АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫЕ АГЕНТЫ Российский патент 2005 года по МПК A61K31/16 A61K38/05 A61P31/04 

Настоящее изобретение относится к применению производных N-формилгидроксиламина в качестве антибактериальных агентов, к новому классу указанных соединений, а также к фармацевтическим и ветеринарным композициям, содержащим указанные соединения.

Уровень техники.

Как правило, патогенные бактерии классифицируют либо как грамположительные, либо как грамотрицательные. Многие антибактериальные агенты (включая антибиотики) проявляют специфический эффект против того или иного грамположительного или грамотрицательного патогенного микроорганизма. Таким образом, антибактериальные агенты, которые эффективны как против грамположительных, так и против грамотрицательных патогенных микроорганизмов, как правило, относят к агентам, обладающим широким спектром действия

Известно много классов антибактериальных агентов, включая пенициллины и цефалоспорины, тетрациклины, сульфонамиды, монобактамы, фторхинолоны и хинолоны, аминогликозиды, гликопептиды, макролиды, полимиксины, линкозамиды, триметоприм и хлорамфеникол. Основные механизмы действия указанных классов антибактериальных агентов различны.

Растущей проблемой является устойчивость бактерий по отношению ко многим известным антибактериальным агентам. Соответственно существует постоянная потребность в создании альтернативных антибактериальнных агентов, особенно таких, у которых механизм действия существенно отличается от механизма действия известных классов.

Среди грамположительных патогенных микроорганизмов, таких как Staphylococci, Streptococci, Mycobacteria и Enterococci, устойчивые штаммы склонны к эволюционированию/размножению, что делает особенно трудным их уничтожение. Примерами таких штаммов являются устойчивый к метициллину Staphylococcus aureus (MRSA), устойчивые к метициллину коагулазно-негативные Staphylococci (MRCNS), устойчивые к пенициллину Streptococcus pneumoniae и устойчивые ко многим антибиотикам Enterococcus faecium.

Патогенные бактерии часто устойчивы к таким типам антибиотиков, как аминогликозиды, β-лактамы (пенициллины и цефалоспорины) и хлорамфеникол. Устойчивость включает ферментативную инактивацию антибиотиков путем их гидролиза или их перевода в неактивные производные.

Семейство β-лактамных антибиотиков (пенициллинов и цефалоспоринов) характеризуется наличием в их структуре β-лактамного кольца. Устойчивость к этому семейству антибиотиков в клинических культурах наиболее часто вызвана продуцированием устойчивыми бактериями фермента "пенициллиназы"(β-лактамазы), который гидролизует кольцо b-лактама, ликвидируя таким образом антибактериальную активность.

Недавно создалась напряженная ситуация с устойчивыми к ванкомицину штаммами enterococci (Woodford N. 1998 Устойчивые к гликопептидам enterococci: декада эксперимента. Journal of Medical Microbiology. 47(10):849-62). Устойчивые к ванкомицину enterococci особенно опасны в связи с тем, что они часто вызывают инфекции, требующие лечения в стационаре, и при этом им свойственна устойчивость по отношению ко многим антибиотикам. Ванкомицин работает за счет связывания с концевыми D-ALa-D-ALa остатками пептидиогликановых предшественников клеточной стенки. Повышенная устойчивость к ванкомицину известна как VanA, и она возникает за счет генов, локализованных на внутреннем элементе, который заменяет концевые остатки на D-Ala-D-lac, снижая, таким образом, сродство к ванкомицину.

В свете стремительного появления устойчивых ко многим лекарственным средствам бактерий крайне важным является поиск антибактериальных агентов, которые являются эффективными против возрастающего числа устойчивых бактерий, в особенности устойчивых к ванкомицину enterococci и бактерий, устойчивых к β-лактамным антибиотикам, таких как устойчивые к метициллину Staphylococcus aureus.

Краткое описание изобретения

Изобретение основывается на обнаружении того факта, что определенные производные N-формилгидроксиламина обладают антибактериальной активностью и являются новым доступным классом антибактериальных агентов. Было найдено, что соединения, которые относятся к настоящему изобретению, обладают антибактериальной активностью по отношению к ряду грамположительных и грамотрицательных организмов. Более того, является очевидным, что некоторые соединения проявляют антибактериальную активность по отношению к бактериям, которые устойчивы к обычно применяемым антибиотикам, таким как ванкомицин и β-лактамные антибиотики, например, таким как устойчивые к метициллину Staphylococcus aureus.

При этом представляет интерес установление механизма действия соединений, которые относятся к настоящему изобретению, т.е. их способности ингибировать рост бактерий, которая обуславливает полезность указанных соединений. Однако в настоящий момент считается, что их антибактериальная активность обеспечивается, по крайней мере частично, благодаря внутриклеточному ингибированию фермента полипептидной деформилазы (PDF).

Бактериальные полипептидные деформилазы (PDF) (ЕС 3.5.1.31), представляют собой консервативное семейство металлоферментов (Обзор: Meinnel Т, Lazennec С, Villoing S, Blanquet S, 1997, Journal of Molecular Biology 267, 749-761), которое определяет жизнеспособность бактерии, при этом их функцией является удаление формильной группы с N-концевого метионинового остатка синтезированных на рибосомах белков эубактерии. Mazel et al. (EMBO J. 13(4):914-923, 1994) недавно клонировал и охарактеризовал Е. coliPDF. Поскольку PDF является необходимой для роста бактерий и при этом отсутствует эукариотический аналог PDF, каждый из Mazel et al. (ibid). Rajagopalan et al. (J. Am. Chem. Soc. 119:12418-12419, 1997) и Bicker et al., (J. Biol Chem. 273(19):11413-11416, 1998) предположил, что (PDF) является прекрасной антибактериальной мишенью.

Некоторые производные N-формилгидроксиламина были ранее заявлены в ряде патентных публикаций, которые приведены ниже, тем не менее получено и описано лишь небольшое количество конкретных соединений.

EP-B-0236872 (Roche)

WO 92/09563 (Glycomed)

WO 92/04735 (Syntex)

WO 95/19965 (Glycomed)

WO 95/22966 (Sanofi Winthrop)

WO 95/33709 (Roche)

WO 96/23791 (Syntex)

WO 96/16027 (Syntex/Agouron)

WO 97/03783 (British Biotech)

WO 97/18207 (DuPont Merck)

WO 98/38179 (GlaxoWellcome)

WO 98/47863 (Labs Jaques Logeais)

Фармацевтическое применение указанных производных N-формилгидроксиламина в перечисленных публикациях определяется их способностью ингибировать металлопротеиназы матрикса (ММР) и, в некоторых случаях, высвобождать фактор некроза опухоли (TNF) а значит, и лечить такие заболевания или состояния, создаваемые этими ферментами, как раковые заболевания или ревматоидный артрит. Однако в предшествующем уровне техники не раскрывается и не подразумевается антибактериальная активность производных N-формилгидроксиламина.

В дополнение к перечисленным выше источникам информации US-A-4738803 (Roques et al.) также раскрывает производные N-формилгидроксиламина, однако эти производные описываются как ингибиторы энкефалиназы и предложены для использования в качестве антидепрессантов и гипотензивных агентов. Также WO 97/38705 (Bristol-Myers Squibb) раскрывает некоторые производные N-формилгидроксиламина в качестве ингибиторов энкефалиназы и ферментов, участвующих в превращении ангиотензина. В этом источнике информации также не раскрывается и не подразумевается какая-либо антибактериальная активность производных N-формилгидроксиламина.

Подробное описание изобретения.

Согласно первому аспекту настоящего изобретения обеспечивается применение соединения формулы (I) или его фармацевтически или ветеринарно приемлемой соли для приготовления антибактериальной композиции:

где R₁ представляет собой водород, или C₁-C₆ алкил или C₁-C₆ алкил, замещенный одним или более атомами галогена;

R₂ представляет собой группу R₁₀-(X)_n-(AЛK)_m-, где

R₁₀ представляет собой водород или C₁-C₆ алкильную, C₂-C₆ алкенильную, C₂-C₆ алкинильную, циклоалкильную, арильную, или гетероциклическую группу, каждая из которых может быть незамещенной или замещенной (С₁-С₆)алкилом, (C₁-C₆) алкокси, гидрокси, меркапто, (C₁-C₆) алкилтио, амино, галогеном (включая фтор, хлор, бром и иод), трифторметилом, циано, нитро, -СООН, -CONH₂, -COOR^A, NHCOR^A -CONHR^A -NHR^A, NR^AR^B, или CONR^AR^B, где R^A и R^B независимо представляют собой (C₁-C₆) алкильную группу, и АЛК представляет собой линейный или разветвленный двухвалентный C₁-C₆ алкиленовый, C₂-C₆ алкениленовый, или C₂-C₆ алкиниленовый радикал, который может быть разорван одной или более несоседними -NH-, -О- или -S- связями,

Х представляет собой -NH-, -O- или -S-,

и m и n независимо представляют собой 0 или 1;

и А представляет собой (i) группу формулы (IА), (IВ), (IC) или (ID)

где R₃ представляет собой водород и R₄ представляет собой боковую цепь природной или неприродной альфа-аминокислоты или R₃ и R₄, взятые вместе с атомами азота и углерода, к которым они соответственно присоединены, образуют необязательно замещенное насыщенное гетероциклическое кольцо от 5 до 8 атомов, которое необязательно сконденсировано с карбоциклическим или вторым гетероциклическим кольцом,

R₅ и R₆, независимо представляют собой водород, или необязательно замещенный C₁-C₈ алкил, циклоалкил, арил, арил(С₁-C₆ алкил), гетероциклил или гетероциклил(С₁-С₆ алкил), или R₅ и R₆, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют необязательно замещенное насыщенное гетероциклическое кольцо от 3 до 8 атомов, кольцо, которое необязательно сконденсировано с карбоциклическим или вторым гетероциклическим кольцом, и

R₇ представляет собой водород, C₁-C₆ алкил или ацильную группу.

В соответствии с другим аспектом изобретение обеспечивает способ лечения бактериальных инфекций у человека и других млекопитающих, который включает введение пациенту, страдающему от такой инфекции, антибактериально эффективного количества соединения формулы (I), как определено выше.

В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения обеспечивается способ лечения бактериального заражения путем нанесения антибактериально эффективного количества соединения формулы (I), как определено выше, на участок заражения.

Соединения формулы (I), как определено выше, могут быть применены в качестве компонентов очищающих антибактериальных или дезинфицирующих средств.

Согласно предпочтительному воплощению изобретение в его различных аспектах может быть использовано против бактерий, устойчивых к ванкомицину, хинолону, и "β-лактамам", а также инфекций, которые они вызывают.

Исходя из гипотезы, что соединения формулы (I) действуют как ингибиторы внутриклеточных PDF, наибольший антибактериальный эффект может быть достигнут в случае применения соединений, которые эффективно проникают через клеточную стенку бактерии. Таким образом, соединения, которые высокоактивны в качестве ингибиторов PDF in vitro и которые проникают в клетки бактерий, предпочтительны для применения в соответствии с изобретением. Можно ожидать, что антибактериальная эффективность соединений, которые являются потенциальными ингибиторами PDF ферментов in vitro, но плохо проникают в клетку, может быть улучшена путем их использования в пролекарственной форме, например, в виде их структурно модифицированного аналога, который превращается в первоначальную молекулу формулы (I), например, под действием фермента после проникновения через клеточную стенку бактерии.

Изобретение также включает новые соединения формулы (I), приведенной выше, или их фармацевтически или ветеринарно приемлемые соли,

где R₁ представляет собой водород, C₁-C₆ алкил или C₁-C₆ алкил, замещенный одним или более атомами галогена ;

R₂ представляет собой группу R₁₀-(АЛK)_m-, где

R₁₀ представляет собой водород, или C₁-C₆ алкильную, С₂-C₆ алкенильную, C₂-C₆ алкинильную, циклоалкильную, арильную или гетероциклическую группу, каждая из которых может быть незамещенной или замещенной (С₁-С₆)алкилом, (C₁-C₆)алкокси, гидрокси, меркапто, (С₁-С₆)алкилтио, амино, галогеном (включая фтор, хлор, бром и иод), трифторметилом, нитро, -СООН, -СОNH₂, -СООR^A, -NHCOR^A, -CONHR^A, -NHR^A, -NHR^AR^B, или -CONR^AR^B, где R^A и R^B независимо представляют собой (С₁-С₆)алкильную группу,

АЛК представляет собой линейный или разветвленный двухвалентный C₁-C₆алкиленовый, С₂-С₆алкениленовый, C₂-C₆алкиниленовый радикал, и он может быть разорван одной или более не соседними -NH-, -О- или -S- связями, и

m представляет собой 0 или 1;

А представляет собой группу формулы (IА), (IB), (IC) или (ID), приведенные выше, где:

R₃ представляет собой водород и R₄ представляет собой боковую цепь природной или неприродной альфа-аминокислоты или R₃ и R₄, взятые вместе с атомами азота и углерода, к которым они соответственно присоединены, образуют необязательно замещенное насыщенное гетероциклическое кольцо от 5 до 8 атомов, которое необязательно сконденсировано с карбоциклическим или вторым гетероциклическим кольцом,

R₅ и R₆, независимо представляют собой водород, или необязательно замещенный C₁-C₆алкил, циклоалкил, арил(С₁-С₆алкил), неароматический гетероциклил, или гетероциклил(C₁-С₆алкил), или R₅ и R₆, взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют необязательно замещенное насыщенное гетероциклическое кольцо от 3 до 8 атомов, которое необязательно сконденсировано с карбоциклическим или вторым гетероциклическим кольцом, и

R₈ представляет собой водород, C₁-C₆алкил или ацильную группу.

При условии, что (i) когда А представляет собой группу формулы (IA) или (IB) и R₂ представляет собой С₂-С₅алкил, тогда R₄ не является боковой цепью природной альфа-аминокислоты или боковой цепью природной альфа-аминокислоты, в которой любые функциональные заместители являются защищенными, любые аминогруппы ацилированными, и любые карбоксильные группы этерифицироваными;

(ii) когда А представляет собой группу формулы (IA) или (IB), тогда R₄ не является бициклоарилметильной группой; и

(iii) когда А представляет собой группу формулы (IA) и R₂ является циклопропилметилом, циклобутилметилом или циклопентилметилом и один из R₅ и R₆ представляет собой водород, тогда R₄ не является трет.-бутилом.

Как использовано здесь, термин "(C₁-C₆)aлкил" обозначает линейную или разветвленную цепь алкильного остатка, содержащего от 1 до 6 атомов углерода, включая например, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, t-бутил, н-пентил и н-гексил.

Термин "двухвалентный (С₁-С₆)алкиленовый радикал" обозначает насыщенную углеводородную цепь, содержащую от 1 до 6 атомов углерода и две свободные валентности.

Термин "(C₂-C₆)алкенил" обозначает линейную или разветвленную цепь алкенильного остатка, содержащего от 2 до 6 атомов углерода и содержащего по крайней мере одну двойную связь с либо Е или Z конфигурацией, где возможно. Термин включает, например, винил, аллил, 1- и 2-бутенил и 2-метил-2-пропенил.

Термин "двухвалентный (C₂-C₆)алкениленовый радикал" обозначает углеводородную цепь, содержащую от 2 до 6 атомов углерода, по крайней мере одну двойную связь, и две ненасыщенные валентности.

Термин "C₂-C₆алкинил" относится к линейным или разветвленным цепям углеводородных групп, содержащих от двух до шести атомов углерода и имеющих в дополнение одну тройную связь. Этот термин будет включать например, этинил, 1-пропинил, 1- и 2-бутинил, 2-метил-2-пропинил, 2-пентинил, 3-пентинил, 4-пентинил, 2-гексинил, 3-гексинил, 4-гексинил и 5-гексинил.

Термин "двухвалентный (C₂-C₆)алкиниленовый радикал" обозначает углеводородную цепь, содержащую от 2 до 6 атомов углерода, по крайней мере одну тройную связь, и две свободные валентности.

Термин "циклоалкил" обозначает насыщенный алициклический остаток, содержащий от 3-8 атомов углерода и включает, например, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и циклооктил.

Термин "циклоалкенил" обозначает ненасыщенный алициклический остаток, содержащий от 3-8 атомов углерода и включает, например, циклопропенил, циклобутенил, циклопентенил, циклогексенил, циклогептенил и циклооктенил. В случае циклоалкенильных колец из 5-8 атомов углерода кольцо может содержать более чем одну двойную связь.

Термин "арил" относится к моно-, би- или трициклической карбоциклической ароматической группе и к группам, состоящим из двух ковалентно связанных моноциклических карбоциклических ароматических групп. Иллюстрацией таких групп являются фенил, бифенил и нафтил.

Термин "гетероарил" относится к 5- или 6-членному ароматическому кольцу, содержащему один или более гетероатомов, и необязательно сконденсированному с бензильным или пиридильным кольцом; и к группам, состоящим из двух ковалентно связанных 5- или 6- членных ароматических колец, каждое из которых содержит один или более гетероатомов; и к группам, состоящим из моноциклической карбоциклической ароматической группы, ковалентно связанной с 5- или 6-членными ароматическими кольцами, содержащими один или более гетероатомов. Иллюстрацией таких групп являются тиенил, фурил, пирролил, имидазолил, бензимидазолил, тиазолил, пиразолил, изоксазолил, изотиазолил. триазолил, тиадиазолил, оксадиазолил, пиридинил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, триазинил, 4-([1,2,3]-тиадиазол-4-ил)фенил и 5-изоксазол-3-илтиенил.

Качественный термин "гетероциклический" или "гетероциклил" включает "гетероарил", как определено выше, и, в частности, обозначает 5-7-членное ароматическое или неароматическое гетероциклическое кольцо, содержащее один или более гетероатомов выбранных из S, N и O и необязательно сконденсированное с бензольным кольцом, включая, например, такие группы, как пирролил, фурил, тиенил, пиперидинил, имидазолил, оксазолил, тиазолил, тиадиазолил, пиразолил, пиридинил, пирролидинил, пиримидинил, морфолинил, пиперазинил, индолил, бензимидазолил, малеинимидо, сукцинимидо, фталимидо и 1,3-диоксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил.

Термин "ацил" обозначает группу R₂₀C(O)-, где R₂₀ представляет собой (C₁-C₆)алкил, (С₂-С₆)алкенил, (С₃-С₇)циклоалкил, фенил, гетероциклил, фенил(С₁-С₆)алкил, гетероциклил(С₁-С₆)алкил, (С₃-С₇)циклоалкил(С₁-С₆)алкил, фенил(С₂-С₆)алкенил, гетероциклил(С₂-C₆)алкенил, (С₃-C₇)циклоалкил (С₂-C₆)алкенил, каждая из групп R₂₀ может быть замещена.

Термин "бициклоарилметил" обозначает (i) метильную группу, замещенную моноциклической арильной или гетероарильной группой, которая в свою очередь замещена моноциклической арильной или гетероарильной группой, или (ii) метильную группу, замещенную моноциклической арильной и гетероарильной группой, которая сконденсирована со второй моноциклической арильной или гетероарильной группой; и включает как незамещенный, так и замещенный бициклоарилметил. Примеры таких бициклоарилметильных групп включают нафтил, индолил, хинолил и изохинолил.

Если специально не оговорено в контексте, где он используется, то термин "замещенный" в отношении любого остатка в данном описании обозначает замещенный вплоть до четырех заместителей, каждый из которых независимо может быть (С₁-С₆)алкилом, бензилом, (С₁-С₆)алкокси, фенокси, гидрокси, меркапто, (С₁-С₆)алкилтио, амино, галогеном (включая фтор, хлор, бром и иод), трифторметилом, нитро, -СООН, -CONH₂, -COR^A, -COOR^A, -NHCOR^A, -CONHR^A, -NHR^A, -NR^AR^B, или -CONR^AR^B, где R^A и R^B независимо представляют собой (C₁-C₆)алкильную группу. В случае когда "замещенным" является бензил, его фенильное кольцо само по себе может быть замещено любым из перечисленных заместителей за исключением бензила.

Термины "боковая цепь природной альфа-аминокислоты" и "боковая цепь неприродной альфа-аминокислоты" обозначают группу R^X соответственно природной и неприродной аминокислоты формулы NH₂-CH(R^X)-COOH.

Примеры боковых цепей природных альфааминокислот включают боковые цепи аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, цистина, глутаминовой кислоты, гистидина, 5-гидроксилизина, 4-гидроксипролина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, пролина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина, а-аминоадипиновой кислоты, а-амино-н-масляной кислоты, 3,4-дигидроксифенилаланина, гомосерина, а-метилсерина, орнитина, пипеколиновой кислоты и тирозина.

В боковых цепях природнах альфа-аминокислот, которые содержат функциональные заместители, такие группы как, например, амино, карбоксил, гидрокси, меркапто, гуанидил, имидазолил или индолил в аргинине, лизине, глутаминовой кислоте, аспарагиновой кислоте, триптофане, гистидине, серине, треонине, тирозине и цистеине, такие функциональные заместители могут быть необязательно защищены.

Аналогично, в боковых цепях неприродных альфа-аминокислот, которые содержат функциональные заместители, например, такие группы как амино, карбоксил, гидрокси, меркапто, гуанидил, имидазолил, или индолил, такие функциональные заместители могут быть необязательно защищены.

Термин "защищенный", когда используется по отношению к функциональному заместителю в боковой цепи природной или неприродной альфа-аминокислоты, обозначает производное такого заместителя, которое по существу нефункционально. Широко известный справочник Т. W. Greene и Р. G. Wuts "Protective Groups in Organic Synthesis" Второе Издание. Wiley, New York, 1991, освещает этот предмет. Например, карбоксильные группы могут быть этерифицированы (например как C₁-C₆ алкиловые сложные эфиры), аминогруппы могут быть переведены в амиды (например, как NHCOC₁-C₆ алкиламиды) или карбаматы (например, как NHC(=O)OC₁-C₆ алкил или NHC(=O)OCH₂Ph карбамат), гидроксильные группы могут быть переведены в простые эфиры (например, OC₁-C₆ алкиловые или O(C₁-C₆ алкил) фениловые простые эфиры) или сложные эфиры (например, SC(=O)C₁-C₆ алкиловый сложный эфир ) и тиольные группы могут быть превращены в простые тиоэфиры (например трет.-бутил- или бензилтиоэфир) или сложные тиоэфиры (например SC(=O)C₁-C₆ алкиловые тиоэфиры).

В соединениях согласно изобретению имеется несколько реальных или потенциальных хиральных центров, поскольку в них присутствуют асимметрические углеродные атомы. Присутствие нескольких асимметрических углеродных атомов приводит к увеличению числа диастереоизомеров с R или S стереохимией каждого хирального центра. Изобретение включает все эти диастереоизомеры и их смеси. Обычно наиболее предпочтительной стереоконфигурацией атома углерода, несущего группу R₂, является конфигурация R; при этом атом углерода, несущий группу R₄ (когда есть асимметрия), имеет конфигурацию S; и атом углерода, несущий группу R₁ (когда есть ассиметрия), имеет конфигурацию R.

В соединениях формулы (I), как определено выше, для использования согласно изобретениям, и в новых соединениях по изобретению формулы (II), как определено выше, ( с учетом перечисленных условий):

R₁ может быть, например, водородом, метилом, или трифторметилом. Водород обычно является наиболее предпочтительным.

R₂ может быть, например:

необязательно замещенным C₁-C₆алкилом, C₃-C₆ алкенилом, С₃-C₆алкинилом или циклоалкилом; фенил (C₁-C₆алкилом)-, фенил (С₃-C₆алкенилом)- или фенил(С₃-С₆алкинилом)-, необязательно замещенным в фенильном кольце; циклоалкил(С₁-С₆алкилом)-, циклоалкил(С₃-С₆ алкенилом)- или циклоалкил(С₃-C₆алкинилом)-, необязательно замещенным в циклоалкильном кольце; гетероциклил(С₁-С₆алкилом)-, гетероциклил(С₃-С₆алкенилом)- или гетероциклил (С₃-C₆алкинилом)-, необязательно замещенным в гетероциклическом кольце; или

СН₃(СН₂)_рО(СН₂)_q- или СН₃(СН₂)S(CH₂)_q-, где р имеет значения 0,1, 2 или 3 и q имеет значения 1, 2 или 3.

Конкретные примеры R₂ группы включают метил, этил, н- и изопропил, н- и изобутил, н-пентил, изопентил, 3-метил-бут-1-ил, н-гексил, н-гептил, н-ацетил, н-октил, метилсульфонилэтил, этилсульфонилметил, 2-метоксиэтил, 2-этоксиэтил, 2-этоксиметил, 3-гидроксипропил, аллил, 3-фенилпроп-3-ен-1-ил, проп-2-ин-1-ил, 3-фенилпроп-2-ин-1-ил, 3-(2-хлорфенил)проп-2-ин-1-ил, бут-2-ин-1-ил, циклопентил, циклогексил, циклопентилметил, циклопентилэтил, циклопентилпропил, циклогексилметил, циклогексилэтил, циклогексилпропил, фуран-2-илметил, фуран-3-метил, тетрагидрофуран-2-илметил, тетрагидрофуран-2-илметил, пиперидинилметил, фенилпропил. 4-хлорфенилпропил, 4-метилфенилпропил, 4-метоксифенилпропил, бензил, 4-хлорбензил, 4-метилбензил, и 4-метоксибензил.

Наиболее предпочтительными группами R₂ являются н-пропил, н-бутил, н-пентил, бензил и циклопентилметил.

Для R₃ наиболее предпочтительным примером является водород.

R₄ может быть, например, характерной группой природной а-аминокислоты, например бензилом или 4-метоксифенилметилом, в которой любая функциональная группа может быть защищена, любая аминогруппа может быть ацилирована и любая присутствующая карбоксильная группа может быть амидирована; или

группой -[AЛК]_nR₉, где АЛК представляет собой (С₁-С₆)алкиленовую или (С₂-С₆)алкениленовую группу, необязательно разорванную одним или более -O- или -S- атомами или -N(R₁₂)- группами [где R₁₂ представляет собой атом водорода или (C₁-C₆) алкильную группу], n представляет собой 0 или 1, и R₉ представляет собой водород или необязательно замещенный фенил, арил, гетероциклическую, циклоалкильную или циклоалкенильную группу или (только когда n имеет значение 1) R₉ может дополнительно представлять собой гидрокси, меркапто, (С₁-C₆) алкилтио, амино, галоген, трифторметил, нитро, -СООН, -CONH₂, -COOR^A, -NHCOR^A, -CONHR^A, -NHR^A, -NR^AR^B, или -CONR^AR^B, где R^A и R^в независимо представляют собой (С₁-C₆)aлкильную группу; или

бензильной группой, замещенной в фенильном кольце группой формулы -OCH₂COR₈, где R₈ является гидроксилом, амино, (С₁-С₆)алкокси, фенил(С₁-С₆)алкокси, (С₁-С₆)алкиламино, ди((С₁-С₆)алкил)амино, фенил(С₁-С₆) алкиламино; или

гетероциклил(С₁-С₆)алкильной группой, как незамещенной, так или моно- или дизамещенной в гетероциклическом кольце с помощью галогена, нитро, карбокси, (C₁-C₆)aлкокси, циано, (C₁-C₆)алканоила, трифторметил (C₁-С₆)алкила, гидрокси, формила, амино, (C₁-C₆)алкиламино, ди-(С₁-С₆)алкиламино, меркапто, (С₁-C₆)алкилтио, гидрокси(С₁-С₆)алкила, меркапто(С₁-С₆)алкила или (С₁-С₆)алкилфенилметила; или

группой -СR_aR_bR_c, в которой:

каждый из R_a, R_b, и R_c независимо представляют собой водород, (С₁-С₆)алкил, (С₂-С₆)алкенил, (С₂-С₆)алкинил, фенил(С₁-С₆)алкил, (С₃-C₈) циклоалкил; или

R_c является водородом и R_a и R_b независимо представляют собой фенил или гетероарил, такой как пиридил; или

R_c является водородом, (С₁-С₆)алкилом, (С₂-С₆)алкенилом, (С₂-С₆)алкинилом, фенил(С₁-С₆)алкилом, или (С₃-C₈)циклоалкилом, и R_a и R_b вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют 3-8-членное циклоалкильное или 5-6-членное гетероциклическое кольцо; или

R_a R_b, и R_c вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют трициклическое кольцо (например адамантил); или

R_a и R_b, каждый независимо представляют собой(С₁-С₆)алкил, (С₂-С₆)алкенил, (C₂-C₆)алкинил, фенил(С₁-С₆)алкил, или группу, как определено для R_c ниже, иную, чем водород, или R_a и R_b, вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют циклоалкильное или гетероциклическое кольцо, и R_c представляет собой водород, -ОН, -SH, галоген, -CN, -СО₂Н, (С₁-С₄)перфторалкил, -СН₂ОН, -СO₂(С₁-С₆)алкил, -O(С₁-С₆)алкил, -O(С₂-С₆)алкенил, -S(С₁-С₆)алкил, -SO(С₁-С₆)алкил, -SO₂(С₁-С₆)алкил, -S(С₂-C₆)алкенил, -SO(C₂-С₆)алкенил, -SO₂(С₂-С₆)алкенил или группу -Q-W, где Q представляет собой связь или -О-, -S-, -SO- или -SО₂- и W представляет собой фенил, фенилалкил, (С₃-С₈)циклоалкил, (С₃-С₈)циклоалкилалкил, (С₄-С₈)циклоалкенил, (C₄-С₈)циклоалкенилалкил, гетероарильную или гетероарилалкильную группу, причем указаная группа W может быть необязательно замещена одним или более заместителями, независимо выбранными из гидроксила, галогена, -CN, -СО₂Н, -СO₂(С₁-С₆)алкила, -CONH₂, -СОNH(C₁-С₆)алкила, -СОNН(С₁-С₆алкила)₂, -СНО, -СН₂ОН, (С₁-С₄)перфторалкила, -O(С₁-С₆)алкила, -S(С₁-С₆)алкила, -SO(C₁-С₆)алкила, -SО₂(С₁-С₆)алкила, -NО₂, -NH₂, -NН(С₁-С₆)алкила, -N((C₁-C₆)алкила)₂, -NНСО(С₁-С₆)алкила, (С₁-С₆)алкила, (С₂-С₆)алкенила, (С₂-С₆)алкинила, (С₃-С₈)циклоалкила, (С₄-С₈)циклоалкенила, фенила или бензила.

Примеры отдельных значений группы R₄ включают метил, этил, бензил, 4-хлорбензил, 4-гидроксибензил, фенил, циклогексил, циклогексилметил, пиридин-3-илметил, трет.-бутоксиметил, нафтилметил, изобутил, втор-бутил, трет.-бутил, 1-бензилтио-1-метилэтил, 1-метилтио-1 -метилэтил, 1-меркапто-1-метилэтил, 1-метокси-1-метилэтил, 1-гидрокси-1-метилэтил, 1-фтор-1-метилэтил, гидроксиметил, 2-гидроксиэтил, 2-карбоксиэтил, 2-метилкарбамоилэтил, 2-карбамоилэтил, и 4-аминобутил. Особенно предпочтительные значения группы R₄ включают трет.-бутил, изобутил, бензил и метил.

R₃ и R₄, взятые вместе с атомами азота и углерода, к которым они соответственно присоединены, могут образовывать необязательно замещенное насыщенное гетероциклическое кольцо от 5 до 8 атомов. Например, R₃ и R₄ могут образовать мостик между атомами азота и углерода, к которым они присоединены, причем указанный мостик представляет собой двухвалентный радикал -(СН₂)_3-6, или -(СН₂)_r-О-СН₂)_s, или -(CH₂)_r-S-(CH₂)_s-, где r и s каждый независимо имеют значения 1, 2 или 3, при условии,что r+s=2,3,4 или 5.

R₅ и R₆ могут независимо представлять собой, например, водород, метил, этил, трет.-бутил, циклопентил, циклогексил, 1,1,3,3-тетраметилбутил, бензил или 2-гидроксиэтил; или R₅ и R₆ взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовать насыщенное 5-8-членное моноциклическое N-гетероциклическое кольцо, которое присоединено через атом N и которое необязательно содержит -N(R₁₁)-, где R₁₁ - это водород или C₁-C₆алкил, бензил, ацил, или амино-защитная группа, О, S, SO или SO₂ в качестве звена кольца, и/или необязательно замещено по одному или более атомов С с помощью гидрокси, C₁-C₆алкила, гидрокси(С₁-C₆алкила)-, C₁-C₆алкокси, оксо, кетализированного оксо, амино, монo(C₁-C₆алкил)амино, ди(С₁-С₆алкил)амино, карбокси, C₁-C₆алкоксикарбонила, гидроксиметила, C₁-C₆алкоксиметила, карбамоила, моно(С₁-С₆алкил)карбамоила, ди(С₁-С₆алкил)карбамоила или гидроксиимино.

Примерами таких колец являются замещенный или незамещенный 1-пирролидинил, пиперидин-1-ил, 1-пиперазинил, гексагидро-1-пиридазинил, морфолин-4-ил, тетрагидро-1,4-тиазин-4-ил, тетрагидро-1,4-тиазин-4-ил 1-оксид, тетрагидро-1,4-тиазин-4-ил 1,1-диоксид, гексагидроазипино или октагидроазоцино.

Примерами вышеприведенных замещенных колец являются 2-(метилкарбамоил)-1-пирролидинил, 2-(гидроксиметил)-1-пирролидинил, 4-гидроксипиперидино, 2-(метилкарбамоил)пиперидино, 4-гидроксииминопиперидино, 4-метоксипиперидино, 4-метилпиперидин-1-ил, 4-бензилпиперидин-1-ил, 4-ацетилпиперидин-1-ил, 4-метил-1-пиперазинил, 4-фенил-1-пиперазинил, 1,4-диокса-8-азаспиро[4,5] декан-8-ил, гексагидро-3-(метилкарбамоил)-2-пиридазинил и гексагидро-1-(бензилоксикарбонил)-2-пиридазинил, декагидроизохинолин-2-ил, и 1,2,3.4-тетрагидроизохинолин-2-ил.

Когда А представляет собой группу формулы (IA), особенно предпочтительно, чтобы R₅ был метилом или водородом и R₆ был метилом.

R₇ может представлять собой, например, водород, или группу R₂₀C(O)-, где R₂₀ представляет собой (С₁-С₆)алкильную группу, такую как метил или этил.

Конкретные примеры соединений, применяемых в качестве антибактериальных агентов в соответствии с изобретением, включают те, которые включены в экспериментальную часть описания. Предпочтительные новые соединения по изобретению включают

2R(или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-этил)-амид и

2R(или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-3-циклопентил-пропионовой кислоты (1S-диметил-карбамоил-2,2-диметил-пропил)-амид

и их фармацевтически и ветиеринарно приемлемые соли.

Соединения, относящиеся к изобретению, могут быть получены путем снятия защиты с O-защищенного N-формил-N-гидроксиаминового соединения формулы (II):

в котором R₁, R₂, и А имеют значения, как определены в общей формуле (I) и R₂₅ является защитной группой гидроксила, удаляемой для высвобождения гидрокси группы путем гидрогенолиза или гидролиза. Бензильная группа является предпочтительной группой R₂₅ для удаления с помощью гидрогенолиза и трет.-бутильная и тетрагидропиранильная группы являются предпочтительными для удаления с помощью кислотного гидролиза.

Соединения формулы (II), где А представляет собой группу формулы (IA), (IB), (IC) или (ID), могут быть получены путем введения кислоты формулы (III) или ее активированного производного во взаимодействие с амином формулы (IVA), (IVB), (IVC) или (IVD) соответственно

где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆ и R₇ имеют значения, определенные в общей формуле (I) за исключением -ОН группы в (IVB), и любые заместители в R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆ и R₇, являющиеся потенциально реакционноспособными в реакциях конденсации, могут сами быть защищены от такой реакции, и R₂₅ имеет значения, определенные в соответствии с формулой (II), приведенной выше, и необязательного удаления защитных групп-ОН группы в (IVB) и R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆ и R₇.

Соединения формулы (III) могут быть получены путем N-формилирования, например, с использованием уксусного ангидрида и муравьиной кислоты, или 1-формилбензотриазола, соединений формулы (V)

где R₁, R₂ и R₂₅ такие, как определены в соответствии с формулой (II) и Х представляет собой либо вспомогательное хиральное вещество, либо группу OR₂₆, где R₂₆ является водородом или защитной группой гидроксила. В случае когда Х является группой OR₂₆ или вспомогательным хиральным веществом, защитную группу гидроксила или вспомогательное хиральное вещество удаляют после проведения стадии формилирования с получением соединения формулы (V). Подходящие вспомогательные хиральные вещества включают замещенные оксазолидиноны, которые могут быть удалены гидролизом в присутствии основания.

В альтернативном процессе соединения общей формулы (II) могут быть получены путем N-формилирования, например, с использованием уксусного ангидрида и муравьиной кислоты, или 1-формилбензотриазола, соединений формулы (VI)

где R₁, R₂, R₂₅ и А такие, как определены в формуле (II). Соединения формулы (VI), где А представляет собой группу формулы (IA), (IВ), (IС) или (ID) могут быть получены путем введения кислоты общей формулы (VII) или ее активированного производного

где R₁, R₂ и R₂₅ такие, как определены в формуле (II), во взаимодействие с амином формулы (IVA), (IVB), (IVC) или (IVD) соответственно, как определено выше.

Альтернативно соединения общей формулы (VI) могут быть получены восстановлением оксима общей формулы (VIII).

Восстанавливающие агенты включают определенные гидриды металлов (например, цианоборгидрид натрия в уксусной кислоте, триэтилсилан или боран/пиридин) и водород в присутствии подходящего катализатора.

В альтернативном процессе соединения общей формулы (II), где R₁, и R₂ такие, как определены в общей формуле (I), R₂₅ представляет собой защитную группу гидроксила, как определено выше, и А является группой формулы (IA), где R₃, R₄, R₅ имеют значения, определенные в общей формуле (IA) и R₆ представляет собой водород, могут быть получены с помощью 4-компонентной Ugi реакции карбоновой кислоты общей формулы (III) как определено выше, амина формулы (IX), альдегида формулы (X) и изонитрила формулы (XI).

R₃-NН₂ (IX)

R₄-CHO (X)

R₅-CN (XI)

где R₃, R₄ и R₅ такие как, определено выше.

Соединение общей формулы (V) может быть получено путем восстановления оксима общей формулы (XI)

где R₁, R₂ и R₂₅ имеют значения, как определено выше, и Х представляет собой либо группу ОR₂₅, как определено выше, либо вспомогательное хиральное вещество. Восстанавливающие агенты включают определенные гидриды металлов (например, цианоборгидрид натрия в уксусной кислоте, триэтилсилан или боран/пиридин) и водород в присутствии подходящего катализатора. После стадии восстановления, когда Х представляет собой вспомогательное хиральное вещество, она может быть необязательно переведена в OR₂₆ группу.

Соединение общей формулы (XI) может быть получено путем реакции β-кетокарбонильного соединения общей формулы (XII)

где R₁, R₂, и Х имеют значения, как определено выше, с O-защищенным гидроксиламином.

β-кетокарбонильные соединения (XII) могут быть получены в виде рацематов путем формилирования или ацилирования карбонильного соединения общей формулы (XIII)

где R₂ и Х имеют значения, как определено выше, соединением общей формулы (XIV)

где R₁, имеет значения, как определено выше и Z представляет собой уходящую группу, такую как галоген или алкокси, в присутствии основания.

Другим способом получения соедингения общей формулы (V) является присоединение производного гидроксиламина по Михаэлю к α,β-ненасыщенным карбонильным соединениям общей формулы (XV)

где R₁, R₂, и Х имеют значения, как определено выше. После проведения реакции присоединения по Михаэлю, в случае когда группа Х представляет собой вспомогательное хиральное вещество, она может быть необязательно переведена в OR₂₆ группу. (α,β-Ненасыщенные карбонильные соединения (XV) могут быть получены при помощи стандартных способов.

Соли соединений по изобретению включают физиологически приемлемые кислотно-аддитивные соли, например хлоргидраты, бромгидраты, сульфаты, метансульфонаты, п-толуолсульфонаты, фосфаты, ацетаты, цитраты, сукцинаты, лактаты, тартраты, фумараты и малеаты. Возможно также образование солей с основаниями, таких как натриевых, калиевых, магниевых и кальциевых солей.

Композиции по изобретению для любого пути введения могут быть получены в соответствии с фармакокинетическими свойствами активного (ных) ингредиента(ов).

Вводимые перорально композиции могут быть в форме таблеток, капсул, порошков, гранул, пастилок, жидких или гелевых составов, таких как пероральные, местно наносимые, или парентеральные стерильные растворы или суспензии. Таблетки и капсулы для перорального введения могут быть в форме одноразовой дозы и содержать традиционные наполнители, такие как связывающие агенты, например, сиропы, аравийскую камедь, желатин, сорбитол, трагакант или поливинилпирролидон; другие наполнители, например лактозу, сахар, маисовый крахмал, фосфат кальция, сорбитол или глицин; смазывающее вещество для таблеток, например стеарат магния, тальк, полиэтиленгликоль или диоксид кремния; разрыхлители, например картофельный крахмал, или приемлемлемые смачивающие агенты, такие как лаурилсульфат натрия. Таблетки могут быть покрыты оболочкой по методике, хорошо известной из обычной фармацевтической практики. Жидкие перорально вводимые составы могут быть, например, в форме водных или масляных суспензий, растворов, эмульсий, сиропов или эликсиров, или они могут находится в виде сухого вещества, готового для разведения водой или другим пригодным разбавителем перед употреблением. Такие жидкие составы могут содержать обычные добавки, такие как суспендирующие агенты, например сорбитол, сироп, метилцеллюлозу, сироп глюкозы, желатин, гидрированные пищевые жиры, эмульгирующие агенты, например летицин, моноолеат сорбитана или аравийскую камедь; неводные разбавители, (которые могут включать пищевые жиры), например миндальное масло, фракционированное кокосовое масло, масляные эфиры, такие как глицерин, пропиленгликоль или этиловый спирт; консерванты, например, метил- или пропил п-гидроксибензоат или сорбиновую кислоту и, по желанию, обычные отдушки и красители.

Для местного нанесения на кожу активный(е) ингредиент(ы) могут быть добавлены в кремы, лосьоны или мази. Составы кремов или мазей, которые могут быть использованы для производства лекарственных средств, представляют собой обычные составы, хорошо известные из уровня техники и описанные, например, в стандартных фармакопейных справочниках, таких как British Pharmacopoeia.

Активный(е) ингредиент(ы) могут быть также введены парентерально в стерильной среде. В зависимости от используемых разбавителей и концентрации лекарственное средство может быть либо суспендировано в нем, либо растворено. Преимущественно в разбавителе могут быть растворены адьюванты, такие как местные анестетики, консерванты или буферные агенты. Другим путем введения соединений по настоящему изобретению является внутривенное вливание.

Безопасные и эффективные дозировки для различных типов пациентов и различных уровней развития болезней будут определяться во время клинических испытаний в соответствии с принятыми нормами в этой области. Должно быть понятно, что уровень специфической дозы для каждого отдельного пациента будет зависеть от множества факторов, включая активность конкретного применяемого соединения, возраст, вес пациента, общее состояние его здоровья, пол, диету, время введения, способ введения, скорость выделения, комбинации лекарственных средств, жесткости проводимой терапии.

Открытие того факта, что соединения с PDF ингибирующей активностью могут ингибировать или предотвращать рост бактерий, открывает новый подход для идентифицирования новых антибактеральных агентов путем скрининга тестовых соединений на активность в качестве ингибиторов PDF in vitro с последующим подтверждением их антибактериальной способности путем изучения ингибирования роста бактерий. Это открытие делает также доступным (i) применение соединений с PDF ингибирующей активностью в качестве антибактериальных агентов, и (ii) способ лечения бактериальных инфекций или заражений путем нанесения или введения соединения, которое ингибирует активность бактериальной PDF.

Таким образом, согласно следующему аспекту изобретения обеспечивается способ идентификации антибактериальных соединений, включающий скрининговое тестирование соединений на их способность ингибировать PDF in vitro, отбор тех соединений, которые проявляют указанную способность и тестирование их на способность ингибировать рост бактерий. Способность ингибировать рост бактерий может быть продемонстрирована путем классических исследований ингибирования роста бактерий с использованием культур в жидкой или на твердой питательной среде, таких как представлены в приведенном здесь биологическом эксперименте.

Подходящий скрининг ингибирования PDF in vitro может заключаться в смешивании друг с другом PDF, PDF субстрата, предпочтительно меченного детектируемым маркером, и тестируемого соединения, с последующим определением через подходящий отрезок времени, ингибируется или нет в присутствии тестируемого соединения способность PDF деформилировать субстрат.

В предпочтительном воплощении изобретения расщепляемый субстрат детектируют с помощью флуорогенного маркера, такого как флуорескамин. После удаления формильной группы с N-концевого метионина в субстрате PDF свободная аминогруппа реагирует с флуорескамином, генерируя флуоресцентный продукт.

Альтернативный скрининг включает оценку того, является ли белок, экспрессированный бактериями, которые экспрессируют эндогенную (или рекомбинантно экспрессирующуюся) PDF, в случае когда бактерии выращивают в присутствии тестируемого соединения, подходящим субстратом для N-концевого секвенирования, или он обеспечивает меньшее количество субстрата, чем белок, экспрессированный теми же бактериями, выращенными в отсутствие тестируемого соединения. Такой способ может быть основан на том материале, который использован в биологическом эксперименте описания.

Специалист в данной области может, не выходя за рамки изобретения, разработать альтернативные методы скрининга тестируемых соединений с точки зрения их способности ингибировать бактериальные PDF.

Природный антибиотик актинонин (см., например J.С.S Perkin I, 1975, 819) представляет собой производное гидроксамовой кислоты структуры (А):

Помимо актинонина антибактериальная активность была определена для его различных структурных аналогов (см., например Broughton et al. (Devlin et al. Journal of the Chemical Society. Perkin Transactions 1 (9):830-841, 1975; Broughton et al. Journal of the Chemical Society. Perkin Transactions 1 (9):857-860, 1975).

Однако до сих пор не установлен механизм действия, лежащий в основе антибактериальной активности актинонина. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что актинонин ингибирует активность бактериальных PDF.

Матлистатиновая группа соединений относится к ряду структур, сходных с актинонином. Все они являются пептидными молекулами с функциональными гидроксамовой кислоты группами, связывающими металл. (Ogita et al., J. Antibiotics. 45(11):1723-1732; Tanzawa et al., J. Antibiotics. 45(11): 1733-1737; Haruyama et ai., J. Antibiotics. 47(12): 1473-1480; Tamaki et al. J. Antibiotics. 47(12): 1481-1492). Матлистатины и их близкие структурные аналоги характеризуются наличием в молекуле двухвалентной пиперазин-1,6-диильной группы, т.е.:

Ввиду того, что они являются близкими по структуре к актинонину, наблюдение того, что актинонин ингибирует PDF, подразумевает, что и матлистатиновые соединения также могут ингибировать PDF.

Согласно следующему аспекту настоящего изобретения обеспечивается применение соединения, которое ингибирует активность бактериальной PDF, для приготовления антибактериальной композиции или агента, при условии

(i) что соединение не является соединением формулы (XI)

RCO-CH(W)-NH-CO-CH(Y)-CH₂-CO-NH-OH (XI)

где (a) R представляет собой циклическую амино группу, W представляет собой водород, метил, изопропил, изобутил или бензил, и Y представляет собой водород, C₁-C₆алкил, фенил, бензил, 4-хлорфенилметил, 4-нитрофенилметил или 4-аминофенилметил; или

(b) R представляет собой 2-пиридиламино или 2-тиазолиламино, W является изопропилом и Y является н-пентилом; или

(c) R представляет собой диэтиламино, W является метилом или изопропилом и Y является н-пентилом;

или (ii) что соединение не является соединением, содержащим двухвалентную пиперазин-1,6-диильную группу, т.е., группу формулы (ХII):

Согласно другому аспекту изобретения обеспечивается способ лечения бактериальных инфекций или заражений путем введения пациенту, страдающему от такой инфекции или заражения, или нанесения на участок такой инфекции или заражения, антибактериально эффективного количества соединения, которое ингибирует активность бактериального PDF фермента, при условии, что соединение не относится к соединениям, включенным в условия, перечисленные в предыдущем абзаце.

Эти условия исключают актинонин и его антибактериально активные аналоги, раскрытые в Devlin et al., Journal of the Chemical Society. Perkin Transactions 1 (9):830-841, 1975 и Broughton et al. Journal of the Chemical Society. Perkin Transactions 1 (9):857-860,1975, и матлистатиновые соединения, раскрытые в Ogita et al., J. Antibiotics. 45(11): 1723-1732; Tanzawa et al., J. Antibiotics. 45(11): 1733-1737; Haruyama et al., J. Antibiotics. 47(12): 1473-1480 и Tamaki et al., J.Antibiotics. 47(12):1481-1492.

Следующие примеры иллюстрируют осуществление изобретения. L-трет.-лейцин-N-метиламид и L-трет-лейцин-N.N-диметиламид и другие производные аминокислот получают в соответствии с методиками, известными из уровня техники. Были использованы следующие сокращения:

DMF - N,N-Диметилформамид, ДМФА

EDC - N-Этил-N'-(3-диметиламинопропил)карбодиимид хлоргидрат

HOAt - 1 -Гидрокси-7-аза-бензотриазол

HOBt - 1-Гидроксибензотриазол

HPLC - Высокоэффективная жидкостная хроматография

LRMS - Масс спектрометрия низкого разрешения

TLC - Тонкослойная хроматография

 ¹Н и ¹С ЯМР спектры были записаны с использованием спектрометра Bruker AC 250E при 250.1 и 62.9 МГц соответственно; с - синглет, д - дуплет, м - мультиплет, т - триплет, кв - квартет.

Масс спектры были получены на спектрометре Perkin Elmer Sciex API 165 с использованием как положительного, так и отрицательного ионных режимов.

Инфракрасные спектры записаны на спектрометре Perkin Elmer РЕ 1600 FTIR.

Пример 1

2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты-(2,2-диметил-1S-метил-карбамоил-пропил)-амид

Названное соединение получают в соответствии со схемой 1 и как детально описано ниже:

Реагенты и условия:

А. пиперидин, НСНО, EtOH, 80°С, о/н;

В. H₂NOBzl, 80°С о/н;

С. НСООН, Ac₂O;

D. Пентафторфенол, EDC, СH₂Cl₂;

Е. Н-трет.-LeuNHMe, ДМФА, 35°С;

F. H₂, 10% Pd/C, EtOAc/EtOH.

СТАДИЯ А: 2-Бутил-акриловая кислота

Бутилмалоновую кислоту (25 г, 156 ммоль) растворяют в этаноле (250 мл) и добавляют 37% раствор формальдегида (15,45 мл, 156 ммоль), а затем пиперидин (47 мл, 624 ммоль). Смесь перемешивают в течение ночи при 80°С с обратным холодильником. Растворители удаляют при пониженном давлении и остаток разбавляют 1 М соляной кислотой и экстрагируют дихлорметаном (3х30 мл). Объединенные органические экстракты промывают рассолом, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают, чтобы получить желаемый продукт в виде желтого масла (25 г, с остаточным растворителем). ¹Н-ЯМР: δ (СDСl₃), 10.04 (1Н, уширенный с), 6.22 (1Н, с), 5.57 (1Н, д, J=1.3 Гц), 2.30 (2Н, т, J=6.9 Гц), 1.38 (4Н, м), и 0.91 (3Н, т, J=7.2 Гц).

СТАДИЯ В: 2RS-(Бензилокси-амино-метил)-гексановая кислота

Смесь 2-бутил-акриловой кислоты (3,43 г, 27,1 ммоль) и 0-бензилгидроксиламина (5 г, 40,65 ммоль) нагревают при 80°С в течение ночи. Смесь охлаждают до комнатной температуры, разбавляют этилацетатом (40 мл), и промывают 1 М соляной кислотой (3х20 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (2х20 мл) и рассолом (2х20 мл), сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают с получением названного соединения в виде белого твердого вещества (2.62 г, 39%). ¹H-ЯМР: δ (CDCl₃). 8.05 (1H, уширенный с), 7.35 (5Н, м), 5.00 (2Н, м), 3.28 (2Н, м), 2.98 (1H, м), 1.31 (6Н, м) и 0.88 (3Н, т, J=5.0 Гц).

Стадия С: 2RS-[(Бензилокси-формил-амино)-метил]-гексановая кислота

2RS-(Бензилоксиамино-метил)-гексановую кислоту (2,62 г, 10,51 ммоль) растворяют в муравьиной кислоте (4 мл, 105 ммоль) и уксусном ангидриде (1,9 мл, 21,02 ммоль) и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Раствор разбавляют этил ацетатом (40 мл), промывают водой (2х20 мл), насыщенным раствором бикарбоната натрия (20 мл) и рассолом (20 мл), сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают с получением желаемого продукта в виде желтого масла (2,9 г, 99%). ¹H-ЯМР: δ (CDCl₃, ротамеры), 8.21 (0.5Н, с), 8.14 (0.5Н, с), 7.37 (5Н, м), 4.98 (2Н, м), 3.86 (1H, м), 3.27 (0.5Н, дд, J=6.0, 14.0 Гц), 2.93 (0.5Н, м), 2.77 (1Н, м). 1.50 (2Н, м), 1.30 (4Н, м) и 0.88 (3Н, м).

СТАДИЯ D: 2RS-[(Бензилокси-формил-амино)-метил]-гексановой кислоты пентафторфениловый эфир

2RS-[(Бензилокси-формиламинометил]-гексановую кислоту (30,72 г, 110 ммоль) и пентафторфенол (26,31 г, 143 ммоль) растворяют в дихлорметане (150 мл) и раствор перемешивают и охлаждают на бане со льдом во время прибавления EDC (25,3 г, 131 ммоль). Реакционной смеси дают нагреться до комнатной температуры и ее перемешивают в течение ночи. Раствор промывают последовательно 1 М соляной кислотой (2х50 мл), 0.5 М карбонатом натрия (2х50 мл) и рассолом (50 мл), сушат над безводным сульфатом магния и фильтруют. Фильтрат упаривают при пониженном давлении и остаток очищают путем флэш хроматографии (силикагель, дихлорметан), чтобы получить названное соединение в виде бесцветного масла (15.0 г, 31%). ¹H-ЯМР: δ (CDCl₃, ротамеры), 8.17 (1Н, уширенный с), 7.37 (5Н, м), 4.95-4.70 (2Н, уширенный м), 4.10-3.75 (2Н, уширенный м), 3.10 (1Н, уширенный с), 1.88-1.55 (2Н, м), 1.39 (4Н, м) и 0.92 (3H,T,J=7.0 Гц).

СТАДИЯ Е: 2R (или S)-[(Бензилокси-формил-амино)-метил]-гексановой кислоты (2,2-диметил-1-метилкарбамоилпропил)-амид

2RS-[(Бензилокси-формил-амино)-метил]-гексановой кислоты пентафторфениловый эфир (5 г, 11 ммоль) и трет.-лейцин N-метиламид (1,62 г, 11 ммоль) растворяют в ДМФА (60 мл) и смесь перемешивают в течение ночи при 35°С. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток перерастворяют в дихлорметане. Раствор промывают последовательно 0.5 М карбонатом натрия, 1.0 М соляной кислотой и рассолом, сушат над безводным сульфатом магния и фильтруют. Два диастереоизомерных продукта разделяют путем флэш хроматографии (силикагель, градиент элюирования от 30% до 0%, гексан в этилацетате). Диастереоизомер А (более высокое значение R): ¹H-ЯМР: δ (CDCl₃, ротамеры), 8.12, 7.87 (1H, 2 уширенный с), 7.27 (5Н, м), 6.26 (1Н, д, J=8.7 Гц), 5.78 (1Н, уширенный с), 4.91-4.60 (2Н, уширенный м), 4.15 (1H, д, J=2 Гц), 3.75 (2Н, уширенный м), 2.79 (3Н, д, J=4.8 Гц), 2.56 (1Н, м), 1.60 -1.35 (2Н, уширенный м), 1.24 (4Н, м), 0.96 (9Н, с) и 0.86 (3Н, т, J=6.7 Гц). Диастереоизомер В (более низкое значение R_f): ¹H-ЯМР: δ (CDCl₃, ротамеры), 8.16, 7.88(1Н, 2 уширенных синглета), 7.27 (5Н, м), 6.28 (1Н, д, J=8.9 Гц), 5.70-5.44(1Н, уширенный с), 4.98-4.61(2Н, уширенный м), 4.14 ОН, д, J=9.2 Гц), 3.78-62 (2Н, уширенный м), 2.85-2.60 (3Н, уширенный м), 2.47(1Н, м), 1.72-1.25 (6Н, уширенный м), 0.98 (9Н, с) и 0.88 (3H,T,J=6.7 Гц).

СТАДИЯ F: 2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (2,2-диметил-1S-метилкарбамоилпропил)-амид.

2-[(Бензилокси-формиламино)-метил]-гексановой кислоты-(2,2-диметил-1-метилкарбамоилпропил)-амид (диастереоизомер А) (1,0 г, 2.5 ммоль) растворяют в смеси этилацетата (20 мл) и этанола (1 мл) и раствор помещают в атмосферу аргона. Добавляют 10% палладий на угле и барботируют тонкую струю водорода через суспензию. Через 40 минут TLC анализ показал, что весь исходный продукт был израсходован, при этом остались более полярные положительные частицы хлорида железа. Систему продувают аргоном, прежде чем удаляют катализатор фильтрованием. Фильтрат упаривают досуха с получением названного соединения в виде не очень белой пены (810 мг, включая остаточный растворитель). ¹H-ЯМР: δ ((CD₃)₂SO, ротамеры), 9.81, 9.41 (1Н, 2 уширенных синглета), 7.82-7.60 (3Н, м), 4.04 (1Н, д, J=9.3 Гц). 3.50-3.02 (2Н, м). 2.87-2.60 (1Н, м), 2.41 (3Н, д, J=4.5 Гц), 1.39-0.93 6Н, м), 0.75 (9Н, с) и 0.67 (3Н, т, J=5.7 Гц). ¹³С-ЯМР: δ ((СD₃)₂СО), 172.5, 170.2. 157.5, 59.9, 42.8, 33.3. 29.0, 28.4, 28.2, 26.4, 24.8, 21.7 и 13.3. ИК (КВr, табл), v_max 3309, 2959, 2873, 1646 и 1540 см-¹.

2-[(Бензилокси-формил-амино)-метил]-гексановой кислоты-(2,2-диметил-1-метилкарбамоилпропил)-амид (диастереоизомер В) (1,0 г, 2.5 ммоль) был также подвергнут снятию защиты с получением диастереоизомера В названного соединения (740 мг, 97%). ¹Н-ЯМР: δ ((CD₃)₂SO, ротамеры), 9.75, 9.30 (1Н, 2 уширенных синглета), 7.81-7.42 (3Н, м), 4.04 (1Н, д, J=9.5 Гц), 3.53-3.02 (2Н, м), 2.80-2.55 (1Н, м), 2.41 (3Н, д, J=4.5 Гц), 1.33-0.82 (6Н, м), 0.72 (9Н, с) и 0.67 (3Н, т, J=6.7 Гц). ¹³С-ЯМР: δ ((СD₃)₂SO), 172.6, 170.4, 161.7, 157.0, 59.8, 34.0, 29.4, 28.6, 26.7, 25.2, 22.1 и 14.1. ИК (КВг табл.), v_max, 3312, 2959, 1640, 1541, 1369 и 1240 см-¹.

Пример 2

2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (2,2-диметил-15-трет.-бутилкарбамоилпропил)-амид

Названное соединение получают аналогично методике примера 1, используя L-трет.-лейцин-N-трет.-бутиламид вместо L-трет.-лейцин-N-метиламида на Стадии Е. Диастереоизомеры, не разделяемые флэш хроматографией (силикагель, этилацетат) на Стадии Е, превращают в смесь желаемых производных N-формил-гидроксиламина путем гидрогенолиза. Получают белое твердое вещество. ¹³С-ЯМР: δ ((СD₃)₂SO), 172.8, 172.5, 170.1, 169.6, 161.6, 156.9, 59.9, 59.7, 51.9, 51.7, 50.2, 49.6, 48.3, 43.2, 43.1, 42.7, 34.2, 34.0, 29.6, 29.3, 29.2, 28.8, 28.6. 26.7, 22.2, 22.1, 20.3 и 13.9. ИК (KBr), v_max, 3311, 2964, 1639, 1548, 1456, 1394, 1364 и 1226 см^-1.

Пример 3

2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (1S-метил-2-морфолин-4-ил-2-оксоэтил)-амид

Раствор 2RS-[(бензилокси-формиламино)-метил]-гексановой кислоты пентафторфенилового эфира (Пример 1, Стадия D) (445 мг, 1 ммоль) в ДМФА (5 мл) добавляют к L аланин-N-морфолинамиду (158 мг, 1 ммоль) в пробирке и перемешивают при 35°С в течение ночи. ДМФА удаляют под вакуумом, остаток вновь растворяют в дихлорметане (2 мл) и пропускают через очищающий угольный брикет (картридж) (Icolute-NH;), элюируя дихлорметаном (4 мл) для того, чтобы удалить пентафторфенол. Дихлорметан удаляют при пониженном давлении и остаток вновь растворяют в муравьиной кислоте (2 мл) и этилацетате (2 мл). Затем раствор обрабатывают 10% палладием на угле (200 мг) и перемешивают при комнатной температуре 2 часа. Катализатор удаляют фильтрованием через целит, хорошо промывают метанолом и растворитель удаляют под вакуумом. Соединения очищают путем HPLC с обращенной фазой (градиент элюирования, 10-90% ацетонитрил/вода). Диастереоизомер А: ¹Н-ЯМР; δ (СО₃OD), 8.03 (0.5Н, с), 7.84 (0.5Н, с), 4.75 (1Н, м), 3.65 (8Н, м), 3.39 (1Н, м), 3.24(1Н, дд, J=4.0, 13.2 Гц), 2.84 (1Н, м), 1.57 (2Н, м), 1.34 (7Н, м), и 0.92 (3Н, м). LRMS: -ve ион 328 [М-Н]. Диастереоизомер В: ¹H-ЯМР; δ (CD₃OD), 3.66 (8Н, м), 3.41 (1Н, дд, J=9.98, 13.1Гц), 3.23 (1Н, м), 2.90 (0.5Н, м), 2.71 (0.5Н, м), 1.62(2Н, м), 1.33(7Н, м), и 0.92 (3Н, т, J=6.7 Гц). LRMS: -ve ион 328 [М-Н].

Соединения по примерам от 4 до 12 получают путем, аналогичным описанному в примере 3, используя подходящий амин или амино-компонент вместо L-аланин-N-морфолинамида. В случае когда получают оба диастереоизомера, диастереоизомер А элюируется быстрее и он является более активным против PDF in vitro. В некоторых случаях только продукт, вытекающий быстрее, подвергался дальнейшим превращениям до конечного соединения.

Пример 4

2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (1S-диметилкарбамоилэтил)-амид

Диастереоизомер А: ¹Н-ЯМР; δ (CD₃OD), 4.72 (1Н, м), 3.53 (1H. дд, J=8.9, 13.0 Гц), 3.23 (1H, м). 3.14 (3Н, с), 2.95 (3Н, с). 2.83 (0.5Н, м). 2.74 (0.5Н. м), 1.57 (2Н, м), 1.33 (7Н, м) и 0.92 (3Н, м). LRMS; +ve ион 288 [М+Н], -ve ион 286 [М-Н].

Диастереоизомер В: ¹H-ЯМР; δ (CD₃OD), 4.74 (1Н, м), 3.41 (1H, дд, J=9.9. 13.0 Гц), 3.25 (1H, дд, J=4.0, 13.1 Гц), 3.15 (3Н, с), 2.97 (3Н, с), 2.89 (0.5Н, м), 2.72 (0.5 Н, м), 1.53 (2Н, м), 1.33 (7Н, м) и 0.93 (3Н, т, J=6.7 Гц). LRMS: +ve ион 310 [M+Na], -ve ион 286 [М-Н].

Пример 5

2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (1S-гидроксиметил-3-метил-бутил)-амид

Диастереоизомер А: ¹H-ЯМР; δ (CD₃OD), 4.07 (1H, м), 3.55 (1H, м), 3.45 (2Н, м), 3.20 (1H, м), 2.85 (0.5Н, м), 2.80 (0.5Н, м), 1.60 (3Н, м), 1.35 (6Н, м) и 0.93 (9Н, м). LRMS: +ve ион 289 [М+Н], -ve ион 287 [М-Н]. Диастереоизомер В: ¹H-ЯМР; δ (CO₃OD), 4.07 (1H, м), 3.59 (1H, м), 3.45 (2Н, м), 3.24 (1H, м), 2.70 (1Н, м), 1.62 (3Н, м), 1.35 (6Н, м) и 0.93 (9Н, м). LRMS: +ve ион 311 [M+H], 289 [М+Н], -ve ион 287 [М-Н].

Пример 6

2R (или S)-[(Формилгидроксиамино)-метил]-гексановой кислоты (1S-гидроксиметил-2-фенилэтил)-амид

Диастереоизомер А: ¹H-ЯМР; δ (СО₃ОD), 7.24 (5Н, м), 4.15 (1Н, м), 3.54 (2Н, д, J=5.4 Гц), 3.38 (1Н, дд, J=7.8, 13.1 Гц), 3.14 (1Н, дд, J=4.7, 13.2 Гц), 2.95 (1Н, дд, J=7.3, 13.7 Гц), 2.68 (2Н, м), 1.58 (2Н, м), 1.32 (4Н,м), и 0.91 (3Н, т, J=6.7 Гц). LRMS: +ve ион 345 [M+Na], 323 [М+Н], -ve ион 321 [М-Н]. Диастереоизомер В: LRMS: +ve ион 345 [M+Na], 323 [М+Н], -ve ион 321 [М-Н].

Пример 7

2R (илиS)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-рексановой кислоты [2,2-диметил-пиридин-2-ил-карбамоил)-пропил]-амид

Диастереоизомер А: бесцветное масло. ¹H-ЯМР; δ (СО₃ОD), 8.34 (1Н, м), 8.06 (1Н, м), 7.90 (1Н, м), 7.33 (1Н, м), 4.45 ОН, с), 3.55 (1Н, дд, J=8.3, 13.2 Гц), 3.25 (1Н, м), 3.05 (1Н, м), 1.61 (2Н, м), 1.32 (4Н,м), 1.11 (9Н, с) и 0.85 (3Н, м). LRMS:+ve ион 379 [М+Н], -ve ион 377 [М-Н].

Диастереоизомер В: бесцветное масло. ¹H-ЯМР; δ (СО₃ОD), 8.33 (1Н, м), 8.20 (0.5Н, м), 7.93 (1Н, м), 7.41 (0.5Н, м), 7.28 (1Н, м), 4.48 (1Н, с), 3.52 (1Н, дд. J=8.8, 13.1 Гц), 3.23 (1Н, дд, J=3.9, 13.1 Гц), 3.05 (0.5Н, м), 2.87 (0.5Н, м), 1.62 (2Н, м), 1.36 (4Н, м), 1.11 (9Н, с) и 0.93 (3Н, м). LRMS: +ve ион 393 [M+Na], 379 [М+Н], -ve ион 377 [М-Н].

Пример 8

2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2-метилпропил)амид

Диастереоизомер А: бесцветное масло. LRMS: +ve ион 338 [M+Na], -ve ион 319 [М-Н].

Пример 9

2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2-фенилэтил)амид

Диастереоизомер А: бесцветное масло. LRMS: +ve ион 386 [M+Na], -ve ион 362 [М-Н] Диастереоизомер В: бесцветное масло LRMS: +ve ион 386 [M+Na], -ve ион 362 [М-Н]

Пример 10

2R (или S)-[(Формилгидроксиамино)-метил]-гексановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-3-метил-бутил)амид

Диастереоизомер А: бесцветное масло. LRMS: +ve ион 352 [M+Na], -ve ион 328 [М-Н].

Пример 11

2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты [3-метил-lS-пирролидин-1-карбонил)-бутил]амид

Диастереоизомер А: бесцветное масло. LRMS:-ve ион 354 [М-Н].

Пример 12

1-{2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексаноил}-пирролидин-2S-карбоновой кислоты диметиламид

Диастереоизомер А: бесцветное масло. LRMS: +ve ион 336 [M+Na], -ve ион 312 [М-Н]. Диастереоизомер В: бесцветное масло. LRMS:+ve ион 336 [M+Na], -ve ион 312 [М-Н].

Пример 13

2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты-1S-диметилкарбамоил-2,2-диметилпропил)-амид

Метод I

Путь синтеза названного соединения представлен на схеме 2 и детально описан ниже.

A. HCOOEt, NaOEt;

B. HCl, NHOBzl, NaOAc, водный EtOH;

C. NaOH, СH₃OH;

D. H-TleN (CH₃)₂; EDC, HOAt, ДМФА;

E. NaCNBH₃, AcOH затем разделение диастереозомеров;

F. HCOBt, ТГФ;

G. H₂, Pd/C, CH₃OH.

Стадия А: 2RS-Формил-гептановой кислоты этиловый эфир

Натрий металлический (4,38 г, 0,191 ммоль) разрезают на мелкие кусочки и помещают в двухгорлую высушенную в печи круглодонную колбу под слой аргона. Добавляют безводный диэтиловый эфир (100 мл), суспензию перемешивают и охлаждают до 0°С. К колбе присоединяют обратный холодильник перед тем, как добавлять по каплям этанол (1,03 мл, 17,3 ммоль). Затем добавляют по каплям через капельную воронку смесь этилформиата (15,41 г, 0,208 ммоль) и этилкапроата (25 г, 0,173 ммоль) в течение порядка 20 минут. Полученной суспензии оранжевого цвета (металлический натрий еще можно наблюдать) дают нагреться до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Образовавшуюся густую оранжевую суспензию (металлический натрий не виден) охлаждают до 0°С и разбавляют ледяной водой (100 мл). Смесь переносят в делительную воронку, водную фазу удаляют, промывают диэтиловым эфиром, охлаждают до 0°С и подкисляют 1 М соляной кислотой (200 мл). Эмульсию экстрагируют этилацетатом и органический слой отделяют, промывают рассолом, сушат над безводным сульфатом магния и фильтруют. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении с образованием желтого масла, содержащего в основном названное соединение (11,09 г), которое используют без дополнительной очистки на Стадии В.

Стадия В: 2RS-(Бензилоксиимино-метил)-гептановой кислоты этиловый эфир

Твердый продукт Кляйзена со Стадии А (11,0 г, 63,9 ммоль) растворяют в этаноле (100 мл) и воде (10 мл) и охлаждают до 0°С во время добавления ацетата натрия (6,2 г, 76,6 ммоль) и 0-бензилгидроксиламина хлоргидрата (12,23 г, 76,6 ммоль). Смеси дают нагреться до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Полученную суспензию фильтруют и фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Оставшуюся пасту желтого цвета распределяют между этилацетатом и водой. Органический слой промывают 1 М соляной кислотой и рассолом, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают до образования желтого масла. Желаемый продукт получают путем флэш хроматографии (силикагель, градиент элюирования от10 до 25%, этилацетат в гексане. Выход 9,19 г (52%). ¹H-ЯМР: δ (СDСl₃ смесь син- и анти-изомеров), 7.46 (0.6Н, д, J=8.0 Гц), 7.38-7.28 (5Н, м), 6.79 (0.4Н, д, J = 7.1 Гц), 5.11 (0.8Н, с), 5.08 (1.2Н, с), 4.16 (1.2Н, кв, J=7.0 Гц), 4.13 (0.6Н, кв, J=7.0 Гц), 3.91 (0.4Н, кв, J=7.2 Гц), 3.21 (0.6Н, тд, J=8.0 и 6.1Гц), 1.90-1.48 (2Н, м), 1.37-1.20 (7Н, м), 0.87 (3Н, т, J=7.0 Гц).

Стадия С: 2RS-(Бензилоксиимино-метил)-гептановая кислота 2RS-(Бензилоксиимино-метил)-гептановой кислоты этиловый эфир (7,0 г, 25,24 ммоль) растворяют в метаноле (125 мл) и раствор охлаждают до 0°С. 1 М Гидроксид натрия (26 мл, 26 ммоль) добавляют порциями в течение 2 минут, что приводит к образованию бледно-желтой эмульсии. Вводят дополнительное количество метанола, пока не образуется прозрачный раствор. Раствор перемешивают 90 минут при 0°С, затем 5 часов при комнатной температуре, пока TLC анализ не покажет, что весь исходный продукт вступил в реакцию. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток распределяют между водой и этилацетатом. Водный слой охлаждают до 0°С и подкисляют 1 М соляной кислотой. Полученную таким образом эмульсию дважды экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывают рассолом, сушат над безводным сульфатом магния и фильтруют. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении с получением названного соединения в виде желтого масла (5,15 г, 82%), которое используют без дополнительной очистки на Стадии D. ¹Н-ЯМР: δ (CDCl₃, смесь син- и анти- изомеров), 8.00 (1Н, уширенный с), 7.46 (0.6Н, д, J=7.9 Гц), 7.36-7.24 (5Н, м), 6.80 (0.4Н, д, J=7.0 Гц), 5.13 (0.8Н, с), 5.09 (1.2Н, с), 3.94 (0.4Н, q, J=7.1 Гц), 3.27 (0.6Н, тд. J=6.4 и 8.0 Гц), 1.94-1.58 (2Н, м), 1.48-1.24 (4Н, м) и 0.94-0.84 (3Н, м).

Стадия D: 2RS-(Бензилоксиимино-метил)-гептановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметилпропил)амид

2-(Бензилоксииминометил)-гептановую кислоту (5,16 г, 20,7 ммоль), трет.-лейцин N.N-диметиламид (3,60 г, 22,77 ммоль) и EDC (4,76г, 24,84 ммоль) перемешивают ее вместе в ДМФА (75 мл) и охлаждают до 0°С. Добавляют HOAt (250 мг, кат.) и полученной ярко-желтой смеси дают нагреться до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Растворитель удаляют при пониженном давлении и оставшееся масло распределяют между этилацетатом и 1 М соляной кислотой. Органический слой промывают рассолом, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют досуха при пониженном давлении. Названное соединение получают в виде бесцветного масла с помощью флэш хроматографии (силикагель, градиент элюирования от 33 до 66%, этилацетат в гексане). Выход 6,84 г (85%). ¹H-ЯМР: δ (CDCl₃, смесь син- и анти- изомеров), 7.45 (0.6Н, 2д), 7.40-7.26 (5Н, м), 6.72 (0.4Н, 2д), 6.58 (1Н, м), 5.20-4.69 (3Н, м), 3.82 (0.4Н, м), 3.16-3.10 (3Н, м), 3.05 (0.6Н. м). 2-99-2.92 (3Н, м), 1.90-1.54 (2Н, м), 1.39-1.17 (4Н, м), 0.97 (2.7Н, с), 0.96 (1.8Н. с), 0.94 (2.7Н, с), 0.92 (1.8Н, с) и 0.92-0.82 (3Н, м).

Стадия Е: 2R (или S)-(Бензилоксиамино-метил)-гептановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметилпропил)амид

К раствору 2RS-(бензилоксиимино-метил)-гептановой кислоты (1S-диметил-карбамоил-2,2-диметил-пропил) амида (5,0 г, 12,84 ммоль) в уксусной кислоте (40 мл) добавляют одной порцией натрий цианоборгидрид (2,02 г, 32,0 моль). Реагент медленно растворяется в течение 1 часа при небольшом выделении газа с образованием бесцветного раствора, который оставляют перемешиваться в течение ночи. Растворитель удаляют путем упаривания при пониженном давлении и отгонки его в виде азеотропа с толуолом. Оставшееся масло распределяют между диэтиловым эфиром и 1 М карбонатом натрия (Внимание - выделяется некоторое количество газа). Органический слой промывают рассолом (70 мл), сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют досуха при пониженном давлении. Два диастереоизомера названного соединения очищают и разделяют с помощью флэш хроматографии (силикагель градиент элюирования от 50% до 100%, этилацетат в гексане). Диастереоизомер А (более быстрое элюирование): бесцветное масло (2.27 г, 45%). ¹H-ЯМР: δ (CDCl₃), 7.43-7.28 (5Н, м), 6.76 (1 Н, уширенный д, J=9.4 Гц), 5.69 (1 Н, уширенный с), 4.93 (1 Н, д, J=9.4 Гц), 4.72 (2Н, с), 3.15 (3Н, с), 3.18-3.00 (2Н, м), 2.96 (3Н, с). 2.49 (1Н, м), 1.66-1.49(2Н, м), 1.46-1.19 (4Н, м), 0.99 (9Н, с) и 0.86 (3Н, т, J=6.8 Гц).

Диастереоизомер В (более медленное элюирование): бесцветное масло (1,44 г, 46%). ¹H-ЯМР: δ (CDCl₃, 7.40-7.27 (5Н, м), 6.70 (1Н, уширенный д, J=9.0 Гц), 5.99 (1Н, уширенный с), 4.85 (1H, д, J=9.0 Гц), 4.71 (2Н, д, J=1.6 Гц), 3.16 (3Н, с), 3.06-2.97 (2Н, м), 2.95 (3Н, с), 2.57 (1Н, м), 1.74-1.21 (6Н, м), 1.00 (9Н, с) и 0.88 (3Н, уширенный т, J=6.7 Гц).

Стадия F: 2R (или S)-[(Бензилокси-формил-амино)-метил]-гептановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-пропил)амид

2-(Бензилоксиамино-метил)-гептановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-пропил) амид (диастериоизомер А) (2,02 г, 5,13 ммоль) растворяют в безводном ТГФ (50 мл) и помещают под слой аргона. Добавляют N-формил-бензотриазол (A.R.Katrizky et al., Synthesis 1995, 503) (0,83 г, 5,65 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов. Растворитель упаривают при пониженном давлении и оставшееся масло распределяют между дихлорметаном и 1 М гидроксидом натрия. Органический слой промывают еще раз гидроксидом натрия и рассолом, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют досуха при пониженном давлении. Названное соединение получают в виде белого кристаллического твердого вещества с помощью флэш хроматографии (силикагель, элюирование 33% этилацетатом в гексане). Выход 1.60 г (74%).¹H-ЯМР: δ (CDCl₃), ротамеры), 8.00 (1Н, уширенный м), 7.47-7.29 (5Н, м), 6.25 (1 Н, уширенный д, J=9.3 Гц), 5.08-4.74 (2Н, уширенный м), 4.87 (1Н, д, J=9.4 Гц), 3.89-3.52 (2Н, уширенный м), 3.13 (3Н, с), 2.94 (3Н, с), 2.54 (1Н, м), 1.67-1.11 (6Н, м), 0.95 (9Н, с) и 0.85 (3Н, уширенный т, J=6.9 Гц).

2-(Бензилоксиамино-метил)-гептановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-пропил)амид(диастереоизомер В) получают аналогично из более медленно элюируемого диастереоизомера Стадии Е. Выход 0,38 г (41%). ¹Н-ЯМР: δ (СDСl₃, ротамеры), 8.00 (1Н, уширенный м), 7.47-7.28 (5Н, уширенный м), 6.29 (1Н, уширенный д, J=9.3 Гц), 5.01-4.63 (2Н, уширенный м), 4.88 (1Н, д, J=9.3 Гц), 3.82-3.51 (1.5Н, уширенный м), 3.20-2.78 (6.5Н, уширенный м), 2.50 (1Н, уширенный м), 1.76-1.17 (6Н, уширенный м), 0.97 (9Н, с) и 0.85 (3Н, уширенный т, J=6.7 Гц).

Стадия G: 2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты-(1S-диметил карбамоил-2,2-диметил-пропил)-амид

2-[(Бензилокси-формил-амино)-метил]-гептановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-пропил)амид (диастереоизомер А) (1,43 г, 3,41 моль) растворяют в метаноле (50 мл) и помещают под слой аргона. Добавляют суспензию 10% палладия на угле (100 мг, кат.) в этилацетате (2 мл) и смесь энергично перемешивают при одновременном барботировании через раствор водорода. Через 10 минут смесь помещают в атмосферу водорода и оставляют перемешиваться 3 часа, до тех пор, пока TLC анализ не покажет, что весь исходный материал вступил в реакцию. Систему насыщают аргоном и катализатор удаляют путем фильтрования. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении с образованием названного соединения в виде бесцветной гигроскопичной пены (1,11 г, 99%). ¹H-ЯМР: δ (CDCl₃, ротамеры), 8.41 (0.35Н, с), 7.83 (0.65Н, уширенный с), 6.80 (0.35Н, уширенный д. J=8.9 Гц), 6.62 (0.65Н, уширенный д, J=9.4 Гц), 4.91 (0.65Н, уширенный д, J=9.4 Гц), 4.88 (0.35Н, уширенный д, J=8.9 Гц), 4.04 (1Н, дд, J=14.7 и 7.4 Гц), 3.82 (0.65, дд, J=14.0 и 9.7 Гц), 3.56 (0.35Н, дд, J=14.7 и 3.3 Гц), 3.48 (0.65Н, дд, J=14.0 и 4.0 Гц), 3.16 (1.05Н. с). 3.15 (1.95Н, с), 2.98 (1.05Н, с), 2.96 (1.95Н, с). 2.90-2.74 (0.65Н, уширенный м). 2.74-2.61 (0.35Н, уширенный м) 1.73-1.17 (6Н, уширенный м), 0.99 (3.15Н, с). 0.95 (5.85Н, с) и 0.87 (3Н, уширенный т, J =6.7 Гц). ¹³С-ЯМР; δ (CDCl₃,, 174.6, 171.2. 162.2, 157.2, 60.1, 54.5, 54.3, 52.3, 48.4, 44.8, 44.3, 35.6, 35.4, 29.6, 29.0, 26.3, 20.8, 20.2, 14.0 и 13.7. LRMS: +ve ион 352 (M+Na), -ve ион 328 (М-Н).

2-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановойкислоты-(1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-пропил)-амид (диастереоизомер В) получают аналогично из диастереоизомера В на Стадии Е

 ¹H-ЯМР; δ (СDСl₃, ротамеры), 9.37 (0.5Н, с), 8.40 (0.5Н, с), 7.75 (0.5Н, уширенный с), 6.62 (0.5Н, уширенный с), 6.41 (0.5Н, уширенный д, J=7.1 Гц), 4.87 (0.5Н, уширенный д, J=6.6 Гц). 4.66 (0.5Н, уширенный д, J=7.6 Гц), 3.84-3.39 (2Н, м), 3.21 (1.5Н, уширенный с), 3.14 (1,5Н, уширенный с), 2.98 (3Н, уширенный с), 2.91-2.54 (1Н, м), 1.79-1.23 (6Н, м) и 1.08-0.83 (12Н, м). ¹³С-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 174.9, 173.3, 56.3, 54.8, 51.6, 50.3, 45.5, 45.1, 38.6, 38.4, 36.2, 36.0, 35.3, 34.4, 29.5, 29.4, 29.3, 29.2, 26.6, 26.5, 22.6, 22.5 и 13.9. LRMS: +ve ион 352 [M+Na], -ve ион 328 [М-Н].

Метод II

Альтернативный ассиметрический путь синтеза соединения по Примеру 13 представлен на схеме 3 и описан ниже

Реагенты и условия:

А. пипердин, HCHO, EtOH, 80%С, o/н;

B. трет.-BuCOCl, Et₃N, затем 3-литий-4-бензил-5,5-диметилоксазолидин-2-он;

C. H₂NOBzl, комнатная тепмература, о/н, затем п-TsOH, EtOAc;

D. LiOH, водный ТГФ, 0°С;

E. H-TleN(Me₂)₂; HOBt, EDC, ДМФА;

F. HCOBt, ТГФ;

G. H₂,Pd/C, EtOH.

Стадия А: 2-Бутил-акриловая кислота

К раствору н-бутилмалоновой кислоты (17,2 г, 107 ммоль) в этаноле (200 мл) добавляют пиперидин (12,76 мл, 129 ммоль) и 37% водный раствор формальдегида (40,3 мл, 538 ммоль). Раствор нагревают до 80°С и в это время появляется осадок, который постепенно растворяется в течение 1 часа. Реакционную смесь перемешивают при 80°С в течение ночи, затем охлаждают до комнатной температуры. Растворители удаляют при пониженном давлении и остаток растворяют в этилацетате (200 мл), промывают последовательно 1 М соляной кислотой и рассолом, сушат над безводным сульфатом магния и фильтруют. Фильтрат концентрируют с образованием названного соединения в виде прозрачного масла (13,37 г, 97%). ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃), 6.29 (1Н, с). 5.65 (1H, с). 2.34-2.28 (2Н, м), 1.54-1.26 (4Н, м) и 0.94 (3Н, т, J=7.1 Гц).

Стадия В: 45-Бензил-3-(2-бутилакрилоил)-5,5-диметил-оксазолидин-2-он

2-Бутилакриловую кислоту (21,5 г, 168 ммоль) растворяют в сухом ТГФ (500 мл) и охлаждают до -78°С под слоем аргона. Добавляют триэтиламин (30 мл, 218 ммоль) и пивалоил хлорид (21 мл, 168 ммоль) с такой скоростью, чтобы температура оставалась ниже -60°С. Смесь перемешивают при -78°С в течение 30 минут, нагревают до комнатной температуры в течение 2 часов и наконец охлаждают вновь до -78°С.

В отдельной колбе растворяют 4S-бензил-5,5-диметил-оксазолидин-2-он в сухом ТГФ (500 мл) и охлаждают до -78°С под слоем аргона. н-Бутиллитий (2.4 М раствор в гексане, 83 мл, 200 ммоль) медленно добавляют и смесь перемешивают в течение 30 минут при комнатной температуре. Полученный анион перемещают через трубку в первоначальный реакционный сосуд. Смеси дают нагреться до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Реакцию гасят с помощью 1 М бикарбоната калия (200 мл) и растворители удаляют при пониженном давлении. Остаток распределяют между этилацетатом и водой. Органический слой промывают рассолом, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с образованием оранжевого масла. TLC анализ показал наличие непрореагировавшего вспомогательного хирального вещества кроме требуемого продукта. Порцию продукта (30 г) растворяют в дихлорметане и пропускают через слой силикагеля, чтобы получить названное соединение в чистом виде, которое представляет собой желтое масло (25,3 г). ¹H-ЯМР: δ (CDCl₃), 7.31-7.19 (5Н, м), 5.41 (2Н,с), 4.51 (1Н, дд, J=9.7, 4.2 Гц), 3.32 (1Н, дд, J=14.2, 4.2 Гц), 2.82 (1Н, дд, J=14.2, 9.7 Гц), 2.40-2.34 (2Н, м), 1.48-1.32 (4Н, м), 1.43 (3Н, с), 1.27 (3Н, с) и 0.91 (3Н, т, J=7.1 Гц). Некоторое количество вспомогательного хирального вещества выделяют при промывке силикагеля метанолом.

Стадия С: 4S- Бензил-3-[2-(бензилоксиамино-метил)-гексаноил]-5,5-диметил-оксазолидин-2-он (соль п-толуолсульфоновой кислоты)

4S-Бензил-3-(2-бутил-акрилоил)-5,5-диметил-оксазолидин-2-он (19,8 г, 62,8 ммоль) смешивают с 0-бензилгидроксиламином (15,4 г, 126 ммоль) и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Смесь растворяют в этилацетате и раствор промывают 1 М соляной кислотой, 1 М карбонатом натрия и рассолом, сушат над безводным сульфатом магния и фильтруют. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении до бледно- желтого масла (25,3 г), которое, как показали данные ЯМР и HPLC, содержит 4S-Бензил-3-[2-(бензилоксиамино-метил)-гексаноил]-5,5-диметил-оксазолидин-2-он (са. 82% д.е.) наряду со следами исходного вещества. Продукт объединяют с другим образцом (26,9 г, 76% д.е.) и растворяют в этилацетате (200 мл). Добавляют п-толуолсульфокислоту (22,7 г, 119 ммоль) и смесь охлаждают до 0°С. Названное соединение получают в виде белого кристаллического твердого вещества путем затравливания и затвердевания (34%, единственный диастереоизомер). Второй образец (14,7 г, 20%, единственный диастереоизомер) также был получен. ¹H-ЯМР; δ (СDСl₃, 7.89 (2Н, д, J=8.2 Гц), 7.37-7.12 (10Н, м), 7.02 (2Н, д, J=6.9 Гц), 5.28-5.19 (2Н, м), 4.55 (1Н, м), 4.23 (1Н, м), 3.93 (1Н, м), 3.58 (1Н, м), 2.58 (1Н, м), 2.35 (3Н, с), 1.67-1.51 (2Н,м), 1.29-1.16 (4Н, м), 1.25 (3Н, с), 1.11 (3Н, с) и 0.80-0.75 (3Н, м).

Стадия D: 2R-Бензилоксиамино-метил)-гексановая кислота 4S-Бензил-3-[2R-(бензилоксиамино-метил)-гексаноил]-5,5-диметил-оксазолидин-2-оновую соль п-толуолсульфокислоты (25,2 г, 40,2 ммоль) распределяют между этилацетатом и 1 М карбонатом натрия. Органическую фазу сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают при пониженном давлении. Оставшееся масло растворяют в ТГФ (150 мл) и воде (50 мл), охлаждают до 0°С и обрабатывают гидроксидом лития (1,86 г, 44,2 ммоль). Раствор перемешивают в течение 30 минут при 0°С, затем в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную массу подкисляют до рН 4 с помощью 1 М лимонной кислоты и растворители удаляют. Остаток распределяют между дихлорметаном и 1 М карбонатом натрия. Щелочной водный слой подкисляют до рН 4 с помощью 1 М лимонной кислоты и экстрагируют три раза этилацетатом. Объединенные органические слои сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют с получением названного соединения в виде бесцветного масла (7,4 г, 73%). ¹Н-ЯМР; δ (CDCl₃). 8.42 (2Н, уширенный с), 7.34-7.25 (5Н. м), 4.76-4.66 (2Н, м), 3.20-3.01 (2Н, м), 2.73 (1 Н, м), 1.70-1.44 (2Н, м), 1.34-1.22 (4Н, м) и 0.92-0.86 (3Н, м).

Стадия Е: 2R-(Бензилоксиамино-метил)-гексановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-1-пропил)амид

2R-Бензилоксиамино-метил)-гексановую кислоту (7,98 г, 31,8 ммоль) растворяют в ДМФА (150 мл) и раствор охлаждают до 0°С. Добавляют EDC (6,1 г, 31,8 ммоль) и HOBt (430 мг, 3,2 ммоль) и смесь перемешивают в течение 15 минут. Затем добавляют трет.-лейцин-М, М-диметиламид (5,53 г, 34 ммоль), смеси дают нагреться до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток растворяют в этилацетате, промывают последовательно 1 М соляной кислотой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и рассолом, сушат и фильтруют. Растворитель удаляют с получением названного соединения в виде желтого масла (8,7 г, 69%), которое используют без дополнительной очистки на Стадии F.¹H-ЯМР; δ (СDСl₃), 7.35-7.28 (5Н, м), 6.77 (1Н, уширенный д, J=9.2 Гц), 5.69 (1Н, уширенный с). 4.93 (1Н, д, J=9.4 Гц), 4.72 (2Н, с), 3.15 (3Н, с), 3.10-3.00 (2Н, м), 2.95 (3Н, с), 2.49 (1Н, м), 1.64-1.21 (6Н, м), 0.99 (9Н, с) и 0.86 (3Н, т, J=6.8 Гц)

Стадия F: 2R-[(Бензилокси-формил-амино)-метил]-гексановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-1-пропил)амид

2R-(Бензилоксиамино-метил)-гексановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-1-пропил)амид (7,8 г, 19,9 ммоль) растворяют в сухом ТГФ (100 мл) и обрабатывают 1-формил-бензотриазолом (3,08 г, 21,0 ммоль). Реакционную массу перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток растворяют в этилацетате, промывают 2 М раствором гидроксида натрия и рассолом. Органический слой сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют досуха при пониженном давлении. Продукт кристаллизуют из этилового эфира-гексана (4,83 г, 57% два образца). ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 8.12 (0.6Н, уширенный с), 7.89 (0.4Н, уширенный с), 7.37 (5Н. с), 6.25 (1 Н, д, J=9.3 Гц), 4.96 (0.6Н, уширенный с), 4.86 (1Н, д, J=9.4 Гц). 4.80 (0.4Н, уширенный с), 3.74 (2Н, уширенный с), 3.13 (3Н, с), 2.94 (3Н. с). 2.53 (1Н, м), 1.38-1.21 (6Н, м), 0.95 (9Н, с) и 0.85 (3Н, т, J=6.9 Гц). Замечание: Небольшое количество образца кристаллизуют из этилового эфира-гексана для получения кристаллов, пригодных для рентгеноструктурного анализа. Стереохимия, приведенная в описании, подтверждена.

Стадия G: 2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-1-пропил)амид

2R-[(Бензилокси-формил-амино)-метил]-гексановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-1-пропил)амид (4,72 г, 11,3 ммоль) растворяют в этаноле (80 мл) и помещают под слой аргона. Добавляют суспензию 10% палладия на угле (940 мг) в этилацетате (2 мл) и смесь энергично перемешивают по мере того, как водород барботируют через систему. Через 30 минут суспензию помещают под ток баллонного водорода и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Колбу насыщают аргоном перед тем, как удалить катализатор фильтрованием. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении с получением названного соединения в виде бесцветной пены, которая кристаллизуется при стоянии (3.65 г, 98%). ¹Н-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 9.32 (0.4Н, уширенный с), 8.41 (0.4Н, с), 7.88 (0.6Н, уширенный с), 7.27 (0.6Н, с), 6.75 (0.4Н, уширенный д, J=8.8 Гц), 6.58 (0.6Н, уширенный д, J=9.3 Гц), 4.89 (1H, м), 4.04 (0.4Н, м), 3.82 (0.6Н, м), 3.53 (1Н, м), 3.16 (1.2Н, с), 3.15 (1.8Н, с), 2.98 (1.2Н, с), 2.96 (1.8Н, с), 2.79 (0.6, м), 2.65 (0.4Н, м), 1.78-1.58 (6Н, м), 0.99 (3.6Н, с), 0.95 (5.4Н, с) и 0.87, 3Н, т, J=6.7 Гц). ¹³C-ЯМР; δ (CDCl₃; ротамеры), 175.8, 173.3, 172.0, 55.4, 54.9, 52.2, 48.8, 46.3, 38.9, 38.8, 36.3, 36.1, 30.3, 30.2, 29.7, 26.9, 23.0 и 14.3. LRMS: +ve ион 352 [M+Na], -ve ион 328 [М-Н]. Соединения по примерам от 14 до 27 получены путем, аналогичным описанному в примере 13, Метод I при замене соответствующим эфиром эфира этилкапроата на Стадии А. Если получают оба диастереоизомера, диастереоизомер А элюируется быстрее и обычно он является более сильнодействующим против PDF in vitro. В некоторых случаях только более быстро выходящий диастереоизомер (Стадия Е) переводят в конечный продукт.

Пример 14

2R (или S)-[(Формилгидроксиамино)-метил]-3-циклопентил-пропионовой кислоты (1S-диметил-карбамоил-2,2-диметил-пропил)-амид

Диастереоизомер А. Бесцветное стекловидное вещество. ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 9.33 (0.4Н, уширенный с), 8.94 (0.6Н, уширенный с), 8.40 (0.4Н, с), 7.82 (0.6Н, с), 6.82 (0.4Н, уширенный д, J=8.6 Гц), 6.62 (0.6Н, уширенный д, J=9.3 Гц), 4.90 (1H, м), 4.06 (0.4Н, уширенный дд, J=14.7, 7.3 Гц), 3.81 (0.6Н, уширенный дд. J=14.0, 9.7 Гц), 3.50 (1H, м), 3.16 (1.2Н, с), 3.14 (1.8Н, с), 2.97 (1.2Н. с), 2.95 (1.8Н, с), 2.80 (1H, м), 1.87-1.32 (9Н, м), 1.16-0.95 (2Н, м), 0.99 (3.6Н, с) и 0.95 (5.4Н, с). ¹³С-ЯМР; δ (СDСl₃, ротамеры), 172.9, 171.3, 55.0, 54.5, 52.0, 48.6, 45.4, 44.2, 38.5, 38.4, 37.9, 37.6, 36.4, 36.3, 35.8, 35.6, 35.5, 32.7, 32.6, 26.5, 26.4 и 25.1. LRMS: +ve ион 378 [M+Na], -ve ион 354 [М-Н].

Диастереоизомер В. Бесцветное стекловидное вещество.¹H-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 9.30 (0.6Н, уширенный с), 8.41 (0.6Н, с), 7.75 (0.4Н, с), 6.52 (0.4Н, уширенный д, J=8.7 Гц), 6.41 (0.6Н, уширенный д, J=7.3 Гц), 4.85 (0.4Н, уширенный д, J=9.5 Гц), 4.63′(0.6Н, уширенный д, J=7.5 Гц), 3.85-3.40 (2Н, м), 3.25-2.95 (6Н,3 уширенных синглета), 2.78 (1Н, 2 уширенных мультиплета), 1.90-1.40 (8Н, м), 1.30 (1Н, м), 1.20-1.00 (2Н, м) и 1.05-0.95 (9Н, 2с). ¹³С-ЯМР; δ (CDCl₃), ротамеры), 174.9, 173.3, 172.8, 56.5, 54.7, 51.5, 50.5, 44.7, 44.6, 38.6, 38.4, 38.0, 37.8, 36.2, 36.0, 35.7, 35.5, 35.3. 34.3, 33.0, 32.9, 32.4, 32.3, 30.9, 26.6, 26.5, 25.1, 25.0 и 24.9. LRMS: +ve ион 378 [M+Na], -ve ион 354 [М-Н].

Пример 15

2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гептановой кислоты-(1S-диметилкарбамоил-2.2-диметил-пропил)-амид

Диастереоизомер А. Темно-оранжевое масло. ¹H-ЯМР; δ (СDСl₃, ротамеры), 8.32 (0.33Н, с), 7.76 (0.67Н, уширенный с), 6.78 (0.33Н, уширенный д, J=9.1 Гц), 6.68 (0.67Н, уширенный д, J=9.1 Гц), 4.87-4.79 (1Н,м), 3.96 (0.33Н, уширенный дд, J=14.6, 7.6 Гц), 3.74 (0.67Н, уширенный дд, J=13.9, 9.7 Гц), 3.51-3.36 (1H, м), 3.09 (1H, с), 3.08 (2Н, с), 2.90 (1H, с), 2.89 (2Н, с), 2.86-2.55 (1H, м), 1.53-1.19 (8Н, уширенный м), 0.92 (3Н, с), 0.88 (6Н, с) и 0.79 (3Н, м). ¹³С-ЯМР; δ (СDСl₃, ротамеры), 174.3, 172.0, 170.5, 170.4, 54.0, 53.5, 53.4, 50.8, 49.7, 47.4, 44.9, 43.8, 37.5. 37.4, 34.8, 34.7, 34.6, 30.6, 29.2, 29.1, 25.8, 25.5, 21.4 и 12.9. LRMS: +ve ион 344 М+Н], -ve ион 342 [М-Н].

Диастереоизомер В. Темно-оранжевое масло. ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 8.36 (0.5Н, с), 7.74 (0.5Н, с), 6.69 (0.5Н, уширенный с), 6.57 {0.5Н, уширенный д, J=7.6 Гц), 4.89 (0.5Н, уширенный с), 4.70 (0.5Н, д, J=7.8 Гц), 3.76-3.40 (2Н, м), 3.21 (1.5Н. с), 3.16 (1.5Н, с), 2.98 (3Н. с), 2.81 (1Н, уширенный с), 2.72-2.60 (1 Н, м), 1.67 (2Н, уширенный с), 1.42-1.22 (6Н, м), 1.02 (4.5Н, с), 0.99 (4.5Н, с), 0.90 (1.5Н, с) и 0.87 (1.5Н, с). ¹³С-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 175.2, 173.8, 173.1, 56.5, 55.1, 52.3, 51.1, 50.6, 45.8, 45.5, 39.0, 38.9, 36.6. 26,3, 35.6, 34.9, 32.1, 32.0, 30.1, 29.9, 27.4, 27.4, 27.0, 26.9, 22.9 и 14.3. LRMS: +ve ион 344 [M+H], -ve ион 342 [М-Н].

Пример 16

2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-пентановой кислоты-(1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-пропил)-амид

Диастереоизомер А. Белая гигроскопичная пена. ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 8.40 (0.33Н, с), 7.83 (0.67Н, уширенный с), 6.88 (0.33Н, уширенный д, J=8.6 Гц), 6.69 (0.67Н, уширенный д. J-9.2 Гц), 4.90 (1Н, т). 4.06 (0.33Н, уширенный дд, J-14.5, 7.4 Гц), 3.82 (0.67Н, уширенный дд, J=13.7, 9.8 Гц), 3.57-3.44 (1Н, м), 3.16 (1H, с), 3.15 (2Н, с), 2.98 (1H, с), 2.96 (2Н, с), 2.87-2.63 (1H, м), 1.64-1.26 (4Н, уширенный м), 0.98 (3Н, с), 0.94 (6Н, с) и 0.90 (3Н, т, J=7.3 Гц). ¹³С-ЯМР; δ (СDСl₃, ротамеры), 175.8, 173.2, 172.0, 55.4, 54.9, 52.2, 48.7, 46.2, 45.0, 38.9, 38.9, 36.3, 36.1, 36.1, 32.7, 32.6, 27.0, 26.9, 20.9, 20.8 и 14.4. LRMS: +ve ион 338 [M+Na], -ve ион 314 [М-Н].

Пример 17

2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-4-метил-пентановой кислоты-(1S-диметил-карбамоил-2,2-диметилпропил)-амид

Диастереоизомер А. Белое гигроскопичное твердое вещество. ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 8.41 (0.4Н, с), 7.83 (0.6Н, с), 6.65 (0.4Н, д, J=8.6 Гц), 6.55 (0.6Н, д, J=9.0 Гц), 4.91-4.83 (1Н, м), 4.03-3.95 (0.4Н, м), 3.84-3.74 (0.6Н, м), 3.62-3.43 (1Н. м), 3.16 (1H, с), 3.13 (2Н, с), 2.98 (1H, с), 2.96 (2Н, с), 2.89-2.79 (0.6Н, м). 2.76-2.71 (0.4Н. м), 1.69-1.34 (1.8Н, м), 1.29-1.20 (1.2Н, м), 1.0 (3.6Н, с), 0.95 (5.4Н. с) и 0.93-0.88 (6Н, м). ¹³С-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 175.8, 173.3, 172.0, 171.7, 55.5, 55.0, 52.4, 49.1, 44.3, 43.2, 39.5, 39.4, 38.9, 38.8, 36.3, 36.1, 27.0. 26.9, 26.3, 26.0, 23.1, 23.0 и 22.8. LRMS: +ve ион 352 [M+Na], -ve ион 328 [М-Н].

Пример 18

3-Циклогексил-2R (или S)-[(Формилгидроксиамино)-метил]-пропионовой кислоты(1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-пропил)-амид

Белое твердое вещество. ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 8.38 (0.25Н, с), 7.82 (0.75Н, с), 6.93 (0.25Н, д, J=8.9 Гц), 6.74 (0.75Н, д, J=8.9 Гц), 4.90 (1Н, д, J=9.4 Гц), 4.02 (0.25Н, дд, J=9.7, 14.1ГЦ), 3.78 (0.75Н, дд, J=9.7, 14.1 Гц), 3.46 (1Н,м), 3.15 (3Н. с), 2.96 (3Н, с), 2.92 (1Н, м), 1.65 (6Н, м), 1.20 (5Н, м). 0.98 (9Н, с) и 0.87 (2Н, м). ¹³С-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 176.4, 174.2, 172.4, 56.0, 55.6, 53.4, 49.9, 44.0, 43.3, 39.6, 39.4, 38.7, 38.5, 36.9, 36.7, 36.6, 34.8, 34.5, 27.5, 27.4 и 27.2. LRMS: +ve ион 370 [М+Н], 368 [М-Н].

Пример 19

2R (или S)-Циклопентил-3-(Формил-гидрокси-амино)-пропионовой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-пропил)-амид

Диастереоизомер А. Пена грязно-белого цвета. ¹Н-ЯМР; δ (СD₃OD, ротамеры), 8.22 (0.33Н, с), 7.79 (0.66Н, с), 4.89 ОН, с), 3.87 (1Н, м), 3.50 (1Н, м), 3.19 (3Н, с,), 2.93 (3Н, с), 2.82 (0.66Н, м), 2.65 (0.33Н, м), 1.89 (2Н, м), 1.56 (5Н, м), 1.24 (2Н, м) и 0.98 (9Н, с). ¹³С-ЯМР; δ (СD₃OD, ротамеры), 176.0, 56.7, 53.2, 51.1, 42.7, 39.2, 36.5, 36.4, 32.0, 27.4, 26.4 и 26.2. ИК (отражательная табл.) v_max3318, 2953, 1663, 1628, 1529, 1367, 1229, 1142, 1087, 877 см-¹. LRMS: +ve ион 364 [M+Na], -ve ион 340 [М-Н].

Пример 20

2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-октановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-пропил)-амид

Диастереоизомер А. ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃), ротамеры), 8.40 (0.4Н, с), 7.83 (0.6Н. с), 6.88 (0.4Н, д, J=8.9 Гц), 6.68 (0.6Н, д, J=9.2 Гц), 4.90 (1H, м), 4.05 (0.4Н, м). 3.81 (0.6Н, м), 3.50 (1H, м), 3.16 (1.2Н, с), 3.15 (1.8Н, с), 2.97 (1.2Н. с), 2.96 (1.8Н, с), 2.86 (0.6Н, м), 2.69 (0.4Н, м), 1.59-1.25 (10Н. м), 1.14-0.95 (9Н. м) и 0.89-0.77 (3Н. м). ¹³С-ЯМР; δ (СDСl₃, ротамеры), 175.2, 172.9, 171.6, 171.4, 54.9, 54.5, 54.3, 52.0, 48.4, 46.1. 45.7, 45.1, 44.7, 39.7, 38.5, 38.4, 35.8, 35.6, 35.6, 31.7, 31.5, 30.2, 30.1, 29.1, 29.1, 27.0, 26.4, 22.4 и 14.0. LRMS: +ve ион 380 [M+Na], 358 [M+H], -ve ион 356 [М-Н].

Пример 21

2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-нонановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-пропил)-амид

Диастереоизомер А: твердое вещество коричневого цвета. ¹H-ЯМР; δ (СDСl₃, ротамеры), 9.30 (0.4Н, с), 8.41 (0.6Н, с), 7.83 (0.4Н, с), 6.66 (0.4Н, д, J=8.9 Гц), 6.52 (0.6Н, д, J=9.7 Гц), 4.92-4.84 (1 Н, м), 4.06-3.97 (0.4Н, м), 3.87-3.77 (0.6Н, м), 3.63-3.45 (1Н. м), 3.16(1.2Н,с), 3.14(1.8Н,с), 2.98 (1.2Н, с), 2.96 (1.8Н, с), 2.86-2.74 (0.6Н, м), 2.66-2.63 (0.4Н, м), 1.95-1.25 (12Н, м), 1.00-0.95 (9Н. м), и 0.90-0.84 (3Н, м). ¹³С-ЯМР; δ (СDСl₃,_{ротамеры), 175.5, 172.8, 171.4, 162.2, 156.1, 55.1. 54.5, 51.3, 50.8, 48.4, 46.3, 44.9, 38.4, 38.4, 35.8, 35.7, 33.9, 31.7, 30.3, 30.2, 29.4, 29.0, 27.1, 26.5, 26.5, 24.9. 22.6 и 14.0. LRMS: +ve ион 394 [M+Na], 372 [M+H], -ve ион 370 [М-Н].}

Пример 22

2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-декановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-пропил)-амид

Диастереоизомер А: бесцветное масло. LRMS: +ve ион 408 [M+Na], 386 [M+H], -ve ион 384 [М-Н].

Пример 23

2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-5-метилгексановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-пропил)-амид

Диастереоизомер А: бесцветное масло. ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 9.31 (0.4Н, с), 8.40 (0.4Н, с), 8.17 (0.6Н, с), 6.77 (0.4Н, д, J=7.5 Гц), 6.60 (0.6Н, д, J=8.0 Гц). 4.89 (1Н, м), 4.04 (0.4Н, м), 3.83 (0.6Н, м), 3.52 (1Н. м), 3.16 (1.2Н, с), 3.15 (1.8Н. с), 2.98 (1.2Н, с), 2.96 (1.8Н, с), 2.70 (1Н, м), 1.58-1.14 (5Н, м), 1.00-0.95 (9Н, м) и 0.87-0.84 (6Н, м). ¹³С-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 172.9, 171.5, 162.2. 156.3, 55.1, 54.6, 51.4, 48.5, 46.4, 45.0, 38.5, 38.4, 36.2, 35.9, 35.6, 29.7, 28.1, 28.0, 27.9, 26.7, 26.6, 26.5 и 22.4. LRMS:+ve ион 366 [M+Na], 344 [M+H], -ve ион 342 [М-Н].

Пример 24

2R (или S)-[формил-гидроски-амино)метил]пропановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-пропил)-амид

Диастереоизомер А: ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃), ротамеры), 8.41 (0.55Н, с), 7.81 (0.45Н, с), 6.67 (0.45Н, д, J=8.4 Гц), 6.51 (0.45Н, д, J=7.2 Гц), 4.88 (0.45Н, д, J=9.4 Гц), 4.66 (0.55Н, д, J=7.7 Гц), 3.76 (1Н, м), 3.55 (0.55Н, дд, J=14.3, 9.8 Гц). 3.44 (0.45Н, дд, J=14.2, 5.3 Гц), 3.21 (1.65Н, с), 3.14 (1.35Н, с), 2.99 (1.65Н, с), 2.97 (1.35Н, с), 2.81 (1H, м), 1.21 (1.65Н, д, J=6.7 Гц), 1.19 (1.35Н, д. J=6.8 Гц), 1.01 (4.95Н, с) и 0.98 (4.05Н, с). LRMS: +ve ион 310 [M+Na], -ve ион 286 [М-Н].

Диастереоизомер В: ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 9.47 (0.4Н, уширенный с), 8.41 (0.4Н, с), 7.86 (0.6Н, с), 6.96 (0.4Н, уширенный с), 6.74 (0.6Н, д, J=7.3Гц), 4.91 (1Н, м), 3.99 (0.4Н. дд, J=14.2, 7.6 Гц), 3.83 (0.6Н, дд, J=13.8, 9.0 Гц), 3.50 (1H, м), 3.16 (1.2Н, с), 3.15 (1.8Н, с), 2.97 (3Н, с), 2.90 (1H, м), 1.21 (1.2Н, д, J=6.8 Гц), 1.15 (1.8Н. д, J=6.5 Гц), 0.99 (3.6Н, с) и 0.95 (5.4Н, с). LRMS: +ve ион 310 [M+Na], -vе ион 286 [М-Н].

Пример 25

2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-3-метилбутановой кислоты (1S-диметил-карбамоил-2,2-диметил-пропил)-амид

Диастереоизомер А: ¹Н-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 9.33 (0.4Н, с), 8.38 (0.4Н, с), 7.81 (0.6Н, с), 6.86 (0.4Н, уширенный с), 6.58 (0.6Н. д, J=8.6 Гц), 4.90 (1Н, м), 4.06 (0.4Н, дд, J=14.7, 7.3 Гц), 3.91 (0.6Н, дд, J=13.8, 10.6 Гц), 3.17 (1.2Н, с), 3.15 (1.8Н, с), 2.98 (1.2Н, с), 2.96 (1.8Н, с), 2.62 (0.6Н, м), 2.48 (0.4Н, м), 1.90 (1H, м), 1.09-0.86 (15Н, м). LRMS: +ve ион 338 (M+Na), -ve ион 314 (М-Н).

Пример 26

2R(или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-3-фенил-пропионилпропионовой кислоты-(1S-диметилкарбамоил-2,2-диметилпропил)-амид

Диастереоизомер А. Бесцветное стекловидное вещество. ¹H-ЯМР; δ (СDСl₃, ротамеры), 9.33 (0.3Н, уширенный с), 8.95 (0.7Н, уширенный с), 8.43 (0.3Н, уширенный с), 7.83 (0.7Н, уширенный с), 7.27-7.10 (5Н, м), 6.65 (0,3Н, уширенный с), 6.45 (0.7Н, уширенный д, J=8.2 Гц), 4.80-4.70 (1 Н, м), 4.22-4.10 (0.3Н, м), 3.89 (0.7Н, дд, J=13.7, 9.6 Гц), 3.63-3.47 (1Н, м), 3.20-2.69 (3Н. м), 3.04 (3Н, уширенный с), 2.86 (3Н, уширенный с), и 0.87 (9Н, уширенный с). ¹³С-ЯМР; δ (СDСl₃, ротамеры), 137.9, 137.7, 128.8, 128.5, 126.6, 54.9, 54.5, 51.3, 48.3, 47.3, 46.6, 38.3. 38.2. 36.2, 36.1, 35.8, 35.7, 35.6, 35.5 и 26.4. LRMS: +ve ион 386 (M+Na), -ve ион 362 (М-Н).

Пример 27

2R (или S)-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-3-(4-метоксифенил)-пропионовой кислоты-(1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-пропил)-амид

Диастереоизомер А: LRMS: +ve ион 416 (M+Na), 394 (М+Н), -ve ион 392 (М-Н)

Соединения по примерам от 28 до 31 получают путем, аналогичным описанному в примере 13, Метод II, заменяя соответствующим амидом или бензиловым эфиром аминокислоты трет.-лейцин N.N-диметиламид на Стадии Е.

Пример 28

2S-{2R-[Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексаноиламино}-3-фенилпропионовая кислота

Белая пена. ¹H-ЯМР; δ (CD₃OD, ротамеры), 8.11 (0.35Н, с), 7.80 (0.65Н, с), 7.31-7.16 (5Н, м), 4.68 (1Н, дд, J=8.7, 5.5Гц), 3.58 (1Н, м), 3.39 (1Н, м), 3.19 (1Н, м), 2.98 (1Н, м), 2.76 (1Н, м), 1.55-1.26 (6Н, м) и 0.90-0.85 (3Н, м). ¹³С-ЯМР; (CD₃OD, ротамеры), 176.1, 175.7, 174.7, 174.5, 138.6, 138.5, 130.3, 129.5, 129.4, 127.7, 55.0, 53.3, 49.8, 45.4, 38.4, 38.3, 31.0, 30.8, 30.1, 23.7 и 14.2. ИК (отражательная табл.) v_max 2932, 2359, 1727, 1660, 1551, 1454, 1381, 1221, 882, 701см -¹. LRMS: +ve ион 359 [M+Na], -ve ион 335 (М-Н).

Пример 29 2S-{2R-[Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексаноиламино}-3,3-диметилбутановая кислота

Белая пена. ¹Н-ЯМР; δ (СD₃OD, ротамеры), 8.25 (0.3Н, с), 7.82 (0.7Н, с), 4.31 (1Н,с), 3.83-3.29 (2Н, м), 3.10-2.89 (1Н, м), 1.54-1.33 (6Н. м), 1.03 (3Н,с), 1.01 (6Н, с) и 0.92-0.87 (3Н, м). ¹³С-ЯМР; δ (CD₃OD, ротамеры), 174.9, 172.9, 61.0, 52.4, 44.2, 44.0, 33.6, 30.1, 29.1, 26.2, 22.6 и 13.1. ИК (отражательная табл.)v_max 2959, 2359, 1644, 1537, 1371, 1218, 881 и 704 см-1. LRMS: +ve ион 325 (M+Na), -ve ион 301 (М-Н).

Пример 30

2S-[2R-(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты {1-[(2S-гидроксиметил-пирролидин-1-карбамоил]-2,2-диметил-пропил}-амид

Бесцветное масло. ¹Н-ЯМР; δ (СD₃OD, ротамеры), 8.26 (0.4Н, с), 7.84 (0.6Н, с), 4.62 (0.4Н, д, J=8.2 Гц), 4.39 (0.6Н, д, J=8.4 Гц), 4.12 (1Н,м), 3.91-3.37 (6Н, уширенный м), 2.93 (0.6Н, м), 2.78 (0.4Н, м), 1.93 (5Н,м), 1.45 (2Н,м), 1.39 (3Н,м), 0.97 (3Н, уширенный с), 0.95 (3Н, уширенный с), и 0.89 (3Н, т, J=6.7 Гц). ¹³С-ЯМР; δ (СDСl₃, ротамеры), 174.8, 172.9, 65.3, 65.1, 59.6, 59.5, 55.9, 55.7, 51.9, 47.8, 44.7, 44.0, 31.5, 30.5, 29.3, 28.7, 28.1, 27.3, 23.8, 22.0, 21.2. 18.7, 18.3, 17.6, 14.7 и 13.3. LRMS: +ve ион 394 (M+Na), 372 (M+H), -ve ион 370 (М-Н).

Пример 31

2S-[2R-(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты {1-[(2-гидрокси-этил)метилкарбамоил]-2,2-диметил-пропил}-амид

Белая пена. ¹H-ЯМР; δ (CD₃OD, ротамеры), 8.25 (0.25Н, с), 8.03 (0.125Н, с), 7.82 (0.625Н, с), 4.88 (1H, м), 3.83-3.54 (4Н, уширенный м), 3.41 (2Н, м), 3.25 (2Н, с), 2.96 (2Н, с и м), 1.49 (2Н, м), 1.23 (4Н, м), 1.00 (6Н, с), 0.99 (3Н, с), и 0.88 (3Н. м). ₁₃С-ЯМР; δ (CD₃OD, ротамеры), 173.6, 164.4, 61.1, 61.0, 56.9, 56.5, 54.2, 53.9, 52.2, 41.8, 38.9, 36.9, 36.3, 35.3, 31.6, 30.8, 27.5, 24.1 и 14.7. LRMS: +ve ион 382 [M+Na], -ve ион 358 [М-Н].

Соединения по примерам с 32 по 59 получают путем, аналогичным описанному в примере 7, Метод II, заменяя на соответствующий амин или амид/бензиловый эфир аминокислоты трет.-лейцин- N.N-диметиламид на Стадии Е. В некоторых случаях используют HOAt на Стадии Е и осуществляют снятие защиты с помощью гидрогенолиза (Стадия G) в условиях каталитического переноса (циклогексен, палладий на угле в этаноле)

Пример 32

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты-(1R-диметилкарбамоил-2,2-диметилпропил)-амид

Бесцветное масло. LRMS: +ve ион 330 [М+Н], -ve ион 328 [М-Н].

Пример 33

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-28-метил- бутил)-амид

Белая пена. LRMS: +ve ион 352 [M+Na], -ve ион 328 [М-Н].

Пример 34

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (1S-

диметилкарбамоил-2-метокси-2-метилпропил)-амид

Из рацемического п-гидроксиметилвалина. Диастереоизомер А. Бесцветное масло. LRMS: +ve ион 368 [M+Na], 346 [М+Н], -ve ион 344 [М-Н]. Диастереоизомер В. LRMS: +ve ион 368 [M+Na], 346 [М+Н], -ve ион 344 [М-Н].

Пример 35

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2-гидрокси-2-метилпропил)-амид

Бесцветное масло. LRMS: +ve ион 354 [M+Na], -ve ион 330 [М-Н].

Пример 36

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты [2-(4-хлорфенил)-1S-диметилкарбамоилэтил]-амид

Бесцветное масло. LRMS: +ve ион 330 (М+Н), -ve ион 328 (М-Н).

Пример 37

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты [1S-диметилкарбамоил-2-(4-гидроксифенил)-этил]-амид

Бесцветное масло. LRMS: +ve ион 402 (M+Na), 380 (М+Н).

Пример 38

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2-нафтален-2-ил-этил)-амид

Бесцветное масло. LRMS: +ve ион 414 (М+Н), -ve ион 412 (М-Н)-

Пример 39

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (2-циклогексил-1S-диметилкарбамоил-этил)-амид

Белая пена. LRMS: +ve ион 392 (M+Na), 370 (М+Н)

Пример 40

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (1S-диметилкарбамоилфенил-метил)-амид

Бесцветное масло. LRMS: +ve ион 350(М+Н), -ve ион 348 (М-Н).

Пример 41

2-{2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексаноил}-1,2,3,4-тетрагидро-изохинолин-3S-карбоновой кислоты диметиламид

LRMS: +ve ион 398 (M+Na), 376 (M+H), -ve ион 374 (М-Н).

Пример 42

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (4-амино-1S-диметилкарбамоил-бутил)-амид

Бесцветное масло. LRMS: +ve ион 345 (M+H), -ve ион 343 (М-Н).

Пример 43

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2-гидрокси-этил)-амид

Бесцветное масло. LRMS: +ve ион 326 (M+Na), -ve ион 302 (М-Н).

Пример 44

N-Гидрокси-N-[2R-(4-метилпиперазин-1-карбонил)-гексил]-формамид

LRMS: +ve ион 272 [М+Н].

Пример 45

N-Гидрокси-N-[2R-(морфолин-4-карбонил)-гексил]-формамид

LRMS: +ve ион 281 (M+Na), 259 (M+H), -ve ион 257 (М-Н).

Пример 46

N-Гидрокси-N-[2R-(2S-гидроксиметил-пирролидин-1-карбонил)-гексил]-формамид

LRMS: -ve ион 271 (М-Н).

Пример 47

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (1S-гидроксиметил-2,2-диметилпропил)-амид

LRMS: +ve ион 289 (M+H), -ve ион 287 (М-Н).

Пример 48

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (1S-метоксиметил-2,2-диметилпропил)-амид

LRMS: +ve ион 303 (M+H), -ve ион 301 (М-Н).

Пример 49

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты [1S-(4-бензил-пиперидин-1-карбонил)-2,2-диметилпропил]-амид

LRMS: -ve ион 458 (М-Н).

Пример 50

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты [1S-(бензил-фенилэтилкарбамоил)-2,2-диметилпропил]-амид

LRMS: +ve ион 496 (M+H), -ve ион 494 (М-Н).

Пример 51

2S-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты [2,2-диметил-1S-(пирролидин-1-карбонил)-пропил]-амид

LRMS: +ve ион 356 (M+H), -ve ион 354 (М-Н).

Пример 52

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты [2,2-диметил-1S-(морфолин-4-карбонил)-пропил]-амид

LRMS: +ve ион 372 (M+H), -ve ион 370 (М-Н).

Пример 53

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты [2,2-диметил-1S-(4-метилпиперазин-1-карбонил)-пропил]-амид

LRMS: +ve ион 385 (M+H), -ve ион 383 (М-Н).

Пример 54

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты [2,2-диметил-1S-(4-метилпиперидин-1-карбонил)-пропил]-амид

LRMS: +ve ион 384 (M+H), -ve ион 382 (М-Н).

Пример 55

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (1S-циклогексилкарбамоил-2,2-диметилпропил)-амид

LRMS: +ve ион 398 (M+H), -ve ион 396 (М-Н).

Пример 56

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты [1S-(4-ацетил-пиперидин-1-карбонил)-2,2-диметилпропил]-амид

LRMS: +ve ион 412 (M+H), -ve ион 410 (М-Н).

Пример 57

1-(2S{2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексаноиламино}-3,3-диметил-бутирил)-пиперидин-4-карбоновой кислоты метиловый эфир

LRMS: +ve ион 442 (M+H), -ve ион 440 (М-Н).

Пример 58

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты [2,2-диметил-1S-(октагидрохинолин-1-карбонил)-пропил]-амид

LRMS: +ve ион 424 (M+H), -ve ион 422 (М-Н).

Пример 59

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты [1S-(3,4-дигидро-2Н-хинолин-1-карбонил)-2,2-диметилпропил]-амид

LRMS: -ve ион 416 (М-Н).

Пример 60

2S-{3-Этилсульфанилметил-2R-[(формилгидроксиамино)-метил]пропиониламино}-3,3,N,N-тетраметилбутирамид

Путь синтеза названного соединения представлен на схеме 4 и детально описан ниже.

Реагенты и условия;

А. 3-литий-4-бензил-оксазалидин-2-он, ТГФ, -78°С;

В. LiN(SiCH₃)₂, ТГФ, -78°С, затем АсСl;

С. HCl, H₂NOBzl, NaOAс, водный эталон;

D. NaCNBH₃, АсOH, комнатная температура;

Е. HCOBt, ТГФ;

F. LiOH, водный ТГФ, 0°С;

G. H-Tle-N(CH₃)₂,HOAt, EDC, ДМФА;

Н. Н₂ Pd/C, метанол, затем разделение диастереоизомеров (HPLC).

Стадия А: 2-Этилсульфанилметил-акриловая кислота

Смесь малоновой кислоты (5,2 г, 50 ммоль), параформальдегида (3,3 г, 110 ммоль), дициклогексиламина, 9,95 мл, 50 ммоль) и этантиола (4,06 мл, 55 ммоль) в диоксане (120 мл) нагревают при 70°С в течение 2 часов. Растворители удаляют при пониженном давлении, остаток перерастворяют в этилацетате и раствор экстрагируют с помощью насыщенного водного раствора бикарбоната натрия (4х20 мл). Объединенные водные слои промывают этилацетатом (20 мл), затем подкисляют 1 М соляной кислотой. Полученную суспензию экстрагируют дихлорметаном и раствор сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают, чтобы получить названное соединение в виде белого твердого вещества (3,76 г, 52%). ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃), 9.89 (1Н, уширенный с), 6.35 (1Н, с), 5.77 (1Н, с), 3.39 (2Н, с), 2.49 (2Н, дд, J=7.4, 14.5 Гц) и 1.25 (3Н, т. J=5.2 Гц).

Стадия В: 4S-Бензил-3-(2-этилсульфанилметил-акрилоил)-5,5-диметил-оксазолидин-2-он 2-Этилсульфанилметил-акриловую кислоту (3,76 г, 25,8 ммоль) растворяют в сухом ТГФ (75 мл) и охлаждают до -78°С под слоем аргона. Триэтиламин (4,6 мл, 33,5 ммоль) и пивалоилхлорид (3,17 мл, 25,8 ммоль) добавляют с такой скоростью, чтобы температура сохранялась ниже -60°С. Смесь перемешивают при -78°С в течение 30 минут, нагревают до комнатной температуры в течение 2 часов и наконец охлаждают вновь до -78°С.

В отдельной колбе растворяют 4S-бензил-5,5-диметил-оксазолидин-2-он в сухом ТГФ (75 мл) и охлаждают до -78°С под слоем аргона. н-Бутиллитий (2,4М раствор в гексане, 12,9 мл, 30,9 ммоль) медленно добавляют и смесь перемешивают в течение 30 минут при комнатной температуре. Полученный анион транспортируют через трубку в первоначальный реакционный сосуд. Смеси дают нагреться до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Реакцию гасят насыщенным раствором бикарбоната натрия (20 мл) и растворители удаляют при пониженном давлении. Остаток распределяют между этилацетатом и водой. Органический слой промывают последовательно насыщенным раствором бикарбоната натрия, 1 М соляной кислотой и рассолом, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью флэш хроматографии (силикагель, 20% этилацетат в гексане), чтобы обеспечить получение названного соединения в виде желтого масла (6,5 г, 76%). ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃), 7.29 (5Н, м), 5.58 (1Н, с), 5.49 (1Н. с), 4.54 (1Н, дд, J=3.9, 9.7 Гц), 3.52 (2Н, дд, J=15.8, 3.1 Гц). 3.38 (1Н, дд, J=3.9, 14.5 Гц), 2.84 (1Н, дд, J=4.6, 14.3 Гц), 2.52 (2Н, дд, J=7.2, 14.6 Гц), 1.42 (3Н, с). 1.29 (3Н, с) и 1.22 (3Н, т, J=7.5 Гц). LRMS: +ve ион 356 (M+Na), 334 (М+Н).

Стадия С: 4S-Бензил-3- [ 2 R-трет. бутоксиамино-метил) -3-этилсульфанилметил-пропионил]-5,5-диметил-оксазолидин-2-он

4S-Бензил-3-(2-этилсульфанилметил-акрилоил)-5,5-диметил-оксазолидин-2-он (2,1 г, 6,3 ммоль) растворяют в этаноле (10 мл) и добавляют 0-трет.-бутилгидроксиламин хлоргидрат (0,95 г, 7,56 ммоль), а затем триэтиламин (1,1 мл, 7,87 ммоль). Смесь перемешивают при 30°С в течение ночи. Растворители удаляют при пониженном давлении и остаток растворяют в этилацетате. Органический раствор промывают последовательно 1 М соляной кислотой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и рассолом, сушат над безводным сульфатом магния и фильтруют. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении, чтобы обеспечить получение названного соединения в виде бледно-желтого масла (2,42 г, 91%; единственный диастереоизомер по HPLC). ¹Н-ЯМР; δ (СDСl₃), 7.30 (5Н, м), 5.09 (1Н, уширенный с), 4.54 (1Н, дд, J=3.5, 9.9 Гц), 4.33 (1Н, м), 3.19 (2Н, м), 3.08 (1Н, дд, J=5.4, 11.8 Гц), 2.80 (3Н, м), 2.56 (2Н, дд, J=7.4, 14.7 ГЦ), 1.41 (3Н, с), 1.36 (3Н, с), 1.23 (3Н, т, J=7.3 Гц) и 1.13 (9Н. с). LRMS: +ve ион 423 (М+Н).

Стадия D: (2R-трет.-бутоксиамино-метил)-3-этилсульфанилметилпропионовая кислота

Раствор 4S-Бензил-3-[2R-трет.-бутоксиамино-метил)-3-этилсульфанилметилпропионил]-5,5-диметил-оксазолидин-2-он в (2,42 г, 5,72 ммоль) ТГФ (40 мл) охлаждают до 0°С и добавляют раствор гидроксида лития (288 мг, 6,86 ммоль) в воде (10 мл). Смеси дают нагреться до комнатной температуры, после чего ее перемешивают в течение 5 часов. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток распределяют между водой и этилацетатом. Водный слой удаляют и слой этилацетата промывают последовательно водой и насыщенным раствором бикарбоната натрия. Объединенные водные слои промывают этилацетатом (20 мл), а затем подкисляют 1 М соляной кислотой. Полученную эмульсию экстрагируют дихлорметаном (3х20 мл) и объединенные органические слои сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают, чтобы обеспечить получение названного соединения в виде бесцветного масла (0,68 г, 50%). ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃), 8.03 (2Н, уширенный с), 3.21 (2Н, д, J=6.1 Гц), 2.89 (2Н, м), 2.75 (1Н, м), 2.57 (2Н, дд, J=7.4, 14.8 Гц), 1.26 (ЗН, т, J=7.4 Гц) и 1.18 (9Н, с). LRMS: +ve ион 236 [М+Н], -ve ион 234 М-Н].

Стадия Е: Раствор 2S-[2R-(трет.-бутоксиаминометил)-3-этилсульфанилметилпропионил-амино}-3,3,N,N-тетраметилбутирамид 2R-трет.-бутоксиамино-метил)-3-этилсульфанилметил-пропионовую кислоту (340 мг, 1,44 моль) растворяют в ДМФА (10 мл) и добавляют трет.-лейцин-N,N-диметиламид (272 мг, 1,73 ммоль), HOAt (19,6 мг, 0,14 ммоль) и EDC (331 мг, 1,73 ммоль). Реакционную массу перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток растворяют в дихлорметане. Органический раствор промывают последовательно 1 М соляной кислотой, 1 М раствором карбоната натрия и рассолом, сушат над безводным сульфатом магния и фильтруют. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении, чтобы δ (CDCl₃), 6.87 (1H, д, J=9.0 Гц), 5.11 (1Н, уширенный с), 4.93 (1H, д, J=9.3 Гц), 3.15 (3Н, с), 3.11 (1H, м), 2.95 (3Н. с), 2.79 (3Н, м), 2.54 (3Н, с), 1.22 (3Н, т, J=7.6 Гц), 1.18 (9Н, с) и 1.01 (9Н, с). LRMS: +ve ион 398 [M+Na], 376[M+1].

Стадия F: 2S-{2R-[(трет.-Бутокси-формил-амино)-метил]-3-этилсульфанилметилпропиониламино}-3,3,N,N-тетраметилбутирамид.

Раствор 2S-[2R-(трет.-бутокси-амино-метил)-3-этилсульфанилметил-пропиониламино}-3,3,N,N-тетраметилбутирамида (220 мг, 0,58 ммоль) в дихлорметане (5 мл) охлаждают до 0°С и обрабатывают смешанным муравьино-уксусным ангидридом (0,1 мл). Реакционную массу перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов, затем растворитель упаривают при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью флэш хроматографии (силикагель, 50% этилацетат в гексане в качестве элюента), чтобы обеспечить получение названного соединения в виде бесцветного масла (120 мг, 52%). ¹H-ЯМР; δ (СDСl₃ ротамеры), 8.31 (1Н, уширенный с), 6.56 (1Н, д. J=9.1 Гц), 4.94 (0.33Н, д, J=9.4 Гц), 4.88 (0.67Н, д, J=9.2 Гц), 4.08 (0.67Н, уширенный м), 3.83 (1.34Н, уширенный м), 3.13 (3Н, с), 2.95 (3Н. с), 2.80 (2Н, м). 2.61 (1Н, дд, J=6.8, 14.0 Гц), 2.49 (2Н, дд, J=7.4, 14.7 Гц), 1.29 (9Н, с), 1.25 (3Н, т, J=7.2 Гц) и 0.99 (9Н, с). LRMS: +ve ион 426 [M+Na], 404 [М+Н].

Стадия G: 2S{3-Этилсульфанилметил-2R-[(формил-гидрокси-амино)-метил]пропионил-амино}-3,3,N,N-тетраметилбутирамид

Раствор 2S-{2R-[(трет.-бутокси-формил-амино)-метил]-3-этилсульфанилметилпропиониламино}-3,3,N,N-тетраметилбутирамид (120 мг, 0,3 ммоль) в дейтерохлороформе (1 мл) обрабатывают трифторуксусной кислотой (4 мл) и дают постоять при 4°С в течение ночи. Растворители удаляют при пониженном давлении и оставшуюся трифторуксусную кислоту удаляют путем азеотропной отгонки с толуолом. Остаток очищают с помощью препаративной HPLC, чтобы обеспечить получение названного соединения в виде бесцветного масла (40 мг, 38%; 7:2 смесь диастереоизомеров с помощью HPLC). ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃. ротамеры), 8.40 (0.33Н, с), 7.87 (0.67Н, с), 7.24 (0.33Н, д, J=9.3 Гц), 6.98 (0.67Н, д, J=9.3 Гц), 4.91 (0.67Н. д, J=9.3 Гц), 4.90 (0.33Н, д, J=9.3 Гц), 4.07 (0.33Н, дд, J=7.5, 14.5 Гц), 3.86 (0.67Н, дд, J=8.8, 14.2 Гц), 3.75 (0.67Н, м), 3.68 (0.33Н, м), 3.16 (1Н, с), 3.15 (2Н, с), 3.05 (1Н, м), 2.96 (3Н, с), 2.77 (1Н, м). 2.66 (1H, м), 2.52 (2Н, дд, J=7.4, 14.8 Гц), 1.22 (3Н, т, J=7.3 Гц), 0.99 (3Н, с) и 0.96 (6Н, с). ¹³С-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 173.3, 171.6, 171.2, 55.2, 54.8, 51.1, 48.5, 45.2, 44.4, 38.5, 38.4, 35.9, 35.8, 35.7, 31.7, 31.4, 26.7, 26.6, 26.5 и 14.6. LRMS: +ve ион 370 [M+Na], 348 [M+H], -ve ион 346 [М-Н]. Соединение по примеру 61 получают аналогично при использовании пиперидина вместо этантиола на Стадии А.

Пример 61

2-{2-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]:-3-пиперидин-1-ил-пропиониламино}-3,3,N,N-тетраметиламид масляной кислоты

Белое твердое вещество (4:1 смесь диастереоизомеров с помощью HPLC). ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 8.29 (1Н, с), 7.95 (1Н, уширенный с), 4.87 (1Н, д, J=9.1 Гц), 4.02 (1Н, дд, J=5.0. 14.6 Гц), 3.56 (1Н, дд, J=8.2, 14.6 Гц). 3.14 (ЗН, с), 2.96 (ЗН, с), 2.89 (1Н. м), 2.69 (1H, м), 2.52 (5Н, м). 1.65 (4Н, м), 1.49 (2Н, м) и 0.99 (9Н, с). ¹³С-ЯМР; δ (CDCl₃), 172.2, 171.3, 60.4, 55.0, 54.9, 48.6, 42.4, 38.8, 36.2, 36.1, 27.0, 25.6 и 24.3. LRMS: +ve ион 371 [M+H], -ve ион 369 [М-Н].

Соединения по примерам с 62 по 65 получают путем, аналогичным описанному в примере 7, Метод II, заменяя О-трет.-бутилгидроксиламином 0-бензилгидроксиламин на Стадии В и соответствующими аминами или амидом/бензиловым эфиром аминокислоты трет.-лейцин N,N-диметиламид на Стадии Е. Завершающее снятие защиты осуществляют путем ацидолиза с помощью трифторуксусной кислоты (см. пример 60, выше).

Пример 62

2R-[(Формил-гидрокси--амино)-метил]-гексановой кислоты (1R-диметилкарбамоил-2-метил-2-метилсульфанилпропил)-амид

Бесцветное масло. ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 8.4 (0.5Н, с), 7.85 (0.5Н, с), 7.11 (0.5Н, д, J=9.1 Гц), 6.93 (0.5Н, д, J=9.1 Гц), 5.15 (1H, д, J=9.4 Гц). 3.90 (0.5Н. м), 3.73 (0.5Н, м), 3.64 (0.5Н, д, J=14.3 Гц), 3.48 (0.5Н, дд, J=14.0. 3.9 Гц). 3.22 (3Н, с), 2.97 (3Н, с), 2.83 (0.5Н, м), 2.70 (0.5Н, м), 2.07 (1.5Н, с), 2.04 (1.5Н, с), 1.58 (1 Н, м), 1.36 (4Н, м), 1.32 (3Н, с), 1.28 (3Н, с) и 0.86 (3Н, т, J=6.6 Гц). ₁₃С-ЯМР; δ (CDCl₃), ротамеры), 175.4,173.5, 170.8, 63.6, 53.2. 53.1, 52.5,,49.5, 47.5, 46.1, 44.9, 41.6, 37.5, 36.5, 36.4, 35.4, 30.2, 29.8, 28.0, 14.3, 12.0 и 11.9. LRMS: +ve ион 362 [M+H], -ve ион 360 [М-Н].

Пример 63

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты (2-бензилсульфанил-1R-диметилкарбамоил-2-метил-пропил)-амид

Белая пена. ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 8.37 (0.33Н, с), 7.81 (0.66Н, с), 7.31 (5Н, м), 7.06 (0.33Н, д, J=8.8 Гц). 6.89 (0.66Н, д, J=9.3 Гц), 5.20 (1Н, д, J=9.3 Гц), 3.94 (0.33Н, дд, J=8.3, 14.6 Гц), 3.78 (2.66Н, м), 3.61 (0.33Н, дд, J=3.5, 14.4 Гц), 3.42 (0.66Н, дд, J=5.1, 14.9 Гц), 3.21 (3Н, с), 3.03 (3Н, с), 2.82 (0.66Н, м), 2.69 (0.33Н, м), 1.61 (1 Н, м), 1.42 (1 Н, м), 1.37 (3Н, с), 1.32 (3Н, с), 1.26 (4Н, м) и 0.86 (3Н, т, J=6.6 Гц). ¹³С-ЯМР; δ (CDCl_3, ротамеры), 175.3, 173.5, 171.0, 138.1, 137.4, 129.5, 129.3, 129.1, 129.0, 128.9, 127.6, 127.4, 55.9, 53.7, 52.5, 51.2, 49.6, 49.5, 46.1, 44.9, 39.0, 38.6, 36.6, 36.4, 33.9, 33.7, 30.3, 30.1, 29.7, 26.7, 26.1, 25.7, 25.5, 24.2, 22-9 и 14.3. LRMS: +ve ион 460 [M+Na], 438 [M+H], -ve ион 436 [М-Н].

Пример 64

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты [2-бензилсульфанил-2-метил-1R-(морфолин-4-карбонил)-пропил]-амид

Белая пена. ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 8.44 (0.5Н, с), 8.37 (0.5Н, с). 7.30 (5Н. м), 6.88 (0.5Н, д, J=8.3 Гц), 6.78 (0.5Н, д, J=9.2 Гц), 5.12 (1Н, д, J=9.5 Гц), 3.91 (1Н, дд, J=8.2, 14.6 Гц), 3.78 (10Н, м), 3.45 (1Н, дд, J=4.5, 14.2 Гц), 2.80 (0.5Н, м), 2.64 (0.5Н, м), 1.61 (1Н, м), 1.41 (1H, м), 1.36 (3Н, с), 1.33 (3Н, с), 1.29 (4Н, м) и 0.87 (3Н, т, J=6.8 Гц). ¹³С-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 175.5, 173.4, 169.4, 137.8, 129.5, 129.3, 129.1, 129.0, 127.8, 127.5, 67.1, 67.0, 53.3, 53.2, 51.99, 49.6, 49.5, 49.2, 47.9, 46.5, 45.0, 43.2. 43.0, 34.0, 30.3, 30.2, 29.7, 26.8, 26.5, 25.9, 25.8, 22.9 и 14.3. LRMS: +ve ион 502 [M+Na], 480 [M+H], -ve ион 478 [М-Н].

Пример 65

2-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гексановой кислоты [2-бензилсульфанил-2-метил-1R(или S)-(4-метилпиперидин-1-карбонил)-пропил]-амид

Диастереоизомер А. Белое твердое вещество. LRMS: +ve ион 514[M+Na], 492[M+H], -ve ион 490[М-Н].

Диастереоизомер В. Бесцветная смола. LRMS: +ve ион 514 [M+Na], 492 [M+H], -ve ион 490[М-Н].

Соединения по примерам с 66 по 68 получают путем, аналогичным описанному в примере 7, Метод II, заменяя соответствующей малоновой кислотой бутилмалоновую кислоту на Стадии А, O-трет-бутилгидроксиламином O-Бензилгидроксиламин на Стадии С. Стереоселективность в реакции присоединения по Михаэлю варьировалась. Окончательное снятие защиты проводят путем ацидолиза с помощью трифторуксусной кислоты (см пример 60, выше).

Пример 66

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-пент-4-еновой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметилпропил)-амид

Единственный диастереоизомер. ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 8.40 (0.25Н, с), 7.84 (0.75Н, с), 7.05 (0.35Н. д, J=9.0 Гц), 6.74 (0.65Н, д, J=9.3Iu), 5.70 (1Н, м), 5.03-5.24 (2Н, м), 4.88 (1Н, дд, J=9.4, 6.7 Гц), 3.98 (0.5Н, м). 3.81 (0.5Н, м), 3.55 (1H, м), 3.14 (3Н, с). 2.97 (1.3Н, с), 2.96 (1.7Н, с), 2.75-2.92 (1H, м), 2.16-2.50 (2Н, м), 0.98 (4.5Н, с) и 0.94 (4.5Н, с). LRMS: +ve ион 336 [M+Na], -ve ион 312 [М-Н].

Пример 67

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гекс-5-еновой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметилпропил)-амид

Диастереоизомер А: бесцветное масло. ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 8.42 (0.45Н, с), 7.84 (0.55Н, с), 6.78 (0.45Н, д, J=8.4 Гц), 6.60 (0.55Н, д, J=9.3 Гц), 5.74 (1H, м), 5.03 (2Н, м), 4.88 (1H, м), 4.14 (0.4Н, м), 3.81 (0.6Н, м), 3.55 (1H, м), 3.16 (1H, с), 3.15 (2Н, с), 2.98 (1H, с), 2.97 (2Н, с), 2.85 (0.7Н, м), 2.68 (0.3Н, м), 2.07 (2Н. м), 1.73 (1.6Н, м), 1.50 (0.4Н, м), 0.99 (4Н, с) и 0.95 (5Н, с). LRMS: +ve ион 350 [M+Na], -ve ион 326 [М-Н]. Диастереоизомер В: бесцветное масло. ¹Н-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 8.41 (0.5Н, с), 7.75 (0.5Н, с), 6.58 (0.5Н, д, J=9.1Гц), 6.36 (0.5Н, д, J=9.1 Гц), 5.75 (1H, м), 5.01 (2Н, м), 4.86 (0.5Н, д, J=9.5Iu), 4.64 (0.5Н, д, J=7.5In), 3.42-3.82 (2Н, м), 3.22 (1.5Н, с), 3.07 (1.5Н, с), 2.99 (3Н, с), 2.87 (0.5Н, м), 2.66 (0.5Н, м), 2.13 (2Н, м), 1.81 (1Н, м), 1.49 (1Н, м), 1.02 (4.5Н, с) и 1.00 (4.5Н, с). LRMS: +ve ион 350 [M+Na], -ve ион 326 [М-Н].

Пример 68

2R-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-гекс-4-иновой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметилпропил)-амид

Диастереоизомер А: бесцветное масло. ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃, ротамеры), 8.39 (0.4Н. с), 7.87 (0.6Н, с), 7.20 (0.4Н, д, J=8.4 Гц), 6.94 (0.6Н, д, J=9.3 Гц), 4.90 (1H, м), 3.66-4.14 (2Н, м), 3.16 (2Н, с), 3.14 (2Н, с), 2.96 (3Н, с), 2.88 (1H, м). 2.41 (2Н, м). 1.77 (3Н, м), 1.00 (3.5Н, с) и 0.96 (5.5Н, с). LRMS: +ve ион 348 [M+Na], -ve ион 324 [М-Н].

Диастереоизомер В: бесцветное масло. ¹H-HMP; δ (СDСl₃, ротамеры), 8.37 (0.5Н, с), 7.81 (0.5Н, с), 6.87 (1H, м), 4.91 (0.5Н, д, J=9.4 Гц), 4.79 (0.5Н, д, J=8.2 Гц). 3.76 (1.5Н, м), 3.63 (0.5Н, м), 3.19 (1.5Н, с), 3.14 (1.5Н, с), 2.98 (3Н, с), 2.85 (1H, с), 2.41 (2Н, м), 1.77 (3Н, м), 1.03 (4.5Н, с) и 1.01 (4.5Н, с). LRMS: +ve ион 348 [M+Na], -ve ион 324 [М-Н].

Пример 69

2R-[1R (или S)-(Формил-гидрокси-амино)-этил]-гексановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметил-пропил)-амид

Названное соединение получают согласно пути синтеза, представленного на Схеме 5 и описанного детально ниже:

Схема 5

Реагенты и условия:

А. (CHO)n, EtSH, дициклогексиламин, диоксан, 70°С, 2 часа;

В. Трет.-BuCOCl, триэтиламин, затем 3-литий-4-бензил-5,5-диметилоксазолидин-2-он;

С. HCl, H₂NO-трет.-Bu, триэтиламин, о/н;

D. LiOH, водный ТГФ, 0°С;

E. H-трет.-LeuN(Me₂)₂, HOAt, EDС, ДМФА;

F. HCOAc, СH₂Сl₂;

G. трифторуксусная кислота, хлороформ.

Стадия А: 4-Бензил-3-гексаноил-оксазолидин-2-он 4S-Бензил-оксазолидин-2-он (14,5 г, 81,7 ммоль) растворяют в сухом ТГФ (75 мл) в атмосфере аргона. Раствор охлаждают на бане со льдом перед медленным добавлением н-бутиллития (1,6 М в гексане, 56 мл, 89,2 ммоль). Из раствора кристаллизуется соль лития в виде твердой массы, и ему дают нагреться до комнатной температуры в течение ночи. Полученную оранжевую суспензию вновь охлаждают на бане со льдом во время добавления охлажденного раствора гексаноилхлорида (10,4 мл, 74,3 ммоль) в сухом ТГФ (50 мл). Смесь оставляют нагреваться до комнатной температуры и затем перемешивают в течение 3 часов. Реакцию гасят с помощью 1 М раствора карбоната натрия (5 мл) и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток распределяют между 1 М раствором карбоната натрия (100 мл) и этилацетатом (150 мл). Органический слой удаляют и водный слой экстрагируют дополнительным количеством этилацетата. Объединенные органические слои промывают последовательно водой, 1 М раствором карбоната натрия и рассолом, сушат над безводным сульфатом магния и фильтруют. Фильтрат концентрируют с получением масла оранжевого цвета. Очистка с помощью флэш хроматографии приводит к получению названного соединения в виде желтого масла (10.21 г, 50%). ¹Н-ЯМР; δ (CDCl₃), 7.38-7.24 (3Н, м). 7.24-7.16 (2Н, м), 4.68 (1Н, м), 4.24-4.12 (2Н, м), 3.30 (1Н, дд, J=13.4, 3.2 Гц), 3.02-2.86 (2Н. м), 2.77 (1Н, дд, J=13.4, 9.6 Гц), 1.77-1.63 (2Н, м), 1.44-1.30 (4Н, м) и 0.92 (3Н, уширенный т, J=6.9 Гц).

Стадия В: 1-(4S-Бензил-2-оксо-оксазолидин-3-ил)-2R-бутил-бутан-1,3-дион 4-Бензил-3-гексаноил-оксазолидин-2-он (10,2 г, 37,1 ммоль) растворяют в ТГФ (150 мл) в атмосфере аргона и охлаждают до -78°С. Гексаметилдисилазид лития (1 М в ТГФ, 41 мл, 41 ммоль) вводят через трубку в течение нескольких минут и полученный зеленый раствор перемешивают при -78°С в течение 2 часов. Медленно добавляют ацетил хлорид (3,3 мл, 46,3 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 3,5 часов. Быстро добавляют раствор лимонной кислоты (3,0 г, 14 ммоль) в воде (15 мл) и гасят реакцию. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток распределяют между этилацетатом и водой, промывают рассолом, сушат над безводным сульфатом магния и фильтруют. Фильтрат концентрируют, чтобы обеспечить получение названного соединения в виде желтого масла (12,11 г, содержится остаточный растворитель), которое используют без дополнительной очистки на Стадии С. ¹H-ЯМР; δ (СDСl₃,), 7.37-7.21 (5Н, м), 4.68 (1Н, м), 4.53 (1Н, дд, J=9.6, 3.7 Гц), 4.23-4.13 (2Н, м), 3.43 (1Н, дд, J=13.5, 3.3 Гц), 2.75 (1-Н, дд, J=13.5, 9.9 Гц), 2.33 (3Н, с), 2.03 (1Н, м), 1.77 (1 Н, м), 1.46-1.26 (4Н, м) и 0.98-0.86 (3Н, м).

Стадия С: 1-(4S-Бензил-2-оксо-оксазолидин-3-ил)-2К-бутилбутан-1,3-дион 3-(0-бензилоксим)

К раствору 1-(4S-бензил-2-оксо-оксазолидин-3-ил)-2R-бутил-бутан-1,3-она (12, 11 г, 38,15 ммоль) в воде (10 мл) и этаноле (90 мл) добавляют ацетат натрия (3,75 г, 45,78 ммоль) и 0-бензилгидроксиламин хлоргидрат (7,31 г, 45,78 ммоль). Полученную суспензию оставляют перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. Продукт (7,3 г, 45%, единственный изомер оксима) кристаллизуют непосредственно из реакционной массы и фильтруют, промывают водным этанолом (1:1) и сушат под вакуумом. Дополнительный продукт (5,31 г, 33%, смесь изомеров оксима) получают в виде желтого масла маточников с помощью кислотно-основной экстракции, а затем колоночной хроматографии. ¹H-ЯМР; δ (СDСl₃, основной изомер оксима), 7.34-7.20 (8Н, м), 7.12-7.07 (2Н. м), 5.14-5.02 (2Н, м), 4.53 (1Н, м), 4.13 (1Н, дд, J=9.4, 4.0 Гц), 4.04 (1Н, уширенный т, J=8.4 Гц), 3.91 (1Н, дд, J=9.0, 2.7 Гц), 3.16 (1Н, дд, J=13.4, 2.9 Гц), 2.09 (3Н, с), 1.97 (1H, м), 1.75 (1Н, дд J=13.4, 10.8 Гц), 1.67(1Н,м), 1.45-1.22 (4Н, м) и 0.91 (3Н, уширенный т, J=6.9 Гц).

Стадия D: 4S-Бензил-3-[2R-(1R(или S)-бензилоксиамино-этил)-гексаноил]-оксазолидин-2-он

Смесь оксимов, полученных на Стадии С (5,31 г, 12,5 ммоль) растворяют в уксусной кислоте (30 мл) и охлаждают на водяной бане со льдом, а затем добавляют цианборгидрид натрия (0,8 г, 12,5 ммоль) в виде одной порции. Через несколько минут прекращается бурное выделение газа, после чего вводят дополнительную порцию цианборгидрида (0,8 г). Реакционной массе дают нагреться до комнатной температуры и ее перемешивают в течение ночи. Уксусную кислоту удаляют при пониженном давлении и остаток перегоняют в виде азеотропа с толуолом. Полученное масло растворяют в этилацетате, промывают водой, 1 М карбонатом натрия и рассолом, сушат над безводным сульфатом магния и фильтруют. Фильтрат упаривают с получением бледно-желтого масла, которое очищают путем флэш хроматографии (силикагель, с 10 до 25%, этилацетат в гексане в качестве элюента). Выход 3,43 г, (64%). ¹H-ЯМР; δ (СDСl₃, смесь диастереоизомеров), 7.36-7.17 (10Н, м), 5.80 (0.45Н, уширенный с), 5.55 (0.55Н, уширенный д, J=8.9 Гц), 4.72-4.59 (ЗН, м), 4.20-4.05 (2Н. м), 3.97 (0.45Н, м), 3.82 (0.55Н, м), 3.47-3.22 (2Н, м), 2.45 (1Н, м), 1.90-1.48 (2Н, м).1.40-1.14 (7Н, м) и 0.95-0.84 (3Н, м).

Стадия Е: М-[2R-(4S-Бензил-2-оксо-оксазолидин-3-карбонил)-1R (или S)-метил-гексил]-N-бензилоксиформамид

4S-Бензил-3-[2R-(1 R (или S)-бензилоксиамино-этил)-гексаноил]-оксазолидин- 2-он (3,08 г, 7,3 ммоль) растворяют в сухом ТГФ и обрабатывают N-формилбензотриазолом (1,60 г, 10,9 ммоль). Реакционную массу перемешивают в течение 4 часов при комнатной температуре. Растворитель удаляют при пониженном давлении и оставшееся масло распределяют между дихлорметаном (40 мл) и 1 М раствором гидроксида натрия (30 мл). Органический слой удаляют, промывают дополнительным количеством раствора гидроксида натрия, затем рассолом, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают. Очистка с помощью флэш хроматографии (силикагель, от 20 до 50%, этилацетат в гексане дает названное соединение в виде бледно- желтого твердого вещества (2,50 г, 76%. ¹H-ЯМР; δ (СDСl₃, смесь диастереоизомеров и ротамеров), 8.22 (1Н, уширенный м), 7.54-7.13 (10Н, м), 5.22-3.92 (7Н, уширенный, м),3.30 (1Н,м),2.48 (1Н, уширенный, м), 1.85-1.13 (9Н, уширенный м) и 0.93-0.83 (3Н, м).

Стадия F: 2R-[1R (или S)-(Бензилокси-формил-амино)-этил]-гексановая кислота N-[2R-(4S-Бензил-2-оксо-оксазолидин-3-карбонил)-1R (или S)-метил-гексил]-N-бензилокси-формамид (1,50 г, 3,31 ммоль) растворяют в ТГФ (25 мл) и воде (5 мл) и раствор охлаждают на водяной бане со льдом. Добавляют раствор пероксида водорода (27% об./об.), 13,26 ммоль), а затем немедленно добавляют гидроксид лития (167 мг, 3,98 ммоль). Реакционной смеси дают нагреться до комнатной температуры и ее перемешивают дополнительно в течение 3 часов. Раствор охлаждают вновь перед тем, как добавить нитрит натрия (0,92 г, 13,3 ммоль). Через 10 минут большую часть растворителя удаляют при пониженном давлении с получением белой пасты, которую распределяют между этилацетатом (25 мл) и 1 М карбонатом натрия (30 мл). Органический слой промывают дополнительным количеством раствора карбоната натрия и объединенные водные экстракты промывают этилацетатом. Водный слой охлаждают и подкисляют 1 М соляной кислотой и экстрагируют дважды этилацетатом. Объединенные органические слои промывают рассолом, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают, чтобы обеспечить получение названного соединения в виде масла зеленого цвета (839 мг, 86%). ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃, смесь диастереоизомеров и ротамеров), 8.40-7.64 (2Н, уширенный м), 7.48-7.27 (5Н, м), 5.23-4.80 (2Н, м), 4.16 (1Н, уширенный м). 2.79 (1Н, м), 1.67-1.47 (2Н, м), 1.47-1.18 (7Н, м) и 0.95-0.82 (3Н, м).

Стадия G: 2R-[1R (или S)-(Бензилокси-формил-амино)-этил]-гексановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметилпропил)-амид 2R-[1R (или S)-(Бензилокси-формил-амино)-этил]-гексановую кислоту (839 мг, 2,86 ммоль), трет.-лейцин N.N-диметиламид (498 мг, 3,15 ммоль) и EDC (658 мг, 3,43 ммоль) растворяют все вместе в ДМФА (15 мл) и добавляют каталитическое количество HOAt (60 мг). Раствор оставляют перемешиваться в течение нескольких дней при комнатной температуре. Растворитель удаляют при пониженном давлении и оставшееся масло распределяют между этилацетатом и 1 М соляной кислотой (75 мл). Органические слои промывают последовательно 1 М соляной кислотой, 1 М раствором карбоната натрия и рассолом, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают с получением желтой пены (1,08 г, 82%). ¹H-ЯМР; δ (СDСl₃, смесь диастереоизомеров и ротамеров), 8.13 (1Н, уширенный м), 7.52-7.31 (5Н, м), 6.28 (1Н, уширенный м), 5.36-4.67 (3Н, уширенный м), 4.09 (1Н, уширенный м), 3.14 (3Н, с), 2.95 (1.2Н, с), 2.93 (1.8Н, с), 2.48 (1Н, уширенный м), 1.61-1.04 (9Н, м), 0.99 (3.6Н, с), 0.95 (5.4Н, с) и 0.89-0.75 (3Н, м).

Стадия Н: 2R-[1R (или S)-(Формил-гидрокси-амино)-этил]-гексановой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметилпропил)-амид

2R-[1R (или S)-(Бензилокси-формил-амино)-этил]-гексановой кислоты (tS-диметилкарбамоил-2,2-диметилпропил)-амид (200 мг, 0,46 ммоль) растворяют в метаноле (15 мл) и помещают под слой аргона. Добавляют суспензию 10% палладия на угле (20 мг) в этилацетате и смесь перемешивают в атмосфере водорода в течение 3 часов. Катализатор удаляют путем фильтрования и фильтрат упаривают с получением бесцветного масла (163 мг, количественный);

Два диастереоизомерных продукта разделяют путем препаративной HPLC. Диастереоизомер А (27мг): ¹H-ЯМР; δ (CDCl₃, в основном один ротамер), 8.67 (0.9Н, уширенный с), 7.92 (1Н, с), 6.74 (0.1 Н, уширенный м), 6.54 (0.9Н, д, J=9.4 Гц), 4.93 (0.9Н, д, J=9.4 Гц), 4.64 (0.1 Н, уширенный м), 3.89 (1Н, дд, J=6.6, 2.6 Гц), 3.16 (3Н, с), 2.96 (3Н, с), 2.62-2.48 (1Н, м), 1.52-1.06 (6Н. м), 1.35 (3Н, д, J=6.6 Гц), 1.00 (9Н, с) и 0.82 (3Н. т, J=6.9 Гц). ¹³С-ЯМР; δ (CDCl₃), 173.0, 171.3, 57.2, 54.4, 50.4, 38.4, 35.6, 29.9, 29.1, 26.6, 22.5, 17.2 и 13.9. LRMS: +ve ион 366 [M+Na], -ve ион 342 [М-Н]. Диастереоизомер В (42мг): ¹H-ЯМР; δ (СDСl₃, смесь ротамеров), 9.15 (0.6Н, с), 8.60 (0.4Н, уширенный с), 8.42 (0.6Н, с), 7.84 (0.4Н, с), 6.83 (0.6Н, д, J=9.2 Гц), 6.55 (0.4Н, д, J=9.4 Гц), 4.91 (0.6Н, д, J=9.2 Гц), 4.89 (0.4Н, д, J=9.4 Гц), 4.69 (0.6Н, квд, J=7.0, 4.3 Гц), 3.92 (0.4Н. дкв, J=9.1, 6.8 Гц), 3.15 (3Н, с), 2.97 (1.8Н, с), 2.95 (1.2Н, с), 2.59 (0.4Н, тд, J=9.8, 4.3 Гц), 2.39 (0.6Н, тд, J=7.4, 4.3 Гц), 1.92-1.07 (6Н, м), 1.37 (1.2Н, д, J=6.8 Гц), 1.31 (1.8Н, д, J=7.0 Гц), 1.01 (5.4Н, с), 0.96 (3.6Н. с), 0.85 (1.8Н, т, J=7.2 Гц) и 0.83 (1.2Н, т, J=7.2 Гц). ¹³С-ЯМР; δ (СDСl₃, смесь ротамеров), 175.7, 173.2, 171.3, 170.7, 56.7, 55.0, 54.4, 53.2, 50.8,49.9, 38.3, 35.7, 35.6, 35.5, 35.4, 30.3, 29.5, 29.3, 26.5, 26.4, 22.5, 22.4, 16.0, 15.4 и 13.8. LRMS: +ve ион 366 [M+Na], -ve ион 342 [М-Н].

Пример 70

N-Циклогексил-2-{2-[(формил-гидрокси-амино)-метил]-3-фенил-пропиониламино}-3,3-диметиламид масляной кислоты

Исходные растворы 1 М аммиака в метаноле (1 мл, 1 ммоль) и 1 М триметилацетальдегида в метаноле (1 мл, 1 ммоль) смешивают в пробирке и оставляют стоять в течение 1 часа. Добавляют 1 М раствор циклогексилизоцианида в метаноле (1 мл, 1 ммоль), а затем 0,5 М 2RS-[(бензилоксиформиламино)-метил]-гексановой кислоты в метаноле (2 мл, 1 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 дней. Растворитель удаляют, используя центрифугу Savant и реакционную смесь кристаллизуют из этилацетата-гексана с получением 2-{2-[(бензилокси-формил-амино)-метил]-3-фенил-пропиониламино}-N-циклогексил-3,3-диметиламида масляной кислоты в виде белого твердого вещества (93 мг, 18%), с которого была снята защита с помощью каталитического обменного гидрогенолиза (водород, 10% палладий на угле, метанол-этилацетат), что позволило получить названное соединение (75 мг, 99%). Белое твердое вещество. LRMS: +ve ион 440 [M+Na], 418 [М+Н], -ve ион 416 [М-Н].

Соединения по примерам с 71 по 77 получают параллельно, используя Ugi 4-компонентную реакцию конденсации, как это было описано выше. Все продукты получают с чистотой >85%, как показывают данные HPLC.

Пример 71

2-{2-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-3-фенил-пропиониламино}-3,3-диметилгексановой кислоты циклогексиламид

Белое твердое вещество (90 мг). ¹H-ЯМР; δ (СD₃OD), 7.82 (1Н, с), 7.29-7.08 (5Н, м), 4.20 (1Н, д, J=5.0 Гц), 3.89 (1Н, м), 3.19 (1Н, м), 2.95-2.67 (2Н, м). 1.88-1.58 (5Н. уширенный м), 1.44-1.05 (9Н, уширенный м) и 0.89 (9Н, с). LRMS: +уеион 468 [M+Na], 446 [М+Н], -ve ион 444 [М-Н].

Пример 72

2-{2-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-3-фенил-пропиониламино}-3,3-диметилгексановой кислоты фенилметиламид

Белое твердое вещество (77 мг). ¹H-ЯМР; δ (CD₃OD), 7.82 (1H, с), 7.35-7.11 (10Н, м), 4.38-4.19 (3Н, м), 3.85 (1Н, м), 3.52 (1H, м), 2.97-2.63 (3Н, м), 1.37-1.11 (4Н, м) и 0.93-0.78 (9Н, м). LRMS: +ve ион 476 [M+Na], 454 [М+Н].

Пример 73

2-{2-[(Формил-гидрокси-амино)-метил}-3-фенилпропиониламино}-3,3-диметилбутановой кислоты трет.-бутиламид

Белое твердое вещество (47 мг). ¹H-ЯМР; δ (СD₃ОD), 7.82 (1Н, с), 7.45 (1Н. м), 7.30-7.09 (5Н, м), 4.12 (1Н, д, J=7.2 Гц), 3.89 (1Н, м), 3.41 (1Н. м), 3.15 (1Н. м), 2.97-2.68 (2Н, м), 1.28 (9Н, с) и 0.92 (9Н, с). LRMS: +ve ион 414 [M+Na], 392 [М+Н], -ve ион 390 [М-Н].

Пример 74

2{2-[(Формил-гидрокси-амино)-метил]-3-фенил-пропиониламино}-3,3-диметилгексановой кислоты (1,1,3,3-тетраметил)-бутирамид.

Белое твердое вещество (65 мг). ¹H-ЯМР; δ (СD₃ОD), 7.79 (1Н, с), 7.42-7.21 (1Н, м), 7.20-7.10 (5Н, м), 4.23 (1Н, д, J=9.1 Гц), 3.86 (1Н, м), 3.51 (1Н, м), 3.23 (1Н, м), 3.00-2.56 (2Н, м), 1.50-1.15 (12Н, м) и 1.02-0.83 (18Н,м). LRMS: +ve ион 498 [M+Na], 476 [М+Н ], -ve ион 474 [М-Н],

Пример 75

N-(Циклогексил-циклогексилкарбамоил-метил)-2-[(формил-гидрокси-амино)-метил]-3-фенилпропионамид

Белое твердое вещество (98 мг). ¹H-ЯМР; δ (СD₃ОD), 7.38-7.08 (5Н, м), 4.01 (1Н. м), 3.81 (1Н, м), 3.68-3.35 (2Н, м), 3.15 (1Н, м), 2.98-2.65 (2Н, м), 1.88-1.49 (10Н, уширенный м) и 1.45-0.83 (11 Н, уширенный м). LRMS: +ve ион 466 [M+Na], 444 [М+Н], -ve ион 442 [М-Н].

Пример 76

N-(Циклогексил-фенилметилкарбамоил-метил)-2-[(формил-гидрокси-амино)-метил]-3-фенилпропионамид

Белое твердое вещество (34 мг). ¹Н-ЯМР; δ (СD₃OD), 7.35-7.10 (10Н, м), 4.44-4.23 (2Н, м). 4.05 (1Н, м), 3.87-3.35 (2Н, м), 3.09 (1Н, м), 2.85-2.72 (2Н. м), 1.65-1.46 (4Н, м), 1.38-0.93 (5Н, уширенный м) и 0.75-0.51 (2Н, уширенный м). LRMS: +ve ион 474 [M+Na], -ve ион 450 [М-Н].

Пример 78

N-[Циклогексил-(1,1,3,3-тетраметил-бутилкарбамоил)-метил]-2-[(формил-гидрокси-амино)-метил]-3-фенилпропионамид

Белое твердое вещество (51 мг). ¹H-ЯМР; δ (CD₃OD), 7.80 (1H. с), 7.36-7.10 (5Н, м), 4.05 (1Н, м), 3.85 (1H, м), 3.49 (1Н, м), 3.15 (1H, м), 2.91 (1Н, м), 2.68 (1H, м), 1.90 (1H, м), 1.80-1.48 (7Н, м), 1.40-1.12 (ЮН, м) и 1.08-0.83 (10Н, м). LRMS: +ve ион 496 [M+Na], 474 [М+Н], -ve ион 472 [М-Н].

Биологический Пример А.

Демонстрация антибактериального воздействия соединения 1 (Пример 1) и соединения 2 (Пример 13).

а).

Минимальные ингибирующие концентрации (MIC) ингибиторов в отношении Е. coli штамма DH5a (Генотип F-f80d/acZDM15D(lacZYA-argF)U169 deoR recA1 endA1 hsdR17(r-k

,m+k)phoA supE441^- thi-1 gyrA96 relA1), полученного от GibcoBRL Life Technologies, Enterobacter cloacae (американский коллекционный номер типовой культуры 13047), Klebsiella pneumoniae (американский коллекционный номер типовой культуры 13883) или Staphylococcus capitzs (американский коллекционный номер типовой культуры 35661) определяли следующим образом. Исходные растворы тестируемого соединения (Соединения 1 и 2 из Примеров 1 и 13 соответственно (оба изомеры А)) и трех стандартных лабораторных антибиотиков карбенициллина (Sigma, каталожный номер С3416), канамицина (Sigma, каталожный номер К4000) и хлорамфеникола (Sigma, каталожный номер С1919) были получены путем растворения каждого соединения в диметилсульфоксиде в концентрации 10 мМ. Для определения минимальной ингибирующей концентрации были приготовлены двукратные серийные разведения в питательной среде 2xYT (типтон (typtone) 16 г/л, дрожжевой экстракт 10 г/л, хлорид натрия 5 г/л, получено от BIO 101Inc, 1070 Joshua Way, Vista, CA92083, USA) с получением по 0,05 мл содержащей соединение среды на лунку. Инокуляты были получены из культур, выращенных в течение ночи в питательной среде 2xYT при 37°С. Плотность клеток была доведена до поглощения при 660 нм (A₆₆₀)=0,l, стандартизированные по оптической плотности составы разводили 1:1000 питательной средой 2xYT, и в каждую лунку инокулировали 0,05 мл разведенных бактерий. Микротитровальные планшеты инкубировали при 37°С в течение 18 часов во влажном инкубаторе. MIC (мМ) определяли как минимальную концентрацию лекарственного средства, при которой ингибировался видимый рост.

b).

Минимальные ингибирующие концентрации (MIC) ингибиторов в отношении Mycobacterium ranae (американский коллекционный номер типовой культуры 110), Pseudomonas aeruginosa (американский коллекционный номер типовой культуры 9027), Klebsiella pneumoniae (американский коллекционный номер типовой культуры 10031), Helicobacter pylori (американский коллекционный номер типовой культуры 43504), клинических культур, устойчивых по отношению к аминогликозидам и эритромицинам Streptococcus pneumoniae и устойчивых к метициллину (MR) Staphylococus aureus (американский коллекционный номер типовой культуры 33591) определяли следующим образом, Исходные растворы тестируемых соединений 1 и 2 из (оба изомеры А) трех стандартных лабораторных антибиотиков гентамицина (G), ампициллина (А) и эритромицина (Е), были получены путем растворения каждого соединения в диметилсульфоксиде в концентрации 10 мМ. Использовались те же способы, что и для а), за исключением того, что в качестве среды для Mycobacterium ranae использовали питательную среду Brain Heart Infasion (GIBCO) и инкубировали их при 37°С в течение 48 часов, для Staphylococcus aureus (MR), Klebsiella pneumoniae и Pseudomonas aeruginosa использовали питательную среду Nutrient (DIFCO) инкубировали их при 37°С в течение 20 часов, для Helicobacter pylori использовали среду на основе агара Columbia (OXOID), содержащую 7% овечьей крови, и инкубировали их при 37°С в течение 72 часов, для Streptococcus pneumoniae использовали триптоновую соевую питательную среду (DIFCO), содержащую 7% телячью сыворотку, и инкубировали их при 37°С в течение 48 часов. MIC (мM) определяли как минимальную концентрацию лекарственного средства, при которой ингибировался видимый рост.

При положительном контроле организмов (1% ДМСО, без тестируемого соединения) обеспечивался рост всех микроорганизмов.

При отрицательном пустом контроле (отсутствие микроорганизмов + тестируемое соединение) не происходил рост микроорганизмов.

В другом эксперименте минимальные ингибирующие концентрации соединения 1 и продукта из Примера 13 (соединение 3) в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий определяли с использованием Метода микроразбавления питательной среды (Microdilution Broth Method) согласно утвержденной стандартной методике National Committee for Clinical Laboratory Standards (Methids for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically- Fourth Edition ISBN 1-56238-309-4).

Активность против грамположительных бактерий.

Активность против грамотрицательных бактерий.

Активности соединения 3 и продукта из Примера 14 (соединение 4) против клинических культур Enterococcus faecalis, устойчивых ко многим антибиотикам, которые оценивались при помощи способа, использованного для вышеприведенных результатов, сведены в следующую таблицу, и проведено сравнение с результатами, полученными этим же способом для известных антибактериальных агентов:

Биологический Пример В

i) Клонирование гена PDF Escherichia coli.

Ген PDF Е. coli клонировали в рЕТ24а(+) (обозначенной как рЕТ24- PDF) и использовали для трансформации клеток BL21 DE3 от Novagen Inc. (Madison, Wisconsin). Клоны были отобраны при 37°С на планшеты с YT агаром (типтон 8 г/л, дрожжевой экстракт 5 г/л, NaCl 5 г/л, агар 15 г/л) с добавлением канамицина.

и) Экспрессия PDF

20 мл ночной культуры клеток BL21 DE3, содержащих рЕТ24- PDF, использовали для инфицирования 500 мл питательной среды 2xYT (типтон 16 г/л, дрожжевой экстракт 10 г/л, NaCl 5 г/л), содержащей 30 мкг/мл канамицина, в 2-литровой колбе с перегородкой, и выращивали при 37°С при перемешивании до OD₆₀₀ 0,6. Затем культуру индуцировали путем добавления в среду до концентрации 1,0 мМ изопропил-b-D-тиогалактопиранозида (IPTG). Индукция продолжалась в течение следующих 3 часов при 37°С, клетки собирали при помощи центрифугирования, клеточный осадок промывали 250 мл солевого фосфатного буфера (PBS) и хранили его при -70°С.

iii) Получение растворимой белковой фракции.

Клетки из 1 л экспрессионного раствора повторно суспендировали в 2х25 мл ледяного солевого фосфатного буфера. Суспензия клеток во льду была обработана ультразвуком с использованием MSE Soniprep 150, откалиброванного по образу среды, при амплитуде 20-25 микрон в 6х20 импульсов в секунду. Полученную суспензию затем очищали при помощи центрифугирования при 20000 xg в течение 15 минут. Затем супернатант использовали для дальнейшей очистки фермента.

iv) Очистка PDF.

Лизат Е. coli из 1 л культуры в солевом фосфатном буфере (PBS) добавляли к 2 М сульфату аммония. 15 мл фенилсефарозная колонка была уравновешена PBS/2M сульфатом аммония при 4°С. Лизат загрузили на колонку и смывали уравновешивающим буфером. Колонку промывали при уменьшении концентрации сульфата аммония от 2 М до 0 М объемом буфера, равном 10 объемам колонки. Собирали фракции по 5 мл и анализировали при помощи SDS-PAGE. Фракции, содержащие большую часть 20 кДа PDF, объединили. Объединенные фракции концентрировали с использованием мембраны с пропускной способностью 3 кДа до объема 5 мл. Затем фракцию загрузили на колонку Superdex 75 (вытеснительная хроматография по размеру молекул), уравновешенную PBS. Концентрированные объединенные фракции PDF элюировали при 1 мл/мин при 4°С, собирали фракции по 5 мл и анализировали их при помощи SDS-PAGE. Самые чистые фракции объединили и хранили при -70°С.

(v) Исследование PDF in vitro.

Исследование проводили в одиночном 96-луночном планшете в окончательном объеме 100 мкл, содержащем:

- 20 мкл PDF (4 мкг/мл)

- 20 мкл 100 мМ Hepes рН 7,0 + 1 М КСl + 0,05% Brij

- 10 мкл серийного разведения тестируемого соединения в 20% ДМСО

- 50 мкл формил-Met-Ala-Ser (8 мМ)

Планшет инкубировали при 37°С в течение 30 минут. Свободные аминогруппы деформилированного продукта (Met-Ala-Ser) определяли при помощи флуорескамина, добавляя следующие компоненты:

- 50 мкл 0,2 М бората рН 9,5

- 50 мкл флуорескамина (150 мкг/мл в сухом диоксане)

Количественную оценку флуоресценции проводили на приборе SLT Fluostar plate reader при возбуждающей длине волны 390 нм и излучающейся длине волны 485 нм. Стандартными контрольными реакциями являлись реакции без ингибитора, которые давали график нулевого ингибировния, и реакция без фермента и без ингибитора, которая давала график 100% ингибирования. Данные были проанализированы путем перевода единиц флуоресценции в % ингибирования и построен график зависимости % ингибирования от концентрации ингибитора. Данные были оптимизированы в виде сигмоидальной функции: у=А+((В-А)/1+(С/х)^D))), где А представляет собой нулевое ингибирование, В представляет собой 100% ингибирование и С представляет собой IC₅₀, D представляет собой угол наклона. IС₅₀ представляет собой концентрацию ингибитора (нМ), которая требуется для снижения активности фермента на 50%. Было обнаружено, что соединения по изобретению ингибируют бактериальную PDF in vitro. Дополнительно было обнаружено, что актинонин (Sigma, кат. №А-6671) ингибирует бактериальную PDF in vitro.

Биологический Пример С.

Демонстрация того, что соединение 2 ингибирует PDF in vivo.

1. Остановка реакции переформилирования mPHKi-Met приводит к устойчивости по отношению к соединению 2 (диастереомер/изомер А).

Триметоприм специфично ингибирует дигидрофолат-редуктазу, тем самым уменьшая запасы производных тетрагидрофолата (THF), включая формилтетрагидрофолат (fTHF), субстрата метионил-тРНК-формилтрансферазы (ЕС 2.1.2.9). Если все существенные метаболиты, биосинтез которых включает производные THF, например пантотенат, метионин, глицин, пуриновые нуклеотиды и тимидин, поставляются извне в форме соединений-предшественников в обогащенной среде с добавлением тимидина, то бактерии, выращенные в обогащенной среде с тимидином (0,03 мМ) и триметопримом (100 мкг/мл), могут синтезировать все химические компоненты нормальных клеток, за исключением fMet-TPHKi (Baumstark et al., J.Bacteriol. 129^457-471, 1977). Вместо нее используется неформилированная Met-тРНKi, что приводит к образованию полипептидов, не содержащих формильной группы на N-конце, независимо от действия деформилаз. Как и предсказывали авторы изобретения, было обнаружено, что клетки DH5a, выращенные в среде LB (типтон 10 г/л, дрожжевой экстракт 5 г/л, NaCl 10 г/л рН 7,5) с добавлением триметоприма и тимидина, устойчивы по отношению к соединению 2 (диастереомер А). Демонстрация того, что рост клеток, в которых экспрессирующиеся белки подвергаются нормальному процессу деформилирования, ингибируется соединением 2А, тогда как неформилированные белки, которые продуцируются клетками, выращенными в этих условиях, не ингибируются соединением 2А, показывает, что соединение 2А, вероятно, действует путем ингибирования реакции деформилирования, которую осуществляют PDF.

Таблица 3Условия выращиванияМинимальная ингибирующая концентрация, мкМLB15LB триметоприм (ЮОмкг/мл), тимидин (0,3мМ)>200

2. Обработка бактерий соединением 2А приводит к накоплению белков с блокированным N-концом.

Если соединения по изобретению действительно ингибируют PDF in vivo, то последствием обработки бактерий соединением 2 (Пример 2, диастереомер А) будет накопление вновь синтезированных белков с N-формилметионином на N-конце. Такие белки будут заблокированы по N-концу, и их невозможно будет использовать в качестве субстрата для секвенирования путем N-концевой химической деградации по Эдману.

Для проверки этого предположения требуемый белок экспрессируют в присутствии или в отсутствие тестируемого соединения. Белок выделяют, очищают и затем секвенируют, подвергая его деградации по Эдману, с использованием методик, известных специалисту в данной области техники.

Бактериальные клетки, трансформированные экспрессионным вектором, позволяющим экспрессировать малую регуляторную субъединицу человеческого калпаина, выращивали до значения OD₆₀₀, равного 0,6, и затем подвергли действию IPTG, чтобы индуцировать экспрессию гетерологичного белка в присутствии 200 мкМ соединения 2А, в присутствии 240 мкМ карбенициллина или в присутствии контроля переносчика в течение 2,5 часов. Белковые экстракты отделяли при помощи SDS-PAGE, элюировали калпаиновую субъединицу и определяли белковую последовательность при помощи химической деградации по Эдману с использованием ABI автоматического белкового секвенатора. Секвенировали одинаковые количества белка. Авторы изобретения обнаружили, что выход белка при обработке соединением 2А был значительно снижен на 85% по сравнению с контролями переносчика и карбенициллина.

Калпаиновую малую регуляторную субъединицу клонировали из матричной РНК, полученной из биопсии опухоли желудка, с использованием набора для выделения мРНК InVitrogen Micro Fast Track™, серия 2.2 (каталожный номер К1520-02). ДНК-копию этой РНК синтезировали с использованием системы синтеза кДНК Promega Riboclone™ M-MLV-RT(H-), Noti (Promega, каталожный номер С 1660), в соответствии с инструкциями производителя. Два олигонуклеотидных праймера для использования в полимеразной цепной реакции (PCR) были синтезированы Applied Biosystems, Inc, Custom Services на основании опубликованной последовательности малой калпаиновой субъединицы (EMBL номер доступа Х04104).

Фрагмент калпаина HindIII/Xhol затем клонировали в разрезаемый HindIII и Xhol экспрессионный вектор pET24d(+) от Novagen Inc, (Madison, WI, USA), с использованием стандартных методик. Использовали лигирующую смесь для трансформации компетентных DH5a клеток (Life Technologies, Inc, Grand Island, NY, USACat# 18265-017). Колонии отбирали путем выращивания в течение ночи при 37°С на YT планшетах с 30 мкг/мл канамицина. ДНК плазмиду получали с использованием набора Promega Plus SV miniprep, и клоны с калпаиновой вставкой идентифицировали с использованием стандартных методик. Последовательность ДНК подтверждали с использованием цикла секвенирования РЕ Applied Biosystems, как описано выше.

Ген Е. coli, клонированный в pET24d(+) (обозначенной как рЕТ24- CANS), использовали для трансформации BL21 DE3 клеток от Novagen Inc, (Madison, Wisconsin). Клоны отбирали при 37°С на агаровых планшетах (типтон 8 г/л, дрожжевой экстракт 5 г/л, NaCl 5 г/л, агар 15 г/л) с добавлением 30 мкг/мл канамицина.

Изобретение относится к области медицины и касается применения соединений формулы (I) для получения антибактериальной композиции, а также бактериальной или ветеринарной композиции, обладающей повышенной активностью. 2 с. и 2 з,п. ф-лы, 3 табл.

1. Применение соединения формулы (I) или его фармацевтически или ветеринарно приемлемой соли для получения антибактериальной композиции:

где R₁ водород или С₁-С₆ алкил;

R₂ - группа -(АЛК)m-R, где R - алкил С₁-С₆ или циклоалкил; АЛК - линейный или разветвленный двухвалентный С₁-С₆ алкилен; m = 0 или 1;

А

R₄ представляет собой боковую цепь природной или неприродной альфа-аминокислоты,

R₅ и R₆ независимо представляют собой водород или необязательно замещенный С₁-С₈ алкил, циклоалкил, арил, арил(С₁-С₆ алкил), гетероциклил или гетероциклил (С₁-С₆ алкил).

2. Применение по п. 1, при котором соединение формулы I представляет собой 2R(или S)-[формил-гидроксиамино)-метил]-гексановой кислоты (1S-диметилкарбамоилэтил)-амид или его фармацевтически или ветеринарно приемлемую соль.3. Применение по п.1, при котором соединение формулы I представляет собой 2R(или S)-[(формил-гидроксиамино)-метил]-3 циклопентилпропионовой кислоты (1S-диметилкарбамоил-2,2-диметилпропил)-амид или его фармацевтически или ветеринарно приемлемую соль.4. Антибактериальная фармацевтическая или ветеринарная композиция, содержащая соединение формулы I со значениями заместителей, приведенными в п.1, вместе с фармацевтически или ветеринарно приемлемым наполнителем или носителем.

По п.1 формулы изобретения в части признаков R₅ и R₆ - водород или C₁-C₆-алкил установлен приоритет от 07.02.1998 согласно первой заявке GB 98025497.

По остальным признакам п.1 формулы и по пп. 2-4 установлен приоритет от 05.02.1999 согласно международной заявке РСТ/GB 99/00386.