Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантации органов и клинической лабораторной диагностике, может быть использовано при ведении реципиентов сердца для диагностики фиброза миокарда трансплантата.
Успешное развитие программы трансплантации сердца содействовало решению новых задач - обеспечение длительного выживания и улучшения качества жизни пациентов с трансплантированным сердцем. Патологические процессы, протекающие в трансплантированном сердце, впоследствии могут приводить к разрастанию соединительной ткани - развитию фиброза миокарда. У реципиентов сердца в отдаленные сроки после трансплантации может развиться субклиническая хроническая сердечная недостаточность, возникающая вследствие совокупности различных патологических механизмов (артериальная гипертензия, острое отторжение и васкулопатия трансплантата, а также ряд сопутствующих заболеваний, в том числе наличие сахарного диабета, метаболического синдрома и прочее), приведших к формированию фиброза миокарда трансплантата.
Разработка малоинвазивных методов выявления осложнений в посттрансплантационном периоде - поиск новых биомаркеров - проводится с целью улучшения доклинической диагностики и увеличения продолжительности жизни реципиентов и трансплантатов.
В настоящее время особое внимание уделяется выявлению профиброгенных биологических агентов - биомаркеров, способных быть индикаторами риска негативных событий, связанных с развитием фиброза. Одним из новых биомаркеров развития тяжести сердечной недостаточности и фиброза миокарда является галектин-3. Галектин-3 относится к семейству лектинов; играет важную роль в регуляции процессов воспаления, иммунного ответа, дегенерации нервной ткани и фиброза. В месте повреждения галектин-3 секретируется во внеклеточное пространство и способствует развитию фиброза через активацию фибробластов, находящихся в покое.
Галектин-3 может иметь прогностическое значение в отношении развития нежелательных событий у пациентов, страдающих сердечной недостаточностью (СН). Выявлена зависимость между уровнем галектина-3 и течением СН: повышение уровня галектина-3 указывает на развитие СН, а при снижении его концентрации - на уменьшение тяжести заболевания [Coromilas Е., Que-Xu Е., Moore D. et al. Dynamics and prognostic role of galectin-3 in patients with advanced heart failure, during left ventricular assist device support and following heart transplantation. BMC Cardiovasc Disord. - 2016.- 16: 138-148.].
При определении динамики концентрации галектина-3 в сыворотке крови реципиентов сердца в различные сроки после трансплантации выявлена обратная корреляция между уровнем галектина-3 и скоростью клубочковой фильтрации. Однако не выявлено связи между уровнем галектина-3, наличием гипертрофии и фиброза миокарда трансплантата. Результаты проводимых исследований позволяют предположить, что галектин-3 может играть роль системного биомаркера, но не кардиоспецифического [Circulating galectin-3 levels are persistently elevated after heart transplantation and are associated with renal dysfunction / Grupper A., Nativi-Nativi J., Maleszewski J.J. et al. // JACC: Heart Failure. - 2016. - 4: 847-856].
Показан диагностический потенциал измерения концентрации галектина-3 в образцах крови пациентов в отношении развития фиброза миокарда трансплантированного сердца [RU 2709193, С1], однако данная методика эффективна в отношении диагностики фиброза миокарда только в отдаленные сроки после трансплантации; при этом диагностическая эффективность способа имеет место при условии наличия у реципиентов эпизодов острого отторжения в анамнезе.
На сегодняшний день объективным методом верификации степени и характера острого отторжения трансплантированного сердца, васкулопатии и фиброза миокарда трансплантата является эндомиокардиальная биопсия (ЭМБ) и коронографическое исследование [Клинические рекомендации. Трансплантация сердца, наличие трансплантированного сердца, отмирание и отторжение трансплантата сердца. / Профессиональная ассоциация: Общероссийская общественная организация трансплантологов «Российское трансплантологическое общество». - 2020.] - (прототип). ЭМБ выполняются в сроки после трансплантации, предусмотренные протоколом, а также при проявлении признаков нарушения функции трансплантированного сердца.
Однако ЭМБ имеет ряд ограничений и рисков, свойственных инвазивным методам диагностики. Кроме того, при получении биоптата исследуют локальный участок, который не всегда может отражать состояние целого трансплантированного органа. Многочисленные публикации зарубежных и отечественных авторов свидетельствуют о высоком риске осложнений и неблагоприятного исхода при использовании данного метода. В связи с его трудоемкостью существует очевидная необходимость в разработке нового неинвазивного диагностического средства, которое может не только выявить наличие фиброза миокарда трансплантата, но и контролировать лечение реципиента.
Нами поставлена задача - разработать доступный, достоверный способ неинвазивной диагностики фиброза миокарда трансплантированного сердца у реципиентов сердца.
Технический результат заключается в обеспечении доступности и неинвазивности диагностики фиброза миокарда трансплантированного сердца, сокращении времени ее проведения при одновременном достижении достоверной диагностики в любые сроки после трансплантации, а также в повышении выживаемости реципиентов сердца и улучшении результатов трансплантации за счет своевременного определения показаний к внеплановой эндомиокардиальной биопсии путем определения концентрации галектина-3 в плазме периферической крови реципиентов сердца.
Предлагаемый способ позволяет повысить выживаемость пациентов с трансплантированным сердцем и улучшить результаты трансплантации сердца за счет своевременного определения показаний к внеплановой ЭМБ путем определения концентрации галектина-3 в плазме периферической крови.
Нами эмпирически установлен достоверный диагностический показатель развития фиброза миокарда трансплантированного сердца, основанный на оценке концентрации галектина-3 в плазме периферической крови реципиентов сердца.
Использование предполагаемого маркера позволяет ограничить круг пациентов, которым требуется проведение ЭМБ для уточнения диагноза фиброза миокарда трансплантированного сердца в любые сроки после трансплантации и независимо от наличия кризов отторжения сердечного трансплантата в анамнезе.
Сущность изобретения состоит в следующем.
Для диагностики фиброза миокарда трансплантированного сердца в отдаленные сроки после трансплантации у реципиента, перенесшего острое отторжение, в плазме венозной крови определяют концентрацию галектина-3. При его уровне выше 21,7 нг/мл диагностируют наличие фиброза трансплантата.
Способ осуществляется следующим образом. В качестве материала для исследования концентрации биомаркера используют плазму венозной крови. Взятие крови для исследования производят, как правило, одновременно с плановым обследованием пациентов.
Кровь собирают в одноразовые пробирки с антикоагулянтом ЭДТА (BD Vacutainer, Becton Dickinson, США) и центрифугируют в течение 10 минут при 3500/1500 g оборотах при комнатной температуре. Полученную плазму замораживают и хранят при температуре -20°С.
Концентрация галектина-3 может быть измерена иммуноферментным методом, например, с помощью наборов реагентов Human Galectin-3 Platinum ELISA (Bender MedSystems GmbH, Vienna, Austria).
Определение проводят с использованием реагентики, входящей в состав наборов и в соответствии с прилагаемой к ним инструкцией. В подготовленные для работы планшеты с фиксированными на дне лунок моноклональными антителами к галектину-3, добавляют заранее подготовленные калибраторы, контроли и разведенные в 2 раза буфером образцы плазмы венозной крови пациентов. Инкубируют микропланшет при комнатной температуре (18-25°С) в течение 60 минут при встряхивании в термо-шейкере со скоростью 400 оборотов в минуту. После четырехкратного отмывания планшета от несвязавшихся компонентов реакции в каждую лунку вносят по 100 мкл рабочего раствора конъюгата (стрептавидин-HRP). Инкубируют планшет при комнатной температуре (18-25°С) в течение 60 минут при встряхивании со скоростью 400 оборотов в минуту.
Для выявления ферментной метки в планшет вносят по 100 мкл субстрата, предварительно отмыв 4-х кратно планшет. Время инкубации составляет 30 минут в темноте. Реакцию останавливают с помощью стоп-реагента, также предусмотренного производителем набора (по 100 мкл в лунку). Интенсивность изменения цвета реагентной смеси прямо коррелирует с концентрацией галектина-3 в исследуемом образце. Оптическую плотность измеряют на спектрофотометре при длине волны 450 нм.
У реципиентов сердца с величиной концентрации галектина-3 в плазме крови выше 21,7 нг/мл диагностируют наличие фиброза трансплантированного сердца.
Для доказательств возможности реализации заявленного назначения и достижения указанного технического результата приводим следующие данные.
Пример 1.
Пациенту Е., 70 лет, выполнена ортопическая трансплантация сердца. Послеоперационный период протекал гладко (с первых суток и до двух лет после трансплантации). Иммуносупрессивная терапия назначена по стандартной схеме. Измеренная на 53 сутки после операции величина концентрации галектина-3 в плазме крови составила 33,98 нг/мл. В соответствии с предлагаемым способом у пациента диагнастирован фиброз миокарда трансплантата. Методом ЭМБ диагноз подтвержден: был установлен выраженный диффузный фиброз миокарда.
Пример 2.
Пациенту М., 52 лет, выполнена ортопическая трансплантация сердца. Послеоперационный период протекал гладко (с первых суток и до двух лет после трансплантации). Иммуносупрессивная терапия назначена по стандартной схеме. Измеренная на 470 сутки после операции величина концентрации галектина-3 в плазме крови составила 27,10 нг/мл. В соответствии с предлагаемым способом у пациента диагнастирован фиброз миокарда трансплантата. Методом ЭМБ диагноз подтвержден: был установлен диффузно-очаговый фиброз миокарда.
Пример 3.
Пациенту П., 42 года, выполнена ортопическая трансплантация сердца. Послеоперационный период протекал гладко (с первых суток и до двух лет после трансплантации). Иммуносупрессивная терапия назначена по стандартной схеме лечения. Измеренная на 299 сутки после операции величина концентрации галектина-3 в плазме крови составила 7,35 нг/мл. По данным ЭМБ признаков фиброза миокарда трансплантата не установлено.
Предложенный способ апробирован в клинической практике на реципиентах сердца в различные сроки после трансплантации (с первых суток и до пяти лет после трансплантации). Уровень галектина-3 после трансплантации выше установленного нами порогового значения - 21,7 нг/мл наблюдался у 31 реципиента в ранние и/или отдаленные сроки после трансплантации сердца, из них в 28 (90,3%) случаях результатами ЭМБ был верифицирован фиброз миокарда трансплантированного сердца различного типа (диффузный, очаговый, диффузно-очаговый).
Специфичность предложенного способа диагностики составляет 78,6%.
Использование в клинической практике патентуемого способа дает возможность диагностировать наличие фиброза миокарда трансплантированного сердца в любые сроки после трансплантации независимо от наличия кризов острого отторжения в анамнезе.
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
Способ неинвазивной диагностики фиброза миокарда трансплантированного сердца в отдаленные сроки после трансплантации у реципиентов, перенесших острое отторжение | 2019 |
|
RU2709193C1 |
Способ неинвазивной диагностики фиброза миокарда трансплантированного сердца | 2021 |
|
RU2758993C1 |
Способ неинвазивной диагностики фиброза миокарда у реципиентов донорского сердца | 2021 |
|
RU2761470C1 |
Способ неинвазивной диагностики фиброза миокарда у реципиентов сердечного трансплантата | 2021 |
|
RU2760093C1 |
Способ диагностики острого отторжения трансплантата у реципиентов сердца | 2021 |
|
RU2759049C1 |
Способ диагностики обструкции бронхов у реципиентов легочного трансплантата | 2020 |
|
RU2750973C1 |
Способ диагностики острого отторжения трансплантата у реципиентов трансплантированного сердца | 2020 |
|
RU2758994C1 |
Способ диагностики обструкции бронха у реципиента трансплантированных легких | 2020 |
|
RU2759048C1 |
Способ диагностики острого отторжения трансплантата у реципиента трансплантированного сердца | 2020 |
|
RU2758973C1 |
Способ дооперационного прогнозирования острого клеточного отторжения трансплантированного сердца | 2022 |
|
RU2798948C1 |
Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии и клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для неинвазивной диагностики фиброза миокарда сердечного аллотрансплантата. В плазме периферической крови реципиента определяют концентрацию галектина-3. При ее величине более 21,7 нг/мл диагностируют наличие фиброза миокарда сердечного аллотрансплантата. Способ обеспечивает доступность и неинвазивность диагностики фиброза миокарда трансплантированного сердца, сокращение времени ее проведения при одновременном достижении достоверной диагностики в любые сроки после трансплантации, а также повышение выживаемости реципиентов и улучшение результатов трансплантации сердца за счет своевременного определения показаний к внеплановой эндомиокардиальной биопсии путем определения величины концентрации галектина-3 в плазме периферической крови реципиентов сердца. 3 пр.
Способ неинвазивной диагностики фиброза миокарда сердечного аллотрансплантата, отличающийся тем, что в плазме периферической крови реципиента определяют концентрацию галектина-3 и при ее величине более 21,7 нг/мл диагностируют наличие фиброза миокарда сердечного аллотрансплантата.
COROMILAS E | |||
et al | |||
Переносная печь для варки пищи и отопления в окопах, походных помещениях и т.п. | 1921 |
|
SU3A1 |
BMC Cardiovasc Disord | |||
Токарный резец | 1924 |
|
SU2016A1 |
Способ неинвазивной диагностики фиброза миокарда трансплантированного сердца в отдаленные сроки после трансплантации у реципиентов, перенесших острое отторжение | 2019 |
|
RU2709193C1 |
ШЕВЧЕНКО О.П | |||
и др | |||
Прибор с двумя призмами | 1917 |
|
SU27A1 |
Авторы
Даты
2022-05-16—Публикация
2021-04-09—Подача