Применение комплекса 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином для лечения патозооспермии Российский патент 2022 года по МПК A61K31/95 A61K47/40 A61P15/08 A61K9/08 A61K9/107 A61K9/40 

Описание патента на изобретение RU2782140C2

Изобретение относится к области медицины, конкретно фармакологии, и касается лечения патозооспермии при нарушениях фертильности.

Изобретение также относится к ветеринарии и может быть использовано для лечения млекопитающих с нарушенной фертильностью.

Многочисленные исследования показали, что последние десятилетия характеризуются падением уровня мужской фертильности [Текстинский О.Л., Калинина С.Н., Михайличенко В.В. Андрология. Медицинское информационное агентство. Москва. 2010. С. 492]. Так, по некоторым данным, в структуре бесплодия мужской фактор составляет до 50%, женский 45-50%. Изучение показателей спермограммы за последние 10 лет свидетельствует о снижении числа сперматозоидов в эякуляте и ухудшении показателей спермы [Машина М.А., Шарапова Е.И., Кузьмин В.Н. Проблемы изменения репродуктивного поведения и реализации репродуктивной функции. Журнал Лечащий врач, 2014, № 12].

Мужское бесплодие возникает в результате многочисленных патологических процессов, приводящих к патозооспермии, таких как врожденные аномалии развития половой системы, эндокринные нарушения, воспалительные заболевания дополнительных половых желез, токсические влияния, в том числе ятрогенные, к числу которых относится целый ряд лекарственных препаратов [Пшеничникова Т.Я. Бесплодие в браке. – М.: Медицина, 1991. - 320 с.; Тикстинский О.Л., Михайличенко В.В. Андрология. - СПб, 1999. - 380 с.].

Необратимые изменения в извитом семенном канальце, приводящие к патозооспермии, могут быть связаны с истощением пролиферативного пула сперматогенеза, источником которого является популяция сперматогоний, а именно стволовых (резервных) клеток [Липатова Н.А. Лабораторные критерии фертильности эякулята // Клиническая лабораторная диагностика. - 1998. - Т.5. - С. 11-15; Сухоруков В.С., Шамшад Д.С. Определение степени зрелости сперматогенного пласта крысы при его регенерации и в процессе созревания интактного семенника// Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1989. - Т.97, №9. - 89 с.]. Это клетки-родоначальники, делятся только при повреждении и являются основой пролиферативного пула сперматогенеза. Для образования стволовых сперматогоний необходимо наличие ниш, которые формируют клетки Сертоли (клетки микроокружения) [Биология стволовых клеток и клеточные технологии. / Под ред. М.А. Пальцева. - М.: Медицина, Шико, 2009. - Т.2. - 456 с]. Последние утрачивают способность к делению в зрелых извитых семенных канальцах [Курносова Т.Р., Вербицкий М.Ш., Сухих Г.Т., Молнар Е.М. Современные представления о структурных основах репаративной регенерации семенника млекопитающих животных и человека. // Бюлл. эксперим. биол. и мед. - 1994. - №4. - С. 396-399]. Регенерация семенных канальцев в целом возможна только одним путем - путем формирования семенных канальцев незрелого типа из регенерационной зоны, которая содержит клетки Сертоли и первичные половые детерминанты, дающие начало новым сперматогониям. Недостаточность регенераторного потенциала семенника приводит к атрофии ткани в целом и служит причиной бесплодия.

К числу наиболее частых форм этого заболевания относится патозооспермия, при которой в эякуляте определяются различные отклонения от нормальных показателей (низкая подвижность, малое количество спермиев, повышение числа их аномальных форм и др.). Патозооспермия представляет собой большую медицинскую и социальную проблему и встречается у 20-50 % мужчин репродуктивного возраста [Пшеничникова Т.Я. Бесплодие в браке. - М:Медицина, 1991. - 320 с.; Павлов В.Н., Галимова Э.Ф., Катаев В.А., Фарфутдинов P.P. Сравнительный анализ антиоксидантных эффектов коэнзима Q и L-карнитина у мужчин с идиопатической патоспермией // Медицинский вестник Башкорстана. 2013. Т. 8, №6. С. 161]. Наиболее частой формой патозооспермии является снижение подвижности спермиев - астеноспермия и олигоспермия. Снижение двигательной активности половых клеток является самым дискриминационным показателем эякулята [Липатова Н.А. Лабораторные критерии фертильности эякулята // Клиническая лабораторная диагностика. 1998. Т. 5. С. 12].

Поиск путей преодоления мужского бесплодия, обусловленного патозооспермией, является в настоящее время одной из актуальных проблем репродуктивной медицины.

Многофакторность патогенеза мужского бесплодия доказана. Одной из причин развития бесплодия является снижение уровня андрогенной насыщенности. Для лечения патозооспермии рекомендуется препарат Спеман [6. Справочник Vidal. Лекарственные препараты в России. М.: АстраФармСервис. 1995. С. Г-49], обладающий проандрогенной активностью. Это лекарственное средство назначают при лечении острого и хронического простатита, в том числе для повышения подвижности сперматозоидов. Препарат имеет сложную композицию лекарственных трав, произрастающих в разных странах мира. Их сырьевые запасы ограничены. В качестве недостатка Спемана следует отметить возможность возникновения аллергических реакций, а его эффективность не всегда высока. Кроме того, Спеман является достаточно дорогостоящим лекарственным средством.

В последние годы было показано, что одним из факторов, снижающих мужскую фертильность, является окислительный стресс сперматозоидов [Евдокимов В.В. и др. Антиоксидантная терапия при снижении фертильности у мужчин // Эксперим. и клин. урология, 2010. №4. С. 38; Галимов Ш.Н., Громенко Д.С., Галимова Э.Ф., Громенко Ю.Ю., Масхаков И.Р. Влияние L-карнитина на показатели эякулята у мужчин из бесплодных пар // Урология. 2012. №1. С. 47]. В связи с этим к заместительной терапии можно отнести L-карнитин [Галимов Ш.Н., Громенко Д.С., Галимова Э.Ф., Громенко Ю.Ю., Масхаков И.Р. Влияние L-карнитина на показатели эякулята у мужчин из бесплодных пар // Урология. 2012. №1. С. 47]. Однако он является биологически активной добавкой. Кроме того, данные о его влиянии на двигательную активность сперматозоидов противоречивы, а этот показатель является основным в характеристике фертилизирующих свойств эякулята [Липатова Н.А. Лабораторные критерии фертильности эякулята // Клиническая лабораторная диагностика. 1998. Т. 5. С. 12].

В настоящее время показано, что снижение подвижности спермиев может быть обусловлено активацией процессов перекисного окисления липидов [Евдокимов В.В. и др. Антиоксидантная терапия при снижении фертильности у мужчин // Эксперим. и клин. урология, 2010. №4. С. 38]. К числу средств, оказывающих положительный эффект в отношении патозооспермии, а конкретно, в отношении подвижности сперматозоидов, относится антиоксидант мексидол (оксиметилэтилпиридина сукцинат) [Евдокимов В.В. и др. Антиоксидантная терапия при снижении фертильности у мужчин // Эксперим. и клин. урология, 2010. №4. С. 38]. Однако эффективность мексидола не всегда достаточно высока, кроме того, он имеет противопоказания и побочные эффекты (тошнота, аллергические реакции и др.) [Справочник Vidal. Лекарственные препараты в России. М.: АстраФармСервис. 1995. С. Г-49].

Также известно, что средство Диборнол, обладая антиоксидантными свойствами, может быть применен для профилактики и лечения патозооспермии [Патент на изобретение РФ 2619330, C1, опубл. 15.05.2017 г].

Все вышеперечисленное не решает проблему лечения патозооспермии, в том числе и астеноспермии, у мужских особей и диктует необходимость разработки новых лекарственных препаратов для лечения нарушений фертильности. Техническая проблема заключается в поиске высокоэффективных, безопасных и доступных лекарственных средств для лечения патозооспермии за счет повышения численности стволовых и полустволовых сперматогониев, увеличения пула тестостерон-синтезирующих клеток (клеток Лейдига), а также клеток Сертоли, играющих важную роль в гормональной регуляции сперматогенеза. Использование специально созданных препаратов, с минимальным количеством побочных эффектов и обладающих, при этом, способностью препятствовать развитию патозооспермии, в том числе и астеноспермии, является хорошей альтернативой лечения нарушений фертильности.

Для решения обозначенной технической проблемы и достижения технического результата в настоящем изобретении предлагается малотоксичное средство, не обладающее иммунотоксическими, аллергизирующими, мутагенными, эмбриотоксическими, тератогенными свойствами, для лечения патозооспермии при нарушениях фертильности, представляющее собой фармацевтическую композицию 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином.

В результате проведенных нами экспериментальных исследований обнаружено неизвестное до сих пор свойство фармацевтической композиции 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином - препятствовать развитию патозооспермии, в том числе и астеноспермии и олигоспермии у мужских особей за счет повышения численности стволовых и полустволовых сперматогониев, увеличения пула тестостерон-синтезирующих клеток (клеток Лейдига), а также клеток Сертоли в тестикулах, играющих важную роль в гормональной регуляции сперматогенеза.

Свойство фармацевтической композиции 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином препятствовать развитию патозооспермии, в том числе олигоспермии и астеноспермии за счет повышения численности стволовых и полустволовых сперматогониев, увеличения пула тестостерон-синтезирующих клеток, и клеток Сертоли, участвующих в гормональной регуляции сперматогенеза, является для специалиста фактом неочевидным и не вытекает из уровня техники в данной области, не обнаружено в патентной и научно-медицинской литературе. Выше указанное свойство фармацевтической композиции 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином может быть использовано в практическом здравоохранении для повышения качества лечения. Таким образом, предлагаемое техническое решение соответствует критериям патентоспособности изобретения, а именно «новизна», «изобретательский уровень» и «промышленная применимость».

Заявляемое изобретение предлагается использовать в качестве средства для лечения патозооспермии при нарушениях фертильности. Предлагаемое средство препятствует развитию патозооспермии, в том числе олигоспермии и астеноспермии, за счет повышения численности стволовых и полустволовых сперматогониев, увеличения пула тестостерон-синтезирующих клеток и клеток Сертоли, участвующих в гормональной регуляции сперматогенеза.

Предлагается фармацевтическая композиция для лечения патозооспермии при нарушениях фертильности, которая содержит в качестве активного компонента 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен в эффективном количестве.

Активный компонент фармацевтической композиции 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен может быть представлен в виде клатратного комплекса с β-циклодекстрином или может содержать дополнительно β-циклодекстрин в соотношениях от 1:1 - до 1:10.

Предлагается лекарственный препарат для лечения патозооспермии при нарушениях фертильности, который в качестве активного компонента содержит указанную фармацевтическую композицию.

Указанный лекарственный препарат может применяться в форме таблеток, с содержанием 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена от 2 до 10 %, а остальное - один или более наполнитель(и). Таблетки могут быть формированы посредством прессовки или формовки.

Лекарственный препарат может также применяется в форме желатиновых капсул, при следующем соотношении компонентов:

- 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен от 2 до 10 %;

- наполнитель(и) или носитель(и) - остальное.

Лекарственный препарат может быть выполнен в виде растворов, эмульсий, суспензий и др., с содержанием активного компонента от 0,025 до 1 %; остальное - наполнитель(и) или носитель(и).

Сущность изобретения поясняется примерами конкретного выполнения, в которых «Комплекс» - клатратный комплекс β-циклодекстрина с 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантеном в соотношении 10:1, полученный стандартным способом /патент RU 2451680, C07D 345/00, опубл. 27.05.2012г./.

Препятствование развитию патозооспермии, в том числе олиго- и астеноспермии, под влиянием фармацевтической композиции 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином, применяемых для увеличения фертильности, продемонстрировано в двух независимых исследованиях. В первом исследовании (Пример 1) на крысах-самцах популяции Вистар оценивали развитие патозооспермии при цитотоксическом воздействии «Паклитакселом». Во втором исследовании (Пример 2) проведена оценка терапевтической эффективности фармацевтической композиции 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином в различных режимах дозирования у пациентов с астеноспермией.

В настоящем изобретении, если не указано иное, концентрации представлены в мас. %.

ПРИМЕР 1. Клатратный комплекс 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином («Комплекс») как средство, способное препятствовать развитию патозооспермии, за счет повышения численности стволовых и полустволовых сперматогониев, увеличения пула клеток Лейдига, а также клеток Сертоли, играющих важную роль в гормональной регуляции сперматогенеза, оценивалось в экспериментах на крысах популяции Вистар при цитотоксическом воздействии «Паклитакселом».

Эксперименты проведены на 40 крысах-самцах Вистар, возраст 3 месяца. Животные содержались в стандартных пластиковых клетках (не более 10 особей в каждой) с мелкой древесной стружкой, на стандартном рационе - гранулированный корм ПК 120-3 (согласно приказу № 1179 МЗ СССР от 10.10.83).

До проведения эксперимента животные проходили карантин в виварии в течение 5 дней. Далее определялась масса тела животных и их распределение по группам. «Паклитаксел» вводился 30-ти крысам-самцам опытных групп однократно внутривенно в максимально переносимой дозе (МПД) - 5,0 мг/кг массы тела. Доза «Паклитаксела» выбрана с учетом опыта клинического применения и была рассчитана для животных методом графического пробит-анализа при наблюдении за ними в течение 30 суток.

Клатратный комплекс 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином вводился внутрижелудочно в течение 10-ти дней через 1 месяц после введения «Паклитаксела» в следующих дозах: 0,3 и 1,0 мг/кг массы тела. Животные контрольной группы получали «Паклитаксел» и дистиллированную воду в эквивалентном объеме. Через 2 и 3 месяца после введения «Паклитаксела» определяли массу тела крыс, затем их умерщвляли дислокацией шейных позвонков (по 5 животных на каждый срок эксперимента), выделяли семенник и эпидидимис. Далее определяли общее количество половых клеток, приходящихся на эпидидимис, процент их подвижных форм [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. / Под ред. Хабриева Р.У. - М.: Медицина, 2005]. При подсчете общего количества сперматозоидов (ОКС), приходящихся на придаток, использовали гомогенизированную клеточную взвесь эпидидимиса. Семенники фиксировали для проведения гистологического анализа в жидкости Карнуа. Затем были приготовлены парафиновые срезы. Депарафинированные срезы толщиной 5 мкм окрашивали гематоксилин-эозином. На срезе семенника определяли: численность клеточной популяции сперматогоний, количество клеток Сертоли и Лейдига [Саноцкий И.В., Фоменко В.И. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм.- М.:Наука, 1979. - 210с]. Эндокринную активность семенника вычисляли как соотношение количества клеток Лейдига к клеткам Сертоли. На основании подсчета клеток Сертоли вычисляли степень зрелости сперматогенного пласта [Сухоруков В.С., Шамшад Д.С. Определение степени зрелости сперматогенного пласта крысы при его регенерации и в процессе созревания интактного семенника // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1989. - Т.97, №9. - 89 с].

При выборе сроков исследований учитывали длительность сперматогенеза у крыс, которая составляет 3 месяца. Срок 2 месяца после введения препарата соответствует, по времени проявления, воздействию на активно обновляющиеся сперматогонии, 3 месяца - на стволовые (резервные сперматогонии, которые делятся при повреждении).

«Паклитаксел» вводился внутривенно. «Комплекс» вводился внутрижелудочно, что соответствует предполагаемому клиническому применению - приему внутрь.

Крысы были рандомизированы на группы с учетом их массы тела:

1. Фон. Интактные животные (n=10);

2. Контроль. Крысам (n=10) вводился «Паклитаксел» однократно внутривенно в максимально переносимой дозе (МПД) - 5,0 мг/кг массы тела и дистиллированная вода;

3. Клатратный комплекс β-циклодекстрина с 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантеном («Комплекс»). Крысам (n=10) вводился внутрижелудочно испытуемый препарат в дозе 0,3 мг/кг в течение 10-ти дней, начиная через 1 месяц после введения «Паклитаксела»;

4. Клатратный комплекс β-циклодекстрина с 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантеном («Комплекс»). Крысам (n=10) вводился внутрижелудочно испытуемый препарат в дозе 1,0 мг/кг в течение 10-ти дней, начиная через 1 месяц после введения «Паклитаксела».

Полученные экспериментальные данные обрабатывали статистически с помощью непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни [Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. - М.: Медицина, 1978. - С.72-75].

Первая серия эксперимента

Оценка состояния репродуктивной системы крыс-самцов через 2 месяца после введения «Паклитаксела»

Результаты оценки массы тела крыс, общего количества половых клеток, приходящихся на эпидидимис, процента подвижных форм зрелых спермиев через 2 месяца после введения «Паклитаксела» представлены в таблице 1. Установлено, что масса тела животных в начале эксперимента и через 2 месяца после введения цитостатического препарата во всех сравниваемых группах не отличалась (Р>0,05). Полученные данные свидетельствуют о том, что в начале эксперимента была осуществлена качественная рандомизация животных по массе тела, а также о том, что в течение 2-х месяцев эксперимента, все оказываемые фармакологические воздействия не приводили к изменению массы тела животных.

Общее количество половых клеток (приходящихся на эпидидимис), процент их подвижных форм у интактных животных находились в пределах возрастной нормы (возраст крыс 5-6 месяца) [Боровская Т.Г., Гольдберг В.Е., Щемерова Ю.А., Полуэктова М.Е., Тимина Е.А., Перова А.В. Влияние ингибиторов топоизомеразной активности на морфологические и функциональные показатели сперматогенеза крыс // Бюлл. эксперим. биол. и мед. - 2005. - Прил.№1. - С. 28-30]. Через 2 месяца после введения крысам-самцам «Паклитаксела» отмечалось статистически значимое снижение общего количества клеток, приходящихся на эпидидимис, а также процента их подвижных форм.

Таблица 1 - Морфологические и функциональные показатели зрелых спермиев и семенников крыс через 2 месяца после введения препарата «Паклитаксел»

Показатели Фон Контроль «Комплекс» 0,3 мг/кг «Комплекс» 1,0 мг/кг Масса тела животного в начале эксперимента (г) 352,6±19,8 352,4±2,58 353,6±18,78 353,4±5,55 Масса тела животного в конце эксперимента (г) 445,2±10,7 456,6±9,87 464,8±23,64 445,4±9,33 Количество подвижных форм сперматозоидов (%) 84,8±1,69 63,7±1,36 # 75,8±4,82* 69,2±3,60 # Общее количество сперматозоидов (ОКС) (абс.ед.) 55,0±1,82 43,80±2,22 # 51,6±2,87 * 52,4±2,42 *

Примечание: здесь и далее

# - статистическая значимость различий по сравнению с фоном

* - статистическая значимость различий по сравнению с контролем («Паклитакселом»).

Снижение общего количества половых клеток и их подвижности, наблюдаемые в эти сроки исследования в группе крыс, получивших «Паклитаксел», свидетельствует (с учетом длительности сперматогенеза у крыс) о токсическом действии препарата на полустволовые сперматогонии. Данные литературы подтверждают тот факт, что сперматогонии являются мишенью действия «Паклитаксела» [Сухачева Т.В., Богуш Т.А., Коломиец О.Л. Повреждающее действие таксола на сперматогенез мыши. // Бюлл. эксперим. биол. и мед. - 2001. - Т.132, №11. - С. 554-560].

Показатель ОКС, в группе крыс, которым вводился препарат «Комплекс» в обеих исследуемых дозах (0,3 и 1,0 мг/кг) через 1 месяц после введения «Паклитаксела», статистически значимо возрастал (на 18-19,6 % соответственно) по сравнению с контролем («Паклитаксел»), и достигал фоновых значений. Процент подвижных форм в группе введения препарата «Комплекс» в дозе 0,3 мг/кг через 1 месяц после «Паклитаксела» возрастал по сравнению с контролем («Паклитаксел») и не отличался от фона. При введении препарата «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг значение этого показателя оказалось ниже фона.

Таким образом, через 2 месяца после введения «Паклитаксела» выявляется тестикулярная недостаточность, признаками которой являются олигоспермия и астеноспермия. Судя по срокам проявления, она обусловлена токсическим действием на делящиеся сперматогонии (полустволовые). Введение препарата «Комплекс» оказывало положительное влияние на состояние сперматогенеза крыс, получавших «Паклитаксел», о чем свидетельствует увеличение продуктивности сперматогенеза (возрастание ОКС в обеих дозах, увеличение доли подвижных форм - «Комплекс» доза 0,3 мг/кг).

Установлено (табл. 2), что через 2 месяца после введения «Паклитаксела» численность клеточной популяции сперматогоний оказалась сниженной (составила 69,7 % от фоновых значений). При введении препарата «Комплекс» в дозе 0,3 мг/кг количество сперматогоний также было статистически значимо снижено, по сравнению с фоном и не отличалось от значений контроля. У крыс, получавших «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг, этот показатель оказался статистически значимо выше (на 17 %) по сравнению с контролем, хотя и не достигал значений интактных животных.

Определение количества тестостерон продуцирующих клеток (клеток Лейдига) показало, что во всех экспериментальных группах оно оказалось сходным с таковым у интактных животных (табл. 2).

При подсчете количества клеток микроокружения (клеток Сертоли) выявилось их статистически значимое снижение в группе крыс, получивших «Паклитаксел». У животных, получавших препарат «Комплекс» в обеих используемых дозах, этот показатель возрастал по сравнению с контролем.

Таблица 2 - Морфологические и функциональные показатели семенников крыс через 2 месяца после введения препарата «Паклитаксел»

Показатели Фон Контроль «Комплекс» 0,3 мг/кг «Комплекс» 1,0 мг/кг Количество сперматогоний (абс.ед.) 18,03±0,32 12,57±0,46 # 13,49±0,51 # 14,70±0,36 # * Количество клеток Лейдига (абс.ед.) 15,75±0,36 15,65±1,24 15,92±0,62 15,84±0,68 Количество клеток Сертоли (абс.ед.) 2,75±0,02 2,58±0,06 # 2,94±0,07 * 2,82±0,08 * Степень зрелости сперматогенного пласта 6,07±0,00 5,49±0,01 # 5,42±0,01 # * 5,44±0,01 # *

При определении степени зрелости сперматогенного пласта, являющейся основным показателем, характеризующим степень выраженности процессов репаративной регенерации ткани, оказалось, что при введении как одного цитостатического препарата, так и всех изучаемых соединений, её значения достоверно снижались по сравнению с фоном. Это свидетельствует о том, что после цитостатического воздействия в семенниках всех животных запущены процессы репаративной регенерации тестикулярной ткани за счет образования новых канальцев. Однако, в группах введения препарата «Комплекс» (в обеих примененных дозах), степень зрелости сперматогенного пласта оказалась ниже контрольных значений (соответственно, на 10,8 и 10,4 %). Полученные данные свидетельствуют о том, что препарат «Комплекс», обладает способностью стимулировать процессы репаративной регенерации сперматогенной ткани, что, безусловно, должно привести к возрастанию продуктивности сперматогенеза через 3 месяца после введения цитостатического препарата.

Таким образом, через 2 месяца после воздействия цитостатиком «Паклитаксел» в семенниках крыс выявлялись признаки естественной регенерации тестикулярной ткани. В группах терапии исследуемым препаратом обновление ткани, судя по степени зрелости сперматогенного пласта, происходило более интенсивно. На фоне введения препарата «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг отмечается повышение количества сперматогоний, что является, по-видимому, следствием повышенной интенсивности репаративных процессов.

Вторая серия эксперимента

Оценка состояния репродуктивной системы крыс-самцов через 3 месяца после введения «Паклитаксела»

Результаты оценки массы тела крыс, количество общих половых клеток, приходящихся на эпидидимис, процента подвижных форм зрелых спермиев через 3 месяца после введения «Паклитаксела» представлены в таблице 3. Установлено, что масса тела животных в начале эксперимента и через 3 месяца после введения цитостатического препарата во всех сравниваемых группах не различалась (Р>0,05). Полученные данные свидетельствуют о том, что в начале эксперимента была осуществлена качественная рандомизация животных по массе тела, а также о том, что в течение 3-х месяца эксперимента все оказываемые фармакологические воздействия не приводили к существенному снижению массы тела животных.

У крыс, получивших «Паклитаксел» без дополнительной терапии, ОКС, приходящихся на эпидидимис, оставалось статистически значимо сниженным (57% от фоновых значений). Это свидетельствует о выраженной недостаточности сперматогенеза в срок, соответствующий проявлению воздействия на стволовые сперматогонии. ОКС в группе крыс, получавших препарат «Комплекс» в обеих исследуемых дозах (0,3 и 1,0 мг/кг), оказалось выше на, соответственно, 96 и 69% по сравнению с контролем («Паклитаксел»). ОКС при введении препарата «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг статистически значимо не отличалось от фоновых значений. Обращает внимание на себя тот факт, что в группе крыс, получавших «Комплекс» в дозе 0,3 мг/кг, ОКС статистически значимо превышало фоновые значения.

Процент подвижных форм в группе крыс, которым вводился препарат «Комплекс» в обеих исследуемых дозах (0,3 и 1,0 мг/кг), оказался на уровне контрольных значений.

Полученные данные через 3 месяца после начала эксперимента свидетельствуют о том, что введение препарата «Комплекс» приводило к увеличению продуктивности сперматогенеза и его эффективность, судя по ОКС, была выше, чем у контроля и фона.

Таблица 3 - Морфологические и функциональные показатели зрелых спермиев крыс через 3 месяца после введения препарата «Паклитаксел»

Показатели Фон Контроль «Комплекс» 0,3 мг/кг «Комплекс» 1,0 мг/кг Масса животного в начале эксперимента (г) 352,2±14,87 352,6±4,06 352,8±14,12 352,6±13,94 Масса животного в конце эксперимента (г) 488,0±17,47 490,0±10,17 491,0±5,55 490,2±6,18 Количество подвижных форм сперматозоидов (%) 84,0±1,41 59,7±1,78 # 66,3±3,73 # 64,3±2,20 # Общее количество сперматозоидов (абс.ед.) 77,0±5,17 44,0±2,07 # 86,2±3,17 *# 74,3±2,75 *

Через 3 месяца после введения «Паклитаксела» сперматогенный эпителий животных выглядел изреженным по сравнению с таковым у интактных крыс. Между канальцами располагалось небольшое число клеток Лейдига.

Установлено (табл. 4), что через 3 месяца после введения «Паклитаксела» численность клеточной популяции сперматогоний оставалась сниженной и составляла 67 % от фоновых значений. Эти данные свидетельствуют о том, что количество сперматогоний с течением времени не возрастает. Источником пополнения этой клеточной популяции являются стволовые сперматогонии, делящиеся при повреждении. Сроком проявления их повреждений, с учетом длительности сперматогенеза, является 3 месяца. В связи с этим, полученный факт свидетельствует о сокращении количества стволовых сперматогоний под действием «Паклитаксела».

Через 3 месяца после введения «Паклитаксела» в группах животных, получивших «Комплекс», сперматогенный эпителий выглядел менее изреженным, чем в контроле (введение одного цитостатического препарата). Между канальцами отчетливо выявлялись клетки Лейдига, в количестве, близком к норме.

При введении препарата «Комплекс» в дозе 0,3 мг/кг в течение 10 дней через 1 месяц после введения «Паклитаксела» количество сперматогоний также было статистически значимо сниженным по сравнению с фоном и не отличалось от контрольных значений. У крыс, получавших «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг, этот показатель статистически значимо превышал контрольные значения (на 22 %).

При подсчете тестостерон продуцирующих клеток (клетки Лейдига) установлено, что в этот срок наблюдения их число в контроле оказалось сниженным по сравнению с фоном (табл.4), что может быть результатом токсического действия препарата на гонадотропные клетки гипофиза. У крыс, получивших терапию препаратом «Комплекс» (в обеих дозах), количество клеток Лейдига превышало таковое в контроле и не отличалось от фоновых значений.

При подсчете количества клеток микроокружения (клетки Сертоли) выявилось их статистически значимое снижение на фоне воздействия «Паклитакселом». У животных, получивших «Комплекс» в обеих используемых дозах, этот показатель превышал значения в контроле. При введении препарата «Комплекс» в обеих дозах число клеток Сертоли превышало фоновые значения.

Воздействие цитостатиком «Паклитаксел» приводило к снижению по сравнению с фоном степени зрелости сперматогенного пласта. В группе крыс, получивших терапию «Комплексом» после введения цитостатического препарата, этот показатель был также ниже фоновых значений. Отмеченные факты свидетельствуют о том, что после цитостатического воздействия в семенниках животных экспериментальных групп были запущены естественные процессы репаративной регенерации тестикулярной ткани. Однако, при введении препарата «Комплекс» (в обеих используемых дозах) степень зрелости сперматогенного пласта оказалась ниже контрольных значений. Полученные данные свидетельствуют о том, что препарат «Комплекс» обладает способностью стимулировать процессы образования стволовых сперматогоний. Следует отметить, что наиболее низкие значения этого показателя выявлялись в группе крыс, получивших «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг.

Таблица 4 - Морфологические и функциональные показатели семенников крыс через 3 месяца после введения препарата «Паклитаксел»

Показатели Фон Контроль «Комплекс» 0,3 мг/кг «Комплекс» 1,0 мг/кг Количество сперматогоний (абс.ед.) 18,44±0,27 12,35±0,17 # 13,18±0,36 # 15,02±0,44 # * Количество клеток Лейдига (абс.ед.) 15,45±0,53 12,68±0,55 # 15,51±0,50* 14,47±0,72* Количество клеток Сертоли (абс.ед.) 2,51±0,18 2,10±0,09 # 3,46±0,05*# 3,70±0,23*# Степень зрелости сперматогенного пласта 6,12±0,04 5,57±0,02 # 5,33±0,01*# 5,28±0,04*#

Введение цитостатического препарата «Паклитаксела» моделирует в семенниках крыс через 2 и 3 месяца после начала эксперимента тестикулярную недостаточность, обусловленную истощением популяции сперматогоний (срок 2 месяца - недостаточность быстро обновляющихся сперматогоний, срок 3 месяца - недостаточность стволовых сперматогоний). О тестикулярной недостаточности свидетельствует снижение продуктивности сперматогенеза (по показателю ОКС). Доказательством того, что это обусловлено истощением источников пролиферативного пула сперматогенеза является снижение численности сперматогоний через 2 и 3 месяца после цитостатического воздействия. Учитывая, что стволовые клетки восполняют численность сперматогоний при повреждении, полученные данные свидетельствуют о частичной гибели под действием «Паклитаксела» стволовых сперматогоний, что подтверждается данными литературы [Сухачева Т.В., Богуш Т.А., Коломиец О.Л. Повреждающее действие таксола на сперматогенез мыши. // Бюлл. эксперим. биол. и мед.- 2001.- Т.132, №11. - С. 554-560].

Образование новых сперматогоний в извитом семенном канальце лимитируется количеством клеток микроокружения, которые в зрелых канальцах не размножаются. Репаративная регенерация сперматогенной ткани идет только путем образования новых извитых семенных канальцев из регенераторной зоны, содержащей клетки Сертоли и первичные половые детерминанты, которые, впоследствии становятся сперматогониями. Вновь образующиеся семенные канальца характеризуются повышенным содержанием клеток Сертоли, что не ограничивает размножение сперматогоний. Критерием эффективности репаративной регенерации ткани является, прежде всего, степень зрелости сперматогенного пласта.

Результаты исследований показали, что степень зрелости сперматогенного пласта на фоне введения «Паклитаксела» снижена по сравнению с фоновыми значениями, как через 2, так и через 3 месяца после введения цитостатического препарата. Таким образом, на фоне повреждения в тестикулярной ткани идут естественные процессы репаративной регенерации. При введении препарата «Комплекс» (в обеих дозах), этот показатель также снижался, но в большей степени, что свидетельствует о более интенсивных процессах репаративной регенерации. Наименьшие значения этого показателя выявлены через 3 месяца после введения «Паклитаксела» в группе препарата «Комплекс» в дозе 1,0 мг/кг.

В сперматогенном пласте более низкой степени зрелости, клеток микроокружения больше. Это подтверждают полученные результаты через 3 месяца после начала эксперимента в группах введения препарата «Комплекс» (в обеих дозах). Доказательством последнего служит тот факт, что количество клеток Сертоли на фоне введения препарата «Комплекс» (в обеих дозах) было выше фоновых значений. Возрастание клеток Сертоли не ограничивает размножение сперматогоний. Их количество на фоне введения препарата «Комплекс» в обеих дозах возрастало (срок 2 мес - по сравнению с контролем; срок 3 месяца - по сравнению с контролем и фоном). Возрастание количества сперматогоний должно привести к увеличению продуктивности сперматогенеза (увеличению общего количества сперматозоидов). И действительно, этот показатель в экспериментальных группах возрастал по сравнению с контролем: на фоне введения препарата «Комплекс» (срок 2 и 3 месяца - дозы 0,3 и 1,0 мг/кг). Наибольшее возрастание ОКС (выше уровня фона) выявлено при введении препарата «Комплекс» в дозе 0,3 мг/кг через 3 месяца после начала опыта. Это может быть связано не только со стимуляцией процессов репаративной регенерации, но и нормализацией количества тестостерон синтезирующих клеток (в этой группе их число практически не отличалось от фоновых значений). Данные литературы свидетельствуют о крайней резистентности клеток Лейдига к фармакологическим воздействиям [Сухоруков В.С., Шамшад Д.С. Определение степени зрелости сперматогенного пласта крысы при его регенерации и в процессе созревания интактного семенника// Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1989. - Т.97, №9. - 89 с]. Между тем, их роль в гормональной регуляции сперматогенеза является неоспоримой.

На модели тестикулярной недостаточности, связанной с истощением пролиферативного пула сперматогенеза (полу- и стволовых сперматогоний), установлено, что препарат «Комплекс» (в обеих дозах) обладает способностью усиливать процессы репаративной регенерации тестикулярной ткани. Наиболее выраженный терапевтический эффект препарата выявлялся на стволовые сперматогонии в дозе 1,0 мг/кг. Проведенные исследования выявили способность препарата «Комплекс» нормализовать уровень тестостерон синтезирующих клеток. Это также может быть одним из преимуществ тестируемого лекарственного средства. Препарат «Комплекс» (доза 0,3 мг/кг) стимулировал сперматогенез в большей степени, о чем свидетельствуют показатель продуктивности сперматогенеза через 3 месяца после начала эксперимента.

ПРИМЕР 2.

Целью данного исследования была оценка терапевтической эффективности фармацевтической композиции 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином в различных режимах дозирования у пациентов с астеноспермией.

Методология: Данное исследование являлось рандомизированным, двойным слепым, сравнительным, плацебо-контролируемым исследованием в параллельных группах. В исследование были рандомизированы 76 пациентов (16 пациентов в группу плацебо и по 20 пациентов в каждую группу терапии). Капсулы активного препарата и плацебо имели одинаковый внешний вид. Каждый пациент получал по 2 банки исследуемых препаратов, промаркированных надписями «утро» и «вечер».

Когорта 1. Плацебо (n=16): пациенты принимали по одной плацебо-капсуле (утром и вечером) на протяжении 4 недель.

Когорта 2. «Комплекс» 2 мг/сутки (n=20): пациенты принимали одну капсулу препарата «Комплекс» 2 мг (утром) + одну капсулу плацебо (вечером) на протяжении 4 недель.

Когорта 3. «Комплекс» 4 мг/сутки (n=20): пациенты принимали одну капсулу препарата «Комплекс» 2 мг (утром) + одну капсулу препарата Комплекс 2 мг (вечером), на протяжении 4 недель.

Когорта 4. Комплекс 5 мг/сутки (n=20): пациенты принимали одну капсулу препарата «Комплекс» 5 мг (утром) + одну капсулу плацебо (вечером) на протяжении 4 недель.

Общая длительность участия пациентов в исследовании составляла около 7 недель. Период скрининга - до 2 недель, период терапии - до 4 недель, период последующего наблюдения - до 1 недели. Общее количество визитов - 5 (визит скрининга, 3 визита периода терапии и один визит последующего наблюдения).

Все визиты исследования проводились амбулаторно, прием препаратов исследования осуществлялся пациентами самостоятельно с ведением записей в специальных журналах, выдаваемых им на руки.

В исследование включали мужчин в возрасте 20-55 лет с астеноспермией (<32% подвижных сперматозоидов с поступательным движением и/или <40% подвижных сперматозоидов с непоступательным и поступательным движением), давших письменное информированное согласие на участие в исследовании.

Препарат «Комплекс» (капсулы 2 мг и 5 мг) назначался внутрь, ежедневно, в течение 4 недель, утром и вечером или только утром в соответствии с когортой, в которую был включен пациент (2, 4 или 5 мг). Плацебо, по одной капсуле, внутрь, ежедневно, в течение 4 недель, утром и вечером или только вечером в соответствии с когортой, в которую был включен пациент.

Критерии эффективности

В качестве первичной конечной точки эффективности выступало изменение доли (в %) сперматозоидов с прогрессивным движением (по усредненным результатам спермограмм, полученных на Визитах 3 и 4, по сравнению с усредненными исходными данными, полученными на Визитах 0 и 1).

Вторичные конечные точки эффективности включали:

• Изменение (в %) показателя общей подвижности сперматозоидов (по усредненным результатам спермограмм, полученных на Визитах 3 и 4, по сравнению с усредненными исходными данными, полученными на Визитах 0 и 1).

• Изменение (по результатам спермограмм, полученных на Визитах 3 и 4, по сравнению с усредненными исходными данными, полученными на Визитах 0 и 1) количества сперматозоидов, содержащихся в 1 мл эякулята;

• Доля живых сперматозоидов (усредненная оценка по результатам спермограммы Визитов 3 и 4, а также ее динамика по сравнению с усредненными исходными данными, полученными на Визитах 0 и 1).

Статистический анализ данных и оформление результатов проводили с использованием программного обеспечения SAS 9.4. Дескриптивная статистика включала среднее значение, среднеквадратичное отклонение (СКО), медиану, минимальное и максимальное значения, число валидных случаев - для количественных переменных; число, долю, распределение - для качественных переменных. Анализ первичной конечной точки эффективности: для каждого участника исследования были рассчитаны средние значения долей сперматозоидов, измеренные на визитах 0 и 1 и на визитах 3 и 4 (Визит 3/4 - Визит 0/1). Сравнение когорт по рассчитанным значениям до терапии, по рассчитанным значениям после терапии и по изменениям этих значений проводилось при помощи однофакторного дисперсионного анализа с последующими парными сравнениями когорт «Комплекс» 2 мг/сутки, 4 мг/сутки и 5 мг/сутки с когортой Плацебо при помощи критерия Даннета. В рамках анализа эффективности для каждой когорты также тестировали статистическую значимость внутригрупповых (для каждой когорты) изменений средних значений долей сперматозоидов, измеренных на визитах 0 и 1 и на визитах 3 и 4 (Визит 3/4 - Визит 0/1) с помощью парного t-теста. Анализ вторичных конечных точек эффективности по спермограмме проводился аналогично первичной переменной для анализа эффективности. Дополнительно для результатов по всем критериям эффективности по спермограмме был выполнен анализ влияния центра.

Первичная конечная точка эффективности

Первичная конечная точка эффективности включала изменение доли (в %) сперматозоидов с прогрессивным движением (по усредненным результатам спермограмм, полученных на Визитах 3 и 4, по сравнению с усредненными исходными данными, полученными на Визитах 0 и 1).

Сводные данные по доле сперматозоидов с прогрессивным движением на каждом визите приведены в Таблице 5.

За период терапии в когортах исследуемого препарата «Комплекс» отмечалось более выраженное увеличение доли сперматозоидов с прогрессивным движением. Так, среднее изменение (увеличение) в когорте Плацебо составило 7,35%, в когорте «Комплекс» 2 мг/сутки - 14,77%, в когорте «Комплекс» 4 мг/сутки - 21,59%, в когорте «Комплекс» 5 мг/сутки - 13,59%. Во всех случаях изменения по сравнению с плацебо были статистически значимыми на двустороннем уровне значимости 20%: р=0,0680; р=0,0001 и р=0,1465 для дозовых уровней 2 мг/сутки, 4 мг/сутки и 5 мг/сутки, соответственно.

Наиболее выраженное изменение доли сперматозоидов с прогрессивным движением отмечалось в когорте «Комплекс» 4 мг/сутки, в которой разность с плацебо составила 14,23% (95% ДИ: 6,38; 22,09), различия по сравнению с плацебо были статистически значимыми как на 5%, так и 20% двустороннем уровне значимости.

По результатам поддерживающего анализа первичной переменной в для всех дозовых уровней различия по сравнению с плацебо были статистически значимыми как на 5%, так и 20% уровне значимости (р=0,038, р<0,0001, р=0,0485 для дозовых уровней 2 мг/сутки, 4 мг/сутки и 5 мг/сутки, соответственно).

По результатам анализа внутригрупповых изменений во всех когортах отмечался статистически значимый результат (р<0,10), однако среднее значение доли сперматозоидов с прогрессивным движением на момент завершения терапии в когорте Плацебо продолжало находиться ниже нижней границы нормы (32%), а в когортах исследуемого препарата превышало 32% (в когорте «Комплекс» 2 мг/сутки - 35,67%, в когорте «Комплекс» 4 мг/сутки - 41,51%, в когорте «Комплекс» 5 мг/сутки - 33,40%).

Таблица 5 - Изменение доли (в %) усредненных значений сперматозоидов с прогрессивным движением

Визит Статистика Когорта плацебо N=15 Когорта «Комплекс»2 мг/сутки (N=20) Когорта «Комплекс» 4 мг/сутки (N=20) Когорта 5 мг/сутки (N=20) p[1] Визит 0/1 n 15 20 20 20 Среднее 19,843 20,900 19,925 19,807 СКО 7,2393 6,2294 7,4803 7,5245 95% ДИ 15,83-23,85 17,98-23,82 16,42-23,43 16,29-23,33 Медиана 20,000 20,750 20,000 21,750 Минимум 6,50 10,50 0,50 0,00 Максимум 31,00 30,50 30,50 29,50 Разность средних 1,057 0,082 -0,036 95% ДИ (разность)[2] -4,75-6,86 -5,73-5,89 -5,84-5,77 0,9569 p [3] 0,9431 1,0000 1,0000 Визит 3/4 n 15 20 20 20 Среднее 27,200 35,675 41,518 33,400 СКО 10,5658 11,7185 8,4115 9,0373 95% ДИ 21,35-33,05 30,19-41,16 37,58-45,45 29,17-37,63 Медиана 23,500 32,000 41,000 30,500 Минимум 8,00 17,50 27,50 13,00 Максимум 47,50 62,50 52,50 55,00 Разность средних 8,475 14,318 6,200 95% ДИ (разность)[2] 0,35-16,60 6,19-22,44 -1,93-14,33 0,0009 p [3] 0,0390 0,0002 0,1694 Изменение по сравнению с Визитом 0/1 n 15 20 20 20 Среднее 7,357 14,775 21,593 13,593 СКО 9,2343 10,9346 9,6026 8,5297 95% ДИ 2,24-12,47 9,66-19,89 17,10-26,09 9,60-17,58 Медиана 5,000 15,000 20,500 13,750 Минимум -2,50 -5,50 2,50 -5,00 Максимум 26,00 40,00 37,50 30,00 Разность средних 7,418 14,236 6,236 95% ДИ (разность)[2] -0,43-15,27 6,38-22,09 -1,62-14,09 0,0007 p [3] 0,0680 0,0001 0,1465 p [4] 0,0081 <,0001 <,0001 <,0001 СКО - среднеквадратическое отклонение.
[1] Межгрупповое сравнение всех когорт (получавших активную терапию или плацебо) проведено с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA).
[2] Доверительный интервал (ДИ) для разности средних когорт 2, 3, 4 и когорты 1, рассчитанный на основе критерия Даннета.
[3] Сравнение когорт 2, 3, 4 с когортой 1 проведено с помощью критерия Даннета.
[4] Результат внутригрупповых сравнений для каждой когорты при помощи парного t-теста.

Вторичные конечные точки эффективности

Изменение общей подвижности сперматозоидов

Сводные данные о показателе общей подвижности сперматозоидов на каждом из визитов оценки приведены в Таблице 6.

Перед началом терапии средние значения показателя общей подвижности во всех когортах были близки к нижней границе нормы (40% по критериям ВОЗ). После завершения терапии (усредненные оценки Визитов 3/4) показатель общей подвижности во всех когортах был выше нижней границы нормы. Однако наиболее выраженные изменения и наибольшие значения средних на момент завершения терапии отмечались в когортах исследуемого препарата «Комплекс». Так, в когорте Плацебо среднее значение данного показателя на момент окончания терапии составило 46,6%, в когорте «Комплекс» 2 мг/сутки - 51,95%, в когорте «Комплекс» 4 мг/сутки - 60,51%, в когорте «Комплекс» 5 мг/сутки - 49,35%.

В когортах исследуемого препарата «Комплекс» отмечалось более выраженное увеличение показателя общей подвижности сперматозоидов за период исследования. Так, среднее изменение (увеличение) в когорте Плацебо составило 5,00%, в когорте «Комплекс» 2 мг/сутки - 9,90%, в когорте «Комплекс» 4 мг/сутки - 21,74%, в когорте «Комплекс» 5 мг/сутки - 12,40%. Для дозовых уровней 4 мг/сутки и 5 мг/сутки различия по сравнению с плацебо были статистически значимыми: p<0,0001 и p=0,0860 соответственно.

Наиболее выраженное изменение общей подвижности наблюдалось в когорте «Комплекс» 4 мг/сутки, в которой разность с плацебо составила 16,74 (95% ДИ: 8,53; 24,69), различия по сравнению с плацебо были статистически значимыми как на 5%, так и 20% уровне значимости.

Внутригрупповые изменения показателя общей подвижности были статистически значимыми в каждой из когорт исследования (р<0,10), однако наиболее выраженные изменения от исходного уровня и наибольшие значения средних на момент завершения терапии отмечались в когортах исследуемого препарата «Комплекс».

Таблица 6 - Изменение (в %) показателя общей подвижности сперматозоидов (по усредненным результатам спермограмм, полученных на Визитах 3 и 4, по сравнению с усредненными исходными данными, полученными на Визитах 0 и 1)

Визит Статистика Когорта плацебо N=15 Когорта «Комплекс» 2 мг/сутки (N=20) Когорта «Комплекс» 4 мг/сутки (N=20) Когорта 5 мг/сутки (N=20) p[1] Визит 0/1 n 15 20 20 20 Среднее 41,633 42,050 38,775 36,950 СКО 15,4856 15,4723 15,2008 12,2064 95% ДИ 33,06-50,21 34,81-49,29 31,66-45,89 31,24-42,66 Медиана 42,500 35,750 35,750 33,500 Минимум 13,50 23,00 2,00 22,00 Максимум 72,00 70,00 80,00 65,00 Разность средних 0,417 -2,858 -4,683 95% ДИ (разность)[2] -11,47-12,31 -14,75-9,03 -16,57-7,21 0,6673 p [3] 0,9995 0,8827 0,6503 Визит 3/4 n 15 20 20 20 Среднее 46,633 51,950 60,518 49,350 СКО 14,9803 15,6616 13,3413 12,1613 95% ДИ 38,34-54,93 44,62-59,28 54,27-66,76 43,66-55,04 Медиана 42,500 49,500 58,250 47,750 Минимум 15,50 32,50 39,50 26,00 Максимум 70,50 80,00 80,00 75,00 Разность средних 5,317 13,884 2,717 95% ДИ (разность)[2] -6,12-16,75 2,45-25,32 -8,72-14,15 0,0225 p [3] 0,5329 0,0134 0,8862 Изменение по сравнению с Визитом 0/1 n 15 20 20 20 Среднее 5,000 9,900 21,743 12,400 СКО 9,4699 10,4537 12,5251 6,9236 95% ДИ -0,24-10,24 5,01-14,79 15,88-27,60 9,16-15,64 Медиана 5,000 11,000 20,250 12,750 Минимум -8,00 -7,50 0,00 -2,50 Максимум 23,00 32,50 45,50 25,00 Разность средних 4,900 16,743 7,400 95% ДИ (разность)[2] -3,32-13,12 8,53-24,96 -0,82-15,62 <,0001 p [3] 0,3403 <,0001 0,0860 p [4] 0,0601 0,0004 <,0001 <,0001 СКО - среднеквадратическое отклонение.
[1] Межгрупповое сравнение всех когорт (получавших активную терапию или плацебо) проведено с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA).
[2] Доверительный интервал для разности средних когорт 2, 3, 4 и когорты 1, рассчитанный на основе критерия Даннета.
[3] Сравнение когорт 2, 3, 4 с когортой 1 проведено с помощью критерия Даннета.
[4] Результат внутригрупповых сравнений для каждой когорты при помощи парного t-теста.

Изменение количества сперматозоидов, содержащихся в 1 мл эякулята

Сводные данные о количестве сперматозоидов в 1 мл эякулята на каждом из визитов оценки приведены в Таблице 7.

На момент включения в исследования во всех группах терапии показатель концентрации сперматозоидов находился выше нижней границы нормы. За период исследования во всех когортах исследуемого препарата «Комплекс» отмечалось увеличение концентрации сперматозоидов, в то время как в когорте Плацебо динамики не наблюдалось. Среднее увеличение в когорте «Комплекс» 2 мг/сутки составило 2,41 млн/мл, в когорте «Комплекс» 4 мг/сутки - 2,49 млн/мл, в когорте «Комплекс» 5 мг/сутки - 6,76 млн/мл. Изменения по сравнению с плацебо не были статистически значимыми ни для одного из дозовых уровней (р>0,20).

Анализ внутригрупповых изменений с помощью парного t-теста показал статистически значимое изменение показателя концентрации сперматозоидов только в когорте «Комплекс» 5 мг/сутки (р<0,10).

Таблица 7 - Изменение (по результатам спермограмм, полученных на Визитах 3 и 4, по сравнению с усредненными исходными данными, полученными на Визитах 0 и 1) количества сперматозоидов, содержащихся в 1 мл эякулята

Визит Статистика Когорта плацебо N=15 Когорта «Комплекс» 2 мг/сутки (N=20) Когорта «Комплекс» 4 мг/сутки (N=20) Когорта 5 мг/сутки (N=20) p[1] Визит 0/1 n 15 20 20 20 Среднее 32,8000 28,5400 40,9375 25,0400 СКО 17,6724 17,9674 30,1118 14,0186 95% ДИ 23,01-42,59 20,13-36,95 26,84-55,03 18,48-31,60 Медиана 27,5000 24,2500 35,7500 22,5000 Минимум 7,500 6,000 10,000 6,050 Максимум 68,000 80,500 113,000 59,000 Разность средних -4,260 8,138 -7,760 95% ДИ (разность)[2] -21,41-12,89 -9,01-25,28 -24,91-9,39 0,1060 p [3] 0,8728 0,5174 0,5530 Визит 3/4 n 15 20 20 20 Среднее 32,7950 30,9500 43,4275 31,8075 СКО 14,4727 16,0664 23,2171 23,0131 95% ДИ 24,78-40,81 23,43-38,47 32,56-54,29 21,04-42,58 Медиана 29,5000 26,0000 39,0000 25,7500 Минимум 9,500 6,500 8,500 6,150 Максимум 54,500 60,000 105,000 105,500 Разность средних -1,845 10,632 -0,987 95% ДИ (разность) [2] -18,06-14,37 -5,58-26,85 -17,20-15,23 0,1743 p [3] 0,9847 0,2697 0,9975 Изменение по сравнению с Визитом 0/1 n 15 20 20 20 Среднее -0,0050 2,4100 2,4900 6,7675 СКО 7,3771 9,8800 14,5708 14,2313 95% ДИ -4,09-4,08 -2,21-7,03 -4,33-9,31 0,11-13,43 Медиана 2,0000 2,5000 2,5000 4,6250 Минимум -17,000 -27,000 -31,000 -7,000 Максимум 9,000 29,700 41,500 50,500 Разность средних 2,415 2,495 6,773 95% ДИ (разность) [2] -7,49-12,32 -7,41-12,40 -3,13-16,68 0,4115 p [3] 0,8786 0,8684 0,2401 p [4] 0,9979 0,2890 0,4541 0,0468 СКО - среднеквадратическое отклонение.
[1] Межгрупповое сравнение всех когорт (получавших активную терапию или плацебо) проведено с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA).
[2] Доверительный интервал для разности средних когорт 2, 3, 4 и когорты 1, рассчитанный на основе критерия Даннета.
[3] Сравнение когорт 2, 3, 4 с когортой 1 проведено с помощью критерия Даннета.
[4] Результат внутригрупповых сравнений для каждой когорты при помощи парного t-теста.

Доля живых сперматозоидов

Сводные данные о доле живых сперматозоидов на каждом из визитов оценки приведены в Таблице 8. Перед началом терапии доля живых сперматозоидов соответствовала нижней границе нормы во всех когортах исследования. Среднее (СКО) значение в когорте Плацебо составляло 55,87 (18,41) %, в когорте «Комплекс» 2 мг/сутки - 58,95 (13,90) %, в когорте «Комплекс» 4 мг/сутки - 58,74 (17,43) %, в когорте «Комплекс» 5 мг/сутки - 57,95 (18,40)%. На момент завершения терапии во всех когортах отмечалось увеличение показателя доли живых сперматозоидов, однако более выраженные изменения наблюдались в когортах исследуемого препарата «Комплекс». Так, среднее изменение в когорте Плацебо составило 4,06%, в когорте «Комплекс» 2 мг/сутки - 6,97%, в когорте «Комплекс» 4 мг/сутки - 15,49%, в когорте «Комплекс» 5 мг/сутки - 6,82%. Изменения по сравнению с плацебо были статистически значимыми только для дозового уровня 4 мг/сутки (p=0,0168). Наиболее выраженное изменение доли живых сперматозоидов отмечалось для дозового уровня 4 мг/сутки, для которого разность с плацебо составила 11,42 (95 % ДИ: 1,74; 21,11), различия были статистически значимыми как на 5%, так и 20% уровне значимости. Внутригрупповые изменения доли живых сперматозоидов были статистически значимыми в каждой из когорт исследования (р<0,10), однако наиболее выраженные изменения от исходного уровня и наибольшие значения средних на момент завершения терапии отмечались в когортах исследуемого препарата «Комплекс». Так, в когорте Плацебо среднее значение на момент окончания терапии составило 60,26%, в когорте «Комплекс» 2 мг/сутки - 68,77%, в когорте «Комплекс» 4 мг/сутки - 73,74%, в когорте «Комплекс» 5 мг/сутки - 65,90%.

Таблица 8 - Доля живых сперматозоидов (усредненная оценка по результатам спермограмм Визитов 3 и 4, а также ее динамика по сравнению с усредненными исходными данными, полученными на Визитах 0 и 1)

Визит Статистика Когорта плацебо N=15 Когорта «Комплекс»2 мг/сутки (N=20) Когорта «Комплекс» 4 мг/сутки (N=20) Когорта 5 мг/сутки (N=20) p[1] Визит 0/1 n 15 20 19 20 Среднее 56,200 61,800 58,263 59,075 СКО 17,5467 10,9993 16,7700 18,4193 95% ДИ 46,48-65,92 56,65-66,95 50,18-66,35 50,45-67,70 Медиана 62,000 63,750 62,500 64,750 Минимум 22,50 33,50 27,50 25,00 Максимум 82,50 73,50 81,00 81,00 Разность средних 5,600 2,063 2,875 95% ДИ (разность)[2] -7,51-18,71 -11,20-15,32 -10,24-15,99 0,7772 p [3] 0,5958 0,9631 0,9075 Визит 3/4 n 15 20 20 20 Среднее 60,267 68,775 73,743 65,900 СКО 16,0244 12,7748 7,9117 13,4659 95% ДИ 51,39-69,14 62,80-74,75 70,04-77,45 59,60-72,20 Медиана 65,000 71,750 73,000 70,750 Минимум 30,00 32,50 50,00 40,50 Максимум 89,50 83,50 84,00 83,50 Разность средних 8,508 13,476 5,633 95% ДИ (разность)[2] -1,78-18,80 3,19-23,76 -4,66-15,92 0,0213 p [3] 0,1250 0,0071 0,4067 Изменение по сравнению с Визитом 0/1 n 15 20 19 20 Среднее 4,067 6,975 15,492 6,825 СКО 8,5604 13,3303 14,6089 8,6500 95% ДИ -0,67-8,81 0,74-13,21 8,45-22,53 2,78-10,87 Медиана 5,000 7,250 12,500 5,750 Минимум -9,00 -32,50 -1,50 -6,50 Максимум 23,00 32,50 42,50 25,00 Разность средних 2,908 11,425 2,758 95% ДИ (разность)[2] -6,67-12,49 1,74-21,11 -6,82-12,34 0,0284 p [3] 0,7966 0,0168 0,8197 p [4] 0,0871 0,0304 0,0002 0,0022 СКО - среднеквадратическое отклонение.
[1] Межгрупповое сравнение всех когорт (получавших активную терапию или плацебо) проведено с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA).
[2] Доверительный интервал для разности средних когорт 2, 3, 4 и когорты 1, рассчитанный на основе критерия Даннета.
[3] Сравнение когорт 2, 3, 4 с когортой 1 проведено с помощью критерия Даннета.
[4] Результат внутригрупповых сравнений для каждой когорты при помощи парного t-теста.

Таким образом, предлагаемое изобретение расширяет арсенал средств предназначенных для лечения патозооспермии в том числе и астеноспермии у мужских особей при нарушениях фертильности за счет повышения численности стволовых и полустволовых сперматогониев, увеличения пула тестостерон-синтезирующих клеток (клеток Лейдига), а также клеток Сертоли, играющих важную роль в гормональной регуляции сперматогенеза.

Примеры твердых лекарственных форм включают, например, таблетки, пилюли, желатиновые капсулы и др.

Примеры жидких лекарственных форм для инъекций и парентерального введения включают растворы, эмульсии, суспензии и др. Композиции, как правило, получают с помощью стандартных процедур, предусматривающих смешение активного соединения с жидким или тонко измельченным твердым носителем.

Готовый лекарственный препарат согласно изобретению в форме таблеток содержат от 2 до 10 % активного соединения и наполнитель(и) или носитель(и). В качестве таковых для таблеток применяются: а) разбавители: свекловичный сахар, лактоза, глюкоза, натрия хлорид, сорбит, маннит, гликоль, фосфат кальция двузамещенный; б) связующие вещества: магниевый силикат алюминия, крахмальная паста, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза и поливинил пиррол и дон; в) разрыхлители: декстроза, агар, альгиновая кислота или ее соли, крахмал, твин.

ПРИМЕР. 1.1

100 мг таблетки, содержащие по 2 мг 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена

9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен 2 мг Лактоза 53,0 мг Альгиновая кислота 20,0 мг Лимонная кислота 5,0 мг Трагакант 20,0 мг

ПРИМЕР. 1.2

100 мг таблетки, содержащие по 5 мг 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена

9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен 5 мг Лактоза 50,0 мг Альгиновая кислота 20,0 мг Лимонная кислота 5,0 мг Трагакант 20,0 мг

ПРИМЕР. 1.3

100 мг таблетки, содержащие по 10 мг 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена

9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен 10 мг Лактоза 45,0 мг Альгиновая кислота 20,0 мг Лимонная кислота 5,0 мг Трагакант 20,0 мг

Таблетка может быть сформирована посредством прессовки или формовки активного ингредиента с одним или более дополнительными ингредиентами. Получение прессованных таблеток осуществляется на специальной установке. Активный ингредиент в свободной форме, такой, как порошок или гранулы, в количествах 20 г или 50 г или 100 г (количество вещества, необходимое для получения 10000 таблеток) перемешивается со связующим веществом - трагакантом (200 г), смешивается с разбавителем - лактозой (530 г или 500 г или 450 г), в смесь добавляется разрыхляющее вещество - альгиновая кислота (200 г) и отдушка - лимонная кислота (50 г).

Для желатиновых капсул обычно используются дополнительно красители и стабилизаторы. В качестве красителей применяются: тетразин, индиго; в качестве стабилизаторов могут быть представлены: натрия метабисульфит, натрия бензоат. Предлагаемые желатиновые капсулы содержат от 2 до 10 % активного ингредиента.

ПРИМЕР 2.1

1 капсула 2 мг содержит:

Активное вещество:

9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен - 2 мг в пересчете на безводное вещество

Вспомогательные вещества:

Бетадекс (β-циклодекстрин) до массы содержимого 190 мг

Капсулы твердые желатиновые:

Желатин

Титана диоксид (Е171)

ПРИМЕР 2.2

1 капсула 5 мг содержит:

Активное вещество:

9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен - 5 мг в пересчете на безводное вещество

Вспомогательные вещества:

Бетадекс (β-циклодекстрин) до массы содержимого 190 мг

Капсулы твердые желатиновые:

Желатин

Титана диоксид (Е171)

ПРИМЕР 2.3

1 капсула 10 мг содержит:

Активное вещество:

9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен - 10 мг в пересчете на безводное вещество

Вспомогательные вещества:

Бетадекс (β-циклодекстрин) до массы содержимого 190 мг

Капсулы твердые желатиновые:

Желатин

Титана диоксид (Е171)

Активный ингредиент в свободной форме, такой, как порошок или гранулы, в количествах 20 г или 50 г или 100 г (количество вещества, необходимое для получения 10000 капсул) перемешивается с веществом β-циклодекстрин (бетадекс) (1880 г или 1850 г или 1800 г).

Инъекционные формы композиции предпочтительно представляют собой изотонические и масляные растворы, суспензии и содержат от 0,025 до 0,1 % активного ингредиента. Вышеуказанные формы могут стерилизоваться и содержать добавки, такие как консерванты: натрия метабисульфит, бензойная кислота, натрия бензоат, смесь метилпарабена и пропилпарабена; стабилизаторы: абрикосовая и аравийская камедь, декстрин, крахмальный клейстер, метилцеллюлоза, твин; соли, регулирующие осмотическое давление (хлорид натрия), или буферы. Кроме того, они могут содержать другие терапевтически полезные вещества.

ПРИМЕР 3.1

2 мл ампулы, содержащие по 0,5 мг 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена:

9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен 0,5 мг Соевое масло гидрированное 2 мл

ПРИМЕР 3.2

2 мл ампулы, содержащие по 1,0 мг 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена:

9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен 1,0 мг Соевое масло гидрированное 2 мл

ПРИМЕР 3.3

2 мл ампулы, содержащие по 2,0 мг 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена:

9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантен 2,0 мг Соевое масло гидрированное 2 мл

Для приготовления инъекционных форм активное соединение (0,5 г или 1 г или 2 г; количества, необходимые для изготовления 1000 ампул) тонко измельчают и смешивают в смесителе с соевым маслом гидрированным (2000 мл). Полученный раствор фасуют в ампулы по 2 мл и стерилизуют паром в течение 30 мин.

Назначаемая для приема доза активного компонента (9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена формулы 1 или его смеси с β-циклодекстрином или клатратного комплекса с β-циклодекстрином) варьирует в зависимости от многих факторов, таких как возраст, пол, масса тела пациента, симптомы и тяжесть заболевания, конкретно назначаемое соединение, способ приема, форма препарата, в виде которой назначается активное соединение. Обычно, суточная назначаемая доза составляет от 1 до 20 мг в день. Общая доза может быть разделена на несколько доз, например, для приема от 1 до 4 раз в день. При оральном назначении интервал общих доз активного вещества составляет от 1 до 20 мг в день, предпочтительно, от 1 до 10 мг. При парентеральном приеме интервал назначаемых доз составляет от 0,5 до 5 мг в день, предпочтительно, от 0,5 до 2 мг. Эффективная терапевтическая доза препарата может быть выбрана лечащим врачом.

Похожие патенты RU2782140C2

название год авторы номер документа
СТИМУЛЯТОР ПРОЦЕССОВ РЕПАРАТИВНОЙ РЕГЕНЕРАЦИИ ТЕСТИКУЛЯРНОЙ ТКАНИ 2019
  • Еримбетов Кенес Тагаевич
  • Бондаренко Екатерина Валерьевна
  • Гончарова Анна Яковлевна
  • Розиев Рахимджан Ахметджанович
RU2778238C2
Применение комплекса 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином для коррекции нарушений сперматогенеза, вызванных цитотоксическим воздействием 2019
  • Еримбетов Кенес Тагаевич
  • Бондаренко Екатерина Валерьевна
  • Гончарова Анна Яковлевна
  • Розиев Рахимджан Ахметджанович
RU2782758C2
Применение фармацевтической композиции β-циклодекстрина с 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантеном для повышения/восстановления либидо 2019
  • Еримбетов Кенес Тагаевич
  • Бондаренко Екатерина Валерьевна
  • Гончарова Анна Яковлевна
  • Розиев Рахимджан Ахметджанович
RU2782133C2
БИСАМИДНОЕ ПРОИЗВОДНОЕ ДИКАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ В КАЧЕСТВЕ СРЕДСТВА, СТИМУЛИРУЮЩЕГО РЕГЕНЕРАЦИЮ ТКАНЕЙ И ВОССТАНОВЛЕНИЕ СНИЖЕННЫХ ФУНКЦИЙ ТКАНЕЙ 2015
  • Небольсин Владимир Евгеньевич
  • Рыдловская Анастасия Владимировна
  • Дыгай Александр Михайлович
  • Боровская Татьяна Геннадьевна
RU2647438C2
БИСАМИДНОЕ ПРОИЗВОДНОЕ ДИКАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ В КАЧЕСТВЕ СРЕДСТВА, СТИМУЛИРУЮЩЕГО РЕГЕНЕРАЦИЮ ТКАНЕЙ И ВОССТАНОВЛЕНИЕ СНИЖЕННЫХ ФУНКЦИЙ ТКАНЕЙ 2016
  • Небольсин Владимир Евгеньевич
  • Рыдловская Анастасия Владимировна
  • Дыгай Александр Михайлович
  • Боровская Татьяна Геннадьевна
  • Скурихин Евгений Германович
RU2727142C2
СРЕДСТВО КОРРЕКЦИИ ОТДАЛЕННЫХ ПОСЛЕДСТВИЙ НАРУШЕНИЙ СПЕРМАТОГЕНЕЗА, ВЫЗВАННЫХ ЦИТОСТАТИЧЕСКИМ ВОЗДЕЙСТВИЕМ 2013
  • Артамонов Андрей Владимирович
  • Бекарев Андрей Александрович
  • Боровская Татьяна Геннадьевна
  • Дыгай Александр Михайлович
  • Жданов Вадим Вадимович
  • Зюзьков Глеб Николаевич
  • Мадонов Павел Геннадьевич
  • Полуэктова Марина Евгеньевна
  • Щемерова Юлия Александровна
  • Вычужанина Анна Владимировна
RU2535002C2
Средство для коррекции отдаленных последствий нарушений сперматогенеза, вызванных цитостатическим воздействием 2019
  • Боровская Татьяна Геннадьевна
  • Григорьева Валерия Александровна
  • Вычужанина Анна Владимировна
  • Полуэктова Марина Евгеньевна
  • Щемерова Юля Александровна
  • Камалова Светлана Ивановна
  • Дыгай Александр Михайлович
  • Кучин Александр Васильевич
  • Чукичева Ирина Юрьевна
  • Буравлёв Евгений Владимирович
  • Коллантай Олеся Вадимовна
RU2717240C1
СПОСОБ КОРРЕКЦИИ НАРУШЕНИЙ СПЕРМАТОГЕНЕЗА, ВЫЗВАННЫХ ЦИТОСТАТИЧЕСКИМ ВОЗДЕЙСТВИЕМ 2009
  • Боровская Татьяна Геннадьевна
  • Дыгай Александр Михайлович
  • Жданов Вадим Вадимович
  • Румпель Олеся Александровна
  • Пахомова Ангелина Владимировна
  • Перова Анна Владимировна
  • Зюзьков Глеб Николаевич
  • Гольдберг Виктор Евгеньевич
RU2406527C1
СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ СПЕРМАТОГЕНЕЗА 2016
  • Ткачук Всеволод Арсеньевич
  • Акопян Жанна Алексеевна
  • Ефименко Анастасия Юрьевна
  • Камалов Армаис Альбертович
  • Кирпатовский Владимир Игоревич
  • Макаревич Ольга Александровна
  • Макаревич Павел Игоревич
  • Нимирицкий Петр Петрович
  • Охоботов Дмитрий Александрович
  • Сагарадзе Георгий Дмитриевич
  • Тарасова Елена Владимировна
RU2652902C1
СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ СПЕРМАТОГЕНЕЗА 2016
  • Ткачук Всеволод Арсеньевич
  • Акопян Жанна Алексеевна
  • Ефименко Анастасия Юрьевна
  • Камалов Армаис Альбертович
  • Кирпатовский Владимир Игоревич
  • Макаревич Ольга Александровна
  • Макаревич Павел Игоревич
  • Нимирицкий Петр Петрович
  • Охоботов Дмитрий Александрович
  • Сагарадзе Георгий Дмитриевич
  • Тарасова Елена Владимировна
RU2653779C1

Реферат патента 2022 года Применение комплекса 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином для лечения патозооспермии

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению клатратного комплекса 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином в качестве средства для лечения патозооспермии. Массовое соотношение 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена и β-циклодекстрина составляет от 1:1 до 1:10 Изобретение позволяет лечить патозооспермию за счет повышения численности стволовых и полустволовых сперматогониев, увеличения пула тестостерон-синтезирующих клеток (клеток Лейдига), а также клеток Сертоли в тестикулах. 8 табл., 11 пр.

Формула изобретения RU 2 782 140 C2

Применение клатратного комплекса 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена с β-циклодекстрином в качестве средства для лечения патозооспермии при массовом соотношении 9-фенил-2,3,4,5,6,7,8,9-октагидро-1Н-селеноксантена и β-циклодекстрина от 1:1 до 1:10.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2022 года RU2782140C2

СРЕДСТВО ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ 2012
  • Розиев Рахимджан Ахметджанович
  • Гончарова Анна Яковлевна
  • Подгородниченко Владимир Константинович
  • Еримбетов Кенес Тагаевич
  • Воробьёв Илья Владимирович
RU2487705C1
КЛАТРАТНЫЙ КОМПЛЕКС ЦИКЛОДЕКСТРИНА ИЛИ АРАБИНОГАЛАКТАНА С 9-ФЕНИЛ-СИММ-ОКТАГИДРОСЕЛЕНОКСАНТЕНОМ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ (ВАРИАНТЫ), ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО 2011
  • Подгородниченко Владимир Константинович
  • Цыб Анатолий Фёдорович
  • Розиев Рахимджан Ахметджанович
  • Гончарова Анна Яковлевна
  • Воробьёв Илья Владимирович
  • Еримбетов Кенес Тагаевич
RU2451680C1
СРЕДСТВО ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ 2012
  • Розиев Рахимджан Ахметджанович
  • Гончарова Анна Яковлевна
  • Еримбетов Кенес Тагаевич
  • Воробьёв Илья Владимирович
RU2489142C1

RU 2 782 140 C2

Авторы

Еримбетов Кенес Тагаевич

Бондаренко Екатерина Валерьевна

Гончарова Анна Яковлевна

Розиев Рахимджан Ахметджанович

Даты

2022-10-21Публикация

2019-09-18Подача