Способ количественного определения треонина на инфракрасных анализаторах Bruker MPA или Bruker Tango-R в кормовом треонине Российский патент 2024 года по МПК G01N21/35 

Изобретение относится к сельскохозяйственному производству, в частности к кормопроизводству, и может быть использовано в комбикормовой промышленности для быстрого и точного количественного определения треонина в кормовом треонине.

Задача - возможность быстрого и точного количественного определения аминокислот в кормах без использования химических реактивов и без подготовки проб.

Технический результат - возможность быстрого и точного количественного определения треонина в кормовом треонине без использования химических реактивов и без подготовки проб.

Технический результат достигается способом количественного определения треонина в кормовом треонине включающий определение аминокислоты на анализаторе при этом перед началом работы на инфракрасных анализаторах Bruker МРА или Bruker Tango-R проводят измерение фона в течении 60 сек., затем выбирают продукт на дисплее в котором заполняют строки в описании образца, после чего образец помещают на дно двух разных стаканов, затем первый стакан с образцом помещают в анализатор и начинают измерение, после появления на экране анализатора сообщения: «Проведено 1 из 2 измерений. Если Вы готовы продолжить нажмите ОК», в анализатор помещают второй стакан и снова запускают анализатор, после второго измерения на экране отобразится результат измерений треонина.

Известен способ определения количества треонина в кормовом треонине по ГОСТ 33428-2015 (ISO 17180:2013). Пробы треонина обрабатывают раствором соляной кислоты, разбавляют цитратным буфером и добавляют внутренний стандарт норлейцина. Аминокислоту определяют на аминокислотном анализаторе или высокоэффективной жидкостной хроматографией с использованием катионообменной смолы и нитратного буфера в качестве элюента, проводят дериватизацию нингидрином или ортофталдиальдегидом (ОРА) и детектируют с помощью фотометрического или флуоресцентного детектора соответственно. Первоначально готовят растворы:

1. Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрации 7,5 моль/дм³

Гидроокись натрия массой 300,0 г растворяют в воде небольшими порциями при перемешивании и после охлаждения доводят объем раствора водой до 1000 см³.

2. Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации 0,1 моль/дм³.

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают 8,2 см³ соляной кислоты, добавляют около 900 см³ воды, тщательно перемешивают и доводят водой объем раствора до метки.

3. Приготовление цитратного буфера 2,20 ед. рН

В стакан вместимостью 1000 см³ помещают 19,61 г двуводного лимоннокислого натрия, 1 г фенола, 5 см³ тиодигликоля, 16,5 см³ соляной кислоты и растворяют их в 800 см³ бидистиллированной воды (фенол используют для сохранения буферного раствора). Доводят рН раствора до 2,20 ед. рН несколькими каплями раствора соляной кислоты или раствора гидроокиси натрия.

4. Приготовление основного раствора норлейцина молярной концентрации 2,5 ммоль/дм³.

В стакане вместимостью 100 (250) см³ растворяют 0,328 г норлейцина в растворе соляной кислоты, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см³ и доводят объем до метки тем же раствором.

5. Приготовление основного раствора аминокислоты треонина молярной концентрации 2,5 ммоль/дм³.

В мерные колбы вместимостью 1000 см³ помещают соответственно 0,297 г треонина, доводят объем в колбе до метки раствором соляной кислоты.

6. Приготовление градуировочного раствора треонина

6.1 Весовое разведение

В колбу вместимостью 50 см³ взвешивают по 2,5 см³ основного раствора треонина и 2,5 см³ основного раствора норлейцина. Доводят объем раствора в колбе до метки цитратным буфером. Подготовка проб

Пробу треонина измельчают на лабораторной мельнице или в ступке до прохода через сито с размером стороны ячейки 0,25 мм и тщательно перемешивают для каждой пробы проводят два параллельных испытания в условиях повторяемости.

Взвешивают 0,29-0,31 г треонина, навески переносят во взвешенные конические колбы вместимостью 500 см³ и добавляют примерно по 400 см³ раствора соляной кислоты. Колбы помещают на магнитную мешалку и перемешивают содержимое в течение 30 мин. Взвешивают колбы с растворами и вычисляют массу экстракционного раствора.

С помощью пипеточного дозатора берут аликвоту 1 см³ в предварительно взвешенную мерную колбу вместимостью 50 см³ и определяют массу аликвоты. В ту же колбу помещают 2,5 см³ раствора норлейцина, взвешивают колбу и вычисляют его массу затем доводят объем раствора до метки цитратным буфером и тщательно перемешивают.

Необходимый объем анализируемого раствора фильтруют через мембранный фильтр в виалу автосэмплера и вводят в аминокислотный анализатор или систему ВЭЖХ. Вводимый объем, как правило, составляет 20-50 мм³.

Хроматографическая система должна обеспечивать линейную зависимость в диапазоне концентраций градуировочных растворов.

Содержание треонина в анализируемых пробах определяют с использованием градуировочных растворов. Для того чтобы убедиться в отсутствии дрейфа, для контроля стабильности вводят градуировочный раствор после каждых четырех определений. Если при этом полученные результаты определения массовой концентрации аминокислоты в градуировочном растворе не укладываются в диапазон от 99% до 101%, то градуировку проводят заново.

Определяют площади пиков градуировочных растворов и анализируемых растворов испытуемых проб и рассчитывают массовую долю аминокислоты в пробе.

Вычисляют коэффициент чувствительности для треонина по формуле

где - площадь пика норлейцина в градуировочном растворе;

- масса 2,5 см³ основного раствора аминокислоты, г;

- площадь пика аминокислоты в градуировочном растворе;

- масса 2,5 см³ основного раствора норлейцина, г.

Вычисляют массовую долю аминокислоты в пробе Waa, %, используя формулу

где - площадь пика аминокислоты в анализируемом растворе;

- коэффициент чувствительности аминокислоты;

- концентрация аминокислоты в основном растворе, г/дм³, предполагая, что 1000 шз раствора весит 1 кг, г/кг;

- масса 2,5 см³ основного стандартного раствора норлейцина в анализируемом растворе, г;

- масса экстракционного раствора, г;

100 - коэффициент перевода результата в проценты;

- площадь пика норлейцина в анализируемом растворе;

- масса навески, г;

- масса используемой аликвоты экстракционного раствора, г;

1000 - коэффициент согласования единиц массы.

Общими недостатком известного технического решения является, то что представленный способ позволяют определить содержание треонина в кормовом треонине только при использовании дорогостоящего оборудования, расходных материалов и вспомогательного оборудования, так же необходим высококвалифицированный специалист, подготовка проб и время проведения исследования составляет около 6 часов.

Пример конкретного выполнения

Перед началом работы на инфракрасных анализаторах Bruker МРА или Bruker Tango-R проводили измерение фона (60 сек.), выбирали продукт-треонин. Заполняли строки в описании образца. Образец помещали в два стакана, так чтобы дно было полностью заполнено, чтобы не было пузырьков воздуха, и слой образца не был прозрачным.

Первый стакан ставили на прибор и нажимали кнопку ИЗМЕРЕНИЕ.

Как только измерение заканчивалось на экране появлялась сообщение: «Проведено 1 из 2 измерений. Если Вы готовы продолжить нажмите ОК». Ставили следующий стакан на прибор и нажимали ОК. После измерения второго стакана, на экране отображался результат измерений. Результаты анализа представлены в таблице 1.

Так из представленных в таблице 1 позиций видно, что проведенные анализы стандартных образцов треонина на инфракрасных анализаторах Bruker МРА или Bruker Tango-R соответствует норме содержания треонина в кормовом треонине от 97,7 до 99,8, что в свою очередь является допустимым значением количества треонина в кормовом треонине.

Таким образом, заявленный способ обеспечивает возможность быстрого и точного количественного определения треонина в кормовом треонине без использования химических реактивов и без подготовки проб.

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано в сельскохозяйственном производстве, в частности в комбикормовой промышленности. Способ количественного определения треонина на инфракрасных анализаторах Bruker МРА или Bruker Tango-R в кормовом треонине включает определение аминокислоты на анализаторе. Перед началом работы на инфракрасных анализаторах Bruker МРА или Bruker Tango-R проводят измерение фона в течение 60 с, затем на дисплее выбирают аминокислоту треонин, после чего образец с кормовым треонином помещают на дно двух стаканов, одинаковой емкостью, при этом слой образца закрывает полностью дно каждого стакана без возможности наличия пузырьков воздуха и прозрачности, затем первый стакан помещают в анализатор и начинают измерение, после появления на экране анализатора сообщения: «Проведено 1 из 2 измерений. Если Вы готовы продолжить нажмите ОК» в анализатор помещают второй стакан и снова запускают анализатор, после второго измерения на экране отобразится результат измерений треонина в кормовом треонине. Техническим результатом является возможность быстрого и точного количественного определения треонина в кормовом треонине без использования химических реактивов и без подготовки проб. 1 табл.

Способ количественного определения треонина на инфракрасных анализаторах Bruker МРА или Bruker Tango-R в кормовом треонине, включающий определение аминокислоты на анализаторе, отличающийся тем, что перед началом работы на инфракрасных анализаторах Bruker МРА или Bruker Tango-R проводят измерение фона в течение 60 с, затем на дисплее выбирают аминокислоту треонин, после чего образец с кормовым треонином помещают на дно двух стаканов, одинаковой емкостью, при этом слой образца закрывает полностью дно каждого стакана без возможности наличия пузырьков воздуха и прозрачности, затем первый стакан помещают в анализатор и начинают измерение, после появления на экране анализатора сообщения: «Проведено 1 из 2 измерений. Если Вы готовы продолжить нажмите ОК» в анализатор помещают второй стакан и снова запускают анализатор, после второго измерения на экране отобразится результат измерений треонина в кормовом треонине.