пациентов с псориазом с транслокацией бактериальной ДНК в крови аналогична кишечной микробной композиции пациентов с псориазом без транслокации.

- Эта кишечная микробная композиция, в свою очередь, отличается от кишечной микробной композиции здоровой популяции.

- С помощью классификации псориазных пациентов в тех же самых энтеротипах/группах, что и здоровой популяции, можно видеть, что пациенты, классифицированные как пациенты с энтеротипом 2 (повышенное количество представителей рода Prevotella), являются преимущественно пациентами с транслокацией.

- Таким образом, вариабельность (изменчивость) в микробной композиции кала псориазных пациентов с транслокацией выше, чем вариабельность (изменчивость) в микробной композиции кала псориазных пациентов, у которых не обнаружено присутствие бактериальной ДНК в крови (пациентов без транслокации).

Пример 2 - Изучение эффекта приема пробиотической композиции у пациентов с псориазом.

2.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Цель клинического исследования

Главная цель:

- Исследовать динамику в группе пациентов с псориазом посредством введения изучаемой пробиотической композиции одновременно с длительным стандартным лечением этих пациентов, оценивая в процентах улучшение у этих пациентов по сравнению с достигнутым согласно описанному в литературе и в соответствии с собственным опытом. С этой целью группу пациентов, которые не принимали пробиотическую композицию по изобретению, использовали для того, чтобы оценивать разницу в процентных долях вылеченных пациентов в конце периода наблюдения.

Вторичные цели:

- Определить уровни биомаркеров системного воспаления в крови: TNF-α, IF-γ и Интерлейкина 1В.

- Оценить тяжесть псориаза с помощью PASI (индекса распространенности и тяжести псориаза) теста в обеих группах пациентов в присутствии и в отсутствие бактериальной транслокации из кишечника.

Пробиотическая композиция

В исследовании использовали пробиотическую композицию (Готовая композиция, Formulated 004023), содержащую штаммы Bifidobacterium lactis СЕСТ 8145, Bifidobacterium longum ES1 СЕСТ 7347 и Lactobacillus rhamnosus СЕСТ 8361. Концентрация таких штаммов относительно количества микроорганизмов в композиции составляла 35% для В. longum ES1%, 35% для В. lactis и 30% для L. rhamnosus.

Методология клинического испытания

Главной целью исследования было проверить, действительно ли процентная доля пациентов с клиническим ответом на лечение (снижение по меньшей мере на 75% значения PASI на 12 неделе по сравнению с исходным, в начале исследования) была выше в группе, получавшей пробиотическую композицию по сравнению с группой пациентов, не получавших пробиотическую композицию.

Определение PASI и PGA (общей оценки врача) проводили во время каждого планового визита, чтобы количественно определить возможные колебания (отклонения) среднего значения этих индексов между визитами (внутригрупповое сравнение).

В качестве вторичной цели проводили аналитическое сравнение ответа на лечение (эффективности лечения). Это аналитическое сравнение проводили путем количественного определения значений маркеров воспаления: TNF-α, IF-γ, IL-1b, IL-16, IL-12, и сравнения их средних значений во время включения в исследование с тем же показателем во время последнего визита (внутригрупповое сравнение).

В качестве меры для гарантии безопасности исследуемой пробиотической композиции все побочные эффекты, наблюдаемые в процессе исследования, регистрировали, как вызванные самой пробиотической композицией, так и другими причинами, и сравнивали результаты, полученные для двух исследуемых групп.

Пригодность для включения в испытание

Для того чтобы быть допущенными к испытаниям и включенными в исследование, потенциальные участники должны отвечать всем критериям включения, перечисленным ниже, а также не отвечать никаким критериям исключения, которые также перечислены ниже:

Критерии:

- Мужчины и женщины в возрасте от 18 до 70 лет.

- Пятнистый (бляшечный) псориаз, диагностированный по меньшей мере за один год до исследования.

- Псориаз от легкой до умеренной степени с PASI больше 6 без новой вспышки псориаза (изменения степени тяжести псориаза отсутствуют) в течение последних четырех недель.

- Пациенты способны дать информированное согласие с участием в исследовании.

- Для женщин детородного возраста предварительный отрицательный тест на беременность и использование противозачаточных мер во время сексуальных контактов в период их участия в исследовании.

Критерии исключения:

- Болезнь Крона, цирроз печени, морбидное ожирение, инфекция, вызванная вирусом иммунодефицита человека (HIV, ВИЧ) или другая активная инфекция.

- Применение пероральных стероидов или любого другого системного, перорального или парентерального средства, применяемого для лечения псориаза в течение последних трех месяцев перед включением в исследование.

- Применение антибиотиков, пробиотиков и/или пребиотиков в течение двух недель перед началом исследования.

- Применение натуральных продуктов с доказанной эффективностью в отношении здоровья в течение последних двух недель перед исследованием (за исключением полиминералов и поливитаминов).

- Болезнь печени с индексом С по классификации Чайлда-Пью, хроническая почечная недостаточность с клиренсом креатинина ниже 50 мл/мин, умеренное или тяжелое эндокринное, неврологическое или сердечно-сосудистое, респираторное хроническое заболевание, в зависимости от соображений исследователей и соответствующего кожного заболевания перед началом исследования.

- Беременность и кормление грудью.

- Неспособность дать информированное согласие с участием в исследовании или неспособность соответствовать условиям по какой-либо причине.

Показатели, оцениваемые в ходе испытания

Показатели первичного исследования:

- Процентная доля пациентов, у которых наблюдается изменение PASI более чем на 75%, в исследуемой группе во время контрольных визитов в ходе исследования и/или во время визита по окончании исследования.

- Процентная доля пациентов, у которых наблюдается улучшение согласно индексу PGA (определяемое как улучшение индекса PGA, стимулирующее изменение категории этого индекса тяжести (псориаза) по окончании исследования).

Вторичные показатели исследования:

- Процентная доля пациентов в стадии ремиссии (бледнеющий псориаз) при контрольных визитах в процессе исследования и/или во время визита по окончании исследования.

- Различие между значениями индексов PASI и PGA и значениями этих индексов во время визита включения до визита по окончании исследования (внутригрупповое различие).

- Процентная доля пациентов, у которых наблюдается изменение более чем на 50% (PASI50) в исследуемой группе во время визита по окончании исследования.

- Процентная доля пациентов, которые остаются в стадии "аналитической" ремиссии по окончании исследования (нормальные значения маркеров воспаления).

- Разница между средними значениями изучаемых маркеров воспаления: TNF-α, IF-γ, IL12, IL1b, IL6 и IL23, определенными во время визита включения (визита исходного уровня) и визита по окончании исследования (внутригрупповые различия).

- Процентная доля пациентов, у которых наблюдаются слабые, умеренные или тяжелые побочные эффекты, вызванные исследуемым лекарственным средством и не вызванные этим лекарственным средством.

Исследуемое лечение и число изученных пациентов

Исследуемое лечение проводили с использованием пробиотической композиции (Formulated 004023) (Bifidobacterium lactis СЕСТ 8145, Bifidobacterium longum ESI СЕСТ 7347 и Lactobacillus rhamnosus СЕСТ 8361) в форме капсул массой 300 мг. Наряду с обычным лечением псориаза ежедневно перед обедом перорально давали капсулу, каждый день в период исследования, как указано в инструкции по применению пробиотической композиции. Эталонное лечение пациентов с псориазом проводили обычным способом.

Будучи пилотным (пробным) исследованием, это исследование проводилось в 47 случаях псориаза, при этом делается вывод, что улучшение в виде достижения значений PASI 75 более чем у 20% в группе пациентов, которые получали пробиотическую композицию, по сравнению с показателем, наблюдаемым у пациентов, получавших традиционное лечение в течение периода наблюдения до 12 недель, уже следует рассматривать как клинически значимую разницу. Результаты сравнивали с данными, полученными исследователями в соответствии с рутинной клинической практикой лечения вспышек псориаза с теми же самыми характеристиками.

2.2 РЕЗУЛЬТАТЫ

К исследованию было привлечено 47 человек, которые отвечали всем критериям включения и не отвечали ни одному критерию исключения. Все они были включены в это пилотное исследование. Демографические данные пациентов и степень тяжести псориаза у них в момент включения в исследование были аналогичны. Пациентов лечили всего в течение двенадцати (12) недель, с ежемесячными визитами, в процессе которых собиралась информация о приверженности лечению и результатах определения значений PASI для каждого пациента.

После периода лечения в течение двенадцати (12) недель было сделано наблюдение, что начиная с недели 8, появляются значительные различия с более высокой процентной долей пациентов с частичным ответом (PASI выше 50%) в группе, пролеченной пробиотической композицией, как на неделе 8, так и на неделе 12 наблюдения (отслеживания) (Фигура 7). Что касается полного ответа на лечение, оцениваемого как улучшение значения PASI больше 75% по сравнению с исходным значением, то также обнаружены значительные различия между двумя терапевтическими группами с преимуществом у группы, пролеченной пробиотической композицией; эти различия были особенно значимыми начиная с недели 8 и продолжались на неделе 12, конечной неделе лечения (Фигура 8). Наконец, в группе, пролеченной пробиотической композицией, не наблюдалось случаев без ответа на лечение, понимаемого как улучшение индекса PASI менее 50% на 12 неделе по сравнению с исходным значением индекса PASI, тогда как в группе, пролеченной плацебо, у 28.6% не наблюдалось никакого ответа на лечение.

По завершении лечения в пилотном исследовании, длившемся двенадцать (12) недель, всего 38 пациентов из общего числа 47 пациентов, участвовавших в интервенционном исследовании, согласились участвовать в ежемесячном последующем наблюдении всего в течение шести (6) месяцев. В течение этого отслеживания для каждого пациента записывали значение PASI и выясняли, была ли новая вспышка псориаза. У пациентов, которые принимали пробиотическую композицию в течение трех (3) месяцев после прекращения лечения, наблюдалось меньше новых вспышек после наблюдения в среднем в течение шести (6) месяцев, при значительной разнице по сравнению с группой пациентов, принимавших плацебо (3/19, 15.8% в группе, принимавшей пробиотическую композицию, по сравнению с 7/19, 36.8% в группе, принимавшей плацебо) (Фигура 10).

Процентная доля случаев с ранней новой вспышкой (в первые два месяца наблюдения) был в четыре (4) раза выше в группе, получавшей плацебо, по сравнению с группой, пролеченной пробиотической композицией. Было четыре рецидива (21%) в группе плацебо против одного рецидива (5.2%) в группе, пролеченной пробиотической композицией, на втором (2) месяце наблюдения, и эта разница между двумя группами оставалась по окончании периода наблюдения (отслеживания) в течение шести (6) месяцев (Фигура 11).

2.3 ВЫВОД

Установлено, что было достигнуто положительное воздействие пробиотической композиции по изобретению на динамику псориаза, значительно повышающее процентную долю пациентов с ответами PASI 50, PASI 75 и уменьшающее число пациентов без ответа (PASI менее 50%) по сравнению с пациентами, которые не были пролечены пробиотической композицией.

Настоящая группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, а именно к композиции для лечения и/или предупреждения вспышек псориаза или псориаза и ее применению. Применение пробиотической композиции, содержащей Bifidobacterium animalis subsp. Lactis (B. lactis), Bifidobacterium longum и Lactobacillus rhamnosus в терапевтически эффективном количестве, для лечения и/или предупреждения вспышек псориаза и/или псориаза, причём B. lactis представляет собой B. lactis CECT 8145, B. longum представляет собой B. Longum ES1 CECT 7347 и/или L. rhamnosus представляет собой L. rhamnosus CECT 8361. Пробиотическая композиция для лечения и/или предупреждения вспышек псориаза и/или псориаза, содержащая терапевтически эффективное количество микроорганизмов Bifidobacterium animalis subs. lactis (B. lactis), Bifidobacterium longum и Lactobacillus rhamnosus, причем B. lactis представляет собой B. lactis CECT 8145, B. longum представляет собой B. longum ES1 CECT 7347 и/или L. rhamnosus представляет собой L. rhamnosus CECT 8361, причём концентрация B. longum ES1 CECT 7347 в расчёте на общую концентрацию микроорганизмов, присутствующих в композиции, составляет по меньшей мере 30%. Вышеописанная композиция эффективна для лечения и/или предупреждения вспышек псориаза или псориаза. 2 н. и 10 з.п. ф-лы, 11 ил., 2 пр.

1. Применение пробиотической композиции, содержащей Bifidobacterium animalis subsp. Lactis (B. lactis), Bifidobacterium longum и Lactobacillus rhamnosus в терапевтически эффективном количестве, для лечения и/или предупреждения вспышек псориаза и/или псориаза, причём B. lactis представляет собой B. lactis CECT 8145, B. longum представляет собой B. Longum ES1 CECT 7347 и/или L. rhamnosus представляет собой L. rhamnosus CECT 8361.

2. Применение по п. 1, причём вспышка псориаза или псориаз выбраны из группы, состоящей из пятнистого (бляшечного) псориаза, ладонно-подошвенного псориаза (пальмо–плантарного псориаза), псориаза волосистой части головы, псориаза ногтей, псориаза на лице, обратного (инверсионного) псориаза, поражающего кожные складки, каплевидного псориаза, эритродермического псориаза и пустулёзного псориаза.

3. Применение по п. 1, причём пробиотическая композиция является фармацевтической композицией или питательной композицией.

4. Применение по п. 3, причем фармацевтическая композиция содержит фармацевтически приемлемый носитель и/или эксципиент.

5. Применение по п. 3, причём фармацевтическая композиция приготовлена для введения в виде жидкой формы или в виде твёрдой формы.

6. Применение по п. 5, причём твёрдая форма выбрана из группы, состоящей из таблеток, леденцов для рассасывания, сладких подушечек, жевательных таблеток, жевательной резинки, капсул, саше, порошков, гранул, частиц с покрытием или таблеток с покрытием, таблеток, покрытых кишечнорастворимой оболочкой, и капсул и диспергируемых плоских полосок и плёнок.

7. Применение по п. 5, причём жидкая форма выбрана из группы, состоящей из пероральных растворов, суспензий, эмульсий и сиропов.

8. Применение по п. 3, причём питательная композиция является пищевой или вводится в пищу.

9. Применение по п. 8, причём пища выбирается из группы, состоящей из фруктовых или овощных соков, мороженого, детских смесей, молока, йогурта, сыра, ферментированного молока, порошкового молока, круп, хлебобулочных изделий, молочных продуктов, мясных продуктов и напитков.

10. Применение по п. 1, причём пробиотическая композиция дополнительно содержит микроорганизм, выбранный из группы, состоящей из Lactobacillus sp., Streptococcus sp., Bifidobacterium sp., Saccharomyces sp., Kluyveromyces sp. и их комбинаций.

11. Применение по п. 1, причём общая концентрация микроорганизмов штаммов B. lactis, L. rhamnosus и B. longum в композиции составляет между 10³ и 10¹² КОЕ, предпочтительно 10⁹КОЕ.

12. Пробиотическая композиция для лечения и/или предупреждения вспышек псориаза и/или псориаза, содержащая терапевтически эффективное количество микроорганизмов Bifidobacterium animalis subs. lactis (B. lactis), Bifidobacterium longum и Lactobacillus rhamnosus, причем B. lactis представляет собой B. lactis CECT 8145, B. longum представляет собой B. longum ES1 CECT 7347 и/или L. rhamnosus представляет собой L. rhamnosus CECT 8361, причём концентрация B. longum ES1 CECT 7347 в расчёте на общую концентрацию микроорганизмов, присутствующих в композиции, составляет по меньшей мере 30%.