N-БОРНИЛ- И N-ФЕНХИЛКАРБОКСАМИДЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ РЕПЛИКАЦИИ ОРТОПОКСВИРУСОВ Российский патент 2023 года по МПК C07C233/58 C07C233/65 C07D213/82 A61P31/20 

Изобретение относится к химии и медицине, а именно к биологически активным веществам, к соединениям с формулами Ia-f и IIa-f (включая их пространственные изомеры, в том числе оптически активные формы):

где R=4-ClC₆H₄, (2R)-Ia и (2S)-Ia; R=4-BrC₆H₄, (2R)-Ib и (2S)-Ib; R=4-NO₂C₆H₄, (2R)-Ic и (2S)-Ic; R=циклогексил, (2R)-Id и (2S)-Id; R=4-CF₃C₆H₄, (2R)-Ie, R=3-пиридил, (2R)-If; R₁=4-ClC₆H₄, (2S)-IIa; R₁=4-BrC₆H₄, (2S)-IIb; R₁=4-NO₂C₆H₄, (2S)-IIc и (2R)-IIc; R₁=4-CF₃C₆H₄, (2S)-IId; R₁=4-CH₃C₆H₄, (2S)-IIe; R₁=4,4-дифторциклогексил, (2S)-IIf. Данные соединения могут использоваться в качестве ингибиторов репликации ортопоксвирусов.

Род Orthopoxvirus относится к семейству Poxviridae и включает более десяти видов, среди которых наиболее известными представителями являются вирус натуральной оспы (VARV), вирус осповакцины (VACV), вирус оспы коров (CPXV), вирус оспы обезьян (MPXV) и вирус оспы мышей (эктромелии, ECTV). Вирус натуральной оспы является возбудителем натуральной оспы, одного из наиболее опасных инфекционных заболеваний человека. Вспышки натуральной оспы происходили в течение как минимум 3000 лет, в результате чего только в 20 веке погибло более 300 миллионов человек. Вирус осповакцины также является широко известным представителем, с его помощью была проведена прививочная кампания по иммунизации населения всего мира против натуральной оспы. Другие представители рода, такие как вирус оспы обезьян и вирус оспы коров также являются патогенными для человека зоонозными инфекциями.

На сегодняшний день существует несколько наиболее перспективных групп препаратов в отношении ортопоксвирусов, химическая структура которых представлена ниже:

Цидофовир был первым нуклеотидным аналогом, одобренным FDA в 2001 году для использования в случае вспышки вируса оспы. Позднее были разработаны эфирные конъюгаты цидофовира с липидами, такие как бринцидофовир (СМХ001, 1-О-гексадецилоксипропилцидофовир). Еще одним перспективным соединением с антиортопоксвирусной активностью является низкомолекулярное соединение ST-246 (Tecovirimat, ТРОХХ®, N-(6,8-диоксо-7-азатрицикло[3.3.2.0^2,4]дец9-ен-7-ил)-4-(трифторметил) бенза-мидметил). Исследования in vitro показали, что ST-246 продемонстрировал субмикромолярное значение IC₅₀ против CPXV, VACV и ECTV. Более того, введение ST-246 животным, инфицированным ECTV, в дозе 100 мг/кг предотвращало их гибель и снижало репликацию вируса в органах [Efficacy of delayed treatment with ST-246 given orally against systemic orthopoxvirus infections in mice. Antimicrob Agents Chemother. 2007;51(2):689-695. doi:10.1128/AAC.00879-06].

Одним из наиболее близких аналогов (прототипом) к заявляемым соединениям является цидофовир. Недостатком указанного препарата является невысокая активность в отношении ортопоксвирусов, плохая пероральная биодоступность и нефротоксичность.

Задачей изобретения является создание нового класса эффективных ингибиторов репликации вирусов из рода Orthopoxvirus.

Технический результат: расширение ассортимента ингибиторов репликации ортопоксвирусов.

Поставленная задача решается новыми соединениями общими формулами Ia-f и IIa-f, обладающими выраженными свойствами ингибиторов репликации ортопоксвирусов.

где R=4-ClC₆H₄, (2R)-Ia и (2S)-Ia; R=4-BrC₆H₄, (2R)-Ib и (2S)-Ib; R=4-NO₂C₆H₄, (2R)-Ic и (2S)-Ic; R=циклогексил, (2R)-Id и (2S)-Id; R=4-CF₃C₆H₄, (2R)-Ie; R=3-пиридил, (2R)-If; R₁=4-ClC₆H₄, (2S)-IIa; R₁=4-BrC₆H₄, (2S)-IIb; R₁=4-NO₂C₆H₄, (2S)-IIc и (2R)-IIc, R₁=4-CF₃C₆H₄, (2S)-IId; R₁=4-CH₃C₆H₄, (2S)-IIe; R₁=4,4-дифторциклогексил, (2S)-IIf. Соединения общей формулы Ia-f и IIa-f, после проведения углубленных фармакологических исследований, могут использоваться, как в чистом виде, так и в качестве компонентов новых низкотоксичных высокоэффективных против ортопоксвирусов лекарственных форм.

Синтез целевых соединений Ia-f и IIa-f осуществлен согласно ниже приведенной схеме 1:

Схема 1. Реагенты и условия: (a) NH₂OH⋅HCl, NaOAc, кипячение; (б) NiCl₂, NaBH₄, МеОН, -30°С; (с) Ni/Al, NaOH, перемешивание, комнатная температура; (d) карбоновая кислота, HBTU, DIPEA, DMF, комнатная температура; (е) (1) RaNi, Н₂, EtOH; (2) NaBH₃CN, АсОН, МеОН. (R)-Экзо-борниламин 2а был получен восстановлением оксима камфоры 1а боргидридом натрия (NaBH₄) в метаноле в присутствии хлорида никеля (II) при охлаждении. (R)-Эндо-борниламин 2b был синтезирован каталитическим гидрированием оксима камфоры 1а с использованием Ni/Al сплава в щелочной среде. Фенхиламины 2c-d были получены в двухстадийном процессе восстановления оксима (-)-фенхона 2b. Сначала оксим 2b обрабатывали никелем Ренея в атмосфере водорода, а затем образовавшийся промежуточный первичный имин обрабатывали NaBH₃CN. Смесь эндо- и экзо- фенхиламинов разделяли колоночной хроматографией на силикагеле. Конденсация аминов 2a-d с карбоновыми кислотами осуществлялась с помощью реагента сшивки HBTU (2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония гексафторфосфат)

Синтезированные соединения были исследованы на противовирусную активность в отношении вируса осповакцины (штамм Copenhagen), вируса оспы коров (штамм Grishak), вируса оспы мышей - эктромелии (штамм К-1). Результаты представлены в таблицах 1-3.

Из результатов, представленных в таблицах 1-3 видно, что соединения Ia-f и IIa-f проявляют выраженную противовирусную активность в отношении вирусов осповакцины, оспы коров и оспы мышей (эктромелии) - типичных представителей ортопоксвирусов. Химиотерапевтический индекс некоторых заявленных соединений превышает таковой у препарата сравнения в 15 и более раз. Также преимуществом данных веществ является их невысокая токсичность.

Спектральные исследования выполнены в Химическом Сервисном Центре коллективного пользования СО РАН. Величины удельного вращения определяли на спектрометре PolAAr 3005. Спектры ЯМР ¹Н и ¹³С регистрировали на спектрометре Bruker AV-400 (1Н: 400.13 МГц, 13С: 100.61 МГц. В качестве внутреннего стандарта использовали остаточные сигналы растворителя - хлороформа (¹Н 7.24, ¹³С 76.90 м.д.). Масс-спектры высокого разрешения записывали на спектрометре DFS ThermoScientific в режиме полного сканирования в диапазоне m/z 0-500, ионизация электронным ударом 70 эВ при прямом вводе образца. Разделение продуктов реакций проводили с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (60-200 р., Masherey-Nagel). Хромато-масс-спектры записывали на газовом хроматографе Agilent 7890 А с квадрупольным масс-спектрометром Agilent 5975С в качестве детектора, кварцевая колонка HP-5MS 30000 0.25 мм, газ-носитель - гелий. Изобретение иллюстрируется следующими примерами:

Пример 1. Общая синтетическая методика для соединений Ia-f и IIa-f

К смеси экзо-борниламина(2а)/эндо-борниламин(2b)/экзо-фенхиламин(2с)/эндо-фенхиламин(2d) (1 экв.), HBTU (1,1 экв.) и N,N-диизопропилэтиламина (DIPEA) (1 экв.) в 5 мл ДМФА добавляли соответствующую карбоновую кислоту (1 экв.). После перемешивания в течение ночи при 23-25°С реакционную смесь выливали в воду, образовавшийся осадок отфильтровывали и промывали водой. Полученное твердое вещество сушили под вакуумом и очищали с помощью колоночной хроматографии с использованием смеси гексан-этилацетат в качестве элюента.

Пример 2. 4-Хлор-N-((1R,2R,4R)-1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил)бензамид ((2R)-Ia)

Вещество (2R)-Ia было получено по общей синтетической методике, используя 4-хлорбензойную кислоту и экзо-борниламин 2а. Выход 40%. Тпл 117.7°С. ¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 0.85 (3Н, s, Ме-8 или Ме-9), 0.88 (3Н, s, Me-10), 0.98 (3Н, s, Ме-8 или Ме-9), 1.19 (1Н, ddd, H-5_endo, ²J=12.2 Hz, ³J=9.6 Hz, ³J=4.2 Hz), 1.34 (1H, ddd, H-6_endo, ²J=12.5 Hz, ³J=9.4 Hz, ³J=4.3 Hz), 1.61 (1H, ddd, H-6_exo, ²J=12.3 Hz, ³J=11.9 Hz, ³J=4.2 Hz), 1.64-1.75 (2H, m, H-3_exo, H-5_exo), 1.78 (1H, t, H-4, ³J_4,3exo=4.2 Hz, ³J_4,5exo=4.2 Hz), 1.93 (1H, dd, H-3_endo, ²J_3exo,3endo=13.2 Hz, ³J_3exo,2endo=9.1 Hz), 4.06 (1H, ddd, H-2_endo, ³J_2endo,3endo=9.1 Hz, ³J_2endo,3exo=8.8 Hz, ³J_2endo-NH=7.1 Hz), 5.9 (1H, уш.d, NH, ³J~7.1 Hz), 7.34-7.40 (2H, m, H-14, H-14`), 7.59-7.64 (2H, d, H-13, H-13`). ¹³С-ЯМР (100 MHz, CDCl₃): 165.5 (1С, C-11), 137.3 (1С, C-15), 133.5 (1С, C-12), 128.7 (2C, C-13 и C-13`), 127.9 (2C, C-14 и C-14`), 57.2 (1С, C-2), 48.7 (1С, C-1), 47.1 (1С, C-7), 44.9 (1С, C-4), 39.1 (1С, C-3), 35.8 (1С, C-6), 26.9 (1С, C-5), 20.2 (1С, C-8 or C-9), 20.1 (1С, C-9 или C-8), 11.7 (1С, C-10). Найдено: m/z 291.1382 [M⁺] C₁₇H₂₂NOCl. Вычислено 291.1384.

Пример 3. 4-Бром-N-((1R,2R,4R)-1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил)бензамид ((2R)-Ib)

Вещество (2R)-Ib было получено по общей синтетической методике, используя 4-бромбензойную кислоту и экзо-борниламин 2а. Выход 33%. Тпл 114.2°С. ¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 0.83 (3Н, s, Ме-8 или Ме-9), 0.87 (3Н, s, Ме-10), 0.97 (3Н, s, Ме-8 или Ме-9), 1.10-1.21 (1Н, m, Н-5_endo), 1.32 (1Н, ddd, Н-6_endo, ²J=12.5 Hz, ³J=9.4 Hz, ³J=4.3 Hz), 1.51-1.78 (4H, m, H-6_exo, H-3_exo, H-5_exo, H-4), 1.91 (1H, dd, H-3_endo, ²J_3exo,3endo=13.1 Hz, ³J_3exo,2endo=9.1 Hz), 4.04 (1H, ddd, H-2_endo, ³J_2endo,3endo=9.1 Hz, ³J_2endo,3exo=8.8 Hz, ³J_2endo-NH=7.8 Hz), 6.0 (1H, уш.d, NH, ³J~7.8 Hz), 7.47-7.58 (4H, m, H-14, H-14`, H-13, Н-13`). ¹³С-ЯМР (100 MHz, CDCl₃): 165.6 (1С, C-11), 133.7 (1С, C-12), 131.6 (2C, C-14 и C-14`), 128.1 (2C, C-13 и C-13`), 125.6 (1С, C-15), 57.1 (1С, C-2), 48.7 (1С, C-l), 46.9 (1С, C-7), 44.7 (1С, C-4), 38.9 (1С, C-3), 35.7 (1С, C-6), 26.8 (1С, C-5), 20.2 (1С, C-8 или C-9), 20.1 (1С, C-9 или C-8), 11.6 (1С, C-10). Найдено: m/z 335.0877 [M+] C₁₇H₂₂ONBr. Вычислено 335.0879.

Пример 4. 4-Нитро-N-((1R,2R,4R)-1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил)бензамид ((2R)-Ic)

Вещество (2R)-Ic было получено по общей синтетической методике, используя 4-нитробензойную кислоту и экзо-борниламин 2а. Выход 60%. Тпл 136.3°С. ¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 0.86 (3Н, s, Ме-8 или Ме-9), 0.90 (3Н, s, Ме-10), 0.98 (3Н, s, Ме-8 или Ме-9), 1.20 (1Н, ddd, H-5_endo, ²J=12.2 Hz, ³J=9.6 Hz, ³J=4.2 Hz), 1.35 (1H, ddd, H-6_endo, ²J=12.5 Hz, ³J=9.4 Hz, ³J=4.3 Hz), 1.59-1.83 (4H, m, H-6_exo, H-3_exo, H-5_exo, H-4), 1.96 (1H, dd, H-3_endo, ²J_3exo,3endo=13.6 Hz, ³J_3exo,2endo=9.2 Hz), 4.09 (1H, ddd, H-2_endo, ³J_2endo,3endo=9.2 Hz, ³J_2endo,3exo=8.8 Hz, ³J_2endo-NH=8.6 Hz), 6.05 (1H, уш.d, NH, ³J~8.6 Hz), 7.80-7.87 (2H, m, H-13, H-13`), 8.23-8.29 (2H,m, H-14, Н-14`). ¹³С-ЯМР (125 MHz, CDCl₃): 164.6 (1С, С-11), 149.3 (1С, C-15), 140.6 (1С, C-12), 127.7 (2C, C-13 и C-13`), 123.8 (2C, C-14 и С-14`), 57.5 (1С, C-2), 48.8 (1С, C-1), 47.1 (1С, C-7), 44.8 (1С, C-4), 39.0 (1С, C-3), 35.7 (1С, C-6), 26.9 (1С, C-5), 20.2 (1С, C-8 или C-9), 20.1 (1С, C-9 или C-8), 11.7 (1С, C-10). Найдено: m/z 302.1629 [M+] C₁₇H₂₂O₃N₂. Вычислено 302.1625.

Пример 5. N-((lR,2R,4R)-1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил)циклогексанкарбоксамид ((2R)-Id)

Вещество (2R)-Id было получено по общей синтетической методике, используя циклогексановую кислоту и экзо-борниламин 2а. Выход 41%. Тпл 151.4°С. ¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 0.79 (3Н, s, Ме-8 или Ме-9), 0.80 (3Н, s, Ме-10), 0.88 (3Н, s, Ме-8 или Ме-9), 1.07-2.04 (18Н, m, H-5_endo, H-6_endo, Н-6_ехо, Н-3_ехо, Н-5_ехо, H-4, H-3_endo, Н-12, H-13, H-13', Н-14, Н-14', Н-15), 3.88 (1Н, ddd, Н-2_endo, ³J_2endo,3endo=9.1 Hz, ³J_2endo,3exo=8.9 Hz, ³J_2endo-NH=7.2 Hz), 5.34 (1H, уш.d, NH, ³J~7.2 Hz). ¹³С-ЯМР (100 MHz, CDCl₃): 175.0 (1С, C-11), 55.9 (1С, C-2), 48.3 (1С, C-1), 46.9 (1С, C-7), 45.6 (1С, C-12), 44.7 (1С, C-4), 39.1 (1С, C-3), 35.7 (1С, C-6), 29.9 и 29.5 (2C, C-13 и С-13`), 26.9 (1С, C-5), 25.7, 25.6 и 25.5 (3C, C-15, C-14 и С-14`), 20.2 (1С, C-8 или C-9), 20.1 (1С, C-9 или C-8), 11.5 (1С, C-10). Найдено: m/z 263.2245 [M+] C₁₇H₂₉ON. Вычислено 263.2244.

Пример 6. 4-трифторметил-N-((lR,2R,4R)-1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил)бензамид ((2R)-Ie)

Вещество (2R)-Ie было получено по общей синтетической методике, используя 4-трифторметилбензойную кислоту и экзо-борниламин 2а. Выход 30%. Тпл 89.2°С. ¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 0.85 (3Н, s, Ме-8 или Ме-9), 0.89 (3Н, s, Ме-10), 0.99 (3Н, s, Ме-8 или Ме-9), 1.15-1.22 (1Н, m, H-5_endo), 1.34 (1Н, ddd, H-6_endo, ²J=13.2 Hz, ³J=9.1 Hz, ³J=3.8 Hz), 1.56-1.74 (3H, m, H-6_exo, H-3_exo, H-5_exo), 1.79 (1H, t, H-4, ³J_4,3exo=4.2 Hz, ³J_4,5exo=4.2 Hz), 1.94 (1H, dd, H-3_endo, ²J_3exo,3endo=13.2 Hz, ³J_3exo,2endo=9.1 Hz), 4.08 (1H, ddd, H-2_endo, ³J_2endo,3endo=9.1 Hz, ³J_2endo,3exo=8.8 Hz, ³J₂endo-NH=8.6 Hz), 6.06 (1H, уш.d, NH, ³J~8.6 Hz), 7.64-7.68 (2H,m, H-14, H-14`), 7.75-7.81 (2H, m, H-13, Н-13`). ¹³С-ЯМР (125 MHz, CDCl₃): 166.9 (1С, C-11), 139.8 (1С, C-12), 134.4 (1С, C-15, q, J=32.6 Hz), 128.6 (2C, C-13 и С-13`), 127.1 (2C, C-14 и C-14`, q, J=3.7 Hz), 125.1 (1С, C-16, q, J=272.4 Hz), 58.8 (1С, C-2), 50.3 (1С, C-1), 48.6 (1С, C-7), 46.3 (1С, C-4), 40.5 (1С, C-3), 37.2 (1С, C-6), 28.4 (1С, C-5), 21.7 (1С, C-8 или C-9), 21.6 (1С, C-9 или C-8), 13.2 (1С, C-10). Найдено: m/z 325.1655 [M+] C₁₈H₂₂O₁NF₃. Вычислено 325.1648.

Пример 7. N-((1R,2R,4R)-1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил)никотинамид ((2R)-If)

Вещество (2R)-If было получено по общей синтетической методике, используя никотиновую кислоту и экзо-борниламин 2а. Выход 40%. Тпл 57.8°С. ¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 0.86 (3Н, s, Ме-8 или Ме-9), 0.90 (3Н, s, Ме-10), 0.99 (3Н, s, Ме-8 или Ме-9), 1.16-1.23 (1Н, m, H-5_endo), 1.31-1.38 (1Н, m, Н-6_endo), 1.57-1.77 (3Н, m, Н-6_ехо, H-3_exo, H-5_ехо), 1.80 (1H, t, H-4, ³J₄,_3exo=4.3 Hz, ³J₄,_5exo=4.3 Hz), 1.95 (1H, dd, H-3_endo, ²J_3exo,3endo=13.8 Hz, ³J_3exo,2endo=9.1 Hz), 4.09 (1H, ddd, H-2_endo, ³J_2endo,3endo=9.1 Hz, ³J_2endo,3exo=8.9 Hz, ³J_2endo-NH=7.9 Hz), 6.05 (1H, уш.d, NH, ³J~7.9 Hz), 7.37 (1H, ddd, H-15, J=0.6, 5.5, 8.1 Hz), 8.06 (1H, dt, H-16, J=3.9, 7.9 Hz), 8.69 (1H, dd, H-14, J=1.6, 4.8 Hz), 8.87 (1H, уш d, H-13, J=2.2 Hz). ¹³С-ЯМР (125 MHz, CDCl₃): 164.6 (1С, C-11), 151.9 (1С, C-13), 147.2 (1С, C-14), 134.9 (1С, C-16), 130.6 (1С, C-12), 123.4 (1С, C-15), 57.2 (1С, C-2), 48.7 (1С, C-1), 47.0 (1С, C-7), 44.7 (1С, C-4), 39.0 (1С, C-3), 35.7 (1С, C-6), 26.8 (1С, C-5), 20.2 (1С, C-8 или C-9), 20.0 (1С, C-9 или C-8), 11.6 (1С, C-10). Найдено: m/z 258.1731 [M+] C₁₆H₂₂ON₂. Вычислено 258.1727.

Пример 8. 4-Бромо-N-((1R,2S,4R)-1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил)бензамид ((2S)-Ia)

Вещество (2S)-Ia было получено по общей синтетической методике, используя 4-бромбензойную кислоту и эндо-борниламин 2b. Выход 30%. ¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 0.82-0.90 (1Н, m, Н-_3endo), 0.85 (3Н, s, Ме-10), 0.88 (3Н, s, Ме-9), 0.97 (3Н, s, Ме-8), 1.16-1.26 (1Н, m, Н-5_endo, 1.37-1.59 (2Н, m, H-6_ехо, Н-6_endo), 1.69 (1Н, t, H-4, J=4.2 Hz), 1.73-1.86 (1Н, m, Н-5_ехо), 2.41 (1H, dddd, Н-3_ехо, J=13.4 Hz, J=11.1 Hz, J=4.2 Hz, J=3.5 Hz), 4.41 (1H, dddd, H-2_exo, J=11.0 Hz, J=8.8 Hz, J=4.5 Hz, J=2.2 Hz), 6.09 (1H, уш.d, NH, ³J=9.1 Hz), 7.53 (2H, d, H-14, H-14`, <sup>3</sup>J=8.6 Hz), 7.61 (2H, d, H-13, H-13`, ³J=8.6 Hz). ¹³С-ЯМР (100 MHz, CDCl₃): 166.5 (1С, C-11), 133.8 (1С, C-12), 131.6 (2C, C-14 и C-14`), 128.3 (2C, C-13 и C-13`), 125.7 (1С, C-15), 54.2 (1С, C-2), 49.6 (1С, C-1), 48.1 (1С, C-7), 44.8 (1С, C-4), 37.6 (1С, C-3), 28.3 (1С, C-5), 28.0 (1С, C-6), 19.7 (1С, C-9), 18.5 (1С, C-8), 11.6 (1С, C-10). Найдено: m/z 335.0877 [M+] C₁₇H₂₂BrNO. Вычислено 335.0879.

Пример 9. 4-Нитро-N-((1R,2S,4R)-1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил)бензамид ((2S)-Ib)

Вещество (2S)-Ib было получено по общей синтетической методике, используя 4-нитробензойную кислоту и эндо-борниламин 2b. Выход 45%. ¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 0.81-0.92 (1Н, m, Н-3_endo), 0.88 (3Н, s, Ме-10), 0.91 (3Н, s, Ме-9), 0.99 (3Н, s, Ме-8), 1.19-1.26 (1Н, m, Н-5_endo), 1.44-1.57 (2Н, m, Н-6_exo, H-6_endo), 1.72 (1Н, t, H-4, J=4.4 Hz), 1.78-1.87 (1H, m, H-5_ехо), 2.45 (1Н, dddd, H-3_exo, J=13.4 Hz, J=11.1 Hz, J=4.6 Hz, J=3.5 Hz), 4.44 (1H, dddd, H-2_exo, J=11.0 Hz, J=8.8 Hz, J=4.5 Hz, J=2.2 Hz), 6.1 (1H, уш.d, NH, ³J=8.3 Hz), 7.88-7.91 (2H, m, H-13, H-13`), 8.24-8.28 (2H, m, H-14, Н-14`). ¹³С-ЯМР (150 MHz, CDCl₃): 165.5 (1С, C-11), 149.3 (1С, C-15), 140.7 (1С, C-12), 127.9 (2C, C-14 и C-14`), 124.7 (2C, C-13 и C-13`), 54.6 (1С, C-2), 49.7 (1С, C-1), 48.2 (1С, C-7), 44.8 (1С, C-4), 37.6 (1С, C-3), 28.3 (1С, C-5), 28.1 (1С, C-6), 19.7 (1С, C-9), 18.5 (1С, C-8), 13.7 (1С, C-10). Найдено: m/z 302.1629 [M+] C₁₇H₂₂N₂O₃. Вычислено 302.1625.

Пример 10. 4-Хлор-N-((1R,2S,4R)-1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил)бензамид ((2S)-Ic)

Вещество (2S)-Ic было получено по общей синтетической методике, используя 4-хлорбензойную кислоту и эндо-борниламин 2b. Выход 37%. ¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 0.83-0.93 (1Н, m, H-3_endo), 0.88 (3Н, s, Ме-10), 0.91 (3Н, s, Ме-9), 1.00 (3Н, s, Ме-8), 1.23 (1H, ddd, H-5_endo, J=12.6 Hz, J=9.4 Hz, J=4.7 Hz), 1.46 (1H, dddd, H-6_exo, J=13.6 Hz, J=12.1 Hz, J=4.8 Hz, J=2.3 Hz), 1.55 (1H, ddd, H-6_endo, J=13.7 Hz, J=9.3 Hz, J=4.5 Hz), 1.72 (1H, t, H-4, J=4.6 Hz), 1.86-1.77 (1Н, m, H-5_exo), 2.45 (1H, dddd, H-3_exo, J=13.4 Hz, J=11.1 Hz, J=4.6 Hz, J=3.5 Hz), 4.46-4.41 (1H, dddd, H-2_exo, J=11.0 Hz, J=8.8 Hz, J=4.5 Hz, J=2.2 Hz), 6.03 (1H, уш.d, NH, ³J=7.5 Hz), 7.40 (2H, d, H-14, H-14`, <sup>3</sup>J=8.5 Hz), 7.69 (2H, d, H-13, H-13`, ³J=8.5 Hz). ¹³С-ЯМР (125 MHz, CDCl₃): 166.7 (1С, C-11), 137.7 (1С, C-15), 133.8 (1С, C-12), 129.0 (2C, C-14 и С-14`), 128.4 (2C, C-13 и C-13`), 54.6 (1С, C-2), 49.9 (1С, C-1), 48.5 (1С, C-7), 45.2 (1С, C-4), 38.1 (1С, C-3), 28.6 (1С, C-5), 28.4 (1С, C-6), 20.0 (1С, C-9), 18.8 (1С, C-8), 13.9 (1С, C-10). Найдено: m/z 291.1382 [M+] C₁₇H₂₂ClNO. Вычислено 291.1384.

Пример 11. N-((1R,2S,4R)-1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил)циклогексанкарбоксамид ((2S)-Id)

Вещество (2S)-Id было получено по общей синтетической методике, используя циклогексановую кислоту и экзо-борниламин 2b. Выход 32%. ¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 0.66-0.74 (1Н, m, H-3_endo), 0.76 (3Н, s, Ме-10), 0.84 (3Н, s, Ме-9), 0.91 (3Н, s, Ме-8), 1.08-1.88 (15Н, m, H-5_endo, U-6_endo, H-5_ехо, H-4, H-6_exo, Н-13, Н-13`, Н-14, Н-14`, Н-15), 1.98-2.12 (1Н, m, Н-12), 2.24-2.38 (1H, m, Н-3_ехо), 4.16-4.27 (1Н, m, H-_2ехо), 5.42 (1Н, уш.d, NH, ³J=8.2 Hz). ¹³С-ЯМР (150 MHz, CDCl₃): 175.9 (1С, C-11), 52.9 (1С, C-2), 49.3 (1С, C-1), 48.0 (1С, C-7), 45.7 (1С, C-4), 44.8 (1С, C-12), 37.7 (1С, C-3), 30.1 и 29.5 (2C, C-13 и C-13`), 28.3 (1С, C-5), 27.9 (1С, C-6), 25.7, 25.6, 25.5 (3C, C-15, C-13 и C-13`), 19.7 (1С, C-9), 18.5 (1С, C-8), 13.5 (1С, C-10). Найдено: m/z 291.1386 [M+] C₁₇H₂₂NOCl. Вычислено 291.1384.

Пример 12. 4-Хлор-N-((1R,2S,4S)-1,3,3-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил)бензамид ((2S)-IIa)

Вещество (2S)-IIa было получено по общей синтетической методике, используя 4-хлорбензойную кислоту и экзо-фенхиламин 2с. Выход 53%). Тпл 119-121°С. ¹Н-ЯМР (300 MHz, CDCl₃) δ: 0.90 (3Н, s, Ме-9), 1.04 (3Н, s, Ме-10), 1.11-1.18 (4Н, m, Н-7_endo, Ме-8), 1.35-1.57 (4Н, m, Н-7_exo, Н-5_endo, Н-5_exo, H-6_ехо), 1.65-1.79 (2Н, m, H-4, H-6_endo), 3.60 (1Н, dd, Н-2, J=9.7, 1.1 Hz), 5.90 (1Н, d, N-H, J=9.0 Hz), 7.37 (2H, d, H-14, H-14', J=8.5 Hz), 7.61-7.72 (2H, m, H-13, H-13', J=8.5 Hz). ¹³С-ЯМР (101 MHz, CDCl₃) δ: 166.06 (1С, C-11), 137.29 (1С, C-15), 133.45 (1С, C-12), 128.71 (2C, C-13, C-13'), 128.04 (2C, C-14, C-14'), 65.07 (1С, C-2), 48.22 (1С, C-4), 48.05 (1С, C-1), 43.34 (1С, C-3), 42.12 (1С, C-7), 35.35 (1С, C-6), 26.72 (1С, C-8), 25.37 (1С, C-5), 24.26 (1С, C-9), 17.75 (1С, C-10). Найдено: m/z 291.1382 [M+] C₁₇H₂₂ClNO. Вычислено 291.1384.

Пример 13. 4-Бром-N-((1R,2S,4S)-1,3,3-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил)бензамид ((2S)-IIb)

Вещество (2S)-IIb было получено по общей синтетической методике, используя 4-бромбензойную кислоту и экзо-фенхиламин 2с. Выход 50%. Тпл 149.2°С. ¹Н-ЯМР (400 MHz, CDCl₃) δ: 0.91 (3Н, s, Ме-9), 1.04 (3Н, s, Ме-10), 1.14 (3Н, s, Ме-8), 1.16-1.26 (1Н, m, H-7_endo), 1.36-1.55 (4Н, m, Н-7_exo, Н-5_endo, Н-5_exo, H-6_ехо), 1.69-1.78 (2Н, m, Н-4, Н-6_endo), 3.61 (1Н, dd, Н-2, J=9.7, 1.4), 5.84 (1Н, d, H-N, J=8.5), 7.53-7.62 (4Н, m, H-13, Н-13', Н-14, Н-14'). ¹³С-ЯМР (101 MHz, CDCl₃) δ: 166.2 (1С, С-11), 133.9 (1С, С-12), 131.7 (2С, С-14, С-14'), 128.2 (2С, C-13, С-13'), 125.7 (1С, С-15), 65.1 (1С, С-2), 48.3 (1С, С-4), 48.1 (1С, С-1), 43.4 (1С, С-3), 42.2 (1С, С-7), 35.4 (1С, С-6), 26.7 (1С, С-8), 25.4 (1С, С-5), 24.3 (1С, С-9), 17.8 (1С, С-10). Найдено: m/z 335.0877 [М+] C₁₇H₂₂BrNO. Вычислено 335.0879.

Пример 14. 4-Нитро-N-((1R,2S,4S)-1,3,3-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил)бензамид ((2S)-IIc)

Вещество (2S)-IIc было получено по общей синтетической методике, используя 4-нитробензойную кислоту и экзо-фенхиламин 2с. Выход 52%. Тпл 148.0°С. ¹Н-ЯМР (400 MHz, CDCl₃) δ: 0.92 (3Н, s, Ме-9), 1.05 (3Н, s, Ме-10), 1.12-1.16 (3Н, m, Ме-8), 1.17-1.23 (1Н, m, H-7_endo), 1.36-1.55 (4Н, m, Н-7_ехо, H-5_endo, H-5_ехо, Н-6_ехо), 1.71-1.77 (2Н, m, Н-4, Н-6_endo), 3.62 (1Н, dd, Н-2, J=9.7, 1.7), 6.01 (1Н, d, N-H, J=9.3), 7.84-7.89 (2Н, m, Н-13, Н-13'), 8.22-8.27 (2Н, m, Н-14, Н-14'). ¹³С-ЯМР (101 MHz, CDCl₃) δ: 165.2 (1С, C-11), 149.3 (1С, C-15), 140.8 (1С, C-12), 127.8 (2C, C-13, C-13'), 123.7 (2C, C-14, C-14'), 65.4 (1С, C-2), 48.2 (1С, C-4), 48.1 (1С, C-1), 43.4 (1С, C-3), 42.1 (1С, C-7), 35.3 (1С, C-6), 26.7 (1С, C-8), 25.3 (1С, C-5), 24.2 (1С, C-9), 17.7 (1С, C-10). Найдено: m/z 302.1623 [M+] C₁₇H₂₂N₂O₃. Вычислено 302.1625.

Пример 15. 4-(Трифторметил)-N-((1R,2S,4S)-1,3,3-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил)бензамид ((2S)-IId)

Вещество (2S)-IId было получено по общей синтетической методике, используя 4-трифторметилбензойную кислоту и экзо-фенхиламин 2с. Выход 52%. Тпл 145.7°С. ¹Н-ЯМР (300 MHz, CDCl₃) δ: 0.92 (3Н, s, Ме-9), 1.05 (3Н, s, Ме-10), 1.14 (3Н, s, Ме-8), 1.18 (1H, s, H-7_endo), 1.33-1.61 (4Н, m, H-7_ехо, Н-5_endo, Н-5_ехо, Н-6_exo), 1.68-1.81 (2Н, m, Н-4, H-6_endo), 3.62 (1H, dd, Н-2, J=9.7, 1.4), 5.98 (1Н, d, N-H, J=9.1), 7.66 (2Н, d, J=8.3, Н-13, Н-13'), 7.82 (2Н, d, J=8.1, Н-14, Н-14'). ¹³С-ЯМР (126 MHz, CDCl₃) δ: 165.9 (1С, С-11), 138.4 (1С, С-12), 132.8 (1С, C-15, q, J=32.6 Hz), 127.1 (2С, C-13, С-13'), 125.5 (q, C-14, С-14', J=3.6 Hz), 123.5 (q, CF₃, J=272.6 Hz), 65.2 (1С, C-2), 48.2 (1С, C-4), 48.0 (1С, C-1), 43.4 (1С, C-3), 42.1 (1С, C-7), 35.3 (1С, C-6), 26.7 (1С, C-8), 25.4 (1С, C-5), 24.2 (1С, C-9), 17.7 (1С, C-10). Найдено: m/z 325.1647 [M+] C₁₈H₂₂F₃NO. Вычислено 325.1648.

Пример 16. 4-Метил-N-((1R,2S,4S)-1,3,3-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил)бензамид ((2S)-IIe)

Вещество (2S)-IIe было получено по общей синтетической методике, используя 4-метилбензойную кислоту и экзо-фенхиламин 2с. Выход 52%. Тпл 147.4°С. ¹Н-ЯМР (300 MHz, CDCl₃) δ: 0.91 (3Н, s, Ме-9), 1.04 (3Н, s, Ме-10), 1.11-1.18 (4Н, m, Н-7_endo, Ме-8), 1.34-1.58 (4Н, m, H-5_endo, Н-5_ехо, Н-6_ехо), 1.66-1.79 (2Н, m, Н-4, Н-6_endo), 2.37 (3Н, s, ArCH₃), 3.58-3.66 (1Н, m, Н-2), 5.90 (1Н, d, J=9.0, H-N), 7.20 (2Н, d, J=7.9, H-13, H-13'), 7.63 (2H, d, J=8.1, H-14, H-14'). ¹³С-ЯМР (101 MHz, CDCl₃) δ: 167.0 (1С, C-11), 141.4 (1С, C-15), 132.2 (1С, C-12), 129.1 (2C, C-14, C-14'), 126.6 (2C, C-13, C-13'), 64.8 (1С, C-2), 48.2 (1С, C-4), 48.0 (1С, C-1), 43.3 (1С, C-3), 42.1 (1С, C-7), 35.4 (1С, C-6), 26.7 (1С, C-8), 25.4 (1С, C-5), 24.3 (1С, C-9), 21.3 (ArCH₃), 17.7 (1С, C-10). Найдено: m/z 271.1929 [M+] C₁₈H₂₅NO. Вычислено 271.1931.

Пример 17. 4,4-Дифтор-N-((1R,2S,4S)-1,3,3-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил) циклогексанкарбоксамид ((2S)-IIf)

Вещество (2S)-IIf было получено по общей синтетической методике, используя 4,4-дифторциклогексановую кислоту и экзо-фенхиламин 2с. Выход 31%. Тпл 179.8°С. ¹Н-ЯМР (300 MHz, CDCl₃) δ: 0.81 (3Н, s, Ме-9), 0.95 (3Н, s, Ме-10), 1.06-1.10 (4Н, m, H-7_emdo, Ме-8), 1.25-1.48 (4Н, m, H-7_ехо, H-5_endo, Н-5_ехо, H-6_exo), 1.60-1.98 (8Н, m, Н-4, H-6_endo, Н-13_eq, Н-13'_eq, Н-14_eq, Н-14_ax, H-14'_eq, Н-14'_ax), 2.05-2.29 (3Н, m, Н-12, Н-13_ax, Н-13'_ax), 3.39 (1Н, dd, Н-2, J=9.7, 1.6 Hz), 5.30 (1Н, d, N-H, J=9.1 Hz). ¹³С-ЯМР (75 MHz, CDCl₃) δ: 173.4 (1С, C-11), 122.5 (t, C-15, J=240.8 Hz), 64.3 (1С, C-2), 48.1 (1С, C-4), 47.6 (1С, C-1), 43.0 (1С, C-12), 42.9 (1С, C-3), 42.0 (1С, C-7), 35.4 (1С, C-6), 32.8 (t, C-14, C-14', J=24.9 Hz), 26.6 (1С, C-8), 26.1 (d, C-13, C-13', J=8.8 Hz), 25.4 (1С, C-5), 24.2 (1С, C-9), 17.6 (1С, C-10). Найдено: m/z 299.2053 [M+] C₁₇H₂₇F₂NO. Вычислено 299.2055.

Пример 18. 4-Нитро-N-((1R,2R,4S)-1,3,3-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил)бензамид ((2R)-IIc)

Вещество (2R)-IIc было получено по общей синтетической методике, используя 4-нитробензойную кислоту и эндо-фенхиламин 2d. Выход 80%. Тпл 114.6°С. ¹Н-ЯМР (500 MHz, CDCl₃) δ: 0.84 (3Н, s, Ме-8), 1.08 (3Н, s, Ме-10), 1.16 (3Н, s, Ме-9), 1.19-1.33 (3Н, m, Н-6_ехо, Н-7_exo, Н-7_endo), 1.46-1.53 (1Н, m, Н-5_exo), 1.65-1.73 (2Н, m, Н-5_endo, Н-6_endo), 1.78-1.81 (1Н, m, Н-4), 3.80 (1Н, dd, Н-2, J=9.3, 1.8 Hz), 6.13 (1Н, d, H-N, J=8.7 Hz), 7.86-7.89 (2H, m, H-13, H-13'), 8.23-8.27 (2H, m, H-14, H-14'). ¹³С-ЯМР (126 MHz, CDCl₃) δ: 166.0 (1С, C-11), 149.3 (1С, C-15), 140.7 (1С, C-12), 127.8 (2C, C-13, C-13'), 123.7 (2C, C-14, C-14'), 64.0 (1С, C-2), 48.5 (1С, C-1), 47.9 (1С, C-4), 42.5 (1С, C-6), 39.4 (1С, C-3), 30.7 (1C, C-9), 27.2 (1С, C-7), 25.8 (1С, C-5), 21.0 (1С, C-8), 19.5 (1С, C-10). Найдено: m/z 302.1629 [M+] C₁₇H₂₂N₂O₃. Вычислено 302.1625.

Пример 19. Определение противовирусного действия соединений Ia-f и IIa-f в отношении вирусов осповакцины, оспы коров и оспы мышей в культуре клеток Vero

Противовирусную активность препаратов оценивали по адаптированной и модифицированной нами методике [Селиванов Б.А., Тихонов А.Я., Беланов Е.Ф., Бормотов Н.И., и др. Химико-фармацевтический журнал. (2017) 51(6), 13-17]. В экспериментах использовали полученные из Коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора ортопоксвирусы: вирус осповакцины (VACV, штамм Copenhagen), вирус оспы коров (CPXV, штамм Grishak) и вирус оспы мышей - эктромелии (ECTV, штамм К-1). Вирусы нарабатывали в культуре клеток Vero. Концентрацию (титр) вирусов в культуральной жидкости определяли путем титрования методом бляшкообразования в чувствительной культуре клеток Vero, рассчитывали и выражали в десятичных логарифмах бляшкообразующих единиц в 1 мл (lg БОЕ/мл). Титр вируса в используемых в работе образцах составлял от 4,8 до 5,5 lg БОЕ/мл. Токсичность соединений определяли по гибели клеток Vero, вызванной ими в лунках планшета, в которые вирус не был введен. Монослои клеток в лунках планшета использовали в качестве контролей, в которые вводили вирус без соединений (контроль вируса) и монослои клеток в лунках, в которые не вводили ни вирус, ни соединение (контроль клеточной культуры). После инкубации в течение 4 суток монослой клеток окрашивали витальным красителем - нейтральным красным в течение 2 часов. После удаления красителя и промывки лунок от его несвязанной фракции добавляли буфер для лизиса клеток. Количество красителя, адсорбированного живыми клетками монослоя, оценивали по оптической плотности (ОП) раствора, которая является показателем количества клеток, неразрушенных под влиянием вируса или препарата в монослое. ОП измеряли на спектрофотометре Emax (Molecular Devices, США) при длине волны 490 нм. Результаты обрабатывали с помощью программы Soft Max Pro 4.0, которая рассчитывала 50%-ную цитотоксическую концентрацию (СС₅₀ в мкМ) и 50%-ную вирусингибирующую концентрацию (IC₅₀ в мкМ). Индекс селективности (SI) определяли как SI=СС₅₀/IC₅₀ с использованием соответствующих концентраций. В качестве положительного контроля использовался коммерчески доступный препарат Cidofovir (Heritage Consumer Products, LLC, США).

Изобретение относится к области химии и медицины, конкретно к применению соединений N-борнил- и N-фенхилкарбоксамидов общей формулы Ia-f и IIa-f, включая их пространственные изомеры, в том числе оптически активные формы, в качестве ингибиторов репликации ортопоксвирусов. В формулах Ia-f и IIa-f R=4-ClC₆H₄, (2R)-Ia и (2S)-Ia; R=4-BrC₆H₄, (2R)-Ib и (2S)-Ib; R=4-NO₂C₆H₄, (2R)-Ic и (2S)-Ic; R=циклогексил, (2R)-Id и (2S)-Id; R=4-CF₃C₆H₄, (2R)-Ie; R=3-пиридил, (2R)-If; R₁=4-ClC₆H₄, (2S)-IIa; R₁=4-BrC₆H₄, (2S)-IIb; R₁=4-NO₂C₆H₄, (2S)-IIc и (2R)-IIc; R₁=4-CF₃C₆H₄, (2S)-IId; R₁=4-CH₃C₆H₄, (2S)-IIe; R₁=4,4-дифторциклогексил, (2S)-IIf. 3 табл., 19 пр.

Применение соединений N-борнил- и N-фенхилкарбоксамидов общей формулы Ia-f и IIa-f, включая их пространственные изомеры, в том числе оптически активные формы,

,

где R=4-ClC₆H₄, (2R)-Ia и (2S)-Ia; R=4-BrC₆H₄, (2R)-Ib и (2S)-Ib; R=4-NO₂C₆H₄, (2R)-Ic и (2S)-Ic; R=циклогексил, (2R)-Id и (2S)-Id; R=4-CF₃C₆H₄, (2R)-Ie; R=3-пиридил, (2R)-If; R₁=4-ClC₆H₄, (2S)-IIa; R₁=4-BrC₆H₄, (2S)-IIb; R₁=4-NO₂C₆H₄, (2S)-IIc и (2R)-IIc; R₁=4-CF₃C₆H₄, (2S)-IId; R₁=4-CH₃C₆H₄, (2S)-IIe; R₁=4,4-дифторциклогексил, (2S)-IIf, в качестве ингибиторов репликации ортопоксвирусов.