Штамм "O N 2241/Эфиопия/2011" вируса ящура Aphtae epizooticae генотипа О/ЕА-3 для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура Российский патент 2023 года по МПК C12N1/20 C12N7/00 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, может быть использовано для разработки и изготовления средств диагностики, специфической профилактики ящура генотипа О/ЕА-3 и контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин.

Ящур является самым контагиозным заболеванием млекопитающих животных и обладает большим потенциалом в плане нанесения серьезных экономических потерь у восприимчивых парнокопытных животных [1].

Возбудитель данного заболевания - безоболочечный вирус, который относится к семейству Picornaviridae, роду Aphthovirus. Выделяют 7 следующих серотипов вируса ящура, которые значительно отличаются друг от друга по аминокислотному составу белков: О, А, Азия-1, С и SAT-1, SAT-2, SAT-3, причем самым распространенным является тип О [2]. Геном вируса ящура представлен одноцепочечной молекулой РНК (ssRNA(+)) положительной полярности с длиной около 8400-8500 и.о., кодирует 4 структурных белка: VP₁, VP₂, VP₃, VP₄ и множество неструктурных протеинов [2].

Каждый серотип генетически разделен на различные топотипы, генетические линии и сублинии (для некоторых штаммов ограничиваются только топотипом) [1, 2, 3].

Анализ базы данных последовательностей генов вируса ящура GenBank показал, что, помимо точечных мутаций, важную роль в эволюции РНК-вирусов играет рекомбинация. Ген 1D (кодирует белок VP₁) имеет самую высокую генетическую изменчивость в геноме возбудителя ящура и поэтому обычно используется для молекулярного типирования его изолятов/штаммов [3].

Штаммы, которые находятся в пределах одной клады и имеют > 95% сходства аминокислотной последовательности в белке VP₁, считаются принадлежащими к одному и тому же генотипу [4].

Белок VP₁ вируса ящура является наиболее вариабельным, поскольку на него приходится около 90% мутаций всех структурных генов. Самыми вариабельными областями являются участки 40-60, 130-160 и 190-213 а.о. [3, 4]. Участок поверхностного белка VP₁ в регионе 130-160 а.о. отличается высокой изменчивостью, поскольку участвует в распознавании рецепторов клетки-хозяина [4, 5].

Изменения в поверхностных белках вируса ящура возникают из-за аминокислотных мутаций, которые изменяют распознавание вирусных белков иммунной системой организма. Поверхностно открытые структуры вируса особенно подвержены иммунной атаке. Процесс появления новых антигенных форм определяется сложным взаимодействием поверхностных вирусных белков и факторов клеток-хозяев [5,6].

Серотип О вируса ящура является наиболее изученным и распространенным во всем мире. Данный серотип разделен на 11 топотипов: EAST AFRICA 1 - 4 (Восточная Африка) (ЕА-1-4), SOUTHEAST ASIA (Юго-Восточная Азия) (SEA), EUROPE-SOUTH AMERICA (Европа-Южная Америка) (EURO-SA), INDONESIA-1 и 2 (Индонезия-1 и 2) (ISA-1 and -2), CATHAY (Китай), MIDDLE EAST-SOUTH ASIA (ME-SA) (Ближний Восток-Южная Азия) и WEST AFRICA (Западная Африка) (WA). Такое генетическое и антигенное разнообразие приводит к проблемам в специфической профилактике ящура при применении культуральных инактивированных противоящурных вакцин, а также затрудняет штаммоспецифическую диагностику выделенных изолятов вируса ящура. В результате возникает необходимость создания новых средств диагностики и специфической иммунопрофилактики в отношении вируса ящура серотипа О и, в частности, генотипа О/ЕА-3, представители которого стали распространяться на территории Восточной Африки и за ее пределами. Следует отметить, что при усилении торгово-экономических связей со странами Африканского континента, возникают риски заноса изолятов данного генотипа на территорию Российской Федерации.

Анализируя вспышки, которые регистрировались на территории Африки, обнаружено, что в Эритрее в 2012 и 2019 гг.были выявлены изоляты вируса ящура, которые принадлежат к генотипу О/ЕА-3, в Эфиопии - в 2019, 2020, 2021, 2022 гг.(данных по 2023 г. в настоящее время не предоставлены), в Южном Судане - в 2017 и 2018 гг., в Судане - в 2016, 2017 и 2020 гг.Таким образом, в странах Африки эпизоотическая ситуация по ящура генотипа О/ЕА-3 в последние годы является напряженной. Данный генотип значительно отличается от других генотипов, принадлежащих серотипу О. Требуется проводить исследования штамма данного генотипа для создания средств диагностики и специфической профилактики ящура генотипа О/ЕА-3.

Известны производственные штаммы вируса ящура серотипа О, которые применяются для производства средств специфической профилактики ящура:

- штамм «О/Тайвань/1997» (генотип O/CATHAY/CAM 94),

- штамм «О/Приморский/2014» (генотип O/SEA/Mya-98),

- штамм «О/Приморский/2012» (генотип O/ME-SA/PanAsia),

- штамм «О/Саудовская Аравия/2008» (генотип 0/ME-SA/PanAsia2),

- штамм «О/Оренбургский/2021» (генотип O/ME-SA/Ind-2001e).

Изолят «О/ЕНТ/2/2011» вируса ящура был выделен от свиньи на территории Федеративной Демократической Республики Эфиопия в населенном пункте Дебре Зейт (Бишофту) в районе Восточная Шева в 2011 году и в 2023 году поступил в ФГБУ «ВНИИЗЖ» из Всемирной справочной лаборатории института Пирбрайта (the World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease, the Pirbright institute, Великобритания) для проведения научных исследований.

При проведении научных исследований в ФГБУ «ВНИИЗЖ» был охарактеризован и получил название - штамм «О №2241/Эфиопия/2011».

По результатам сравнительного анализа нуклеотидных последовательностей выделенный штамм принадлежит к генотипу О/ЕА-3 вируса ящура, который значительно отличается от производственных штаммов вируса ящура серотипа О.

Настоящее изобретение позволяет расширить арсенал производственных штаммов вируса ящура серотипа О, обладающих высокой инфекционной, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде, пригодный для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин, изготовления чувствительных и высокоспецифичных диагностических тест-систем и высоко иммуногенных вакцинных препаратов путем получения штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура генотипа О/ЕА-3.

Штамм вируса ящура «О №2241/Эфиопия/2011» депонирован во Всероссийской государственной коллекции экзотических типов вирусов ящура и других патогенов животных (ГКШМ) ФГБУ «ВНИИЗЖ», под регистрационным номером: №481 - деп / 23-31 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ».

Экспериментально подтверждена возможность использования штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура для изготовления средств диагностики и профилактики ящура генотипа О/ЕА-3.

Сущность изобретения отражена на графическом изображении:

Фиг. 1. - Дендрограмма, отражающая филогенетическое взаимоотношение штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура с эпизоотическими штаммами серологического типа О. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена VP₁.

Сущность изобретения пояснена следующими перечнями последовательностей:

SEQ ID NO: 1 представляет последовательность нуклеотидов гена белка VP₁ штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура генотипа О/ЕА-3; SEQ ID NO: 2 представляет последовательность аминокислот гена белка VP₁ штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура генотипа О/ЕА-3.

Штамм «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура характеризуется следующими признаками и свойствами. Морфологические признаки

Штамм «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура серотипа О относится к отряду Picornavirales, семейству Picornaviridae, роду Aphthovirus, виду Foot-and-Mouth Disease virus и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона иксаэдрическая, размер 24 нм. Вирион состоит из молекулы одноцепочечной положительно заряженной молекулы РНК и 60 копий полипептида, каждый из которых представлен белками VP₄, VP₂, VP₃, VP₁

Антигенные свойства

По антигенным свойствам штамм «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура относится к серотипу О. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. У переболевших животных в сыворотке крови образуются типоспецифические антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции микронейтрализации (РМН).

Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура ID-гена белка VP₁ штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура принадлежит к генотипу О/ЕА-3 (Фиг. 1).

Антигенное родство (r₁) штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура изучено в РМН, в перекрестном исследовании штамма со специфическими сыворотками, полученными на следующие производственные штаммы вируса ящура:

- штамм «О/Тайвань/1997» (генотип 0/CATHAY/CAM 94),

- штамм «О/Приморский/2014» (генотип O/SEA/Mya-98),

- штамм «О/Приморский/2012» (генотип O/ME-SA/PanAsia),

- штамм «О/Саудовская Аравия/2008» (генотип 0/ME-SA/PanAsia2),

- штамм «О/Оренбургский/2021» (генотип O/ME-SA/Ind-2001e).

Титр референтных сывороток крови КРС, полученных путем иммунизации животных моновалентными вакцинами из производственных штаммов вируса ящура серотипа О, против 10² ТЦД₅₀ гомологичного и гетерологичного вируса определяли в РМН при перекрестном титровании, рассчитывая значения с использованием уравнения линейной регрессии, и выражали в lg. Значение r₁ определяли, как антилогарифм разности lg титров сыворотки против гетерологичного и гомологичного вируса [7, 8, 9].

Значение r₁ в РМН интерпретировали следующим образом: при ≥ 0,3 -исследуемый и производственный штаммы вируса ящура являются родственными; при < 0,3 - исследуемый образец штамма вируса ящура значительно отличается от производственного штамма. Максимальное родство отмечается при значении r₁ в РМН, стремящимся к 1,0.

Показатели антигенного родства при изучении штамма «О №2241/Эфиопия/2011» составили r₁ от 0,05 до 0,19, что свидетельствует об отсутствии явного антигенного родства с производственными штаммами вируса ящура серотипа О, а именно для штамма «О/Тайвань/1997» - 0,05, штамма «О/Приморский/2014» - 0,10, штамма «О/Приморский/2012» - 0,14, штамма «О/Саудовская Аравия/2008» - 0,12, штамма «О/Оренбургский/2021» - 0,19.

Полученные данные свидетельствуют об отсутствии антигенного родства с производственными штаммами вируса ящура серотипа О.

Гено- и хемотаксономическая характеристики

Штамм «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура является РНК(+) -содержащим вирусом с молекулярной массой 8,08×10⁶ Д. Нуклеиновая кислота представлена одноцепочной линейной молекулой молекулярной массой 2,8×10⁶ Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP₁, VP₂, VP₃ и VP₄. Липопротеидная оболочка отсутствует.

Основным антигенным белком является VP₁. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирусная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса.

Физические свойства

Масса вириона составляет 8,4×10^-18 г. Плавучая плотность 1,46 г/см³.

Устойчивость к внешним факторам

Штамм «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура устойчив к эфиру, хлороформу, и ацетону. Наиболее стабилен при рН 7,45-7,70. Сдвиги рН в кислую и сильно щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, у-облучению, высоким температурам (выше 38,4°С).

Дополнительные признаки и свойства

Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.

Патогенность - патогенен для парнокопытных животных.

Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.

Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 5 пассажей (срок наблюдения) на перевиваемых культурах.

Биотехнологические характеристики

Штамм «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура репродуцируется в перевиваемых культурах клеток: почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), почки свиньи (IB-RS-2), почки сирийского хомячка (ВНК-21).

При испытании было проведено 5 последовательных пассажей штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура в перевиваемых культурах клеток ПСГК-30, ВНК-21, IB-RS-2. Биологические свойства характеризовали путем определения инфекционной активности вируса каждого пассажа в перевиваемой клеточной линии IB-RS-2 и на естественно восприимчивых животных - крупном рогатом скоте (КРС) и свиньях.

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его исследования, которые не ограничивают объем изобретения.

Пример 1. Исследование биологических свойств штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура при репродукции в монослойных перевиваемых клеточных линиях.

При исследовании штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура с целью получения его однородной популяции, обладающей оптимальными биотехнологическими свойствами, использовали комплекс биологических, вирусологических и биохимических методов, предусмотренных методическими указаниями по выявлению и идентификации штаммов вируса ящура [7].

Биологические и вирусологические методы включали в себя метод выделения в клеточной линии и адаптацию вируса ящура к ним.

Выделение вируса ящура проводили в монослойных перевиваемых клеточных линиях ПСГК-30, IB-RS-2, ВНК-21 с последующей адаптацией в течение 5 последовательных пассажей. Культуры клеток выращивали в соответствующих питательных средах, в стационарных условиях во флаконах с площадью поверхности 25,0 см², отмывали от ростовой среды и заражали 10%-ной суспензией афтозного материала (множественность заражения составляла 1-10 ТЦЦ₅₀ на клетку), приготовленной в растворе Хэнкса с 0,5% гидролизата лактальбумина по стандартной рецептуре. Для удаления микрофлоры и балластных клеточных компонентов вирусную суспензию предварительно обрабатывали 10%-ным раствором хлороформа. После 30-минутного контакта вируса с клеточной культурой при температуре 37±0,5°С во флаконы вносили по 5,0 см³ поддерживающей среды и инкубировали при температуре 37±0,5°С до появления цитопатического действия (ЦПД) в культуре клеток, которое представлено в виде округления клеток, повышения их оптической плотности, дегенерации и отделении клеток от поверхности субстрата. При ЦПД не менее 90% клеток, флаконы подвергали замораживанию-оттаиванию, очистке клеточной взвеси хлороформом и центрифугированию при 3000 g в течение 15 мин. Полученный вируссодержащий материал использовали для последующих пассажей. Вирус считался адаптированным к культурам клеток, если в течение не менее 24 часов проявлялось 90-100% ЦПД в монослое клеточных культур. Адаптация эпизоотического изолята «О/ЕНТ/2/2011» к различным клеточным линиям наступала на уровне пятого пассажа. В результате был получен штамм «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура. Титр инфекционной активности определяли с помощью разработанной ранее методики [10].

Результаты адаптации штамма вируса ящура к различным клеточным культурам представлены в таблице 1, данные которой свидетельствуют о высокой адаптационной способности штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура к использованным клеточным линиям. В монослойной культуре клеток ПСГК-30 за 13 ч получали вирусную суспензию с активностью в РСК 1:32 и титром инфекционной активности 7,40±0,05 lg ТЦД₅₀/СМ³. В монослойной культуре клеток IB-RS-2 за 14 ч получали вирусную суспензию с активностью в РСК 1:32 и титром инфекционной активности 7,35±0,10 lg ТЦД₅₀/СМ³. В монослойной культуре клеток ВНК-21 за 14 ч получали вирусную суспензию с активностью в РСК 1:32 и титром инфекционной активности 7,40±0,08 lg ТЦД₅₀/СМ³. Каждое исследование и культивирование проводили 5 раз. В итоге получен штамм «О №2241/Эфиопия/2011» с охарактеризованными биологическими культуральными свойствами, который далее использовали для исследования его свойств.

Пример 2. Оценка биологических свойств штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура на крупном рогатом скоте.

Заражение КРС исходным штаммом вируса ящура проводили интрадермолингвально (I пассаж). Адаптацию и наработку штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура на КРС проводили в течение 2 последовательных пассажей. С целью определения титра инфекционной активности адаптированного штамма из афт на этапе 2 пассажа на КРС получали 10%-ную вирусную суспензию, из которой готовили последовательные 10-кратные разведения в 1/15 М фосфатно-солевом буферном растворе (ФСБР). Подготовленные разведения с 10^-2 по 10^-6 вводили интрадермолингвально в 4 точки по 0,1 см³ двум головам КРС. Учет результатов титрования на животных проводили спустя 24 ч по наличию афт на месте введения разведений вируса ящура штамма «О №2241/Эфиопия/2011». Титр инфекционной активности на КРС данного штамма вируса ящура на стадии первого пассажа на КРС составил 4,75 lg ИД₅₀/0,1 см³, второго пассажа - 5,25 lg ИД₅₀/ОД см³. Таким образом, была получена 10%-ная афтозная суспензия вируса ящура штамма «О №2241/Эфиопия/2011» (2 пассаж на КРС) с титром инфекционной активности 5,25 lg ИД,₅₀/0,1 см³.

Пример 3. Оценка биологических свойств штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура на свиньях.

Заражение свиней исходным штаммом «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура проводили внутрикожно на стадии первого пассажа в область венчика передних конечностей. Адаптацию и наработку штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура на свиньях вели в течение 2 последовательных пассажей. С целью определения титра инфекционной активности адаптированного штамма из афт 2 пассажа на свиньях получали 10%-ную вирусную суспензию, из которой готовили последовательные 10-кратные разведения с использованием в качестве растворителя 1/15 М ФБР. Подготовленные разведения с 10^-2 по 10^-6 вводили внутрикожно в венчики копытец по 0,1 см³ в 4 точки на каждый палец конечности одного разведения, из расчета 1 разведение на 2 копытца 1 конечности каждому из 2 подопытных подсвинков.

Учет результатов титрования проводили через 24 ч по наличию афт на месте введения разведений. Титр инфекционной активности на свиньях для штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура на свиньях на стадии первого пассажа составил 5,00 lg ИД₅₀/0,1 см³, второго - 5,50 lg ИД₅₀/0,1 см³.

Пример 4. Исследование биологических свойств штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура при репродукции в перевиваемой суспензионной клеточной линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH.

Штамм «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура репродуцировали в суспензионной перевиваемой культуре клеток из почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21 /SUSP/ARRIAH. В качестве поддерживающей среды использовали среду Игла, с добавлением ферментативного гидролизата мышц сухого, гидролизата белков крови сухого при рН среды 7,45-7,60. Клеточную линию заражали вирусом из расчета 0,005 ТЦД5о/клетка.

Культивирование штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура осуществляли при температуре 37,0±0,2°С до достижения ЦПД вируса, соответствующего не менее 90%. Полученную вируссодержащую суспензию контролировали на стерильность и содержание 146S компонента и общего вирусного белка (ОВБ). Полученные суспензии были стерильными. Концентрация ОВБ в суспензии составляла 2,47±0,19 мкг/см³. Значения титра инфекционной активности вируса, а также процентное содержание 146S компонента штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура отражены в таблице 2, из данных которой видно, что при средней концентрации клеток ВНК-21/SUSP/ARRIAH, равной 4,05±0,16 млн клеток/см³, дозе заражения 0,005 ТЦД₅₀/клетку и продолжительности репродукции вируса 10,30±0,42 ч средний титр инфекционной активности возбудителя ящура был равен 9,39±0,15 lg ТЦД₅₀/СМ³. Концентрацию 146S компонента вируса ящура определяли с помощью ранее разработанной методики [11]. Содержание данного компонента составило 68,40±1,00% (1,69±0,12 мкг/см³).

Пример 5. Оценка типовой специфичности и активности штамма «О №2241/Эфиопия/2017» вируса ящура

Оценку типовой специфичности и активности штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура проводили в реакции связывания комплемента (РСК).

К полученному антигену штамма «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура, взятому в объеме 0,4 см³ в цельном виде и в разведениях 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 добавляли по 0,1 см³ гомологичной и гетерологичных гипериммунных сывороток, полученных на вирус ящура в рабочем (удвоенном) титре и 0,1 см³ комплемента в рабочем разведении. Смесь выдерживали в водяной бане в течение 20 мин при температуре 37±0,2°С. Затем вносили по 0,2 см³ гемолитической системы и выдерживали 30 мин при температуре 37±0,2°С. Положительный результат реакции соответствовал 100%-ной задержке гемолиза эритроцитов барана («4 креста»). Параллельно проводили контрольные реакции без сыворотки, без комплемента и компонентов реакции.

В качестве реагентов в РСК использовали сыворотки ящурные типоспецифические гипериммунные морских свинок, полученные на производственные штаммы вируса ящура «А/Турция/06»,

«О №2241/Эфиопия/2011» {предлагаемое изобретение), «Азия-1/Таджикистан/2011», «SAT-1 №96/62», «SAT-2/SAU7/2000»,

«О/Оренбургский/2021», комплемент сухой для РСК, гемолизин (сыворотка гемолитическая), эритроциты барана 2% (взвесь на физиологическом растворе, рН=7,05-7,15). В качестве контроля использовали антигены вируса ящура штаммов «А/Турция/06», «О №2241/Эфиопия/2011»,

«Азия-1/Таджикистан/2011», «SAT-1 №96/62», «SAT-2/SAU7/2000», «О/Оренбургский/2021».

Результаты исследования отражены в таблице 3, из которой следует, что штамм «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура обладает выраженной типовой специфичностью, относится к вирусу ящура серотипа О и активен в РСК в разведении 1:32.

Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента Российской Федерации на изобретение «Штамм «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура Aphtae epizooticae генотипа О/ЕА-3 для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура».

1. OIE. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. 7th ed. Paris, 2018. - Ch. 3.1.8

2. Пономарев А.П., Узюмов В. Л. Вирус ящура: структура, биологические и физико-химические свойства. Владимир: Фолиант, 2006. - 250 с.

3. Alexandersen, S. The pathogenesis and diagnosis of foot and mouth disease / S. Alexsandersen, Z. Zhang, A.L. Donaldson // J. Compr. Pathol. - 2003. - V. 129.-P. 268-282.

4. Жильцова M.B. Биологические свойства эпизоотических изолятов вируса ящура типов А, О и Азия-1: Автореф... дис.кан. наук. - Владимир: 2008. -23 с.

5. Бурдов А.Н., Дудников А.И., Малярец П.В. и др. Ящур. / Под ред. А.Н. Бурдова. - М., Агропромиздат, 1990, 320 с.

6. Анализ эпизоотической ситуации по ящуру в России с 2010 г. по март 2019 г. / В. П. Семакина, Т. П. Акимова, В. А. Мищенко, А. К. Караулов // Ветеринария. - 2019. - №11. - С.16-20.

7. Методические рекомендации по выделению и идентификации штаммов вируса ящура /А. А. Гусев, В. М. Захаров, Ж. А. Шажко и др.; ФГУ «ВНИИЗЖ». - Владимир. 2002. - 31 с.

8. Методические рекомендации по определению антигенного соответствия между эпизоотическими изолятами и производственными штаммами вируса ящура в перекрестной реакции микронейтрализации /С.Р. Кременчугская, М. В. Жильцова, Т. К. Майорова; ФГБУ «ВНИИЗЖ». -Владимир, 2012. - 36 с.

9. Эпизоотологические особенности ящура типа А, вызванного гетерологичными штаммами вируса / А. В. Мищенко, В. А. Мищенко, В. В. Дрыгин [и др.] // Ветеринария. -2014. - №11. - С.20-24.

10. Патент №2674076 С1 Российская Федерация, МПК А61К 39/135 C12Q 1/68. Способ определения титра инфекционной активности вируса ящура в неинактивированном сырье для вакцины с применением метода обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции в режиме реального времени: №2017145889: заявл. 25.12.2017: опубл. 04.12.2018 / Д.А. Лозовой, Д.В. Михалишин [и др.]; заявитель Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ").

11. Патент №2712769 С1 Российская Федерация, МПК G01M 33/58, C12Q 1/68. Способ спектрометрического определения концентрации 146S частиц вируса ящура в неинактивированном сырье для вакцины по оценке количества молекул вирусной РНК, выделенной после иммунного захвата вирионов: №2019116272: заявл. 27.05.2019: опубл. 31.01.2020 / Д.А. Лозовой, Д.В. Михалишин [и др.]; заявитель Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ").

--->

<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>

<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing

1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">

<ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="FMDV strain O

2241.xml new.xml" softwareName="WIPO Sequence"

softwareVersion="2.1.2" productionDate="2023-06-02">

<ApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText>

<FilingDate>2023-06-01</FilingDate>

</ApplicationIdentification>

<ApplicantFileReference>508</ApplicantFileReference>

<EarliestPriorityApplicationIdentification>

<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>

<ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText>

<FilingDate>2023-06-01</FilingDate>

</EarliestPriorityApplicationIdentification>

<ApplicantName languageCode="ru">ФГБУ &quot;Федеральный центр охраны

здоровья животных&quot; (ФГБУ &quot;ВНИИЗЖ&quot;)</ApplicantName>

<ApplicantNameLatin>FGBI &quot;ARRIAH&quot;</ApplicantNameLatin>

<InventorName languageCode="ru">Михалишин Дмитрий

Валерьевич</InventorName>

<InventorNameLatin>Doronin Maksim Igorevich </InventorNameLatin>

<InventionTitle languageCode="ru">Штамм «О № 2241/Эфиопия/2011»

вируса ящура Aphtae epizooticae генотипа O/EA-3 для изготовления

биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики

ящура</InventionTitle>

<SequenceTotalQuantity>2</SequenceTotalQuantity>

<SequenceData sequenceIDNumber="1">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>639</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..639</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>genomic DNA</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q1">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>FMDV</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>accacctccccaggcgaatcggccgaccctgtgactgccaccgtcgaaa

actacggcggtgagacacaggcccagaggcgccaacacacggacgtctcgttcattcttgacagatttgt

gaaggtaacaccaaaagaccaaatcaatgtgctggacttgatgcagacccctgctcacacgctggttgga

gcgctccttcgcactgccacttactacttcgcagatttagaagtggcggtgaaacacgaggggaacctca

catgggtccctaacggagcaccagaatcagctctggacaacaccaccaatccaacagcctaccacaaggc

accacttactagacttgccttgccctacacggcaccacaccgcgtgttggcaaccgtttacaacggaaac

tgcaagtatggtgagacgttggcgtccaacgtgaggggcgatctccaggtgttggcccagaaggcggcga

gaccgctgcccacctctttcaactacggcgccatcaaggctacgcgggtgactgaattgctttaccgcat

gaagagggctgaaacatactgcccacggcccctgttggccgttcacccaagcgaggccaggcacaagcag

aagatagtggcgcctgtgaagcaactcctg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

<SequenceData sequenceIDNumber="2">

<INSDSeq>

<INSDSeq_length>213</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..213</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals>

<INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

<INSDQualifier id="q2">

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>FMDV</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier>

</INSDFeature_quals>

</INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>TTSPGESADPVTATVENYGGETQAQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQIN

VLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPESALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPY

TAPHRVLATVYNGNCKYGETLASNVRGDLQVLAQKAARPLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPR

PLLAVHPSEARHKQKIVAPVKQLL</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq>

</SequenceData>

</ST26SequenceListing>

<---

Изобретение относится к области биотехнологии и касается нового штамма вируса ящура Aphtae epizooticae генотипа О/ЕА-3 семейства Picornaviridae рода Aphthovirus, депонированного во Всероссийской государственной коллекции экзотических типов вируса ящура и других патогенов животных (ГКШМ) ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером №481 - деп/23-31 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ» штамм «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 вируса ящура. Представленный штамм репродуцируется в перевиваемых культурах клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), почки свиньи (IB-RS-2), почки новорожденного сирийского хомячка (ВНК-21). В перевиваемой суспензионной культуре клеток почки сирийского хомячка ВНК-21/SUSP/ARRIAH в течение 10,30±0,42 часов инкубирования концентрация 146S компонента штамма «О №2241/Эфиопия/2011» генотипа О/ЕА-3 вируса ящура имеет средние значения 1,69±0,12 мкг/см³ (68,40±1,00%), сохраняя исходные характеристики при пассировании в перевиваемой суспензионной клеточной линии ВНК-21/SUSP/ARRI АН. Представленный штамм «О №2241/Эфиопия/2011» может быть использован для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура генотипа О/ЕА-3 и для контроля антигенной активности противоящурных вакцин. 1 ил., 3 табл., 5 пр.

Штамм «О №2241/Эфиопия/2011» вируса ящура Aphtae epizooticae генотипа О/ЕА-3, депонированный во Всероссийской государственной коллекции экзотических типов вируса ящура и других патогенов животных (ГКШМ) ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером №481 - деп/23-31 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ» для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура генотипа О/ЕА-3.