Способ очистки нуклеиновой кислоты Российский патент 2023 года по МПК C07H21/00 C12Q1/6806 C12N15/10 

Область техники

Изобретение относится к способу очистки нуклеиновой кислоты, в частности к способу очистки нуклеиновой кислоты, который включает первую стадию кристаллизации нуклеиновой кислоты с использованием раствора, содержащего гидрофильный органический растворитель, и вторую стадию сушки кристаллизованной нуклеиновой кислоты горячим воздухом с высокой влажностью.

Уровень техники

В качестве способов кристаллизации нуклеиновых кислот в основном применяют способ с использованием гидрофильного органического растворителя. В случае нуклеиновых кислот, используемых в пищевых продуктах, удаление органических растворителей в конечных продуктах является существенно важным вопросом ввиду правил относительно остаточного количества органических растворителей в каждой стране. Гидрофильные органические растворители, обычно используемые для кристаллизации нуклеиновых кислот, включают этанол, метанол и тому подобное. В частности, требуется полное удаление метанола, поскольку регулирование остаточного количества метанола является строгим. Тем не менее, способ с использованием органического растворителя (корейский патент No. 10-0051324) по-прежнему широко используют в качестве способа кристаллизации нуклеиновых кислот. В связи с этим, помимо этого патента, корейский патент No. 10-0083595, китайский патент No. 100395256, китайский патент No. 101863943, корейский патент No. 10-0025552 и корейский патент No. 10-0117428 и т.п. также описывают способы кристаллизации нуклеиновых кислот с использованием органического растворителя.

Кристаллы нуклеиновых кислот, особенно кристаллы гептагидрата динатриевой соли гуанозин-5'-монофосфата, которые существуют в виде гептагидрата, теряют кристаллизационную воду при низких температурах, таких как комнатная температура, и происходит потеря около 70%, когда гептагидрат превращается в 2,5-гидрат при повышении температуры с комнатной температуры до 80°С в течение примерно 30 минут (фиг.1). Эта потеря гидратной воды в кристаллах гептагидрата динатрий-гуанозин-5'-монофосфата снижает кристалличность кристаллов и вызывает ослабление кристаллов и изменение формы кристаллов, и поэтому существенно важно поддерживать во время сушки кристаллизационную воду на уровне гептагидрата. При наличии большого количества поверхностной воды кристаллы трансформируются в аморфную форму, происходит агломерация, и, таким образом, в процессе очистки также происходят потери вследствие явления агломерации.

Ввиду этих свойств нуклеиновых кислот, в качестве способа удаления остаточного органического растворителя в кристаллизованной нуклеиновой кислоте проводят сушку при низких температурах, таких как комнатная температура. Однако существует проблема, состоящая в том, что в случае сушки кристаллов нуклеиновой кислоты при низкой температуре остаточный органический растворитель в кристаллах не удаляется полностью. С другой стороны, сушку выгодно выполнять при высокой температуре для полного удаления остаточного органического растворителя в кристаллах в условиях удаления органического растворителя, но есть проблема в том, что качество продукта - кристаллов нуклеиновых кислот снижается из-за испарения кристаллизационной воды, и необходима альтернатива этому.

Краткое описание изобретения

Задачей изобретения является создание способа очистки нуклеиновой кислоты, который включает первую стадию кристаллизации нуклеиновой кислоты с использованием раствора, содержащего гидрофильный органический растворитель, и вторую стадию сушки кристаллизованной нуклеиновой кислоты воздухом, имеющим температуру 30°С или более и 90°С или менее и относительную влажность 40% или более и 90% или менее.

Каждое описание и воплощение, раскрытые в данном документе, также могут быть применены к другим описаниям и воплощениям. То есть все сочетания различных элементов, раскрытых в данном описании, находятся в пределах объема охраны изобретения. Кроме того, объем охраны изобретения не ограничен приведенным ниже конкретным описанием.

Кроме того, специалисты в данной области техники понимают или смогут установить, используя не более чем рутинные эксперименты, многие эквиваленты конкретных воплощений изобретения, описанных в данном описании. Кроме того, эти эквиваленты следует интерпретировать как находящиеся в пределах объема охраны изобретения.

Кроме того, во всем данном описании, когда часть упоминается как «включающая» элемент, следует понимать, что могут быть дополнительно включены другие элементы, но не исключены другие элементы, если только обратное специально не описано.

Далее изобретение описано подробно.

Для решения указанной задачи в одном из аспектов изобретения предложен способ очистки нуклеиновой кислоты, который включает первую стадию кристаллизации нуклеиновой кислоты с использованием раствора, содержащего гидрофильный органический растворитель, и вторую стадию сушки кристаллизованной нуклеиновой кислоты воздухом, имеющим температуру 30°С или более и 90°С или менее и относительную влажность 40% или более и 90% или менее.

Способ очистки нуклеиновой кислоты согласно изобретению включает первую стадию кристаллизации нуклеиновой кислоты с использованием раствора, содержащего гидрофильный органический растворитель. В данном изобретении способ кристаллизации не является особо ограниченным, пока он представляет собой способ с использованием раствора, содержащего гидрофильный органический растворитель.

Используемый здесь термин «нуклеиновая кислота» относится к соединению, состоящему из основания, сахара и фосфорной кислоты. В частности, в данном изобретении нуклеиновая кислота может представлять собой любую одну или более кислот, выбранных из группы, состоящей из гуанозин-5'-монофосфата (5'-ГМФ) и инозин-5'-монофосфата (5'-ИМФ), более конкретно гуанозин-5'-монофосфата (5'-ГМФ), но не ограничивается этим.

В данном изобретении подразумевается, что нуклеиновая кислота включает как соли соединений нуклеиновых кислот, так и гидратные формы солей.

Используемый здесь термин «соль» относится к форме, в которой катион и анион связаны друг с другом электростатическим притяжением и могут в целом представлять собой соль металла, соль с органическим основанием, соль с неорганической кислотой, соль с органической кислотой, соль с основной или кислой аминокислотой и т.п.. Например, соль металла может представлять собой соль щелочного металла (натриевая соль, калиевая соль или т.п.), соль щелочноземельного металла (кальциевая соль, магниевая соль, бариевая соль или т.п.), алюминиевая соль или т.п.; соль с органическим основанием может представлять собой соль с триэтиламином, пиридином, пиколином, 2,6-лутидином, этаноламином, диэтаноламином, триэтаноламином, циклогексиламином, дициклогексиламином, N,N-дибензилэтилендиамином или т.п.; соль с неорганической кислотой может представлять собой соль с соляной кислотой, бромоводородной кислотой, азотной кислотой, серной кислотой, фосфорной кислотой или т.п.; соль с органической кислотой может представлять собой соль с муравьиной кислотой, уксусной кислотой, трифторуксусной кислотой, фталевой кислотой, фумаровой кислотой, щавелевой кислотой, винной кислотой, малеиновой кислотой, лимонной кислотой, янтарной кислотой, метансульфоновой кислотой, бензолсульфоновой кислотой, п-толуолсульфоновой кислотой или т.п.; соль с основной аминокислотой может представлять собой соль с аргинином, лизином, орнитином или т.п.; и соль с кислой аминокислотой может представлять собой соль с аспарагиновой кислотой, глутаминовой кислотой или т.п.

Используемый здесь термин «гидрат» относится к форме, в которой вода связана с соединением, и содержащаяся в нем вода называется кристаллизационной водой, когда гидрат представляет собой кристалл.

Иными словами, в данном изобретении нуклеиновая кислота относится к соединению нуклеиновой кислоты, ее соли или гидрату соли. В частности, нуклеиновая кислота может представлять собой любую одну или более кислот, выбранных из группы, состоящей из динатриевой соли гуанозин-5'-монофосфата (5'-ГМФ 2Na) и динатриевой соли инозин-5'-монофосфата (5'-ИМФ 2Na), которые представляют собой соль гуанозин-5'-монофосфата (5'-ГМФ) и соль инозин-5'-монофосфата (5'-ИМФ), соответственно. Более конкретно, нуклеиновая кислота может представлять собой динатриевую соль гуанозин-5'-монофосфата (5'-ГМФ 2Na), но ею не ограничена.

В частности, нуклеиновая кислота может представлять собой гидраты динатриевой соли гуанозин-5'-монофосфата (5 - ГМФ 2Na) и динатриевой соли инозин-5'-монофосфата (5'-ИМФ 2Na). В частности, нуклеиновая кислота может представлять собой гептагидрат динатриевой соли гуанозин-5'-монофосфата (5'-ГМФ 2Na 7Н₂О) или 7,5-гидрат динатриевой соли инозин-5'-монофосфата (5'-ИМФ 2Na 7,5Н₂О), но не ограничена ими.

Используемый здесь термин «гидрофильный органический растворитель» относится к органическому растворителю, проявляющему гидрофильные свойства. В частности, органический растворитель может представлять собой любой один или более растворителей, выбранных из группы, состоящей из метанола и этанола, более конкретно метанола, но не ограничен этим.

Первая стадия изобретения может конкретно включать стадию (i) добавления раствора, содержащего гидрофильный органический растворитель, к концентрату нуклеиновой кислоты; стадию (ii) охлаждения концентрата нуклеиновой кислоты, к которому добавляют раствор; стадию (iii) разделения полученной суспензии кристаллов нуклеиновой кислоты путем центрифугирования; и стадию (iv) промывания выделенных кристаллов нуклеиновой кислоты, но не ограничена этим.

В данном изобретении гидрофильный органический растворитель может быть добавлен при 1,0 RV или более и 1,5 RV или менее, в частности при 1,0 RV или более и 1,5 RV или менее, 1,1 RV или более и 1,4 RV или менее, 1,1 RV или более и 1,3 RV или менее, или 1,15 RV или более и 1,25 RV или менее по отношению к концентрату нуклеиновой кислоты, но не ограничен этим.

В данном изобретении охлаждение может быть выполнено в течение 1 часа или более и 3 часов или менее, в частности в течение 1 часа или более и 3 часов или менее, или 1,5 часа или более и 2,5 часа или менее, но не ограничено этим.

В данном изобретении охлаждение можно осуществлять при 20°С или более и 30°С или менее, в частности при 20°С или более и 30°С или менее, 22°С или более и 28°С или менее, 23°С или более и 27°С или менее, или 24°С или более и 26°С или менее, но не ограничено этим.

В данном изобретении центрифугирование может быть выполнено при 2000 об/мин или более и 3000 об/мин или менее, но не ограничено этим.

Способ очистки нуклеиновых кислот согласно изобретению включает вторую стадию сушки кристаллизованной нуклеиновой кислоты воздухом, имеющим температуру 30°С или более и 90°С или менее и относительную влажность 40% или более и 90% или менее.

Вторая стадия данного изобретения может, в частности, включать стадию (а) регулирования температуры и влажности воздуха, и стадию (b) сушки кристаллов нуклеиновой кислоты, полученных на первой стадии, воздухом с регулируемыми температурой и влажностью, но не ограничивается этим.

В данном изобретении воздух может иметь температуру 30°С или более и менее 60°С и относительную влажность 40% или более и 90% или менее. В частности, температура может составлять 30°С или более и менее 60°С, 30°С или более и 55°С или менее, 35°С или более и 55°С или менее, 35°С или более и 50°С или менее, 40°С или более и 55°С или менее, 45°С или более и 55°С или менее, 45°С или более и 55°С или менее, 45°С или более и менее 60°С, или 50°С или более и менее 60°С, и относительная влажность может составлять 40% или более и 90% или менее, 55% или более и 85% или менее, 50% или более и 80% или менее, 40% или более и 60% или менее, 45% или более и 55% или менее, или 80% или более и 90% или менее, но температура и относительная влажность не ограничены этим.

В данном изобретении воздух может иметь температуру 60°С или более и 90°С или менее и относительную влажность 70% или более и 90% или менее. В частности, температура может составлять 60°С или более и 90°С или менее, 60°С или более и 85°С или менее, 60°С или более и 80°С или менее, 65°С или более и 90°С или менее, 65°С или более и 80°С или менее, или 65°С или более и 75°С или менее, и относительная влажность воздуха может составлять 70% или более и 90% или менее, 75% или более и 90% или менее, или 80% или более и 90% или менее, но температура и относительная влажность этим не ограничены.

В данном изобретении сушка может быть выполнена в течение 2 часов или более и 7 часов или менее. В частности, время сушки может составлять 2 часа или более и 7 часов или менее, 2,5 часа или более и 6,5 часов или менее, 3 часа или более и 6 часов или менее, но не ограничено этим.

В данном изобретении способ сушки не является особенно ограниченным, если он представляет собой способ, использующий горячий воздух с высокой влажностью, а именно воздух с регулируемой температурой и влажностью. В частности, сушка может быть выполнена с использованием сушилки, способной регулировать влажность воздуха, но не ограничивается ею.

Сушилка, используемая в данном изобретении, состоит из устройства регулирования температуры и влажности и сушильной камеры (фиг.2). Горячий воздух с высокой влажностью, температуру и влажность которого регулируют устройством регулирования температуры и влажности, можно подавать в камеру сушилки, а затем могут быть введены влажные кристаллы для удаления органического растворителя и поверхностной воды в кристаллах нуклеиновой кислоты. Фиг. 2 представляет собой принципиальную схему, иллюстрирующую пример сушилки, используемой в данном изобретении.

В способе очистки нуклеиновых кислот согласно изобретению органический растворитель, оставшийся после кристаллизации нуклеиновой кислоты с использованием гидрофильного органического растворителя, может быть полностью удален путем сушки горячим воздухом с высокой влажностью. Кристаллизационная вода в нуклеиновых кислотах сохраняется и во время сушки, гидратная структура сохраняется, и агломерации кристаллов не происходит, и таким образом получают превосходный выход.

Эффекты могут проявиться только посредством сушки горячим воздухом с высокой влажностью, таким образом, существует также эффект снижения затрат, и способ очистки нуклеиновых кислот можно широко использовать для более экономичной очистки нуклеиновых кислот.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 представляет собой график, иллюстрирующий потерю кристаллизационной воды в кристаллах нуклеиновой кислоты в зависимости от температуры; и

Фиг. 2 представляет собой принципиальную схему, иллюстрирующую пример сушилки, пригодной для использования в данном изобретении.

Подробное описание изобретения

Далее конфигурация и эффекты данного изобретения описаны более подробно со ссылкой на иллюстративные воплощения. Однако эти иллюстративные воплощения предназначены только для иллюстративных целей, и объем охраны изобретения не предполагается ограничить этими иллюстративными воплощениями.

Экспериментальный пример 1

Экспериментальный пример 1-1. Кристаллизация нуклеиновой кислоты

Готовили концентрат, в котором гептагидрат динатриевой соли гуанозин-5'-монофосфата присутствовал в концентрации примерно 250 г/л. Гидрофильный органический растворитель, соответствующий 1,2 RV (относительный объем) по отношению к объему концентрата, добавляли при скорости потока 0,2 RV/ч при 38°С в течение 6 часов. Охлаждение выполняли до 25°С в течение 2 часов с момента времени, в который заканчивали подачу, и суспензию кристаллов отделяли с помощью центрифуги. В это время проводили центрифугирование со скоростью от 2000 об/мин до 3000 об/мин, в качестве промывочного раствора использовали водный раствор, содержащий гидрофильный органический растворитель в концентрации 50%, и промывали кристаллы путем распыления при 2000 об/мин. После завершения промывки получали влажные кристаллы гептагидрата динатриевой соли гуанозин-5'-монофосфата, имеющие влажность 30%.

Экспериментальный пример 1-2. Сушка кристаллизованной нуклеиновой кислоты

Горячий воздух с высокой влажностью, используемый для сушки кристаллов, контролировали с помощью устройства регулирования влажности, установленного в нижней части сушилки (фиг.2). После того, как воздух с низкой температурой нагревали до высокой температуры, для его использования регулировали влажность. После стабилизации устройством регулирования влажности горячий воздух с высокой влажностью подавали в камеру сушилки. После этого подавали влажные кристаллы, полученные в экспериментальном примере 1-1, для удаления органического растворителя и поверхностной воды, содержащихся в кристаллах нуклеиновой кислоты. За температурой и влажностью внутри сушилки наблюдали с помощью термогигрометра, установленного внутри камеры.

Экспериментальный пример 2. Анализ кристаллов

Экспериментальный пример 2-1. Анализ изменения содержания органического растворителя

Оборудование: Hewlett packard 5890 series 2

Колонка: Porapak q (Waters associates, 6FT 1/8 in (дюйм) 80/100 заполненная колонка Supelco)

Газ-носитель: водород, азот

Тип детектора: FLD

Температура термостатирующего шкафа: 140°С

Температура образца на входе: 150°С

Температура детектора: 175°С

Объем впрыска образца: 1 мкл

Чтобы проанализировать содержание органического растворителя в кристаллах, кристаллы гептагидрата динатрия гуанозин-5'-монофосфата точно взвешивали с массой 1,0000 г, помещали в мерную колбу объемом 0,01 л и разбавляли сверхчистой водой для получения образца 100 г/л. После этого готовили стандартный реагент метанола (или этанола) (J.T. Baker > 99,0%) с концентрацией 50 мг/л, этот стандартный реагент использовали в качестве внешнего стандарта, и анализировали образец методом газовой хроматографии (ГХ).

Экспериментальный пример 2-2. Анализ изменения количества кристаллизационной воды путем измерения остаточного гидрата

Для анализа остаточного содержания гидрата кристаллы гептагидрата динатрия гуанозин-5'-монофосфата точно взвешивали с массой 20 мг и помещали в термогравиметрический анализатор. После этого температуру термогравиметрического анализатора повышали с начальной температуры 25°С до 300°С со скоростью 2°С/мин для наблюдения за изменением массы. При этом в кристаллах гептагидрата динатрия гуанозин-5'-монофосфата происходит изменение массы на 23,6% в области около 200°С, это можно рассматривать как изменение массы ввиду испарения гептагидрата, и таким образом анализировали остаточное содержание гидрата.

Экспериментальный пример 2-3. Анализ изменения выхода

Чтобы проанализировать выход после сушки, потери, возникшие во время сушки, измеряли путем измерения массы мелкодисперсного порошка, собранного в рукавном фильтре, установленном на верхней части сушилки после завершения сушки.

Экспериментальный пример 3. Наблюдение за изменением количества кристаллизационной воды в зависимости от состояния температуры и влажности

Изменения количества кристаллизационной воды во влажных кристаллах гептагидрата динатрия гуанозин-5'-монофосфата при изменении условий температуры и влажности в камере сушилки наблюдали с помощью устройства регулирования влажности, установленного в нижней части сушилки.

В результате установлено, как показано в таблице 1, что содержание остаточного гидрата составляло от 12,7% до 25,2%, когда сушку проводили в условиях температуры 30°С или более и 90°С или менее и относительной влажности 40% или более и 90% или менее.

Было подтверждено, что остаточный гидрат составляет от 21,4% до 25,2%, особенно когда сушку проводили в условиях температуры 30°С или более и менее 60°С и относительной влажности 40% или более или температуры 60°С или более и 90°С или менее и относительной влажности 80% или более, и, таким образом, было подтверждено, что в вышеуказанных диапазонах присутствует значительно большее количество остаточного гидрата.

С помощью полученных результатов было установлено, что кристаллизационная вода сохраняется во время длительной обработки в сушилке, а также в условиях указанных температуры и влажности. Поскольку гидратная структура не изменяла форму в процессе сушки, так как кристаллизационная вода составляла примерно 23,6% (±2%), что является теоретическим количеством кристаллизационной воды в кристаллах гептагидрата динатриевой соли гуанозин-5'-монофосфата, подтверждено, что явление агломерации кристаллов не происходит, и нет потери выхода вследствие агломерации. Кроме того, было подтверждено, что кристалличность также является превосходной, поскольку не происходит пересушивания.

Благодаря этому было подтверждено, что кристаллизационная вода сохраняется ступенчато, и полное удаление органического растворителя возможно, когда температура и относительная влажность находятся в пределах указанных диапазонов, явление агломерации кристаллов не происходит, и отсутствует потеря выхода вследствие агломерации, так как гидратная структура не изменяет форму в процессе сушки.

Пример 1. Очистка I нуклеиновой кислоты

После того, как температуру и влажность в камере сушилки установили постоянными на уровне 35°С и 50% с помощью устройства регулирования влажности, установленного в нижней части сушилки, непрерывно вводили влажные кристаллы гептагидрата динатрия гуанозин-5'-монофосфата. В это время влажность, включая поверхностную воду и кристаллизационную воду, во влажных кристаллах составляла примерно 30%.

В результате, как представлено в таблице 2, остаточный гидрат составил 22,3%, и содержание метанола составило 0 частей на миллион (ppm), когда сушку проводили в течение 6 часов в условиях температуры 34°С и относительной влажности 48%.

Из полученных результатов было установлено, что кристаллизационная вода сохраняется ступенчато во время сушки, и полное удаление метанола возможно при указанных условиях температуры и влажности. Кроме того, подтверждено, что явление агломерации кристаллов не происходит, и нет потери выхода вследствие агломерации, поскольку гидратная структура не изменяет форму в процессе сушки.

Пример 2. Очистка II нуклеиновой кислоты

После того, как температуру и влажность в камере сушилки установили постоянными на уровне 55°С и 60% с помощью устройства регулирования влажности, установленного в нижней части сушилки, непрерывно вводили влажные кристаллы гептагидрата динатрия гуанозин-5'-монофосфата. При этом влажность, включая поверхностную воду и кристаллизационную воду, во влажных кристаллах составляла примерно 30%.

В результате, как показано в таблице 3, остаточный гидрат составлял 23%, и содержание метанола составляло 0 ppm при сушке в течение 3 часов в условиях температуры 55°С и относительной влажности 60%.

Из полученных результатов было установлено, что кристаллизационная вода сохраняется ступенчато во время сушки, и полное удаление метанола возможно при указанных условиях температуры и влажности. Кроме того, подтверждено, что явление агломерации кристаллов не происходит, и нет потери выхода вследствие агломерации, поскольку гидратная структура не изменяет форму в процессе сушки.

Пример 3. Очистка III нуклеиновой кислоты

После того, как температуру и влажность в камере сушилки установили постоянными на уровне 70°С и 80% с помощью устройства регулирования влажности, установленного в нижней части сушилки, непрерывно вводили влажные кристаллы гептагидрата динатрия гуанозин-5'-монофосфата. При этом влажность, включая поверхностную воду и кристаллизационную воду, во влажных кристаллах составляла примерно 30%.

В результате, как представлено в таблице 4, остаточный гидрат составил 23%, и содержание метанола составило 0 ррт, когда сушку проводили в течение 3 часов в условиях температуры 70°С и относительной влажности 80%.

Из полученных результатов было установлено, что кристаллизационная вода сохраняется ступенчато во время сушки, и полное удаление метанола возможно при указанных условиях температуры и влажности. Кроме того, подтверждено, что явление агломерации кристаллов не происходит, и нет потери выхода вследствие агломерации, поскольку гидратная структура не изменяет форму в процессе сушки.

Сравнительный пример 1. Очистка IV нуклеиновой кислоты

После того, как температуру (относительная влажность - неконтролируемый сухой воздух; влажность примерно 13%) в сушильной камере установили постоянной на уровне 37°С с помощью устройства регулирования влажности, установленного в нижней части сушилки, непрерывно вводили влажные кристаллы гептагидрата динатриевой соли гуанозин-5'-монофосфата. В это время влажность, включая поверхностную воду и кристаллизационную воду, во влажных кристаллах составляла примерно 30%.

В результате, как показано в таблице 5, остаточный гидрат составил 13%, и содержание метанола составило 9 ppm, когда сушку проводили в течение 3 часов в условиях температуры 37°С и неконтролируемой относительной влажности (примерно 13%).

Из этих результатов было установлено, что полное удаление метанола невозможно в указанных условиях температуры и влажности. Кроме того, было подтверждено, что кристалличность является более низкой, так как кристаллизационная вода составляет примерно 13%, и происходит потеря примерно 45% в расчете на теоретическое количество кристаллизационной воды, и качество не может быть достигнуто ввиду недостаточного количества гидрата.

Сравнительный пример 2. Очистка V нуклеиновой кислоты

После того, как температуру и влажность в камере сушилки установили постоянными на уровне 70°С и 50% с помощью устройства регулирования влажности, установленного в нижней части сушилки, непрерывно вводили влажные кристаллы гептагидрата динатрия гуанозин-5'-монофосфата. При этом влажность, включая поверхностную воду и кристаллизационную воду, во влажных кристаллах составляла примерно 30%.

В результате, как представлено в таблице 6, остаточный гидрат составлял 13%, и содержание метанола составляло 0 ppm, когда сушку проводили в течение 3 часов в условиях температуры 70°С и относительной влажности 50%.

Из результатов было установлено, что полное удаление метанола возможно при указанных условиях температуры и влажности. Однако было подтверждено, что кристалличность является более низкой, так как кристаллизационная вода составляет примерно 13%, и происходит потеря примерно 45% в расчете на теоретическое количество кристаллизационной воды, и качество не может быть достигнуто ввиду недостаточного количества гидрата.

Из результатов, описанных выше, было установлено, что кристаллизационная вода сохраняется, метанол полностью удаляют, и нет потери выхода вследствие агломерации кристаллов при поддержании диапазонов температуры и влажности согласно изобретению, а именно условий температуры 30°С или более и 90°С или менее и относительной влажности 40% или более и 90% или менее; в частности, влажность 40% или более и 90% или менее поддерживают при температуре 30°С или более и менее 60°С, и влажность 70% или более и 90% или менее поддерживают при температуре 60°С или более и 90°С или менее. Кроме того, было установлено, что кристаллизационная вода испаряется или органический растворитель не может быть полностью удален вследствие снижения влажности, когда диапазоны температуры и влажности выходят за пределы вышеуказанных диапазонов.

Основываясь на приведенном выше описании, специалистам в данной области техники понятно, что изобретение может быть реализовано в другой конкретной форме без изменения технического замысла или его существенных характеристик. Поэтому следует понимать, что приведенное выше воплощение является не ограничительным, а иллюстративным во всех аспектах. Объем охраны изобретения определяется прилагаемыми пунктами формулы изобретения, а не предшествующим им описанием, и поэтому предусмотрено, что все изменения и модификации, которые попадают в пределы и границы формулы изобретения или эквиваленты таких пределов и границ, находятся в объеме формулы изобретения.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к композиции, содержащей высококонцентрированный ингибитор альфа-1 протеиназы (A1PI), и способу ее приготовления. Способ предусматривает использование однопроходной фильтрации в тангенциальном потоке. Изобретение эффективно для лечения состояний, связанных с лечением заболеваний, связанных с дефицитом A1PI, или заболеваний, при которых полезным является повышение уровня A1PI. 4 з.п. ф-лы, 2 ил., 6 табл., 5 пр.

1. Способ очистки нуклеиновой кислоты, включающий:

первую стадию кристаллизации нуклеиновой кислоты с использованием раствора, содержащего гидрофильный органический растворитель, и

вторую стадию сушки кристаллизованной нуклеиновой кислоты воздухом, имеющим температуру 30°С или более и 90°С или менее и относительную влажность 40% или более и 90% или менее,

в котором нуклеиновая кислота включает любую одну или более кислот, выбранных из группы, состоящей из динатриевой соли гуанозин-5'-монофосфата и динатриевой соли инозин-5'-монофосфата.

2. Способ очистки нуклеиновой кислоты по п. 1, в котором нуклеиновая кислота включает гептагидрат динатриевой соли гуанозин-5'-монофосфата или 7,5-гидрат динатриевой соли инозин-5'-монофосфата.

3. Способ очистки нуклеиновой кислоты по п. 1, в котором гидрофильным органическим растворителем является любой один или более растворителей, выбранных из группы, состоящей из метанола и этанола.

4. Способ очистки нуклеиновой кислоты по п. 1, в котором воздух имеет температуру 30°С или более и менее 60°С и относительную влажность 40% или более и 90% или менее.

5. Способ очистки нуклеиновой кислоты по п. 1, в котором воздух имеет температуру 70°С или более и 90°С или менее и относительную влажность 70% или более и 90% или менее.