СПОСОБ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ ИШЕМИИ КОНЕЧНОСТИ Российский патент 2012 года по МПК G09B23/28 A61K39/395 A61P9/10 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции ишемии конечности.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции ишемии конечности (RU 2302239, опубл. 10.07.2007), который заключается в том, что в эксперименте лабораторному животному с экспериментальной ишемией конечности вводят внутрибрюшинно L-аргинин однократно с 7-го по 28-й день после моделирования ишемии в дозе от 30 до 200 мг/кг.

Недостатком известного решения является то, что прием L-аргинина вызывает побочные эффекты, а именно эмбриотоксичность, тератогенность и мутагенность.

Задачей изобретения является разработка эффективного способа коррекции ишемии конечности, позволяющего исключить наличие побочных эффектов.

Поставленная задача достигается тем, что в эксперименте лабораторному животному с экспериментальной ишемией конечности коррекцию ишемии конечности проводят путем ежедневного в течение 28 дней после моделирования ишемии, два раза в сутки, внутрижелудочного (через зонд) введения смеси растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200 в дозе 4,5 мл/кг (9 мл/кг/сут).

Основным преимуществом предлагаемого способа является отсутствие эмбриотоксичности, тератогенности и мутагенности фармакологического агента, так как он относится к новому классу препаратов сверхмалых доз (СМД) антител.

Междисциплинарные исследования, проводимые в течение более чем 6 лет в ряде научно-исследовательских и клинических учреждений России, позволили выявить основные механизмы, лежащие в основе биологических и клинических эффектов сверхмалых доз (СМД) антител, вводимых перорально. Механизмом действия смеси гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200 (действующее вещество в составе препарата разведено в 100¹², 100³⁰ и 100²⁰⁰ раз соответственно) является активация ими по принципу «обратной связи» эндотелиальной NO-синтазы. Под действием данного фермента клетки эндотелия секретируют оксид азота II (NO) - мощный эндогенный гуморальный вазодилататор, участвующий в релаксации сосудов и стимулирующий рост новых сосудов (неоваскулогенез). Оксид азота II диффундирует в гладкомышечные клетки сосудов, что приводит к их расслаблению. Доклинические исследования подтвердили отсутствие эмбриотоксичности, тератогенности и мутагенности у препаратов сверхмалых доз антител (Эпштейн О.И. Фармакология сверхмалых доз антител к эндогенным регуляторам функций: дис. д-ра мед. наук / О.И.Эпштейн. - Томск, 2003. - С.352).

Способ осуществляется следующим образом.

Опыты проводят на белых крысах линии Wistar массой 250-300 г. Моделирование ишемии конечности проводили под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг веса внутрибрюшинно) путем удаления участка магистрального сосуда, включающего бедренную артерию, подколенную артерию и начальные отделы артерии голени.

Оценка микроциркуляции в мышцах голени животного проводится при помощи лазер-Доплер флоуметра Biopac-systems MP-100 и датчика TSD-144 (США). Для этого под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг веса внутрибрюшинно) иссекают участок кожи в переднебоковом участке области голени. Запись уровня микроциркуляции осуществляют в пяти точках (середина длины мышцы, точки на 3-5 мм выше и ниже, латеральнее и медиальнее первой).

Регистрация уровня микроциркуляции проводится в группах животных: интактные; ложнооперированные; с моделированием ишемии конечности (контроль); с коррекцией ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200.

Смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200 внутрижелудочно (через зонд) вводили ежедневно в дозе 4,5 мл/кг 2 раза в сутки в течение 28 дней после моделирования ишемии.

При статистической обработке данных рассчитывается среднее значение, величина стандартного отклонения. Различия считаются достоверными при р<0,05.

Пример конкретного выполнения.

Уровень микроциркуляции в правой и левой мышцах голени интактных животных не отличался друг от друга и составлял 525,7±9,8 п.е. (перфузионных единиц). Экспериментальные животные были разделены на следующие группы:

1. интактные (n=10);

2. ложнооперированные (n=10);

3. с моделированием ишемии мышцы голени (n=10);

4. с моделированием ишемии мышцы голени + смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200 (n=10).

Моделирование ишемии мышцы голени у крыс осуществляли под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг веса внутрибрюшинно) путем удаления участка магистрального сосуда, включающего бедренную артерию, подколенную артерию и начальные отделы артерий голени.

Коррекцию ишемии конечности производили внутрижелудочным (через зонд) введением смеси растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200 в дозе 4,5 мл/кг два раза в сутки (9 мл/кг/сут) ежедневно с 1-го по 28-й день после моделирования ишемии.

Оценку микроциркуляции в мышцах голени животного проводили при помощи лазер-Доплер флоуметра Biopac-systems MP-100 и датчика TSD-144 (США) на 28 сутки. Для этого под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг веса внутрибрюшинно) иссекали участок кожи в переднебоковой области голени. Запись уровня микроциркуляции осуществляют в пяти точках (середина длины мышцы, точки на 3-5 мм выше и ниже, латеральнее и медиальнее первой). Запись кривой уровня микроциркуляции проводили в течение 30 секунд в каждой точке. Из полученных пяти значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции в мышцах голени у данного животного. Из 10 полученных значений выводили среднее, которое принимали за уровень микроциркуляции в данной группе животных на данном сроке исследования.

Результаты оценки уровня микроциркуляции у животных на 28 сутки при моделировании ишемии конечности и ее коррекции смесью растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200 в дозе 9 мл/кг/сут ежедневно представлены в таблице (табл.1).

Таблица 1 Результаты оценки уровня микроциркуляции в мышцах голени на 28 сутки (М±m), п.е. (перфузионные единицы) Интактные (n=10) 525,7±9,8 Ложнооперированные (n=10) 531,8±12,8 Ишемия конечности (n=10) 361,3±8,7* Ишемия конечности + смесь р-ров гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200 (n=10) 490,3±18,6** Примечание: * - р<0,05 в сравнении с интактной группой животных; ** - р<0,05 в сравнении с группой животных с ишемией конечности

Из таблицы видно, что уровень микроциркуляции после операции моделирования ишемии задней конечности составил 361,3±8,7 п.е. на 28 сутки, что достоверно ниже значения в группе интактных (р<0,001) и ложнооперированных животных (р<0,001). На фоне коррекции патологии смесью растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200 уровень микроциркуляции достоверно возрастает до 490,3±18,6 п.е. (р<0,05).

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать эффективность фармакологической коррекции ишемии конечности смесью растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200 за счет стимуляции неоваскулогенеза. Кроме того, заявленный способ фармакологической коррекции ишемии конечности позволяет исключить побочные эффекты, так как применяемый фармакологический агент относится к классу препаратов сверхмалых доз антител.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для изучения возможности коррекции ишемии. Для этого экспериментальным животным моделируют ишемию конечности. Затем ежедневно в течение 28 дней внутрижелудочно вводят смесь растворов гомеопатических разведений поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200 в дозе 4,5 мл/кг два раза в сутки. Способ обеспечивает эффективное лечение ишемии за счет стимуляции неоваскулогенеза, а также позволяет исключить побочные эффекты, так как применяемый фармакологический агент относится к классу препаратов сверхмалых доз антител. 1 пр., 1 табл.

Способ фармакологической коррекции ишемии конечности, включающий введение лабораторному животному фармакологического средства после моделирования ишемии, отличающийся тем, что в качестве такого средства используют смесь растворов гомеопатических разведении поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной синтазе оксида азота - С12, С30, С200, которую внутрижелудочно в дозе 4,5 мл/кг (9 мл/кг/сут) вводят лабораторному животному ежедневно, в течение 28 дней после моделирования ишемии, два раза в сутки.