Защитная среда для криоконсервации спермы осетровых рыб Российский патент 2024 года по МПК A01N1/02 

Известно изобретение, относится к искусственному воспроизводству рыб, а именно к средствам для криокосервирования спермы рыб. Сущность: средство содержит трис-оксиметил-аминометан, 1,3-бутиленгликоль, яичный желток, винную кислоту, бидистиллированную воду, (патент RU 2010513 С1, опубликован 06.02.1992).

Известно изобретение, относится к рыбной промышленности и может использоваться при искусственном воспроизводстве осетровых рыб, а также для создания низкотемпературных генетических банков с целью сохранения биоразнообразия рыб. Защитная среда для криоконсервации спермы осетровых рыб содержит сахарозу, хлорид калия и криопротекторы метанол и формамид. Компоненты защитной среды берут в следующем соотношении, мас. %: сахароза 0,1; хлорид калия 0,08; метанол 8; формамид 0,5-1; дистиллированная вода - остальное. Изобретение позволяет повысить сохранность оплодотворяющей способности спермы при криоконсервации за счет более эффективного синергетического состава защитной среды (патент RU 2683682 С1, опубликован 01.04.2019).

За прототип выбрано изобретение относится к рыбной промышленности и может быть использовано в искусственном разведении осетровых рыб. Способ включает разбавление спермы перед замораживанием защитным раствором, содержащим сахарозу, хлорид калия и метанол, и последующее замораживание в парах жидкого азота. В защитный раствор вводят в качестве дополнительного криопротектора глицерин, замораживание разбавленной спермы осуществляют в три этапа. Компоненты защитного раствора берут в следующем соотношении, мас. %: сахароза 0,05-0,5; хлорид калия 0,01-0,15; метанол 6-12; глицерин 0,05-5; дистиллированная вода - остальное. Обеспечивается сохранность оплодотворяющей способности спермы при криоконсервации за счет использования более эффективного состава защитного раствора и более щадящего режима замораживания (патент RU 2317703 С1, опубликован 27.02.2008).

К недостаткам известных криозащитных сред следует отнести то, что они не образует стабильную суспензию, хуже взаимодействует с мембраной сперматозоида.

Целью изобретения является повышение эффективности криконсервации спермы осетровых видов рыб (русский осетр).

Задача - сохранение криоконсервированной спермы при искусственном воспроизводстве, на рыбоводных предприятиях, получение генетически разнородного потомства, сокращение площади и затрат на содержание самцов, тем самым позволив увеличить продукционное стадо самок.

Технический результат - сохранность, активность разбавленной спермы и повышение времени жизни дефростированных (размороженных) клеток при применении криопротектора с сухим соевым лецитином в криозащитном растворе для сперматозоидов осетровых рыб.

Технический результат достигается защитной средой для криоконсервации спермы осетровых рыб, состоящая из сахарозы, хлорида калия, метанола, глицерина, дистиллированной воды, отличается тем, что дополнительно содержит соевый лецитин, при следующем соотношении, мас. %:

сахароза 0,05 хлорид калия 0,15 метанол 6-12 глицерин 0,05-5 соевый лецитин 1 дистиллированная вода остальное

Криозащитные свойства криопротекторов заключаются в понижении температуры стеклования замороженных половых клеток ниже точки плавления, они предотвращают эффективное замерзание, и клетка сохраняет гибкость в стеклообразной фазе, ведя себя как аморфное твердое тело, которое затвердевает без образования кристаллов. У клеток повреждение в основном вызвано не кристаллами льда, а изменениями осмотического давления и ионной силы.

Пример конкретного выполнения.

Для приготовления защитной среды для криоконсервации спермы осетровых рыб компоненты защитного раствора берут в следующем соотношении, мас. %, использовалось сахароза - 0,05, хлорид калия - 0,15, метанол - 6-12, глицерин - 0,05-5, соевый лецитин-1, дистиллированная вода-остальное.

Лецитин - поверхностно-активный агент. Он хорошо работает на поверхности раздела фаз различных субстанций. В присутствии двух несмешиваемых жидких фаз лецитин понижает поверхностное натяжение и действует как эмульгатор. При использовании между твердыми фазами вещество работает как смазочный агент и агент освобождения (неприлипания к формам). В водном растворе фосфолипиды лецитина могут образовывать либо липосомы, бислойные мембраны, мицеллы, либо пластинчатые структуры, в зависимости от гидратации и температуры.

По гипотезе исследования растительный лецитин может использоваться как альтернатива птичьему яичному желтку. Также обеспечивает ее санитарно-эпидемиологическую безопасность, так как не содержит компонентов животного происхождения.

Различные концентрации соевого лецитина были испытаны только для криоконсервации спермы карпа. Для спермы стерляди вещество используется впервые

Экспериментальные работы проводились в условиях Центра «Разведения ценных пород осетровых» ФГБОУ ВО Волгоградского ГАУ. В опыте участвовали половые клетки от 6 самцов русского осетра.

Сперма была получена за 1 сутки до получения икры. Криосреды для проведения исследования были приготовлены за 1 сутки.

Замораживание проводили по программе, разработанной для замораживания спермы русского осетра: выдерживание образцов спермы русского осетра в жидком азоте проводили в течение 12 часов.

При использовании криозащитной среды, содержащей соевый лецитин, было зафиксировано, что активность разбавленной спермы увеличилась на 13,55, а дефростированной на 10,6%, при этом время жизни сперматозоидов увеличилось на 2,79 (разбавленая) и 2,05% (дефростированная) соответственно.

Изобретение относится к искусственному воспроизводству осетровых рыб. Защитная среда для криоконсервации спермы осетровых рыб составлена из сахарозы, хлорида калия, метанола, глицерина, лецитина и дистиллированной воды при следующем соотношении компонентов, мас.%: сахароза 0,05, хлорид калия 0,15, метанол 6-12, глицерин 0,05-5, соевый лецитин 1,0, дистиллированная вода – остальное. Предлагаемая защитная среда для криоконсервации спермы осетровых рыб обеспечивает сохранность, активность разбавленной спермы и повышение времени жизни дефростированных клеток. 1 пр.

Защитная среда для криоконсервации спермы осетровых рыб, состоящая из сахарозы, хлорида калия, метанола, глицерина, дистиллированной воды, отличающаяся тем, что дополнительно содержит соевый лецитин при следующем соотношении компонентов, мас.%:

сахароза 0,05 хлорид калия 0,15 метанол 6-12 глицерин 0,05-5 соевый лецитин 1 дистиллированная вода остальное