СРЕДСТВО ДЛЯ СНИЖЕНИЯ ВНУТРИГЛАЗНОГО ДАВЛЕНИЯ И СПОСОБ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 2024 года по МПК A61K9/10 A61K31/40 A61K38/44 A61P27/06 

Область техники, к которой относится изобретение

Группа изобретений относится к медицине, в частности к офтальмологии и фармации, и предназначена для получения средства для снижения внутриглазного давления (ВГД) с комплексным антиоксидантным и противоишемическим действием, которое может найти применение при лечении глаукомы, а также вторичной офтальмогипертензии, которая может быть вызвана воспалительными процессами различной этиологии, в том числе травматическими, инфекционными, и наблюдаться при сосудистых и наследственных патологиях

Уровень техники

Повышение ВГД является наиболее распространенным патогенетическим фактором развития глаукомы, а также может возникать как вторичное явление при различной глазной патологии и травмах глаза. Наибольшая необходимость в гипотензивных препаратах имеется для лечения глаукомы. Глаукома – одно из наиболее тяжелых и широко распространенных в мире глазных заболеваний, приводящее к необратимому снижению зрения и слепоте. Согласно данным ВОЗ более 14% людей во всем мире, страдающих слепотой, утратили зрение вследствие глаукомы. Это вторая ведущая и наиболее распространенная причина необратимой слепоты как во всем мире, так и в России [Мовсисян А.Б., Куроедов А.В., Архаров М.А., Прохоренко В.В., Чепурнов И.А. Эпидемиологический анализ заболеваемости и распространенности первичной открытоугольной глаукомы в Российской Федерации. Клиническаяофтальмология. 2022, 22(1), 3–10; European Glaucoma Society Terminology and Guidelines for Glaucoma, 4th Edition - Chapter 2: Classification and terminology Supported by the EGS Foundation: Part 1: Foreword; Introduction; Glossary; Chapter 2 Classification and Terminology. Br J Ophthalmol. 2017, 101(5), 73–127]). Глаукома является полиэтиологичным заболеванием с многообразными механизмами развития и согласно современным представлениям определяется как хроническая прогрессирующая оптическая нейропатия с морфологическими изменениями в головке зрительного нерва и слое нервных волокон сетчатки, связанными с гибелью ганглиозных клеток сетчатки и уменьшением поля зрения. Повышение ВГД, которое происходит вследствие нарушения баланса между образованием и оттоком внутриглазной жидкости, является наиболее распространенным фактором в патогенезе глаукомы, и большинство пациентов с глаукомой должны постоянно получать гипотензивные препараты. Арсенал этих средств достаточно велик, но наличие индивидуальных различий развития патологии и чувствительности к гипотензивным препаратам, а также существование привыкания к определённому препарату и вследствие этого снижения его эффективности требует разработки новых гипотензивных средств.

В настоящее время в качестве гипотензивных средств в основном применяют аналоги простагландинов, бета-блокаторы, агонисты альфа-адренергических рецепторов, ингибиторы карбоангидразы, ингибиторы Rho-киназы.

Ингибиторы ангиотензин превращающего фермента (АПФ) широко применяют при лечении сердечно-сосудистой патологии. В тканях глаза функционирует локальная ренин-ангиотензиновая система (РАС). Повышение активности АПФ приводит к образованию сильного вазоконстриктора ангиотензина II, разрушению вазодилятатора брадикинина, увеличению образования вазоконстриктора эндотелина, что вызывает ишемию тканей глаза. Помимо этого, ангиотензин II способствует увеличению секреции водянистой влаги и повышению ВГД [Cullinane A.B., Leung P.S., Ortego J., Coca-Prados M., Harvey B.J. Renin-angiotensin system expression and secretory function in cultured human ciliary body non-pigmented epithelium. Br J Ophthalmol. 2002, 86(6), 676–83; Holappa M, Vapaatalo H, Vaajanen A. Local ocular renin-angiotensin-aldosterone system: any connection with intraocular pressure? A comprehensive review. Ann Med. 2020, 52(5), 191–206]. Установлено,что использование ингибиторов АПФ в виде инстилляций снижает ВГД [Shah G.B., Sharma S., Mehta A.A., Goyal R.K. Oculohypotensive effect of angiotensin-converting enzyme inhibitors in acute and chronic models of glaucoma. J Cardiovasc Pharmacol. 2000, 36(2), 169–75; Чеснокова Н.Б., Кост О.А., Никольская И.И., Безнос О.В., Давыдова Н.Г., Столярова Е.П., Биневский П.В., Павленко Т.А. Влияние местного применения ингибиторов ангиотензин-превращающего фермента на внутриглазное давление, гидродинамику глаза и активность ангиотензин-превращающего фермента в слезе и водянистой влаге (экспериментальное исследование). РОЖ. 2009, 2(1), 42–8.].

Однако не более 5% от общей дозы препарата, вводимого в виде глазных капель, проникает во внутренние структуры глаза вследствие короткого времени удержания в слезной пленке, смывания слезой, недостаточного контакта с эпителием роговицы, быстрой элиминацией и трудностями при преодолении тканевых барьеров.

Перспективным подходом к решению проблемы проникновения лекарственного препарата внутрь глаза является использование наночастиц в качестве систем доставки лекарств, так как они способны значительно увеличивать биодоступность лекарственного препарата и повышать его концентрацию в тканях без повышения исходной концентрации [Araújo J., Gonzalez E., Egea M.A., Garcia M.L., Souto E.B. Nanomedicines for ocular NSAIDs: safety on drug delivery. Nanomedicine. 2009, 5(4), 394–401.; Sahoo S.K., Dilnawaz F., Krishnakumar S. Nanotechnology in ocular drug delivery. Drug Discov Today. 2008, 13(3–4), 144–151.; Vaneev A., Tikhomirova V., Chesnokova N., Popova E., Beznos O., Kost O., Klyachko N. Nanotechnology for topical drug delivery to the anterior segment of the eye. Int J Mol Sci. 2021, 22(22).]. При этом наночастицы должны быть биосовместимы, хорошо выводиться из организма, не оказывать токсического действия. Этими свойствами обладают кальций-фосфатные частицы (КФЧ). Методика получения КФЧ была впервые упомянута и запатентована в 2002 году [BellS., HeQ., Могсо Т. Therapeutic calcium phosphate particles and methods of manufacture and use. USPatent №6355271 B1, prior.12.03.2002]. Кальций-фосфатные наночастицы хорошо выводятся из организма и обладают хорошей биосовместимостью ввиду схожести по составу с гидроксиапатитом Ca₁₀(PO₄)₆(OH)2, который является основным компонентом костей и зубов человека [Chu T.C., He Q., Potter D.E. Biodegradable calcium phosphate nanoparticles as a new vehicle for delivery of a potential ocular hypotensive agent. J. Of Ocular Pharm. And Therap. 2002, 18(6), 507–14.].

Ранее нами были разработаны средство и способ снижения внутриглазного давления, основанные на введении в конъюнктивальную полость препарата из группы ингибиторов АПФ в составе кальций-фосфатных биодеградируемых наночастиц с радиусом 30–350 нм и в концентрации ингибитора 0,1% - 3%. Выбор размера наночастиц и соответствующей концентрации указанных средств позволяет при введении их в конъюнктивальную полость обеспечить усиление и пролонгацию эффекта снижения внутриглазного давления с уменьшением риска местных и общих побочных реакций, в том числе при использовании пролекарственных форм указанных ингибиторов [патент RU2472471 от 20.01.2013.].

Далее в качестве покрывающего агента для КФЧ нами был использован положительно заряженный биосовместимый и биоразлагаемый биополимер – хитозан. Продукты деградации хитозана, такие как глюкозамин или N-aцетилглюкозамин, усваиваются в организме [“ХИТОЗАН”. Под ред. К.Г. Скрябина, С.Н. Михайлова, В.П. Варламова. М.: Центр “Биоинженерия” РАН, 2013. 593 C]. Хитозан обладает мукоадгезивностью и способностью увеличивать проникновение больших молекул через слизистые поверхности [Menchicchi B., Fuenzalida J.P., Bobbili K.B., Hensel A., Swamy M.J., Goycoolea F.M. Structure of chitosan determines its interactions with mucin. Biomacromolecules. 2014, 15(10), 3550–8.], а наноразмерные частицы на основе хитозана способны преодолевать физиологические барьеры, в том числе барьер роговицы [daSilva S.B., Ferreira D., Pintado M., Sarmento B. Chitosan-based nanoparticles for rosmarinic acid ocular delivery - In vitro tests. Int J Biol Macromol. 2016, 84, 112–20.]. Нами были получены КФЧ с хитозановым покрытием, содержащие препарат для снижения ВГД - β-блокатор тимолол и КФЧ с хитозановым покрытием, содержащие ингибитор АПФ лизиноприл [патент RU 2657780 от 15.06.2018]. Данные средства для лечения глазных заболеваний и способы их применения являются ближайшими аналогами к заявленным изобретениям.

В то же время известно, что окислительный стресс играет важную роль в нейродегенеративных процессах, в том числе при глаукоме, вызывая повреждение трабекулярной сети, ганглиозных клеток сетчатки и головки зрительного нерва [Hurley D.J., Normile C., Irnaten M., O’Brien C. The intertwined roles of oxidative stress and endoplasmic reticulum stressin glaucoma. Antioxidants 2022, 11(5), 886.]. В условиях окислительного стресса клетки продуцируют в очень больших количествах супероксид-анион – молекулярный кислород с неспаренным электроном на внешнем уровне. Супероксид-анион может реагировать с молекулами воды с образованием очень агрессивных гидроксильных радикалов, которые легко реагируют с органическими молекулами с образованием органических свободных радикалов. Образующиеся в большом количестве свободные радикалы разрушают компоненты клеток, приводя к нарушению микроциркуляции в тканях, их ишемизации и гипоксии [Yadav C.S.U., Kalariya M.N., RamanaV.K. Emerging role of antioxidants in the protection of uveitis complications. Curr Med Chem. 2011, 18(6), 931–42]. Супероксид-анион также реагирует с оксидом азота с образованием высокотоксичного пероксинитрита. Снижение содержания оксида азота приводит к нарушению оттока внутриглазной жидкости и к глазной гипертензии [Reina-Torres E., de Ieso M.L., Pasquale L.R., Madekurozwa M., van Batenburg-Sherwood J., Overby D.R., Stamer W.D. The vital role for nitric oxide in intraocular pressure homeostasis. Prog Retin Eye Res. 2021, 83]. В организме контроль концентрации супероксид-аниона, играющего важную роль в запуске окислительного стресса, в основном осуществляет антиоксидантный фермент СОД (супероксидисмутаза), который катализирует реакцию дисмутациисупероксидных кислородных радикалов в кислород и перекись водорода.

Нами показано, что СОД1 может быть эффективно инкапсулирована в КФЧ. Внедрение СОД1 в КФЧ позволяет увеличить терапевтическую эффективность СОД за счет усиления способности этого фермента снижать выраженность окислительного стресса [Чеснокова Н.Б., Кост О.А., Никольская И.И., Безнос О.В., Галицкий В.А., Бейшенова Г.А., Клячко Н.Л., Кабанов А.В. «Способ лечения заболеваний глаз, сопровождающихся окислительным стрессом». // RU 2577236 С1,10.03.2016].

Технической проблемой, решаемой заявленным изобретением, является создание нового эффективного средства для снижения ВГД.

Раскрытие сущности изобретения

Техническим результатом предлагаемого изобретения является усиление эффекта снижения внутриглазного давления с уменьшением риска местных и общих побочных реакций.

Технический результат достигается за счет использования для инстилляций в конъюнктивальную полость средства, представляющего собой суспензию покрытых хитозаном кальций-фосфатных наночастиц диаметром 120-150 нм, содержащую комбинацию супероксиддисмутазы 1 с ферментативной активностью 10-30 кЕд/мл и ингибитора ангиотензин-превращающего фермента с концентрацией 1-5 мМ.

Получение средства включает следующие этапы:

- приготовление исходных растворов солей хлорида кальция (12-50 мМ), гидрофосфата калия (12-50 мМ) и цитрата натрия (15,6-46,8 мМ), в том числе содержащих ингибитор АПФ и СОД1.

- фильтрование всех растворов через фильтры с размером пор не более 0,45 мкм.

- смешивание растворов при объемных соотношениях (5:5:1) с возможным отклонением от указанных значений не более чем на 15%, и при фиксированном значении рН среды от 6,8 до 8,8, при температуре от 4 до 70°С при одновременной ультразвуковой обработке в течение времени, необходимом для получения устойчивой суспензии частиц.

- добавление к полученной суспензии КФЧ растворов хитозана с концентрацией 0,5-2 мг/мл и триполифосфата натрия (1 мг/мл), в объемным соотношениях 1: 0,1÷0,5 (где на одну часть суспензии КФЧ берут от 0,1 до 0,5 частей раствора триполифосфата натрия), при интенсивном перемешивании с получением готового средства, содержащего покрытые хитозаном кальций-фосфатные наночастицы диаметром 120-150 нм, с включенным в них комплексом из супероксиддисмутазы 1 и ингибитора ангиотензин-превращающего фермента.

В процессе приготовления средства осуществляют контроль размера и дзета-потенциала полученных частиц после фильтрации через фильтры 0,45 мкм. В качестве фильтров могут быть использованы фильтры “Millipore”, Германия.

Средство может дополнительно содержать целевые добавки, в качестве которых может быть использован буферный агент, и/или 0,15 М хлористый натрий, и/или консерванты.

Технический результат также достигается способом снижения ВГД, согласно которому в конъюнктивальную полость инстиллируют указанное средство в терапевтически эффективном количестве активности. Частоту и длительность использования средства выбирают в зависимости от характера и степени выраженности заболевания.

Усиление эффекта снижения внутриглазного давления достигается за счет использования средства, содержащего определенные активные компоненты в определенном количественном соотношении. По результатам проведенных исследований обнаружено, что полученное средство способно существенно более эффективно предотвращать снижение зрения, чем отдельные препараты. Повышение ВГД при глаукоме или других глазных патологиях всегда сопровождается ишемией и окислительным стрессом, которые, в итоге, приводят к апоптозу ганглиозных клеток сетчатки и повреждению зрительного нерва. Одновременное включение в наночастицы ингибитора АПФ и СОД1 в определенном количественном соотношении позволяет усилить гипотензивное действие отдельно применяемых препаратов, а также дополнительно совместить гипотензивное действие с антиоксидантным, нейропротекторным и противоишемическим. Усиление эффекта снижения ВГД при одновременном включении СОД1 и ингибитора АПФ в КФЧ, покрытые хитозаном, свидетельствует о том, что присутствующие в составе активные компоненты воздействуют на разные факторы, влияющие на ВГД, и присутствие одной лекарственной субстанции усиливает действие другой. При этом усиление эффекта снижения внутриглазного давления наблюдается при использовании активных компонентов в заявленных интервалах. При использовании активных компонентов, взятых в других количественных соотношениях - за пределами указанных интервалов, либо не приводит к значимому снижению ВГД (при снижении содержания указанных компонентов), либо не приводит к усилению наблюдаемого эффекта (при дальнейшем повышении содержания указанных компонентов).

Получение средства, демонстрирующего усиление эффекта снижения внутриглазного давления, с очевидностью позволяет снизить дозу и частоту применения препарата, что, в свою очередь, приведет к снижению местных и системных побочных эффектов и улучшит качество жизни больных глаукомой.

Полученное средство может быть использовано для лечения глаукомы и заболеваний глаз, сопровождающихся повышением ВГД.

Краткое описание чертежей

Перечень иллюстративного материала:

Фиг. 1. Влияние СОД1 (17 кЕд/мл) в виде простого раствора и в составе КФЧ, покрытых хитозаном, на ВГД у кроликов. Здесь и далее по оси ординат - разница между исходным ВГД и ВГД после однократного закапывания раствора, по оси абсцисс – время после закапывания в часах. * - U-критерий Манна-Уитни U_эмп≤U_0,05, различия достоверны.

Фиг. 2. Влияние ингибитора АПФ эналаприлата (2,2 мМ) в виде простого раствора и в составе КФЧ, покрытых хитозаном, на ВГД у кроликов. ** - U-критерий Манна-Уитни U_эмп≤U_0,01, различия достоверны.

Фиг. 3. Влияние СОД1 (17 кЕд/мл) в составе покрытых хитозаном КФЧ, эналаприлата (2,2 мМ ) в составе покрытых хитозаном КФЧ и КФЧ, содержащих одновременно СОД1 (17 кЕд/мл) и эналаприлат (2,2 мМ ) на ВГД у кроликов. ** - U-критерий Манна-Уитни U_эмп≤U_0,01, различия достоверны.

Осуществление изобретения

Для получения КФЧ и покрытия их хитозаном использована разработанная нами методика [Popova E.V., Tichomirova V.E., Beznos O.V., Chesnokova N.B., Grigoriev Y.V., Klyachko N.L., Kost O.A. Chitosan-covered calcium phosphate particles as a drug vehicle for delivery to the eye. Nanomedicine. 2022, 40, 102493]. Внедрение отдельно или совместно СОД1 (препарат Рексод-ОФ) и ингибитора АПФ эналаприлата (Sigma, США) в КФЧ проводили на стадии получения частиц. Необходимое количество СОД1 и эналаприлата растворяли в исходном растворе K₂HPO₄. Внедрение СОД1 и ингибитора АПФ в КФЧ проводили при варьировании температуры от 4 до 70°С, рН среды в интервале 6,8-8,8, а также концентрации цитрата натрия от 15,6-46,8 мМ. При покрытии КФЧ хитозаном варьировали рН в интервале 5,3-6,0.

КФЧ, содержащие СОД1 и эналаприлат, получали следующим способом.

Готовили растворы: 1) 12,5 мМ K₂HPO₄, содержащий СОД1 и эналаприлат; 2) 46,8 мМ цитрата натрия; 3) 12,5 мМ CaCl₂. Один объем раствора цитрата натрия добавляли к пяти объемам раствора K₂HPO₄ с СОД1 и эналаприлатом и доводили рН до 7,0. Затем одновременно с включением ультразвукового гомогенизатора (BandelinSonopuls, Германия) добавляли раствор CaCl₂ (5 объемов) и подвергали ультразвуковой обработке в течение 20 мин при мощности 200 Вт. Синтез проводили при охлаждении ледяной водой. После этого суспензию фильтровали через фильтр с размерами пор 0,45 мкм и хранили при 4°С.

Для покрытия полученных частиц хитозаном 1 объем раствора 5 кДа хитозана с концентрацией 1 мг/мл, рН 3,9, добавляли по каплям к 2 объемам суспензии КФЧ с рН 6,5 при постоянном интенсивном перемешивании на магнитной мешалке (400 об/мин). Далее к реакционной смеси по каплям добавляли 0,5 объема водного раствора 1 мг/мл триполифосфата натрия. Систему оставляли при постоянном перемешивании на ночь при комнатной температуре. Полученную суспензию частиц, покрытых хитозаном, фильтровали на фильтрах 0,45 мкм и хранили при 4°С.

Конечная концентрация СОД1 в суспензии, содержащей покрытые хитозаном КФЧ, составляла 10-30 кЕд/мл, эналаприлата 1-5 мМ. Активность СОД1 определяли по степени подавления реакции автоокисления кверцетина [Костюк В.А., Потапович А.И., Ковалева Ж.В. Простой и чувствительный метод определения активности супероксиддисмутазы, основанный на реакции окисления кверцетина. Вопр. мед. химии. 1990; 36(2): 88–91]. Для контроля полученных наносистем определяли размеры частиц методом динамического светорассеяния и значения дзета-потенциала.

Нами была проведена сравнительная оценка влияния СОД1 в растворе, СОД1 в составе суспензии покрытых хитозаном КФЧ (фиг.1), ингибитора АПФ в растворе, ингибитора АПФ в составе суспензии покрытых хитозаном КФЧ (фиг.2), а также СОД1 и ингибитора АПФ, одновременно включенных в состав покрытых хитозаном КФЧ (фиг.3) на ВГД у нормотензивных кроликов. Каждую серию экспериментов воспроизводили дважды после двухнедельного перерыва. ВГД измеряли по стандартной методике с использованием автоматического ветеринарного монитора Tonovet. Статистическая достоверность результатов представлена как области значений U-критерия Манна-Уитни * - U_эмп≤ U_0,05 и ** - U_эмп≤ U_0,01 (различия достоверны).

Результаты проведенных исследований представлены на фиг.1–3.

Приведенные данные свидетельствуют, что комбинация СОД1 и ингибитора АПФ, внедренных в КФЧ, покрытые хитозаном, приводят к сверхсуммарному снижению ВГД по сравнению с этими же субстанциями, но внедренными в наночастицы по отдельности. Снижение ВГД при использовании суспензии частиц, содержащих одновременно СОД1 и ингибитор АПФ через один час после инстилляции было выше, чем сумма величин снижения ВГД под действием суспензий частиц, содержащих отдельно СОД1 и отдельно ингибитор АПФ. Усиление эффекта снижения ВГД при одновременном включении СОД1 и ингибитор АПФ в частицы свидетельствует о том, что СОД1 и ингибитор АПФ воздействуют на разные факторы, влияющие на ВГД, и присутствие одной лекарственной субстанции усиливает действие другой.

Снижение ВГД осуществляют следующим образом.

В конъюнктивальную полость однократно инстиллируют 50 мкл суспензии покрытых хитозаном кальций-фосфатных наночастиц диаметром 120–150 нм, содержащей комбинацию супероксиддисмутазы 1 с ферментативной активностью 10-30 кЕд/мл и ингибитора ангиотензин-превращающего фермента с концентрацией 1-5 мМ.

Частоту и длительность использования выбирают в зависимости от характера и степени выраженности заболевания.

Пример №1. Кролик №3. Инстилляция суспензии покрытых хитозаном КФЧ, содержащей СОД1 и ингибитор АПФ эналаприлат. Активность СОД1 в суспензии 10 кЕд/мл, концентрация эналаприлата 2,2 мМ.

До закапывания суспензии кролику в течение двух недель ежедневно проводили измерение ВГД для того, чтобы кролик привык к процедуре и для определения фоновых значений ВГД. ВГД измеряли с помощью автоматического ветеринарного монитора Tonovet. Наши предварительные исследования показали, что парный глаз не может быть контрольным, потому что при закапывании исследуемых препаратов давление в контрлатеральном глазу также несколько снижается. Поэтому во всех экспериментах после введения в глаз препарата сравнивали значения ВГД с его исходным значением. Закапывали суспензию частиц с помощью дозатора в количестве 50 мкл. После измерения исходного ВГД в оба глаза, начиная с правого, однократно закапывалисуспензию частиц. ВГД на обоих глазах измеряли через 1, 2 и 3 часа после закапывания. Оценивали разницу между исходными значениями ВГД и в различные временные промежутки после закапывания препарата (Δ ВГД).

  до 1 ч 2 ч 3 ч ВГД OD 15 12 13 13 ΔВГД OD 0 -3 -2 -2 ВГД OS 14 12 12 13 ΔВГД OS 0 -2 -2 -1

Как видно из приведенных данных, под влиянием инстилляции суспензии покрытых хитозаном КФЧ, содержащей СОД1 и ингибитор АПФ эналаприлат с общей активностью СОД1 10 кЕд/мл и концентрацией эналаприлата 2,2 мМ у кролика №3 ВГД резко снижалось на 2,5 мм рт.ст. в течение первого часа после инстилляции, держалось практически на том же уровне через два часа, а через три часа начинало повышаться.

Пример №2. Кролик №1. Инстилляция суспензии покрытых хитозаном КФЧ, содержащей СОД1 и ингибитор АПФ эналаприлат. Активность СОД1 в суспензии 17 кЕд/мл, концентрация эналаприлата 2,2 мМ.

Метод исследования такой же, как в примере №1.

  до 1 ч 2 ч 3 ч ВГД OD 17 13 14 14 ΔВГД OD 0 -4 -3 -3 ВГД OS 18 15 15 16 ΔВГД OS 0 -3 -3 -2

У кролика №1 через час после инстилляции наблюдалось резкое снижение ВГД на 3,5 мм рт.ст., наблюдалось устойчивое снижение ВГД во все время эксперимента, даже через три часа после инстилляции ВГД оставалось сниженным на 2,5 мм рт.ст.

Пример №3. Кролик №6. Инстилляция суспензии покрытых хитозаном КФЧ, содержащей СОД1 и ингибитор АПФ эналаприлат. Активность СОД1 в суспензии 30 кЕд/мл, концентрация эналаприлата 2,2 мМ.

Метод исследования такой же, как в примере №1.

  до 1 ч 2 ч 3 ч ВГД OD 20 16 16 17 ΔВГД OD 0 -4 -4 -3 ВГД OS 19 16 16 17 ΔВГД OS 0 -3 -3 -2

У кролика №6 через час после инстилляции наблюдалось резкое снижение ВГД на 3,5 мм рт.ст., наблюдалось устойчивое снижение ВГД во все время эксперимента, даже через три часа после инстилляции ВГД оставалось сниженным на 2,5 мм рт.ст.

Пример №4. Кролик №9. Инстилляция суспензии покрытых хитозаном КФЧ, содержащей СОД1 и ингибитор АПФ эналаприлат. Активность СОД1 в суспензии 17 кЕд/мл, концентрация эналаприлата 1 мМ.

  до 1 ч 2 ч 3 ч ВГД OD 15 13 13 13 ΔВГД OD 0 -2 -2 -2 ВГД OS 14 11 12 13 ΔВГД OS 0 -3 -2 -1

Пример №5. Кролик №12. Инстилляция суспензии покрытых хитозаном КФЧ, содержащей СОД1 и ингибитор АПФ эналаприлат. Активность СОД1 в суспензии 17 кЕд/мл, концентрация эналаприлата 5 мМ.

  до 1 ч 2 ч 3 ч ВГД OD 18 14 14 15 ΔВГД OD 0 -4 -4 -3 ВГД OS 19 15 16 16 ΔВГД OS 0 -4 -3 -3

Дальнейшее повышение содержания какого-либо препарата в частицах уже не приводило к значительному усилению эффекта, в то время как снижение содержания СОД1 или эналаприлата ниже указанных пределов снижало величину эффекта на ВГД.

Таким образом, приведенные примеры свидетельствуют, что внедрение СОД1 и ингибитора АПФ в наночастицы КФЧ, покрытые хитозаном, усиливает действие обеих лекарственных субстанций на ВГД. Одновременное внедрение СОД1 и ингибитора АПФ в частицы приводит к значительному повышению их физиологического действия, при этом эффект, наблюдаемый при действии препарата, полученного при совместном введении в частицы СОД1 и эналаприлата, превышает сумму эффектов, наблюдаемых в случаях, когда в частицы внедряются отдельные субстанции. Это с очевидностью позволяет снизить дозу и частоту применения препарата, что, в свою очередь, приведет к снижению местных и системных побочных эффектов и улучшит качество жизни больных глаукомой.

Группа изобретений относится к медицине. Раскрыто средство для снижения внутриглазного давления, представляющее собой суспензию покрытых хитозаном кальций-фосфатных наночастиц диаметром 120-150 нм, содержащую комбинацию супероксиддисмутазы 1 с ферментативной активностью 10-30 кЕд/мл и эналаприлата в качестве ингибитора ангиотензин-превращающего фермента с концентрацией 1-5 мМ. Также раскрыт способ лечения глазных заболеваний этим средством. Группа изобретений обеспечивает усиление эффекта снижения внутриглазного давления с уменьшением риска местных и общих побочных реакций. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 3 ил., 5 табл., 5 пр.

1. Средство для снижения внутриглазного давления, представляющее собой суспензию покрытых хитозаном кальций-фосфатных наночастиц диаметром 120-150 нм, содержащую комбинацию супероксиддисмутазы 1 с ферментативной активностью 10-30 кЕд/мл и эналаприлата в качестве ингибитора ангиотензин-превращающего фермента с концентрацией 1-5 мМ.

2. Средство по п.1, отличающееся тем, что используют низкомолекулярный хитозан со средней молекулярной массой 5 кДа.

3. Средство по п.1, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит целевые добавки.

4. Средство по п.3, отличающееся тем, что в качестве целевых добавок используют буферный агент, и/или 0,15 М хлористый натрий, и/или консерванты.

5. Способ лечения глазных заболеваний, сопровождающихся повышением внутриглазного давления, отличающийся тем, что в конъюнктивальную полость инстиллируют средство по любому из пп.1-4 в терапевтически эффективном количестве.