Способ проведения суперовуляции у коров-доноров эмбрионов Российский патент 2024 года по МПК A61D19/00 A61K38/24 

Изобретение относится к биотехнологии и позволяет повысить эффективность суперовуляции у крупного рогатого скота.

Широко известны способы проведения суперовуляции у коров с использованием гонадотропинов.

Часто используемым гонадотропином для проведения суперовуляции является СЖК. Для обеспечения роста нескольких фолликулов и их последующей овуляции СЖК инъецируют за 4-5 дней до ожидаемой охоты. Это достигается тем, что гормональную обработку донора начинают за 2-3 дня до естественной или индуцированной регрессии желтого тела. В первом случае препарат вводят в переходный период от лютеиновой к фолликулярной фазе полового цикла на 16-17 день и затем при появлении первых признаков и во время ожидаемой охоты инъецируют внутривенно 2000 ИЕ ХГ (3).

Достоинством данного способа является дешевизна СЖК, возможность получить препарат непосредственно на предприятии, производящем эмбрионы. Недостатком способа является высокая анафилактогенность СЖК. Кроме того, Европейский парламент намерен ввести запрет на импорт сыворотки крови жеребых кобыл (СЖК), повышающего плодовитость у животных (5).

Достоинством данного способа является однократное применение гонадотропина. Однако данный способ требует дополнительного применения эстрадиола-бензоата и хорионического гонадотропина. Данный способ растянут по временным рамкам, что вызывает возрастание цены в получении эмбрионов в связи с кормлением и содержанием доноров (1).

Достоинством данного способа является короткий период гормональной обработки животного-донора эмбрионов. Однако продолжительное действие гонадотропинов не позволяет получить стойкий результат в виде суперовуляций и качестве эмбрионов (1).

Достоинством данного способа является равномерное воздействие препарата на яичник и получение большого количества пригодных для замораживания и хранения эмбрионов. Недостатком является высокая стоимость препарата (4).

Известен способ индукции суперовуляции у коров-доноров эмбрионов с пролонгированием действия гипофизарных гонадотропинов, включающий однократное введение коровам-донорам в лютеиновую фазу полового цикла препарата, содержащего гипофизарные гонадотропины фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) и лютеинизирующий гормон (ЛГ), сочетанно с пролонгатором, с последующим введением через 48 часов простогландина F2α. В способе дополнительно вводят 0,25-1% раствор новокаина в количестве 3-15 мл, причем данный раствор новокаина вводят одномоментно в сочетании с препаратом, содержащим гипофизарные гонадотропины ФСГ и ЛГ, сочетанным с пролонгатором, при этом в качестве пролонгатора используют биологически деградируемый полимер полиэтиленгликоль (ПЭГ) с массой от 6000 до 70000 Да в количестве 0,5-7 г, а препарат, содержащий гипофизарные гонадотропины ФСГ и ЛГ, вводят в общей дозе, рекомендуемой инструкцией этого препарата для индукции суперовуляции (патент РФ № 2617042, 2017 г.)

Недостатком способа, по мнению многих специалистов является: «Побочное действие новокаина, причем наиболее типичными, побочными эффектами являются:

• онемение;

• покалывание;

• небольшая боль в месте укола.

Новокаин малотоксичен, но часто вызывает аллергические реакции. Их проявлениями могут быть:

• стоматиты;

• дерматиты;

• отек Квинке;

• анафилактический шок.

При повышенной чувствительности к новокаину у пациента наблюдается:

• головокружение;

• слабость;

• падение кровяного давления;

• коллапс;

• шок.

Другие необычные побочные эффекты включают боль в груди, уменьшение частоты сердечных сокращений, сонливость, беспокойство, тошноту, рвоту, дрожь, судороги» (https://www.colgate.ru/oral-health/anesthesia/what-are-common-novocain-side-effects).

Наиболее близким техническим решением является способ проведения суперовуляции с применением препарата «ФСГ-супер» (см. патент РФ на изобретение № 2469738, кл. A61D 19/02, 2012 г.), в котором для стимуляции полиовуляции у коров-доноров эмбрионов, начиная с 9-10 дня полового цикла, им вводят препарат «ФСГ-супер» в дозе 6 ед. Арморовского стандарта (АЕ) (120 И.Е.) два раза в сутки через каждые 12 часов. На третьи сутки после начала введения одновременно с «ФСГ-супер» вводят один из препаратов F2α (эстрофан, клатрапростин и т.д.) по одной дозе утром и вечером. Выявление признаков охоты у коров начинается через 36-48 часов от момента введения простагландина F2α. По мере прихода животных в охоту их искусственно осеменяют 2-3 раза с интервалом 12 часов. Эмбрионы у коров-доноров извлекают в сроки, необходимые для получения эмбрионов желательных стадий (на 7-8 день), считая нулевым днем день первого осеменения животных, используя наставления по применению «ФСГ-супер» (2).

Достоинством данного способа является низкая стоимость используемых препаратов и высокий выход эмбрионов.

Недостаток способа - недостаточная эффективность за счет отсутствия неспецифической стимуляции яичников и матки.

Техническим результатом изобретения является повышение эффективности проведения суперовуляции у коров-доноров эмбрионов и улучшение их качества за счет неспецифического воздействия на яичники и матку животного.

Технический результат достигается тем, что в способе проведения суперовуляции у коров-доноров эмбрионов, включающем введение на 10-е, 11-е и 13-е сутки полового цикла двукратно внутримышечно препарата «ФСГ-супер» в дозировке 6АЕ, на 12 день полового цикла к препарату «ФСГ-супер» в дозировке 6АЕ добавляют простагландин F2α в дозировке 500 мкг в 8-00 и в дозировке 250 мкг в 20-00, на 14 день полового цикла, в конце половой охоты, внутримышечно вводят препарат, отличающийся тем, что в качестве препарата применяют «Фермивит-Se», в дозе 8 мл/гол однократно.

Сопоставительный анализ заявляемого и используемого способов проведения суперовуляции у коров-доноров эмбрионов позволяет выявить признаки, отличающие предлагаемое техническое решение от прототипа: повышение эффективности влияния фолликулостимулирующего гормона при суперовуляции, а также повышение качества получаемых эмбрионов - достигается внутримышечной инъекцией витаминно-минерального препарата «Фермивит-Se». Инъекцию препарата проводят в день искусственного осеменения в дозе 7-8 мл на голову однократно.

На сегодняшний день, из доступной авторам патентной и научно-технической литературы неизвестно сочетанное использование «Фермивит-Se» с фолликулостимулирующим гормоном, обеспечивающее повышение эффективности проведения суперовуляции у коров-доноров эмбрионов с целью получения большего количества жизнеспособных эмбрионов.

Таким образом, заявляемый способ проведения суперовуляции у коров-доноров эмбрионов соответствует критерию «новизна».

Заявляемый способ имеет изобретательский уровень, так как для среднего специалиста оно явным образом не следует из уровня техники: ни в инструкциях, ни в рекомендациях по трансплантации эмбрионов использование витаминно-минеральных препаратов, в частности «Фермивит-Se», не известно.

Способ является промышленно применимым, так как может быть использован для стимуляции суперовуляции у коров-доноров.

Фермивит-Se - раствор для инъекций, в качестве действующих веществ в 1 мл содержит трехвалентное железо (в комплексе с низкомолекулярным декстраном) - 40 мг, витамин А - 2500 ME, витамин Д3-500 ME, витамин Е - 2,5 мг, витамин K - 0,25 мг, витамин В1 - 2,5 мг, витамин В2 - 1 мг, витамин В6 - 0,75 мг, витамин В12 - 0,0025 мг, никотинамид - 7,5 мг, пантотеновая кислота - 5 мг, фолиевая кислота - 0,05 мг, биотин - 0,0025 мг, селенит натрия (в пересчете на селен) -0,15 мг, гидролизат белка лактоальбумина - 0,2 мг, глюкоза - 15 мг, а в качестве вспомогательных веществ нипагин - 0,5 мг, вода для инъекций - до 1 мл. Фермивит-Se назначают для лечения и профилактики гиповитаминозов и заболеваний животных, вызванных недостатком железа и селена, а также при стрессах, нарушениях воспроизводительной функции, отставании молодняка в росте и развитии, в период вакцинации, дегельминтизации, выздоровления после перенесенных заболеваний (https://www.vidal.ru/veterinar/fermivit-se-30181).

Способ проведения суперовуляции у коров-доноров эмбрионов осуществляют следующим образом: на 10-е, 11-е и 13-е сутки полового цикла двукратно внутримышечно вводят препарат «ФСГ-супер» в дозировке 6 АЭ (в 8⁰⁰ и в 20⁰⁰). На 12 день полового цикла к препарату «ФСГ-супер» в дозировке 6 АЭ добавляют простагландин F2α в дозировке 500 мкг в 8⁰⁰ и в дозировке 250 мкг в 20⁰⁰. На 14 день полового цикла, в конце половой охоты внутримышечно вводят препарат «Фермивит-Se» в дозе 8 мл /гол и осеменяют животное. На 21 день полового цикла производят нехирургическое извлечение эмбрионов. Вводимая доза 8 мл/гол препарата «Фермивит-Se» обусловлена тем, что если взять меньше 8 мл/гол, то эффективность будет низкая, а если доза препарата будет больше 8 мл/гол, то могут проявляться побочные явления.

Пример конкретного выполнения заявляемого способа

Для реализации предлагаемого способа проведения суперовуляции у коров-доноров эмбрионов был поставлен научно-производственный опыт.

В условиях учебно-опытного хозяйства «Кубань» ФГБОУ ВО Кубанский, Краснодарского края по принципу пар-аналогов были сформированы две группы коров по 15 голов в каждой: контрольная (прототип) и опытная (заявляемый способ).

Из таблицы видно, что от коров из опытной группы было получено на 0,2 эмбриона больше, чем в контрольной группе (по прототипу). При этом количество эмбрионов, пригодных к пересадке в опытной группе на 0,3 эмбриона больше, чем в контрольной группе (по прототипу). Данные приведены из расчета на одно животное.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить большее количество жизнеспособных эмбрионов от коров-доноров.

Литература

1. Валюшкин К.Д., Медведев Г.Ф. Акушерство, гинекология и биотехника размножения животных: Учебник, 2-е изд., перераб. И доп. - Мн.: Ураджай, 2001. - С. 320.

2. Наставление по применению «ФСГ-супер» для стимуляции функции яичников у самок животных и полиовуляции у коров-доноров эмбрионов. Утверждено заместителем начальника Департамента ветеринарии Б.А. Кобзевым 23 апреля 1996 г. Регистрационный номер препарата ПВР-2-1.0/00269.

3. Прокофьев М.И. Регуляция размножения сельскохозяйственных животных. - Л.: Наука, 1983. - С. 182.

4. Эрнст Л.К., Сергеев Н.И. Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных. - М.: Агропромиздат, 1989. - С. 117.

5. https://www.partyfortheanimals.com/ru/eu-parliament-opposes-livestock-medicine-of-horse-blood.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ проведения суперовуляции у коров-доноров эмбрионов, включающий введение на 10-е, 11-е и 13-е сутки полового цикла двукратно внутримышечно препарата «ФСГ-супер» в дозировке 6АЕ, на 12 день полового цикла к препарату «ФСГ-супер» в дозировке 6АЕ добавляют простагландин F2α в дозировке 500 мкг в 8-00 и в дозировке 250 мкг в 20-00, на 14 день полового цикла, в конце половой охоты, внутримышечно вводят препарат, при этом в качестве препарата применяют «Фермивит-Se», в дозе 8 мл/гол однократно. Изобретение позволяет повысить эффективность суперовуляции у крупного рогатого скота. 1 табл., 1 пр.

Способ проведения суперовуляции у коров-доноров эмбрионов, включающий введение на 10-е, 11-е и 13-е сутки полового цикла двукратно внутримышечно препарата «ФСГ-супер» в дозировке 6АЕ, на 12 день полового цикла к препарату «ФСГ-супер» в дозировке 6АЕ добавляют простагландин F2α в дозировке 500 мкг в 8-00 и в дозировке 250 мкг в 20-00, на 14 день полового цикла, в конце половой охоты, внутримышечно вводят препарат, отличающийся тем, что в качестве препарата применяют «Фермивит-Se», в дозе 8 мл/гол однократно.