СПОСОБ ИММУНОКОРРЕКЦИИ У ЖИВОТНЫХ Российский патент 2024 года по МПК A61D99/00 

Изобретение относится к области ветеринарной медицины, в частности к коррекции иммунных нарушений у животных.

Известен способ иммунокоррекции с использованием экстрактов жирных масел из семян чернушки дамасской и эхинацеи пурпурной на примере циклофосфановой модели, который характеризуется тем, что экспериментальный иммунодефицит корректировали смесью экстрактов жирных масел указанных растений в объемном соотношении 1:1, которую вводили лабораторной крысе внутрижелудочно через зонд в дозе 4,6 мл/кг/сут ежедневно в течение 14 дней [Патент №2679402, МПК А61К 36/28, А61К 36/71, А61Р 37/00].

Недостатками способа являются сложная технология экстракции жирных масел растений и длительность введения смеси.

Наиболее близким к заявленному решению является способ иммунокоррекции апи-фитокомпозицией, включающий воспроизведение иммунодефицита у лабораторных животных путем введения циклофосфана однократно в дозе 200 мг/кг массы тела лабораторного животного (1-е сутки эксперимента) с последующей его коррекцией, причем коррекцию иммунодефицита проводят апи-фитокомпозицией в виде водной суспензии меда, пыльцы, прополиса, экстракта эхинацеи пурпурной в соотношении 10:1:1:2, которую вводят лабораторному животному внутрижелудочно (через зонд) в дозе 200 мг/кг ежедневно в течение 10 дней на вторые сутки эксперимента [Патент №2524658, МПК А61К 35/64, А61К 36/28, А61К 31/66, А61Р 37/00].

Недостатками способа являются высокая стоимость компонентов смеси, аллергизирующее действие меда, пыльцы и прополиса, непостоянный состав компонентов апи-фитокомпозиции, зависящий от вида и региона произрастания медоносных растений, что снижает эффективность способа.

Техническим результатом является создание высокоэффективного, экономически доступного для лечения животных способа иммунокоррекции с пониженной степенью риска аллергизации организма животных и с использованием стандартизированных препаратов постоянного состава.

Технический результат достигается тем, что способ иммунокоррекции у животных с использованием Полисорба ВП и солодки сиропа включает воспроизведение иммунодефицита у лабораторных животных путем введения циклофосфана однократно в дозе 200 мг/кг массы тела животного на первые сутки эксперимента с последующей его коррекцией на вторые сутки в течение 10 дней при ежедневном внутрижелудочном введении через зонд водной суспензии смеси препаратов, коррекцию иммунодефицита проводят смесью препаратов Полисорба ВП и солодки сиропа в соотношении 1:1 в дозе 250 мг/кг массы тела животного.

Использование в способе Полисорба ВП обеспечивает детоксицирующий эффект, что снижает токсическую нагрузку на органы иммунной системы при эндотоксикозе, сопровождающем развитие многих патологических процессов, протекающих с развитием иммунодефицита, что повышает эффективность способа.

Использование в способе солодки сиропа обеспечивает повышение продукции гамма-интерферона, активизирует фагоцитоз и увеличивает активность натуральных киллеров [Кошкина, А.В. Солодка голая. Фитохимический состав и биологические эффекты / А.В. Кошкина, Ю.О. Федотова // Орбиталь. - 2018. - №2(3). - С. 30-51]. Эти свойства указывают на иммуностимулирующий эффект сиропа солодки, что повышает эффективность способа.

Использование в способе смеси Полисорба ВП и солодки сиропа обеспечивает синергетический эффект, что повышает эффективность иммунокоррекции при экспериментальном иммунодефиците, так как оба компонента смеси обладают и антиоксидантным действием [Патент №2253459 С1, МПК А61К 33/00, А61Р 39/06], защищая клетки иммуннойсистемы от повреждения свободными радикалами. Кроме того, Полисорб ВП и глицирризиновая кислота - одно из тритерпеновых соединений, содержащихся в солодке, - обладают противоаллергическим действием [Средство с мембраностабилизирующим эффектом. Номер международной публикации WO 2009/154505 А1, МПК А61К 31/4152, А61Р 43/00, https://patentimages.storage.googleapis.com/63/5e/9c/22e97255d3c888/WO2009154505A1.pdf], что снижает риск аллергических реакций при иммунокоррекции. Оба препарата, входящие в состав смеси, производятся промышленным способом, имеют постоянный состав и доступны по цене для использования в животноводстве в отличие от компонентов прототипа, которые имеют непостоянный состав, зависящий от вида и региона произрастания медоносных растений [Панасюк А.Л., Кузьмина Е.И., Свиридов Д.А., Ганин М.Ю. Индивидуальный комплексный подход к идентификации меда с использованием инструментальных методов анализа. Пищевые системы, 2023, №6(2), 211-223], высокую стоимость и обладают аллергизирующими свойствами [Helbling A, Peter С, Berchtold Е, Bogdanov S, Mtiller U. Allergy to honey: relation to pollen and honey bee allergy. Allergy. 1992 Feb;47(l):41-9; Bauer L, Kohlich A, Hirschwehr R, Siemann U, Ebner H, Scheiner O, Kraft D, Ebner C. Food allergy to honey: pollen or bee products? Characterization of allergenic proteins in honey by means of immunoblotting. J Allergy Clin Immunol. 1996 Jan;97(l Pt l):65-73; Ломаев, Г.В. Причины аллергии на мед / Г.В. Ломаев, А.В. Петышин // Пчеловодство. - 2017. - №1. - С. 48-49; El-Guendouz S, Lyoussi В, Miguel MG. Insight on Propolis from Mediterranean Countries: Chemical Composition, Biological Activities and Application Fields. Chem Biodivers. 2019 Jul; 16(7):e 1900094; Leang ZX, Thalayasingam M, O'Sullivan M. A paediatric case of exercise-augmented anaphylaxis following bee pollen ingestion in Western Australia. Asia Рас Allergy. 2022 Jul 12;12(3):e23], что снижает эффективность их применения.

Способ осуществляется следующим образом. Опыты проводят на 50 белых крысах-самцах линии Вистар половозрелого возраста с массой тела200-250 г. Из данного количества животных формируют 5 групп по 10 особей в каждой: 1 группа - интактные крысы; 2 группа - крысы с моделью иммунодефицита (контроль); 3 группа - крысы с коррекцией иммунодефицита Полисорбом ВП; 4 группа - крысы с коррекцией иммунодефицита солодки сиропом; 5 группа - крысы с коррекцией иммунодефицита смесью Полисорба ВП и солодки сиропа в виде водной суспензии. Животные 1-й группы никаким манипуляциям не подвергались. Животным 2-й группы вводили циклофосфан однократно в дозе 200 мг/кг массы тела на 1-е сутки эксперимента. В 3-й группе на фоне экспериментального иммунодефицита проводили иммунокоррекцию внутрижелудочным введением через зонд Полисорба ВП ежедневно, начиная со 2-го дня эксперимента, в дозе 250 мг/кг массы тела крысы в течение 10 дней. В 4-й группе проводили коррекцию иммунодефицита внутрижелудочным введением через зонд солодки сиропа ежедневно в дозе 250 мг/кг массы тела крысы в течение 10 дней. В 5-й группе проводили коррекцию экспериментального иммунодефицита на 2-е сутки эксперимента путем ежедневного внутрижелудочного введения через зонд в течение 10 дней Полисорба ВП и солодки сиропа в весовом соотношении 1:1 в дозе 250 мг/кг массы тела в виде водной суспензии, которую готовили перед применением, смешивая необходимое количество смеси Полисорба ВП и солодки сиропа с двадцатикратным количеством воды (50 мг смеси×20=1000 мг воды=1 г=1 мл). Животных выводили из эксперимента на 11 сутки. Брыжеечные лимфоузлы фиксировали в 4% нейтральном растворе формальдегида и подвергали стандартной гистологической проводке. Срезы толщиной 5 мкм окрашивали гематоксилином и эозином. Морфометрические исследования осуществляли с помощью цифрового микроскопа Альтами БИО1 и программного обеспечения Altami Studio.

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием непараметрического U-критерия Манна-Уитни. Результатыпредставлены как Me - медиана, Q1 - нижний квартиль, Q3 - верхний квартиль. Различия считали статистически значимыми при р<0,05.

Лимфатические узелки коркового вещества лимфоузлов участвуют в гуморальных иммунных реакциях. Они являются В-зоной, в них преобладают клетки В-ряда, покоящиеся или находящиеся на той или иной стадии антигензависимой дифференцировки. В В-зонах присутствуют и Т-клетки. В процессе антигензависимого созревания В- и Т-клетки взаимодействуют друг с другом, вступая в непосредственный контакт.

Экспериментальные данные представлены в таблице 1.

Через 10 суток после начала эксперимента у крыс с моделированием иммунодефицита количество лимфоидных узелков на срезе лимфоузла уменьшилось более, чем в 2 раза. В группе с коррекцией иммунодефицита Полисорбом ВП данный показатель был выше, чем у крыс с иммунодефицитом на 52,1%, в группе с солодки сиропом - на 33,8% выше, чем у крыс с иммунодефицитом. При использовании Полисорба ВП с солодки сиропом количество лимфоидных узелков на срезе лимфоузла было на 83,1% больше, чем в группе с иммунодефицитом, и лишь на 9,7% меньше, чем у интактных животных, что указывает на усиление фармакологического эффекта при совместном применении Полисорба ВП и солодки сиропа. Длина и ширина лимфоидных узелков у крыс с иммунодефицитом были на 40,3% и 46,3% соответственно меньше, чем данные показатели у интактных животных. Наиболее эффективная коррекция данных параметров отмечалась в группе с использованием Полисорба ВП и солодки сиропа.

Учитывая близкие к значениям интактных животных размеры герминативных центров и процентное количество лимфоидных узелков с герминативными центрами у животных с коррекцией иммунодефицита Полисорбом ВП и солодки сиропом, можно утверждать, что данное сочетание препаратов дает наилучший эффект. Статистически значимыеразличия между данными показателями в группах интактных и опытных животных с коррекцией иммунодефицита Полисорбом ВП и солодки сиропом отсутствуют.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о выраженной иммунокоррекции в условиях модельного эксперимента с провокацией циклофосфанового иммунодефицита у крыс предлагаемой смесью Полисорба ВП и солодки сиропа в виде водной суспензии. Сочетание данных компонентов обеспечивает синергетический эффект при коррекции экспериментального иммунодефицита.

Предлагаемый способ иммунокоррекции у животных с использованием Полисорба ВП и солодки сиропа обладает высокой эффективностью за счет использования Полисорба ВП, который обеспечивает детоксицирующий эффект, что снижает токсическую нагрузку на органы иммунной системы при эндотоксикозе, сопровождающем развитие многих патологических процессов, протекающих с развитием иммунодефицита, за счет использования солодки сиропа, который стимулирует продукцию гамма-интерферона, повышает фагоцитоз и увеличивает активность натуральных киллеров, эти свойства указывают на иммуностимулирующий эффект солодки сиропа, за счет использования смеси Полисорба ВП и сиропа солодки, которая обеспечивает синергетический эффект, так как оба компонента смеси обладают антиоксидантным действием, защищая клетки иммунной системы от повреждения свободными радикалами, за счет использования Полисорба ВП и солодки сиропа, которые производятся промышленным способом и имеют постоянный состав; предлагаемый способ обладает противоаллергическим действием, что снижает риск аллергических реакций при иммунокоррекции за счет противоаллергического действия Полисорба ВП и глицирризиновой кислоты - одного из тритерпеновых соединений, содержащихся в солодке; предлагаемый способ обладает низкой себестоимостью, что позволяет его использовать в животноводстве, вотличие от прототипа, имеющего в своем составе более дорогие компоненты: мед, прополис, пыльцу.

Способ иммунокоррекции может использоваться в клиниках мелких домашних животных и промышленных животноводческих предприятиях для коррекции иммунных нарушений у животных, подвергающихся действию многочисленных стресс-факторов, а также при различных заболеваниях, сопровождающихся развитием иммуносупрессии.

Предложенный способ иммунокоррекции у животных с использованием Полисорба ВП и солодки сиропа прошел испытание в лаборатории кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства ФГБОУ ВО Омского ГАУ.

Изобретение относится к области ветеринарной медицины, в частности к коррекции иммунных нарушений у животных. Способ иммунокоррекции у животных с использованием Полисорба ВП и солодки сиропа включает воспроизведение иммунодефицита у лабораторных животных путем введения циклофосфана однократно в дозе 200 мг/кг массы тела животного на первые сутки эксперимента с последующей его коррекцией на вторые сутки в течение 10 дней при ежедневном внутрижелудочном введении через зонд водной суспензии смеси препаратов Полисорба ВП и солодки сиропа в соотношении 1:1 в дозе 250 мг/кг массы тела животного. Способ иммунокоррекции является высокоэффективным для лечения животных, обладает пониженной степенью риска аллергизации организма животных и осуществляется с использованием стандартизированных препаратов постоянного состава. 1 табл.

Способ иммунокоррекции у животных с использованием Полисорба ВП и солодки сиропа, включающий воспроизведение иммунодефицита у лабораторных животных путем введения циклофосфана однократно в дозе 200 мг/кг массы тела животного на первые сутки эксперимента с последующей его коррекцией на вторые сутки в течение 10 дней при ежедневном внутрижелудочном введении через зонд водной суспензии смеси препаратов, отличающийся тем, что коррекцию иммунодефицита проводят смесью препаратов Полисорба ВП и солодки сиропа в соотношении 1:1 в дозе 250 мг/кг массы тела животного.