Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к интраназальному введению физиологически активных веществ, конкретнее, к интраназальному введению водной композиции, содержащей полностью растворенное физиологически активное вещество и усилитель интраназальной абсорбции.
Уровень техники
Интраназальное введение предлагает ряд привлекательных опций для локальной и системной доставки водорастворимых физиологически активных веществ. Природа слизистой оболочки носа обеспечивает ряд уникальных свойств, каждое из которых может помочь максимизировать безопасность, удобство и податливость пациента. Введение физиологически активных веществ через слизистую оболочку носа предлагает преимущества над другими путями введения, например, пероральным введением, так как активное вещество транспортируется непосредственно в большой круг кровообращения и поэтому избегает прохождение сначала метаболизма. Кроме того, активные агенты могут абсорбироваться непосредственно в ЦНС после назального введения, проходя через обонятельную слизистую оболочку или будучи перенесенными через систему тройничного нерва в носовой полости, известную как путь от носа к головному мозгу.
Несмотря на то, что слизистая носа в носовой полости обеспечивает идеальную область абсорбции, проницаемость природного барьера и эффективный механизм очистки ограничивают общее количество активного вещества, которое может быть абсорбировано. К числу основных недостатков назального пути относятся ограниченный объем нанесения (25–250 мкл), трудности прохождения через слизистую носа для высокомолекулярных лекарственных средств (>1000 Да), наличие паталогических состояний, мукоцилиарный клиренс лекарства, ферментативные барьеры и раздражение слизистой оболочки носа. Делаются усилия по улучшению абсорбции водорастворимых физиологически активных веществ, когда они вводятся назальным введением.
В ЕР–А 0967214 описывается интраназальный фармацевтический препарат для лечения мужской эректильной дисфункции или половых расстройств у женщин, который включает силденафил мезилат вместе с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем в форме, адаптированной для интраназального введения. В примере 2 описывается раствор интраназального препарата, содержащий силденафил мезилат, никотинамид и воду.
В DE–А 4430154 описывается водная антидепрессивная композиция, включающая 100 мл дистиллированной воды, 0,1 грамма никотиновой кислоты, 1 грамм никотинамида и 10 грамм аскорбата натрия. Эту композицию применяют к пациентам, страдающим от депрессии, путем закапывания водной композиции в угол глаза (0,5–0,7 мл) или нанесения композиции на слизистую носа (1–1,2 мл).
В US 2014/0072588 раскрывается композиция, включающая инсулин и Solutol®HS15 в различных концентрациях от 1 до 40%, мас./об.. Solutol® представляет собой эфир жирной гидроксикислоты и полиэтиленгликоля. В US 2014/0072588 утверждается, что когда эфир жирной гидроксикислоты и полиэтиленгликоля используют в комбинации с терапевтическим средством, терапевтическое средство абсорбируется через поверхность слизистой оболочки в значительно более высокой степени, чем если эфир жирной гидроксикислоты и полиэтиленгликоля не присутствует в препарате.
В US 2016 022726 A1 раскрывается композиция для назального введения витамина В12, конкретно, водный раствор, включающий от примерно 0,02%, мас./мас., до примерно 1%, мас./мас., кобаламинового соединения и фармацевтически приемлемый буфер, причем композиция имеет pH от примерно 4 до примерно 6,5, и причем кобаламиновыми соединениями являются цианокобаламин или гидроксикобаламин. Кроме того, в US 2016 022726 A1 раскрываются следующие усилители назальной абсорбции: полиоксиэтиленовые производные жирных кислот, неполные сложные эфиры ангидридов сорбитола, лаурилсульфат натрия, салицилат натрия, олеиновая кислота, лецитин, дегидратированный спирт, твин (например, твин 20, твин 40, твин 60, твин 80 и т.п.), спан (например, спан 20, спан 40, спан 80 и т.п.), полиоксил–40 стеарат, полиоксиэтилен–50 стеарат, динатрия эдетат, пропиленгликоль, моноолеат глицерина, фузиеаты, соли желчных кислот, октоксинол и их комбинации. Эффективность этих усилителей абсорбции часто не оправдывает надежд, и некоторые из таких усилителей вызывают нежелательные побочные действия, такие как сенсибилизация и раздражение.
Остается потребность в интраназальных препаратах физиологически активных веществ, которые безопасны для применения, и которые достигают эффективной интраназальной абсорбции физиологически активного вещества.
Сущность изобретения
Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что интраназальную абсорбцию водорастворимых физиологически активных веществ из водных растворов можно существенно усилить путем включения никотинамида в подходящей концентрации.
Таким образом, один аспект настоящего изобретения относится к нетерапевтическому способу введения водорастворимых физиологически активных веществ, причем указанный способ включает интраназальное введение субъекту водной композиции, включающей
– 0,001–25 мас.% одного или нескольких полностью растворенных физиологически активных веществ, включая по меньшей мере 0,001 мас.% одного или нескольких витаминов и/или по меньшей мере 0,001 мас.% кофеина, причем физиологически активные вещества имеют растворимость в деминерализованной воде по меньшей мере 15 мг/мл при 20°С, причем водная композиция не включает одновременно ниацин и аскорбиновую кислоту;
– 0,01–10 мас.% никотинамида и
– по меньшей мере 60 мас.% воды.
Другой аспект изобретения относится к водной композиции для применения в профилактическом или терапевтическом лечении расстройства, причем лечение включает интраназальное введение водной композиции, включающей
– 0,001–25 мас.% одного или нескольких полностью растворенных физиологически активных веществ, причем физиологически активные вещества имеют растворимость в деминерализованной воде по меньшей мере 15 мг/мл при 20°С; причем одно или несколько физиологически активных веществ присутствуют в водной композиции в концентрации, которая ниже их предела растворимости в воде при 20°С;
– 0,01–10 мас.% никотинамида и
– по меньшей мере 60 мас.% воды;
причем водную композицию вводят интраназально в виде спрея или аэрозоля в дозе 0,01–0,3 мл для предоставления одного или нескольких физиологически активных веществ в дозе 10–10000 мкг.
Примеры водорастворимых физиологически активных веществ, интрназальная абсорбция которых может быть усилена путем применения их в водном препарате согласно настоящему изобретению, включают водорастворимые витамины, пептиды, белки и алкалоиды, такие как кофеин.
Без связи с какой–либо теорией, полагают, что увеличение абсорбции через слизистую оболочку носа происходит из–за никотинамида, улучшающего проницаемость слизистой оболочки.
С учетом улучшенной абсорбции физиологически активных веществ в настоящем изобретении требуется введение меньших доз физиологически активных веществ. Это означает, что концентрацию физиологически активного вещества в препарате можно уменьшить, и/или что можно уменьшить дозу для введения.
Настоящее изобретение также относится к применению никотинамида в качестве усилителя интраназальной абсорбции физиологически активного вещества из водного раствора, причем водный раствор дополнительно включает 0,01–10 мас.% никотинамида.
Кроме того, изобретение также относится к набору, включающему
– контейнер, включающий водную композицию, указанную выше; и
– устройство назальный аппликатор для интраназального введения в жидкостной связи с водной композицией.
Описание воплощений
В первом аспекте настоящее изобретение относится к нетерапевтическому способу введения водорастворимых физиологически активных веществ, причем указанный способ включает интраназальное введение субъекту водной композиции, включающей
– 0,001–25 мас.% одного или нескольких полностью растворенных физиологически активных веществ, включая по меньшей мере 0,001 мас.% одного или нескольких витаминов и/или по меньшей мере 0,001 мас.% кофеина, причем физиологически активные вещества имеют растворимость в деминерализованной воде по меньшей мере 15 мг/мл при 20°С, причем водная композиция не включает одновременно ниацин и аскорбиновую кислоту (в том числе, соли этих кислот);
– 0,01–10 мас.% никотинамида и
– по меньшей мере 60 мас.% воды.
Термин «никотинамид», используемый в настоящем описании, относится к пиридин–3–карбоксамиду, также известному как ниацинамид, а также к его физиологически приемлемым (диссоциированным) солям. Никотинамид представлен структурной формулой I
Формула I
Термин «витамин», используемый в настоящем описании, обозначает органическое соединение, которое является жизненно важным питательным веществом, которое требуется людям в ограниченных количествах. Термин «витамин» не включает незаменимые жирные кислоты или незаменимые аминокислоты.
Термин «пептид», используемый в настоящем описании, обозначает химическое соединение, полученное из двух–ста молекул аминокислот (одинаковых или различных) путем образования ковалентной связи от карбонильного углерода одной аминокислоты с атомом азота другой с соответствующей утратой воды.
Термин «белок», используемый в настоящем описании, обозначает встречающийся в природе или (полу)синтетический полипептид, полученный из более, чем ста молекул аминокарбоновых кислот.
Термин «кофеин», используемый в настоящем описании, относится к 1,3,7–триметилксантину, а также его физиологически приемлемым (диссоциированным) солям.
Подходящие физиологически приемлемые соли могут быть органическими или неорганическими. Подходящие органические физиологически приемлемые соли включают, но без ограничения, цитрат и формиат. Подходящие неорганические физиологически приемлемые соли включают, но без ограничения, хлорид и иодид.
Водорастворимое физиологически активное вещество, которое используют согласно настоящему изобретению, предпочтительно имеет растворимость в деминерализованной воде по меньшей мере 15 мг/мл при 20°С, предпочтительно по меньшей мере 20 мг/мл при 20°С, предпочтительнее по меньшей мере 33 мг/мл, даже предпочтительнее по меньшей мере 66 мг/мл при 20°С. Типично растворимость водорастворимого физиологически активного вещества не превышает 100 мг/мл в деминерализованной воде при 20°С.
Предпочтительно водорастворимое физиологически активное вещество имеет log P менее 0,5, предпочтительнее менее 0, даже предпочтительнее менее –0,5. Log P соответствует коэффициенту распределения октанол/вода и представляет липофильность вещества.
Как пояснялось в настоящем описании ранее, никотинамид в водной композиции усиливает интраназальную абсорбцию физиологически активного вещества. Иными словами, предпочтительно никотинамид не используют как усилитель растворимости. Соответственно, в особенно предпочтительном воплощении физиологически активное вещество присутствует в водной композиции в концентрации, которая ниже его растворимости в воде при 20°С. Даже предпочтительнее физиологически активное вещество присутствует в концентрации, которая ниже 90%, предпочтительнее ниже 80% его растворимости в воде при 20°С.
В другом предпочтительном воплощении водная композиция содержит 0,001–20 мас.%, предпочтительнее 0,005–15 мас.%, даже предпочтительнее 0,001–10 мас.% и наиболее предпочтительно 0,001–5 мас.% одного или нескольких физиологически активных веществ.
Никотинамид предпочтительно присутствует в водной композиции в концентрации 0,05–8 мас.%, предпочтительнее 0,1–7 мас.%, даже предпочтительнее 0,5–6 мас.% и наиболее предпочтительно 1–5 мас.%.
В одном предпочтительном воплощении водорастворимое физиологически активное вещество представляет собой витамин, выбранный из группы, включающей аскорбиновую кислоту (витамин С), тиамин (витамин В1), рибофлавин (витамин В2), ниацин (витамин В3), пантотеновую кислоту (витамин В5), пиридоксин (витамин В6), биотин (витамин В7), фолиевую кислоту (витамин В9), цианокобаламин, гидроксокобаламин, метилкобаламин (витамин В12) и их соли и смеси. В предпочтительном воплощении используемым витамином является компонент витамин В12, выбранный из группы, включающей цианокобаламин, гидроксокобаламин и метилкобаламин. В другом предпочтительном воплощении витамин представляет собой пиридоксин (витамин В6). В еще одном предпочтительном воплощении витамин представляет собой фолиевую кислоту (витамин В9).
В еще одном предпочтительном воплощении водорастворимое физиологически активное вещество представляет собой 1,3,7–триметилксантин (кофеин).
Предпочтительно водная композиция имеет рН в интервале 4,5–6,5, предпочтительнее в интервале 5,0–6,2, даже предпочтительнее в интервале 5,5–6,0.
В предпочтительном воплощении водная композиция включает не более 1 мас.%, предпочтительно не более 0,5 мас.% поверхностно–активных веществ, полимерных и полигидроксильных эксципиентов. Поэтому теперь возможно получить композиции водорастворимых физиологически активных веществ для назального введения, которые по существу свободны от поверхностно–активных веществ, полимерных или полигидроксильных эксципиентов. Эти эксципиенты ранее использовались как усилители абсорбции, но известны как имеющие нежелательные побочные действия. Кроме того, так как биодоступность водорастворимых физиологически активных веществ улучшена в способе по изобретению, можно использовать более низкие концентрации водорастворимых физиологически активных веществ. Преимущества этого включают улучшения в осмолярности композиции, так что можно получить изотонические композиции, которые менее вредны для субъекта, чем высокие концентрации водорастворимых физиологически активных веществ.
Водная композиция предпочтительно имеет осмолярность от 200 до 500 мосм/л, предпочтительнее от 260 до 380 мосм/л.
Способ по настоящему изобретению предпочтительно включает интраназальное введение композиции в дозе 0,0001–0,3 мл, предпочтительнее 0,001–0,2 мл, наиболее предпочтительно 0,01–0,1 мл, даже предпочтительнее 0,05–0,2 мл. Композицию предпочтительно вводят в виде спрея или аэрозоля.
Термин «аэрозоль» обозначает туман из частиц жидкости. Система дозирования для такого препарата может представлять собой контейнер или флакон, который содержит жидкий сжатый под давлением газ пропеллент.
Термин «спрей» обозначает тонкую дисперсию частиц жидкости, которую можно получить ручным насосом и выпустить с усилием через сопло атомайзера.
Типичный препарат назального спрея состоит из флакона, содержащего водную композицию физиологически активного вещества. Приведение насоса в действие субъектом доставляет физиологически активное вещество в носовую полость.
В предпочтительном воплощении одно или несколько физиологически активных веществ вводят субъекту в дозе, которая составляет от 10 до 10000 мкг, предпочтительно от 50 до 1000 мкг, даже предпочтительнее от 100 до 500 мкг.
Во втором аспекте изобретение относится к набору, включающему
– по меньшей мере один контейнер, включающий водную композицию, включающую
– 0,001–25 мас.% одного или нескольких полностью растворенных физиологически активных веществ, включая по меньшей мере 0,001 мас.% одного или нескольких витаминов и/или по меньшей мере 0,001 мас.% кофеина, причем физиологически активные вещества имеют растворимость в деминерализованной воде по меньшей мере 15 мг/мл при 20°С;
– 0,01–10 мас.% никотинамида;
– по меньшей мере 60 мас.% воды;
– устройство назальный аппликатор для интраназального введения в жидкостной связи с водной композицией.
Набор предоставляет простой благоприятный для потребителя путь введения композиции, описанной в настоящем описании.
В предпочтительном воплощении назальный аппликатор соединен с контейнером, включающим композицию. Назальный аппликатор предпочтительно адаптирован для подачи отмеренной дозы композиции в носовую полость субъекта в форме спрея или аэрозоля.
В другом предпочтительном воплощении назальный аппликатор соединенный с контейнером, включающим композицию, можно снять. Контейнер можно отделить от назального аппликатора, например, путем отвинчивания или снятия. В таком случае, когда контейнер пустой, потребитель может присоединить назальный аппликатор к новому полному контейнеру, избегая таким образом излишней потери назального аппликатора.
Контейнер может представлять собой флакон, ампулу, пузырек или другой подходящий резервуар для содержания композиции. Контейнер может иметь приемное устройство для присоединения назального аппликатора, так что когда контейнер подходящим образом соединен с назальным аппликатором, композицию можно интраназально вводить субъекту. Контейнер может включать устройство для открывания контейнера, такое как навинчивающаяся крышка, snap line в случае ампул, средство для прокола спая или другое такое средство для открывания контейнера, с тем, чтобы композицию можно было передать из контейнера в назальный аппликатор. В таком случае назальный аппликатор можно наполнить снова, что позволяет потребителю повторно использовать устройство, а не выбрасывать назальный аппликатор после одного применения.
Третий аспект настоящего изобретения относится к водной композиции для применения при профилактическом или терапевтическом лечении расстройства, причем лечение включает интраназальное введение водной композиции, включающей
– 0,001–25 мас.% одного или нескольких полностью растворенных физиологически активных веществ, причем физиологически активные вещества имеют растворимость в деминерализованной воде по меньшей мере 15 мг/мл при 20°С; причем одно или несколько физиологически активных веществ присутствуют в водной композиции в концентрации, которая ниже предела их растворимости в воде при 20°С;
– 0,01–10 мас.% никотинамида и
– по меньшей мере 60 мас.% воды;
причем водную композицию вводят интраназально в виде спрея или аэрозоля в дозе 0,01–3 мл для предоставления одного или нескольких физиологически активных веществ в дозе 10–10000 мкг.
В одном предпочтительном воплощении водорастворимое физиологически активное вещество, которое используют при этом лечении, представляет собой витамин, выбранный из группы, включающей аскорбиновую кислоту (витамин С), тиамин (витамин В1), рибофлавин (витамин В2), ниацин (витамин В3), пантотеновую кислоту (витамин В5), пиридоксин (витамин В6), биотин (витамин В7), фолиевую кислоту (витамин В9), цианокобаламин, гидроксокобаламин, метилкобаламин (витамин В12) и их соли и смеси. В предпочтительном воплощении используемым витамином является компонент витамина В12, выбранный из группы, включающей цианокобаламин, гидроксокобаламин и метилкобаламин. В другом предпочтительном воплощении витамин представляет собой пиридоксин (витамин В6). В еще одном предпочтительном воплощении витамин представляет собой фолиевую кислоту (витамин В9). В предпочтительном воплощении водная композиция не включает одновременно ниацин и аскорбиновую кислоту.
В другом предпочтительном воплощении водорастворимое физиологически активное вещество, которое используют при лечении, представляет собой амфетамин или его производное. В особенно предпочтительном воплощении амфетамин или его производное представляет собой метилфенидат.
В другом предпочтительном воплощении водорастворимое физиологически активное вещество, которое используют при лечении, представляет собой пептид, выбранный из группы, включающей кальцитонин, инсулин, окситоцин, вазопрессин, эпидермальный фактор роста, соматостатин, глюкагон, родственные GLP–1 соединения, ангиотензин, гастрин, тетрагастрин, пентагастрин, брадикинин, бацитрацины, полимиксины, колистины, тироцидин, грамицидины, меланокортины и их производные. Предпочтительно пептид представляет собой кальцитонин. Производные вышеуказанных пептидов включают аналоги указанных пептидов, в которых по меньшей мере одна аминокислота в пептидной последовательности модифицирована, заменена или делетирована. Модифицированные пептиды включают, например, конъюгацию по меньшей мере одной аминокислоты с полиалкиленоксидными группами или полигидроксильными группами. С другой стороны, нативную аминокислотную последовательность можно изменить путем замены одной или нескольких нативных аминокислот ненативной аминокислотой или синтетической аминокислотой. Усеченные производные пептидов (где по меньшей мере одна аминокислота делетирована) можно получить синтезом «фрагментов», соответствующих различным длинам встречающейся в природе пептидной последовательности.
В еще одном предпочтительном воплощении водорастворимое физиологически активное вещество, которое используют при лечении, представляет собой белок, выбранный из группы, включающей эритропоэтин, адренокортикотропный гормон, тромбоцитарный фактор роста, пролактин, лютеинизирующего гормона высвобождающий гормон, гормон роста высвобождающий гормон, секретин, фактор некроза опухоли, фактор роста нервов, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор, гранулоцитарно–макрофагальный колониестимулирующий фактор, иммуноглобулины и ренин. В особенно предпочтительном воплощении белок представляет собой эритропоэтин.
Обнаружено, что применение никотинамида в качестве усилителя абсорбции не ограничивается низкомолекулярными веществами, но никотинамид также усиливает абсорбцию активных веществ с высокой молекулярной массой, например, более 1000 Да. Водорастворимое физиологически активное вещество предпочтительно имеет молекулярную массу от 100 до 100000 Да.
В предпочтительном воплощении водорастворимое физиологически активное вещество, которое используют при лечении, представляет собой витамин, имеющий молекулярную массу от 100 до 1500 Да.
В другом предпочтительном воплощении водорастворимое физиологически активное вещество, которое используют при лечении, представляет собой пептид, имеющий молекулярную массу от 500 до 10000 Да, предпочтительно от 1000 до 7000 Да, даже предпочтительнее от 1000 до 500 Да.
В другом предпочтительном воплощении водорастворимое физиологически активное вещество, которое используют при лечении, представляет собой белок, молекулярная масса составляет предпочтительно от 10000 до 100000 Да, предпочтительно от 10000 до 75000 Да, даже предпочтительнее от 10000 до 50000 Да.
Применение водной композиции при вышеупомянутом профилактическом или терапевтическом лечении предпочтительно включает интраназальное введение путем, описанным в настоящем описании ранее в отношении нетерапевтического способа введения водорастворимых физиологически активных веществ.
В предпочтительном воплощении расстройство выбирают из группы, включающей авитаминоз, болезнь сердца, эндокринные расстройства, рак, астму, респираторные расстройства и костные нарушения.
В предпочтительном воплощении расстройство представляет собой недостаточность водорастворимых витаминов, и водорастворимым физиологически активным веществом, используемым при лечении, является витамин, выбранный из группы, включающей аскорбиновую кислоту (витамин С), тиамин (витамин В1), рибофлавин (витамин В2), ниацин (витамин В3), пантотеновую кислоту (витамин В5), пиридоксин (витамин В6), биотин (витамин В7), фолиевую кислоту (витамин В9), цианокобаламин, гидроксокобаламин, метилкобаламин (витамин В12) и их соли и смеси, при условии, что смесь не включает одновременно ниацин и аскорбиновую кислоту.
В другом предпочтительном воплощении расстройство представляет собой недостаточность витамина В, и физиологически активным веществом, используемым при лечении, является витамин, выбранный из группы, включающей тиамин, рибофлавин, пантотеновую кислоту, пиридоксин, биотин, фолиевую кислоту, цианокобаламин, гидроксокобаламин, метилкобаламин и их соли и смеси.
В особенно предпочтительном воплощении расстройство представляет собой недостаточность витамина В12, и физиологически активное вещество, используемое при лечении, выбираютй из группы, включающей цианокобаламин, гидроксокобаламин и метилкобаламин.
В другом предпочтительном воплощении расстройство представляет собой недостаточность витамина В6, и физиологически активным веществом, используемым при лечении, является пиридоксин (витамин В6).
В другом предпочтительном воплощении расстройство представляет собой недостаточность витамина В9, и физиологически активным веществом, используемым при лечении, является фолиевая кислота (витамин В9).
В другом предпочтительном воплощении расстройство представляет собой эндокринное расстройство, и водорастворимым физиологически активным веществом является водорастворимый пептид или белок. Эндокринное расстройство может быть выбрано из группы, включающей акромегалию, болезнь Аддисона, рак надпочечников, болезнь надпочечников, анапластический рак щитовидной железы, синдром Кушинга, тиреоидит де Катрена, диабет, фолликулярный рак щитовидной железы, гестационный диабет, зоб, болезнь Грейвса, нарушения роста, недостаточность гормона роста, тиреоидит Хасимото, гюртле–клеточный рак щитовидной железы, гипергликемию, гиперпаратиреоз, гипертиреоз, низкий тестостерон, медуллярный рак щитовидной железы, MEN 1, MEN 2A, MEN 2В, менопаузу, метаболический синдром, ожирение, остеопороз, папиллярный рак щитовидной железы, болезни паращитовидной железы, феохромоцитому, заболевания гипофиза, опухоли гипофиза, синдром поликистоза яичников, преддиабет, репродукцию, бессимптомный тиреоидит, рак щитовидной железы, болезни щитовидной железы, узлы щитовидной железы, тиреоидит, синдром Тернера, диабет типа 1, диабет типа 2.
В четвертом аспекте настоящее изобретение относится к набору, включающему
– по меньшей мере один контейнер, включающий водную композицию, включающую
– 0,001–25 мас.% одного или нескольких полностью растворенных физиологически активных веществ, имеющих растворимость в деминерализованной воде по меньшей мере 15 мг/мл при 20°С; причем одно или несколько физиологически активных веществ присутствуют в водной композиции в концентрации, которая ниже предела их растворимости в воде при 20°С;
– 0,01–10 мас.% никотинамида и
– по меньшей мере 60 мас.% воды; и
– устройство назальный аппликатор для интраназального введения при передаче жидкости водной композиции;
причем назальный аппликатор адаптирован для предоставления в носовую полость отмеренной дозы водной композиции в 0,01–0,3 мл в форме спрея или аэрозоля, причем указанная отмеренная доза предоставляет 10–10000 мкг одного или нескольких физиологически активных веществ.
Набор предоставляет простой благоприятный для потребителя путь введения композиции, описанной в настоящем описании.
В предпочтительном воплощении назальный аппликатор соединен с контейнером, включающим композицию.
В другом предпочтительном воплощении назальный аппликатор соединенный с контейнером, включающим композицию, можно снять. Контейнер можно отделить от назального аппликатора, например, путем отвинчивания или снятия. В таком случае, когда контейнер пустой, потребитель может присоединить назальный аппликатор к новому полному контейнеру, избегая таким образом излишней потери назального аппликатора.
Контейнер может представлять собой флакон, ампулу, пузырек или другой подходящий резервуар для содержания композиции. Контейнер может иметь приемное устройство, адаптированное для присоединения назального аппликатора, так что когда контейнер подходящим образом соединен с назальным аппликатором, композицию можно интраназально вводить субъекту. Контейнер может включать устройство для открывания контейнера, такое как навинчивающаяся крышка, snap line в случае ампул, средство для прокола спая или другое такое средство для открывания контейнера, с тем, чтобы композицию можно было передать из контейнера в назальный аппликатор. В таком случае назальный аппликатор можно наполнить снова, что позволяет потребителю повторно использовать устройство, а не выбрасывать назальный аппликатор после одного применения.
В пятом аспекте настоящее изобретение относится к применению никотинамида в качестве усилителя интраназальной абсорбции из водного раствора водорастворимого физиологически активного вещества, имеющего растворимость в деминерализованной воде по меньшей мере 15 мг/мл при 20°С, причем водный раствор дополнительно включает 0,01–10 мас.% никотинамида.
Настоящее изобретение описано выше с обращением к ряду примеров воплощения. Возможны модификации и альтернативное осуществление некоторых частей или элементов, которые включены в объем охраны, определенный прилагаемой формулой изобретения.
Примеры
Получают водные композиции, включающие никотинамид и водорастворимое физиологически активное вещество в количествах, указанных ниже в примерах 1–6, и вводят интраназально человеку, причем композиции имеют следующий общий состав:
– водорастворимое физиологически активное вещество: 0,040–10 мас.%;
– никотинамид: 3,5–10 мас.%;
– фосфатный буфер, рН 6,2 (+/– 0,2): 0,10 мас.%;
– хлорид бензалкония (консервант): 0,02 мас.%;
– хлорид натрия для достижения изотоничности: q.s.;
– очищенная вода: ad 100%.
Получают контрольные композиции, в которых никотинамид не присутствует.
Берут кровь до введения водорастворимого физиологически активного вещества и затем через 30 и/или 60 минут после введения. Все анализируемые образцы плазмы крови получают из цельной крови центрифугированием при 1000 G в течение 10 минут.
Пример 1 (витамин В6)
Получают 1 мл композиции, включающей 15 мг пиридоксинфосфата (молекулярная масса 169, logP –0,77) и 35 мг никотинамида. По 0,1 мл этой водной композиции вводят людям в носовые полости в виде назального спрея. В качестве контроля используют водную композицию с 15 мг пиридоксинфосфата.
Через 0 и 60 минут определяют ВЭЖХ концентрации витамина В6/пиридоксина в плазме.
Прибор для ВЭЖХ и процедура анализа. Используют насос для ВЭЖХ LKB HPLC (модель 2150 с титановыми деталями), снабженный инертным инжектором (LKB, модель 2154–002) и 500–мкл пробоотборной петлей. Используют аналитическую колонку LKB 4,6×250 мм с насадкой из 5–пм частиц материла обращенной фазы (TSK ODS–120T), в сочетании с 3–см защитной колонкой, содержащей подобный насадочный материал (или защитой LKB Spherisorb или Lichrosorb RP18). Элюентом является 75 ммоль/л NaH2PO4 буфер, содержащий 75 ммоль NaClO4, 8,5 мл ацетонитрила и 0,5 мл триэтаноламина на литр, и доведенный до pH 3,38 концентрированным NaClO4. Скорость потока составляет 1,2 мл/мин при постоянном давлении 12000 кПа. Постколоночная дериватизация перидоксальфосфата бисульфит–ионами как предложенная в Coburn SF, Mahuren JD. Универсальная процедура катионного обмена для измерения семи основных форм витамина В6 в биологических образцах. Anal Biochem, 1983, 129, 310–7. Используют шприцевой насос Braun, соединенный с T–переходом и реакционным змеевиком. Постколоночный реагент состоит из буфера Na2HPO4 (250 ммоль/л, pH 11,7), содержащего 1 г метабисульфита натрия на литр. Скорость потока постколоночного реагента поддерживают при 6 мл/час. Вытекающие из колонок потоки проверяют флуориметром модели L5–20 (Perkin–Elmer Ltd., Beaconsfield, Bucks. HP9 1QA, U.K.), снабженным 50–пл капиллярной проточной ячейкой. Длины волн возбуждения и испускания устанавливают при 325 и 400 нм, соответственно. Объем впрыска составляет 100 пл.
Результаты приводятся в таблицах 1 и 2.
Таблица 1: изобретение: пиридоксинфосфат (1,5 мас.%) + никотинамид (3,5 мас.%)
Таблица 2: контроль: пиридоксинфосфат – 1,5 мг (1,5 мас.%)
t=0 мин. t=60 мин.
Пример 2 (витамин В9)
Получают 1 мл композиции, включающей 4 мг фолиевой кислоты (витамин В9; молекулярная масса 441, logP –0,02) и 35 мг никотинамида. По 0,1 мл этой водной композиции вводят людям в носовые полости в виде назального спрея. В качестве контроля используют водную композицию с 4 мг фолиевой кислоты.
Используют электрохемилюминесцентный иммуноанализ (Access Folate assay, Beckman Coulter, Inc – конкурентно–связывающий анализ рецепторов) для количественного определения фолата, присутствующего в образцах крови. Коротко, образец сыворотки обрабатывают для высвобождения фолата из эндогенных связывающих белков. После нейтрализации реакционной смеси в реакционный сосуд добавляют фолатсвязывающий белок, мышиный антифолатсвязывающий белок, конъюгат фолиевая кислота–щелочная фосфататаза и козье антимышиное антитело, иммобилизованное на парамагнитных частицах. Фолат в образце конкурирует с конъюгатом фолиевая кислота–щелочная фосфататаза за сайты связывания на ограниченном количестве фолатсвязывающего белка. Полученные комплексы связываются с твердой фазой через мышиный антифолатсвязывающий белок. После инкубации в реакционном сосуде материалы, связанные с твердой фазой, удерживаются в магнитном поле, в то время как несвязанные материалы вымываются. В сосуд добавляют хемилюминесцентный субстрат Lumi–Phos 530, и люминометром измеряют свет, генерируемый реакцией. Выделение света обратно пропорционально концентрации фолата в образце. Количество аналита в образце определяют из хранившейся многоточечной калибровочной кривой. Анализ стандартизируют по Международному стандарту Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) 03/178 (Beckman Coulter Assay Manual 2011, Beckman Coulter Inc., Fullerton, CA). Используемым прибором является Beckman Coulter DXI 800.
Таблица 3: изобретение: фолиевая кислота (0,4 мас.%) + никотинамид (3,5 мас.%)
t=0 мин. t=60 мин.
Таблица 4: контроль: фолиевая кислота (0,4 мас.%)
t=0 мин. t=60 мин.
Пример 3 (витамин В12 – гидроксокобаламин, доза 500 мкг)
Получают 1 мл композиции, включающей 5 мг гидроксикобаламина (молекулярная масса 1346, logP –0,9) и 50 мг никотинамида. По 0,1 мл этой водной композиции вводят людям в носовые полости в виде назального спрея. В качестве контроля используют водную композицию с 0,5 мг гидроксокобаламина.
Используют иммуноанализ (доступ к анализу на витамин В12, Beckman Coulter Inc.) для количественного определения витамина В12, присутствующего в образцах крови. Коротко, образец добавляют в реакционный сосуд вместе с щелочным цианидом калия и дитиотреитолом. Эта обработка денатурирует белки, связывающие В12, и превращает все формы витамина В12 в форму цианокобаламина. После нейтрализации к образцу добавляют конъюгат внутренний фактор–щелочная фосфатаза и парамагнитные частицы с покрытием из козьего антимышиного IgG:мышиного моноклонального антивнутреннего фактора. Витамин В12 в образце связывается с конъюгатом внутреннего фактора, предотвращая связывание конъюгата с антивнутренним фактором твердой фазы. После инкубации в реакционном сосуде материалы, связанные с твердой фазой, удерживаются в магнитном поле, в то время как несвязанные материалы вымываются. В сосуд добавляют хемилюминесцентный субстрат Lumi–Phos 530, и люминометром измеряют свет, генерируемый реакцией. Выделение света обратно пропорционально концентрации витамина В12 в образце. Количество аналита в образце определяют с помощью хранившейся многоточечной калибровочной кривой (инструкция: Beckman Coulter Assay Manual 2015, Beckman Coulter Inc., Brea, CA).
Таблица 5: изобретение: В12 (0,5 мас.%) + никотинамид (5 мас.%)
t=0 мин. t=60 мин.
Таблица 6: контроль: В12 (0,5 мас.%)
t=0 мин. t=60 мин.
Пример 4 (витамин В12 – гидроксокобаламин, доза 75 мкг)
Получают 1 мл композиции, включающей 750 мкг гидроксокобаламина (молекулярная масса 1346, logP –0,9) и 50 мг никотинамида. По 0,1 мл этой водной композиции вводят людям в носовые полости в виде назального спрея. В качестве контроля используют водную композицию с 750 мкг гидроксокобаламина. Для количественного определения гидроксокобаламина используют такой же метод, как в примере 3.
Используют иммуноанализ (доступ к анализу на витамин В12, Beckman Coulter Inc.) для количественного определения витамина В12, присутствующего в образцах крови. Коротко, образец добавляют в реакционный сосуд вместе с щелочным цианидом калия и дитиотреитолом. Эта обработка денатурирует белки, связывающие В12, и превращает все формы витамина В12 в форму цианокобаламина. После нейтрализации к образцу добавляют конъюгат внутренний фактор–щелочная фосфатаза и парамагнитные частицы с покрытием из козьего антимышиного IgG:мышиного моноклонального антивнутреннего фактора. Витамин В12 в образце связывается с конъюгатом внутреннего фактора, предотвращая связывание конъюгата с антивнутренним фактором твердой фазы. После инкубации в реакционном сосуде материалы, связанные с твердой фазой, удерживаются в магнитном поле, в то время как несвязанные материалы вымываются. В сосуд добавляют хемилюминесцентный субстрат Lumi–Phos 530, и люминометром измеряют свет, генерируемый реакцией. Выделение света обратно пропорционально концентрации витамина В12 в образце. Количество аналита в образце определяют с помощью хранившейся многоточечной калибровочной кривой (инструкция: Beckman Coulter Assay Manual 2015, Beckman Coulter Inc., Brea, CA).
Таблица 7: изобретение: В12 (0,075 мас.%) + никотинамид (5 мас.%)
t=0 мин. t=60 мин.
Таблица 8: контроль: В12 (0,075 мас.%)
t=0 мин. t=60 мин.
Пример 5 (rh–эритропоэтин, 0,040 мас.%)
Получают 1 мл композиции, включающей 400 мкг rh–эритропоэтина (молекулярная масса 34000, logP 0) и 50 мг никотинамида. По 0,1 мл этой водной композиции вводят людям в носовые полости в виде назального спрея. В качестве контроля используют водную композицию с 400 мкг rh–эритропоэтина.
Используют иммуноанализ (доступ к эритропоэтину (ЕРО), Beckman Coulter Inc.) для количественного определения эритропоэтина. Коротко, выполняют тест по Beckman Coulter DxI 800 (Beckman Coulter Inc.). Коротко образец добавляют в реакционный сосуд вместе с парамагнитными частицами с покрытием из мышиного моноклонального анти–ЕРО, блокирующего реагента и конъюгата щелочной фосфатазы. После инкубации в реакционном сосуде материалы, связанные с твердой фазой, удерживаются в магнитном поле, в то время как несвязанные материалы вымываются. Затем в сосуд добавляют хемилюминесцентный субстрат Lumi–Phos 530, и люминометром измеряют свет, генерируемый реакцией. Выделение света прямо пропорционально концентрации ЕРО в образце. Количество аналита в образце определяют из хранившейся многоточечной калибровочной кривой (инструкция: Beckman Coulter Access EPO, Beckman Coulter Access Immunoassay Systems, Beckman Coulter, Inc, Fullerton CA 2009).
Таблица 9: изобретение: эритропоэтин (0,04 мас.%) + никотинамид (5 мас.%)
t=0 мин. t=60 мин.
Таблица 10: контроль: эритропоэтин (0,04 мас.%)
t=0 мин. t=60 мин.
Пример 6 (кофеин)
Получают 1 мл композиции, включающей 12,5 мг кофеина (молекулярная масса 194, logP –0,79) и 50 мг никотинамида. По 0,2 мл этой водной композиции вводят четыре раза людям в носовые полости в виде назального спрея. В качестве контроля используют водную композицию с 12,5 мг/мл кофеина.
Совершенствуют метод разделения ВЭЖХ с использованием колонки с обращенной фазой с С18 и смеси 1% ледяной уксусной кислоты и метанола (83:17, об./об.) в качестве подвижной фазы согласно Pickard C.E., Stewart A.D., Hartley R. and Lucock M.D., A rapid HPLC method for monitoring plasma levels of caffeine and theophylline using solid phase extraction columns, Ann. Clin. Biochem., 1986, 23, 440–446. Условия для хроматографии: поток растворителя 0,5 мл/мин, объем впрыска 5 мкл, время выполнения 20 минут, и УФ–детекция при 274,4 нм. УФ–детекция сопровождается МС–детекцией для идентификации пика на основании массы соединения. Кофеин и внутренний стандарт 4–аминоантипирин растворяют в искусственной плазме, как описано в Alvi S.N, Muhammad M., Hammami M., Validated HPLC Method for Determination of Caffeine Level in Human Plasma using Synthetic Plasma: Application to Bioavailability Studies, J. Chromatogr. Sci., 2011, 49 (4), 292–296. Искусственная плазма состоит из хлорида натрия (145 мМ), хлорида калия (4,5 мМ), хлорида кальция (32,5 мМ), хлорида магния (0,8 мМ), мочевины (2,5 мМ) и глюкозы (4,7 мМ). Определяют времена удерживания для кофеина, 4–аминоантипирина, а также продуктов разложения теобромина и теофиллина, для оптимизации разделения пиков. Затем получают ряд разведений кофеина в искусственной плазме в интервале 0,05–43,6 микрограмм/мл кофеина (конечные концентрации) с добавлением или 2,8 или 5,3 микрограмм/мл (конечные концентрации) внутреннего стандарта. Образцы крови замораживают при –20°С после доставки; образцы оттаивают и перед взятием аккуратно смешивают с раствором. К 100 микролитрам плазмы крови добавляют 5,3 микрограмм/мл внутреннего стандарта (конечная концентрация). Образец встряхивают вращательным движением и центрифугируют 5 минут, и анализируют после прямого впрыска.
Таблица 11: изобретение: кофеин (10 мг) + никотинамид (10 мг)
t=0 мин. t=60 мин.
Таблица 12: контроль: кофеин (10 мг)
t=0 мин. t=60 мин.
В каждом из примеров 1–6 определяют действие никотинамида на уровень в крови испытываемых водорастворимых физиологически активных веществ путем вычисления процента увеличения абсорбции с использованием среднего увеличения. Результаты суммируются в таблице 13.
Таблица 13. Увеличение абсорбции водорастворимого физиологически активного вещества относительно контроля
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ БОЛИ | 2017 |
|
RU2749398C2 |
| ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ СОСТАВ, СОДЕРЖАЩИЙ ВИТАМИН B | 2013 |
|
RU2655696C2 |
| ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПАРЕНТЕРАЛЬНОГО КАПЕЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ | 2019 |
|
RU2723950C1 |
| СТАБИЛИЗАЦИЯ ВИТАМИНА В | 2008 |
|
RU2472528C2 |
| КОМПЛЕКСНЫЙ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ПРЕПАРАТ | 2009 |
|
RU2425674C2 |
| ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПАРЕНТЕРАЛЬНОГО КАПЕЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ (ВАРИАНТЫ) | 2019 |
|
RU2707948C1 |
| КРЕМ-ГЕЛЬ ДЛЯ ВОССТАНОВЛЕНИЯ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ КОЖИ | 2022 |
|
RU2807844C1 |
| СИРОП ДЛЯ ДЕТЕЙ ИЛИ ПОДРОСТКОВ, СОДЕРЖАЩИЙ ПОЛИВИТАМИНЫ | 2004 |
|
RU2369271C2 |
| СМЕСЬ СОЛЕЙ ЖЕЛЕЗА И МЕДИ, МАСКИРУЮЩАЯ МЕТАЛЛИЧЕСКИЙ ВКУС | 2006 |
|
RU2423988C2 |
| ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ПРЕПАРАТ ДЛЯ НАРУЖНОГО И МЕСТНОГО ПРИМЕНЕНИЯ НА ОСНОВЕ СТЕФАГЛАБРИНА | 2007 |
|
RU2364399C1 |
Группа изобретений относится к области фармацевтики и может быть использована для интраназального введения водорастворимых физиологически активных веществ. Нетерапевтический способ введения водорастворимых физиологически активных веществ, выбранных из одного или нескольких витаминов, включает интраназальное введение субъекту водной композиции, включающей: 0,001–25 мас.% одного или нескольких полностью растворенных физиологически активных веществ, включая по меньшей мере 0,001 мас.% одного или нескольких витаминов, выбранных из группы тиамина, рибофлавина, ниацина, пантотеновой кислоты, пиридоксина, биотина, фолиевой кислоты, цианокобаламина, гидроксокобаламина, метилкобаламина и их солей и смесей; 0,01–10 мас.% никотинамида и по меньшей мере 60 мас.% воды. При этом водная композиция не включает одновременно ниацин и аскорбиновую кислоту, физиологически активные вещества имеют растворимость в деминерализованной воде по меньшей мере 15 мг/мл при 20°С и физиологически активное вещество присутствует в водной композиции в концентрации, которая ниже предела его растворимости в воде при 20°С. Группа изобретений относится также к применению указанной водной композиции в профилактическом или терапевтическом лечении недостаточности витамина В, набору для интраназального введения водорастворимых физиологически активных веществ и применению никотинамида в качестве усилителя интраназальной абсорбции из водного раствора физиологически активного вещества. Обеспечивается существенное усиление интраназальной абсорбции водорастворимых витаминов из водных растворов. 4 н. и 9 з.п. ф-лы, 13 табл., 6 пр.
1. Нетерапевтический способ введения водорастворимых физиологически активных веществ, выбранных из одного или нескольких витаминов, включающий интраназальное введение субъекту водной композиции, включающей
– 0,001–25 мас.% одного или нескольких полностью растворенных физиологически активных веществ, включая по меньшей мере 0,001 мас.% одного или нескольких витаминов, выбранных из группы тиамина, рибофлавина, ниацина, пантотеновой кислоты, пиридоксина, биотина, фолиевой кислоты, цианокобаламина, гидроксокобаламина, метилкобаламина и их солей и смесей, причем физиологически активные вещества имеют растворимость в деминерализованной воде по меньшей мере 15 мг/мл при 20°С, причем водная композиция не включает одновременно ниацин и аскорбиновую кислоту;
– 0,01–10 мас.% никотинамида и
– по меньшей мере 60 мас.% воды, причем физиологически активное вещество присутствует в водной композиции в концентрации, которая ниже предела его растворимости в воде при 20°С.
2. Нетерапевтический способ по п. 1, причем водная композиция содержит 0,001–20 мас.%, предпочтительно 0,005–15 мас.%, предпочтительнее 0,001–10 мас.% или даже предпочтительнее 0,001–5 мас.% одного или нескольких физиологически активных веществ.
3. Нетерапевтический способ по п. 1 или 2, причем водная композиция содержит 0,05–8 мас.%, предпочтительно 0,1–7 мас.%, предпочтительнее 0,5–6 мас.% или даже предпочтительнее 1–5 мас.% никотинамида.
4. Нетерапевтический способ по любому из предшествующих пунктов, причем витамин представляет собой компонент витамина В12, выбранный из группы, включающей цианокобаламин, гидроксокобаламин и метилкобаламин.
5. Нетерапевтический способ по любому из пп.1-4, причем витамин представляет собой пиридоксин (витамин В6).
6. Нетерапевтический способ по любому из пп.1-4, причем витамин представляет собой фолиевую кислоту (витамин В9).
7. Нетерапевтический способ по любому из предшествующих пунктов, причем физиологически активное вещество имеет растворимость в деминерализованной воде по меньшей мере 20 мг/мл при 20°С, предпочтительно по меньшей мере 33 мг/мл при 20°С, даже предпочтительнее по меньшей мере 66 мг/мл при 20°С.
8. Нетерапевтический способ по любому из предшествующих пунктов, причем водная композиция имеет рН в интервале 4,5–6,5, и причем водная композиция имеет осмолярность от 200 до 500 мосм/л, предпочтительнее от 260 до 380 мосм/л.
9. Нетерапевтический способ по любому из предшествующих пунктов, включающий интраназальное введение композиции в дозируемом спрее в одной дозе 0,01–0,3 мл.
10. Применение водной композиции в профилактическом или терапевтическом лечении недостаточности витамина В, причем водная композиция включает
– 0,001–25 мас.% одного или нескольких полностью растворенных физиологически активных веществ, причем физиологически активные вещества имеют растворимость в деминерализованной воде по меньшей мере 15 мг/мл при 20°С; причем одно или несколько физиологически активных веществ присутствуют в водной композиции в концентрации, которая ниже предела их растворимости в воде при 20°С;
– 0,01–10 мас.% никотинамида и
– по меньшей мере 60 мас.% воды;
причем физиологически активное вещество присутствует в водной композиции в концентрации, которая ниже предела его растворимости в воде при 20°С, и
причем водную композицию вводят интраназально в виде спрея или аэрозоля в дозе 0,01–0,3 мл для предоставления одного или нескольких физиологически активных веществ в дозе 10–10000 мкг, и при этом физиологически активное вещество выбрано из группы, состоящей из тиамина, рибофлавина, ниацина, пантотеновой кислоты, пиридоксина, биотина, фолиевой кислоты, цианокобаламина, гидроксокобаламина, метилкобаламина и их солей и смесей.
11. Применение никотинамида в качестве усилителя интраназальной абсорбции из водного раствора физиологически активного вещества, имеющего растворимость в деминерализованной воде по меньшей мере 15 мг/мл при 20°С, при этом физиологически активное вещество выбрано из группы, состоящей из тиамина, рибофлавина, ниацина, пантотеновой кислоты, пиридоксина, биотина, фолиевой кислоты, цианокобаламина, гидроксокобаламина, метилкобаламина и их солей и смесей.
12. Набор для интраназального введения водорастворимых физиологически активных веществ, включающий
контейнер, включающий водную композицию, где указанная водная композиция включает:
– 0,001–25 мас.% одного или нескольких полностью растворенных физиологически активных веществ, включая по меньшей мере 0,001 мас.% одного или нескольких витаминов, выбранных из группы, состоящей из тиамина, рибофлавина, ниацина, пантотеновой кислоты, пиридоксина, биотина, фолиевой кислоты, цианокобаламина, гидроксокобаламина, метилкобаламина и их солей и смесей, причем физиологически активные вещества имеют растворимость в деминерализованной воде по меньшей мере 15 мг/мл при 20°С, причем водная композиция не включает одновременно ниацин и аскорбиновую кислоту;
– 0,01–10 мас.% никотинамида и
– по меньшей мере 60 мас.% воды;
устройство назальный аппликатор для интраназального введения в жидкостной связи с водной композицией;
причем физиологически активное вещество присутствует в водной композиции в концентрации, которая ниже предела его растворимости в воде при 20°С.
13. Набор по п. 12, в котором
назальный аппликатор адаптирован для предоставления отмеренной дозы 0,01–0,3 мл водной композиции в носовую полость субъекта в форме спрея или аэрозоля, причем указанная отмеренная доза предоставляет 10–10000 мкг одного или нескольких физиологически активных веществ.
| NOH EUN SUN, CHUN IN KOO "Formulation of Caffeine Nasal Sprays and Its Enhanced Permeation through Rabbit Nasal Mucosa", J | |||
| Kor | |||
| Pharm | |||
| Sci., vol.34, N2, 2004, pp.131-138, реферат, табл.1 на с.134 | |||
| US 20100210580 A1, 19.08.2010 | |||
| Способ учета переносных защитных заземлений в логике программно-логической электромагнитной блокировки от ошибочных действий персонала при переключениях в электроустановках 6-750 кВ | 2023 |
|
RU2823167C1 |
| EP 967214 B1, 23.06.2004 | |||
| US 20150366798 A1, 24.12.2015. | |||
