СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА ШЕЙКИ МАТКИ Российский патент 2023 года по МПК A61K31/115 A61K33/14 A61P35/00 A61P35/04 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для лечения рака шейки матки Т3-4.

Рак шейки матки является четвертым наиболее распространенным видом рака у женщин. По оценкам ВОЗ, в 2018 году во всем мире у 570 000 женщин был диагностирован рак шейки матки, и около 311 000 женщин умерли от этого заболевания. В 2020 году - 604 000 новых случаев и 342 000 смертей. Около 90% новых случаев заболевания и смертей во всем мире в 2020 году произошло в странах с низким и средним уровнем дохода. С каждым годом число заболевших женщин раком шейки матки значительно превышает тех, кому диагностировали рак молочных желез.

Наиболее подверженными к развитию такой болезни считаются женщины от 40 до 55 лет. Но в последнее время все чаще этот недуг выявляют у более молодых женщин детородного возраста. Сейчас такое заболевание встречается даже в возрасте до 30 лет, что вынуждает обеспокоиться о том, как его своевременно выявить и эффективно излечить.

При диагностике рак шейки матки является одной из наиболее успешно поддающихся лечению форм рака, если он обнаруживается на ранней стадии Т0-1 и эффективно лечится. Рак, диагностированный на поздних стадиях Т3-4, также можно контролировать с помощью соответствующего лечения и паллиативной помощи. Но выздоровления при Т3-4 не зарегистрировано. Смертность в запущенных формах 100% в течение 5 лет.

Диагноз рака шейки матки должен быть поставлен с помощью гистологического исследования. Стадия определяется в зависимости от размера опухоли и распространения заболевания. Терапевтический план зависит от стадии заболевания, возможны варианты хирургического вмешательства, лучевой терапии и химиотерапии. Наиболее подходящий способ лечения определяется врачом индивидуально, с учетом степени развития заболевания.

При лечении рака шейки матки используют противоопухолевые препараты, которые вызывают гибель раковых клеток, либо останавливают их рост и размножение. Чаще всего назначают такие препараты как цисплатина, карбоплатин, фторурацил, однако известны и другие подходы.

Например, в патенте RU 2404794 C2 (опубл. 27.11.2010) раскрыто средство для лечения рака шейки матки, содержащее в качестве активного компонента композицию рекомбинантных белков, состоящую из аминокислотных последовательностей белка Е7 вируса папилломы человека 16 и 18 типов соответственно, которые ковалентно соединены с аминокислотной последовательностью белка теплового шока м.м. 70 кДа из M.tuberculosis.

Недостатком данного средства является сложность процесса получения активного компонента.

В патенте US 10391123 B2 (опубл. 27.08.2019) раскрыто средство для лечения цервикального рака, содержащее в своем составе нано-размерное серебро, карбомер, триэтаноламин, глюкозу и воду.

Недостатком данного средства является сложный процесс получения готовой лекарственной формы, включающий использование ультразвукового диспергирования.

В патенте EA 033519 B1 (опубл. 31.10.2019) раскрыто средство для лечения карциномы шейки матки, включающее селенит и фармацевтически приемлемую кислоту. Описанная композиция предназначена для местного применения, что, очевидно, негативно сказывается на поступлении активного вещества в системный кровоток.

Таким образом, существует потребность в новых, простых и безопасных средствах для лечения рака шейки матки.

Целью настоящего изобретения является создание эффективного и безопасного лекарственного средства, пригодного для лечения рака шейки матки.

Технический результат заключается в расширении арсенала средств указанного назначения.

Объектом настоящего изобретения является лекарственное средство для лечения рака шейки матки Т3-4, представляющее собой раствор формальдегида в 0,9 мас. % изотоническом растворе натрия хлорида для инъекций при следующем соотношении компонентов:

формальдегид 0,012 мас. % 0,9 мас.% изотонический раствор натрия хлорида для инъекций остальное

Формальдегид - огнеопасный бесцветный газ, который обладает сильным неприятным запахом, хорошо растворяется как в обычной воде, так и в спирте. Считается, что формальдегид является ядом с общетоксическим действием на организм. Однако формальдегид также вырабатывается как нормальное физиологическое химическое вещество во всех живых клетках Эндогенный формальдегид в большом количестве присутствует в человеческом организме в количестве около 100 мкМ при нормальных условиях.

Формальдегид эндогенно продуцируется в организме человека, и уровень этого соединения в головном мозге повышается при нейродегенеративных состояниях. Исходя из клинических исследований, положительное влияние оказало профилактическое введение формальдегида на физиологические и биохимические показатели состояния мозга при ишемии. Установлено защитное профилактическое действие формальдегида при ишемии головного мозга. Также установлено, что действие формальдегида на факторы, способствующие формированию необратимых изменений в ткани мозга при ишемии. Известно, что введение формальдегида вызывает повышение концентрации липидов в ткани мозга и предотвращает рост концентрации диеновых коньюгантов в ткани как при сохраненном мозговом кровотоке, так и в условиях ишемии мозга. Повышение концентрации липидов в ткани мозга под действием формальдегида хорошо коррелирует со сведениями о стимулировании формальдегидом синтеза липидов и о снижении им уровня катехоламинов в изолированных органах и тканях (Лапкина Т.И. и др., 1987).

Лечение формальдегидом привлекает все большее внимание общественности. Альдегид муравьиной кислоты в газообразном виде и форме раствора оказывает выраженное антимикробное, вируцидное, фунгицидное и дезодорирующее действие. Действует почти на все виды возбудителей, в том числе споровые формы. Используется в виде различных препаратов в качестве дезинфектора, реже антисептика.

Существует ряд препаратов на основе формальдегида, примером таких является дибенорм. Препарат представляет собой иммуномодулирующее средство, сочетающее иммунотропную и противовирусную активность. Особый интерес представляет его фармакотерапевтический потенциал для лечения хронических вирусных инфекций, включая ВИЧ-инфекцию. Препарат хорошо переносится больными и не вызывает побочных эффектов. Практически все пациенты наблюдали улучшение общего самочувствия, повышение работоспособности, у многих больных было улучшение аппетита и существенная прибавка массы тела (Пленина Л. В. и др., 2007).

Формальдегид также может быть использован как альтернатива антибиотикам для лечения рефрактерного импетиго и других инфекционных заболеваний кожи.

Как известно, устойчивые к антибиотикам штаммы бактерий являются актуальной проблемой не только в больницах, но и в обществе. Это привело к тому, что бактериальные инфекции, такие как импетиго, стали трудно поддаваться лечению. В настоящее время альтернативные варианты лечения необходимы. Есть возможность использования формальдегида в качестве альтернативного антимикробного средства. При этом исключается развитие резистентности к антибиотикам.

По мнению ряда авторов (Nikolic P. et al, 2019), формальдегид в настоящее время используется в качестве консерванта в косметических и лекарственных кремах благодаря своей антибактериальной активности. Следовательно, он может быть использован в качестве альтернативного антибактериального средства для лечения инфекций, устойчивых к антибиотикам. Вредные побочные эффекты воздушного формальдегида и воздействия на людей с аллергией были тщательно изучены. Значительно меньше исследований было проведено в отношении контакта кожи с формальдегидом у здоровых людей. Если формальдегид безопасен для местного применения у людей, он может помочь в борьбе с устойчивостью к антибиотикам.

Были проведены исследования эффективности применения водного раствора формальдегида при геморрагическом лучевом проктите (Roche B. et al., 1996). Лучевой проктит с кровотечением - не частое осложнение лучевой терапии карциномы таза. В наиболее тяжелых формах обильное кровотечение может потребовать повторных переливаний и стационарного лечения. В тяжелых случаях лечение не оказалось эффективным. Операция может привести к серьезным осложнениям и является технически сложной. У обследованных шести пациентов, был обнаружен геморрагический радиационно-индуцированный проктит. Лечение проходило амбулаторно с применением 4% формальдегида. В четырех случаях кровотечение прекратилось после первого применения формальдегида; у двух пациентов продолжалось кровотечение, но еще одно нанесение формальдегида через 3 недели окончательно остановило кровотечение. Последующая оценка через 12 месяцев показала в каждом случае, что кровотечение удалось контролировать и лечить. Осложнений в виде ожогов или поздних стенозов глубоких слоев прямой кишки не было. Этот недорогой метод хорошо переносится пациентом и дает хорошие долгосрочные результаты, а также доступен в каждой больнице. Местное нанесение 4% формальдегида на прямую кишку может быть методом выбора при геморрагическом лучевом проктите.

Авторами настоящего изобретения неожиданно было обнаружено, что раствор формальдегида в определенной концентрации представляет собой эффективное и безопасное средство для лечения онкологических заболеваний, а именно для лечения рака шейки матки Т3-4.

Предлагаемое средство получают путем смешивания доступного на рынке 36,5-37,5% мас. % медицинского водного раствора формальдегида и стерильного 0,9 мас.% раствора хлорида натрия для инъекций до получения 0,012 мас. % раствора формальдегида. Средство хранят в темном месте при температуре 15-35°С.

Получаемое средство вводится путем внутримышечных инъекций. Курс лечения РШМ Т3-4 состоит из внутримышечных инъекций препарата по 2 мл один раз в день в период от постановки диагноза до полного исчезновения метастазов. Далее по 2 мл один раз в пять дней под контролем онкомаркеров и КТ органов малого таза. Было установлено, что указанное количество заявляемого препарата не оказывает токсического действия на организм.

Далее изобретение будет проиллюстрировано с помощью неограничивающих примеров.

Пример 1.

Выбор оптимальной концентрации.

Выбор оптимальной концентрации был осуществлен на основании процента апоптоза. Тестировались концентрации от 0,007 до 0,014 мас.% с шагом в 0,001 мас.%. Было пролечено 24 кошки с онкопроцессом, по 3 особи на каждую концентрацию. Делались гистологические срезы с биопсированного материала отдаленного от пораженного органа на 1,5-2 см. Биопсия выполнялась с помощью биопсийной иглы. Расчет выполнялся по 4 точкам забора материала. Брали по 10 срезов с каждой из 4 точек. Просматривали 90-100 полей зрения. Расчет вели через число клеток с апоптозом на общее количество визуализируемых клеток (90-100). Во избежание преждевременной гибели клеток за цель был взят уровень апоптоза от 0,27397% до 0,29985%.

В таблице 1 показана зависимость процента апоптоза от концентрации формальдегида.

Таблица 1 - Изменение процента апоптоза от концентрации формальдегида в инъекционном растворе у кошек с онкопроцессом Концентрация формальдегида Процент апоптоза 0,007 % 0,17 % 0,008 % 0,17 % 0,009 % 0,195 % 0,01 % 0,21% 0,011% 0,24% 0,012% 0,28% 0,0135% 0,325% 0,014% 0,16%

Как видно из таблицы 1, самые лучшие результаты по уровню апоптоза были получены при концентрации 0,012%. При этой же концентрации были получены лучшие результаты по выживаемости и внешним проявлениям заболевания.

Пример 2.

Тестирование препарата на культуре клеток Hela-V.

Используя клеточную линию карциномы шейки матки Hela-V были проведены доклинические in vitro исследования по влиянию тестируемого средства на пролиферацию и жизнеспособность данных клеток.

Hela-V клетки высевали в 48-луночные культуральные планшеты в дозе 1х10⁴ клеток/см². Культивирование проводили в стандартных условиях инкубатора (5% СО₂; 37°C). Через 24 часа после посева клеток лунки были разделены на опытные и контрольные.

- Контроль - клетки без внесенного лекарственного препарата;

- среда без препаратов;

- ЛП - среда с лекарственным препаратом в терапевтической дозе;

Лекарственный препарат вносили в лунки с новой ростовой средой согласно схеме эксперимента. Длительность исследования составила 6 суток с момента внесения лекарственного препарата в лунки. Ежедневно производили визуальную оценку и фотографирование культуры с помощью аппаратно-программного комплекса на основе инвертированного микроскопа при увеличении 100, 200. Оценивали структурные особенности клеток и монослоя в целом, считали количество клеток на 1мм².

Рост клеток оценивался на протяжении 6 суток после внесения препарата по следующим критериям - плотность монослоя, индекс пролиферации, время удвоения (таблицы 2,3).

Таблица 2 - Пролиферативная активность контрольной культуры Hela-v Срок
эксперимента, сутки Плотность
монослоя, кл./1мм² Индекс пролиферации, отн. ед. Время
удвоения, ч Исходные данные 291,3±18,1 1 345,2±15,5 1,2±0,2 98,0±2,5 2 570,0±7,1 1,7±0,8 33,2±1,0 3 683,2±15,5 1,2±0,2 91,8±1,8 4 746,6±16,7 1,1±0,3 187,5±2,8 5 996,0±8,5 1,3±0,2 57,7±0,8 6 1114,0±26,3 1,1±0,2 148,6±2,5

Таблица 3 – Пролиферативная активность культуры Hela-v в присутствии заявляемого средства Срок эксперимента, сутки Плотность монослоя, кл./1мм² Индекс пролиферации, отн. ед. Время
удвоения, ч Исходные данные 291,3±18,1 1 345,2±12,5 1,2±0,5 98,0±1,1 2 428,6±10,5 1,2±0,1 76,9±0,9 3 498,1±18,2 1,2±0,5 110,7±3,1 4 643,6±21,1 1,3±0,2 64,9±1,1 5 955,6±18,6 1,5±0,1 42,1±1,5 6 1037,3±49,8 1,1±0,1 202,8±2,8

Полученные данные демонстрируют выраженный противоопухолевый эффект заявляемого средства в отношении культуры клеток карциномы шейки матки.

Пример 3.

Больная М., 40 лет. При первичном ультразвуковом обследовании органов малого таза обнаружено исходящее из шейки матки образование неправильной формы 92*70*68 мм, объемом 230 м³ с выраженным кровотоком. Обнаружены метастазы в забрюшинные лимфоузлы. По данным исследования биопсийного материала - плоскоклеточный неороговевающий рак. Поставлен основной диагноз - рак шейки матки сТ3N1Mo G2, III стадия. Начато лечение заявляемым средством по 2 мл один раз в день внутримышечно.

Спустя 5 месяцев после начала лечения при ультразвуковом обследовании органов малого таза сохраняется образование пониженной эхогенности с нечетким контуром, размерами 26*13*37 мм, данных за MTS не выявлено. Заявляемое средство продолжили вводить по 2 мл один раз в пять дней.

Спустя еще 3 месяца при МРТ обследовании органов малого таза определяется зона пониженного сигнала без четких контуров, с умеренным повышением на постконтрасте и DW размерами около 19*12 мм.

Спустя еще 9 месяцев по результатам ультразвукового обследования органов малого таза сохраняется образование пониженной эхогенности с нечетким ровным контуром, размерами 14*10 мм.

Спустя еще 8 месяцев по результатам ультразвукового обследования органов малого таза патологических образований шейки матки не выявлено, данных за MTS и прогрессию не выявлено. При исследовании крови на наличие антигена плоскоклеточной карциномы (SCC) определен уровень 1,0 нг/мл при референсном интервале 0,6-2,7 нг/мл.

Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает простое, безопасное и эффективное средство, которое может быть использовано для лечения рака шейки матки.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к лекарственному средству для лечения рака шейки матки T3 и способу лечения рака шейки матки T3. Лекарственное средство для лечения рака шейки матки Т3, представляющее собой раствор формальдегида в 0,9 мас. % изотоническом растворе натрия хлорида для инъекций, при следующем соотношении компонентов: формальдегид – 0,012 мас.%, 0,9 мас.% изотонический раствор натрия хлорида для инъекций – остальное. Способ лечения рака шейки матки Т3, включающий внутримышечное введение вышеуказанного лекарственного средства в количестве 2 мл один раз в день в период от постановки диагноза до полного исчезновения метастазов и далее 20 месяцев по 2 мл один раз в пять дней. Группа изобретений позволяет расширить арсенал лекарственных средств для лечения рака шейки матки T3. 2 н.п. ф-лы, 3 табл., 3 пр.

1. Лекарственное средство для лечения рака шейки матки Т3, представляющее собой раствор формальдегида в 0,9 мас.% изотоническом растворе натрия хлорида для инъекций, при следующем соотношении компонентов:

формальдегид 0,012 мас. % 0,9 мас.% изотонический раствор натрия хлорида для инъекций остальное

2. Способ лечения рака шейки матки Т3, включающий внутримышечное введение лекарственного средства по п.1 в количестве 2 мл один раз в день в период от постановки диагноза до полного исчезновения метастазов и далее 20 месяцев по 2 мл один раз в пять дней.