Способ определения фенотипа стрессированных крыс с моделированным тревожно-фобическим расстройством Российский патент 2024 года по МПК A61B5/16 G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной медицине, психонейрофармакологии, и может быть использовано в качестве релевантной модели хронического стресса для доклинических испытаний эффективности фармакологических препаратов в коррекции тревожно-фобических расстройств. В условиях хронического стресса тревожная симптоматика является широко распространенным проявлением поведенческих расстройств. Весьма часто тревожное поведение отягощается иррациональным неконтролируемым страхом в виде агорофобии или социофобии [1]. В таких случаях подразумевается наличие непросто тревожных, а тревожно-фобических расстройств. Если тревожное поведение при определенных условиях может иметь защитный характер, отражающее готовность организма реализовать активную копинг-стратегию, то тревожно-фобические расстройства характеризуют иррациональную тревогу, парализующую волю. Известны случаи, когда фармакологические препараты, хорошо зарекомендовавшие себя как противотревожные средства, как например селективные ингибиторы обратного захвата серотонина (СИОЗС), оказываются недостаточно эффективными в коррекции тревожно-фобических расстройств [2]. Поэтому поиск путей коррекции связанных с хроническим стрессом тревожно-фобических расстройств является актуальной задачей современной фармакологии. Лимитирующим фактором для доклинических испытаний эффективности фармакологической коррекции трвожно-фобических расстройств является отсутствие релевантной модели хронического стресса, воспроизводящей эти поведенческие нарушения.

В настоящее время известна экспериментальная модель посттравматических стрессорных расстройств (ПТСР), спровоцированных хроническим предаторным стрессом, принятая за прототип, предложенной в данной заявке модели стресса (RU2746 901) [3]. Стресс хищником (предаторный стресс) - достаточно хорошо проверенная модель ПТСР, предполагает использование в качестве стрессора - хищника, который вызывает у грызунов изменение поведения, избегания травм, социальную отстраненность и стойкие, похожие на тревогу ответы [4]. Стресс хищником имеет большую ценность, как врожденная стрессовая угроза для грызунов, которая включает в себя фактическую или возможную смерть или получение серьезной травмы. При этом миндалина, префронтальные кортикальные и гиппокампальные контуры вовлечены в поведенческие изменения, вызванные предаторным стрессом [5]. Прототип состоит из следующих этапов: проводят экспозицию запахом хищника, при этом кошачья моча в количестве 100 мл устанавливается на 10 мин ежедневно, на протяжение 10 дней непосредственно в клетке лабораторных животных; производят оценку поведенческой активности животных на 3-и, 7-е, 10-е, 14-е и 30-е сутки; при этом определяют с помощью лабораторных и инструментальных методов уровень кортикостерона в крови и концентрацию нейромедиаторов в головном мозге, осуществляемых на 3-и, 7-е, 10-е, 14-е и 30-е сутки после завершения хронического стресса, что определяется особенностями развития синдрома ПТСР; производят фенотипирование животных. Для этого используются показатели теста приподнятого крестообразного лабиринта (ПКЛ). На основании определенных в ходе эксперимента значений индекса тревожности (ИТ), животных разделяют на 2 фенотипа: фенотип 1 -животные устойчивые к посттравматическим стрессорным расстройствам (низко-тревожные), ИТ=0,8; фенотип 2 - животные, предрасположенные к посттравматическим стрессорным расстройствам (высоко-тревожные), ИТ>8.

Основные недостатки этого прототипа:

1. Тревожные расстройства воспроизводятся, только начиная с 10-тых суток после завершения хронического предаторного стресса. На 3-ьи сутки даже зарегистрирована анксиолитическая реакция.

2. В общей выборке стрессированных животных соотношение между высоко и низко-тревожными животными 1:1, что соответствует представлениям о том, что ПТСР формируется в 50% случаев.

3. Анализируются только тревожные расстройства, и при этом не рассматривается наличие фобических расстройств.

Обозначенные недостатки прототипа обусловлены тем, что он эффективен только для воспроизведения поведенческих расстройств, характерных для ПТСР, так как с его помощью воспроизводится главное патогенетическое звено этого заболевания, а именно постепенно развивающаяся после завершения хронического стресса повышенная чувствительность к провоцирующим факторам (Time Dependent Sensitization или TDS). Между тем TDS вовлечена только в патогенез ПТСР и не связана с патогенезом хронического стресса[6]. Первоначальная сниженная тревожность после завершения хронического стресса свидетельствует о следующем: во-первых, в ходе многократного стрессирования кошачьими одорантами, происходит формирование адаптации к хроническому стрессу; во-вторых, данный вариант адаптации оказывается неустойчивым и сменяется развитием ПТСР. Тем не менее, наличие даже кратковременной адаптации делает бесперспективным использование данной версии хронического предаторного стресса в качестве платформы для экспериментальной проверки эффективности фармакологических препаратов, если речь идет о поведенческих расстройствах, сформировавшихся непосредственно в ходе хронического стресса.

Техническая задача предлагаемого изобретения заключается в разработке экспериментальной модели хронического cтресса, которая приводит к развитию тревожно-фобических расстройств, будучи при этом провалидированной для доклинических испытаний фармакологических препаратов.

Технический результат изобретения заключается в том, что разработанная экспериментальная модель является применимой для проведения доклинических испытаний фармакологических препаратов с целью коррекции стрессорных тревожно-фобических расстойств.

Способ моделирования тревожно-фобических расстройств в условиях хронического стресса у лабораторных крыс осуществляется следующим образом. Крыс, подвергают эмоциональному стрессу, а именно экспозицией лисьей мочи в количестве 100 мл в течение 10 мин ежедневно, в течение 10 суток. Стрессорный стимул в виде пропитанного лисьей мочой подстила для животных, упакованного в контейнеры для сбора мочи (сигнал опасности), вносят в домашние клетки, в которых содержатся лабораторные крысы в количестве 5 штук на клетку. Ежедневно ведется онлайн съемка поведенческих реакций на стрессорный раздражитель. Через 2 часа после завершения последнего стрессорного эпизода тестируется поведенческая активность в тесте приподнятый крестообразный лабиринт (ПКЛ). Тестирование проводится в течении 5 минут. Определяется количество времени пребывания в темных и светлых рукавах лабиринта, количество заходов в темные и светлые рукава лабиринта, индекс тревожности (ИТ), количество актов фризинга, груминга и.т.д. На основании данных тестирования ПКЛ определяют индекс тревожности животных по формуле:

ИТ=1 - {[(время в открытых рукавах/ ∑время в лабиринте)+(количество заходов в открытые рукава /∑общее количество заходов)]/2} (1)

- где ИТ - индекс тревожности; - время в открытых рукавах - сумма времени нахождения крыс в открытых рукавах крестообразного лабиринта (сек); - ∑время в лабиринте - суммарное время нахождения крыс в крестообразном лабиринте (сек); - количество заходов в открытые рукава - количество заходов крыс в открытые рукава крестообразного лабиринта; - ∑общее количество заходов - суммарное количество заходов крыс в открытые и закрытые рукава крестообразного лабиринта.

Выраженность тревожно-фобических расстройств определяется количественно по значению индекса тревожности: (ИТ)>0.7 и по количеству случаев фризинга: (ФР) >3. На основе предложенных количественных критериев тревожно-фобических расстройств выделяют как минимум три поведенческих фенотипа стрессированных животных. В первом фенотипе тревожные и фобические расстройства выражены в одинаковой степени ИТ>0.7, ФР>3. Во втором фенотипе тревожные расстройства доминируют над фобическими ИТ>0.7; ФР<3. В третьем фенотипе фобические расстройства доминируют над тревожными ИТ<0.7; ФР>3. Здесь пороговое значение ИТ снижено , поскольку при доклинических испытаниях препаратов, хронические инъекции растворителем значительно снижают величину ИТ для контрольных значений.

Для всех трех фенотипов стрессированных животных после эвтаназии собиралась коллекция плазмы и/ или сыворотки крови и внутренних органов. Также приготавливались гистологические препараты печени, сердца, почек, надпочечников, окрашенные гематоксилином-эозином. По каждому препарату давалось его общее описание, количественно оценивались проценты некротического поражения, уровень фиброзирования, уровень лейкоцитарных инфильтраций. Морфометрическое определение абсолютного количества паренхиматозных клеток в печени, почках, надпочечниках а также нейтрофилов, моноцитов/макрофагов, лимфоцитов проводили на 1 мм2 среза. Во всех препаратах проводился гистохимический анализ содержания гликогена. Головной мозг иссекался на префронтальную кору, гиппокамп и стриатум, гипоталамус, средний мозг, продолговатый мозг. В структурах мозга определялись активности моноаминооксидаз А и Б, (МАО-А и МАО-Б), содержание моноаминов – нейротрансмиттеров (норадреналин, дофамин и серотонин). С помощью ПЦР в режиме реального времени определяли содержание мРНК для МАО-А и МАО-Б, катехол-О-метилтрансферазы, дофаминового транспортера (DAT), фактора нейропластичности (BDNF). В печени определяли активность 11β гидроксистероиддегидрогеназы-1 (11βГСДГ-1) - ключевого фермента тканевого метаболизма глюкокортикоидов. В надпочечниках определяли концентрацию кортикостерона. Кроме того, концентрация кортикостерона определялась в плазме крови. Во всех органах определяли уровень окислительного стресса по содержанию молекулярных продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) и карбонилированных белков. В плазме крови также определяли концентрацию ресвератрола. В отношении каждого определенного в ходе исследований значения поведенческого, гистологического или метаболического показателя оценивалось наличие у них корреляций с концентрацией ресвератрола в плазме крови.

Таблица 1

Сравнение поведенческих эффектов хронического предаторного стресса в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» в условиях стрессирования лисьей (ХПС1) и кошачьей мочой (ХПС2) (M±SD).

Показатели Контроль (n=15) ХПС1 (n=20) ХПС2 (n=20) Время в закрытых рукавах 264.3±11.99 289.2±5.6* 236.8±28.6# Время в открытых рукавах 35.66±11.99 10.8±5.6* 63.2±28.6 Количество заходов в открытые рукава 3±1.0 0.2±0.1*** 1.6±0.52### Количество заходов в закрытые рукава 1.3±0.57 2.2±1.09** 3.2±0.11# Общее количество заходов 4.3±1.52 2.4±1.1* 4.8±0.14# Индекс Тревожности 0.78±0.04 0.93±0.02* 0.72±0.02## Фризинг 0±0 5.2±0.03* 1.2±0.01#

Примечание: В группе ХПС1 приводятся значения для общей выборки стрессированных животных. Среди них 45% крыс относятся к 1 фенотипу, 25% ко второму и 30% к третьему фенотипу. * p<0.05 ; p<0.001**;p<0.0001 статистически значимые различия между контролем и группами ХПС. #p<0.05; ##p<0.001;###p<0.0001 статистически значимые различия между группами ХПС1 и ХПС2.

Данные, представленные в таблице1 наглядно демонстрируют, что замена кошачьего одоранта на лисий реально предотвращает десенситизацию к повторному действию стрессора. Кроме того, представленные результаты свидетельствуют о том, что учет фризинга в тесте ПКЛ повышает аналитические возможности этого поведенческого теста, так как позволяет идентифицировать случаи не просто тревожных, а тревожно-фобических расстройств. В группе ХПС 2 отсутствовали статистически значимые изменения в тесте ПКЛ по сравнению с контролем. Из этого следует то, что группа ХПС2 бесперспективна для доклинических испытаний фармакологической коррекции тревожно-фобических расстройств по причине их отсутствия в связи со сформировавшейся десенстизацией к хроническому действию стрессора кошачьей мочой. Наличие тревожно-фобических расстройств в группе ХПС1 делает предлагаемый способ потенциально эффективным при доклинических испытаниях фармакологических препаратов.

Для определения возможности применения предлагаемого способа предаторного стрессирования лабораторных крыс для доклинических испытаний фармакологических препаратов с целью коррекции стрессорных тревожно-фобических расстойств проведены следующие исследования.

В дальнейшем для доказательства эффективности предложенного способа мы использовали его для оценки перспективности совместного введения ингибиторов обратного захвата серотониниа (СИОЗС) и ресвератрола в коррекции стрессорных тревожно-фобических расстройств.

Известна эффективность селективных ингибиторов обратного захвата серотонина (СИОЗС) в присутствии ресвератрола в коррекции тревожно-фобических расстройств. Ингибиторы обратного захвата серотонина (СИОЗС) нашли широкое применение в коррекции вызванных хроническим стрессом поведенческих расстройств [7]. Между тем, имеются сведения о недостаточной эффективности СИОЗС в коррекции поведенческих расстройств в условиях предаторного стресса [2]. В таком случае именно предаторный стресс, осуществляемый по предлагаемому способу, может стать перспективной платформой для доклинических испытаний новых подходов для коррекции тревожно-фобических расстройств. Ресвератрол, относящийся по своей химической природе к производным стильбена и содержащимся в растительном сырье, обладает отчетливым нейропротекторным эффектом[8]. Более того имеются сведения о его способности усиливать корригирующее действие СИОЗС при экспериментальной постстрессорной депрессии[9]. На предложенной модели хронического предаторного стресса проведены доклинические испытания совместного действия ресвератрола и СИОЗС на тревожно-фобические расстройства. В качестве селективных ингибиторов обратного захвата серотонина (СИОЗС) использовали циталопрам (Ципрамил, Х.Лундбек А/О, Копенгаген), флуоксетин (Флуоксетин Ланнахер, Австрия), пароксетин (Паксил, ЗАО Глаксо СмитКляйн Трейдинг, Россия), сертралин (Золофт, Viatris, Германия). Инъекции исследуемых препаратов проводили внутрибрюшинно, ежедневно с 1 по 14 день эксперимента. Растворы готовили 1 раз в неделю и хранили при комнатной температуре.

Ресвератрол, а также СИОЗС растворяли в ДМСО таким образом, чтобы объем инъекции соответствовал 1мл/кг животного. Сначала изготавливался раствор ресвератрола. После того как раствор ресвератрола был изготовлен, уже его использовали как растворитель для СИОЗС в необходимой концентрации. Концентрация СИОЗС рассчитывалась по тому же принципу что и ресвератрол (доза на 1 кг/ мл). Через 2 часа после завершения последнего стрессорного эпизода тестировалась поведенческая активность в тесте приподнятый крестообразный лабиринт. Тестирование проводится в течении 5 минут. Процедуры инъекции сами по себе отразились на реакции стрессированных крыс. Так в группе ХПС 42% выборки испытывала повышенную тревожность и характеризовалась снижением времени нахождения в открытых и повышением времени нахождения в закрытых рукавах крестообразного лабиринта. У 58% животных уровень фризинга, характеризующего эмоции страха был повышен в 4 раза по сравнению с контрольными животными. Среди использованных СИОЗС, только сертралин смог значимо снизить величину индекса тревожности у стрессированных по предлагаемому способу животных (F5,31=2.72;Р=0.038 post hoc p=0.042 vs ХПС1). При этом эффективность СИОЗС убывает в следующей последовательности: пароксетин <флуоксетин <циталопрам < сертралин. Важно отметить, хронические инъекции СИОЗС стрессированным животным не смогли корригировать фобические реакции, идентифицируемые по уровню фризинга. (F5,31=1.69;p=0.16). Таким образом, с помощью предлагаемого способа подтвердилась низкая эффективность СИОЗС в коррекции фобических рсстройств. Примечательно, что для сертралина также отмечено наиболее отчетливое снижение прооксидантных эффектов хронического стресса в печени (F5,31=3.21;p=0.025 post hoc p=0.031 vs ХПС1). Токсические эффекты СИОЗС также выражались в формировании патологических изменений во внутренних органах. В частности хронические инъекции флуоксетина приводили к появлению отеков и некротического поражения в надпочечниках (F5,31=3.21;p=0.025 post hoc p=0.031). Кроме того, токсические эффекты СИОЗС выражались в формировании некротических зон в печени (F5,31=3.21;p=0.025 post hoc p=0.031). Среди СИОЗС наиболее отчетливым гепатопротекторным эффектом обладал сертралин. Следовательно предлагаемый способ может эффективно воспроизводить побочные эффекты СИОЗС.

Таблица 2

Анализ эффективности СИОЗС в коррекции вызванных ХПС1 поведенческих расстройств, содержания продуктов ПОЛ (ХПС2) (M±SD).

Группы ИТ Фризинг Продукты
Пол печень Некротические поражения печени Контроль 0.68±0.04 0.8±0.03 0.57±0.03 18.8± 7.4 ХПС1 0.85±0.02* 3.8±0.42* 0.73±0.02* 37.3±10.11* ХПС1+пароксетин 0.72±0.01 2.14±0.5 0.54±0.05 35.42±9.68 ХПС1+циталопрам 0.54±0.016 3.7±0.31 0.59±0.03 15.42±7.21# ХПС1+флуоксетин 0.77±0.024 3.5±0.31 0.68±0.02 34.85±6.87 ХПС1+сертралин 0.38±0.015# 3.63±0.31 0.47±0.02 8.66±1.25#

Примечание: В группе ХПС1 приводятся значения для общей выборки стрессированных животных. Среди них 40% крыс относятся к 1 фенотипу, 35% ко второму и 25% к третьему фенотипу. * p<0.05 ; p<0.001**;p<0.0001 статистически значимые различия между контролем и группами ХПС. #p<0.05; ##p<0.001;###p<0.0001 статистически значимые различия между группами ХПС1 и ХПС2.

Характер поведенческих эффектов СИОЗС непосредственно зависел от дозы ресвератрола. Все СИОЗС усугубляли анксиогенные эффекты хронического стресса при их совместном введении с ресвератролом в дозе 10 мг/кг. Прежде всего, это выражалось в снижении времени в открытых рукавах крестообразного лабиринта (F6,38=4.33;P=0.001; post hoc: сертралин на 58% p= 0.0002 пароксетин на 52% p= 0.0005, циталопрам на 56% p= 0.0004, флуоксетин на 54% p= 0.0003) по сравнению с группой ХПС1.

В присутствии ресвератрола в дозе 20мг/кг отмечен разнонаправленный характер межгрупповых различий по величине индекса тревожности (F6,38=3.44; P=0.008). Так, в группе «ХПС1+ ресвератрол 20 мг/кг + циталопрам» значение индекса тревожности повысилось на 90 % против контрольных значений (p=0.0098), а в группе «ХПС1+ ресвератрол 20 мг/кг + флуоксетин » снизилось на 50% по сравнению с группой ХПС1p=0.039). Разнонаправленный характер межгрупповых различий отмечен и в отношении фризинга (F6,38=2.74;P=0.026). В группе «ХПС1+ ресвератрол 20 мг/кг + флуоксетин » флуоксетина количество случаев фризинга снижено на 50% (p=0.045) против группы «ХПС1», а в группе «ХПС1+ ресвератрол 20 мг/кг +пароксетин » (p=0.046) повышено в 2,5 раза относительно контрольной группы. Таким образом, в присутствии ресвератрола в дозе 20 мг/кг оптимизируются поведенческие эффекты флуоксетина при хроническом стрессе.

В присутствии ресвератрола в дозе 50мг/кг в большинстве групп стрессированных животных получавших СИОЗС, отмечено снижение фризинга, по сравнению с группой «ХПС1» (F6,37=2.68;P=0.032; post hoc : циталопрам на 80% p=0.05, флуоксетин на 82% p=0.005, пароксетин на 50% p=0.017). В группах стрессированных животных получавших пароксетин и флуоксетин в присутствии ресвератрола в дозе 50мг/кг наблюдалось снижение времени в открытых рукавах лабиринта по сравнению с группой ХПС (F6,37=2.7;P=0.028; post hoc : флуоксетин на 54 % p=0.017, пароксетин на 64% p=0.008).

Таблица 3

Анализ способности ресвератрола в различных дозах модулировать корригирующие эффекты СИОЗС в отношении вызванных ХПС1 поведенческих расстройств, (M±SD).

Группы ИТ Время в открытых рукавах Время в закрытых рукавах Заходы в открытые рукава Заходы в закрытые рукава Фризинг Контроль 0.33±0.01 171.5±50.9 128.5±50.9 1.75±0.62 2.25±0.63 0±0 ХПС1 0.73±0.01* 74.85±21.4* 225.14±8.9* 1.8±0.08* 4.5±0.41 3.±0.08* ХПС1+ресвератрол 100 мг/кг+ 0.55±0.04# 125.28±32.1 174.72± 32.1 2.85±1.15 3.15±0.52 0±0# ХПС1+ресвератрол 100мг/кг+ флуоксетин 0.29±0.06### 207±35.34### 93±5.3### 1.4±0.07# 1.7±0.07# 5.8±0.07# ХПС1+ресвератрол 100мг/кг+циталопрам 0.64±0.13* 66.7±3.45* 233.2±15.2* 3.14±0.15 5.14±0.25 0.41±0.12 ХПС1+ресвератрол 100мг/кг+пароксетин 0.48±0.06 123.14±31.5 176±45.7 1.0±0.1 2.0±0.1 1.42±0.3 ХПС1+ресвератрол 100 мг/кг+ сертралин 0.42±0.06# 177.8 122.1 1.0±0.07 2.5±0.07 2.0±0.2

Примечание: * p<0.05; статистически значимые различия между контролем и ХПС1. #p<0.05; ##p<0.001;###p<0.0001 статистически значимые различия между группами ХПС1 иХПС1+ресвератрол

В присутствии ресвератрола в дозе 100мг/кг у стрессированных животных относящихся к группе ХПС1, получавших сертралин и флуоксетин отмечено снижение величины индекса тревожности по сравнению с группой «ХПС1» (F6,39=2.4;P=0.04; post hoc : сертралин p=0.027, флуоксетин p=0.0028 ). Для стрессированных животных получавших сертралин в присутствии максимальной дозы ресвератрола характерны отрицательные корреляции между концентрацией ресвератрола в крови и индексом тревожности (r=-0.75;p<0.05). Отличительной особенностью стрессированных животных группы «ХПС1+флуоксетин+ресвератрол» является двукратное повышение количества cлучаев фризинга по сравнению с группой ХПС (F6,39=3.1;P=0.015; post hoc p=0.045). При этом обнаружена корреляция между концентрацией ресвератрола в плазме крови и уровнем фризинга (r=-0.62;p<0.05). Таким образом, на основании полученных результатов можно сделать заключение о том, что все использованные СИОЗС не в состоянии самостоятельно корригировать фризинг. Позитивные эффекты наблюдаются только в присутствии ресвератрола. С этих позиций для усиления поведенческих эффектов флуоксетина является оптимальной доза ресвератрола 20 мг/кг и нежелательна доза 100 мг/кг. Для циталопрама представляется оптимальной доза ресвератрола 50мг/кг, в то время как для сертралина и пароксетина 100 мг/кг.

Таким образом, предложенный способ моделирования хронического стресса позволяет не только воспроизвести тревожно-фобическое поведение в условиях хронического стресса, но и установить наличие как минимум трех фенотипов для этого типа поведенческих расстройств по пороговым значениям величин индекса тревожности и количества случаев фризинга. В приведенном примере наглядно показано, что предлагаемый способ стрессирования наиболее применим для доклинических испытаний новых подходов к фармакологической коррекции тревожно-фобических расстройств.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Menezes GB, Fontenelle LF, Mululo S, Versiani M. Resistência ao tratamento nos transtornos de ansiedade: fobia social, transtorno de ansiedade generalizada e transtorno do pânico [Treatment-resistant anxiety disorders: social phobia, generalized anxiety disorder and panic disorder]. Braz J Psychiatry. 2007 Oct;29 Suppl 2:S55-60. Portuguese. doi: 10.1590/s1516-44462007000600004. PMID: 18157434.

2. Dielenberg RA, McGregor IS. Defensive behavior in rats towards predatory odors: a review. Neurosci Biobehav Rev. 2001 Dec;25(7-8):597-609. doi: 10.1016/s0149-7634(01)00044-6. PMID: 11801285.

3. Патент № 2746901 «Способ моделирования посттравматического стрессового расстройства у лабораторных крыс» (2020) г (Цейликман и соавторы)

4. Yehuda R, Neylan TC, Flory JD, McFarlane AC. The use of biomarkers in the military: from theory to practice. Psychoneuroendocrinology. 2013 Sep;38(9):1912-22. doi: 10.1016/j.psyneuen.2013.06.009. Epub 2013 Aug 6. PMID: 23927936.

5. Pitman RK, Rasmusson AM, Koenen KC, Shin LM, Orr SP, Gilbertson MW, Milad MR, Liberzon I. Biological studies of post-traumatic stress disorder. Nat Rev Neurosci. 2012 Nov;13(11):769-87. doi: 10.1038/nrn3339. Epub 2012 Oct 10. PMID: 23047775; PMCID: PMC4951157.

6. Tseilikman V, Lapshin M, Klebanov I, Chrousos G, Vasilieva M, Pashkov A, Fedotova J, Tseilikman D, Shatilov V, Manukhina E, Tseilikman O, Sarapultsev A, Downey HF. The Link between Activities of Hepatic 11beta-Hydroxysteroid Dehydrogenase-1 and Monoamine Oxidase-A in the Brain Following Repeated Predator Stress: Focus on Heightened Anxiety. Int J Mol Sci. 2022 Apr 28;23(9):4881. doi: 10.3390/ijms23094881. PMID: 35563271; PMCID: PMC9102549.

7. Hampf C, Scherf-Clavel M, Weiß C, Klüpfel C, Stonawski S, Hommers L, Lichter K, Erhardt-Lehmann A, Unterecker S, Domschke K, Kittel-Schneider S, Menke A, Deckert J, Weber H. Effects of Anxious Depression on Antidepressant Treatment Response. Int J Mol Sci. 2023 Dec 5;24(24):17128. doi: 10.3390/ijms242417128. PMID: 38138957; PMCID: PMC10742776.

8. Tseilikman VE, Shatilov VA, Zhukov MS, Buksha IA, Epitashvily AE, Lipatov IA, Aristov MR, Koshelev AG, Karpenko MN, Traktirov DS, Maistrenko VA, Kamel M, Buhler AV, Kovaleva EG, Kalinina TS, Pashkov AA, Kon'kov VV, Novak J, Tseilikman OB. Limited Cheese Intake Paradigm Replaces Patterns of Behavioral Disorders in Experimental PTSD: Focus on Resveratrol Supplementation. Int J Mol Sci. 2023 Sep 20;24(18):14343. doi: 10.3390/ijms241814343. PMID: 37762647; PMCID: PMC10532287.

9. Shen J, Qu C, Xu L, Sun H, Zhang J. Resveratrol exerts a protective effect in chronic unpredictable mild stress-induced depressive-like behavior: involvement of the AKT/GSK3β signaling pathway in hippocampus. Psychopharmacology (Berl). 2019 Feb;236(2):591-602. doi: 10.1007/s00213-018-5087-1. Epub 2018 Oct 29. PMID: 30374891.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно психонейрофармакологии. Крыс подвергают предаторному стрессу экспозицией лисьей мочой в количестве 100 мл в течение 10 мин ежедневно в течение 10 суток. Через два часа после последней экспозиции лисьей мочой исследуют поведенческую активность в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» (ПКЛ) в течение пяти минут. Определяют индекс тревожности (ИТ) и количество актов фризинга (ФР). По полученным значениям ИТ и ФР определяют поведенческие фенотипы стрессированных животных. Способ позволяет получить экспериментальную модель хронического стресса для доклинических испытаний фармакологических препаратов с целью коррекции стрессорных тревожно-фобических расстройств. 3 табл., 1 пр.

Способ определения фенотипа стрессированных крыс с моделированным тревожно-фобическим расстройством, характеризующийся формированием стрессовой обстановки с помощью хронического предаторного стресса, при котором опытных животных подвергают предаторному стрессу экспозицией лисьей мочой в количестве 100 мл в течение 10 мин ежедневно в течение 10 суток, затем у крыс через два часа после последней экспозиции лисьей мочой исследуют поведенческую активность в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» (ПКЛ) в течение пяти минут, определяют индекс тревожности (ИТ) и количество актов фризинга (ФР), по полученным значениям выделяют три поведенческих фенотипа стрессированных животных: при ИТ больше 0,7 и ФР больше 3 тревожные и фобические расстройства выражены в одинаковой степени, при ИТ больше 0,7 и ФР меньше 3 тревожные расстройства доминируют над фобическими, при ИТ меньше 0,7 и ФР больше 3 фобические расстройства доминируют над тревожными.