СОЛЬ ПЕНТАЦИКЛИЧЕСКОГО СОЕДИНЕНИЯ И ЕГО КРИСТАЛЛ Российский патент 2024 года по МПК C07D495/22 A61K31/551 A61P25/28 A61P43/00 

Область техники

[0001] Настоящее изобретение относится к фармацевтически приемлемым солям пентациклического соединения, обладающим холинергическим нейронным активирующим и/или нейрозащитным действием, а также к кристаллам пентациклического соединения и его фармацевтически приемлемых солей. Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим составам, содержащим указанные выше соли или кристаллы в качестве активной субстанции.

Уровень техники

[0002] Холинергические нейроны, которые обеспечивают высвобождение ацетилхолина в качестве трансмиттера, в значительной степени распространены в переднем мозге от базального ядра Мейнерта и ядра перегородки базального отдела переднего мозга до гиппокампа, миндалины и коры головного мозга и участвуют в процессах модуляции памяти, обучения, познания и внимания (непатентный литературный источник 1). Кроме того, холинергические нейроны в педункулопонтийном тегментальном ядре и латеродорсальном тегментальном ядре ствола головного мозга распространены в полосатом теле, прилежащем ядре, черном веществе и таламусе, и считается, что они вовлечены в регуляцию мотивации и бодрствования (непатентные литературные источники 2-4).

[0003] В частности, роль холинергических нейронов в базальном отделе переднего мозга была выяснена в большей степени путем анализа с применением многих животных моделей, таких как модель поражения. В частности, корреляция между функциональным нарушением холинергических нейронов и ухудшением памяти и способности к обучению была показана на животных моделях (непатентные литературные источники 5-7), и было показано, что когнитивная деятельность улучшается за счет увеличения количества ацетилхолина при применении ингибитора холинэстеразы и усиления функции холинергических нейронов (непатентные литературные источники 8-12).

[0004] Сообщалось, что фактор роста нервов (NGF) демонстрирует нейропротекторный эффект в отношении холинергических нейронов на животной модели с потерей холинергических нейронов. (Непатентные литературные источники 13-15).

[0005] В частности, в случае болезни Альцгеймера (AD) потеря холинергических нейронов обнаруживается на ранней стадии AD и является одним из патологических проявлений AD. Накопление сенильных бляшек вследствие отложения бета-амилоида и нейрофибриллярных клубков вследствие агрегации тау-белка также представляет собой патологические проявления AD, и, в частности, известно, что нейрофибриллярные клубки увеличиваются с развитием патологического состояния и это приводит к гибели нейронов. Нейрофибриллярные клубки обнаруживаются в базальном ядре Мейнерта и энторинальной области коры с ранней стадии AD. В том числе сообщается, что потеря холинергических нейронов в базальном ядре Мейнерта за счет агрегации тау-белка обнаруживается на более ранней стадии, и что существует корреляция между такой потерей и уменьшением показателя когнитивной функции (непатентные литературные источники 16 и 17). Как и в случае с AD, гиперфосфорилирование и аномальное накопление тау-белка обнаруживается у генетически модифицированных мышей с мутацией P301S, которая была обнаружена при наследственной лобно-височной деменции (трансгенные мыши с мутацией P301S, экспрессирующие тау-белок человека). Следовательно, образуются нейрофибриллярные клубки, являющиеся патологическим проявлением AD, (непатентный литературный источник 18), и они вызывают когнитивную дисфункцию из-за синаптических нарушений, нейродегенерации и потери нейронов. На основании этих результатов трансгенные мыши с мутацией P301S, экспрессирующие тау-белок человека, широко применяются в качестве AD-подобных животных моделей (непатентные литературные источники 19-22), и можно ожидать улучшения в отношении снижения когнитивных способностей и подавления развития патологического состояния при болезни Альцгеймера путем подавления AD-подобных патологических изменений у трансгенных мышей с мутацией P301S, экспрессирующих тау-белок человека.

[0006] Кроме того, многочисленные анализы с применением генетически модифицированных мышей и животных моделей нарушений позволяют предположить, что дефицит аксонального транспорта является одной из причин потери холинергических нейронов (непатентные литературные источники 23-25). В том числе аксон холинергических нейронов, который выступает из области перегородки в гиппокамп, имеет нарушения в модели поражения бахромок гиппокампа и свода головного мозга, и при этом нарушение ретроградного транспорта молекул, связанных с выживанием и функционированием, приводит к потере нейронов (непатентные литературные источники 26-28). Нарушение ретроградного транспорта также обнаруживается у генетически модифицированных мышей (непатентные литературные источники 23 и 24), и потеря холинергических нейронов вследствие поражения бахромок гиппокампа и свода головного мозга отражает один аспект патологического состояния. Таким образом, можно ожидать улучшения в отношении снижения когнитивных способностей и подавления развития патологического состояния при болезни Альцгеймера путем подавления или улучшения в отношении потери холинергических нейронов в данной модели нарушения.

[0007] Деменция с тельцами Леви (DLB) и болезнь Паркинсона (PD) представляют собой прогрессирующие нейродегенеративные заболевания, при которых патологические тельца включения (тельца Леви), в основном состоящие из альфа-синуклеина, образуются внутри нейронов и приводят к дегенерации и потере нейронов. Когнитивная дисфункция развивается, если тельца Леви в основном распределены в коре головного мозга, и паркинсонизм развивается, если тельца Леви в основном распределены в стволе головного мозга. В дополнение к этому также развиваются психиатрические симптомы, такие как зрительная галлюцинация, галлюцинация и бред, нарушение сна и вегетативные симптомы. Диагноз представляет собой деменцию с тельцами Леви, если деменция появляется до или в течение одного года от начала паркинсонизма, и диагноз представляет собой болезнь Паркинсона с деменцией (PDD), если паркинсонизм появился до одного года или больше от начала деменции. Деменция с тельцами Леви, болезнь Паркинсона с деменцией и болезнь Паркинсона являются патологически одинаковыми заболеваниями и в целом называются болезнью телец Леви (LBD), хотя они различны по когнитивной дисфункции, и порядку появления, и степени паркинсонизма. При деменции с тельцами Леви и болезни Паркинсона с деменцией, как и в случае с болезнью Альцгеймера, нейроны базального ядра Мейнерта, представляющего собой ядро, являющееся источником холинергического нерва, дегенерируют и гибнут, и сообщается, что появляется тяжелое нарушение холинергических нейронов в гиппокампе и коре головного мозга (непатентные литературные источники 29-31). Кроме того, существует корреляция между развитием нарушения холинергических нейронов и когнитивной дисфункцией (непатентный литературный источник 29), и было продемонстрировано, что ингибиторы холинэстеразы обеспечивают улучшение когнитивной функции. На основании этих результатов был сделан вывод о том, что когнитивная функция улучшается вследствие улучшения функции холинергических нейронов и, как и в случае с болезнью Альцгеймера, можно ожидать улучшения в отношении снижения когнитивных способностей и подавления развития патологического состояния при деменции с тельцами Леви и болезни Паркинсона с деменцией путем подавления или уменьшения потери холинергических нейронов в нескольких моделях нарушения.

[0008] Следовательно, на основании этих результатов можно ожидать улучшения в отношении снижения когнитивной деятельности, обусловленного дисфункцией холинергических нейронов, путем достижения функциональной активации и/или нейропротекторного эффекта в отношении холинергических нейронов в клинической практике.

Список цитируемой литературы

Непатентные литературные источники

[0009] [Непатентный литературный источник 1] Everitt BJ et al. "Central cholinergic systems and cognition." Annu. Rev. Psychol. 48 (1997) 649-684.

[Непатентный литературный источник 2] Gulledge AT. et al. "Cholinergic inhibition of neocortical pyramidal neurons." J. Neurosci. 25 (2005) 10308-20.

[Непатентный литературный источник 3] Daniel Dautan D. et al. "A major external source of cholinergic innervation of the striatum and nucleus accumbens originates in the brainstem." J. Neurosci. 34 (2014) 4509-18.

[Непатентный литературный источник 4] M Steriade M. et al. "Neuronal activities in brain-stem cholinergic nuclei related to tonic activation processes in thalamocortical systems." J. Neurosci. 10 (1990) 2541-59.

[Непатентный литературный источник 5] Fischer W. et al. "Progressive decline in spatial learning and integrity of forebrain cholinergic neurons in rats during aging." Neurobiol. Aging 13 (1992) 9-23.

[Непатентный литературный источник 6] Leanza G. et al. "Selective lesioning of the basal forebrain cholinergic system by intraventricular 192 IgG-saporin: behavioural, biochemical and stereological studies in the rat." Eur. J. Neurosci. 7 (1995) 329-43.

[Непатентный литературный источник 7] Leanza G. et al. "Selective immunolesioning of the basal forebrain cholinergic system disrupts short-term memory in rats." Eur. J. Neurosci. 8 (1996) 1535-44.

[Непатентный литературный источник 8] Ogura H. et al. "Donepezil, a centrally acting acetylcholinesterase inhibitor, alleviates learning deficits in hypocholinergic models in rats." Methods Find Exp Clin Pharmacol. 22 (2000) 89-95.

[Непатентный литературный источник 9] Spowart-Manning L. et al. "Spatial discrimination deficits by excitotoxic lesions in the Morris water escape task." Behav Brain Res. 156 (2005) 269-76.

[Непатентный литературный источник 10] Bruce AP. et al. "Choline acetyltransferase activity and cognitive domain score of Alzheimer's patients." Neurobiol. Aging. 21 (2000) 11-17

[Непатентный литературный источник 11] Rogers SL. et al. "The efficacy and safety of donepezil in patients with Alzheimer's disease: results of a US Multicentre, Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled Trial. The Donepezil Study Group." Dementia. 7 (1996) 293-303

[Непатентный литературный источник 12] Mori E. et al. "Donepezil for dementia with Lewy bodies: a randomized, placebo-controlled trial." Ann Neurol. 72 (2012) 41-52

[Непатентный литературный источник 13] Mufson EJ. et al. "Human cholinergic basal forebrain: chemoanatomy and neurologic dysfunction." J. Chem. Neuroanat. 26 (2003) 233-242

[Непатентный литературный источник 14] Mufson EJ. et al. "Cholinergic system during the progression of Alzheimer's disease: therapeutic implication." Expert. Rev. Neurother. 8 (2008) 1703-1718

[Непатентный литературный источник 15] Schliebs R. et al. "The significance of the cholinergic system in the brain during aging and in Alzheimer's disease." J. Neural. Transm 113 (2006) 1625-1644

[Непатентный литературный источник 16] Vana L et al. "Progression of tau pathology in cholinergic Basal forebrain neurons in mild cognitive impairment and Alzheimer's disease." Am J Pathol. 179 (2011) 2533-2550.

[Непатентный литературный источник 17] Gómez-Isla T et al. "Neuronal loss correlates with but exceeds neurofibrillary tangles in Alzheimer's disease." Ann Neurol. 41 (1997) 17-24.

[Непатентный литературный источник 18] Lee VM et al. "Neurodegenerative tauopathies." Annu. Rev. Neurosci. 24 (2001) 1121-1159.

[Непатентный литературный источник 19] Allen B et al. "Abundant tau filaments and nonapoptotic neurodegeneration in transgenic mice expressing human P301S tau protein." J. Neurosci. 22 (2002) 9340-9351.

[Непатентный литературный источник 20] Xu H et al. "Memory deficits correlate with tau and spine pathology in P301S MAPT transgenic mice." Neuropathol. Appl. Neurobiol. 40 (2014) 833-43.

[Непатентный литературный источник 21] Yoshiyama Y et al. "Synapse loss and microglial activation precede tangles in a P301S tauopathy mouse model." Neuron. 53 (2007) 337-351.

[Непатентный литературный источник 22] Hoffmann NA et al. "Impaired plasticity of cortical dendritic spines in P301S tau transgenic mice." Acta Neuropathol Commun. 1 (2013) 82.

[Непатентный литературный источник 23] Salehi A et al. "Increased App Expression in a Mouse Model of Down's Syndrome Disrupts NGF Transport and Causes Cholinergic Neuron Degeneration" Neuron 51 (2006) 29-42.

[Непатентный литературный источник 24] Onishi T et al. "Early-onset cognitive deficits and axonal transport dysfunction in P301S mutant tau transgenic mice" Neuroscience Research 80 (2014) 76-85.

[Непатентный литературный источник 25] Xu W et al. "Amyloid precursor protein-mediated endocytic pathway disruption induces axonal dysfunction and neurodegeneration" J. Clin. Invest. 126 (2016) 1815-33.

[Непатентный литературный источник 26] Lapchak PA et al. "Effect of recombinant human nerve growth factor on presynaptic cholinergic function in rat hippocampal slices following partial septohippocampal lesions: measures of [³H]acetylcholine synthesis, [³H]acetylcholine release and choline acetyltransferase activity" Neuroscience 42 (1991) 639-49.

[Непатентный литературный источник 27] Gilmor ML et al. "Coordinate expression of the vesicular acetylcholine transporter and choline acetyltransferase following septohippocampal pathway lesions" J. Neurochem. 71 (1998) 2411-20.

[Непатентный литературный источник 28] Gu H et al. "Recombinant human NGF-loaded microspheres promote survival of basal forebrain cholinergic neurons and improve memory impairments of spatial learning in the rat model of Alzheimer's disease with fimbria-fornix lesion" Neurosci. Lett. 453 (2009) 204-9.

[Непатентный литературный источник 29] Shimada, H. et al., "Mapping of brain acetylcholinesterase alterations in Lewy body disease by PET" Neurology, vol.73, стр. 273-278, 2009.

[Непатентный литературный источник 30] Tiraboschi, P. et al., "Cholinergic dysfunction in diseases with Lewy bodies" Neurology 54 (2000) 407-411.

[Непатентный литературный источник 31] Perry, E. K. et. al., "Neocortical cholinergic activities differentiate Lewy body dementia from classical Alzheimer's disease", NeuroReport, vol.5, стр.747-749 (1994).

Краткое описание изобретения

Техническая задача

[0010] Авторы настоящего изобретения обнаружили, что соединение, представленное следующей формулой (I) (5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-дион, в дальнейшем именуемое «соединение (I)») способно активировать холинергические нейроны и/или обладает нейропротекторным действием. Следовательно, существует возможность использования соединения (I) в качестве средства для улучшения сниженной в результате дисфункции холинергических нейронов когнитивной способности.

[0011] Физические свойства соединений, используемых в качестве фармацевтических препаратов, и их солей, и их кристаллов обычно сильно влияют на биодоступность лекарственного средства, чистоту лекарственного вещества и состав фармацевтического препарата. Следовательно, целью настоящего изобретения является предоставление фармацевтически приемлемых солей соединения (I), которые потенциально можно использовать в качестве лекарственной субстанции для фармацевтических препаратов, и их кристаллов.

Решение задачи

[0012] В результате тщательных исследований соединения (I) с учетом вышеупомянутых обстоятельств авторы настоящего изобретения открыли соли соединения (I) и их кристаллы, тем самым выполнив настоящее изобретение.

[0013] Таким образом, настоящее изобретение относится к следующим пунктам <1>-<35>.

<1> Моногидрохлорид или моногидробромид 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, представленный формулой (I):

.

<1> Кристалл 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона или моногидрохлорида или моногидробромида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона.

<3> Кристалл 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, имеющий дифракционные пики при углах дифракции (2θ±0,2°) 9,0°, 11,1° и 23,6° в порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<3.1> Кристалл 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, имеющий дифракционные пики при углах дифракции (2θ±0,2°) 9,0°, 11,1°, 14,5°, 18,1°, 20,0°, 21,9°, 23,6°, 24,4°, 24,9° и 28,5° в порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<3.2> Кристалл 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, картина порошковой рентгеновской дифракции которого приведена на Фигуре 1 при порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<4> Кристалл типа А моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, имеющий дифракционные пики при углах дифракции (2θ±0,2°) 11,6°, 20,8° и 25,7° в порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<4.1> Кристалл типа А моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, имеющий дифракционные пики при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,1°, 7,8°, 11,6°, 16,2°, 19,9°, 20,8°, 25,2°, 25,7°, 26,9° и 29,9° в порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<4.2> Кристалл типа А моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, картина порошковой рентгеновской дифракции которого приведена на Фигуре 2 при порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<4.3> Кристалл типа А моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[4,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, характеризующийся пиками при химических сдвигах (δ±0,5 м.д.) 164,0 м.д., 129,6 м.д. и 36,5 м.д. в ¹³С спектре твердотельного ЯМР с глицином (176,03 м.д.) в качестве внешнего стандарта.

<5> Кристалл типа В моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, имеющий дифракционные пики при углах дифракции (2θ±0,2°) 9,7°, 10,1° и 17,9° в порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<5.1> Кристалл типа В моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, имеющий дифракционные пики при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,3°, 9,7°, 10,1°, 17,9°, 19,0°, 19,4°, 23,4°, 26,3°, 27,3° и 32,0° в порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<5.2> Кристалл типа В моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, картина порошковой рентгеновской дифракции которого приведена на Фигуре 3 при порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<5.3> Кристалл типа В моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, характеризующийся пиками при химических сдвигах (δ±0,5 м.д.) 160,1 м.д., 133,4 м.д. и 130,7 м.д. в ¹³С спектре твердотельного ЯМР с глицином (176,03 м.д.) в качестве внешнего стандарта.

<6> Кристалл типа С моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, имеющий дифракционные пики при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,0°, 7,7° и 16,9° в порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<6.1> Кристалл типа С моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, имеющий дифракционные пики при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,0°, 7,7°, 9,7°, 11,4°, 15,8°, 16,9°, 18,1°, 23,2°, 25,4° и 27,6° в порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<6.2> Кристалл типа С моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, имеющий картину порошковой рентгеновской дифракции, как приведено на Фигуре 4, при порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<6.3> Кристалл типа С моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, характеризующийся пиками при химических сдвигах (δ±0,5 м.д.) 159,6 м.д., 127,6 м.д. и 38,9 м.д. в ¹³С спектре твердотельного ЯМР с глицином (176,03 м.д.) в качестве внешнего стандарта.

<7> Кристалл типа D моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, имеющий дифракционные пики при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,6°, 14,6° и 26,4° в порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<7.1> Кристалл типа D моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, имеющий дифракционные пики при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,6°, 14,6°, 16,1°, 20,5°, 21,0°, 23,0°, 24,5°, 26,4°, 28,0° и 32,5° в порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<7.2> Кристалл типа D моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, картина порошковой рентгеновской дифракции которого приведена на Фигуре 5 при порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<8> Кристалл типа Е моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, имеющий дифракционные пики при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,4°, 11,3° и 27,3° в порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<8.1> Кристалл типа Е моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, имеющий дифракционные пики при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,4°, 11,3°, 15,7°, 18,0°, 19,2°, 22,8°, 24,6°, 25,4°, 26,0° и 27,3° в порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<8.2> Кристалл типа Е моногидрохлорида соединения (I), имеющий картину порошковой рентгеновской дифракции, как приведено на Фигуре 6, при порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<9> Кристалл типа F моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, имеющий дифракционные пики при углах дифракции (2θ±0,2°) 7,3°, 9,3° и 10,7° в порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<9.1> Кристалл типа F моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, имеющий дифракционные пики при углах дифракции (2θ±0,2°) 5,9°, 7,3°, 9,3°, 10,7°, 13,8°, 15,6°, 16,4°, 18,7°, 25,1° и 26,8° в порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<9.2> Кристалл типа F моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, имеющий картину порошковой рентгеновской дифракции, как приведено на Фигуре 7, при порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<10> Кристалл моногидробромида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, имеющий дифракционные пики при углах дифракции (2θ±0,2°) 7,8°, 24,5° и 25,2° в порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<10.1> Кристалл моногидробромида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, имеющий дифракционные пики при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,0°, 7,8°, 10,0°, 11,7°, 17,8°, 20,8°, 23,5°, 24,5°, 25,2° и 27,3° в порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<10.2> Кристалл моногидробромида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, имеющий картину порошковой рентгеновской дифракции, как приведено на Фигуре 8, при порошковой рентгеновской дифракции с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

<11> Кристалл типа А моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, характеризующийся пиком Рамановского сдвига (± 2 см^-1) при 587 см^-1, полученным с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния.

<12> Кристалл типа А моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, характеризующийся пиками Рамановского сдвига (± 2 см^-1) при 587 см^-1, 1428 см^-1 и 1493 см^-1, полученными с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния.

<13> Кристалл типа А моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, характеризующийся пиками Рамановского сдвига ( 2 см^-1) при 587 см^-1, 763 см^-1, 1428 см^-1, 1493 см^-1 и 1688 см^-1, полученными с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния.

<14> Кристалл типа А моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, характеризующийся пиками Рамановского сдвига (± 2 см^-1) при 409 см^-1, 587 см^-1, 763 см^-1, 976 см^-1, 1428 см^-1, 1493 см^-1 и 1688 см^-1, полученными с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния.

<15> Кристалл типа А моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, характеризующийся спектром, приведенным на фигуре 19 и полученным с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния.

<16> Фармацевтический состав, содержащий соль согласно <1> или кристалл согласно любому из <2> - <15>.

<17> Фармацевтический состав согласно <16>, который является средством, активирующим холинергические нейроны.

<18> Фармацевтический состав согласно <16>, который является средством, предотвращающим повреждение холинергических нейронов.

<19> Фармацевтический состав согласно <16> для лечения когнитивной дисфункции.

<20> Терапевтическое средство для лечения когнитивной дисфункции, содержащее соль согласно <1> или кристалл согласно любому из <2> - <15>.

<21> Способ лечения когнитивной дисфункции, включающий введение пациенту соли согласно <1> или кристалла согласно любому из <2> - <15>.

<22> Соль согласно <1> или кристалл согласно любому из <2> - <15> для применения в лечении когнитивной дисфункции.

<23> Применение соли согласно <1> или кристалла согласно любому из <2> - <15> в производстве терапевтического средства для лечения когнитивной дисфункции.

<24> Терапевтическое средство для лечения болезни Альцгеймера, содержащее соль согласно <1> или кристалл согласно любому из <2> - <15>.

<25> Способ лечения болезни Альцгеймера, включающий введение пациенту соли согласно <1> или кристалла согласно любому из <2> - <15>.

<26> Соль согласно <1> или кристалл согласно любому из <2> - <15> для применения в лечении болезни Альцгеймера.

<27> Применение соли согласно <1> или кристалла согласно любому из <2> - <15> в производстве терапевтического средства для лечения болезни Альцгеймера.

<28> Терапевтическое средство для лечения деменции с тельцами Леви, содержащее соль согласно <1> или кристалл согласно любому из <2> - <15>.

<29> Способ лечения деменции с тельцами Леви, включающий введение пациенту соли согласно <1> или кристалла согласно любому из <2> - <15>.

<30> Соль согласно <1> или кристалл согласно любому из <2> - <15> для применения в лечении деменции с тельцами Леви.

<31> Применение соли согласно <1> или кристалла согласно любому из <2> - <15> в производстве терапевтического средства для лечения деменции с тельцами Леви.

<32> Терапевтическое средство для лечения болезни Паркинсона с деменцией, содержащее соль согласно <1> или кристалл согласно любому из <2> - <15>.

<33> Способ лечения болезни Паркинсона с деменцией, включающий введение пациенту соли согласно <1> или кристалла согласно любому из <2> - <15>.

<34> Соль согласно <1> или кристалл согласно любому из <2> - <15> для применения в лечении болезни Паркинсона с деменцией.

<35> Применение соли согласно <1> или кристалла согласно любому из <2> - <15> в производстве терапевтического средства для лечения болезни Паркинсона с деменцией.

Полезные эффекты настоящего изобретения

[0014] В соответствии с настоящим изобретением можно получать соли соединения (I) и их кристаллы, в отношении которых ожидается, что их можно использовать в качестве лекарственных субстанций фармацевтических препаратов, и что они обладают хорошими физическими свойствами.

Краткое описание графических материалов

[0015]

На фигуре 1 представлена картина порошковой рентгеновской дифракции кристалла соединения (I), полученного в примере 1. По оси абсцисс отложен угол дифракции (2θ), а по оси ординат отложена интенсивность пиков.

На фигуре 2 представлена картина порошковой рентгеновской дифракции кристалла типа А моногидрохлорида соединения (I), полученного в примере 2. По оси абсцисс отложен угол дифракции (2θ), а по оси ординат отложена интенсивность пиков.

На фигуре 3 представлена картина порошковой рентгеновской дифракции кристалла типа В моногидрохлорида соединения (I), полученного в примере 4. По оси абсцисс отложен угол дифракции (2θ), а по оси ординат отложена интенсивность пиков.

На фигуре 4 представлена картина порошковой рентгеновской дифракции кристалла типа С моногидрохлорида соединения (I), полученного в примере 3. По оси абсцисс отложен угол дифракции (2θ), а по оси ординат отложена интенсивность пиков.

На фигуре 5 представлена картина порошковой рентгеновской дифракции кристалла типа D моногидрохлорида соединения (I), полученного в примере 5. По оси абсцисс отложен угол дифракции (2θ), а по оси ординат отложена интенсивность пиков.

На фигуре 6 представлена картина порошковой рентгеновской дифракции кристалла типа Е моногидрохлорида соединения (I), полученного в примере 6. По оси абсцисс отложен угол дифракции (2θ), а по оси ординат отложена интенсивность пиков.

На фигуре 7 показана картина порошковой рентгеновской дифракции кристалла типа F моногидрохлорида соединения (I), полученного в примере 7. По оси абсцисс отложен угол дифракции (2θ), а по оси ординат отложена интенсивность пиков.

На фигуре 8 представлена картина порошковой рентгеновской дифракции кристалла моногидробромида соединения (I), полученного в примере 8. По оси абсцисс отложен угол дифракции (2θ), а по оси ординат отложена интенсивность пиков.

На фигуре 9 представлен ¹³C спектр твердотельного ЯМР кристалла типа А моногидрохлорида соединения (I), полученного в примере 2. По оси абсцисс отложен химический сдвиг (δ), а по оси ординат отложена интенсивность пиков.

На фигуре 10 представлен ¹³С спектр твердотельного ЯМР кристалла типа B моногидрохлорида соединения (I), полученного в примере 4. По оси абсцисс отложен химический сдвиг (δ), а по оси ординат отложена интенсивность пиков.

На фигуре 11 представлен ¹³C спектр твердотельного ЯМР кристалла типа С моногидрохлорида соединения (I), полученного в примере 3. По оси абсцисс отложен химический сдвиг (δ), а по оси ординат отложена интенсивность пиков.

На фигуре 12 представлены кривые термического анализа ТГ-ДТА кристалла типа А моногидрохлорида соединения (I), полученного в примере 2. По оси абсцисс показана температура, по оси ординат слева показано изменение веса при ТГ, а по оси ординат справа показан тепловой поток при ДТА.

На фигуре 13 представлены кривые термического анализа ТГ-ДТА кристалла типа В моногидрохлорида соединения (I), полученного в примере 4. По оси абсцисс показана температура, по оси ординат слева показано изменение веса при ТГ, а по оси ординат справа показан тепловой поток при ДТА.

На фигуре 14 представлены кривые термического анализа ТГ-ДТА кристалла типа С моногидрохлорида соединения (I), полученного в примере 3. По оси абсцисс показана температура, по оси ординат слева показано изменение веса при ТГ, а по оси ординат справа показан тепловой поток при ДТА.

На фигуре 15 представлены кривые термического анализа ТГ-ДТА кристалла типа D моногидрохлорида соединения (I), полученного в примере 5. По оси абсцисс показана температура, по оси ординат слева показано изменение веса при ТГ, а по оси ординат справа показан тепловой поток при ДТА.

На фигуре 16 представлены кривые термического анализа ТГ-ДТА кристалла типа Е моногидрохлорида соединения (I), полученного в примере 6. По оси абсцисс показана температура, по оси ординат слева показано изменение веса при ТГ, а по оси ординат справа показан тепловой поток при ДТА.

На фигуре 17 представлены кривые термического анализа ТГ-ДТА кристалла типа F моногидрохлорида соединения (I), полученного в примере 7. По оси абсцисс показана температура, по оси ординат слева показано изменение веса при ТГ, а по оси ординат справа показан тепловой поток при ДТА.

На фигуре 18 представлены кривые термического анализа ТГ-ДТА кристалла моногидробромида соединения (I), полученного в примере 8. По оси абсцисс показана температура, по оси ординат слева показано изменение веса при ТГ, а по оси ординат справа показан тепловой поток при ДТА.

На Фигуре 19 представлен спектр комбинационного рассеяния кристаллов типа А моногидрохлорида соединения (I), полученного в Примере 2.

Описание вариантов осуществления

[0016] Далее будут подробно описаны соли соединения (I) настоящего изобретения, их кристаллы и способ их получения.

[0017] Используемый здесь термин «соль» относится к химическому веществу, состоящему из соединения (I) в качестве основного компонента и определенного количества эквивалентов кислоты по отношению к соединению (I).

[0018] Примеры используемой здесь «соли» включают соли неорганических кислот, соли органических кислот и соли кислых аминокислот, и среди них предпочтительными являются фармацевтически приемлемые соли.

[0019] Примеры солей неорганических кислот включают соли хлористоводородной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, азотной кислоты и фосфорной кислоты; и примеры солей органических кислот включают соли органических карбоновых кислот, таких как уксусная кислота, янтарная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, винная кислота, яблочная кислота, лимонная кислота, молочная кислота, стеариновая кислота и бензойная кислота, а также соли органических сульфоновых кислот, таких как метансульфокислота (мезилат), этансульфокислота, бензолсульфокислота и п-толуолсульфокислота (тозилат); и среди них предпочтительны хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота и фосфорная кислота.

[0020] Примеры солей кислых аминокислот включают соли аспарагиновой кислоты и глутаминовой кислоты.

[0021] Соль настоящего изобретения может быть в ангидридной, гидратированной или сольватированной форме. Гидрат или сольват в контексте настоящего описания относятся к твердому веществу, которое образуют соединение (I) или его соль и молекулы воды или молекулы растворителя; это твердое вещество может быть кристаллом; примеры растворителя в сольвате включают растворители на основе кетонов, такие как ацетон, 2-бутанон и циклогексанон; растворители на основе сложных эфиров, такие как метилацетат и этилацетат; растворители на основе простых эфиров, такие как 1,2-диметоксиэтан и трет-бутилметиловый эфир; растворители на спиртовой основе, такие как метанол, этанол, 1-пропанол и изопропанол; полярные растворители, такие как N-метил-2-пирролидон, N, N-диметилформамид и диметилсульфоксид. Число молекул воды или молекул растворителя, приходящееся на соединение (I) или его соль, особенно не ограничено, и, например, может составлять одну молекулу или две молекулы.

[0022] Используемый здесь термин «кристалл» относится к кристаллу ангидридной или гидратированной формы соединения (I) или его соли.

[0023] В контексте настоящего описания предпочтительные примеры кристаллов соединения (I) и гидрохлорида и гидробромида соединения (I) включают:

кристалл соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 9,0°, 11,1° и 23,6° в исследовании методом порошковой рентгеновской дифракции;

кристалл соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 9,0°, 11,1°, 14,5°, 18,1°, 20,0°, 21,9°, 23,6°, 24,4°, 24,9° и 28,5° в исследовании методом порошковой рентгеновской дифракции;

кристалл типа А моногидрохлорида соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 11,6°, 20,8° и 25,7° в исследовании методом порошковой рентгеновской дифракции;

кристалл типа А моногидрохлорида соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 6.1°, 7,8°, 11,6°, 16,2°, 19,9°, 20,8°, 25,2°, 25,7°, 26,9° и 29,9° в исследовании методом порошковой рентгеновской дифракции;

кристалл типа А моногидрохлорида соединения (I), характеризующийся пиками при химических сдвигах (δ±0,5 м.д.) 164,0 м.д., 129,6 м.д. и 36,5 м.д. в ¹³С спектре твердотельного ЯМР;

кристалл типа А моногидрохлорида соединения (I), характеризующийся пиком рамановского сдвига (± 2 см^-1) при 587 см^-1, полученным с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния;

кристалл типа А моногидрохлорида соединения (I), характеризующийся пиками рамановского сдвига (± 2 см^-1) при 587 см^-1, 1428 см^-1 и 1493 см^-1, полученными с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния;

кристалл типа А моногидрохлорида соединения (I), характеризующийся пиками рамановского сдвига (± 2 см^-1) при 587 см^-1, 763 см^-1, 1428 см^-1, 1493 см^-1 и 1688 см^-1, полученным с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния;

кристалл типа А моногидрохлорида соединения (I), характеризующийся пиками рамановского сдвига (± 2 см^-1) при 409 см^-1, 587 см^-1, 763 см^-1, 976 см^-1, 1428 см^-1, 1493 см^-1 и 1688 см^-1, полученными с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния;

кристалл типа А моногидрохлорида соединения (I), по существу характеризующийся спектром, приведенным на фигуре 19 и полученным с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния;

кристалл типа В моногидрохлорида соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 9,7°, 10,1° и 17,9° в исследовании методом порошковой рентгеновской дифракции;

кристалл типа В моногидрохлорида соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,3°, 9,7°, 10,1°, 17,9°, 19,0°, 19,4°, 23,4°, 26,3°, 27,3° и 32,0° в исследовании методом порошковой рентгеновской дифракции;

кристалл типа В моногидрохлорида соединения (I), характеризующийся пиками при химических сдвигах (δ±0,5 м.д.) 160,1 м.д., 133,4 м.д. и 130,7 м.д. в ¹³С спектре твердотельного ЯМР;

кристалл типа С моногидрохлорида соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,0°, 7,7° и 16,9° в исследовании методом порошковой рентгеновской дифракции;

кристалл типа С моногидрохлорида соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,0°, 7,7°, 9,7°, 11,4°, 15,8°, 16,9°, 18,1°, 23,2°, 25,4° и 27,6° в исследовании методом порошковой рентгеновской дифракции;

кристалл типа С моногидрохлорида соединения (I), характеризующийся пиками при химических сдвигах (δ±0,5 м.д.) 159,6 м.д., 127,6 м.д. и 38,9 м.д. в ¹³С спектре твердотельного ЯМР;

кристалл типа D моногидрохлорида соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,6°, 14,6° и 26,4° в исследовании методом порошковой рентгеновской дифракции;

кристалл типа D моногидрохлорида соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,6°, 14,6°, 16,1°, 20,5°, 21,0°, 23,0°, 24,5°, 26,4°, 28,0° и 32,5° в исследовании методом порошковой рентгеновской дифракции;

кристалл типа Е моногидрохлорида соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,4°, 11,3° и 27,3° в исследовании методом порошковой рентгеновской дифракции;

кристалл типа Е моногидрохлорида соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,4°, 11,3°, 15,7°, 18,0°, 19,2°, 22,8°, 24,6°, 25,4°, 26,0° и 27,3° в исследовании методом порошковой рентгеновской дифракции;

кристалл типа F моногидрохлорида соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 7,3°, 9,3° и 10,7° в исследовании методом порошковой рентгеновской дифракции;

кристалл типа F моногидрохлорида соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 5,9°, 7,3°, 9,3°, 10,7°, 13,8°, 15,6°, 16,4°, 18,7°, 25,1° и 26,8° в исследовании методом порошковой рентгеновской дифракции;

кристалл моногидробромида соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 7,8°, 24,5° и 25,2° в исследовании методом порошковой рентгеновской дифракции; и

кристалл моногидробромида соединения (I), характеризующийся дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,0°, 7,8°, 10,0°, 11,7°, 17,8°, 20,8°, 23,5°, 24,5°, 25,2° и 27,3° в исследовании методом порошковой рентгеновской дифракции;

[0024] Дифракционные пики порошковой рентгеновской дифракции, химические сдвиги в ¹³С спектре твердотельного ЯМР и пики Рамановского сдвига, полученные с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния, описанные выше, являются уникальными для каждого из кристалла соединения (I), кристаллов типов от A до F моногидрохлорида соединения (I) и кристалла моногидробромида соединения (I), и они являются характерными пиками для кристаллов.

[0025] Как правило, углы дифракции (2θ) порошковой рентгеновской дифракции могут содержать погрешности в пределах±0,2°, поэтому необходимо учитывать, что значения углов дифракции, описанные выше, включают числовые значения в пределах примерно±0,2°. Таким образом, не только кристаллы, у которых углы дифракции пиков при порошковой рентгеновской дифракции полностью совпадают, но и кристаллы, углы дифракции пиков которых совпадают с погрешностью примерно±0,2°, являются одинаковыми в определенном соединении или его соли и включены в настоящее изобретение.

[0026] В данном контексте, например, выражение «имеющий дифракционный пик при угле дифракции (2θ±0,2°) 9,0°» означает «наличие дифракционного пика при угле дифракции (2θ) от 8,8° до 9,2°", и то же самое относится к случаю других углов дифракции.

[0027] В общем, даже когда кристаллическая форма одинакова, интенсивность пика или полуширина углов дифракции (2θ) в порошковой рентгеновской дифракции различается для каждого измерения в зависимости от различных условий измерения и разницы в размере и форме частиц кристаллов порошка, используемых в качестве образца для измерения, и получить постоянную интенсивность пика или полуширину получается не всегда. Следовательно, при сравнении картин порошковой рентгеновской дифракции, если наблюдается разница в интенсивности или полуширине пика при одном и том же угле дифракции (2θ), то это не означает, что эта разница вызвана различием кристаллических форм. Поэтому это означает, что кристалл, характеризующийся картиной порошковой рентгеновской дифракции, которая отличается указанным образом от дифракционных пиков, характерных для конкретного кристалла настоящего изобретения, имеет такую же кристаллическую форму, что и кристалл настоящего изобретения. Кроме того, в данном контексте выражение «характеризующийся картиной порошковой рентгеновской дифракции, приведенной на фигуре 1» означает, что весь кристалл, демонстрирующий картину порошковой рентгеновской дифракции, приведенную на фигуре 1, является тем же кристаллом, что и кристалл настоящего изобретения, не только в том случае, когда картина порошковой рентгеновской дифракции, имеющая характерные дифракционные пики, совпадает с картиной порошковой рентгеновской дифракции, приведенной на фигуре 1, в пределах погрешности±0,2°, но также и в случае порошковой дифракционной картины, имеющей отличающиеся интенсивность или полуширину пика, но при этом имеющие характерные углы дифракции, которые соответствуют картине порошковой рентгеновской дифракции, приведенной на фигуре 1, в пределах погрешности±0,2°.

[0028] Используемое здесь выражение «химические сдвиги (δ±0,5 м.д.) 164,0 м.д., 129,6 м.д. и 36,5 м.д.» означает «характеризуются пиками, по существу эквивалентными химическим сдвигам (δ±0,5 м.д.) 164,0 м.д., 129,6 м.д. и 36,5 м.д., если получение измерений ¹³С спектра твердотельного ЯМР проводят в обычных условиях измерения или в условиях, по существу, таких же, как в настоящем описании».

[0029] В общем случае, при определении того, «характеризуются по существу эквивалентными пиками» или нет, необходимо учитывать, что химический сдвиг δ в ¹³С спектре твердотельного ЯМР может содержать погрешность в пределах±0,5 м.д., поэтому значения химических сдвигов, описанные выше, включают числовые значения в пределах примерно±0,5 м.д. Таким образом, не только кристаллы, химические сдвиги которых в ¹³С спектрах твердотельного ЯМР идеально совпадают, но также кристаллы, химические сдвиги которых совпадают с погрешностью примерно±0,5 м.д., включены в настоящее изобретение. Следовательно, в данном контексте, например, «характеризующийся пиком при химическом сдвиге (δ±0,5 м.д.) 164,0 м.д.» означает наличие пика при химическом сдвиге (δ) в диапазоне от 163,5 до 164,5 м.д., и то же самое относится к случаю других химических сдвигов в ¹³С спектре твердотельного ЯМР.

[0030] Как правило, пики рамановского сдвига (см^-1), полученные с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния, могут иметь погрешность в пределах±2 см^-1, так что значения пиков, описанные выше, должны рассматриваться как включающие числовые значения в пределах примерно±2 см^-1. Таким образом, не только кристаллы, у которых пики рамановского сдвига, полученные с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния, идеально совпадают, но также и кристаллы, у которых пики рамановского сдвига совпадают с погрешностью примерно±2 см^-1, являются одинаковыми в определенном соединении или его соли и включены в настоящее изобретение.

[0031] Используемое здесь, например, выражение «характеризующийся пиком рамановского сдвига (± 2 см^-1) при 587 см^-1, полученным с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния» означает «характеризующийся пиком рамановского сдвига при 585 см^-1 до 589 см^-1, полученным с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния», и то же самое относится к случаю других рамановских сдвигов.

[0032] В общем случае, даже когда кристаллическая форма одинакова, интенсивность пиков или полуширина рамановского сдвига, полученные с помощью измерения спектроскопии комбинационного рассеяния, различаются при каждом измерении в зависимости от различных условий измерения и вариаций размера и формы частиц кристаллов порошка, используемого в качестве образца для измерения, при этом одинаковую интенсивность или полуширину пика получают не всегда. Следовательно, при сравнении измерений спектроскопии комбинационного рассеяния, если наблюдается разница в интенсивности или полуширине пика одного и того же пика рамановского сдвига (см^-1), то это не означает, что эта разница вызвана различием кристаллических форм. Таким образом, это означает, что кристалл, характеризующийся спектром комбинационного рассеяния с таким отличием от пиков рамановского сдвига, характерных для определенного кристалла настоящего изобретения, имеет такую же кристаллическую форму, что и кристалл настоящего изобретения. Кроме того, в контексте настоящего описания выражение «характеризуется спектром, приведенным на фигуре 19, полученным с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния» означает, что весь кристалл, демонстрирующий спектр комбинационного рассеяния, приведенный на фигуре 19, является таким же кристаллом, что и кристалл настоящего изобретения, не только в случае, где спектр комбинационного рассеяния с характерными пиками рамановского сдвига (см^-1) соответствует спектру комбинационного рассеяния, приведенному на фигуре 19, в пределах ошибки±2 см^-1, но также и в случае спектра комбинационного рассеяния, имеющего отличающиеся интенсивности или полуширины пиков при наличии характерных пиков рамановского сдвига, которые совпадают в пределах ошибки±2 см^-1.

[0033] Далее описаны способы получения солей соединения (I), кристаллов и т.п., которые представляют собой один вариант осуществления настоящего изобретения.

[0034] Способ получения соединения (I)

Соединение (I) можно получать способами, хорошо известными специалистам в данной области. Например, соединение (I) можно синтезировать способом, описанным в сравнительном примере, описанном ниже.

[0035] Способ получения соли соединения (I)

Соли соединения (I) согласно настоящему изобретению можно получать способами получения обычных солей. В частности, соли можно получать, например, путем суспендирования или растворения соединения (I) в растворителе при нагревании при необходимости, а затем добавления кислоты в полученную суспензию или раствор с последующим перемешиванием или выдержкой смеси при комнатной температуре или путем охлаждения в течение периода от нескольких минут до нескольких дней. Используя эти способы получения, соли соединения (I) можно получать в кристаллической или аморфной формах. Кроме того, дополнительно к этим способам получения, аморфную форму можно получать путем выполнения такой операции, как лиофилизация, если это необходимо. Примеры используемого здесь растворителя включают растворители на спиртовой основе, такие как этанол, 1-пропанол и изопропанол; ацетонитрил; растворители на основе кетонов, такие как ацетон и 2-бутанон; растворители на основе сложных эфиров, такие как этилацетат; растворители на основе насыщенных углеводородов, такие как гексан и гептан; растворители на основе простых эфиров, такие как трет-бутилметиловый эфир и вода. Эти растворители можно использовать по отдельности или в комбинации двух или более из них.

[0036] Способ получения кристалла соединения (I) или его соли

Кристалл соединения (I) или его соли можно получать вышеуказанным способом получения соединения (I) или способом получения его соли, или можно получать путем нагревания и растворения соединения (I) или его соли в растворителе, а затем охлаждения полученного раствора при перемешивании для осуществления кристаллизации.

[0037] Соединение (I) или его соль, используемые для кристаллизации, может иметь любую форму, то есть сольватированную, или гидратированную, или ангидридную, аморфную или кристаллическую формы (включая форму, состоящую из множества полиморфных кристаллов), или их смесь.

[0038] Примеры растворителя, используемого для кристаллизации, включают растворители на спиртовой основе, такие как метанол, этанол, изопропанол и 1-пропанол; ацетонитрил; растворители на основе амидов, такие как N, N-диметилформамид; растворители на основе сложных эфиров, такие как этилацетат; растворители на основе насыщенных углеводородов, такие как гексан и гептан; растворители на основе кетонов, такие как ацетон и 2-бутанон; растворители на основе простых эфиров, такие как трет-бутилметиловый эфир и вода. Эти растворители можно использовать по отдельности или в комбинации двух или более из них.

[0039] Количество используемого растворителя можно выбирать соответствующим образом при условии, что количество, способное растворять соединение (I) или его соль при нагревании, или количество, которое позволяет перемешивать суспензию, является нижним пределом, а количество, при котором выход кристалла существенно не снижается, является верхним пределом.

[0040] В ходе кристаллизации затравочный кристалл (например, кристалл соединения (I) или его соли, который требуется получить) можно вносить или не вносить. Температура, при которой вносят затравочный кристалл, специально не ограничивается и предпочтительно составляет от 0 до 80°С.

[0041] Температуру нагревания и растворения соединения (I) или его соли можно выбирать подходящим образом в зависимости от растворителя так, чтобы соединение (I) или его соль могли растворяться при этой температуре, однако эта температура предпочтительно находится в пределах от 50°C до температуры начала кипения растворителя перекристаллизации с обратным холодильником, более предпочтительно, от 55 до 80°С.

[0042] Поскольку при быстром охлаждении могут образовываться кристаллы разного характера (полиморфизм), охлаждение во время кристаллизации желательно проводить при соответствующем регулировании скорости охлаждения с учетом влияния на качество и сорт кристаллов, при этом предпочтительно охлаждение со скоростью, например, от 5 до 40°С/час. Более предпочтительно охлаждение со скоростью, например, от 5 до 25°С/час.

[0043] Конечную температуру кристаллизации можно соответствующим образом выбирать в зависимости от выхода, качества и т.п. кристаллов и предпочтительно она составляет от -25 до 30°С.

[0044] Требуемый кристалл можно получать путем отделения кристаллов, полученных кристаллизацией, используя обычную процедуру фильтрации, промывки отфильтрованных кристаллов растворителем, если необходимо, и затем сушки. В качестве растворителя для промывки кристалла можно использовать растворители, аналогичные растворителям, используемым для кристаллизации. Предпочтительно, их примеры включают этанол, ацетон, 2-бутанон, этилацетат, диэтиловый эфир, трет-бутилметиловый эфир и гексан. Эти растворители можно использовать по отдельности или в комбинации двух или более из них.

[0045] Кристаллы, отделенные с помощью процедуры фильтрации, можно сушить, соответствующим образом оставляя на воздухе или в потоке азота, или путем нагревания.

[0046] Время сушки можно соответствующим образом выбирать как время, необходимое для того, чтобы содержание остаточного растворителя стало ниже заданной величины, в зависимости от производимого количества, сушильного устройства, температуры сушки и т.п. Сушку также можно проводить в потоке воздуха или при пониженном давлении. Степень понижения давления можно соответствующим образом выбирать в зависимости от производимого количества, сушильного устройства, температуры сушки и т.п. Полученный кристалл также можно оставить на воздухе после сушки, если необходимо.

[0047] Кристаллы соединения (I) и соли соединения (I), полученные описанным выше способом, способны активировать холинергические нейроны и/или обладают нейропротекторным действием, как видно из данных об активности в описанных ниже примерах фармакологических испытаний, и существует возможность их использования в качестве средства для улучшения сниженной в результате дисфункции холинергических нейронов когнитивной способности.

[0048] [Фармацевтический состав]

Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой фармацевтический состав, содержащий кристаллы соединения (I) и фармацевтически приемлемые добавки. Фармацевтический состав можно получать путем смешивания фармацевтически приемлемых добавок с кристаллами соединения (I). Фармацевтический состав согласно настоящему изобретению можно получать в соответствии с известным способом, например, способом, описанным в General Rules for Preparations в Japanese Pharmacopoeia 17th Edition.

Фармацевтический состав согласно настоящему варианту осуществления можно подходящим в зависимости от его лекарственной формы образом вводить пациенту.

[0049] Доза соединений (I) согласно настоящему изобретению зависит от тяжести симптомов, возраста, пола, веса тела, лекарственной формы, типа соли, конкретного типа заболевания и других условий; однако, как правило, суточная доза для взрослого человека в случае перорального введения составляет от примерно 30 мкг до 10 г, предпочтительно - от 100 мкг до 5 г и более предпочтительно - от 100 мкг до 1 г; суточная доза для взрослого человека в случае инъекционного введения составляет от примерно 30 мкг до 1 г, предпочтительно - от 100 мкг до 500 мг и более предпочтительно - от 100 мкг до 300 мг; и при этом вышеуказанную дозу вводят один или несколько раз.

Примеры

[0050] Кристаллы соединения (I) настоящего изобретения можно получать, например, с помощью способов, описанных в следующих примерах, а действие соединений можно подтверждать с помощью способов, описанных в последующих примерах испытаний. Однако, это всего лишь примеры, и настоящее изобретение в любом случае не ограничено следующими конкретными примерами и может быть модифицировано без отступления от объема настоящего изобретения.

[0051] Порошковую рентгеновскую дифракцию кристаллов, полученных в следующих примерах, проводили, закрепляя полученный кристалл на предметном столике устройства для порошковой рентгеновской дифракции, и измерения проводили в любых из следующих условий.

(Условия при пропускании)

Источник рентгеновского излучения: CuKα

Напряжение: 45 кВ

Ток: 40 мА

Оптическая система: фокусирующее зеркало

Щель Соллера: 0,02°

Детектор: X'Celerator (полупроводниковый детектор)

Диапазон сканирования: 5° - 35°

Размер шага: 0,017°

Время шага сканирования: 600 сек

Держатель образца: каптонная пленка

(Условия при отражении)

Источник рентгеновского излучения: CuKα

Напряжение: 50 кВ

Ток: 300 мА

Щель: отклоняющая щель 0,5 мм, рассеивающая щель открыта, приемная щель света открыта

Детектор: сцинтилляционный счетчик

Скорость сканирования: 5°/мин

Шаг сканирования: 0,02°

Диапазон сканирования: 5° - 35°

Держатель образца: алюминиевый держатель

[0052] Образец точно взвешивали в алюминиевой кювете для образцов, и термический анализ проводили при следующих условиях.

(Условия измерений)

Атмосфера: в потоке газообразного азота (100 мл/мин)

Контроль: пустая алюминиевая кювета для образцов

Скорость повышения температуры: 10°C/мин

Шаг сканирования: 1 сек

Интервал измерения температуры: от комнатной до 320°C

[0053] В ¹³С спектр кристалла при твердотельном ЯМР измеряли путем помещения примерно 300 мг твердого образца в пробирку для образца при следующих условиях.

(Условия измерений)

Используемый прибор: Avance 400 MГц (изготовленный компанией BRUKER) с 7 мм CPMAS-датчиком (изготовленным компанией BRUKER)

Измеренные ядра: ¹³C (резонансная частота 100,6248425 MГц)

Температура измерения: комнатная температура

Импульсный режим: Измерение CPTOSS

Скорость вращения: 5000 Гц

Время повторения импульса: 3 сек

Время контакта: 1 мсек

Общее количество раз: 5120 раз

Эталонный материал: глицин (внешний стандарт: 176,03 м.д.)

[0054] Спектр комбинационного рассеяния кристаллов измеряли, помещая образец на предметный столик рамановского микроспектроскопа при следующих условиях измерения.

(Условия измерений)

Используемый прибор: Рамановский микроскоп RENISHAW с технологией Via Reflex

Длина волны лазера: 785 нм

Дифракционная решетка: 1200 линий/мм

Цель: 50 раз

Режим сканирования: непрерывный

Время экспозиции: 5 сек

Общее количество раз: 5 раз

Диапазон измерений: от 400 до 1800 см^-1 (Рамановский сдвиг)

Погрешность:±2 см^-1

[0055] Соединения, описанные со ссылками на документы и т.д., были получены в соответствии с этими документами и т.д.

[0056] Более того, сокращения, применяемые в настоящем описании, хорошо известны и понятны специалисту в данной области техники. В настоящем описании применяются следующие сокращения.

DMSO: диметилсульфоксид

IPA: изопропанол

н-: нормальный

TEA: триэтиламин

THF: тетрагидрофуран

¹H-ЯМР: спектрометрия на основе протонного ядерного магнитного резонанса

MS: масс-спектрометрия

[0057] Термин «комнатная температура» в следующих примерах и сравнительных примерах, как правило, относится к интервалу от примерно 10°C до примерно 35°C. % относится к массовой доле в процентах, если не указано иное.

[0058] Химические сдвиги на спектрах протонного ядерного магнитного резонанса обозначены в единицах δ (м.д.) относительно тетраметилсилана, а константы взаимодействия регистрируются в герцах (Гц). Структуры расщепления обозначены следующими аббревиатурами:

s: синглет; d: дублет; t: триплет; q: квартет; m: мультиплет; br.s: широкий синглет.

[0059] В реакциях с использованием микроволнового реактора в сравнительных примерах использовали Initiator (TM) или Initiator+ (TM) производства Biotage.

[0060] Что касается хроматографии, в качестве силикагеля использовали Silica Gel60, производства Merck (70-230 меш ASTM), или PSQ60B, производства Fuji Silysia Chemical Ltd., или предварительно упакованную колонку {колонка: Hi-Flash (TM) Column (силикагель), производства YAMAZEN, размер: один из S (16×60 мм), M (20×75 мм), L (26×100 мм), 2L (26×150 мм) и 3L (46×130 мм); или Biotage (TM) SNAP Ultra Silica Cartridge, производства Biotage, размер: один из 10 г, 25 г и 50 г}.

В качестве NH-силикагеля применяли CHROMATOREX NH-DM2035, производства Fuji Silysia Chemical Ltd., или применяли предварительно упакованную колонку {колонка: Hi-Flash (TM) Column (модифицированный аминогруппами силикагель), производства YAMAZEN, размер: один из S (16×60 мм), M (20×75 мм), L (26×100 мм), 2L (26×150 мм) и 3L (46×130 мм); или Presep (TM) (Luer Lock) NH2(HC), производства Wako Pure Chemical Industries, Ltd., размер: один из типа M (14 г/25 мл), типа L (34 г/70 мл), типа 2L (50 г/100 мл) и типа 3L (110 г/200 мл)}.

В качестве нейтрального оксида алюминия использовали оксид алюминия 90, активный нейтральный, 70-230 меш, Merck, E6NXX.

[0061] В качестве названий соединений, показанных ниже, за исключением обычно применяемых реагентов, использовали названия, показанные в "E-Notebook" версии 12 (PerkinElmer).

[0062] Сравнительный пример 1

Синтез 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона (в дальнейшем именуемое «соединение (I)»)

[0063]

(1) Синтез этил-2-амино-6-метил-4,5,6,7-тетрагидротиено[2,3-c]пиридин-3-карбоксилата

TEA (61,6 мл, 442 ммоль) добавляли при комнатной температуре к смеси 1-метил-4-пиперидона (CAS № 1445-73-4) (51,5 мл, 442 ммоль), этилцианоацетата (CAS № 105-56-6) (47,2 мл, 442 ммоль), серы (CAS № 7704-34-9) (14,2 г, 442 ммоль) и этанола (800 мл). Реакционную смесь перемешивали при 40°C в течение 15 часов и затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (NH-силикагель, этилацетат). Полученный концентрированный остаток растирали с этилацетатом. Осадки собирали посредством фильтрации, промывали с помощью этилацетата и высушивали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (58,4 г).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (м.д.): 1,33 (t, J=7,0 Гц, 3H), 2,44 (s, 3H), 2,62-2,70 (m, 2H), 2,79-2,88 (m, 2H), 3,37 (t, J=2,0 Гц, 2H), 4,26 (q, J=7,3 Гц, 2H), 5,97 (br. s, 2H).

МС (ионизация электрораспылением (ESI)) масса/заряд: 241 [M+H]⁺

[0064]

(2) Синтез 4-метил-3,4-дигидро-1H-тиено[2,3-e][1,4]диазепин-2,5-диона

1H,2H,4H-Тиено[2,3-d][1,3]оксазин-2,4-дион (CAS № 103979-54-0) (600 мг, 3,55 ммоль) добавляли к раствору саркозина (790 мг, 8,87 ммоль) в воде (12 мл). Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 1,5 часа. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. К реакционной смеси добавляли хлороформ и отделяли органический слой. Водный слой экстрагировали хлороформом (дважды) и этилацетатом (3 раза). Объединенный органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученное твердое вещество высушивали с получением указанного в заголовке соединения (430 мг).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (м.д.): 3,23 (s, 3H), 3,99 (s, 2H), 6,90 (d, J=5,9 Гц, 1H), 7,29 (d, J=5,7 Гц, 1H), 8,39 (br. s, 1H).

МС(ионизация электрораспылением (ESI)) масса/заряд: 197 [M+H]⁺

[0065]

(3) Синтез соединения (I)

Оксихлорид фосфора (1,43 мл, 15,3 ммоль) добавляли при комнатной температуре к смеси 4-метил-3,4-дигидро-1H-тиено[2,3-e][1,4]диазепин-2,5-диона (1,00 г, 5,10 ммоль), полученного на стадии (2), этил-2-амино-6-метил-4,5,6,7-тетрагидротиено[2,3-c]пиридин-3-карбоксилата (1,84 г, 7,64 ммоль), полученного на стадии (1), и 1,4-диоксана (30 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 минут, а затем перемешивали при 90°C в течение 2 часов. Этоксид натрия (20% раствор в этаноле, 21,7 мл, 56,1 ммоль) добавляли в течение 5 минут к реакционной смеси, охлажденной до комнатной температуры. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 часа. К реакционной смеси последовательно добавляли этилацетат, насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия и воду и отделяли органический слой. Водный слой экстрагировали этилацетатом. Объединенный органический слой высушивали над безводным сульфатом магния и фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (силикагель, 20%-50% метанол/этилацетат). Полученное твердое вещество растирали с этанолом и осадки собирали посредством фильтрации. Полученное твердое вещество промывали с помощью этанола и высушивали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (712 мг).

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ (м.д.): 2,52 (s, 3H), 2,71-2,87 (m, 2H), 3,05-3,30 (m, 5H), 3,59-3,75 (m, 2H), 4,23 (d, J=14,8 Гц, 1H), 4,57 (d, J=14,8 Гц, 1H), 7,35 (d, J=6,2 Гц, 1H), 7,39 (d, J=5,9 Гц, 1H).

МС(ионизация электрораспылением (ESI)) масса/заряд: 373 [M+H]⁺

[0066] Пример 1

Получение кристалла соединения (I)

В 1,5 л 0,3 М хлористоводородной кислоты вносили 152,08 г соединения (I) и к этому раствору добавляли 450 мл этилацетата, а затем перемешивали в течение 5 минут. Водный слой отделяли и промывали 450 мл этилацетата и нерастворимое вещество отфильтровывали. К фильтрату добавляли 100 мл 1 н. водного раствора гидроксида натрия на водяной бане при 20°C и смесь перемешивали в течение 15 минут. К смеси добавляли 350 мл 1 н. водного раствора гидроксида натрия и полученную суспензию перемешивали в течение 2 часов 30 минут. Полученные кристаллы собирали фильтрованием, промывали последовательно 300 мл, 450 мл и 300 мл воды, 300 мл, 350 мл и 300 мл этанола и сушили при пониженном давлении, получая 141,7 г указанного в заголовке кристалла.

Пик порошковой рентгеновской дифракции (метод отражения, 2θ±0,2°): 9.0°, 11,1°, 14,5°, 18,1°, 20,0°, 21,9°, 23,6°, 24,4°, 24,9°, 28,5°

Картина порошковой рентгеновской дифракции кристалла соединения (I), полученного вышеупомянутым способом, приведена на фигуре 1.

[0067] Пример 2

Получение кристалла типа A моногидрохлорида соединения (I)

В пробирку с завинчивающейся крышкой вносили 101 мг соединения (I). Сюда же добавляли 0,2 мл 1,5 М хлористоводородной кислоты и растворяли. Сюда же добавляли 1,8 мл IPA, облучали ультразвуковыми волнами, а затем перемешивали мешалкой при 40°C в течение суток. После перемешивания при комнатной температуре в течение еще 1 часа образец собирали на фильтре фильтрованием (0,2 μm), промывали с помощью 0,5 мл IPA/воды (9/1 об./об.) и сушили на воздухе в токе азота. Остаток сушили при 70°C в течение примерно 1 часа, получая указанный в заголовке кристалл (103 мг).

Пики порошковой дифракции рентгеновских лучей (метод пропускания, 2θ±0,2°): 6.1°, 7,8°, 11,6°, 16,2°, 19,9°, 20,8°, 25,2°, 25,7°, 26,9°, 29,9°

¹³C-ЯМР (100 МГц, твердотельный) δ (м.д.): 164,0, 162,5, 160,5, 153,9, 151,6, 150,7, 133,6, 131,1, 129,6, 128,4, 126,9, 125,2, 123,7, 121,3, 120,3, 119,5, 53,7, 52,0, 50,9, 44,7, 36,5, 22,6

Пики рамановского сдвига (см^-1): 409, 587, 763, 976, 1428, 1493, 1688

Картина порошковой рентгеновской дифракции кристалла типа A моногидрохлорида соединения (I), полученного вышеупомянутым способом, приведена на фигуре 2, ¹³С спектр твердотельного ЯМР приведен на фигуре 9, кривые термического анализа ТГ-ДТА приведены на фигуре 12, а спектр комбинационного рассеяния показан на фигуре 19.

[0068] Пример 3

Получение кристалла типа C моногидрохлорида соединения (I)

В пробирку с завинчивающейся крышкой вносили 1020 мг соединения (I). 1,5 эквивалента (353 мкл) хлористоводородной кислоты растворяли в 20 мл метанола и этот раствор добавляли к образцу. Образец перемешивали мешалкой при комнатной температуре в течение 2 суток. Образец собирали на фильтре фильтрованием (0,2 мкм). Полученное твердое вещество сушили при пониженном давлении в течение примерно 2 часов, затем сушили при 70°C в течение 1 часа, получая указанный в заголовке кристалл (1048 мг).

Пик порошковой рентгеновской дифракции (метод пропускания, 2θ±0,2°): 6.0°, 7,7°, 9,7°, 11,4°, 15,8°, 16,9°, 18,1°, 23,2°, 25,4°, 27,6°

¹³C-ЯМР (100 МГц, твердотельный) δ (м.д.): 162,5, 160,5, 159,6, 153,8, 151,1, 134,1, 131,6, 128,4, 127,6, 125,6, 120,0, 54,0, 52,6, 50,9, 44,3, 43,5, 38,9, 32,3, 22,4

Картина порошковой рентгеновской дифракции кристалла типа С моногидрохлорида соединения (I), полученного вышеупомянутым способом, приведена на фигуре 4, ¹³С спектр твердотельного ЯМР приведен на фигуре 11, и кривые термического анализа ТГ-ДТА приведены на фигуре 14.

[0069] Пример 4

Получение кристалла типа В моногидрохлорида соединения (I).

В платиновый тигель вносили 303 мг кристаллов гидрохлорида, полученного в примере 3, и нагревали при 160°C в течение 15 минут, получая указанный в заголовке кристалл (293 мг).

Пик порошковой рентгеновской дифракции (метод пропускания, 2θ±0,2°): 6.3°, 9,7°, 10,1°, 17,9°, 19,0°, 19,4°, 23,4°, 26,3°, 27,3°, 32,0°

¹³C-ЯМР (100 МГц, твердотельный) δ (м.д.): 162,0, 160,1, 153,8, 151,1, 133,4, 130,7, 128,3, 126,9, 125,6, 120,3, 51,2, 43,6, 32,3, 22,3

Картина порошковой рентгеновской дифракции кристалла типа В моногидрохлорида соединения (I), полученного вышеупомянутым способом, приведена на фигуре 3, ¹³С спектр твердотельного ЯМР приведен на фигуре 10, и кривые термического анализа ТГ-ДТА приведены на фигуре 13.

[0070] Пример 5

Получение кристалла типа D моногидрохлорида соединения (I)

В пробирку с завинчивающейся крышкой вносили 227 мг смеси кристаллов гидрохлорида, полученных в примерах 2 и 3, и 8 мл этанола. Смесь перемешивали мешалкой при 65°С. Примерно через 1 час смесь облучали ультразвуковыми волнами и перемешивали при той же температуре в течение одних суток. Образец собирали на фильтре фильтрованием (0,2 мкм), получая указанный в заголовке кристалл (203 мг).

Пик порошковой рентгеновской дифракции (метод пропускания, 2θ±0,2°): 6,6°, 14,6°, 16,1°, 20,5°, 21,0°, 23,0°, 24,5°, 26,4°, 28,0°, 32,5°

Картина порошковой рентгеновской дифракции кристалла типа D моногидрохлорида соединения (I), полученного вышеупомянутым способом, приведена на фигуре 5, а кривые ТГ-ДТА термического анализа приведены на фигуре 15.

[0071] Пример 6

Получение кристалла типа Е моногидрохлорида соединения (I)

В пробирку с завинчивающейся крышкой вносили 108 мг кристаллов гидрохлорида, полученного в примере 2, и 5 мл ацетонитрила. Смесь перемешивали мешалкой при 60°C в течение суток, и образец собирали на фильтре фильтрованием (0,2 мкм). Полученное твердое вещество и 5 мл ацетонитрила снова вносили в пробирку с завинчивающейся крышкой и перемешивали мешалкой при 60°C в течение суток. Образец собирали на фильтре фильтрованием (0,2 мкм) в потоке азота, получая указанный в заголовке кристалл (89,7 мг).

Пик порошковой рентгеновской дифракции (метод пропускания, 2θ±0,2°): 6.4°, 11,3°, 15,7°, 18,0°, 19,2°, 22,8°, 24,6°, 25,4°, 26,0°, 27,3°

Картина порошковой рентгеновской дифракции кристалла типа Е моногидрохлорида соединения (I), полученного вышеупомянутым способом, приведена на фигуре 6, а кривые ТГ-ДТА термического анализа приведены на фигуре 16.

[0072] Пример 7

Получение кристалла типа F моногидрохлорида соединения (I)

В пробирку с завинчивающейся крышкой вносили 101 мг кристаллов гидрохлорида, полученного в примере 2, и 5 мл этанола. Смесь перемешивали мешалкой при 60°C в течение суток. Образец собирали на фильтре фильтрованием (0,2 мкм). Полученное твердое вещество и 5 мл этанола снова вносили в пробирку с завинчивающейся крышкой и перемешивали мешалкой при 60°C в течение 4 часов. Образец собирали на фильтре фильтрованием (0,2 мкм), получая указанный в заголовке кристалл (75,0 мг).

Пик порошковой рентгеновской дифракции (метод пропускания, 2θ±0,2°): 5.9°, 7,3°, 9,3°, 10,7°, 13,8°, 15,6°, 16,4°, 18,7°, 25,1°, 26,8°

Картина порошковой рентгеновской дифракции кристалла типа F моногидрохлорида соединения (I), полученного вышеупомянутым способом, приведена на фигуре 7, а кривые ТГ-ДТА термического анализа приведены на фигуре 17.

[0073] Пример 8

Получение кристалла моногидробромида соединения (I)

В пробирку с завинчивающейся крышкой вносили 933 мг соединения (I). 1,5 эквивалента (434 мкл) бромистоводородной кислоты растворяли в 20 мл метанола и этот раствор добавляли к образцу. Смесь перемешивали мешалкой при комнатной температуре в течение 3 дней. Образец собирали на фильтре фильтрованием (0,2 мкм) и сушили при 60°С в течение 1 часа, получая указанный в заголовке кристалл (1111 мг).

Пик порошковой рентгеновской дифракции (метод пропускания, 2θ±0,2°): 6.0°, 7,8°, 10,0°, 11,7°, 17,8°, 20,8°, 23,5°, 24,5°, 25,2°, 27,3°

Картина порошковой рентгеновской дифракции моногидробромида соединения (I), полученного вышеупомянутым способом, приведена на фигуре 8, а кривые ТГ-ДТА термического анализа приведены на фигуре 18.

[0074] <Примеры фармакологических исследований>

Измерение высвобождения ацетилхолина (ACh) в системе первичной культуры нейронов перегородки крыс в присутствии NGF

(1) Первичная культура нейронов перегородки крыс

Выделяли область перегородки у крыс Спрег-Доули (SD) (Charles River Laboratories Japan, Inc.) в гестационном возрасте 18 дней и культивировали. В частности, плоды в стерильных условиях удаляли у беременных крыс под анестезией изофлураном. Головной мозг извлекали из каждого плода и погружали в охлажденную льдом среду L-15 (11415-064, Thermo Fisher Scientific). Область перегородки иссекали из извлеченного головного мозга под стереоскопическим микроскопом. Иссеченную область перегородки подвергали ферментативной обработке в ферментном растворе, содержащем 0,25% трипсина (15050-065, Thermo Fisher Scientific) и 0,01% ДНКазы (D5025-150KU, Sigma), при 37°C в течение 30 минут, тем самым обеспечивая диспергирование клеток. В данном случае ферментативную реакцию останавливали с помощью добавления инактивированной лошадиной сыворотки (26050-088, Thermo Fisher Scientific). Обработанный ферментами раствор центрифугировали при 1000 об./мин. в течение 3 минут и надосадочную жидкость удаляли. К полученной клеточной массе добавляли среду в количестве 10 мл. Применяемой средой являлась среда Игла в модификации Дульбекко (044-29765, WAKO), дополненная с помощью добавки N2 (17502-048, Thermo Fisher Scientific), 1 мМ пирувата натрия (11360-070, Thermo Fisher Scientific) и пенициллина-стрептомицина (15140-1221, Thermo Fisher Scientific). Клетки в клеточной массе, в которую добавляли среду, повторно диспергировали путем аккуратного пипетирования, а затем снова центрифугировали при 1000 об./мин в течение 3 минут и надосадочную жидкость удаляли. Среду в количестве 10 мл добавляли к полученной клеточной массе и дисперсию клеток фильтровали через 40 мкм нейлоновую сетку (Cell Strainer) с удалением клеточной массы с получением тем самым суспензии нейронных клеток. Суспензию нейронных клеток разбавляли с помощью среды и 10% инактивированной бычьей сыворотки (26140-079, Thermo Fisher Scientific) и добавляли 10% инактивированной лошадиной сыворотки. После этого высевали 100 мкл/лунку суспензии в 96-луночный планшет (354461, CORNING), предварительно покрытый поли-D-лизином, так что начальная плотность культуры составляла 1,4×10⁵ клетки/см². После того, как высеянные клетки культивировали при 5% CO₂-95% воздуха в инкубаторе с температурой 37°C в течение 2 дней, всю среду заменяли 120 мкл свежей среды и затем клетки культивировали в течение 5 дней.

(2) Добавление соединения

На 7-й день культивирования соединение добавляли следующим образом. Раствор тестируемого соединения в DMSO разбавляли с помощью среды так, чтобы концентрация была в 10 раз выше, чем конечная концентрация. NGF (450-01, PEPRO TECH, INC.) приготовляли с концентрацией 0,3 нг/мл. Каждый из этих двух растворов добавляли в количестве 15 мкл/лунку и смесь хорошо смешивали. Конечная концентрация DMSO составляла 0,1% или меньше. Более того, только DMSO и NGF добавляли к контрольной группе.

(3) Измерение высвобождения ACh

Через день после добавления соединения количество высвобождаемого ACh измеряли с помощью HPLC следующим образом. Нагретый буфер добавляли при 100 мкл/лунку в лунку после того, как среду убирали, и буфер немедленно удаляли. После этого добавляли буфер, в который добавляли 10 мкм холина, 10 мкм физостигмина и 6 мМ KCl, при 120 мкл/лунку. Буфер получали путем добавления 125 мМ NaCl, 25 мМ 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновой кислоты, 1,2 мМ KH₂PO₄, 1,2 мМ MgSO₄, 2,2 мМ CaCl₂ (2H₂O) и 10 мМ глюкозы к стерилизованной воде и конечное значение pH раствора регулировали до 7,4. После инкубирования при 5% CO₂-95% воздуха 96-луночного планшета с добавленным буфером в инкубаторе при температуре 37°C в течение 40 минут, отбирали 80 мкл буфера. Раствор внутреннего стандарта IPHC (5×10^-7 М) добавляли в количестве 6 мкл к собранному буферу и буфер переносили в пробирку для ВЭЖХ и проводили исследование с помощью ВЭЖХ. Результаты представлены эффектом от каждого соединения в виде процента (% от контроля) концентрации ACh в буфере контрольной группы, и концентрация соединения в сравнительном примере 1, демонстрирующая увеличение на 20% по сравнению с концентрацией ACh в буфере контрольной группы, составляла 0,1 мкМ.

[0075] Измерение уровней экспрессии мРНК холинацетилтрансферазы (ChAT) в области перегородки у крыс

(1) Введение соединения

В данном исследовании применяли самцов крыс SD (Charles River Laboratories Japan, Inc.) с весом тела от примерно 250 до 350 г. Соединение растворяли в 0,01 моль/л хлористоводородной кислоты и вводили перорально.

(2) Отбор образцов

Через 24 часа после введения соединения всю ткань головного мозга собирали под анестезией пентобарбиталом. Выделяли медиальную перегородку из всего головного мозга на льду и замораживали с помощью жидкого азота и затем хранили при -80°C.

(3) Измерение уровней экспрессии мРНК ChAT

Для очищения РНК в данном исследовании применяли набор RNeasy Plus Mini (№ 74136: QIAGEN). Очищение РНК проводили с помощью способа, описанного в наборе. После очищения РНК измеряли общую концентрацию РНК с применением прибора QIAxpert (QIAGEN). Синтезировали кДНК с применением набора для синтеза кДНК SuperScript (R) VILO (TM) (№ 11754: Thermo Fisher Scientific). Синтез кДНК проводили с помощью способа, описанного в наборе. Синтезированную кДНК разбавляли в 4 раза водой, не содержащей РНКазы, и разбавленный раствор кДНК применяли в качестве образца. Универсальный мастер-микс для ПЦР Taqman (№4304437: Thermo Fisher Scientific), наборы для анализа экспрессии генов Taqman (R), INVENTORIED (№4331182: Thermo Fisher Scientific), воду, не содержащую РНКазы, и раствор кДНК смешивали в количестве 10 мкл, 1 мкл, 4 мкл и 5 мкл, соответственно, и полученную смесь применяли в качестве измеряемого образца раствора. Количественную полимеразную цепную реакцию (кПЦР) проводили с применением ABI PRISM (R) 7900HT (Thermo Fisher Scientific) с помощью способа с применением флуоресцентных зондов. Анализ проводили с помощью SDS 2.4 (Thermo Fisher Scientific). Результаты рассчитывали по проценту увеличения уровней экспрессии мРНК ChAT в группе введения соединения из сравнительного примера 1 по сравнению с уровнями экспрессии мРНК ChAT в группе введения носителя до 56,4% при 10 мг/кг.

[0076] Измерение концентрации ацетилхолина (ACh) в спинномозговой жидкости (CSF) крыс

(1) Предпосылки

Корреляция между увеличением и уменьшением количества нейротрансмиттеров в головном мозге и нейротрансмиттеров в спинномозговой жидкости (CSF) была выявлена в исследованиях на грызунах, и также корреляция наблюдалась у человека (Lowe S et al. Psychopharmacology 219 (2012) 959-970). Соответственно, измеряли изменения концентрации ацетилхолина в CSF, чтобы определить изменения концентрации ацетилхолина в головном мозге с помощью тестируемых соединений.

(2) Введение соединения

В данном исследовании применяли самцов крыс Fischer 344 (Charles River Laboratories Japan, Inc.) с весом тела от приблизительно 150 до 250 г. Исследуемые соединения вводили крысам перорально один раз в сутки при 10 мг/кг в течение трех дней. Применяемая среда-носитель представляла собой 0,01 моль/л раствор хлористоводородной кислоты.

(3) Отбор образцов

Через 24 часа после введения среды-носителя и тестируемых соединений собирали CSF из мозжечково-мозговой цистерны в пробирку, содержащую ингибиторы AchE, под анестезией пентобарбиталом. Собранную CSF центрифугировали при 3500 x g при 4°C в течение 10 минут и собирали надосадочную жидкость. Собранную надосадочную жидкость замораживали с помощью жидкого азота и затем хранили при -80°C.

(4) Измерение концентрации Ach с помощью ЖХ-МС

В 10 мкл CSF вносили 50 мкл ацетилхолин-d9-хлорида (ACh-d9) при конечной концентрации 0,34 нмоль/л в качестве внутреннего стандарта. Смесь пипетировали и центрифугировали при 1500 x g при 4°C в течение 10 минут. Надосадочную жидкость собирали и исследовали с помощью ЖХ/МС (NexeraX2 (MS), TSQ Altis (HPLC)), выявляя Ach как соответствующий пику иона-предшественника при значении масса/заряд, равном 146,050, и пику иона-продукта при значении масса/заряд, равном 87,071, концентрацию ACh-d9 определяли в качестве внутреннего стандарта пику иона-предшественника при значении масса/заряд, равном 155,088, и пику иона-продукта при значении масса/заряд, равном 87,000. Результаты рассчитывали по проценту (% от контроля) концентрации ACh в спинномозговой жидкости (CSF) в группе введения соединения сравнительного примера 1, увеличившейся по сравнению с концентрацией ACh в спинномозговой жидкости в группе введения носителя до 156,8%.

[0077] Оценка в трансгенной мыши с мутацией P301S, экспрессирующей тау-белок человека

(1) Введение соединения

В данном исследовании тестируемые соединения один раз в сутки в течение трех месяцев вводили перорально трансгенным мышам с мутацией P301S, экспрессирующей тау-белок человека, мыши возрастом от четырех месяцев до семи месяцев. Применяемая среда-носитель представляла собой 0,01 моль/л раствор хлористоводородной кислоты.

(2) Отбор образцов

В первый день введения (в возрасте четырех месяцев) и на следующий день после последнего введения мышей из группы с введением среды-носителя и группы с введением тестируемого соединения подвергали анестезии пентобарбиталом (50 мг/кг, i. p.) и перфузировали с помощью PBS. После перфузии передний мозг, в том числе медиальную область перегородки, собирали и фиксировали с помощью 4% раствора параформальдегида.

(3) Получение коронарного среза замороженного головного мозга

Собранный передний мозг, в том числе медиальную область перегородки, погружали в 4% раствор параформальдегида и встряхивали в течение ночи. Раствор для погружения заменяли 7,5% раствором сахарозы. Полученное погружали в 7,5% раствор сахарозы и встряхивали в течение ночи, и раствор для погружения заменяли 15% раствором сахарозы, и полученное погружали в него и встряхивали в течение ночи. Раствор для погружения заменяли 30% раствором сахарозы и полученное погружали в него и встряхивали в течение ночи. Коронарные срезы замороженного головного мозга с толщиной 30 мкм получали из переднего мозга, в том числе медиальной области перегородки, с применением микротома (Leica, SM2000R).

(4) Иммуногистохимическое исследование клеток, положительных в отношении холинацетилтрансферазы (ChAT)

Полученные коронарные срезы замороженного головного мозга окрашивали с помощью DAB (НАБОРА С DAB-СУБСТРАТОМ ПЕРОКСИДАЗЫ (Vector, SK-4100)) с применением антитела к ChAT (Santa Cruz, SC-20672) в качестве первичного антитела. Изображение среза, в том числе медиальной области перегородки, как показано в "The mouse Brain in stereotaxic coordinates" (COMPACT THIRD EDITION, Keith B.J. Franklin & George Paxinos), получали с помощью универсального флуоресцентного микроскопа (KEYENCE, BZ-X710) и ChAT-положительные клетки вблизи основной оси медиальной области перегородки подсчитывали с помощью программного обеспечения для анализа BZ (KEYENCE). Результаты представлены в виде процента количества ChAT-положительных клеток в группе с введением среды-носителя и группе с введением тестируемого соединения относительно числа ChAT-положительных клеток на момент первоначального введения (в возрасте четырех месяцев). Данные приведены как среднее значение ±SEM. Различия между группой на момент первоначального введения и группой, обработанной средой-носителем (значительные: *), анализировали с помощью непарного t-критерия, а также различия между группой, обработанной средой-носителем, и группой, обработанной соединением (значительные: ^#), анализировали с помощью непарного t-критерия. Значение P<0,05 считали статистически значимым. Статистические анализы проводили с применением GraphPad Prism версии 7.02. Результаты представлены в таблице 1.

[0078] [Таблица 1]

Группа, которую подвергали обработке Соотношение (%) числа ChAT-положительных клеток по сравнению с таковым при первоначальном введении Группа на момент первоначального введения 100,0±4,5 Группа с введением среды-носителя 83,0±5,8* Группа введения соединения сравнительного примера 1
(доза: 5 мг/кг) 105,3±4,3^#

[0079] Нейропротекторное и восстанавливающее действие на холинергические нейроны на модели крыс с поражением бахромок гиппокампа и свода

(1) Получение крысиной модели с поражением бахромок гиппокампа и свода головного мозга

В данном исследовании применяли самцов крыс Спрег-Доули (Charles River Laboratories Japan, Inc.) с весом тела от примерно 250 до 350 г. Крысу подвергали анестезии с помощью комбинации трех лекарственных средств: мидазолама (2 мг/кг s.c.), медетомидина гидрохлорида (0,15 мг/кг s.c.) и буторфанола тартрата (2,5 мг/кг s.c.), и фиксировали с помощью стереотаксического аппарата для работы с головным мозгом (Narishige Co., Ltd.). Обнажали череп и просверливали отверстие шириной 5 мм в черепе от срединной линии на 2 мм позади брегмы. Лезвие шириной 4 мм вводили в брегму на глубину 5,5 мм с разрезанием бахромок гиппокампа и свода головного мозга. После остановки кровотечения скальп зашивали. После операции крысу возвращали обратно в клетку и обеспечивали восстановление после анестезии. В группе с имитацией операции просверливали отверстие шириной 5 мм в черепе от срединной линии на 2 мм позади брегмы, но без введения лезвия.

(2) Введение соединения

Исследуемые соединения вводили крысам перорально один раз в сутки от пяти дней до девяти дней после операции (пример 1: 10 мг/кг) или от семи дней до четырнадцати дней после операции (пример 3: 3 мг/кг). Применяемая среда-носитель представляла собой 0,01 моль/л раствор хлористоводородной кислоты. В группе с имитацией операции среду-носитель вводили перорально один раз в сутки аналогично группе с введением тестируемого соединения.

(3) Отбор образцов

Крыс подвергали анестезии с помощью пентобарбитала и транскардиально перфузировали с помощью ледяного PBS. После перфузии передний мозг, в том числе медиальную область перегородки, собирали и погружали в 4% раствор параформальдегида, и встряхивали в течение ночи. Раствор для погружения заменяли 7,5% раствором сахарозы. Полученное погружали в 7,5% раствор сахарозы и встряхивали в течение ночи, и раствор для погружения заменяли 15% раствором сахарозы, и полученное погружали в него и встряхивали в течение ночи. Раствор для погружения заменяли 30% раствором сахарозы и полученное погружали в него и встряхивали в течение ночи. Коронарные срезы замороженного головного мозга с толщиной 30 мкм получали из переднего мозга, в том числе медиальной области перегородки, с применением микротома (Leica, SM2000R).

(4) Иммуногистохимическое исследование клеток, положительных в отношении холинацетилтрансферазы (ChAT), и везикулярного транспортера ацетилхолина (VAChT)

Полученные коронарные срезы замороженного головного мозга окрашивали с помощью DAB (НАБОРА С DAB-СУБСТРАТОМ ПЕРОКСИДАЗЫ (Vector, SK-4100)) с применением антитела к ChAT (Santa Cruz, SC-20672) или антитела к VAChT (Merck Millipore, ABN100) в качестве первичного антитела. Изображение среза, в том числе медиальной области перегородки или гиппокампа, как показано в "The mouse Brain in stereotaxic coordinates" (COMPACT THIRD EDITION, Keith B.J. Franklin & George Paxinos), получали с помощью универсального флуоресцентного микроскопа (KEYENCE, BZ-X710) и количество ChAT-положительных клеток медиальной области перегородки или оптическую плотность (OD) гиппокампального VAChT измеряли с помощью программного обеспечения для анализа BZ (KEYENCE). Результаты представлены в виде процента количества ChAT-положительных клеток медиальной области перегородки или OD гиппокампального VAChT в группе с введением среды-носителя и группе с введением тестируемого соединения относительно числа ChAT-положительных клеток медиальной области перегородки или OD гиппокампального VAChT в группе с имитацией операции. Данные приведены в виде среднего значения ±SEM. Различия между группой, обработанной средой-носителем, и группой, обработанной соединением (значительные: ^#), анализировали с помощью непарного t-критерия. Значение P<0,05 считали статистически значимым. Статистические анализы проводили с применением GraphPad Prism версии 7.02. Результаты представлены в таблицах 2 и 3.

[0080] [Таблица 2]

Соединение Число ChAT-положительных клеток (%) при первоначальном введении Число ChAT-положительных клеток (%) в группе с введением среды-носителя Число ChAT-положительных клеток (%) в группе с введением исследуемого соединения Сравнительный пример 1 57,0±7,5 38,4±5,0 74,1±9,3^#

[0081] [Таблица 3]

Соединение OD гиппокампального VAChT (%) при первоначальном введении OD гиппокампального VAChT (%) в группе с введением среды-носителя OD гиппокампального VAChT (%) в группе с введением исследуемого соединения Сравнительный пример 1 51,7±13,1 19,5±6,4 66,1±14,2^#

Изобретение относится к моногидрохлориду 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, представленного формулой (I), а также его кристаллам типа А, В, С, D, E, F с дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°), приведенными в формуле изобретения, в порошковой рентгеновской дифракции, полученной с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения. Изобретение относится к моногидробромиду 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, представленного формулой (I), а также его кристаллу с дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°), приведенными в формуле изобретения, в порошковой рентгеновской дифракции, полученной с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения. Изобретение относится к кристаллу 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, представленного формулой (I), с дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 9,0°, 11,1°, 14,5°, 18,1°, 20,0°, 21,9°, 23,6°, 24,4°, 24,9° и 28,5° в порошковой рентгеновской дифракции, полученной с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения. Также изобретение относится к фармацевтическому составу, обладающему активирующим действием на холинергические нейроны, содержащему соль моногидрохлорида или моногидробромида соединения формулы (I) или кристалл соединения формулы (I) качестве активного компонента и фармацевтически приемлемые добавки. Технический результат - (5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-дион в виде его моногидрохлоридной или моногидробромидной соли, также в кристаллической форме, способный активировать холинергические нейроны и/или обладает нейропротекторным действием. 11 н. и 1 з.п. ф-лы, 19 ил., 3 табл., 9 пр.

1. Моногидрохлорид или моногидробромид 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, представленного формулой (I):

.

2. Кристалл 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, представленного формулой (I):

,

с дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 9,0°, 11,1°, 14,5°, 18,1°, 20,0°, 21,9°, 23,6°, 24,4°, 24,9° и 28,5° в порошковой рентгеновской дифракции, полученной с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

3. Кристалл типа А моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, представленного формулой (I):

,

с дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,1°, 7,8°, 11,6°, 16,2°, 19,9°, 20,8°, 25,2°, 25,7°, 26,9° и 29,9° в порошковой рентгеновской дифракции, полученной с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

4. Кристалл типа В моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, представленного формулой (I):

,

с дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,3°, 9,7°, 10,1°, 17,9°, 19,0°, 19,4°, 23,4°, 26,3°, 27,3° и 32,0° в порошковой рентгеновской дифракции, полученной с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

5. Кристалл типа С моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, представленного формулой (I):

,

с дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,0°, 7,7°, 9,7°, 11,4°, 15,8°, 16,9°, 18,1°, 23,2°, 25,4° и 27,6° в порошковой рентгеновской дифракции, полученной с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

6. Кристалл типа D моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, представленного формулой (I):

,

с дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,6°, 14,6°, 16,1°, 20,5°, 21,0°, 23,0°, 24,5°, 26,4°, 28,0° и 32,5° в порошковой рентгеновской дифракции, полученной с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

7. Кристалл типа Е моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, представленного формулой (I):

,

с дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,4°, 11,3°, 15,7°, 18,0°, 19,2°, 22,8°, 24,6°, 25,4°, 26,0° и 27,3° в порошковой рентгеновской дифракции, полученной с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

8. Кристалл типа F моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, представленного формулой (I):

,

с дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 5,9°, 7,3°, 9,3°, 10,7°, 13,8°, 15,6°, 16,4°, 18,7°, 25,1° и 26,8° в порошковой рентгеновской дифракции, полученной с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

9. Кристалл моногидробромида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, представленного формулой (I):

,

с дифракционными пиками при углах дифракции (2θ±0,2°) 6,0°, 7,8°, 10,0°, 11,7°, 17,8°, 20,8°, 23,5°, 24,5°, 25,2° и 27,3° в порошковой рентгеновской дифракции, полученной с использованием CuKα в качестве источника рентгеновского излучения.

10. Кристалл типа А моногидрохлорида 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагидропиридо[4'',3'':4',5']тиено[2',3':4,5]пиримидо[1,2-a]тиено[3,2-f][1,4]диазепин-4,13-диона, представленного формулой (I):

,

характеризующийся пиками при химических сдвигах (δ±0,5 м.д.) 164,0 м.д., 129,6 м.д. и 36,5 м.д. в ¹³С спектре твердотельного ЯМР с глицином (176,03 м.д.) в качестве внешнего стандарта.

11. Кристалл по п.10, характеризующийся пиками при химических сдвигах (δ±0,5 м.д.) 164,0 м.д., 162,5 м.д., 160,5 м.д., 153,9 м.д., 151,6 м.д., 150,7 м.д., 133,6 м.д., 131,1 м.д., 129,6 м.д., 128,4 м.д., 126,9 м.д., 125,2 м.д., 123,7 м.д., 121,3 м.д., 120,3 м.д., 119,5 м.д., 53,7 м.д., 52,0 м.д., 50,9 м.д., 44,7 м.д., 36,5 м.д. и 22,6 м.д. в ¹³С спектре твердотельного ЯМР с глицином (176,03 м.д.) в качестве внешнего стандарта.

12. Фармацевтический состав, обладающий активирующим действием на холинергические нейроны, содержащий соль согласно п.1 или кристалл согласно любому из пп. 2-11 в качестве активного компонента и фармацевтически приемлемые добавки.