[N'-(Изо)хинолилметилен]гидразиды 3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты Российский патент 2023 года по МПК C07D215/12 C07D215/14 C07D215/18 C07D215/20 C07D215/22 C07D215/227 C07D215/26 C07D217/16 A61P35/00 

Изобретение относится к новым неописанным биологически активным соединениям, конкретно, новым [N'-(изо)хинолилметилен]гидразидам 3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты общей формулы:

R₁ и R₂ = Н, Me, ОМе, Cl или F.

Предлагаемые соединения общей формулы I обладают антипролиферативной активностью в отношении эстрогензависимых клеток рака молочной железы MCF-7 и могут найти применение в медицине, ветеринарии, химико-фармацевтической промышленности и в биотехнологиях. Рак, неконтролируемое, быстрое и патологическое размножение аномальных клеток, является одной из основных проблем здравоохранения во всем мире. По данным ВОЗ, ведущим онкологическим заболеванием у женщин является рак молочной железы. Однако применяемое в настоящее время лечение бывает не всегда эффективным [V. Wadhwa, N. Patel, D. Grover, F.S. Ali, N. Thosani, Interventional gastroenterology in oncology, CA Cancer J Clin. 2022, 1-34; R.L. Siegel, K.D. Miller, H.E. Fuchs, A. Jemal, Cancer Statistics, 2021, CA Cancer J Clin. 2021, 71, 7-33].

Большое значение для лечения гормонозависимых онкологических заболеваний женщин имеют химиотерапевтические препараты стероидной структуры. Они образуют уникальную группу в семействе противоопухолевых средств. В повседневной клинической практике применяют стероидные препараты, такие как фулвестрант формулы:

сульфамат эстрона (ЕМАТЕ) формулы: экземестан формулы:

[R. Minorics, I. Zupko, Steroidal Anticancer Agents: An Overview of Estradiol-related Compounds, Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry 2018, 18, 652-666; A. Belosay, A.M.H. Brodie, V.C.O. Njar, Effects of Novel Retinoic Acid Metabolism Blocking Agent (VN/14-1) on Letrozole-Insensitive Breast Cancer Cells, Cancer Res. 2006, 66 (23), 11485-11493].

Однако высокая токсичность доступных в настоящее время лекарств для нормальных клеток и резистентность опухолевых клеток к лекарственным средствам приводит к ограничению области их применения и низкому терапевтическому эффекту. В связи с этим актуальной задачей является расширение арсенала противоопухолевых препаратов [Е. Frei, A. Elias, С. Wheeler, P. Richardson, W. Hryniuk, The relationship between high-dose treatment and combination chemotherapy: the concept of summation dose intensity, Clin. Cancer Res. 1998, 4, 2027-2037; M.M. Gottesman, Mechanisms of cancer drug resistance, Annu Rev. Med. 2002, 53, 615-627; P.A. Clarke, T. Roe, K. Swabey, S.M. Hobbs, C. McAndrew, K. Tomlin, I. Westwood, R. Burke, R. van Montfort, P. Workman, Dissecting mechanisms of resistance to targeted drug combination therapy in human colorectal cancer, Oncogene 2019, 38, 5076-5090]. Одним из недостатков вышеуказанных известных лекарственных средств является наличие у них неселективной активности, в частности, реализуемой за счет их взаимодействия с рядом ферментов и рецепторов в нормальных тканях пациента. Такие взаимодействия приводят к нежелательным побочным эффектам, иногда приводящим к коррекции дозы или отмене терапии выбранным препаратом. В опухолевых клетках стероидные препараты также могут активировать пути, поддерживающие пролиферацию. Например, ингибитор ароматазы экземестан может активировать в клетках рака молочной железы сигнальные пути рецептора андрогенов, что может быть одной из причин развития рецидива заболевания.

В связи с этим перспективными противоопухолевыми агентами являются производные секостероидов - полусинтетические природные стероиды, у которых отсутствует одно из четырех колец стероидного каркаса и для которых в силу их химического строения характерно отсутствие заметного гормонального (агонистического) эффекта [R. Minorics, N. Bózsity, J. Molnár, J. Wölfling, E. Mernyák, G. Schneider. I. Ocsovszki, I. Zupkó, A molecular understanding of D-homoestrone-induced G2/M cell cycle arrest in HeLa human cervical carcinoma cells, J. Cell. Mol. Med. 2015, 19(10), 23652374; E. Frank, G. Schneider, Synthesis of sex hormone-derived modified steroids possessing antiproliferative activity, J. Steroid Biochem. Mol. Biol., 2013, 137, 301-315; J. Huber, J. Wölfling, G. Schneider, I. Ocsovszki, M. Varga, I. Zupkó, E. Mernyák, Synthesis of antiproliferative 13α-d-homoestrones via Lewis acid-promoted one-pot Prins-Ritter reactions of d-secosteroidal δ-alkenyl-aldehydes, Steroids, 2015, 102, 76-84].

Ранее в литературе были описаны соединения общей формулы:

где

R₃ = Н, Me, NO₂ близкие по структуре к заявленным соединениям общей формулы I [J. Szabó, I. Bacsa, J. Wölfling, G. Schneider, I. Zupkó, M. Varga, B.E. Herman, L. Kalmár, M. Szécsi, E. Mernyák, Synthesis and in vitro pharmacological evaluation of N-[(1-benzyl-1,2,3-triazol-4-yl) methyl]-carboxamides on d-secoestrone scaffolds, J. Enzyme Inhib. Med. Chem. 2016, 31, 574-579]. Эти бензил- и п-бензилзамещенные триазолы D-секоэстрона общей структурной формулы II проявили умеренные по активности антипролиферативные свойства в отношении клеток рака молочной железы MCF-7.

Наиболее близкими по структуре и свойствам к заявленным соединениям общей формулы I являются [N'-(гетеро)арилметилен]гидразиды 13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты общей структурной формулы:

где

R₄ = арил или гетероарил [A.I. Ilovaisky, V.M. Merkulova, E.I. Chernoburova, M.A. Shchetinina, D.I. Salnikova, A.M. Scherbakov, I.V. Zavarzin, A.O. Terent'ev, Secosteroidal hydrazides: Promising scaffolds for anti-breast cancer agents, J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2021, 214, 106000].

Известные соединения общей формулы III проявляют антипролиферативные свойства в отношении клеток рака молочной железы MCF-7. Значения IC₅₀ (IC₅₀ - концентрация, ингибирующая рост клеток на 50% по сравнению с контролем) в отношении клеток рака молочной железы MCF-7 для ведущих секостероидов общей формулы III, где R₄ = 4-нитрофенил (3l) составил 2.2±0.2, R₄ = 4-хлорфенил (3d) составил 2.9±0.3 и R₄ = 3-(м-толил)-1Н-пиразол-4-ил (3q) составил 3±0.3 мкМ, т.е. находятся в интервале 2.2-3 мкМ, при этом 50% нормальных эпителиальных клеток MCF-10A погибало при концентрациях соединений 6.7, 9.1 и 7.6 мкМ. Таким образом, индекс селективности (ИС), рассчитанный как отношение значений IC₅₀ для MCF-10A к значениям IC₅₀ для MCF-7, для 3l составляет - 3.0, для 3d - 3.1, для 3q - 2.5, т.е. находится в интервале от 2.5 до 3.1. Общей задачей предлагаемого изобретения является создание секостероидов, которые не уступают по антипролиферативным характеристикам секостероидам формулы III и превосходят их по ИС не менее чем на 45%. Ожидается, что увеличение ИС приведет к созданию антипролиферативных средств с улучшенным фармакологическим профилем.

Технической задачей предлагаемого изобретения является расширение ассортимента секостероидных соединений, обладающих высокими антипролиферативной активностью и селективностью в отношении клеток рака молочной железы MCF-7 при приемлемой растворимости в воде. Поставленная техническая задача достигается новыми [N'-(изо)хинолилметилен]гидразидами 3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты общей формулы:

R₁ и R₂ = H, Me, OMe, Cl или F.

Предлагаемые соединения общей формулы I являются новыми, неописанными ранее в литературе, и отличаются от известных соединений тем, что они содержат остаток хинолина или изохинолина - бициклических гетероциклов, содержащих атом азота.

Предлагаемые соединения общей формулы I обладают высокой антипролиферативной активностью в отношении клеток рака молочной железы MCF-7.

Предлагаемые соединения получают путем взаимодействия гидразида 13α- или 13β-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты с замещенными хинолинкарбальдегидами или изохинолин-5-карбальдегидом общей структурной формулы RCHO, где R имеет вышеуказанные значения, в среде этанола при кипячении. Выход полученных соединений составляет 70-89%.

Процесс протекает по следующей схеме:

R₁ и R₂ = Н, Me, OMe, Cl или F.

Расположение заместителей (метильной группы и гидроксильной группы) в 13 положении стероидного скелета может быть различным: 13α-ОН/β-СН₃ или 13α-СН₃/β-ОН.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами, не ограничивающими его объем.

Пример 1.

К раствору гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (0.332 г, 1 ммоль) в этаноле (7 мл) прибавили хинолин-3-карбальдегид (173 мг, 1,1 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь кипятили в течение 4 часов и затем охлаждали до комнатной температуры. По окончании реакции растворитель упаривали, остаток очищали колоночной хроматографией: элюент - смесь: петролейный эфир-этилацетат (3:1). Получили 401 мг (85%) [N'-хинолин-3-илметилен]гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (Ia), чистота 98% (по ЯМР). Т.пл. 222-224°С, + 78.2 (с 1, ДМСО). ¹Н ЯМР (300 MHz, ДМСО-d₆) δ 1.01 (с, 3Н, Н-18), 1.11-1.66 (м, 6Н), 1.72-1.82 (м, 1Н), 1.92-2.43 (м, 5Н), 2.67-2.87 (м, 3Н), 3.68 (с, 3Н, ОМе), 4.34 (с, 0.6Н, ОН), 4.36 (с, 0.4Н, ОН), 6.56 (д, J=2.8 Гц, 0.6Н, Н-4), 6.60 (д, J=2.8 Гц, 0.4Н, Н-4), 6.66 (дд, J=8.6, 2.8 Гц, 1Н, Н-2), 7.16 (д, J=8.6 Гц, 1Н, Н-1), 7.64 (т, J=7.6 Гц, 1Н), 7.79 (т, J=7.7 Гц, 1Н), 7.99-8.09 (м, 2Н), 8.20 (с, 0.6Н, CH=N), 8.40 (с, 0.4Н, CH=N), 8.51 (д, J=1.8 Гц, 0.6Н), 8.56 (д, J=1.8 Гц, 0.4Н), 9.25 (д, J=1.8 Гц, 0.4Н), 9.29 (д, J=1.8 Гц, 0.6Н), 11.44 (с, 0.6Н, NH), 11.63 (с, 0.4Н, NH). ¹³С ЯМР (75 MHz, ДМСО-d₆) δ 21.04, 21.15, 23.00, 23.21, 26.99, 28.22, 28.28, 30.00, 33.99, 35.73, 42.36, 42.42, 42.79, 42.82, 43.00, 43.10, 51.59, 51.78, 54.81, 71.56, 71.60, 111.61, 112.99, 126.40, 127.25, 127.28, 127.50, 127.61, 128.42, 128.52, 128.79, 128.83, 130.12, 130.22, 131.90, 134.29, 134.39, 137.29, 140.19, 143.33, 147.60, 147.73, 148.02, 148.28, 157.03, 169.26, 175.12. Масс-спектр высокого разрешения (ESI) для [C₂₉H₃₄N₃O₃]⁺ [М+Н]⁺: вычислено 472.2595, найдено: 472.2592. Элементный анализ; вычислено для C₂₉H₃₃N₃O₃ (%): С, 73.86; Н, 7.05. Найдено для (%): С, 73.72; Н, 7.19.

Пример 2.

Аналогично из 0.332 г гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты и 173 мг хинолин-5-карбальдегида получено 401 мг (83%) [N'-хинолин-5-илметилен]гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (Ib), чистота 98% (по ЯМР). Т.пл. 191-193°С, + 67.5 (с 1, EtOH). ¹Н ЯМР (300 MHz, ДМСО-d₆) δ 1.00 (с, 1.8Н, Н-18), 1.02 (с, 1.2Н, Н-18), 1.09-1.67 (м, 6Н), 1.70-1.82 (м, 1Н), 1.93-2.45 (м, 5Н), 2.64-2.91 (м, 3Н), 3.67 (с, 3Н, ОМе), 4.38 (с, 0.6Н, ОН), 4.41-4.58 (ушир. с, 0.4Н, ОН), 6.56 (д, J=2.8 Hz, 0.6Н, Н-4), 6.60 (д, J=2.8 Hz, 0.4Н, Н-4), 6.66 (дд, J=8.7, 2.8 Hz, 1Н, Н-2), 7.16 (д, J=8.7 Hz, 1Н, H-1), 7.62 (дд, J=8.8, 4.4 Hz, 0.6H, H-3'), 7.65 (дд, J=8.8, 4.4 Hz, 0.4H, H-3'), 7.79-7.86 (м, 1Н), 7.88-7.95 (м, 1Н), 8.07 (д, J=8.1 Hz, 1H), 8.62 (с, 0.6H, CH=N), 8.75 (с, 0.4H, CH=N), 8.93-8.97 (м, 1H, H-2'), 9.10 (д, J=8.8 Hz, 0.6H, H-4'), 9.37 (д, J=8.8 Hz, 0.4H, Н-4'), 11.35 (с, 0.6H, NH), 11.70 (с, 0.4H, NH). ¹³C ЯМР (75 MHz, ДМСО-d₆) δ 21.18, 21.23, 23.00, 23.38, 27.10, 28.37, 30.07, 34.04, 35.86, 42.42, 42.50, 42.90, 43.17, 51.66, 51.87, 54.93, 71.71, 71.77, 111.74, 113.09, 122.31, 125.30, 125.36, 126.55, 127.51, 128.67, 129.15, 129.19, 130.39, 130.43, 130.92, 131.15, 132.00, 132.62, 133.33, 137.40, 137.44, 141.77, 145.42, 148.06, 150.75, 157.13, 169.42, 175.11. Масс-спектр высокого разрешения (ESI) для [C₂₉H₃₄N₃O₃]⁺ [М+Н]⁺: вычислено 472.2595, найдено: 472.2587. Элементный анализ; вычислено для C₂₉H₃₃N₃O₃ (%): С, 73.86; Н, 7.05; N, 8.91. Найдено для (%): С, 73.64; Н, 7.27; N, 8.78..

Пример 3.

Аналогично из 0.332 г гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты и 173 мг хинолин-6-карбальдегида получено 377 мг (80%) [N'-хинолин-6-илметилен]гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (Ic), чистота 98% (по ЯМР). Т.пл. 149-151°С, + 65.6 (с 1, ДМСО). ¹Н ЯМР (300 MHz, ДМСО-d₆) δ 1.01 (с, 3Н, Н-18), 1.12-1.66 (м, 6Н), 1.71-1.81 (м, 1Н), 1.90-2.43 (м, 5Н), 2.64-2.89 (м, 3Н), 3.68 (с, 3Н, ОМе), 4.35 (с, 0.6Н, ОН), 4.39 (с, 0.4Н, ОН), 6.60 (д, J=2.8 Hz, 1Н, Н-4), 6.66 (дд, J=8.6, 2.8 Hz, 1Н, H-2), 7.18 (д, J=8.6 Hz, 1H, H-1), 7.56 (дд, J=8.3, 4.1 Hz, 1H), 8.00-8.08 (м, 1H), 8.10-8.24 (м, 2.6H), 8.36-8.46 (м, 1.4H), 8.91 (д, J=4.1 Hz, 1H), 11.38 (c, 0.6H, NH), 11.63 (c, 0.4H, NH). ¹³С ЯМР (75 MHz, ДМСО-d₆) δ 21.05, 21.16, 23.02, 23.23, 27.01, 28.21, 28.31, 30.04, 34.14, 35.75, 42.33, 42.39, 42.80, 42.85, 43.02, 43.17, 51.59, 51.84, 54.84, 71.58, 71.62, 111.67, 113.02, 125.81, 126.27, 126.43, 127.91, 128.10, 128.16, 129.55, 131.91, 132.55, 132.69, 136.26, 136.32, 137.31, 141.92, 144.94, 148.26, 148.33, 151.03, 151.09, 157.05, 169.23, 175.03. Масс-спектр высокого разрешения (ESI) для [C₂₉H₃₄N₃O₃]⁺ [М+Н]⁺: вычислено 472.2595, найдено: 472.2598. Элементный анализ; вычислено для C₂₉H₃₃N₃O₃ (%): С, 73.86; Н, 7.05; N, 8.91. Найдено для (%): С, 73.74; Н, 7.17; N, 8.89.

Пример 4.

Аналогично из 0.332 г гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты и 173 мг хинолин-8-карбальдегида получено 382 мг (81%) [N'-хинолин-8-илметилен]гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (Id), чистота 98% (по ЯМР). Т.пл. 134-136°С, + 36.9 (с 1, EtOH). ¹Н ЯМР (300 MHz, ДМСО-d₆) δ 1.00 (с, 1.8Н, Н-18), 1.02 (с, 1.2Н, Н-18), 1.08-1.66 (м, 6Н), 1.71-1.81 (м, 1Н), 1.92-2.41 (м, 5Н), 2.63-2.94 (м, 3Н), 3.68 (с, 3Н, ОМе), 4.36 (с, 1H, ОН), 6.61 (д, J=2.5 Hz, 1H, Н-4), 6.67 (дд, J=8.7,2.5 Hz, 1Н, Н-2), 7.17 (д, J=8.7 Hz, 1Н, H-1), 7.61 (дд, J=8.2, 4.2 Hz, 1H, H-3'), 7.70 (т, J=7.7 Hz, 0.4H, H-6'), 7.72 (т, J=7.7 Hz, 0.6H, H-6'), 8.06 (д, J=7.8 Hz, 1H), 8.32 (д, J=7.7 Hz, 1H), 8.44 (д, J=8.2 Hz, 1H), 8.97 (дд, J=4.2, 1.5 Hz, 1H, H-2'), 9.28 (с, 0.6H, CH=N), 9.48 (c, 0.4H, CH=N), 11.44 (с, 0.6H, NH), 11.65 (с, 0.4H, NH). ¹³C ЯМР (75 MHz, ДМСО-d₆) δ 21.08, 21.19, 23.15, 23.40, 27.05, 28.38, 30.08, 30.14, 30.71, 34.41, 35.86, 42.43, 42.86, 42.91,43.10, 43.26, 51.64, 51.93, 54.90, 71.63, 111.72, 113.03, 113.09, 121.91, 125.10, 125.50, 126.54, 128.04, 129.65, 129.81, 131.26, 131.36, 131.94, 136.66, 137.37, 139.80, 142.76, 145.23, 150.35, 157.08, 169.20, 175.11. Масс-спектр высокого разрешения (ESI) для [C₂₉H₃₄N₃O₃]⁺ [М+Н]⁺: вычислено 472.2595, найдено: 472.2602. Элементный анализ; вычислено для C₂₉H₃₃N₃O₃ (%): С, 73.86; Н, 7.05; N, 8.91. Найдено для (%): С, 73.71; Н, 7.19; N, 8.83.

Пример 5.

Аналогично из 0.332 г гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты и 188 мг 6-метилхинолин-5-карбальдегида получено 422 мг (87%), [N'-(6-метилхинолин-5-ил)метилен]гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (Ie), чистота 98% (по ЯМР). Т.пл. 157-159°С, + 79.5 (с 1, EtOH). ¹Н ЯМР (300 MHz, ДМСО-d₆) δ 0.99 (с, 1.8Н, Н-18), 1.03 (с, 1.2Н, Н-18), 1.08-1.66 (м, 6Н), 1.69-1.82 (м, 1Н), 1.93-2.45 (м, 5Н), 2.53-2.88 (м, 3Н), 2.58 (с, 3Н, СН₃), 3.67 (с, 1.8Н, ОМе), 3.68 (с, 1.2Н, ОМе), 4.31 (с, 0.6Н, ОН), 4.40 (с, 0.4Н, ОН), 6.50 (д, J=2.8 Hz, 0.6Н, Н-4), 6.61 (д, J=2.8 Hz, 0.4Н, Н-4), 6.62-6.71 (м, 1Н, Н-2), 7.14 (д, J=8.8 Hz, 0.6Н, H-1), 7.17 (д, J=8.8 Hz, 0.4H, H-1), 7.53 (дд, J=8.8, 4.4 Hz, 0.6H, H-3'), 7.57 (дд, J=8.8, 4.4 Hz, 0.4H, H-3'), 7.66 (д, J=8.8 Hz, 1H, H-7'), 7.96 (д, J=8.8 Hz, 1H, H-8'), 8.66 (с, 0.6H, CH=N), 8.80 (с, 0.4H, CH=N), 8.83-8.88 (м, 1H, H-2'), 9.03 (д, J=8.8 Hz, 0.6H, H-4'), 9.31 (д, J=8.8 Hz, 0.4H, H-4'), 11.32 (с, 0.6H, NH), 11.57 (с, 0.4H, NH). ¹³C ЯМР (75 MHz, ДМСО-d₆) δ 20.03, 20.23, 21.13, 21.18, 22.75, 23.31, 26.96, 28.20, 29.79, 30.03, 33.75, 35.80, 42.41, 42.80, 43.07, 51.61, 51.76, 54.85, 71.55, 71.66, 111.60, 111.68, 112.96, 113.00, 122.01, 122.07, 125.76, 126.46, 127.62, 130.09, 130.41, 131.90, 132.81, 133.27, 133.94, 136.62, 137.08, 137.28, 137.36, 141.34, 144.60, 146.81, 149.66, 157.03, 157.07, 169.14, 174.90. Масс-спектр высокого разрешения (ESI) для [C₃₀H₃₆N₃O₃]⁺ [М+Н]⁺: вычислено 472.2595, найдено: 472.2606. Элементный анализ; вычислено для C₃₀H₃₅N₃O₃ (%): С, 74.20; Н, 7.26; N, 8.65. Найдено для (%): С, 74.04; Н, 7.37; N, 8.54.

Пример 6.

Аналогично из 0.332 г гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты и 206 мг 8-метоксилхинолин-5-карбальдегида получено 411 мг (82%) [N'-(8-метоксихинолин-5-ил)метилен]гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (If), чистота 98% (по ЯМР). Т.пл. 190-192°С, + 77.4 (с 1, EtOH). ¹Н ЯМР (300 MHz, ДМСО-d₆) δ 1.02 (с, 3Н, Н-18), 1.10-1.66 (м, 6Н), 1.70-1.82 (м, 1Н), 1.92-2.42 (м, 5Н), 2.65-2.86 (м, 3Н), 3.68 (с, 3Н, ОМе), 4.01 (с, 3Н, ОМе), 4.33 (с, 0.6Н, ОН), 4.39 (с, 0.4Н, ОН), 6.56 (д, J=2.8 Hz, 0.6Н, Н-4), 6.60 (д, J=2.8 Hz, 0.4Н, Н-4), 6.62-6.71 (м, 1Н, Н-2), 7.16 (д, J=8.7 Hz, 1Н, Н-1), 7.25 (д, J=8.1 Hz, 1Н, Н-7'), 7.59-7.70 (м, 1Н, Н-3'), 7.80 (д, J=8.1 Hz, 1Н, H-6'), 8.46 (с, 0.6H, CH=N), 8.58 (с, 0.4H, CH=N), 8.86-8.93 (м, 1H, H-2'), 9.21 (д, J=8.8 Hz, 0.6H, H-4'), 9.47 (д, J=8.8 Hz, 0.4H, H-4'), 11.18 (с, 0.6H, NH), 11.39 (с, 0.4H, NH). ¹³C ЯМР (75 MHz, ДМСО-d₆) δ 21.14, 22.82, 23.28, 26.99, 28.26, 29.97, 33.78, 35.70, 42.35, 42.44, 42.78, 43.05, 51.59, 51.77, 54.81,55.83,71.56,71.62, 107.82, 107.92, 111.57, 111.62, 113.00, 121.78, 122.67, 126.12, 126.24, 126.40, 129.52, 130.50, 131.88, 132.70, 133.34, 137.30, 139.65, 142.64, 146.13, 148.98, 156.40, 156.57, 157.02, 168.90, 174.68. Масс-спектр высокого разрешения (ESI) для [C₃₀H₃₆N₃O₄]⁺ [М+Н]⁺: вычислено 502.2700, найдено: 502.2697. Элементный анализ; вычислено для C₃₀H₃₅N₃O₄ (%): С, 71.83; Н, 7.03; N, 8.38. Найдено для (%): С, 71.64; Н, 7.38; N, 8.23.

Пример 7.

Аналогично из 0.332 г гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты и 193 мг 6-фторхинолин-3-карбальдегида получено 435 мг (89%) (N'-(6-фторхинолин-3-илметилен]гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (Ig), чистота 98% (по ЯМР). Т.пл. 197-199°С, + 75.4 (с 1, EtOH). ¹Н ЯМР (300 MHz, ДМСО-d₆) δ 1.01 (с, 3Н, Н-18), 1.07-1.68 (м, 6Н), 1.72-1.82 (м, 1Н), 1.90-2.43 (м, 5Н), 2.68-2.85 (м, 3Н), 3.68 (с, 3Н, ОМе), 4.36 (с, 0.6Н, ОН), 4.39 (с, 0.4Н, ОН), 6.56 (д, J=2.8 Hz, 0.6Н, Н-4), 6.60 (д, J=2.8 Hz, 0.4Н, Н-4), 6.66 (дд, J=8.7, 2.8 Hz, 1Н, H-2), 7.16 (д, J=8.7 Hz, 1H, H-1), 7.69 (ддд, J=9.0, 9.0, 2.8 Hz, 1H, H-7'), 7.81 (дд, J=9.0, 2.8 Hz, 0.6H, H-5'), 7.86 (дд, J=9.0, 2.8 Hz, 0.4H, H-5'), 8.10 (дд, J=9.0, 5.5 Hz, 1H, H-8'), 8.18 (с, 0.6H, CH=N), 8.38 (c, 0.4H, CH=N), 8.48 (д, J=2.0 Hz, 0.6H, H-4'), 8.55 (д, J=2.0 Hz, 0.4H, H-4'), 9.21 (д, J=2.0 Hz, 0.4H, H-2'), 9.25 (д, J=2.0 Hz, 0.6H, H-2'), 11.44 (с, 0.6H, NH), 11.66 (с, 0.4H, NH). ¹³C ЯМР (75 MHz, ДМСО-d₆) δ 21.07, 21.17, 23.07, 23.28, 27.05, 28.29, 28.36, 30.08, 34.09, 35.81, 42.39, 42.45, 42.89, 43.07, 43.17, 51.63, 51.81, 54.85, 71.65, 111.48 (д, ²J_CF=21.8 Hz), 111.57 (д, ²J_Cf=21.8 Hz), 111.67, 113.01, 120.04 (д, ²J_CF=25.9 Hz), 126.50, 128.15, 128.24, 128.29, 128.35, 131.70 (д, ³J_CF=9.8 Hz), 131.73 (д, ³J_CF=9.8 Hz), 131.93, 133.77, 133.84, 137.35, 139.93, 143.03, 144.82, 144.97, 147.61, 147.98, 157.09, 160.11 (д, ¹J_CF=245.3 Hz), 169.42, 175.24. Масс-спектр высокого разрешения (ESI) для [C₂₉H₃₃FH₃O₃]⁺: [М+Н]⁺: вычислено 490.2500, найдено: 490.2498. Элементный анализ; вычислено для C₂₉H₃₂FN₃O₂ (%): С, 71.14; Н, 6.26; N, 8.58. Найдено для (%): С, 71.02; Н, 6.65; N, 8.47.

Пример 8.

Аналогично из 0.332 г гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты и 193 мг 6-фторхинолин-8-карбальдегида получено 396 мг (81%), [N'-(6-фторхинолин-8-ил)метилен]гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (Ih), чистота 98% (по ЯМР). Т.пл. 131-133°С, + 70.4 (с 1, EtOH). ¹Н ЯМР (300 MHz, ДМСО-d₆) δ 1.00 (с, 1.8Н, Н-18), 1.01 (с, 1.2Н, Н-18), 1.11-1.65 (м, 6Н), 1.70-1.81 (м, 1Н), 1.93-2.42 (м, 5Н), 2.65-2.90 (м, 3Н), 3.68 (с, 3Н, ОМе), 4.33 (с, 0.6Н, ОН), 4.35 (с, 0.4Н, ОН), 6.55 (д, J=2.8 Hz, 0.6Н, Н-4), 6.60 (д, J=2.8 Hz, 0.4Н, Н-4), 6.66 (дд, J=8.8, 2.8 Hz, 1Н, H-2), 7.16 (д, J=8.8 Hz, 1H, H-1), 7.64 (дд, J=8.8, 4.2 Hz, 1H, H-3'), 7.83-7.91 (м, 1H), 8.00-8.10 (м, 1H), 8.41 (d, J=8.8 Hz, 1H, H-4'), 8.94 (д, J=4.2 Hz, 1H, H-2'), 9.23 (с, 0.6H, CH=N), 9.43 (с, 0.4H, CH=N), 11.54 (с, 0.6H, NH), 11.74 (с, 0.4H, NH). ¹³C ЯМР (75 MHz, ДМСО-d₆) δ 21.05, 21.18, 23.19, 23.34, 27.02, 28.29, 28.35, 30.02, 34.30, 35.87, 42.43, 42.86, 43.06,43.18, 51.61, 51.87, 54.87, 71.63, 111.67, 112.55 (д, ²J_CF=22.2 Hz), 112.75 (д, ²J_CF=22.2 Hz), 113.00, 113.90 (д, ²J_CF=26.0 Hz), 114.21 (д, ²J_CF=26.0 Hz), 122.78, 126.52, 129.30 (д, ³J_cf=10.5 Hz), 131.94, 134.46 (д, ³J_CF=8.8 Hz), 136.24 (д, ⁴J_cf=4.7 Hz), 137.33, 137.37, 138.47, 141.48, 141.53, 142.47, 142.54, 149.78, 149.80, 157.08, 159.40 (д, ¹J_Cf=244.5 Hz), 169.37, 175.29. Масс-спектр высокого разрешения (ESI) для [C₂₉H₃₃FN₃O₃]⁺: [M+H]⁺: вычислено 490.2500, найдено: 490.2496. Элементный анализ; вычислено для C₂₉H₃₂FN₃O₃ (%): С, 71.14; Н, 6.59; N, 8.58. Найдено для (%): С, 71.03; Н, 6.65; N, 8.39.

Пример 9.

Аналогично из 0.332 г гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты и 210 мг 2-хлорхинолин-3-карбальдегида получено 434 мг (86%) [N'-(2-хлорхинолин-3-ил)метилен]гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (Ii), чистота 98% (по ЯМР). Т.пл. 160°С (разд.), + 61.5 (с 1, CHCl₃). ¹Н ЯМР (300 MHz, ДМСО-d₆) δ 1.01 (с, 3Н, Н-18), 1.09-1.65 (м, 6Н), 1.70-1.83 (м, 1H), 1.91-2.42 (м, 5Н), 2.63-2.85 (м, 3Н), 3.66 (с, 1.8Н, ОМе), 3.68 (с, 1.2Н, ОМе), 4.36 (с, 0.4Н, ОН), 4.39 (с, 0.6Н, ОН), 6.49 (д, J=2.6 Hz, 0.6Н, Н-4), 6.60 (д, J=2.6 Hz, 0.4Н, Н-4), 6.65 (дд, J=8.6, 2.6 Hz, 1Н, H-2), 7.15 (д, J=8.6 Hz, 1H, H-1), 7.68 (т, J=7.3 Hz, 1H), 7.84 (т, J=7.8 Hz, 1H), 7.96 (д, J=8.1 Hz, 1H, H-8'), 8.11 (д, J=8.6 Hz, 0.6H, H-5'), 8.20 (д, J=8.6 Hz, 0.4H, H-5'), 8.43 (с, 0.6H, CH=N), 8.63 (с, 0.4H, CH=N), 8.88 (c, 1H, H-3'), 11.59 (с, 0.6H, NH), 11.81 (c, 0.4H, NH). ¹³C ЯМР (75 MHz, ДМСО-d₆) δ 21.10, 21.17, 23.17, 23.31, 26.96, 27.04, 28.33, 30.06, 34.32, 35.89, 42.40, 42.46, 42.86, 43.02, 43.11, 51.61, 51.80, 54.84, 71.65, 71.68, 111.61, 111.68, 112.98, 126.24, 126.32, 126.48, 126.88, 127.61, 127.70, 127.83, 128.77, 128.96, 131.59, 131.68, 131.89, 135.32, 135.51, 137.32, 137.70, 140.80, 146.93, 147.05, 148.31, 148.41, 157.06, 169.37, 175.25. Масс-спектр высокого разрешения (ESI) для [C₂₉H₃₃ClN₃O₃]⁺: [М+Н]⁺: вычислено 506.2205, найдено: 506.2201. Элементный анализ; вычислено для C₂₉H₃₂ClN₃O₃ (%): С, 68.83; Н, 6.37; N, 8.30. Найдено для С, 68.69; Н, 6.51; N, 8.19.

Пример 10.

Аналогично из 0.332 г гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты и 226 мг 2-хлор-6-метилхинолин-3-карбальдегида получено 436 мг (84%) [N'-(2-хлор-6-метилхинолин-3-ил)метилен]гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (Ij), чистота 98% (по ЯМР). Т.пл. 168-170°С, + 66.9 (с 1, EtOH). ¹Н ЯМР (300 MHz, ДМСО-d₆) δ 1.01 (с, 3Н, Н-18), 1.11-1.64 (м, 6Н), 1.72-1.84 (м, 1Н), 1.89-2.42 (м, 5Н), 2.48, 2.49 оба с, 3Н, СН₃) 2.67-2.85 (м, 3Н), 3.67 (с, 1.8Н, ОМе), 3.68 (с, 1.2Н, ОМе), 4.38 (с, 1H, ОН), 6.50 (д, J=2.7 Hz, 0.6Н, Н-4), 6.54 (д, J=2.7 Hz, 0.4Н, Н-4), 6.66 (дд, J=8.7, 2.7 Hz, 1Н, H-2), 7.15 (д, J=8.7 Hz, 1H, H-1), 7.68 (дд, J=8.6, 2.0 Hz, 1H, H-7'), 7.83 (c, 0.6H), 7.85 (д, J=8.6 Hz, 1H, H-8'), 7.92 (с, 0.4H), 8.42 (с, 0.6H, CH=N), 8.62 (c, 0.4H, CH=N), 8.73 (с, 0.6H), 8.75 (с, 0.4H), 11.60 (с, 0.6H, NH), 11.85 (с, 0.4H, NH). ¹³C ЯМР (75 MHz, ДМСО-d₆) δ 21.11, 21.16, 23.14, 23.32, 26.97, 27.02, 28.28, 28.37, 30.04, 30.16, 34.21, 35.90, 42.40, 42.48, 42.84, 42.91, 43.05, 43.13, 51.61, 51.82, 54.85, 54.88, 71.67, 111.70, 112.91, 113.01, 126.22, 126.49, 126.55, 126.85, 126.89, 127.28, 127.36, 127.45, 131.90, 131.93, 133.74, 133.87, 134.50, 134.77, 137.34, 137.38, 137.59, 137.87, 140.98, 145.59, 145.71, 147.46, 147.55, 157.07, 169.46, 175.26. Масс-спектр высокого разрешения (ESI) для [C₃₀H₃₅ClN₃O₃] [М+Н]⁺: вычислено 520.2361, найдено: 520.2354. Элементный анализ; вычислено для C₃₀H₃₄ClN₃O₃ (%): С, 69.28; Н, 6.59; N, 8.08. Найдено (%): С, 69.14; Н, 6.63; N, 7.97.

Пример 11.

Аналогично из 0.332 г гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты и 226 мг 2-хлор-8-метилхинолин-3-карбальдегида получено 465 мг (87%) [N'-(2-хлор-8-метилхинолин-3-ил)метилен]гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (Ik), чистота 98% (по ЯМР). Т.пл. 155-157°С, + 33.1 (с 1,CHCl₃). ¹Н ЯМР (300 MHz, ДМСО-d₆) δ 1.01 (с, 3Н, Н-18), 1.10-1.66 (м, 6Н), 1.70-1.83 (м, 1Н), 1.91-2.43 (м, 5Н), 2.64 (с, 3Н, СН₃) 2.68-2.84 (м, 3Н), 3.66 (с, 1.8Н, ОМе), 3.68 (с, 1.2Н, ОМе), 4.34 (с, 0.4Н, ОН), 4.36 (с, 0.6Н), 6.49 (д, J=2.7 Hz, 0.6Н, Н-4), 6.59 (д, J=2.7 Hz, 0.4Н, Н-4), 6.64 (дд, J=8.7, 2.7 Hz, 1Н, H-2), 7.14 (д, J=8.7 Hz, 1H, H-1), 7.54 (т, J=7.4 Hz, 1H, H-6'), 7.68 (д, J=7.3 Hz, 1H, H-7'), 7.90 (д, J=7.4 Hz, 0.6H, H-5'), 7.99 (д, J=7.4 Hz, 0.4H, H-5'), 8.42 (с, 0.6H, CH=N), 8.62 (с, 0.4H, CH=N), 8.81 (c, 1H, H-4'), 11.57 (с, 0.6H, NH), 11.77 (с, 0.4H, NH). ¹³C ЯМР (75 MHz, ДМСО-d₆) δ 17.27, 21.03, 21.13, 23.11, 23.24, 26.92, 28.23, 28.27, 30.01, 34.21, 35.84, 42.48, 42.82, 42.98, 43.05, 51.58, 51.76, 54.79, 71.62, 111.56, 112.95, 125.92, 125.98, 126.40, 126.56, 126.74, 126.87, 127.49, 131.42, 131.51, 131.86, 135.38, 135.48, 135.72, 137.27, 137.71, 140.83, 145.98, 146.10, 147.35, 147.44, 157.01, 169.31, 175.20. Масс-спектр высокого разрешения (ESI) для [C₃₀H₃₅ClN₃O₃]⁺: [М+Н]⁺: вычислено 520.2361, найдено: 520.2359. Элементный анализ; вычислено для C₃₀H₃₄ClN₃O₃ (%): С, 69.28; Н, 6.59; N, 8.08. Найдено (%): С, 69.09; Н, 6.75; N, 7.94.

Пример 12.

Аналогично из 0.332 г гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты и 243 мг 2-хлор-6-метоксихинолин-3-карбальдегида получено 460 мг (86%) [N'-(2-хлор-6-метоксихинолин-3-ил)метилен]гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (II), чистота 98% (по ЯМР). Т.пл. 148-150°С, + 27.5 (с 1, CHCl₃). ¹Н ЯМР (300 MHz, ДМСО-d₆) δ 1.02 (с, 3Н, Н-18), 1.12-1.67 (м, 6Н), 1.71-1.83 (м, 1Н), 1.90-2.44 (м, 5Н), 2.67-2.86 (м, 3Н), 3.67 (с, 1.8Н, ОМе), 3.69 (с, 1.2Н, ОМе), 3.88 (с, 1.8Н, ОМе), 3.90 (с, 1.2Н, ОМе), 4.33 (с, 0.4Н, ОН), 4.38 (с, 0.6Н, ОН), 6.50 (д, J=2.7 Hz, 0.6Н, Н-4), 6.61 (д, J=2.7 Hz, 0.4Н, Н-4), 6.66 (дд, J=8.7, 2.7 Hz, 1Н, H-2), 7.16 (д, J=8.7 Hz, 1H, H-1), 7.47 (д, J=9.0 Hz, 1H), 7.49 (с, 0.6H), 7.64 (с, 0.4H), 7.86 (д, J=9.0 Hz, 1H), 8.42 (c, 0.6H, CH=N), 8.60 с, 0.4H, CH=N), 8.79 (с, 1H), 11.55 (с, 0.6H, NH), 11.75 (c, 0.4H, NH). ¹³C ЯМР (75 MHz, ДМСО-d₆) δ 21.05, 21.13, 23.03, 23.24, 26.95, 28.21, 28.30, 29.97, 30.04, 34.28, 35.84, 42.37, 42.41, 42.79, 42.87, 42.97, 43.13, 51.58, 51.85, 54.79, 55.61, 55.68, 71.62, 106.27, 106.57, 111.64, 112.83, 112.98, 123.97, 126.23, 126.45, 128.15, 128.96, 129.10, 131.85, 133.93, 134.10, 137.29, 137.80, 140.75, 142.94, 145.65, 157.02, 158.00, 169.25, 175.10. Масс-спектр высокого разрешения (ESI) для [C₃₀H₃₅ClN₃O₄]⁺: [М+Н]⁺: вычислено 536.2311, найдено: 536.2306. Элементный анализ; вычислено для C₃₀H₃₄ClN₃O₄ (%): С, 67.22; Н, 6.39; N, 7.84. Найдено (%): С, 67.04; Н, 6.46; N, 7.73.

Пример 13.

Аналогично из 0.332 г гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты и 243 мг 2-хлор-7-метоксихинолин-3-карбальдегида получено 470 мг (88%) [N'-(2-хлор-7-метоксихинолин-3-ил)метилен]гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (Im), чистота 98% (по ЯМР). Т.пл. 162-164°С, + 28.8 (с 1, CHCl₃). ¹Н ЯМР (300 MHz, ДМСО-d₆) δ 1.01 (с, 3Н, Н-18), 1.11-1.65 (м, 6Н), 1.71-1.82 (м, 1H), 1.96-2.41 (м, 5Н), 2.66-2.83 (м, 3Н), 3.67 (с, 1.8Н, ОМе), 3.68 (с, 1.2Н, ОМе), 3.93 (с, 3Н, ОМе), 4.35 (с, 0.4Н, ОН), 4.37 (с, 0.6Н, ОН), 6.50 (д, J=2.7 Hz, 0.6Н, Н-4), 6.59 (д, J=2.7 Hz, 0.4Н, Н-4), 6.65 (дд, J=8.7, 2.7 Hz, 1Н, H-2), 7.15 (д, J=8.7 Hz, 1Н, Н-1), 7.31 (д, J=8.8 Hz, 1Н, Н-6'), 7.35 (с, 1Н, Н-8'), 7.99 (д, J=8.8 Hz, 0.6Н, H-5'), 8.09 (д, J=8.8 Hz, 0.4H, H-5'), 8.40 (с, 0.6Н, CH=N), 8.60 (с, 0.4Н, CH=N), 8.77 (с, 0.6Н, Н-4'), 8.78 (с, 0.4Н, Н-4'), 11.50 (с, 0.6Н, NH), 11.72 (с, 0.4Н, NH). ¹³С ЯМР (75 MHz, ДМСО-d₆) δ 21.08, 21.15, 23.11, 23.28, 26.93, 27.00, 28.31, 30.01, 34.25, 35.84, 42.37, 42.45, 42.84, 43.00, 43.09, 51.60, 51.79, 54.81, 55.78, 71.65, 106.35, 106.41, 111.60, 112.97, 120.52, 122.04, 122.08, 123.60, 123.71, 126.43, 129.90, 130.11, 131.88, 134.93, 135.12, 137.31, 137.96, 141.09, 148.63, 148.73, 149.01, 149.15, 157.03, 161.90, 162.00, 169.22, 175.11. Масс-спектр высокого разрешения (ESI) для [C₃₀H₃₅ClN₃O₄]⁺: [М+Н]⁺: вычислено 536.2311, найдено: 536.2300. Элементный анализ; вычислено для C₃₀H₃₄ClN₃O₄ (%): С, 67.22; Н, 6.39; N, 7.84. Найдено (%): С, 67.05; Н, 6.51; N, 7.70.

Пример 14.

Аналогично из 0.332 г гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты и 239 мг 2,6-диметоксихинолин-3-карбальдегида получено 382 мг (72%) [N'-(2,6-диметокси-3-ил)метилен]гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (In), чистота 98% (по ЯМР). Т.пл. 172-175°С, + 73.0 (с 1, ДМСО). ¹Н ЯМР (300 MHz, ДМСО-d₆) δ d 1.02 (с, 3Н, Н-18), 1.11-1.66 (м, 6Н), 1.71-1.82 (м, 1Н), 1.94-2.40 (м, 5Н), 2.68-2.86 (м, 3Н), 3.67 (с, 1.8Н, ОМе), 3.68 (с, 1.2Н, ОМе), 3.83 (с, 1.8Н, ОМе), 3.85 (с, 1.2Н, ОМе), 4.02 (с, 3Н, ОМе), 4.33 (с, 0.4Н, ОН), 4.36 (с, 0.6Н, ОН), 6.50 (д, J=2.7 Hz, 0.6Н, Н-4), 6.61 (д, J=2.7 Hz, 0.4Н, Н-4), 6.66 (дд, J=8.7, 2.7 Hz, 1Н, H-2), 7.16 (д, J=8.7 Hz, 1H, H-1), 7.33 (д, J=8.8 Hz, 1H, H-7'), 7.37 (с, 0.6H, H-5'), 7.49 (с, 0.4H, H-5'), 7.70 (д, J=8.8 Hz, 1H, H-8'), 8.31 (с, 0.6H, CH=N), 8.51 (с, 0.4H, CH=N), 8.57 (с, 0.6H, H-4'), 8.60 (с, 0.4H, H-4'), 11.39 (с, 0.6H, NH), 11.59 (с, 0.4H, NH). ¹³C ЯМР (75 MHz, ДМСО-d₆) δ 21.05, 21.13, 23.04, 23.27, 26.95, 28.32, 29.98, 30.09, 34.24, 35.81, 42.38, 42.79, 42.87, 43.01, 43.17, 51.59, 51.86, 53.42, 54.78, 54.81, 55.35, 55.40, 71.59, 106.96, 107.27, 111.66, 112.82, 112.99, 118.64, 118.70, 122.02, 125.42, 125.50, 126.47, 127.76, 127.87, 131.86, 132.85, 133.14, 136.98, 137.04, 137.30, 141.42, 141.50, 155.97, 157.02, 157.91, 169.07, 174.99. Масс-спектр высокого разрешения (ESI) для [C₃₁H₃₇N₃O₅Na]⁺ [M+Na]⁺: вычислено 554.2625, найдено: 554.2615. Элементный анализ; вычислено для C₃₁H₃₇N₃O₅ (%): С, 70.03; Н, 7.01; N, 7.90. Найдено (%): С, 69.92; Н, 7.28; N, 7.75.

Пример 15.

Аналогично из 0.332 г гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты и 239 мг 2,7-диметоксихинолин-3-карбальдегида получено 372 мг (70%) [N'-(2,7-диметоксихинолин-3-ил)метилен]гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (Io), чистота 98% (по ЯМР). Т.пл. 140-142°С, + 6.4 (с 1, CHCl₃). ¹Н ЯМР (300 MHz, ДМСО-d₆) δ 1.01 (с, 3Н, Н-18), 1.11-1.64 (м, 6Н), 1.71-1.81 (м, 1Н), 1.94-2.37 (м, 5Н), 2.67-2.84 (м, 3Н), 3.67 (с, 3Н, ОМе), 3.90 (с, 3Н, ОМе), 4.04 (с, 3Н, ОМе), 4.35 (с, 1Н, ОН), 6.51 (д, J=2.7 Hz, 0.6Н, Н-4), 6.60 (д, J=2.7 Hz, 0.4Н, Н-4), 6.66 (дд, J=8.7, 2.7 Hz, 1Н, H-2), 7.09 (д, J=8.8 Hz, 1H, H-6'), 7.16 (д, J=8.7 Hz, 1H, H-1), 7.18 (с, 1H, H-8'), 7.83 (д, J=8.8 Hz, 0.6H, H-5'), 7.92 (д, J=8.8 Hz, 0.4H, H-5'), 8.29 (с, 0.6H, CH=N), 8.49 (с, 0.4H, CH=N), 8.55 (с, 0.6H, H-4'), 8.57 (с, 0.4H, H-4'), 11.32 (с, 0.6H, NH), 11.52 (с, 0.4H, NH). ¹³C ЯМР (75 MHz, ДМСО-d₆) δ 21.07, 21.14, 23.09, 23.30, 26.92, 26.98, 28.24, 28.30, 30.00, 30.05, 34.19, 35.79, 42.36, 42.44, 42.80, 42.84, 43.02, 43.12, 51.59, 51.78, 53.54, 54.81, 54.83, 55.48, 71.60, 106.14, 106.20, 111.60, 112.98, 115.81, 115.94, 116.69, 119.49, 119.55, 126.44, 129.60, 129.80, 131.90, 133.69, 133.96, 137.18, 137.31, 140.20, 147.97, 148.09, 157.03, 159.73, 159.76, 161.29, 161.39, 168.99, 174.96. Масс-спектр высокого разрешения (ESI) для [C₃₁H₃₇N₃O₅Na]⁺ [M+Na]⁺: вычислено 554.2625, найдено: 554.2616. Элементный анализ; вычислено для C₃₁H₃₇N₃O₅ (%): С, 70.03; Н, 7.01; N, 7.90. Найдено (%): С, 69.94; Н, 7.23; N, 7.78.

Пример 16.

Аналогично из 0.332 г гидразида 13β--гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты и 173 мг хинолин-3-карбальдегида получено 396 мг (84%) [N'-хинолин-3-илметилен]гидразида 13β-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (Ip), чистота 98% (по ЯМР). Т.пл. 162-164°С, + 58.8 (с 1, ДМСО). ¹Н ЯМР (300 MHz, ДМСО-d₆) δ 0.96-1.07 (м, 1Н), 1.18-1.35 (м, 1H), 1.19 (с, 1.8Н, Н-18), 1.22 (с, 1.2Н, Н-18), 1.39-1.76 (м, 5Н), 1.80-2.30 (м, 5Н), 2.57-2.73 (м, 1Н), 2.73-2.90 (м, 2Н, Н-6), 3.68 (с, 3Н, ОМе), 3.96 (с, 1Н, ОН), 6.57 (д, J=2.8 Hz, 0.6Н, Н-4), 6.60 (д, J=2.8 Hz, 0.4Н, Н-4), 6.67 (дд, J=8.6, 2.8 Hz, 1Н, H-2), 7.18 (д, J=8.6 Hz, 1H, H-1), 7.64 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.79 (t, J=1.1 Hz, 1H), 7.97-8.08 (м, 2H), 8.21 (с, 0.6H, CH=N), 8.42 (с, 0.4H, CH=N), 8.49 (д, J=1.8 Hz, 0.6H), 8.56 (д, J=1.8 Hz, 0.4H), 9.24 (д, J=1.8 Hz, 0.4H), 9.27 (д, J=1.8 Hz, 0.6H), 11.43 (с, 0.6H, NH), 11.65 (c, 0.4H, NH). ¹³C ЯМР (75 MHz, ДМСО-d₆) δ 23.40, 23.60, 25.91, 26.52, 29.03, 29.18, 30.12, 33.16, 34.59, 40.53, 42.59, 49.52, 49.73, 54.79, 69.87, 111.57, 113.00, 126.39, 127.27, 127.48, 127.63, 128.39, 128.51, 128.79, 128.83, 130.14, 130.22, 132.36, 134.31, 134.38, 137.42, 137.47, 140.22, 143.31, 147.59, 147.73, 147.91, 148.29, 156.91, 169.33, 175.14. Масс-спектр высокого разрешения (ESI) для [C₂₉H₃₄N₃O₃]⁺ [М+Н]⁺: вычислено 472.2595, найдено: 472.2594,. Элементный анализ; вычислено для C₂₉H₃₃N₃O₃ (%): С, 73.86; Н, 7.05. Найдено (%): С, 73.73; H, 7.18

Пример 17.

Аналогично из 0.332 г гидразида 13β--гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты и 173 мг хинолин-6-карбальдегида получено 391 мг (83%) [N'-хинолин-6-илметилен]гидразида 13β-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (Iq), чистота 98% (по ЯМР). Т.пл. 145-147°С, + 57.4 (с 1, ДМСО). ¹Н ЯМР (300 MHz, ДМСО-d₆) δ 0.96-1.07 (м, 1Н), 1.19 (с, 1.8Н, Н-18), 1.22 (с, 1.2Н, Н-18), 1.24-1.39 (с, 1Н), 1.40-1.76 (с, 5Н), 1.90-2.29 (с, 5Н), 2.54-2.69 (м, 1Н), 2.73-2.90 (м, 2Н, Н-6), 3.69 (с, 3Н, ОМе), 3.96 (с, 1Н, ОН), 6.60 (д, J=2.8 Hz, 1H, Н-4), 6.68 (дд, J=8.6, 2.8 Hz, 1H, H-2), 7.18 (д, J=8.6 Hz, 1H, H-1), 7.56 (дд, J=8.3, 4.1 Hz, 1H), 8.04 (д, J=8.5 Hz, 1H), 8.09-8.22 (м, 2.6H), 8.34-8.45 (м, 1.4H), 8.91 (д, J=4.1 Hz, 1H), 11.36 (с, 0.6H, NH), 11.54 (с, 0.4H, NH). ¹³C ЯМР (75 MHz, ДМСО-d₆) δ 23.42, 23.61, 25.91, 26.48, 26.55, 29.02, 29.17, 30.13, 33.25, 34.63, 40.12, 40.54, 42.59, 49.52, 49.76, 54.81,69.90, 111.60, 113.02, 122.03, 122.07, 125.75, 126.37, 127.87, 127.90, 128.05, 128.10, 129.50, 132.37, 132.52, 132.70, 136.21, 136.29, 137.44, 137.47, 141.88, 144.88, 148.24, 148.33, 151.03, 151.07, 156.92, 169.25, 175.06. Масс-спектр высокого разрешения (ESI) для [C₂₉H₃₄N₃O₃]⁺ [М+Н]⁺: вычислено 472.2595, найдено: 472.2579. Элементный анализ; вычислено для for C₂₉H₃₃N₃O₃ (%): С, 73.86; Н, 7.05. Найдено (%): С, 73.75; Н, 7.19.

Пример 18.

Аналогично из 0.332 г гидразида 13β--гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты и 206 мг 8-метоксихинолин-5-карбальдегида получено 431 мг (86%) [N'-(8-метоксихинолин-5-ил)метилен]гидразида 13β-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (Ir), чистота 98% (по ЯМР). Т.пл. 142-144°С, + 41.0 (с 1, ДМСО). ¹Н ЯМР (300 MHz, ДМСО-d₆) δ 0.96-1.07 (м, 1Н), 1.13-1.34 (м, 1Н), 1.19 (с, 3Н, Н-18), 1.39-1.78 (м, 5Н), 1.87-2.33 (м, 5Н), 2.57-2.97 (м, 3Н), 3.69 (с, 3Н, ОМе), 3.93 (с, 0.6Н, ОН), 3.94 (с, 0.4Н, ОН), 4.01 (с, 3Н, ОМе), 6.57 (д, J=2.8 Hz, 0.6Н, Н-4), 6.61 (д, J=2.8 Hz, 0.4Н, Н-4), 6.67 (дд, J=8.6, 2.8 Hz, 1Н, H-2), 7.18 (д, J=8.6 Hz, 1H, H-1), 7.25 (д, J=8.2 Hz, 1H, H-7'), 7.59 (дд, J=8.4, 4.5 Hz, 0.6H, H-3'), 7.67 (дд, J=8.4, 4.5 Hz, 0.4H, H-3'), 7.79 (д, J=8.2 Hz, 1H, H-6'), 8.46 (c, 0.6H, CH=N), 8.59 (с, 0.4H, CH=N), 8.86-8.93 (м, 1H, H-2'), 9.22 (д, J=8.4 Hz, 0.6H, H-4'), 9.47 (д, J=8.4 Hz, 0.4H, H-4'), 11.13 (с, 0.6H, NH), 11.35 (с, 0.4H, NH). ¹³C ЯМР (75 MHz, ДМСО-d₆) δ 23.24, 23.50, 25.92, 26.47, 26.53, 29.15, 30.04, 30.11, 32.88, 34.61, 40.54, 42.57, 49.53, 49.73, 54.81, 55.85, 69.91, 107.85, 107.94, 111.55, 113.02, 121.77, 122.58, 122.67, 126.11, 126.24, 126.37, 129.55, 130.47, 132.41, 132.70, 133.36, 137.49, 142.65, 146.06, 148.99, 156.41, 156.56, 156.92, 168.96, 174.68. Масс-спектр высокого разрешения (ESI) для [C₃₀H₃₃N₃O₄]⁺ [М+Н]⁺: вычислено 502.2700. найдено: 502.2690. Элементный анализ; вычислено для for C₃₀H₃₅N₃O₄ (%): С, 71.83; Н, 7.03; N, 8.38. Найдено (%): С, 71.67; Н, 7.34; N, 8.25

Пример 19.

Аналогично из 0.332 г гидразида 13β--гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты и 173 мг N'-изохинолин-5-карбальдегида получено 377 мг (80%) [N'-изохинолин-5-илметилен]гидразида 13α-гидрокси-3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты (Is), чистота 98% (по ЯМР). Т.пл. 162-165°С, + 73.9(с 1, EtOH). ¹Н ЯМР (300 MHz, ДМСО-d₆) δ 1.01 (с, 1.8Н, Н-18), 1.02 (с, 1.2Н, Н-18), 1.08-1.67 (м, 5Н), 1.72-1.82 (м, 1Н), 1.94-2.45 (м, 5Н), 2.65-2.92 (м, 3Н), 3.67 (с, 3Н, ОМе), 4.35 (с, 0.6Н, ОН), 4.42 (с, 0.4Н, ОН), 6.56 (д, J=2.7 Hz, 0.6Н, Н-4), 6.60 (д, J=2.7 Hz, 0.4Н, Н-4), 6.66 (дд, J=8.7, 2.7 Hz, 1Н, H-2), 7.15 (д, J=8.7 Hz, 1H, H-1), 7.75 (дд, J=8.1, 7.3 Hz, 1H), 8.05-8.13 (м, 1H), 8.18 (д, J=8.1 Hz, 1H), 8.47 (д, J=6.1 Hz, 0.6H), 8.59 (д, J=6.1 Hz, 0.6H), 8.61 (с, 0.6H, CH=N), 8.61 (д, J=6.1 Hz, 0.4H), 8.73 (с, 0.4H, CH=N), 8.74 (д, J=6.1 Hz, 0.4H), 9.37 (с, 1H), 11.36 (с, 0.6H, NH), 11.61 (с, 0.4H, NH). ¹³C ЯМР (75 MHz, ДМСО-d₆) δ 21.13, 22.89, 23.29, 27.05, 28.27, 28.30, 30.01, 33.95, 35.79, 42.37, 42.44, 42.82, 43.08, 51.59, 51.81, 54.84, 71.59, 71.66, 111.65, 113.00, 116.85, 117.49, 126.45, 127.11, 127.16, 128.60, 128.88, 128.95, 129.61, 129.84, 130.81, 131.91, 132.32, 132.36, 137.30, 137.34, 141.26, 144.08, 144.14, 144.83, 153.14, 153.20, 157.04, 169.23, 174.98. Масс-спектр высокого разрешения (ESI) для [C₂₉H₃₄N₃O₃]⁺ [М+Н]⁺: вычислено 472.2595н. найдено: 472.2598. Элементный анализ; вычислено для C₂₉H₃₃N₃O₃ (%): С, 73.86; Н, 7.05; N, 8.91. Найдено (%): С, 73.72; Н, 7.18; N, 8.80. Предлагаемый новый тип гибридных соединений - секостероида и хинолина общей формулой I был подвергнут скринингу на антипролиферативную активность в отношении чувствительной к эстрогену линии клеток рака молочной железы человека MCF-7.

Пример 20. Антипролиферативная активность заявленных соединений. Изучение антипролиферативной активности заявленных соединений проводилось на культурах эстрогензависимых клеток рака молочной железы человека MCF-7. Данные об антипролиферативной активности (IC₅₀ - концентрация, ингибирующая рост клеток на 50% по сравнению с контролем) заявленных в изобретении соединений, приводятся в таблице 1, где для каждого соединения указана структура и номер примера их синтеза (описанных выше), а также приводятся данные об антипролиферативной активности для препарата сравнения - противоопухолевого препарата цисплатина. Определение IC₅₀ проводилось с помощью МТТ-теста по стандартной методике, описанной в литературе [Т. Mossman, Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: Application to proliferation and cytotoxicity assays, J. Immunol. Methods 1983, 65, 55-63]. Соединения растворяли в ДМСО (Applichem) в концентрации 10 мкМ. Клетки рака молочной железы человека MCF-7 были получены из коллекции АТСС. Клетки MCF-7 культивировали in vitro в стандартной среде DMEM (Gibco). Среда содержала 10%-ную эмбриональную сыворотку телят (HyClone), пеницилин 50 ед/мл и стрептомицин 50 мкг/мл (PanEco), инкубацию проводили при 37°С, 5%-ном СО₂ и относительной влажности 80-90%. При определении количества выживших клеток был использован МТТ тест, основанный на превращении реагента МТТ (3-[4,5-диметилтиазол-2]-2,5-дифенилтетразол бромида) в кристаллы формазана. Клетки рассевали на 24-луночные планшеты в расчете 40 000 клеток на одну лунку. Через 24 часа добавляли анализируемые соединения; к контрольным клеткам добавляли соответствующее количество растворителя (ДМСО). Концентрация соединений в среде для культивирования варьировалась от 0.5 до 50 мкМ, при этом содержание органического растворителя в среде не превышало 0.5%. Через 72 часа роста с соединениями среду удаляли и добавляли к клеткам МТТ реагент (AppliChem) на 2 ч. После окончания инкубации клетки лизировали в ДМСО и легким встряхиванием планшета растворяли накопленный клетками формазан. Оптическую плотность полученных растворов анализировали на спектрофотометре MultiScan FC (ThermoFisher) при 571 нм. За 100% принимали выживаемость клеток, обработанных растворителем. Сравнение активности соединений выполняли с помощью статистики ANOVA в программе GraphPad.

Как видно из представленных данных, соединения, являющиеся предметом настоящего изобретения и описанные в примерах, обладают антипролиферативным действием в микромолярных концентрациях и в большинстве случаев превосходят активность препарата сравнения цисплатина. Максимальной антипролиферативной активностью обладают соединения Ia и Ic (IC₅₀=1.7-1.8 мкМ) и соединение If (IC₅₀=0.8 мкМ), превосходя эталонный препарат цисплатин в 3-7 раз.

Пример 21.

Антипролиферативная активность заявленных соединений в отношении полирезистентных опухолевых клеток.

Изучение цитотоксичности заявленных соединений Ia и Ic проводили также на культуре полирезистентных опухолевых клеток NCI/ADR-RES с экспрессией р-гликопротеина (p-gp). Известно, что экспрессия АТР-связывающих кассетных транспортеров, таких как р-гликопротеин, на поверхности опухолевых клеток является одним из наиболее типичных механизмов резистентности, развивающихся в опухолевых клетках в ответ на химиотерапию [R.W. Robey, K.М. Pluchino, M.D. Hall, А.Т. Fojo, S.E. Bates, M.M. Gottesman, Revisiting the role of ABC transporters in multidrug-resistant cancer, Nat. Rev. Cancer 2018, 18, 452-464; A.A. Stavrovskaya, E.Y. Rybalkina, Recent Advances in the Studies of Molecular Mechanisms Regulating Multidrug Resistance in Cancer Cells, Biochemistry Moscow 2018, 83, 779-786; M.P. Ceballos, J.P. Rigalli, L.I. Ceré, M. Semeniuk, V.A. Catania, MX. Ruiz, ABC Transporters: Regulation and Association with Multidrug Resistance in Hepatocellular Carcinoma and Colorectal Carcinoma, Curr. Med. Chem. 2019, 26, 1224-1250]. NCI/ADR-RES - это линия клеток, служащая общепринятой моделью для изучения резистентности опухолевых клеток к химиотерапии [А. Vert, J. Castro, М. Ribó, М. Vilanova, A. Benito, Transcriptional profiling of NCI/ADR-RES cells unveils a complex network of signaling pathways and molecular mechanisms of drug resistance, Onco Targets Ther. 2018, 11, 221-237]. Определение IC₅₀ (IC₅₀ - концентрация, ингибирующая рост клеток на 50% по сравнению с контролем) заявленных в изобретении соединений Ia и Ic проводилось аналогично описанному выше с помощью МТТ-теста по стандартной методике, описанной в литературе [Т. Mossman, Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: Application to proliferation and cytotoxicity assays, J. Immunol. Methods 1983, 65, 55-63]. В качестве соединения сравнения использовался противоопухолевый препарат доксорубицин. Стандартные значения IC₅₀ для доксорубицина лежат в области 0.05-0.5 мкМ, однако больше 50% клеток NCI/ADR-RES выживает даже при концентрации доксорубицина 2 мкМ, что показывает высокий уровень устойчивости клеток NCI/ADR-RES к доксорубицину (Таблица 2).

Соединения общей формулы I на примере заявленных соединения Ia и Ic показали высокую антипролиферативную активность в отношении полирезистентных опухолевых клеток NCI/ADR-RES со значениями IC₅₀=1.5±0.3 мкМ для Ia и IC₅₀=3.5±0.5 мкМ для Ic (Таблица 3), что демонстрирует возможность использования заявленных соединений формулы I для преодоления устойчивости опухолевых клеток к химиотерапии.

Пример 22.

Селективность заявленных соединений по отношению к опухолевым клеткам MCF-7 по сравнению с клетками нормального эпителия MCF-10A. Современные стандарты разработки лекарственных средств указывают на необходимость оценки токсичности соединений на самых ранних этапах разработки. Это позволяет отобрать соединения, которые эффективно блокируют рост опухолевых клеток, но не повреждают нетрансформированные (нормальные) клетки. Для оценки потенциальной токсичности ведущего стероида Ic выбрана линия MCF-10A. Определение IC₅₀ (IC₅₀ - концентрация, ингибирующая рост клеток на 50% по сравнению с контролем) соединения Ic в отношении нормальных клеток MCF-10A проводилось аналогично описанному выше с помощью МТТ-теста по стандартной методике, описанной в литературе [Т. Mossman, Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: Application to proliferation and cytotoxicity assays, J. Immunol. Methods 1983, 65, 55-63]. В таблице 4 указаны полученные значения IC₅₀ для секостероида Ic в сравнении с известными ведущими секостероидами общей формулы III (3l, 3d, 3q) и эталонным соединением - противоопухолевым препаратом доксорубицином. Индекс селективности (ИС) рассчитан как отношение значений IC₅₀ для MCF-10A к значениям IC₅₀ для MCF-7.

Как видно из представленных данных, доксорубицин оказывает значительное токсическое воздействие на клетки нормального эпителия и не обладает селективностью в отношении опухолевых клеток. Заявленные в изобретении секостероиды общей формулы I на примере Ic превосходят по антипролиферативной активности известные ведущие секостероиды общей формулы III (3l, 3d, 3q), при этом ИС соединения Ic превышает ИС ведущих секостероидов общей формулы III (3l, 3d, 3q) на 48%. Таким образом, секостероиды общей формулы I на примере Ic являются высокотоксичными для опухолевых клеток и низкотоксичными для нормальных клеток. Техническим результатом предлагаемого изобретения является создание новых, неописанных в литературе, соединений общей формулы I, обладающих антипролиферативной активностью в отношении клеток рака молочной железы MCF-7. Большинство полученных соединений обладают максимальной антипролиферативной активностью (IC₅₀ от 2.5-5.0 мкМ) и превосходят по активности эталонный лекарственный препарат цисплатин (IC₅₀ 6.2 мкМ), продемонстрировали на примере секостероида Ic очень хорошую селективность в отношении опухолевых клеток (ИС=4.6) по сравнению с эталонным соединением доксорубином (ИС=0.2) и с известными секостероидами общей формулы III (3l, 3d, 3q), у которых ИС составляет от 2.5 до 3.1, а также показали на примере соединений Ia и Ic высокую антипролиферативную активность со значениями IC₅₀=1.5±0.3 мкМ для Ia и IC₅₀=3.5±0.5 мкМ для Ic в отношении полирезистентных опухолевых клеток NCI/ADR-RES, что демонстрирует возможность использования заявленных соединений I для преодоления устойчивости опухолевых клеток к химиотерапии.

Полученные соединения могут рассматриваться в качестве кандидатов для разработки противоопухолевых препаратов, в частности, для агрессивных раковых опухолей с множественной лекарственной устойчивостью.

Изобретение относится к новым [N'-(изо)хинолилметилен]гидразидам 3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты указанной ниже общей формулы, которые обладают антипролиферативной активностью в отношении клеток рака молочной железы MCF-7 и могут найти применение в медицине, ветеринарии, химико-фармацевтической промышленности и биотехнологии. 1 з.п. ф-лы, 4 табл., 22 пр.

R₁ и R₂=Н, Me, ОМе, Cl или F

1. [N'-(Изо)хинолилметилен]гидразиды 3-метокси-13,17-секоэстра-1,3,5(10)-триен-17-овой кислоты общей формулы

где

R₁ и R₂=Н, Me, ОМе, Cl или F.

2. Соединения по п. 1, обладающие антипролиферативной активностью в отношении клеток рака молочной железы MCF-7.