СПОСОБ ЭНДОТЕЛИОПРОТЕКЦИИ ПРИ ADMA-ПОДОБНОЙ МОДЕЛИ ГЕСТОЗА ИНГИБИТОРОМ АРГИНАЗЫ II Российский патент 2017 года по МПК G09B23/28 A61K31/195 A61P9/08 A61P15/06 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии.

По известным литературным источникам описанные на сегодняшний день ингибиторы аргиназы являются малоселективными либо неселективными и подавляют активность как аргиназы II, так и аргиназы I. Снижение активности аргиназы I сопряжено с рядом нежелательных эффектов. В экспериментах с нокаутом гена аргиназы I у мышей наблюдались тяжелые симптомы гипераммониемии. Все животные погибали в срок от 10 до 14 дней постнатального развития (Mouse model for human arginase deficiency [Text] / R. K. Iyer, P. K. Yoo, R. M. Kern [et al.] // Mol. Cell. Biol. – 2002. – Vol. 22, № 13. – P. 4491-4498). Актуальным на сегодняшний день является поиск селективных ингибиторов аргиназы II и изучение их протективных свойств.

Известен способ коррекции эндотелиальной дисфункции L-норвалином при ADMA-подобной модели гестоза (RU 2449381 C1, опубл. 27.04.2012), который характеризуется тем, что моделируют ADMA-подобный гестоз у лабораторных беременных крыс линии Wistar ежедневным внутрибрюшинным введением с 14 по 20 день беременности ингибитора NO-синтазы L-нитро-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг массы тела животного. Коррекцию эндотелиальной дисфункции обеспечивают L- норвалином, который на фоне моделирования вводят внутрижелудочно ежедневно в течение 7 суток в дозе 10 мг/кг однократно в сутки. Способ приводит к выраженной коррекции дисфункции в условиях специфических механизмов протекания патологического процесса у беременных.

Степень развития эндотелиальной дисфункции и активизацию ее коррекции с помощью указанного средства оценивают по соотношению эндотелийнезависимой (ЭНЗВ) и эндотелийзависимой вазодилатации (ЭЗВ).

Основным недостатком способа является то, что в эксперименте для коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобной модели гестоза применяют L-норвалин - неселективный ингибитор аргиназы, который снижает активность как аргиназы II, так и аргиназы I. Вследствие подавления активности аргиназы I у животных могут наблюдаться такие побочные эффекты, как гипераммониемия, проявляющаяся в недостаточности цикла ферментов мочевины и приводящая к отравлению организма аммиаком.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции эндотелиальной дисфункции селективным ингибитором фермента аргиназы II, веществом под шифром ZB49-0010C, на модели L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота в эксперименте (Эндотелиопротективная и кардиопротективная активность селективного ингибитора аргиназы II в эксперименте [Текст] / В.И. Якушев, В.В. Гуреев, М.В. Покровский [и др.] // Кубанский научный медицинский вестник. – 2015. – № 3. – С. 139-142), который характеризуется тем, что моделируют дисфункцию эндотелия ежедневным в течение 7 суток внутрибрюшинным введением крысам L-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг. В эксперименте были использованы следующие группы животных: 1) интактные (n=10); 2) контрольные – с L-NAME (n=10); 3) селективный ингибитор фермента аргиназы II, вещество ZB49-0010C, - внутрижелудочно в дозе 1 мг/кг 1 раз в сутки в течение 7 дней подряд; 4) вещество ZB49-0010C - внутрижелудочно в дозе 5 мг/кг 1 раз в сутки в течение 7 дней подряд; 5) вещество ZB49-0010C - внутрижелудочно в дозе 10 мг/кг 1 раз в сутки в течение 7 дней подряд. ZB49-0010C вводилось за 30 минут до введения L-NAME.

Способ обеспечивает эффективную коррекцию эндотелиальной дисфункции в специфических условиях эксперимента. ZB49-0010C обладает выраженной дозозависимой эндотелиопротективной активностью, которая проявляется в предотвращении нарушений взаимоотношения эндотелиозависимой и эндотелионезависимой вазодилатации и улучшении NO-синтезирующей функции эндотелия на ADMA-подобной модели патологии. При этом данные эффекты наиболее выражены в дозе 10 мг/кг.

Основным недостатком способа является то, что в данном эксперименте не были дополнительно изучены эндотелиопротективные свойства при ADMA-подобной модели гестоза в условиях специфических механизмов протекания патологического процесса у беременных.

Изучаемое вещество ZB49-0010C (2-{1-[3-(3-хлороизоксазол-5-ил) пропил] пиперидин-4-ил}-6-(дигидроксиборил) норлейцин дигидрохлорид) (Якушев, В. И. КАРДИОВАСКУЛЯРНАЯ АКТИВНОСТЬ СЕЛЕКТИВНОГО ИНГИБИТОРА АРГИНАЗЫ II [Текст] : дис. … к-та мед. наук : 14.03.06 / В. И. Якушев. – Белгород, 2016. – С.55) представляет собой производное норлейцинамида. Исследуемое нами вещество KUD975 представляет собой синтезированное соединение фенольной природы - метиловый эфир (2-((1-гидроксинафталин-2-ил)тио)ацетил)-D-пролина.

Задачей предлагаемого изобретения является способ эндотелиопротекции при ADMA-подобной модели гестоза ингибитором аргиназы II KUD975, представляющего собой соединение фенольной природы.

Задача достигается тем, что на фоне моделирования ADMA-подобного гестоза в эксперименте у лабораторных беременных крыс линии Wistar ежедневным внутрибрюшинным введением с 14 по 20 день беременности ингибитора NO-синтазы L-NAME в дозе 25 мг/кг массы тела животного проводится коррекция эндотелиальной дисфункции селективным ингибитором аргиназы II KUD975, который на фоне моделирования вводят внутрижелудочно, через зонд, ежедневно, за 30 мин до введения L-NAME, в дозе 1 мг/кг массы тела животного один раз в день в течение 7 сут.

Основным преимуществом предлагаемого способа является то, что в данном эксперименте впервые были изучены эндотелиопротективные свойства при ADMA-подобной модели гестоза селективного ингибитора аргиназы II KUD975 в условиях специфических механизмов протекания патологического процесса у беременных.

Способ осуществляется следующим образом. Эксперимент выполнен на беременных белых крысах-самках линии Wistar массой 250–300 г. ADMA-подобный агент - неселективный блокатор NO-синтазы L-NAME вводили внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут в течение 7 дней (14-20 сутки беременности). На 21-е сутки беременности под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг) вводили катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей гемодинамики, болюсное введение фармакологических агентов осуществляли в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряли непрерывно посредством датчика и аппаратного комплекса для инвазивного измерения показателей гемодинамики Biopac (USA) и компьютерной программы AsqKnowledge 3.8.1.

Проводили сосудистые пробы на эндотелийзависимую вазодилатацию (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, и эндотелийнезависимую вазодилатацию (ЭНЗВ) – внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг с расчетом коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД)

КЭД=S_{АД НП}/S_{АД АХ,}

где КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции; S_{АД НП} - площадь треугольника над кривой восстановления АД при проведении функциональной пробы с введением нитропруссида натрия; S_{АД АХ} - площадь треугольника над кривой восстановления АД при проведении функциональной пробы с введением ацетилхолина в дозе 40 мкг/кг (патент №2301015 от 20.06.2007 г. Бюл. №17).

При статистической обработке данных рассчитывается среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считаются достоверными при p<0,05.

Пример конкретного выполнения

Блокада NO-синтазы, вызванная 7-дневным введением L-NAME лабораторным беременным крысам-самкам (14-20 сутки беременности), приводила к нарушению взаимоотношений вазодилатирующих и вазоконстрикторных механизмов регуляции сосудистого тонуса, о чем свидетельствуют результаты сосудистых проб на эндотелийзависимое (ацетилхолин) и эндотелийнезависимое (нитропруссид натрия) расслабление сосудов и увеличение КЭД с 1,04±0,11 у интактных животных до 3,32±0,21 (р<0,05).

Ежедневное, в течение 7 суток (14-20 сутки беременности), внутрижелудочное, через зонд, введение KUD975 за 30 мин до L-NAME однократно в сутки на фоне ADMA-подобного гестоза приводило к достоверному снижению КЭД до 1,46±0,15, что достоверно меньше, чем в группе животных с введением L-NAME (р<0,05).

Артериальное давление у интактных животных составляло: систолическое (САД) – 131±2 мм рт. ст., диастолическое (ДАД) – 92±2 мм рт. ст. При введении L-NAME происходило увеличение артериального давления до 178±5 мм рт. ст. и 143±4 мм рт. ст. соответственно. Введение исследуемого вещества KUD975 на фоне L-NAME снижало артериальное давление до 157±4 мм рт. ст. и 113±5 мм рт.ст. соответственно (р<0,05).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о выраженной коррекции эндотелиальной дисфункции в условиях ADMA-подобной модели гестоза у беременных крыс селективным ингибитором аргиназы II KUD975.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобной модели гестоза. Способ включает воспроизведение гестоза у лабораторных беременных крыс линии Wistar ежедневным внутрибрюшинным введением с 14 по 20 день беременности ингибитора NO-синтазы L-NAME в дозе 25 мг/кг/сутки. При этом коррекцию эндотелиальной дисфункции проводят ежедневным внутрижелудочным введением селективного ингибитора аргиназы II -KUD975. Введение ингибитора осуществляют за 30 минут до введения L-NAME в дозе 1 мг/кг массы тела животного. Способ приводит к выраженной коррекции дисфункции в условиях специфических механизмов протекания патологического процесса у беременных при исключении побочных эффектов, характерных для мало- и неселективных ингибиторов аргиназ.1 пр.

Способ эндотелиопротекции при ADMA-подобной модели гестоза ингибитором аргиназы II, включающий воспроизведение ADMA-подобного гестоза в эксперименте у лабораторных беременных крыс линии Wistar ежедневным внутрибрюшинным введением с 14 по 20 день беременности ингибитора NO-синтазы L-NAME в дозе 25 мг/кг массы тела животного и проведение его коррекции, отличающийся тем, что коррекцию гестоза проводят ежедневным внутрижелудочным введением, через зонд, за 30 мин до введения L-NAME, селективного ингибитора аргиназы II KUD975 в дозе 1 мг/кг массы тела животного.