ПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ОСНОВЕ ВЕЩЕСТВ ФЕНОЛЬНОЙ ПРИРОДЫ И ФОСФОЛИПИДОВ Российский патент 2007 года по МПК A61K36/00 A61P43/00 

Изобретение относится к области фармакологии и медицины, конкретно к новому комплексному препарату в липосомной форме, характеризующемуся высокой гидрофильностью, улучшенной биодоступностью и терапевтическими свойствами по сравнению со свободными биофлафоноидами и другими веществами фенольной природы.

В широко распространенное среди лекарственных растений семейство флавоноидов входит обширный собирательный класс полифенолов. Флавоноидные соединения подразделяются на основные группы флавонов, флавонолов, флаванонов, флаванонолов, катехинов и антоцианов. Флавоноиды обладают широким спектром биологической и антиоксидантной активности. В настоящее время хорошо изучены и задокументированы такие фармакологические свойства флавоноидов, как антиоксидантная, периферическая, вазодилаторная активности, вазопротекторная активность (влияние на хрупкость и проницаемость капилляров), противовоспалительное, антиспазмолитическое, антигистаминное и противоопухолевое действия.

Несмотря на многообещающие перспективы клинического применения флавоноидов, их терапевтическая эффективность часто оказывается недостаточной при местном и пероральном применении. При пероральном применении наблюдается слабая абсорбция флавоноидов в кишечнике, обусловленная бактериальной деградацией и формированием не всасывающихся в кишечнике комплексов флавоноидов с другими веществами пищеварительного тракта. Поскольку флавоноиды практически нерастворимы в воде, их парентеральное применение также оказывается затруднительным. Для целей практической медицины несомненную актуальность приобретает поиск путей повышения биодоступности и терапевтической эффективности препаратов, основой которых являются флавоноиды. Одним из таких путей является применение липофильных комплексов флавоноидов с фосфолипидами, разработанных авторами патента США №5043323.

Хотя безусловной заслугой авторов является некоторое повышение биодоступности флавоноидов за счет улучшения их абсорбции в кишечнике при применении per os, высокая липофильность комплексов служит серьезным препятствием для парентерального применения препаратов, необходимого для более радикальной терапии ряда патологий.

В патенте РФ №2161488 описано применение липофильных комплексов флаволигнанов, представляющих собой смесь силибинина, силидианина и силикристина с натуральными или синтетическими фосфолипидами для терапии опухолей женской половой сферы. Авторам удалось добиться выраженного терапевтического эффекта при пероральном применении препаратов, однако дальнейшее повышение терапевтической эффективности флаволигнанов в данном случае также ограничено высокой липофильностью препаратов, создающей препятствия для их парентерального применения.

Наиболее близким техническим решением является профилактическая композиция, применяемая для предупреждения или лечения патологических процессов и поддержания высокого уровня функциональной активности организма, включающая комбинации одного или нескольких экстрактов лекарственных растений, содержащих вещества фенольной природы, и фосфолипид (пат. РФ №2252029). В качестве фосфолипида использовался соевый фосфолипидный комплекс.

Таким образом, авторами приведенных выше работ частично решена задача повышения биодоступности флавоноидов за счет увеличения их абсорбции в кишечнике в виде комплексов с фосфолипидами, однако проблема повышения растворимости флаволигнанов в водных растворах с целью создания инъекционных форм остается нерешенной.

Изобретательской задачей является создание гидрофильной, липосомной композиции с повышенной биодоступностью, обладающей более высокой терапевтической активностью, способностью к образованию стабильных водных микродисперсий, которая в отличие от ранее предлагаемых липофильных препаратов может быть использована для парентерального введения и обладает более высокой терапевтической активностью.

Изобретательская задача решается тем, что предлагается профилактическая композиция, применяемая для предупреждения или лечения патологических процессов и поддержания высокого уровня функциональной активности организма, включающая комбинации одного или нескольких экстрактов лекарственных растений, содержащих вещества фенольной природы, и фосфолипид, вещества фенольной природы заключены в оболочку из фосфолипида, выбранного из группы: фосфолипиды из бычьего или свиного мозга, или кожи, фосфатидилхолин, фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламин, содержащие одинаковые или различные ацильные группы, яичный лецитин, при этом оболочка выполнена в форме липосом, содержащих холестерол в количестве 11-40%.

При этом вещества фенольной природы выбраны из группы: 5,6,7,4'-тетраоксифлавон, 5,6,7-триоксифлавон, g-схизандрин, апигенин, астрагалин, ауреузидин, виснагин, виснадин, гесперидин, гиперозид, дезоксисхизандрин, дигидросамидин, дигидросилибин, изоликвиритигенин, изорамнитин, инокостерон, кверцетин, кверцитрин, квинквелозид, келлин, кемпферол, лептозидин, ликвиритигенин, лютеолин, мирицетин, нарингенин, пиранокумарин, розавин, рутин, салидрозид, силидианин, силибинин, силикристин, скополетин, сульфуретин, схизандрин, схизандрол, тилирозид, трицин, умбеллиферон, 6-метокси-7,8-диоксикумарин, фурокумарин, экдистерон, энтеграстероны, 6,7-диоксикумарин и их производные.

Данные композиции могут быть получены методами ультразвуковой обработки, экструзии, инжекции эфирных или спиртовых растворов смесей, содержащих компоненты в заявляемых соотношениях.

При получении водного раствора предлагаемой композиции образуется стабильная дисперсия микровезикул, которые могут быть использованы для получения инъекционных или инфузионных лекарственных форм.

В основе изобретения лежит новая липосомная композиция, которая может содержать одно или несколько веществ фенольной природы или один или несколько содержащих данные вещества экстрактов лекарственных растений и фосфолипиды, отличающаяся способностью к образованию стабильных водных микродисперсий, которая в отличие от ранее предлагаемых липофильных препаратов может быть использована для парентерального введения и обладает более высокой терапевтической активностью.

Составы предлагаемой липосомной композиции сведены в таблицу 1.

Таблица 1№№Соотношение активное вещество/фосфолипидАктивное веществоФосфолипидОболочка, содержащая холестерол, %11:10кверцетинфосфатидилхолин1021:5гиперозидсмесь фосфатидилхолин/фосфатидилсерин3831:0,5силимаринсоевый лецитин1141:1экстракт расторопши пятнистойсоевый лецитин1551:20экстракты расторопши пятнистой и эхинацеифосфатидилхолин1261:50рутинфосфолипид из бычьего мозга4071:305,6,7-триоксифлавонфосфолипид свиного мозга3581:15g-схизандринфосфолипид из кожи3291:25апигенинфосфатидилсерин20101:40астрагалинфосфатидилэтаноламин30111:10Ауреузидиняичный лецитин16

Аналогично были получены композиции с остальными веществами фенольной природы, указанные выше. Заявляемый препарат, включающий комплексы исходных веществ фенольной природы или содержащих их растительных экстрактов и фосфолипидов, отличается способностью в водных растворах образовывать стабильные дисперсии микровезикул. Стабильность и гидрофильность заявляемого препарата подтверждается отсутствием осадка при длительном хранении, а также данными микроскопии (чертеж).

Пример 1. Антиоксидантная активность полученных композиций.

Антиоксидантную активность композиций оценивали по их влиянию на генерацию активных форм кислорода у макрофагов, вызванную хризотил-асбестом.

В измерительную кювету хемилюминометра помещали 0,85 мл среды, содержащей 110 мМ NaCl, 10 мМ Трис-HCl, рН 7.4, 5 мМ глюкозы, 2.5 мМ MgCl₂, 0.65 мМ люминола, рН 7.4. Затем в кювету добавляли 0,1 мл суспензии макрофагов (5·10⁶ клеток/мл) и регистрировали интенсивность хемилюминесценции клеток при 37°С и постоянном перемешивании. Через 5 мин измеряли уровень спонтанной хемилюминесценции макрофагов. Затем в кювету вводили 0,05 мл исследуемых комплексов (концентрация вещества фенольной природы во всех случаях составляла 0,1 мг/мл), а через 3 мин добавляли 0,05 мл физ. раствора, содержащего 0,3 мг хризотил-асбеста. Через 5 мин измеряли максимальный уровень люминесценции макрофагов (ХЛ_ОП). В качестве контрольного образца использовали аналогичную систему, не содержащую исследуемых препаратов (ХЛ_К). Антиоксидантную активность исследуемых комплексов оценивали в процентах по формуле: (0% - отсутствие антиоксидантной активности). В качестве препаратов сравнения использовали смеси фосфолипидов с веществами фенольной природы или содержащими их растительными экстрактами.

Результаты исследования приведены в таблице 2.

Таблица 2Липосомные композицииАнтиоксидантная активность, %Комплексный препаратСмеськверцетин/фосфатидилхолин46,830,6гиперозид/фосфатидилхолин/фосфатидилсерин38,027,9силимарин/соевый лецитин51,935,8экстракт расторопши пятнистой/экстракт эхинацеи/фосфатидилхолин58,441,3

Как видно из таблицы 2, антиоксидантная активность веществ фенольной природы или содержащих их экстрактов может быть значительно повышена при включении их в состав заявляемого комплексного препарата. При этом антиоксидантная активность заявляемых комплексных препаратов существенно превышает активность простых смесей веществ фенольной природы с фосфолипидами.

Аналогичные результаты были получены при исследовании антиоксидантной активности других вышеперечисленных веществ фенольной природы, входящих в состав комплексных препаратов с фосфолипидами.

Пример 2. Специфическая гепатозащитная активность липосомной композиции, включающей силибинин и фосфатидилхолин.

Исследование специфической гепатозащитной активности композиций проводили на модели острого токсического гепатита у мышей. В экспериментах были использованы белые беспородные мыши в половозрелом возрасте. Водный раствор препарата вводили внутрижелудочно с помощью зонда в дозе 100 мг/кг по силибинину. В качестве гепатотропного средства использовали парацетамол (модель лекарственного гепатита). Животным вводили препарат впервые за 1 ч до введения парацетамола, а затем еще 5 раз ежедневно. В качестве препарата сравнения использовали простую смесь силибинина и фосфатидилхолина в виде водной суспензии, которую вводили по соответствующей схеме в дозе 100 мг/кг по силибинину. Контрольным животным вводили только парацетамол. Через сутки после последнего введения препаратов животных декапитировали и проводили вскрытие и изучение биохимических показателей крови. Активность аланинаминотрансферазы (АЛАТ) и аспартатаминотрансферазы (АСАТ) определяли по методу Райтмана-Френкеля. Общий белок определяли с помощью биуретового реактива. Относительная масса печени у контрольных животных с гепатитом была увеличена по сравнению со здоровыми интактными животными на 45,6%; у экспериментальных животных этот показатель составлял 23,1% (30,2% при приеме простой смеси). Таким образом, степень выраженности воспалительных процессов у животных, получавших заявленный липосомный комплексный препарат, заметно снижалась. Исследование активности трансаминаз в сыворотке крови показало, что у контрольных животных с гепатитом уровни аланинаминотрансферазы (АЛАТ) и аспартатаминотрансферазы (АСАТ) были повышены по сравнению с интактными животными на 432,9% и 211,5%; у мышей, получавших заявляемый комплексный препарат, эти показатели снижались до 208,6% и 52,3% соответственно (267,3% и 76,0% при приеме простой смеси). Уровень общего белка в сыворотке крови больных гепатитом контрольных мышей снижался до 63,2% (100% - у интактных здоровых животных), в то время как применение заявляемого препарата увеличивало этот показатель до 89,7%. При применении простой смеси уровень общего белка составлял лишь 79,1% от такового для здоровых контрольных животных.

Таким образом, применение предлагаемого препарата положительно влияло на дезинтоксикационные функции печени животных с острым лекарственным гепатитом. При этом эффект от комплексного препарата превышал эффект от препарата сравнения (простой смеси силибинина и фосфатидилхолина).

Пример 3. Противоопухолевая активность липосомной композиции, включающей экстракты расторопши пятнистой и эхинацеи и соевый лецитин.

Исследование противоопухолевой активности композиций проводили на модели меланомы линии В16 у мышей C57BI/6. Для индукции солидных опухолей мышам вводили подкожно клеточную суспензию (2·10⁵ клеток в 0,1 мл физиологического раствора). Экспериментальным животным внутривенно вводили заявляемый комплексный препарат в физиологическом растворе. В качестве препарата сравнения использовали водную суспензию простой смеси, содержащей экстракты расторопши и эхинацеи и соевый лецитин в тех же количествах, вводимую внутрижелудочно через зонд. Препараты вводили один раз в неделю, всего три приема, начиная с 3 дня после прививки опухоли. Каждая экспериментальная группа состояла из шести животных, контрольная - из десяти. Размер солидных опухолей измеряли один раз в 2-3 дня. Объем опухоли вычисляли по формуле , где а - короткий, b - длинный диаметр опухоли. Относительный размер опухолей (ОРО) определяли по формуле: , где Р_оп - средний размер опухолей в опытной группе, Р_к - средний размер опухолей у контрольных животных. Увеличение продолжительности жизни леченых животных по сравнению с контролем определяли по формуле: , где Т - СПЖ леченых животных, дни, С - СПЖ контрольных животных, дни.

Результаты исследования приведены в таблице 3. Как видно из таблицы, противоопухолевый эффект от применения простой смеси был слабовыраженным. В то же время применение заявляемого липосомного комплексного препарата оказывало значительный ингибирующий эффект в отношении роста опухолей, а также приводило к существенному увеличению продолжительности жизни животных по сравнению с контролем.

Таблица 3ПрепаратОРО, %УСПЖ, %Физ. раствор (контроль)100-Смесь [экстракт расторопши пятнистой/экстракт эхинацеи/соевый лецитин], водная суспензия внутрижелудочно76,220,3Липосомная композиция, те же компоненты, водный раствор внутривенно51,952,0

Таким образом, применение веществ фенольной природы, входящих в состав заявляемого комплексного препарата, значительно увеличивает их противоопухолевый эффект за счет повышенной биодоступности и применения в виде инъекционной формы.

Изобретение относится к области фармакологии и медицины, конкретно к новому комплексному препарату в липосомной форме, характеризующемуся высокой гидрофильностью, улучшенной биодоступностью и терапевтическими свойствами по сравнению со свободными биофлафоноидами и другими веществами фенольной природы. Профилактическая композиция, применяемая для предупреждения или лечения патологических процессов и поддержания высокого уровня функциональной активности организма, включающая комбинации одного или нескольких экстрактов лекарственных растений, содержащих вещества фенольной природы, и фосфолипид, вещества фенольной природы заключены в оболочку из фосфолипида, выбранного из группы: фосфолипиды из бычьего или свиного мозга, или кожи, фосфатидилхолин, фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламин, содержащие одинаковые или различные ацильные группы, яичный лецитин, при этом оболочка выполнена в форме липосом, содержащих холестерол в количестве 11-40%. При этом вещества фенольной природы выбраны из группы: 5,6,7,4′-тетраоксифлавон, 5,6,7-триоксифлавон, g-схизандрин, апигенин, астрагалин, ауреузидин, виснагин, виснадин, гесперидин, гиперозид, дезоксисхизандрин, дигидросамидин, дигидросилибин, изоликвиритигенин, изорамнитин, инокостерон, кверцетин, кверцитрин, квинквелозид, келлин, кемпферол, лептозидин, ликвиритигенин, лютеолин, мирицетин, нарингенин, пиранокумарин, розавин, рутин, салидрозид, силидианин, силибинин, силикристин, скополетин, сульфуретин, схизандрин, схизандрол, тилирозид, трицин, умбеллиферон, 6-метокси-7,8-диоксикумарин, фурокумарин, экдистерон, энтеграстероны, 6,7-диоксикумарин и их производные. Средство обладает способностью к образованию стабильных водных микродисперсий, которые в отличие от ранее предлагаемых липофильных препаратов могут быть использованы для парентерального введения и обладают более высокой терапевтической активностью. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл.

1. Профилактическая композиция, применяемая для предупреждения или лечения патологических процессов и поддержания высокого уровня функциональной активности организма, включающая комбинации одного или нескольких экстрактов лекарственных растений, содержащих вещества фенольной природы, и фосфолипид, отличающаяся тем, что вещества фенольной природы заключены в оболочку из фосфолипида, выбранного из группы: фосфолипиды из бычьего или свиного мозга или кожи, фосфатидилхолин, фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламин, содержащие одинаковые или различные ацильные группы, яичный лецитин, при этом оболочка выполнена в форме липосом, содержащих холестерол в количестве 11-40%.2. Профилактическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что вещества фенольной природы выбраны из группы: 5,6,7,4′-тетраоксифлавон, 5,6,7-триоксифлавон, g-схизандрин, апигенин, астрагалин, ауреузидин, виснагин, виснадин, гесперидин, гиперозид, дезоксисхизандрин, дигидросамидин, дигидросилибин, изоликвиритигенин, изорамнитин, инокостерон, кверцетин, кверцитрин, квинквелозид, келлин, кемпферол, лептозидин, ликвиритигенин, лютеолин, мирицетин, нарингенин, пиранокумарин, розавин, рутин, салидрозид, силидианин, силибинин, силикристин, скополетин, сульфуретин, схизандрин, схизандрол, тилирозид, трицин, умбеллиферон, 6-метокси-7,8-диоксикумарин, фурокумарин, экдистерон, энтеграстероны, 6,7-диоксикумарин и их производные.