СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РИСКА ПРОГРЕССИРОВАНИЯ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ НА ФОНЕ ТАМОКСИФЕНА С УЧЕТОМ ЭКСПРЕССИОННЫХ ОСОБЕННОСТЕЙ ОПУХОЛИ Российский патент 2024 года по МПК G01N33/68 G01N33/58 G01N33/574 C12Q1/6806 C12Q1/686 C12Q1/6886 

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и касается способов прогнозирования риска прогрессирования рака молочной железы на фоне тамоксифена.

Рак молочной железы (РМЖ) является самым распространенным онкологическим заболеванием среди женщин во всем мире и, в том числе, в России. [1]. РМЖ представляет собой группу гормонозависимых гетерогенных опухолей различных биологических подтипов. Опухоли, положительные по рецепторам эстрогена и прогестерона подразделяются на подтипы: люминальный А подобный, люминальный В подобный и гормон-рецептор-позитивный Her2/neu-позитивный РМЖ [2]. Такие подтипы характеризуются более благоприятным течением заболевания по сравнению с гормон-рецептор-негативными опухолями, и, в отличие от последних, имеют точки приложения для проведения гормональной терапии [3]. Однако существенной проблемой такой терапии остается развитие эндокринной резистентности и, как итог, возникновение прогрессирования заболевания. В связи с этим актуальной задачей остается выявление дополнительных прогностических маркеров, которые позволят выяснить причины различного поведения опухолей и ответа на проводимую терапию.

Одной из причин возникновения лекарственной устойчивости может являться перекрестное взаимодействие сигнальных каскадов ERα и трансформирующего фактора роста β1 (TGF-β1). Как известно, белки данного семейства играют ключевую роль в процессах клеточной дифференцировки, индукции апоптоза, регуляции пролиферации, иммуносупрессии, инициации эпителиально-мезенхимального перехода, а также ангиогенеза [4]. TGF-β1 способен активировать различные внутриклеточные сигнальные каскады, одним из которых является классический TGF-β1/ Smad - сигналинг, изменение функциональной активности которого, может определять развитие резистентности к антипролиферативным эффектам и способствовать прогрессии опухолевого роста. Помимо классического сигналинга, возможна TGF-β1/Smad-независимая активация PI3K/Akt/mTOR - сигнального пути через прямую индукцию фосфорилирования Akt [5]. Гиперактивация данного каскада приводит к интенсивной пролиферации клеток, в том числе за счет увеличения продукции регуляторных молекул клеточного цикла, таких как циклин D1, p27Kip1 и pRb, что может способствовать развитию гормональной резистентности [6, 7].

Анализ научно-медицинских источников показал наличие исследований, свидетельствующих о вкладе компонентов TGF-β1/PI3K сигнального пути в эффективность лечения тамоксифеном рака молочной железы. Выявлены релевантные источники - патенты РФ, КНР и США, в которых описаны биомаркеры прогнозирования прогрессирования РМЖ. Проведенное патентное исследование включало изучение следующих баз данных: Роспатент (ФИПС) (http://www1.fips.ru), European Patent Office (http://ep.espacenet.com), Canada Intellectual Property Office (http://cipo.gc.ca/).

Показано, что низкий уровень экспрессии TGF-βR2 ассоциирован с резистентностью к тамоксифену у пременопаузальных больных РМЖ [8]. Выявлен низкий уровень мРНК TGF-βR2 в опухолевой ткани у тамоксифен-резистентной группы больных РМЖ [8].

В исследованиях Yoo et al., продемонстрировано, что активация pAkt приводит к супрессии Smad3 и усиленной пролиферации тамоксифен-резистентной линии клеток рака молочной железы [9]. Продемонстрировано, что прием высоких доз тамоксифена после лечения низкими дозами данного препарата эффективен для пациенток РМЖ, имеющих метастазы в кости [10].

Для определения риска прогрессирования (возникновения рецидива) рака молочной железы предложен способ, основанный на оценке экспрессии генов-маркеров EL0VL5, IGFBP6 и TXNDC9. Вероятность риска оценивали, используя метод сравнения уровня экспрессии данных генов с пороговыми значениями [11].

На основе анализа экспрессии генов MAGEA2, MAGEB1 и XAGE3 предлагается способ прогнозирования развития метастазов у больных РМЖ. Амплификация проходит в режиме реального времени с использованием красителя EvaGreen Dye и высокоспецифичных праймеров [12]. Однако известный способ не обладает достаточной точностью как и метод, описанный выше, поскольку не учитывают молекулярно-генетические подтипы опухоли, которые характеризуются различным клиническим течением и прогнозом заболевания.

Предложен метод пронозирования рецидива рака молочной железы при эндокринной терапии. Данный метод предусматривает определение в опухолевой ткани (ER-позитивный, Her2/neu-негативный) уровня экспрессии генов UBE2C, BIRC5, DHCR7, STC2, AZGP1, RBBP8, IL6ST и MGP или генов UBE2C, RACGAP1, DHCR7, STC2, AZGP1, RBBP8, IL6ST и MGP, а также математическое комбинирование величин уровня их экспрессии [13]. Недостатком описанного способа является сложный алгоритм расчета результатов.

Для пациентов с ER-позитивным статусом опухоли предложен способ прогнозирования прогрессирования РМЖ на основании определения уровня экспрессии 41 белкового маркера, либо их комбинаций [15]. Недостатком предложенного способа является отсутствие конкретизированных методик для определения содержания белковых продуктов в опухолевой ткани.

На основании определения ядерных и цитоплазматических уровней экспрессии NMT1 и NMT2 предлагается оценивать прогноз и ответ на лечение среди больных с различными молекулярными подтипами РМЖ [16]. Недостатком способа является ограниченное количество используемых молекулярных маркеров, а также отсутствие клинических испытаний.

Для оценки устойчивости к лекарственной терапии тамоксифеном предлагают оценивать уровень экспрессии MiR-200a, однако недостатком указанного способа является отсутствие исследований опухолевой ткани in situ [17].

Группу чувствительных к гормональной терапии тамоксифеном опухолей рекомендуется определять на основании оценки экспрессии молекулы lnc-PHK lnc-DC. Авторы данной работы отмечают, что чувствительность клеток молочной железы, устойчивых к тамоксифену, может быть восстановлена за счет применения комбинации тамоксифена и ингибитора молекулы lnc-PHK lnc-DC [18]. Представленный способ ограничен определением лишь одного генетического параметра, что существенно снижает точность прогнозирования заболевания.

Также предложены моноклональные антитела, специфичные к BQ323636.1, и их использование для прогнозирования резистентности к тамоксифену у пациентов с раком молочной железы [19]. Недостатком метода является ограниченное количество используемых критериев.

Наиболее близким к предлагаемому является способ оценки чувствительности ER-позитивных опухолей к гормональной терапии тамоксифеном на основании наличия полиморфного локуса rs2228480 гена ESR1, характера распределения ERα в опухолевой ткани, состояния регионарных лимфатических узлов и степени злокачественности опухоли [14]. Однако в данном способе не рассматривались молекулярно-генетические критерии, учитывающие транскрипционную активность гена ESR1, а также уровень экспрессии pAkt, TGF-βR2 и процентное содержание субпопуляции клеток pAkt-/TGF-βR2+, более полно характеризующие особенности опухоли.

Таким образом, в настоящее время прогнозирование течения РМЖ и ответа на терапию основано на изучении экспрессионных характеристиках генов, оценки биохимических маркеров, а также использовании моноклональных антител. Однако отсутствует комплексный подход, который бы учитывал молекулярно-генетические особенности рака молочной железы с учетом характеристик белковой и генной экспрессии мембранных рецепторов опухолевых клеток, а также уровня активации внутриклеточных путей и их центральных регуляторов.

Новая техническая задача - повышение точности и информативности способа.

Для решения поставленной задачи в способе прогнозирования риска прогрессирования рака молочной железы (РМЖ) на фоне приема тамоксифена с учетом экспрессионных особенностей опухоли, включающий определение транскрипционной активности гена ESR1 в опухолевой ткани при помощи молекулярно-генетических методов, определение экспрессии в опухолевой ткани белков TGF-βR2, pAkt и процентного содержания субпопуляции pAkt-/TGF-dR2+ клеток при помощи метода проточной цитофлуориметрии и расчет значения Y уравнения логистической регрессии по формуле:

Y = 6,851 - 2,940X₁ - 3,525Х₂ + 2,876Х₃ - 1,827X4,

где

6,851 - значение коэффициента регрессии свободного члена,

X₁ - транскрипционная активность гена ESR1: низкая - X₁ = 1, высокая - X₁ = 2,

Х₂ - уровень экспрессии TGF-βR2: низкий - Х₂ = 1, высокий - Х₂ = 2,

Х₃ - уровень экспрессии pAkt: низкий - Х₃ = 1, высокий - Х₃ = 2,

Х₄ - процентное содержание субпопуляции опухолевых клеток pAkt-/TGF-βR2+: низкое - Х₄ = 1, высокое - Х₄ = 2,

-2,940, -3,525, 2,876, -1,827 - значения коэффициентов регрессии признаков,

значение Р вероятности развития прогрессирования РМЖ рассчитывают по уравнению:

Р = e^Y/(l+e^Y), где

е = 2,72

и при Р≥0,5 прогнозируют высокий риск прогрессирования РМЖ на фоне приема тамоксифена, а при Р<0,5 - низкий риск прогрессирования.

Чувствительность математической модели составляет - 96,0 %, специфичность модели - 66,7 %, диагностическая точность - 91,5 %.

Способ включает определение транскрипционной активности гена ESR1 в опухолевой ткани при помощи молекулярно-генетических методов, определение экспрессии в опухолевой ткани белков TGF-βR2, pAkt и процентного содержания субпопуляции pAkt-/TGF-βR2+ клеток при помощи метода проточной цитофлуориметрии и расчет значения Y уравнения логистической регрессии по формуле:

Y = 6,851 - 2,940X₁ - 3,525X₂ + 2,876X₃ - 1,827X4,

где

6,851 - значение коэффициента регрессии свободного члена,

X₁ - транскрипционная активность гена ESR1: низкая - X₁ = 1, высокая - X₁ = 2,

Х₂ - уровень экспрессии TGF-PR2: низкий - Х₂ = 1, высокий - Х₂ = 2,

Х₃ - уровень экспрессии pAkt: низкий - Х₃ = 1, высокий - Х₃ = 2,

Х₄ - процентное содержание субпопуляции опухолевых клеток pAkt-/TGF-βR2+: низкое - Х₄ = 1, высокое - Х₄ = 2,

-2,940, -3,525, 2,876, -1,827 - значения коэффициентов регрессии признаков,

значение Р вероятности развития прогрессирования РМЖ рассчитывают по уравнению:

Р = e^Y/(1+e^Y), где

е = 2,72

и при Р≥0,5 прогнозируют высокий риск прогрессирования РМЖ на фоне приема тамоксифена, а при Р<0,5 - низкий риск прогрессирования.

Сущность предлагаемого способа иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Больная 3., 50 лет, с диагнозом: рак правой молочной железы T1N0M0. По данным гистологического исследования: инфильтративно-протоковый рак. ИГХ: ER (8б), PR (6б), Her2/neu (1+), Ki 67-15 %. Люминальный A, Her2/neu негативный подтип опухоли.

Предполагаемая вероятность развития прогрессирования РМЖ определялась согласно уравнению:

Y = 6,851 - 2,940×1 - 3,525×2 + 2,876×2 - 1,827×1 = 0,786

Регрессионное уравнение имело вид:

Р = e^Y/(1+ e^Y) = 2,72^0,786 / (1+ 2,72^0,786) = 0,69

Вероятность развития прогрессирования заболевания на фоне приема тамоксифена 69 %. При динамическом наблюдении за больной, спустя 15 месяцев после комплексного лечения выявлено отдаленное метастазирование РМЖ.

Пример 2. Больная Л., 62 года, с диагнозом: рак молочной железы слева T2N0M0 (IIА стадия). По данным гистологического исследования: инвазивный протоковый рак 2 степени с преобладанием инфильтративного компонента с фиброзом стромы, кальцинатами на фоне ФКБ, с апокринизацией части эпителия протоков, с очагами атипической протоковой гиперплазии в ВВК. В 20 из исследованных лимфоузлов гистиоцитоз, липоматоз. ИГХ: ER (6б), PR (0б), Неr2/nеu (0), Ki 67-34 %. Люминальный В, Her2/neu негативный подтип опухоли. Проведена радикальная мастэктомия.

Предполагаемая вероятность развития прогрессирования РМЖ определялась согласно уравнению:

Y = 6,851 - 2,940×1 - 3,525×1 + 2,876×2 - 1,827×1 = 4,311

Регрессионное уравнение имело вид:

Р = e^Y/(1+ e^Y) = 2,72^4,311 / (1+ 2,72^4,311) = 0,99

Вероятность прогрессирования заболевания на фоне приема тамоксифена составила 99 %. При динамическом наблюдении за больной, спустя 7 месяцев после комплексного лечения выявлено отдаленное метастазирование РМЖ.

Пример 3. Больная Д., 51 год, с диагнозом: рак правой молочной железы T2N1M0. По данным гистологического исследования: инвазивный протоковый дольковый рак с метастазами в 2 лимфатических узлах из 9 обследованных, ER-позитивный, PR-позитивный, Her2/neu (-), Ki 67-18 %. Люминальный A, Her2/neu негативный подтип опухоли. Проведена секторальная резекция правой молочной железы

Предполагаемая вероятность развития прогрессирования РМЖ определялась согласно уравнению:

Y = 6,851 - 2,940×2 - 3,525×2 + 2,876×1 - 1,827x2 = - 6,857

Регрессионное уравнение имело вид:

Р = e^Y/(1+ e^Y) = 2,72^-6,857 / (1+ 2,72^-6_’⁸⁵⁷) = 0,001

Вероятность прогрессирования заболевания на фоне приема тамоксифена составила 0,1 %. При динамическом наблюдении за больной, спустя 42 месяца после комплексного лечения, прогрессирование не выявлено.

Пример 4. Больная С., 44 года, с диагнозом: рак левой молочной железы T2N1M0 (ПА стадия). По данным гистологического исследования: инфильтративно-протоковый рак 2 степени злокачественности. ИГХ: ER- позитивный, PR- позитивный, Her2/neu (0), Ki 67-6 %. Люминальный A Her2/neu негативный подтип опухоли. Проведена секторальная резекция левой молочной железы.

Предполагаемая вероятность развития прогрессирования РМЖ определялась согласно уравнению:

Y = 6,851 - 2,940×1 - 3,525×2 + 2,876×1 - 1,827×1 = - 2,09

Регрессионное уравнение имело вид:

Р = e^Y/(1+ e^Y) = 2,72^-2,09/ (1+ 2,72^-2,09) = 0,11

Вероятность прогрессирования заболевания на фоне приема тамоксифена составила 11 %. При динамическом наблюдении за больной, спустя 30 месяцев после комплексного лечения, прогрессирование не выявлено.

Предлагаемый способ основан на анализе данных клинических наблюдений. В настоящее исследование включена 141 пациентка с впервые верифицированным операбельным эстроген-позитивным раком молочной железы (T_1-4N_0-3,M₀). Средний возраст пациенток - 54,7±9,9 лет. Все пациентки получали лечение в объеме оперативного хирургического вмешательства, а также лучевой и химиотерапии - по показаниям. В качестве обязательного компонента адъювантной гормонотерапии явился прием тамоксифена (5 лет; 20 мг/сутки). Классическая панель, включающая в себя иммуногистохимические маркеры ER, PR, Her2/neu и Ki-67, использована для определения молекулярно-генетического подтипа эстроген-позитивного РМЖ. Люминальный А подтип РМЖ характеризовался гормон-положительным статусом, отрицательной экспрессией Her2/neu и низким уровнем белка Ki-67 (<20 %). К люминальному В подтипу относили опухоли, имеющие позитивную экспрессию рецепторов к эстрогену и прогестерону, высокую пролиферативную активность Ki-67 (более 20 %), а также положительную, либо отрицательную экспрессию Her2/neu. В зависимости от отдаленных результатов лечения больные РМЖ были распределены на две группы, а также сопоставимы по основным клинико-морфологическим характеристикам. Первую группу составляли больные без признаков прогрессирования заболевания (N = 110 (78,0 %)), вторая группа объединяла пациенток с наличием отдаленных метастазов либо рецидивом заболевания (N = 31 (22,0 %)). Сроки наблюдения от 2 до 74 месяцев.

Используя набор RNeasy Plus mini Kit (Qiagen, Германия) из образцов опухолевой и прилежащей нормальной ткани выделена РНК. Выделение проводилось в соответствии с инструкцией производителя. Качество очистки и концентрацию выделенной РНК оценивали при помощи спектрофотометра NanoDrop-2000 (Thermo Scientific,США). Концентрация РНК из выделенных образцов была в пределах 20 - 300 нг/мкл, А260/А280 = 1,90-2,25.

Транскрипционная активность гена ESR1 проведена при помощи количественной ПЦР с обратной транскрипцией в режиме реального времени (ОТ-ПЦР, RT-qPCR). На первом этапе работы для постановки количественной ПЦР в режиме реального времени проведена реакция обратной транскрипции. кДНК на матрице РНК получена с использованием набора RevertAid™ (Fermentas, Литва). Оценка экспрессии мРНК проанализирована с использованием количественной ПЦР на амплификаторе CFX96 («Bio-Rad», США). Первый шаг амплификации включал предварительную денатурацию при t = 95°С, 5 мин; второй шаг - 10 сек, t = 94°С и 30 сек, t = 60°С (40 циклов). Уровень экспрессии исследуемых генов нормализован по отношению к гену GAPDH (glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase). Относительная экспрессия оценена методом 2-ΔΔСТ (Livak) [19].

Количество клеток, экспрессирующих TGF-βR2, pAkt и комбинации pAkt/TGF-βR2 определено методом проточной цитофлуориметрии при помощи цитометра CytoFLEX (Beckman Coulter, США). Для получения клеточной суспензии использованы камеры типа Medicons (Dako, США) и автоматическая система Medimachine (Dako, США). Конечная концентрация гомогената составляла 1×10⁶ клеток/мл.

В исследовании были использованы следующие антитела: Human TGF-beta RII (R&D Systems, США), AKT1 [p Ser473] (Novus Biologicals, США). Йодистый пропидий (Novus Biologicals, США) применяли для оценки жизнеспособности клеток, антитела АРС anti-human CD326 (Ер-CAM, BioLegend, США) использованы в качестве маркеров опухолевых клеток. Анализируемые образцы опухолевой ткани были отобраны в следующей последовательности: 1 - общая популяция исследуемых клеток, 2 - PI- популяция, 3 - ЕрСАМ+ клетки, 4 - популяция клеток, экспрессирующих исследуемые маркеры. В каждом из исследуемых образцов проанализировано не менее 10 тыс. клеток. Полученные результаты продемонстрированы в процентном отношении к популяции клеток - ЕрСАМ+/РI-. Визуализация и количественная оценка клеток проведена при помощи программы CytExpert 2.0.0.152 (Becton Dickinson, США).

Статистическую обработку проводили при помощи программного пакета «STATISTICA 8.0» и SPSS 21.0.

Для прогнозирования риска прогрессирования рака молочной железы на фоне тамоксифена с учетом экспрессионных особенностей опухоли использовался логистический регрессионный анализ.

На первом этапе методом пошаговой логистической регрессии были определены независимые признаки с показателем уровня значимости р<0,05: транскрипционная активность гена ESR1, уровень экспрессии TGF-βR2 и pAkt, а также процентное содержание субпопуляции опухолевых клеток pAkt-/TGF-βR2+.

На втором этапе была разработана модель и проведен расчет значения Y уравнения логистической регрессии по формуле:

Y = 6,851 - 2,940X₁ - 3,525Х₂ + 2,876Х₃ - 1,827X₄,

где

6,851 - значение коэффициента регрессии свободного члена,

X₁ - транскрипционная активность гена ESR1: низкая - X₁ = 1, высокая - X₁ = 2,

Х₂ - уровень экспрессии TGF-βR2: низкий - Х₂ = 1, высокий - Х₂ = 2,

Х₃ - уровень экспрессии pAkt: низкий - Х₃ = 1, высокий - Х₃ = 2,

Х₄ - процентное содержание субпопуляции опухолевых клеток pAkt-/TGF-βR2+: низкое - Х₄ = 1, высокое - Х₄ = 2,

-2,940, -3,525, 2,876, -1,827 - значения коэффициентов регрессии признаков,

значение Р вероятности развития прогрессирования РМЖ рассчитывают по уравнению:

Р = e^Y/(1+e^Y), где

е = 2,72

и при Р≥0,5 прогнозируют высокий риск прогрессирования РМЖ на фоне приема тамоксифена, а при Р<0,5 - низкий риск прогрессирования.

Чувствительность математической модели составляет - 96,0 %, специфичность модели - 66,7 %, диагностическая точность - 91,5 %.

Способ позволяет с большей точностью и информативностью осуществить прогнозирование риска прогрессирования рака молочной железы на фоне тамоксифена среди пациентов с эстроген-положительным РМЖ.

В результате проведенного исследования показано, что совокупность таких показателей, как транскрипционная активность гена ESR1, уровень экспрессии TGF-βR2 и pAkt, а также процентное содержание субпопуляции опухолевых клеток pAkt-/TGF-βR2+ можно рассматривать в качестве прогностических факторов риска вероятности прогрессирования рака молочной железы на фоне тамоксифена. Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить точность и информативность прогнозирования риска прогрессирования рака молочной железы на фоне тамоксифена среди пациентов с эстроген-позитивным РМЖ. Использование данного способа в клинической практике предоставит возможность определить наиболее значимые молекулярно-генетические маркеры, сопряженные с эффективностью гормональной терапии тамоксифеном среди больных эстроген-позитивным раком молочной железы, что позволит в пределах одного молекулярного подтипа выделить подгруппы с наиболее агрессивным течением заболевания и неблагоприятным исходом.

Источники информации, принятые во внимание при составлении описания:

1. Состояние онкологической помощи населению России в 2021 году / Под ред. А.Д. Каприна, В.В. Старинского, А.О. Шахзадовой. - М.: МНИОИ им. П.А. Герцена - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, 2022. - 239 с.

2. Burstein H.J., Curigliano G., Loibl S. et al. Estimating the benefits of therapy for early stage breast cancer the St Gallen International Consensus Guidelines for the primary therapy of early breast cancer 2019 // Annals of Oncology. 2019. 30 (10). P. 1541-1557.

3. Sihto H., Lundin J., Lundin M. et al. Breast cancer biological subtypes and protein expression predict for the preferential distant metastasis sites: a nationwide cohort study// Breast Cancer Res. 2011. 13(5). P. 1186.

4. Hinck A.P., Mueller T.D., Springer T.A. Structural biology and evolution of the TGF-P family // Cold Spring Harb Perspect Biol. 2016. 8. P. a022103.

5. Song J., Landström M. TGFp activates PI3K-AKT signaling via TRAF6 // Oncotarget. 2017; 8(59): 99205-99206.

6. Shoman N., Klassen Sh., McFadden A. et al. Reduced PTEN expression predicts relapse in patients with breast carcinoma treated by tamoX₁fen // Mod pathol. 2005. 18 (2). P. 250-259.

7. Tanic N., Milivanovic Z., Tanic N. et al. The impact of PTEN tumor suppressor gene on acquiring resistance to tamoX₁fen treatment in breast cancer patients // Cancer Biol Ther. 2012. 13(12). P. 1165-1174.

8. Busch S., Sims A.H., Stal O. et al. Loss of TGFP receptor type 2 expression impairs estrogen response and confers tamoX₁fen resistance // Cancer Res. 2015. 75 (7) P. 1457-1469.

9. Yoo Y.A., Kim Y.H., Kim J.S., Seo J.H The functional implications of Akt activity and TGF-beta signaling in tamoX₁fen-resistant breast cancer // Biochim. Biophys. Acta. 2008. 1783 (3). P. 438-447.

10. Stathopoulos G.P., Trafalis D., Kaparelou M. Bone metastasis in breast cancer is treated by high-dose tamoX₁fen // J BUON. - 2016. 21 (4). P. 1013-1015.

11. Шкурников М.Ю., Галатенко B.B., Галатенко A.B., Саматов Т.Р., Тоневицкий А.Г. Способ определения риска возникновения рецидива онкологических заболеваний молочной железы // Патент РФ № 2626603, опубликован 28.07.2017. Бюл. №22.

12. Кит О.И., Водолажский Д.И., Франциянц Е.М., Кутилин Д.С., Могушова Х.А., Вереникина Е.В. Способ прогнозирования развития метастазов у больных раком молочной железы // Патент РФ № 2675236, опубликован 18.12.2018. Бюл. №35.

13. Дертманн М., Федер И.З., Германн М., Хеннинг Г., Вебер К., Фон Т.К., Кроненветт Р., Петри К. Способ предсказания рецидива рака молочной железы при эндокринном лечении // Патент РФ № 2654587, опубликован 21.05.2018. Бюл. №15.

14. Слонимская Е.М., Бабышкина Н.Н., Паталяк С.В., Завьялова М.В., Вторушин С.В. Способ прогнозирования эффективности антиэстрогенной терапии тамоксифеном у больных с люминальным типом рака молочной железы // Патент РФ № 2558857, опубликован 10.08.2015. Бюл. № 22.

15. Wang G., Hooke J., Campbell J., Cutler M., Shriver C, Kebish M, Kovatich A., Shah P., Narain N., Sarangarajan R., Hu H. Protein markers for the prognosis of breast cancer progression // патент № WO 2022/216798 A1, опубликован 13.10.2022.

16. Shrivastav A. Predicting prognosis and treatment response of breast cancer patients using expression and cellular localization of n-myristoyltransferase // патент № WO 2022/241568 A1, опубликован 24.11.2022.

17. Zhang J., Li M., Zhang Y., Chen S. TamoXifen drug resistance related microRNA molecule MiR-200a and application thereof // патент № CN 105400785 А, опубликован 16.03.2016.

18. Yang L., Ni Ch., Hu X., Mo Y. Application of non-coding RNA molecule lnc-DC in predicting drug resistance of tamoX₁fen in breast cancer// патент № CN 108753966A, опубликован 11.06.2018.

19. Khoo U.S., GonG С.J., Lee K.W.T. Monoclonal antibody for predicting tamoX₁fen response in breast cancer patients // патент № US 10823735 B2, опубликован 03.11.2020.

20. Livak K.J., Schmittgen T.D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCT method // Methods. 2001. 25 (4). P. 402-408.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования риска прогрессирования рака молочной железы (РМЖ) на фоне приема тамоксифена с учетом экспрессионных особенностей опухоли. В опухолевой ткани определяют транскрипционную активность гена ESR1, экспрессию белков TGF-βR2, pAkt и процентное содержание субпопуляции pAkt-/TGF-βR2+ клеток. Полученные значения подставляют в формулу расчета значения уравнения логистической регрессии, которое используют для расчета вероятности Р прогрессирования РМЖ. При Р≥0,5 прогнозируют высокий риск прогрессирования РМЖ на фоне приема тамоксифена. При Р<0,5 прогнозируют низкий риск прогрессирования. Способ обеспечивает повышение точности и информативности прогнозирования риска прогрессирования РМЖ на фоне приема тамоксифена за счет использования оригинальной формулы расчета уравнения логистической регрессии и определения вероятности развития прогрессирования РМЖ. 4 табл., 4 пр.

Способ прогнозирования риска прогрессирования рака молочной железы (РМЖ) на фоне приема тамоксифена с учетом экспрессионных особенностей опухоли, включающий определение транскрипционной активности гена ESR1 в опухолевой ткани при помощи молекулярно-генетических методов, определение экспрессии в опухолевой ткани белков TGF-βR2, pAkt и процентного содержания субпопуляции pAkt-/TGF-βR2+ клеток при помощи метода проточной цитофлуориметрии и расчет значения Y уравнения логистической регрессии по формуле:

Y = 6,851 - 2,940X₁ - 3,525Х₂ + 2,876Х₃ - 1,827X₄,

где

6,851 - значение коэффициента регрессии свободного члена,

X₁ - транскрипционная активность гена ESR1: низкая - X₁ = 1, высокая - X₁ = 2,

Х₂ - уровень экспрессии TGF-βR2: низкий - Х₂ = 1, высокий - Х₂ = 2,

Х₃ - уровень экспрессии pAkt: низкий - Х₃ = 1, высокий - Х₃ = 2,

Х₄ - процентное содержание субпопуляции опухолевых клеток pAkt-/TGF-βR2+: низкое -Х₄ = 1, высокое - Х₄ = 2,

-2,940, -3,525, 2,876, -1,827 - значения коэффициентов регрессии признаков,

значение Р вероятности развития прогрессирования РМЖ рассчитывают по уравнению:

Р=e^Y/(1+e^Y), где

е = 2,72,

и при Р≥0,5 прогнозируют высокий риск прогрессирования РМЖ на фоне приема тамоксифена, а при Р<0,5 - низкий риск прогрессирования.