СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ПОСТТРАВМАТИЧЕСКОГО СТРЕССОВОГО РАССТРОЙСТВА У ОСОБЕЙ РЫБ ДАНИО-РЕРИО Российский патент 2024 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к психологии поведения животных, психонейроэндокринологии, экспериментальной медицине, нейробиологии и касается моделирования симптомов посттравматических стрессорных расстройств в экспериментах на рыбах с использованием модифицированной модели предаторного стресса.

Стресс - это обычная психофизиологическая реакция организма на нежелательные, сложные и трудные обстоятельства или стрессоры. Интенсивность эффектов стресса варьируются в зависимости от его продолжительности, но, тем не менее, даже относительно кратковременный стресс может вызывать долговременные структурные и психологические дефекты мозга.

Одним из последствий чрезмерного эффекта стрессора может стать развитие посттравматического стрессового расстройства. Посттравматическое стрессовое расстройство (ПТСР) - это тяжелое нейропсихическое расстройство, связанное со стрессом, вызванное воздействием сильного травматического события. Расстройство встречается почти у 10% населения мира. Широкий спектр генетических, когнитивных и социальных факторов, а также нарушений нейроэндокринной и нейротрансмиттерной систем способствует патогенезу ПТСР, что приводит к аберрантной эмоциональной регуляции, нарушению процессов контекстуальной обработки.

В настоящий момент принято говорить об определенной предрасположенности к развитию данной психопатологии, связанной с индивидуальной изменчивостью каждого человека, а также генетической предрасположенности, составляющей от 30 до 40% уязвимости. Другими словами, ПТСР-подобное состояние может присутствовать у всех людей, но полноценно развиться в расстройство способно только у определенной группы людей. Распространенность посттравматического стрессового расстройства в течение жизни колеблется от 1,3 до 12,2%, а распространенность в течение 1 года от 0,2 до 3,8%.

Таким образом, посттравматическое стрессовое расстройство является крайне специфическим заболеванием, поражающим лишь определенный процент людей в общей популяции. Ввиду таких событий активно изучаются более эффективные лекарственные препараты, способные вылечить ПТСР. В качестве такого лекарственного препарата, к примеру, можно выделить пропранолол. Пропранолол - неселективный антагонист β-адренергических рецепторов, широко используемый при лечении гипертонии. Из-за возможных побочных эффектов он гораздо менее известен в качестве анксиолитика, чье действие опосредовано блокированием нейрохимических мишеней норадреналина. В то же время, благодаря отсутствию седативных и амнестических эффектов он имеет терапевтическую значимость при лечении тревожных расстройств, например ПТСР и фобий, которые могут проявляться у человека.

Учитывая специфичность данного расстройства, для проведения лабораторных и клинических испытаний препаратов, способных облегчить и ремиссировать симптомы ПСТР, некоторые ученые предложили изучать и моделировать это заболевание у животных с помощью индивидуального профилирования. Одним из первых исследований, успешно применяющих этот подход, является работа с использованием критериев отсеивания, где травмированная популяция опытных животных разделяется на отдельные, «крайние», подгруппы. Данное разделение животных позволило лучше спрогнозировать нарушения физиологических показателей у подопытных животных и добиться стабильных результатов в сериях экспериментов.

Так, на сегодняшний день существует множество методик индивидуального профилирования на грызунах. В каждой методике разделение животных строится вокруг оценки различных показателей организма, напрямую связанных с одним или несколькими критериями диагностики ПТСР по руководствам международной классификации болезней (МКБ) или номенклатуре психических расстройств (DSM). К таким показателям можно отнести: поведенческую активность в различных установках, показатели электрокардиограммы, акустическую реакцию испуга, показатели соматических реакций, уровни нейромедиаторов и гормонов в крови и многое другое [Cohen H. et al., 2003, Cohen H. et al., 2012, Albrecht A. et al., 2021, Ardi Z. et al., 2016, Ritov G. et al., 2016].

В качестве прототипа выбран способ моделирования посттравматического стрессового расстройства у лабораторных крыс, в процессе которого их подвергают предаторному стрессу экспозицией кошачьей мочой в количестве 100 мл в течение 10 мин ежедневно, в течение 10 суток, после чего в последующие 30 суток постстрессового периода опытных и контрольных животных содержат в обычных условиях, при этом проводят оценку поведенческих характеристик на каждые 3-и, 7-е, 10-е, 14-е и 30-е сутки после последнего воздействия предаторным стрессом [RU2746901C1, дата публикации: 22.04.2021 г.].

Общим недостатком вышеупомянутых методик и прототипа является отсутствие возможности анализа трехмерной модели поведения подопытных животных при моделировании у них ПТСР, что значительно огранивает количество возможных поведенческих показателей, влияющих на точность установки у них возникновения посттравматического стрессового расстройства. Это существенно замедляет развитие фармакологических препаратов, направленных на лечение и предотвращение такого заболевания, как ПТСР. Ввиду существующего недостатка известных технических решений требуется разработка способа моделирования ПТСР у новой, ранее неизвестной группы подопытных животных.

Техническая проблема, на решение которой направлено изобретение, заключается в необходимости расширения набора инструментов моделирования посттравматического стрессового расстройства у подопытных животных.

Технический результат, на достижение которого направлено изобретение, заключается в обеспечении возможности создания экспериментальной модели посттравматического стрессового расстройства у рыб Данио-рерио, релевантной состоянию посттравматического стрессового расстройства у человека.

Дополнительный технический результат, на достижение которого направлено изобретение, заключается в повышении эффективности этапа воздействия предаторным стрессом на особи рыб Данио-рерио.

Дополнительный технический результат, на достижение которого направлено изобретение, заключается в повышении выживаемости особей рыб Данио-рерио на этапе воздействия предаторным стрессом.

Дополнительный технический результат, на достижение которого направлено изобретение, заключается в сокращении временных интервалов выполнения способа моделирования посттравматического стрессового расстройства у особей рыб Данио-рерио.

Дополнительный технический результат, на достижение которого направлено изобретение, заключается в снижении риска искажения результатов регистрации поведенческих показателей подопытной группы особей рыб Данио-рерио при проведении теста новым аквариумом.

Дополнительный технический результат, на достижение которого направлено изобретение, заключается в снижении риска искажения результатов регистрации поведенческих показателей подопытной группы особей рыб Данио-рерио при проведении зеркального теста на агрессию.

Сущность изобретения заключается в следующем.

Способ моделирования посттравматического стрессового расстройства у особей рыб Данио-рерио характеризуется тем, что включает этапы, при выполнении которых:

- подопытную группу особей Данио-рерио на промежуток времени величиной от 0,5 до 5 часов помещают в экспозиционный резервуар для воздействия предаторным стрессом вместе с особью рыбы, являющейся источником предаторного стресса подопытной группы особей Данио-рерио.

- подопытную группу извлекают из экспозиционного резервуара и на промежуток времени, величиной от 7 до 30 дней помещают в резервуар с естественными условиями обитания;

- подопытную группу извлекают из резервуара с естественными условиями обитания и помещают в экспозиционный резервуар для проведения теста новым аквариумом, визуально разделенный по меньшей мере на две равные горизонтальные зоны;

- регистрируют такие поведенческие показатели подопытной группы как: частота, общая продолжительность и латентный период выхода в верхнюю часть экспозиционного резервуара, замирание и число беспорядочных движений;

- проводят сравнение поведенческих показателей подопытной группы с контрольной группой особей Данио-рерио;

- подопытную группу извлекают из экспозиционного резервуара для проведения теста новым аквариумом и помещают в резервуар с естественными условиями обитания на промежуток времени величиной от 1 до 3 дней;

- подопытную группу извлекают из резервуара с естественными условиями обитания и помещают в экспозиционный резервуар для проведения зеркального теста на агрессию, имеющий зеркальную стенку, при этом на расстоянии 0,5 см от зеркальной стенки визуально отделена вертикальная зона контакта особи подопытной группы с ее зеркальным отражением, а на расстоянии 3 см от зеркальной стенки визуально отделена вертикальная зона приближения особи подопытной группы к ее зеркальному отражению;

- регистрируют такие поведенческие показатели подопытной группы, как: частота, общая продолжительность и латентный период укусов, а также замирание и число беспорядочных движений;

- проводят сравнение поведенческих показателей подопытной группы с контрольной группой особей Данио-рерио;

- по результатам сравнений поведенческих показателей подопытной группы с контрольной группой особей Данио-рерио, выделяют особи рыб, у которых сформировалось посттравматическое стрессовое расстройство.

Данио-рерио представляет собой вид пресноводных лучепёрых рыб семейства карповых, которая отлично подходит в качестве модели для различных биологических и фармакологических экспериментов, в том числе фенотипического скрининга благодаря наличию у них всех основных биохимических путей, нейромедиаторов и гормонов, которые есть у человека и других млекопитающих.

Подопытную группу особей Данио-рерио помещают в экспозиционный резервуар для воздействия предаторным стрессом вместе с особью рыбы, являющейся источником предаторного стресса подопытной группы особей Данио-рерио для того, чтобы симулировать ситуацию, в которой жизни Данио-рерио угрожает их природный хищник, что в свою очередь вызывает приступ страха у подопытной группы. Воздействие предаторным стрессом может длиться от 0,5 до 5 часов. При этом, для повышения выживаемости особей подопытной группы время воздействия может составлять 2 часа.

Особь рыбы, являющаяся источником предаторного стресса, представляет собой рыбу, оказывающую психическое воздействие на особей Данио-рерио. В качестве вышеупомянутых особей рыб могут выступать: индийская листовая рыба, пятнистый змееголов, мистус полосатый, индийская рыба-нож или цихлазома чернополосая. Кроме того, для дополнительного повышения выживаемости особей рыб Данио-рерио на этапе воздействия предаторным стрессом хищная рыба может быть покормлена перед помещением в экспозиционный резервуар.

Уровень воды в экспозиционном резервуаре имеет важную роль при проведении разовой экспозиции хищной рыбой. Для дополнительного повышения эффективности этапа воздействия предаторным стрессом на особи рыб Данио-рерио могут использовать заполненный на 1/3 экспозиционный резервуар. Кроме того, для дополнительного повышения эффективности этапа воздействия предаторным стрессом на особи рыб Данио-рерио в экспозиционный резервуар могут добавлять тревожный феромон. В качестве тревожного феромона могут использовать любое вещество, являющееся сильным стрессором для особей рыб Данио-рерио. При этом, для дополнительного повышения эффективности этапа воздействия предаторным стрессом на особи рыб Данио-рерио тревожный феромон могут получать из подверженной холодной анестезии особи рыбы Данио-рерио, содержавшейся в естественных условиях обитания, для чего в эпидермисе рыбы могут выполнять разрезы, после чего в поврежденную область эпидермиса могут заливать дистиллированную воду и собирать её в отдельную емкость. Объем тревожного феромона при этом может составлять 10 мл.

Подопытную группу извлекают из экспозиционного резервуара и помещают в резервуар с естественными условиями обитания, который служит их зоной отдыха для того, чтобы обеспечить комфорт и безопасность от внешних угроз в период ожидания между процедурами тестирования. Время нахождения в данном резервуаре может варьироваться от 7 до 30 дней. При этом, для дополнительного сокращения временных интервалов выполнения способа моделирования посттравматического стрессового расстройства у особей рыб Данио-рерио время нахождения особей в данном резервуаре может составлять 10 дней.

Тест новым аквариумом представляет собой тест, в котором подопытную группу особей Данио-рерио помещают в новый, отличный от известных подопытной группе резервуар, визуально разделенный на две равные горизонтальные зоны. Для визуального разделения могут использовать нанесенную на стенку горизонтальную линию или иные средства, способствующие различимости упомянутых горизонтальных зон. При этом для исключения возможности отвлечения особей рыб и снижения риска искажения результатов регистрации поведенческих показателей подопытной группы особей рыб Данио-рерио при проведении теста новым аквариумом горизонтальная линия может быть выполнена короткими штрихами.

В процессе проведения теста новым аквариумом регистрируют такие поведенческие показатели как: частота, общая продолжительность и латентный период перехода из одной зоны экспозиционного резервуара в другую, замирание и число беспорядочных движений. После этого проводят сравнение поведенческих показателей подопытной группы с контрольной группой особей Данио-рерио, что позволяет включить подопытную особь в группу, в зависимости от степени её уязвимости.

Затем подопытную группу извлекают из экспозиционного резервуара для проведения теста новым аквариумом и помещают в резервуар с естественными условиями обитания для того, чтобы облегчить психофизиологическое состояние подопытных особей после предыдущего тестирования, а также исключить влияние предыдущего тестирования на последующие результаты. Время нахождения подопытных особей в резервуаре может варьироваться от 1 до 3 дней. При этом, для сокращения временных интервалов выполнения способа моделирования посттравматического стрессового расстройства у особей рыб Данио-рерио время нахождения подопытных особей в резервуаре может составлять 1 день.

Затем подопытные особи помещают в резервуар, одна из стенок которого заменена на зеркальную и проводят зеркальный тест на агрессию, что позволяет определить реакцию подопытных особей на своих сородичей. Для более точного определения результатов, на расстоянии 0,5 см от зеркальной стенки визуально отделена вертикальная зона контакта особи подопытной группы с ее зеркальным отражением, а на расстоянии 3 см от зеркальной стенки визуально отделена вертикальная зона приближения особи подопытной группы к ее зеркальному отражению. Для визуального разделения могут использовать нанесенную на стенку вертикальную линию или иные средства, способствующие различимости упомянутых вертикальных зон.

При этом для исключения возможности отвлечения рыбы и снижения риска искажения результатов регистрации поведенческих показателей подопытной группы особей рыб Данио-рерио при проведении зеркального теста на агрессию для визуального отделения вертикальных зон могут быть использованы вертикальные линии, которые могут быть нанесены на боковую поверхность резервуара короткими штрихами.

Изобретение может быть выполнено из известных материалов с помощью известных средств, что свидетельствует о его соответствии критерию патентоспособности «промышленная применимость».

Изобретение характеризуется ранее неизвестной из уровня техники совокупностью существенных признаков, отражающих способ моделирования посттравматического стрессового расстройства у особей рыб Данио-рерио.

Совокупность существенных признаков изобретения позволяет создать условия, при которых с большой долей вероятности у особей подопытной группы возможно развитие паттернов тревожности, а также выделить из нее подгруппы особей с устойчивым, уязвимым и промежуточным фенотипами в соответствии с критериями отсеивания и затем определить группу особей рыб с уязвимым фенотипом, со сформированным состоянием, подобным посттравматическому стрессовому расстройству.

Благодаря этому обеспечивается достижение технического результата, заключающегося в обеспечении возможности создания экспериментальной модели посттравматического стрессового расстройства у рыб Данио-рерио, релевантной состоянию посттравматического стрессового расстройства у человека, тем самым расширяется набор инструментов моделирования посттравматического стрессового расстройства моделирования посттравматического стрессового расстройства у подопытных животных.

Изобретение обладает ранее неизвестной из уровня техники совокупностью существенных признаков, что свидетельствует о его соответствии критерию патентоспособности «новизна».

Из уровня техники известны способы моделирования посттравматического стрессового расстройства у лабораторных крыс и иных подопытных животных. Однако из уровня техники не известен способ моделирования посттравматического стрессового расстройства у особей рыб Данио-рерио. Ввиду этого изобретение соответствует критерию патентоспособности «изобретательский уровень».

Изобретение поясняется следующими фигурами.

Фиг. 1 - Экспозиционный резервуар для воздействия предаторным стрессом, в котором помещены особи рыб Данио-рерио и источник предаторного стресса, представленный в виде Цихлазомы чернополосой.

Фиг. 2 - Экспозиционный резервуар, используемый для теста новым аквариумом.

Фиг. 3 - Экспозиционный резервуар, используемый для зеркального теста на агрессию.

Фиг. 4 - Схематическое представление разделения подопытных особей рыб Данио-рерио на подгруппы.

Фиг. 5 - Таблица пороговых поведенческих критериев особей рыб Данио-рерио.

Для иллюстрации возможности реализации и более полного понимания сути изобретения ниже представлен вариант его осуществления, который может быть любым образом изменен или дополнен, при этом настоящее изобретение ни в коем случае не ограничивается представленным вариантом.

Для осуществления способа моделирования посттравматического стрессового расстройства у рыб Данио-рерио используют несколько экспозиционных резервуаров: экспозиционный резервуар 10 для воздействия предаторным стрессом; экспозиционный резервуар 20 для проведения теста новым аквариумом, размеры которого составляют 20×15×5 см, при этом на середине внешней стенки которого нанесена горизонтальная линия 22.

Экспозиционный резервуар 30 для проведения зеркального теста на агрессию представляет собой емкость, размеры которой идентичны размерам экспозиционного резервуара для проведения теста новым аквариумом, боковая стенка выполнена в виде зеркала 32, а на смежной с ней внешней стенке на расстоянии 0,5 см от зеркала 32 нанесена вертикальная линия 34 «зоны контакта», а на расстоянии 2,5 см от линии 34 нанесена вертикальная линия 36 «зоны приближения».

Способ моделирования посттравматического стрессового расстройства у особей рыб Данио-рерио осуществляют следующим образом.

Для проведения стрессирования рыб Данио-рерио берут подопытную группу 40 особей Данио-рерио и помещают в экспозиционный резервуар 10. После этого в экспозиционный резервуар 10 помещают одну взрослую особь хищной рыбы 42, в качестве которой используют Цихлазому чернополосую. Таким образом подопытную группу 40, в течение 2 часов, подвергают предаторному стрессу разовой экспозицией хищной рыбой 42, тем самым вызывая у подопытной группы 40 сильный страх, избегание и тревогу. При этом, чтобы свести к минимуму смертность подопытной группы 40, хищную рыбу 42 обязательно кормят до контакта с подопытной группой 40.

Кроме того, для усиления стресса у подопытной группы 40 экспозиционный резервуар 10 опустошают на 2/3, а также добавляют 10 мл тревожного феромона, обычно применяемого в моделях острого и хронического стресса и являющегося сильным стрессором для особей рыб подопытной группы 40.

Данный тревожный феромон получают из подверженной холодной анестезии особи рыбы Данио-рерио, содержавшейся в естественных условиях. В эпидермисе рыбы делают 15 мелких разрезов, после чего в поврежденную область заливают 10 мл дистиллированной воды, и собирают её в отдельную емкость.

Экспозиционный резервуар 10 и возможное расположение подопытной группы 40 и хищной рыбы 42 представлено на Фиг.1.

После предаторного стресса разовой экспозицией хищной рыбой 42 подопытную группу 40 возвращают в резервуар с естественными условиями обитания на 10 дней.

В качестве резервуара с естественными условиями обитания используют 40-литровый бак, размерами 45×40×30 см, заполненный отфильтрованной системной водой температурой 25°C, pH = 6,8-7,2, уровнем аммиака <0,9 мг/л и уровнем нитратов <200 мг/л. Освещение в помещении, в котором размещен резервуар, обеспечивается люминесцентными лампами со световым потоком 1000-1100 люкс и периодами включения 14/10-часов. (14 часов свет, 10 часов темнота, включение в 8:00 утра).

На 11 день подопытная группа 40 проходит тест новым аквариумом. Тест новым аквариумом является хорошо зарекомендовавшей себя методикой оценки поведения, широко используемой в анализе уровня беспокойства и двигательной активности подопытной группы 40 Данио-рерио. Для проведения вышеупомянутого теста подопытную группу 40 помещают в экспозиционный резервуар 20 (Фиг.2). При помещении подопытной группы 40 в экспозиционный резервуар 20 их поведение регистрируют на видеокамеру в течение 5 минут. Далее записанные видеоролики вручную обрабатывают с помощью программного обеспечения RealTimer, где оценивают: частоту, общую продолжительность и латентный период выхода в верхнюю и нижнюю части аквариума, замирание (неподвижность >2 с) и число беспорядочных движений.

После прохождения теста новым аквариумом подопытную группу 40 возвращают в резервуар с естественными условиями обитания на 3 дня.

На 14 день подопытная группа 40 проходит зеркальный тест на агрессию. Зеркальный тест на агрессию - тест, при котором рыбу, взятую из подопытной группы 40, помещают в экспозиционный резервуар 30 с зеркалом 32, где оценивают ее реакцию на свое отражение. Поскольку большинство видов, включая вид подопытных особей 40, не проходят тест на самораспознавание, отражение в зеркале 32 они интерпретируют как родственника или соперника, что позволяет использовать зеркальный тест на агрессию для измерения уровня агрессии и социального взаимодействия (Фиг.3). Поведение рыб в установке регистрируют в течение 6 минут и записывают на видеокамеру. Далее видеоролики вручную обрабатывают в программе RealTimer, где оценивают: частоту, общую продолжительность и латентность укусов, замирание (неподвижность >2 с) и количество беспорядочных движений.

После проведения всех тестов у подопытной группы 40 проверяют общегрупповой эффект от воздействия стресса через статистическую обработку сравнением контрольной и подопытной групп. После подтверждения наличия эффекта стрессора подопытную группу 40 делят на три подгруппы (Фиг.4) с устойчивым, уязвимым и промежуточным фенотипами в соответствии с критериями отсеивания. Критериями отсеивания являются пороговые значения по определенным поведенческим паттернам. Их значения формируют из значений контрольной группы, а именно из 20 или 80% от среднего по группе (Фиг.5).

Процедуру отбора осуществляют следующим образом. Каждую особь из подопытной группы 40, демонстрирующую попадание в границы критериев отсеивания по одному из поведенческих паттернов, оценивают как «находящаяся под влиянием» и выставляют 1 балл. Как минимум 2 балла должны быть получены по паттернам, связанным с основным показателем теста, такими как показатель выхода наверх для теста новым аквариумом и показатель укусов для зеркального теста на агрессию, и 1 балл по одному из паттернов тревожности (замирание или беспорядочные движения). После получения 3 баллов по какому-либо фенотипу рыбу относят в одну из подгрупп. Результаты каждого теста оценивают отдельно от другого. К концу отбора выделяют устойчивую, промежуточную и уязвимую экспериментальные подгруппы особей.

По итогу, благодаря использованию данной процедуры стрессирования и применению индивидуального профилирования в подгруппе у особей рыб с уязвимым фенотипом формируют состояние, подобное посттравматическому стрессовому расстройству.

Таким образом, обеспечивается достижение технического результата, заключающегося в обеспечении возможности создания экспериментальной модели посттравматического стрессового расстройства у рыб Данио-рерио, релевантной состоянию посттравматического стрессового расстройства у человека, тем самым расширяется набор инструментов моделирования посттравматического стрессового расстройства у подопытных животных.

Изобретение относится к психологии поведения животных, психонейроэндокринологии, экспериментальной медицине, нейробиологии и касается моделирования симптомов посттравматических стрессорных расстройств в экспериментах на рыбах с использованием модифицированной модели предаторного стресса. Сущность изобретения заключается в способе моделирования посттравматического стрессового расстройства у особей рыб Данио-рерио, реализованном посредством подвергания их предаторным стрессом разовой экспозицией хищной рыбой, проведения теста новым аквариумом и зеркального теста на агрессию для выявления уязвимой подгруппы особей. Изобретение обеспечивает создание экспериментальной модели посттравматического стрессового расстройства у рыб Данио-рерио. 9 з.п. ф-лы, 5 ил.

1. Способ моделирования посттравматического стрессового расстройства у особей рыб Данио-рерио, характеризующийся тем, что включает этапы, при выполнении которых:

- подопытную группу особей рыб Данио-рерио на промежуток времени величиной от 0,5 до 5 часов помещают в экспозиционный резервуар для воздействия предаторным стрессом вместе с особью рыбы, являющейся источником предаторного стресса подопытной группы особей Данио-рерио;

- подопытную группу извлекают из экспозиционного резервуара и на промежуток времени величиной от 7 до 30 дней помещают в резервуар с естественными условиями обитания;

- подопытную группу извлекают из резервуара с естественными условиями обитания и помещают в экспозиционный резервуар для проведения теста новым аквариумом, визуально разделенный по меньшей мере на две равные горизонтальные зоны;

- регистрируют такие поведенческие показатели подопытной группы, как частота, общая продолжительность и латентный период выхода в верхнюю часть экспозиционного резервуара, замирание и число беспорядочных движений;

- проводят сравнение поведенческих показателей подопытной группы с контрольной группой особей Данио-рерио;

- подопытную группу извлекают из экспозиционного резервуара для проведения теста новым аквариумом и помещают в резервуар с естественными условиями обитания на промежуток времени величиной от 1 до 3 дней;

- подопытную группу извлекают из резервуара с естественными условиями обитания и помещают в экспозиционный резервуар для проведения зеркального теста на агрессию, имеющий зеркальную стенку, при этом на расстоянии 0,5 см от зеркальной стенки визуально отделена вертикальная зона контакта особи подопытной группы с ее зеркальным отражением, а на расстоянии 3 см от зеркальной стенки визуально отделена вертикальная зона приближения особи подопытной группы к ее зеркальному отражению;

- регистрируют такие поведенческие показатели, как частота, общая продолжительность и латентный период укусов, а также замирание и число беспорядочных движений;

- проводят сравнение поведенческих показателей подопытной группы с контрольной группой особей рыб Данио-рерио;

- по результатам сравнений поведенческих показателей подопытной группы с контрольной группой особей рыб Данио-рерио выделяют особи рыб, у которых сформировалось посттравматическое стрессовое расстройство.

2. Способ п.1, отличающийся тем, что время воздействия предаторным стрессом особью рыбы, являющейся источником предаторного стресса подопытной группы особей Данио-рерио, составляет 2 часа.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве особи рыбы, являющейся источником предаторного стресса, используют Цихлазому чернополосую.

4. Способ п.1, отличающийся тем, что для воздействия предаторным стрессом используют экспозиционный резервуар, заполненный водой на 1/3.

5. Способ п.1, отличающийся тем, что в экспозиционный резервуар для воздействия предаторным стрессом добавляют тревожный феромон.

6. Способ по п.5, отличающийся тем, что тревожный феромон получают из подверженной холодной анестезии особи рыбы Данио-рерио, содержавшейся в естественных условиях обитания, для чего в эпидермисе рыбы выполняют разрезы, а в поврежденную область эпидермиса заливают дистиллированную воду, после чего собирают её в отдельную емкость.

7. Способ п.6, отличающийся тем, что объем полученного тревожного феромона составляет 10 мл.

8. Способ п.1, отличающийся тем, что время нахождения особей рыб Данио-рерио в резервуаре с естественными условиями обитания составляет 10 дней.

9. Способ п.1, отличающийся тем, что для визуального разделения горизонтальных зон на экспозиционном резервуаре для проведения теста новым аквариумом используют горизонтальную линию, нанесенную на боковую поверхность резервуара короткими штрихами.

10. Способ по п.1, отличающийся тем, что для визуального отделения вертикальных зон на экспозиционном резервуаре для проведения зеркального теста на агрессию используют вертикальные линии, нанесенные на боковую поверхность резервуара короткими штрихами.