КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ФЛЕБОПРОТЕКТОРА И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2023 года по МПК A61K36/72 B01F23/00 A61P9/14 

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности, к способам получения композиции для флебопротектора из комплекса биофлавоноидов обезжиренного облепихового шрота, являющегося крупнотоннажным отходом производства облепихового масла.

По статистике, хронической венозной недостаточностью страдает от 35% до 60% людей трудоспособного возраста, а в возрасте старше 50 лет - хроническая недостаточность наблюдается у 99% населения [1]. При этом наряду с хирургическими методами, склеротерапией и эластической компрессией, фармакотерапия занимает важное место, является обязательным методом лечения этой патологии и базируется на использовании флебопротекторов [2].

В мировой фармакопее представлено более 100 препаратов для лечения венозной недостаточности, а в Российской Федерации разрешено к применению порядка 20 - преимущественно импортного производства Флебавен, Флебодиа, Венарус, Детралекс. Эндотелон, стоимостью от 1900-3300 руб. [3].

Действующим и наиболее эффективным веществом большинства флеботропных препаратов являются биофлавоноиды, недостатками которых являются их ограниченная биодоступность, обусловленная низкой растворимостью в воде, нестабильностью к изменению физиологической среды, ограниченной проницаемостью мембраны, низким коэффициентом переноса через слизистую оболочку кишечника, предрасположенностью к быстрой метаболической трансформации и т.д. [4-6]. На практике низкая биодоступность определяет необходимость приема таких препаратов в более высоких (по сравнению с аннотацией) дозах для достижения клинического эффекта. В то время как современные фармакокинетические исследования подтвердили, что скорость всасывания лекарственных средств более важны, чем действующая на мишень доза.

Известны лекарственные формы и композиции для их получения из биофлавоноидов: «Твердая лекарственная форма диосмина» (Патент РФ 2314812) [7] - действующим веществом которой является экстракт листьев красного винограда. Авторы указывают на более высокий терапевтический эффект по сравнению с известными формами диосмина, не приводя подтверждающих данных исследований in vitro / in vivo.

В патенте Евразийского союза ЕА 021107 В1 «Combination composition, comprising as active ingredient L-carnitine or propionyl Lcarnitine, for the prevention or treatment of chronic venous insufficiency» описана комбинированная композиция, содержащая в качестве активных ингредиентов наряду с диосмином или гесперидином или троксерутином L-карнитин для профилактики и/или лечения хронических венозных заболеваний. Заявленный эффект подтвержден клиническими испытаниями на мелких лабораторных животных и установлена эффективная суточная доза для человека. В заключении сказано, что композиция перечисленных флавоноидов показала эффект статистически значимо более активный, чем использование компонентов, взятых отдельно. Недостатком данной композиции является весьма широкий спектр ее применения - как лекарственное средство с широким спектром введения и как БАД к пище, что ставит под сомнение реальность терапевтического эффекта [8].

В изобретении ITRM 20120591 А1 «Composizioni da utilizzare nelle flebopatologie da stasi ed infiammatories [9] показано влияние флавоноидов рутина и лютеолина на эффективность лечения застоя и воспалительных флебопатий, поскольку они снижают экспрессию некоторых воспалительных генов. Авторами доказано в эксперименте, что смесь рутина и лютеолина в концентрации 50 μMoI снижает экспрессию гена IL1-бета, ответственного за снижение эластина, являющегося одной из возможных причин некоторых венозных недостаточностей, не вызывает изменений в экспрессии генов, кодирующих TNF-альфа и SOD-2, но сильно снижает экспрессию гена, кодирующего iNOS. Недостатком данного изобретения является то, что авторы предлагают множество замен как действующих веществ, так и их сырьевых источников.

Одним из путей изменения свойств флавоноидов и других БАВ является микронизация.

Известен способ микронизации корневищ растений, богатых лигноцеллюлозой, раскрытый в «Super micronization method for botanical medicinal, product obtained thereby and use thereof» (Patent CN 100577134 C) [10]. Микронизация проводится путем так называемого «парового взрыва» при температуре водяного пара 180-235°С и давлении 1,5-2,8 МПа в течение 2-3 мин и криогенной обработки по технологии криогенного замораживания. В результате размер частиц растительного сырья составляет порядка 1-25 мкм. Данные способы не приемлемы для биофлавоноидов, структура и свойства которых разрушаются под воздействием указанных параметров.

Известна фармацевтическая композиция, содержащая синергетическую комбинацию трех агентов с венотонической и вазопротекторной активностью - очищенная микронизированная флавоноидная фракция диосмина (90%, присутствует в рецептуре в диапазоне концентраций от 225,0 мг до 450,0 мг на единицу дозы) и гесперидина (10%, присутствует в рецептуре в диапазоне концентраций от 25,0 мг до 50,0 мг на единицу дозы) и добезилата кальция, а также фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества для перорального введения. Данная композиция используется для контроля и лечения хронической венозной недостаточности и обеспечивает улучшенный терапевтический эффект и более быстрое фармакологическое действие за меньшее время, с меньшими концентрациями активных начал и снижением риска серьезных осложнений и/или побочных эффектов, что подтверждено клиническими исследованиями [11]. Недостатком данной композиции является наличие в ней добезилат кальция (2,5-дигидроксибензолсульфонат), терапевтическое действие которого по результатам рандомизированного контролируемого исследования 500 пациентов с хроническим заболеванием вен, не смогло выявить значимых различий между добезилатом кальция и плацебо в отношении отека, веноспецифических симптомов и качества жизни [12]. Кроме того, не указан способ микронизации и размер полученных частиц.

В изобретении «Pharmaceutical composition in the form of a chewable tablet of diosmin or of a flavonoid moiety» (Patent 2019306315 A1 AU) [13] раскрыта фармацевтическая композиция в форме жевательной таблетки, содержащая высокую дозу микронизированного диосмина - 87-93% и других флавоноидов (примерно 10% гесперидина, изорфолина, линарина и диосметина) от общей массы фармацевтической композиции, которая используется при лечении венозной недостаточности и геморроидальных кризов. К недостаткам предлагаемой композиции можно отнести добавление других фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ - ароматизаторов (аромат апельсина, лимона, мягкий карамельный, ванили/лимона) и подсластителей (аспартам, ацесульфам калия, сахарин натрия, цикламат калия); не указан конкретный способ микронизации полученных частиц со средним диаметр меньше 5 мкм (предпочтительно строго меньше 1,6 мкм), перечислены лишь системы микронизации: измельчитель, воздушно-струйная мельница, микронизатор без указания типа оборудования и параметров процесса микронизации.

Известно, что на сегодняшний день наиболее эффективным способом повышения биодоступности флавоноидов является ультразвуковая микронизация, благодаря которой происходит увеличение поверхности соприкосновения частиц с водой, за счет чего абсорбция флавоноидов в желудочно-кишечном тракте достигает 60-65%, поскольку размер частиц с 36,5 мкм (нативный компонент) уменьшается до 1,75 мкм. Кроме того, имеется информация, что на сегодняшний день ультразвуковая микронизация является единственной технологией, повышающей биодоступность ряда флавоноидов, в то время как другие приемы (например, гранулирование) не оказывают влияния на фармакологические свойства и клиническую эффективность: повышение растворимости путем измельчения приводит к усилению антиоксидантной активности, а также капилляропротективного действия [14].

Актуальная тенденция на импортозамещение лекарственных средств способствует изысканию и исследованию биофлавоноидов растительного сырья, обладающих фармакологической активностью, в частности - флебопротекторной. В связи с чем, задачей настоящего изобретения является расширение сырьевой базы для производства твердой лекарственной формы эффективного отечественного флебопротектора - композиции из комплекса биофлавоноидов обезжиренного облепихового в микронизированной форме.

Технический результат - разработка высокоэффективного простого способа получения композиции для флебопротектора из доступного сырьевого источника - комплекса биофлавоноидов обезжиренного шрота плодов облепихи крушиновидной (Hippophae rhamnoides).

Указанный технический результат достигается тем, что предлагается способ микронизации комплекса биофлавоноидов обезжиренного облепихового шрота в условиях ультразвукового воздействия, обеспечивающего на поверхности твердых частиц колебания с интенсивностью 15 Вт/см² и акустической мощностью 135±5 Вт на частоте 22±1,65 кГц при температуре 40°С в течение 10 мин. Формируемые на поверхности твердой фазы кавитационные пузырьки взрываются, а возникающие ударные волны разрушают структуру твердых частиц до наноразмерных значений. Определяющее значение при реализации предлагаемого способа имеют параметры ультразвукового воздействия, при которых процесс микронизации твердой фазы суспензии реализуется с максимальной эффективностью.

На 0,5%-ную водную суспензию комплекса биофлавоноидов обезжиренного облепихового шрота воздействуют ультразвуковыми колебаниями в режиме развитой кавитации, когда взрывающиеся пузырьки запасают и передают по поверхности твердых частиц максимальную энергию. Это обеспечивается при создании на поверхности твердых частиц колебаний с интенсивностью 15 Вт/см² и объемной плотностью акустической энергии 330±10 Вт/дм3 (соответствующей акустической мощности 135±5 Вт) на частоте 22±1,65 кГц при температуре 40°С в течение 10 мин.

Такой эффект создается при амплитуде колебаний излучающей поверхности ультразвукового преобразователя 20-30 мкм и легко реализуется на частицах сырья, перемещающихся в жидкой фазе суспензии на расстояниях, не превышающих 5-15 мм от излучающей поверхности. Продолжительности ультразвукового воздействия 10 минут достаточно для того, чтобы все твердые частицы суспензии, находящиеся в замкнутом объеме на расстояниях, превышающих указанное, за счет механического перемешивания, вызываемого кавитацией, были подвергнуты микронизации [15].

Предложенный способ реализован при помощи ультразвукового технологического аппарата «Волна», модель УЗТА-0,4/22-ОМ, оснащенного грибовидным рабочим инструментом (производство ООО «Центр ультразвуковых технологий», г. Бийск, Алтайский край), изображенного на фиг. 1 [16].

Полученную после реализации процесса микронизации суспензию сливают из реактора, охлаждают до температуры 20-22°С, твердую фракцию отделяют центрифугированием при частоте вращения 3500 об/мин, в течение 15 мин. Остаток высушивают при температуре не выше 60°С до влажности не более 5%.

Предлагаемое техническое решение подтверждается следующими примерами. Пример 1. Водную суспензию, содержащую 0,5% твердой фракции комплекса биофлавоноидов обезжиренного облепихового шрота, загружают в реактор ультразвукового технологического аппарата «Волна» и подвергают ультразвуковому воздействию на частоте 22±1,65 кГц, интенсивностью 15 Вт/см², акустической мощностью 135±5 Вт при температуре 40°С, в течение 10 мин. Затем микронизированную суспензию выгружают из реактора, охлаждают до температуры 20-22°С, твердую фракцию отделяют центрифугированием при частоте вращения 3500 об/мин, в течение 15 мин. Твердый остаток после удаления супернатата высушивают до влажности 5% при температуре не превышающей 60°С.

На фиг. 2 показана фотография частиц диспергированного в воде порошка комплекса биофлавоноидов облепихового шрота, размер которых составляет 1,4 мкм (доля частиц с размером менее 1,4 мкм Q=24%). Изображение получено с помощью сканирующего электронного микроскопа. Сформированные наноразмерные частицы имеют неправильную сферическую форму. Сферическая форма улучшает диспергируемость, увеличивает растворимость, антиоксидантную активность и другие свойства наночастиц в водных средах [17].

Анализ качественного и количественного состава композиции для флебопротектора, полученной по предлагаемому способу, проводят методом ОФ ВЭЖХ с фотометрическим детектированием на приборе Shimadzu «LC-20 Prominence», с последующей компьютерной обработкой полученных результатов. Условия хроматографического анализа: колонка: октадецилсиликагель, Symmetry С 18, размер колонки 4,6×250 мм, размер частиц 5 мкм. В качестве подвижной фазы использовали ацетонитрил - раствор трифторуксусной кислоты рН=2,6 (40:60), скорость подвижной фазы 0,5 мл/мин. Градиентное элюирование 0-40 мин. Температура колонки 30°С, температура автосемплера 20°С. Детектирование: УФ, λ=365 нм; объем вводимой пробы: 10 мм3. Расчет содержания индикаторных компонентов проведен по градуировочному графику, построенному в координатах S (площадь пика) - С (концентрация), г/100 г. Методом ОФ ВЭЖХ в составе микронизированного комплекса биофлавоноидов облепихового шрота обнаружены рутин, нарциссин, мирицетин, кемпферол, кверцетин и изорамнетин при следующем соотношении компонентов масс. %:

Рутин 0,1

Нарциссин 0,3

Мирицетин 0,3

Кемпферол 0,8

Кверцетин 34,3

Изорамнетин 64,2

Предложенная композиция обладает антиоксидантной активностью, доказанной экспериментально в условиях in vitro с сульфгидрильными (SH-) группами глутатиона в сравнении с контрольным образцом рутина и лекарственным препаратом «Детралекс» в дозировке 1000 мг (табл.).

Таблица - Процент восстановленных сульфгидрильных групп глутатиона в модельной системе Наименование образца М.д. восстановленных SH-групп, % Рутин 33,3 Комплекс биофлавоноидов облепихового шрота 29,5 Микронизированный комплекс биофлавоноидов облепихового шрота 35,9 Лекарственный препарат «Детралекс» 33,4

Подтверждением флеботропной активности предложенной композиции микронизированного комплекса биофлавоноидов обезжиренного облепихового шрота является доказанная в экспериментах in vivo и in vitro антиоксидантная, противовоспалительная, противоотечная и капилляропротекторная активности.

Источники информации

1. Хроническая венозная недостаточность: вебинар д.м.н. Гришина О.В. - URL: https://www.dna-sklad.ru/info/video-hronicheskaya- venoznaya-nedostatochnost.html.

2. Голованова О.В., Кузнецов А.Н. Алгоритм ведения больного с начальными стадиями хронических заболеваний вен нижних конечностей: терапевт-хирург // Стационарозамещающие технологии: Амбулаторная хирургия. - 2015. - №3-4 - С. 17-22.

3. Чеснокова Н.Н., Кононова С.В., Петрова С.В., Писаненко Д.В. Исследование рынка флеботропных лекарственных препаратов, применяемых при лечении варикозной болезни 36 вен нижних конечностей (без язв и воспалений) // Ремедиум. - 2017. - №5. - С. 36-42.

4. Tomas-Barberan F.A., Selma M.V., Espin J.С. Interactions of gut microbiota with dietary polyphenols and consequences to human health // Current Opinion in Clinical Nutrition and Metabolic Care - 2016. - Vol. 19. - Pp. 471-76. DOI:10.1097/MCO.0000000000000314.

5. Karas D., Ulrichova J., Valentova K. Galloylation of polyphenols alters their biological activity // Food Chem. Toxicol. - 2017. - Vol. 105. - Pp. 223-240. DOI:/l 0.1016/j .fct.2017.04.021.

6. Etxeberria U., Arias N., Boque N., Macarulla M., Portillo M., Martinez J., Milagro F. Reshaping faecal gut microbiota composition by the intake of trans-resveratrol and quercetin in high-fat sucrose diet-fed rats // The Journal of Nutritional Biochemistry. - 2015. - Vol. 26. - Pp. 651-660. DOI:10.1016/j.jnutbio.2015.01.002.

7. Патент 2314812 RU Твердая лекарственная форма диосмина / ЗАО «Канонфарма продакшн» (Россия); заявл. 22.11.2005 № 2005136202/15; опубл. 20.01.2008, бюл. № 2.

8. Patent 021107В1 ЕА Combination composition, comprising as active ingredient L-carnitine or propionyl Lcarnitine, for the prevention or treatment of chronic venous insufficiency / SIGMA TAU IND FARMACEUTI (IT) / Virmani Mohamed Ashraf Koverech Aleardo (IT) priority date 07.02.2011 № EA201200786A; publication info 30.04.2015.

9. Patent 20120591A1 ITRM A61K36/28 (EP) Composizioni da utilizzare nelle flebopatologie da stasi ed infiammatorie / S. Ammendola, M. di Loreto, A. Scotto d Ambusco; priority date 26.11.2012 № ITRM20120591A; publication info 27.05.2014.

10. Patent 100577134 С CN A61J3/02 Super micronization method for botanical medicinal, product obtained thereby and use thereof / Jinhua Hu, Like Wu (CN); priority date 30.12.2006 № CN200610095385A; publication info 06.01.2010.

11. Patent 2208498A1 ЕР A61K 31/185, A61K 31/7048, A61K 45/06, A61P 7/02 Pharmaceutical composition combining various venotonic and vasoprotective agents for the treatment of chronic venous insufficiency / WORLD TRADE IMP EXPORT WTIE AGO(CH) / E.M. Garcia Armenta, J. Santos Murillo, V. G. Alvarez Ochoa (MX); priority date 05.09.2008 № EP08829371A; publication info 21.07.2010.

12. Martinez-Zapata M.J., Moreno R.M., Gich I., Urrutia G., Bonfill X. A randomized, double-blind multicenter clinical trial comparing the efficacy of calcium dobesilate with placebo in the treatment of chronic venous disease // European Journal of Vascular and Endovascular Surgery.-2008.-Vol. 35.-Pp. 358-365. DOI:10.1016/j.ejvs.2007.08.012.

13. Patent 2019306315A1 AU A61K31/7048 Pharmaceutical composition in the form of a chewable tablet of diosmin or of a flavonoid moiety / S. Marsas, J.-M. Pean; priority date 19.07.2019 № EP2019069498W, 20.07.2018 № FR1856769A; publication info 11.02.2021.

14. Воронков А.В., Гамзелева О.Ю. Обзор современных флеботропных препаратов на основе флавоноидов как перспективных эндотелиопротекторов при лечении хронических заболеваний вен // Амбулаторная хирургия. - 2019. № 1-2. - С. 27-33. DOI: 10.21518/1995-1477-2019-1 -2-27-33.

15. Молчанов, Г.И. Фармацевтические технологии: современные электрофизические биотехнологии в фармации: учебное пособие / Г.И. Молчанов, А.Л. Молчанов, Ю.Л. Морозов. - М.: Альфа-М; ИНФРА-М, 2009. - 336 с.

16. Хмелев, В.Н. Ультразвук. Аппараты и технологии: монография / В.Н. Хмелев, А.В. Шалунов, С.С. Хмелев, С.Н. Цыганок. - Бийск: Изд-во Алт. гос. технич. ун-та, 2015. - 688 с.

17. Telange D.R., Patil А.Т., Pethe A.M., Fegade H., Anand S., Dave V.S. Formulation and characterization of an apigenin-phospholipid phytosome (APLC) for improved solubility, in vivo bioavailability, and antioxidant potential // European Journal of Pharmaceutical Sciences. - 2017. - Vol. 108. - C. 36-49.

Группа изобретений относится к области фармацевтики, а именно к композиции для флебопротектора и способу её получения. Композиция для флебопротектора, полученная микронизацией комплекса биофлавоноидов обезжиренного облепихового шрота до размера частиц 1,4 мкм, содержит рутин, нарциссин, мирицетин, кемпферол, кверцетин и изорамнетин при следующем соотношении компонентов, мас.%: рутин 0,1, нарциссин 0,3, мирицетин 0,3, кемпферол 0,8, кверцетин 34,3, изорамнетин 64,2. Способ получения вышеуказанной композиции для флебопротектора включает микронизацию 0,5%-ной водной суспензии комплекса биофлавоноидов обезжиренного облепихового шрота, при этом микронизацию осуществляют ультразвуковым воздействием частотой 22±1,65 кГц, интенсивностью 15 Вт/см², акустической мощностью 135±5 Вт при температуре 40°С, в течение 10 мин с последующим отделением твердой фракции центрифугированием. Вышеуказанная группа изобретений позволяет расширить сырьевую базу для производства твёрдой лекарственной формы эффективного отечественного флебопротектора, а также обеспечить получение композиции для флебопротектора из доступного сырьевого источника высокоэффективным простым способом. 2 н.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл., 1 пр.

1. Композиция для флебопротектора, полученная микронизацией комплекса биофлавоноидов обезжиренного облепихового шрота до размера частиц 1,4 мкм, содержащая рутин, нарциссин, мирицетин, кемпферол, кверцетин и изорамнетин при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Рутин 0,1 Нарциссин 0,3 Мирицетин 0,3 Кемпферол 0,8 Кверцетин 34,3 Изорамнетин 64,2

2. Способ получения композиции для флебопротектора по п. 1, включающий микронизацию 0,5%-ной водной суспензии комплекса биофлавоноидов обезжиренного облепихового шрота, при этом микронизацию осуществляют ультразвуковым воздействием частотой 22±1,65 кГц, интенсивностью 15 Вт/см², акустической мощностью 135±5 Вт при температуре 40°С, в течение 10 мин с последующим отделением твердой фракции центрифугированием.