Способ диагностики неполного самопроизвольного аборта Российский патент 2023 года по МПК A61B5/00 G01N33/50 G01N33/52 

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано при диагностике неполного самопроизвольного аборта [1, 2].

Проблема неполного самопроизвольного аборта в 21 веке стоит остро как никогда. Являясь одной из причин снижения рождаемости в РФ и требует к себе особого внимания. Поэтому требуется разработка нового метода диагностики неполного самопроизвольного аборта [3, 4].

Одним из способов диагностики данной патологии беременности является определение концентрации свободного эстриола крови [5]. Другим способом диагностики неполного самопроизвольного аборта является определение концентрации свободного β-ХГЧ в крови [6]. Определение низкой концентрации РАРР-А (ассоциированный с беременностью протеин А) в сыворотке крови сообщает нам о возможности развития неполного самопроизвольного аборта в последующем [7]. При низкой концентрации АФП (альфа-фетопротеина) в сыворотке крови мы также можем говорить о неблагоприятном течении данной конкретной беременности [8].

Все выше представленные нами методы обладают существенными недостатками. Отсутствие возможности использования в качестве самостоятельного способа исследования и диагностика патологии беременности непосредственно при возникновении клинических проявлении делают данные методы недостаточно эффективными. Поэтому необходима разработка метода диагностики и прогнозирования неполного самопроизвольного аборта с целью сохранения и пролонгирования желанной беременности [9, 10].

В процессах эмбриогенеза, имплантации плодного яйца и его эвакуации из полости матки важное место занимают такие ферменты лизосом как катепсины [11, 12]. Являясь центральным звеном регуляции женской репродуктивной системы, катепсины также участвуют в развитии патологии эндометрия [13, 14]. В ходе некоторых научных работ авторами были выяснено, что катепсин G является одним из маркеров развития гестоза и злокачественных новообразований [15].

Техническим результатом настоящего изобретения является разработка способа ранней диагностики неполного самопроизвольного аборта.

Осуществление изобретения

Все пациентки, включенные в исследование, были поделены на 2 группы: 35 пациенток с неполным самопроизвольным абортом и 35 пациенток контрольной группы с нормальным течением беременности. Данное деление производилось на основании данных ультразвукового исследования, анамнеза и клинических проявлений. Из исследования были исключены пациентки с гестозом, хроническим эндометриозом и злокачественными новообразованиями в анамнезе. Пациентки, задействованные в исследовании, обращались в гинекологический стационар с клиническими проявлениями угрозы прерывания беременности, а пациентки контрольной группы вставали на учет в женскую консультацию.

Для получения сыворотки проводили забор крови у пациенток в пробирки, затем образцы оставляли на 2 часа при комнатной температуре. Далее пробирки с образцами крови центрифугировали 20 мин при оборотах 1000g (Elmi СМ-6МТ, Латвия) и хранили при температуре -20°С, избегая повторных циклов заморозки/разморозки.

Активность катепсина G определяли колориметрическим методом с использованием коммерческого набора «Набор для определения активности Катепсина G (CG) колометрическим способом, Assay Genie, Ирландия». Метод основан на способности катепсина G, расщеплять субстрат и высвобождать краситель 4-нитроанилин (pNA). Реакцию останавливали специфическим ингибитором катепсина G, после чего интенсивность окраски определяли на микропланшетном анализаторе Stat Fax 2100 («Awareness Technology», США) при длине волны 405 нм. Количество белка в пробах анализировали методом Бредфорда (Pierce Coomassie Plus (Bradford) Assay Kit, «ThermoFisher», США) [Bradford, M. M. (1976) A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding, Anal Biochem., 7 (72), 248-54, doi.org/10.1006/abio.1976.9999].

Активность катепсина G определяли по калибровочному графику, построенного с использованием стандарта pNA, и выражали в нмоль/сек×мг белка.

Данные, полученные в ходе исследования, были проанализированы нами в программе Statistica 12.4. У полученных данных по результатам исследования было нормальное распределение (критерию Шапиро-Улка р<0,05), поэтому для проведения дальнейшего анализа нами были использованы параметрические тесты. Для выявления статистически значимых различий между полученными данными в группах применялся дисперсионный анализ (ANOVA), а с помощью критерия Манна-Уитни (U-тест) проводились парные сравнения в исследуемых группах. Уровень достоверности и статистической значимости (р) приняли равным 0,05. Все числовые данные были представлены нами в виде среднего арифметического, а также стандартного отклонения.

По результатам проведенного исследования вышло что у пациенток из контрольной группы минимальный показатель активность катепсина G составил 0,17 нмоль/сек×мг белка, а максимальный - 0,28 нмоль/сек×мг белка соответственно (р<0,05). У группы же с неполным самопроизвольным абортом минимальный показатель активности катепсина G составил 0,79 нмоль/сек×мг белка, а максимальный - 0,89 нмоль/сек×мг белка.

Клинический случай 1: Пациентка Д., 36 лет, поступила в гинекологическое отделение с диагнозом угрожающий аборт при беременности 6-7 недель. На УЗИ органов малого таза при поступлении- Беременность 6-7 недель. Нами также был произведен забор венозной крови для исследования активности катепсина G и его активность оказалась равна 0,79 нмоль/сек×мг белка. Диагноз угрожающего аборта был установлен на основании данных анамнеза, жалоб (на тянущие боли внизу живота в течение недели), данные ультразвукового исследования (маточная беременность) и гинекологического исследования (слизистые выделения, зев закрыт, матка соответствует сроку беременности). Пациентка получала сохраняющую терапию, находилась 7 дней на стационарном лечении и 7 дней в дневном стационаре, после чего была выписана под наблюдение врача женской консультации. Через 5 дней пациентка снова поступает в отделение с жалобами на умеренные кровянистые выделения с диагнозом угрожающий аборт при беременности 9-10 недель, который после УЗИ органов малого (остатки хориальной ткани) был изменен на неполный самопроизвольный аборт при беременности 9-10 недель. Выполнено экстренное оперативное лечение (экстренная вакуум-аспирация содержимого полости матки с патогистологическим исследованием полученного материала), во время выполнения которого предварительно диагноз был подтвержден. Диагноз подтвердился также по итогам патогистологического исследования (остатки хориальной ткани).

Клинический случай 2: Пациентка З., 35 лет, поступила в гинекологическое отделение с диагнозом угрожающий аборт при беременности 7-8 недель. На УЗИ органов малого таза при поступлении- Беременность 7-8 недель. Нами также был произведен забор венозной крови для исследования активности катепсина G и его активность оказалась равна 0,81 нмоль/сек×мг белка. Диагноз угрожающего аборта был установлен на основании данных анамнеза, жалоб (на тянущие боли внизу живота в течение недели), данные ультразвукового исследования (маточная беременность) и гинекологического исследования (слизистые выделения, зев закрыт, матка соответствует сроку беременности). Пациентка получала сохраняющую терапию, находилась 7 дней на стационарном лечении после чего была выписана под наблюдение врача женской консультации. Через 4 дня пациентка снова поступает в отделение с жалобами на обильные кровянистые выделения с диагнозом угрожающий аборт при беременности 8-9 недель, который после УЗИ органов малого (остатки хориальной ткани) был изменен на неполный самопроизвольный аборт при беременности 8-9 недель. Было выполнено экстренное оперативное лечение (экстренная вакуум-аспирация содержимого полости матки с патогистологическим исследованием полученного материала), в ходе которого диагноз был предварительно подтвержден. В итоге диагноз был подтвержден патогистологически (остатки плодного яйца).

Клинический случай 3: Пациентка Ш., 36 лет, поступила в гинекологическое отделение с диагнозом угрожающий аборт при беременности 6-7 недель. На УЗИ органов малого таза при поступлении- Беременность 6-7 недель. Нами также был произведен забор венозной крови для исследования активности катепсина G и его активность оказалась равна 0,88 нмоль/сек×мг белка. Диагноз угрожающего аборта был установлен на основании данных анамнеза, жалоб (на тянущие боли внизу живота в течение недели), данные ультразвукового исследования (маточная беременность) и гинекологического исследования (слизистые выделения, зев закрыт, матка соответствует сроку беременности). Пациентка получала сохраняющую терапию, через 2 дня нахождения в стационаре появились жалобы на незначительные кровянистые выделения, была назначена гемостатическая терапия. На 3 день нахождения в стационаре при походе в туалет, со слов больной, из нее вышел большой сгусток крови. Была направлена на УЗИ органов малого таза (остатки плодного яйца), диагноз был изменен на неполный самопроизвольный аборт при беременности 7-8 недель. Произведено экстренное оперативное лечение (экстренная вакуум-аспирация содержимого полости матки с патогистологическим исследованием полученного материала), в ходе выполнения которой диагноз был предварительно подтвержден. Диагноз в дальнейшем был подтвержден окончательно патогистологически (остатки плодного яйца).

Таким образом, значение активности катепсина G от 0,79 до 0,89 нмоль/сек×мг белка свидетельствуют о возникновении в дальнейшем неполного самопроизвольного аборта. Метод определения активности катепсина G можно использовать в качестве способа диагностики, представленной нами патологии беременности.

Список литературы

1. Goddijn M., Leschot N.J. Genetic aspects of miscarriage [Journal] // Baillieres Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol. -2000. - Vol. 14. - p. 855.

2. Regan L., Rai R. Epidemiology and the medical causes of miscarriage [Journal] // Baillieres Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol. - 2000. - Vol. 14. - p. 839.

3. Vitzthum V.J., Spielvogel H., Thornburg J., West B. A prospective study of early pregnancy loss in humans. Fertil Steril [Journal] // Fertil Steril. - 2006. - Vol. 86. - p. 373.

4. Wang X., Chen C., Wang L. Conception, early pregnancy loss, and time to clinical pregnancy: a population-based prospective study. [Journal] // ertil Steril. - 2003. - Vol. 79. - p. 577

5. Tochiev GF, Toktar LR, Semyatov SD. Compliance and importance in pelvic organ prolapsed. Bulletin of Peoples' Frendship University. Series «Medicine. Obstetrics and Gynecology», 2013, 5: 191-200.

6. Lohstroh P.N., Overstreet J.W., Stewart D.R. Secretion and excretion of human chorionic gonadotropin during early pregnancy [Journal] // Fertil Steril. - 2005. - Vol. 83. - p. 1000.

7. Monaghan C., Thilaganathan B. Fetal Growth Restriction (FGR): How the Differences Between Early and Late FGR Impact on Clinical Management? J. Fetal Med. Springer India, 2016. Vol. 3, № 3. P. 101-107.

8. Elevated maternal serum alpha-fetoprotein with low unconjugated estriol and the risk for lethal perinatal outcome / P.A. Benn, A. Craffey, D. Horne [et al.] // J. Matern. Fetal. Med. - 2000. - Vol. 9, № 3. - P. 165-169.

9. Yuan X.M., Li W., Brunk U.T., Dalen H., Chang Y.H., Seva-nian A. // Free. Radic. Biol. Med. 2000. Vol. 15, № 28(2). Р. 208-18

10. Tsukuba T., Okamoto K., Yasuda Y., Morikawa W., Nakanishi H., Yamamoto K. // Mol. Cells. 2000. Vol. 31, № 10(6). Р. 601-11

11. Moses E.K., FreedK.A., Higgins J.R., Brennecke S.P. // Mol. Hum. Reprod. 1999. Vol. 5, №10. Р. 983-9

12. Абрамченко В.В. Антиоксиданты и антигипоксанты в акушерстве.. СПб.: Изд-во ДЕАН. 2001.400с.

13. Ishihara N. et al. // Am. J. Obstet. Gynecol. 2002. Vol. 186, №1. P. 158-166.

14. Neale D. et al. // J. Matern. Fetal. Neonatal. Med. 2003. Vol. 13, №1. P. 39-44.

15. Пат. 2263913 Россия. Способ прогнозирования гесто-за/Борзова Н.Ю. и др. // БИПМ. 2005. №11. С. 215.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано при диагностике неполного самопроизвольного аборта. Определяют активность катепсина G в сыворотке крови колориметрическим методом. При значениях от 0,79 до 0,89 нмоль/с×мг белка диагностируют возникновение неполного самопроизвольного аборта. Способ эффективен, позволяет диагностировать на раннем этапе неполный самопроизвольный аборт, что позволяет сохранить и пролонгировать желанную беременность. 3 пр.

Способ диагностики неполного самопроизвольного аборта, включающий определение в сыворотке крови активности катепсина G колометрическим способом, при этом при его значениях от 0,79 до 0,89 нмоль/с×мг белка диагностируют неполный самопроизвольный аборт.