АНТИАРИТМИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ОСНОВЕ АНТИАРИТМИЧЕСКОГО СРЕДСТВА Российский патент 2024 года по МПК A61K36/714 B01D11/02 A61P9/06 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Заявляемая группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к средствам и способам получения лаппаконитина гидробромида, в частности к способам получения смеси лаппаконитина гидробромида с сопутствующими алкалоидами, а также к антиаритмическому средству, представляющему собой смесь лаппаконитина гидробромида с сопутствующими алкалоидами, полученную данным способом.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Из уровня техники известно антиаритмическое средство, представляющее собой гидробромид природного алкалоида лаппаконитина (SU 1335293), из которого в настоящее время производят лекарственный препарат «аллапинин».

Данное средство относится к мембраностабилизирующим препаратам I С класса. Фармакологическое действие лаппаконитина гидробромида основано на его способности блокировать встроенные в наружную клеточную мембрану кардиомиоцитов быстрые трансмембранные потенциалзависимые Na+ каналы и тем самым препятствовать поступлению ионов Na+ в цитозоль кардиомиоцитов (Валеев А.Е. с соавт. Нейрофизиология. 1990. №2. С. 201-206). Известно, что препараты на основе лаппаконитина гидробромида замедляют проведение возбуждения и сокращают рефрактерный период в предсердиях, атриовентрикулярном узле, пучке Гиса и волокнах Пуркинье (Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Новая волна, 2002. Т. 1. С. 371). В клинике препараты применяются при наджелудочковой и желудочковой экстрасистолии (далее - ЖЭС); пароксизмах мерцания и трепетания предсердий; пароксизмальной наджелудочковой тахикардии (в т.ч. при синдроме WPW); пароксизмальной желудочковой тахикардии (при отсутствии органических поражений сердца).

Наиболее близким к заявляемому средству является антиаритмическое средство (RU 2624240, опубликовано 03.07.2017), представляющее собой субстанцию, выделенную из растений рода Aconitum (борец) семейства Ranunculaceae (лютиковые), которая содержит лаппаконитин в сочетании с шестью другими алкалоидами: N-ацетилсепаконитин, 1-дезметиллаппаконитин, ранаконитин, N-дезацетиллаппаконитин, изолаппаконитин, 9-деоксилаппаконитин, присутствующими в исходном сырье, или их фармацевтически приемлемые соли, в том числе гидробромиды.

Однако данное средство содержит только семь сопутствующих алкалоидов, в то время как в исходном сырье может содержаться широкий ряд алкалоидов, также обладающих антиаритмическим действием.

Таким образом, из корней с корневищами или травы растений рода Aconitum (борец) семейства Ranunculaceae (лютиковые) - аконита белоустого (Aconitum leucostomum) или корней с корневищами или травы аконита северного (Aconitum septentrionale) потенциально возможно получить антиаритмические средства, с различными сопутствующими алкалоидами.

Учитывая существующую потребность в подобного рода средствах, их получение остается весьма актуальной технической задачей, направленной на расширение арсенала кардиопротекторных средств на основе лапппаконитина и сопутствующих алкалоидов.

Известные способы получения антиаритмических средств основаны на экстракции корней или травы растений рода Aconitum (борец) семейства Ranunculaceae (лютиковые) - аконита белоустого (Aconitum leucostomum) или корней или травы аконита северного (Aconitum septentrionale) различными растворителями: метанолом (Marion L., Fonzer L., Wilkins C.K., Boca Jr and J.P., Sandberg F., Thorsen R., Linden E. // Can J. Chem. 1967. vol. 45, pp. 969-973); 80%-ным этанолом (Ross A., Pelletier S.W.//Tetrahedron. 1992, vol. 48, № 7, pp. 1183-1192); дихлорэтаном (Платонова Т.Ф., Кузовков А.Д., Массагетов П.С.//ЖОХ. - 1958, с. 258-261); хлороформом (Усманова С.К., Тельнов В.А., Юнусов М.С., Абдуллаев Н.Д., Шретер А.И., Филиппова Г.Б. // ХПС. - 1987, с. 879-883).

Известная из уровня техники общепринятая последовательность получения лаппаконитина и сопутствующих алкалоидов, а также их солей с небольшими вариациями условий экстракции и экстрагентов включает следующие стадии:

- экстракция измельченного сухого растительного сырья органическим растворителем,

- упаривание полученного экстракта до полного удаления растворителя,

- подкисление остатка до кислой реакции,

- экстракция полученного кислого раствора не смешивающимся с водой органическим растворителем для удаления примесей неосновного характера,

- подщелачивание водного раствора до щелочной реакции,

- отделение выделяющегося лаппаконитина (фильтрованием или экстракцией),

- переведение основания лаппаконитина в гидробромид действием бромистоводородной кислоты,

- очистка до фармакопейной чистоты гидробромида лаппаконитина кристаллизацией из спирта.

В некоторых случаях дополнительно используется колоночная хроматография на окиси алюминия для доочистки основной массы основания лаппаконитина (Marion L., Fonzer L., Wilkins C.K., Boca Jr and J.P., Sandberg F., Thorsen R., Linden E. // Can J. Chem. 1967. vol. 45, pp. 969-973) или объединенных маточников (Ross A., Pelletier S.W.//Tetrahedron. 1992, vol. 48, № 7, pp. 1183-1192).

Структура лаппаконитина содержит фрагмент эфира N-ацетил антраниловой (о-аминобензойной) кислоты. В силу этого, данная молекула весьма лабильна. Было обнаружено, что и в кислых, и в основных средах может достаточно быстро происходить гидролиз как сложноэфирного, так и N-ацетильного фрагмента. Таким образом, проведение процесса получения лаппаконитина из растительного сырья, согласно известным способам, требовало большой осторожности в соблюдении рН раствора и температурного режима на стадии подкисления упаренного экстракта, на стадии подщелачивания после экстракции примесей неосновного характера, а также при получении гидробромида подкислением бромистоводородной кислотой основания лаппаконитина. Кроме того, во избежание гидролиза все эти способы должны были проводиться сравнительно быстро и не занимать много времени для минимизации побочных процессов гидролиза. Несоблюдение вышеперечисленных условий может приводить к значительному снижению выхода целевого продукта из-за процесса гидролиза на одной или нескольких стадиях способа.

Способ решения указанной проблемы раскрыт в патенте RU 2123347 С1, (опубликовано 20.12.1998), в котором получение лаппаконитина гидробромида осуществляют путем 3-5-кратной экстракции корней или травы аконита северного или корней или травы аконита белоустого 50-80%-ым по объему водным раствором ацетона, с последующей отгонкой ацетона из объединенного водно-ацетонового экстракта, удалением примесей неалкалоидного характера из подкисленного серной кислотой водного остатка однократной обработкой дихлорэтаном, выделением алкалоидов из подщелоченного раствора 2-3-кратной экстракцией дихлорэтаном или этилацетатом, обработкой алкалоидов спиртовым раствором бромистоводородной кислоты и однократной перекристаллизацией лаппаконитина гидробромида из водного спирта.

Однако производственный цикл данного способа весьма длителен - около 60 часов: 21-28 часов затрачивается на экстракцию растительного сырья посредством 3-5-кратной экстракции, определенное время затрачивается на упаривание экстрагента, проводится 4 экстракции дихлорэтаном, около 24 часов затрачивается на кристаллизацию основания лаппаконитина и около 10 часов - на кристаллизацию гидробромида лаппаконитина. Кроме того, данный способ является весьма ресурсоемким. При его осуществлении велика вероятность протекания побочных реакций гидролиза. Наконец, рассматриваемый способ характеризуется недостаточно высоким выходом продукта - средний выход целевого продукта составляет около 0,595 % в расчете на исходное сухое сырье.

Известен способ, в котором решается задача упрощения технологического процесса производства гидробромида лаппаконитина, сокращения его длительности и повышение выхода целевого продукта фармакопейной чистоты. Так, в патенте RU 2545799 C2, (опубликовано 10.04.2015) раскрыт способ, включающий экстракцию корней или травы аконита северного (Aconitum septentrioale) или аконита белоустого (Aconitum leucostomum) органическим растворителем, очистку экстракта, обработку лаппаконитина раствором бромистоводородной кислоты и кристаллизацию целевого продукта. При этом экстракцию указанного растительного сырья осуществляли хлористым метиленом в аппарате для непрерывной экстракции с последующей очисткой полученного экстракта флэш-хроматографией. Длительность производственного цикла в данном способе была снижена до 30 часов, а средний выход целевого продукта достигал 0,73 % при максимальном выходе - 0,95 %.

Однако производственный цикл согласно данному способу по-прежнему является весьма длительным и ресурсоемким, при обеспечении сравнительно невысокого выхода. Это можно объяснить тем, что в данном способе используется флэш-хроматография, которая предполагает использование значительных количеств органического растворителя для элюирования сорбированных алкалоидов и последующего упаривания полученного элюата, а также повторного растворения полученного при упаривании материала для преобразования сырого основания лаппаконитина в гидробромид лаппаконитина в жидкой фазе с использованием растворов бромистоводородной кислоты.

Кроме того, данным способом получают именно лаппаконитина гидробромид, при этом в патенте RU2545799 не раскрыто получение его в смеси с другими алкалоидами. Упомянутые выше способы направлены на получение именно лаппаконитина или его фармацевтически приемлемых солей, в частности, лаппаконитина гидробромида.

В уровне техники также известны эффективные способы получения антиаритмических средств, включающих иные алкалоиды помимо лаппаконитина.

В патенте RU 2039568 С1, (опубликовано 20.07.1995), раскрыт способ получения средства, обладающего антиаритмическим действием, включающий восьмикратную экстракцию органическим растворителем корневищ борца северного/Aconitum Septentrionale Koell/, упаривание объединенного экстракта, растворение осадка алкалоидов в растворе серной кислоты, промывание их органическим растворителем, подщелачивание до pH 9-10, извлечение алкалоидов хлороформом, повторное упаривание, очистку суммы алкалоидов, осаждение целевого продукта 5%-ным раствором бромистоводородной кислоты, при этом экстракцию проводят 78-80%-ым раствором этанола при соотношении 1 2,2 2,6, упаривание проводят до 10 % первоначального объема, осаждают алкалоиды подщелачиванием до pH 9-10 и растворяют их в 10%-ном растворе серной кислоты, сернокислый раствор промывают хлороформом, а очистку суммы алкалоидов проводят обработкой упаренного концентрата этиловым спиртом и бромистоводородную соль алкалоидов перекристаллизовывают из метанола.

Антиаритмическое средство, полученное указанным способом, содержит такие алкалоиды, как лаппаконитин, лайконин, N-дезацетиллаппаконитин, N-ацетилсепаконитин и раноканитин.

К недостаткам данного способа можно отнести высокие длительность и ресурсоемкость способа, в связи с тем, что многократная и длительная экстракция алкалоидов из растительного сырья 80 % этиловым спиртом занимает 56 часов; низкий выход целевого продукта из-за образования значительных количеств длительно не расслаивающихся эмульсий (до нескольких суток), затрудняющих ведение технологического процесса и снижающих выход готового продукта, а также из-за потери продукта с маточным раствором, образующимся после фильтрации технической суммы алкалоидов (до 10 % от прямого выхода готового продукта), повышенный риск токсического поражения, связанный с многократным разделением фаз, и с выделением технической суммы алкалоидов, очистка которой проводится в гетерогенной среде; получение средства, содержащего только пять алкалоидов, присутствующих в исходном сырье.

Наиболее близким к заявленному способу является способ, раскрытый в патенте RU 2624240 С1 (опубл. 03.07.2017).

Выделение технической суммы алкалоидов согласно данному способу проводят четырехкратной экстракцией растительного сырья из растений рода Aconitum (борец) семейства Ranunculaceae (лютиковые) с использованием спирта этилового (этанола) на батарее из трех экстракторов с получением водно-спиртовых извлечений и использованием первого извлечения от каждой загрузки каждого экстрактора для упаривания, а второго, третьего и четвертого извлечений каждой загрузки - в качестве экстрагента для первого, второго и третьего извлечений очередных загрузок, причем четвертое извлечение каждой загрузки производится спиртом. В пусковой период в первом, втором и третьем экстракторах проводятся первая, вторая и третья загрузки сырья соответственно; первое извлечение первой загрузки проводят спиртом и направляют на упаривание, второе извлечение первой загрузки проводят спиртом и направляют во второй экстрактор для получения первого извлечения второй загрузки, которое направляют на упаривание, третье извлечение первой загрузки проводят спиртом этиловым и направляют во второй экстрактор для получения второго извлечения второй загрузки, которое направляют в третий экстрактор для получения первого извлечения третьей загрузки, которое направляют на упаривание, четвертое извлечение первой загрузки проводят спиртом этиловым и направляют во второй экстрактор для получения третьего извлечения второй загрузки, которое направляют в третий экстрактор для получения второго извлечения третьей загрузки, которое направляют на рабочий период, четвертое извлечение второй загрузки проводят спиртом этиловым и направляют в третий экстрактор для получения третьего извлечения третьей загрузки, которое направляют на рабочий период, четвертое извлечение третьей загрузки проводят спиртом этиловым и направляют на рабочий период, при котором в первом, втором и третьем экстракторах проводят четвертую, пятую, шестую и так далее загрузки сырья соответственно; причем первое извлечение каждой загрузки направляют на упаривание, а второе, третье и четвертое - на получение первого, второго и третьего извлечений каждой последующей загрузки. После этого проводят упаривание под вакуумом первого водно-спиртового извлечения и очистку полученного при этом водного кубового остатка от балластных веществ этилацетатом, с подкислением при помощи минеральных или органических кислот водного кубового остатка, насыщенного этилацетатом, и неоднократную экстракцию хлороформом при контроле рН среды, которое не должно превышать значения 2, упаривание хлороформных извлечений под вакуумом и вытеснение хлороформа спиртом этиловым с получением суспензии готового продукта, который фильтруют, промывают спиртом этиловым и сушат.

Причем на первую экстракцию алкалоидов первой загрузки пускового периода в первый экстрактор подают спирт этиловый 80 % при соотношении сырья и экстрагента 1:8, и проводят первую экстракцию в течение 3 часов, при комнатной температуре и перемешивании, с последующей регенерацией спирта из отработанного сырья, очистку этилацетатом первого извлечения от балластных веществ после упаривания производят этилацетатом, насыщенным водой четырехкратно в течение 30 минут при перемешивании, водный раствор экстракта, насыщенного этилацетатом упаривают под вакуумом, охлаждают до комнатной температуры, подкисляют при помощи минеральных или органических кислот до рН среды, не превышающего значение 2, проводят выдержку при работающей мешалке, а по окончании выдержки проводят обработку хлороформом. Обработку хлороформом производят четырехкратно с получением четырех хлороформных извлечений, которые упаривают под вакуумом, а для вытеснения хлороформа подают спирт этиловый ректификованный и снова упаривают до полного удаления хлороформа.

При очистке технического продукта выполняют его растворение, перекристаллизацию, фильтрацию, промывку и сушку с получением готового продукта, при этом упомянутую перекристаллизацию производят из раствора технического продукта в смеси двух одноатомных алифатических насыщенных спиртов, один из которых берется из группы: метанол, этанол, а второй - из группы одноатомных алифатических насыщенных спиртов с количеством атомов углерода от 3 до 5, причем растворение технического продукта первоначально проводят в одном из одноатомных алифатических насыщенных спиртов из группы: метанол, этанол, затем добавляют к полученному раствору одноатомный алифатический насыщенный спирт из группы одноатомных алифатических насыщенных спиртов с количеством атомов углерода от 3 до 5 в количестве 4-20 об. % от полученного раствора, упаривают полученный раствор при вакуумметрическом давлении до полного удаления одноатомного алифатического насыщенного спирта из группы: метанол, этанол и проводят окончательную кристаллизацию целевого продукта в одноатомном алифатическом насыщенном спирте из группы одноатомных алифатических насыщенных спиртов с количеством атомов углерода от 3 до 5, после чего проводят упомянутые фильтрацию, промывку и сушку с получением целевого очищенного продукта.

Общие признаки заявляемого способа с прототипом: экстракция смеси алкалоидов органическим растворителем или смесью спирта с водой; подкисление продукта для получения соли гидробромида производится в органическим растворителе; в некоторых вариантах осуществляют перекристаллизацию из алифатических спиртов.

К недостаткам данного способа можно отнести его многостадийность, длительность и ресурсоемкость, поскольку он предусматривает множество стадий экстракции, упаривания, сушки и последующего растворения полученных промежуточных продуктов для их перекристаллизации, повторного упаривания и сушки, которые, как хорошо известно специалистам в данной области техники, являются весьма длительными и ресурсоемкими, а также то, что данный способ позволяет выделять только семь присутствующих в исходном сырье алкалоидов, обладающих противоаритмической активностью.

Вышеизложенное подтверждает существующую проблему в получении антиаритмических средств на основе гидробромида лаппаконитина, решение которой обеспечивало бы меньшую длительность и ресурсоемкость способа, при достижении сравнимого или более высокого выхода целевого продукта, выделенного из исходного сырья растений рода Aconitum (борец) семейства Ranunculaceae (лютиковые) и содержащего большее число алкалоидов, обладающих противоаритмической активностью.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Основной задачей заявляемой группы изобретений является расширение арсенала кардиопротекторных средств, обладающих антиаритмической активностью, и способов их получения.

Технический результат - реализация этого назначения.

При этом заявляемая группа изобретений позволяет:

- повысить быстродействие технологического процесса получения заявляемого антиаритмического средства за счет исключения ресурсо- и энергоемких стадий упаривания, сушки и последующего растворения в растворителях, отличных от использованных на стадии экстракции;

- повысить качество готового продукта за счет уменьшения времени термического воздействия, что позволяет избежать внесения в него дополнительных примесей;

- получить кардиопротекторное средство, обладающее антиаритмическими свойствами и включающее 11 гидробромидов алкалоидов.

Заявляемый технический результат достигается тем, что средство, обладающее антиаритмическим действием, представляет собой субстанцию, выделенную из растений борца северного (борца высокого) - Aconitum septentrionale Koelle, семейства лютиковые - Ranunculaceae или борца белоустого - Aconitum leucostomum, семейства лютиковые - Ranunculaceae, включающую гидробромиды алкалоидов лаппаконитина, септефина,

гидробромида алкалоида структурной формулы

гидробромида алкалоида структурной формулы

сепаконитина, N-деацетилранаконитина, N-деацетиллаппаконитина, N-ацетилсепаконитина, ранаконитина, изолаппаконитина, 9-деоксилаппаконитина при следующем соотношении масс. %:

лаппаконитина гидробромид - 79,36-92,06,

септефина гидробромид - 0,02-0,14,

алкалоида структурной формулы

гидробромид - 0,10-0,86,

алкалоида структурной формулы

гидробромид 0,02-0,11,

сепаконитина гидробромид 0,03-0,12,

N-деацетилранаконитина гидробромид 0,01-0,16,

N-деацетиллаппаконитина гидробромид 0,84-3,56,

N-ацетилсепаконитина гидробромид 1,75-4,86,

ранаконитина гидробромид 0,79-9,75,

изолаппаконитина гидробромид 0,86-3,26,

9-деоксилаппаконитина гидробромид 0,42-0,76.

Антиаритмическое средство может быть выделено из растительного сырья, представляющего корневища с корнями борца северного (борца высокого) - Aconitum septentrionale Koelle, семейства лютиковые - Ranunculaceae, или корневища и корни растения борца белоустого - Aconitum leucostomum, семейства лютиковые - Ranunculaceae.

Антиаритмическое средство может быть выделено из травы растения борца белоустого - Aconitum leucostomum, семейства лютиковые - Ranunculaceae.

Заявляемый технический результат достигается также тем, что в отличие от известного способа получения антиаритмического средства, основанном на измельчении растительного сырья борца северного (борца высокого) - Aconitum septentrionale Koelle, семейства лютиковые - Ranunculaceae или борца белоустого - Aconitum leucostomum, семейства лютиковые - Ranunculaceae, рода Aconitum (борец) семейства Ranunculaceae (лютиковые), экстракции растительного сырья с помощью экстрагента, выбранного из группы органических растворителей, фильтрацию, промывку и сушку с получением целевого очищенного продукта в виде солей, образованных минеральной кислотой, и его очистку, в заявляемом способе экстракцию осуществляют при соотношении массы сырья в граммах и объема экстрагента в мл 1:1, с помощью экстрагента, выбранного из группы, состоящей из этилового спирта, изопропилового спирта, ацетона и смеси этилового и изопропилового спирта, прибавляют к экстракту адсорбирующую добавку, выбранную из группы, состоящей из силикагеля, окиси алюминия и активированного угля, а количество адсорбирующей добавки выбирают в объеме от 0,1/100 до 5/100 к массе загруженного сырья, после перемешивания отделяют адсорбирующую добавку с адсорбированными на ней примесями и смолами путем фильтрации, полученный фильтрат подкисляют раствором бромистоводородной кислоты, и упаривают полученный раствор до получения сухого остатка целевого продукта, содержащего смесь лаппаконитина гидробромида и гидробромидов сопутствующих алкалоидов, включающих септефин, сепаконитин, N-деацетилранаконитин, N-деацетиллаппаконитин, N-ацетилсепаконитин, ранаконитин, изолаппаконитин, 9-деоксилаппаконитин,

алкалоид структурной формул

алкалоид структурной формулы

Предпочтительно растительное сырье, выбирать из группы, состоящей из травы борца белоустого, корневищ и корней борца белоустого - Aconitum leucostomum Worosch, корневищ и корней борца северного (борца высокого) - Aconitum septentrionale Koelle (A. excelsum Reichenb.) семейства лютиковых - Ranunculaceae).

Предпочтительно экстрагент выбирать из группы, состоящей из этилового спирта с концентрацией 80-95 об. %, изопропилового спирта, ацетона и смеси этилового и изопропилового спирта в соотношении от 1/9 до 9/1 (об./об.).

Оптимально проводить экстракцию в течение 2-4 часов.

Предпочтительно устанавливать время перемешивания добавки с экстрактом в пределах 5 - 60 минут.

Адсорбирующую добавку и экстракт оптимально перемешивать в течение 30 минут при скорости перемешивания 100-300 об./мин.

Предпочтительно отделять адсорбирующую добавку путем фильтрации под вакуумом или самотеком через стеклянный пористый фильтр, или бумажный фильтр, или тканый фильтр или синтетическое волокно, например, полиамид.

Раствор бромистоводородной кислоты можно выбирать из соотношения 0,12 мл бромистоводородной кислоты 48 % к 100 г сырья.

Оптимально подкислять полученный фильтрат раствором бромистоводородной кислоты в растворителе, который был использован в качестве экстрагента.

В некоторых вариантах способа полученный целевой продукт дополнительно растворяют в спирте и осуществляют его перекристаллизацию.

Заявляемый способ позволяет значительно сократить время производства антиаритмического средства (до 5-10 часов) и ресурсоемкость данного процесса за счет проведения экстракции целевых компонентов из растительного сырья простым и эффективным образом в экстракторе «Сокслет» (Jensen W. B. The Origin of the Soxhlet Extractor (англ.) // J. Chem. Educ. - 2007. - Vol. 84, no. 12. - P. 1913-1914), не требующим использования значительных количеств экстрагента, проведения очистки полученного экстракта путем добавления адсорбирующей добавки с последующим ее отделением с адсорбированными на ней смолами и примесями простой фильтрацией, что не требует проведения весьма ресурсо- и энергоемких стадий упаривания, сушки и последующего растворения в растворителях, отличных от использованных на стадии экстракции, т.е. стадий, обычно входящих в аналогичные способы, известные из уровня техники, и использующихся в том числе в способе, выбранном в качестве наиболее близкого аналога. В некоторых вариантах ресурсоемкость повышается также за счет преобразования полученных алкалоидов в соответствующие гидробромиды за счет простого подкисления полученного после отделения адсорбирующей добавки фильтрата раствором бромистоводородной кислоты в том же растворителе, что использовался на стадии экстракции, что также дополнительно исключает весьма длительные, а также ресурсо- и энергоемкие стадии получения продукта в твердом состоянии и последующего его растворения в иных растворителях. Кроме того, исключение смены растворителя в заявленном способе позволяет избежать излишнего термического воздействия на получаемые промежуточные и итоговые продукты и тем самым снизить вероятность гидролиза целевых компонентов, а также избежать внесения в итоговый продукт дополнительных примесей. Не желая ограничиваться рамками какой-либо конкретной теории, авторы настоящего изобретения полагают, что это также позволяет способу согласно изобретению обеспечивать высокий выход продукта из разного вида сырья (от 0,7 % до 1,0 %), выход, который сравним с теми, что обеспечиваются известными из уровня техники методиками получения аналогичных средств, а зачастую и превышающий их. Также способ согласно изобретению позволяет получать средство, в котором содержится большее число алкалоидов, присутствующих в исходном сырье, обладающих сходной антиаритмической активностью. За счет этого эффективность антиаритмического средства согласно изобретению выше, чем у известных из уровня техники аналогов.

ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Заявляемый способ включает следующие стадии получения антиаритмического средства:

- измельчают растительное сырье, выбранное из группы, состоящей из травы борца белоустого, корневищ и корней борца белоустого - Aconitum leucostomum Worosch, корневищ и корней борца северного (борца высокого) - Aconitum septentrionale Koelle (A. excelsum Reichenb.) семейства лютиковых - Ranunculaceae)

- осуществляют взаимодействие измельченного растительного сырья с экстрагентом в экстракторе типа «сокслет» при соотношении масса сырья в граммах: объем экстрагента в мл 1:1, при этом экстрагент выбирают из группы, состоящей из этилового спирта с концентрацией 80-95 об. %, изопропилового спирта, ацетона и смеси этилового и изопропилового спирта в соотношении от 1/9 до 9/1 (об./об.). Оптимальное время экстракции составляет 2-4 часа, более длительная экстракция не приводит к увеличению выхода;

- добавляют к полученному экстракту адсорбирующую добавку, выбранную из группы, состоящей из силикагеля, окиси алюминия и активированного угля и перемешивают полученную смесь в течение 30 минут при скорости перемешивания 100-300 обр./мин. Количество адсорбирующей добавки берется в соотношении 1/100 к массе загруженного сырья, возможно уменьшение и увеличение количества адсорбирующей добавки в интервале от 0,1/100 до 5/100 к массе загруженного сырья. Время перемешивания можно варьировать от 5 мин до 60 мин;

- затем отделяют адсорбирующую добавку с адсорбированными на ней примесями и смолами путем фильтрации под вакуумом или самотеком через стеклянный пористый фильтр, или бумажный фильтр, или тканый фильтр или синтетическое волокно (например, полиамид);

- подкисляют полученный фильтрат раствором бромистоводородной кислоты (в оптимальном соотношения 0,12 мл бромистоводородной кислоты 48 % к 100 г взятого сырья) в том же растворителе, что использовался в качестве экстрагента, и упаривают полученный раствор до получения сухого остатка, содержащего чистого лаппаконитина с сопутствующими алкалоидами; Увеличение количества бромистоводородной кислоты приводит к загрязнению продукта, уменьшение - к неполному образованию гидробромидов алкалоидов;

- в некоторых вариантах реализации растворяют полученный продукт в спирте и осуществляют перекристаллизацию. Перекристаллизация используется для увеличения доли содержания основного компонента - лаппаконитина в смеси алкалоидов в виде гидробромидов.

Входящие в состав заявленного антиаритмического средства алкалоиды имеют следующие структурные формулы, химические наименования и характеристики:

Лаппаконитин

IUPAC: (1S,4S,5S,7S,8S,9S,10S,11S,13R,14S,16S,17R)-20-этил-8,9-дигидрокси-1,14,16-триметокси аконитан-4-ил 2-(ацетиламино)бензоат.

Химическая формула: C₃₂H₄₄N₂O₈.

Молекулярная масса: 584,71.

Септефин

IUPAC: (1S,4S,5S,7S,8S,9S,10S,11S,13R,14S,16S,17R)-20-этил-8,9-дигидрокси-1,14,16-триметокси аконитан-4-ил 2-(метиламино)бензоат.

Химическая формула: C₃₁H₄₄N₂O₇.

Молекулярная масса: 556,70.

IUPAC: (1S,4S,5S,7S,8S,9S,10S,11S,13R,14S,16S,17R)-20-этил-1,8,10-тригидрокси-14,16-диметоксиаконитан-4-ил 2-(ацетиламино)бензоат.

Химическая формула: C₃₁H₄₂N₂O₈.

Молекулярная масса: 570,68.

IUPAC: (1S,4S,5S,7S,8S,9S,10S,11S,13R,14S,16S,17R)-20-этил-7,8,10-тригидрокси-1,14,16-триметоксиаконитан-4-ил 2-(ацетиламино)бензоат.

Химическая формула: C₃₂H₄₄N₂O₉.

Молекулярная масса: 600,71.

Сепаконитин

IUPAC: (1S,4S,5S,7S,8S,9S,10S,11S,13R,14S,16S,17R)-20-этил-8,9,10-тригидрокси-1,14,16-триметоксиаконитан-4-ил 2-аминобензоат.

Химическая формула: C₃₀H₄₂N₂O₈.

Молекулярная масса: 558,67.

N-деацетилранаконитин

IUPAC: (1S,4S,5S,7S,8S,9S,10S,11S,13R,14S,16S,17R)-20-этил-7,8,9-тригидрокси-1,14,16-триметоксиаконитан-4-ил 2-аминобензоат.

Химическая формула: C₃₀H₄₂N₂O₈.

Молекулярная масса: 558,67.

N-деацетиллаппаконитин

IUPAC: (1S,4S,5S,7S,8S,9S,10S,11S,13R,14S,16S,17R)-20-этил-8,9-дигидрокси-1,14,16-триметоксиаконитан-4-ил 2-аминобензоат.

Химическая формула: C₃₀H₄₂N₂O₇.

Молекулярная масса: 542,67.

N-ацетилсепаконитин

IUPAC: (1S,4S,5S,7S,8S,9S,10S,11S,13R,14S,16S,17R)-20-этил-8,9,10-тригидрокси-1,14,16-триметокси аконитан-4-ил 2-(ацетиламино)бензоат.

Химическая формула: C₃₂H₄₄N₂O₉.

Молекулярная масса: 600,71.

Ранаконитин

IUPAC: (1S,4S,5S,7S,8S,9S,10S,11S,13R,14S,16S,17R)-20-этил-7,8,9-тригидрокси-1,14,16-триметоксиаконитан-4-ил 2-(ацетиламино)бензоат.

Химическая формула: C₃₂H₄₄N₂O₉.

Молекулярная масса: 600,71.

Изолаппаконитин

IUPAC: (1S,4S,5S,7S,8S,9S,10S,11S,13R,14S,16S,17R)-20-этил-7,8-дигидрокси-1,14,16-триметоксиаконитан-4-ил 2-(ацетиламино)бензоат.

Химическая формула: C₃₂H₄₄N₂O₈.

Молекулярная масса: 584,71.

9-деоксилаппаконитин

IUPAC: (1S,4S,5S,7S,8S,9S,10S,11S,13R,14S,16S,17R)-20-этил-8-гидрокси-1,14,16-триметоксиаконитан-4-ил 2-(ацетоамино)бензоат.

Химическая формула: C₃₂H₄₄N₂O₇.

Молекулярная масса: 568,71.

Далее осуществление заявленных изобретений демонстрируется с помощью следующих иллюстративных неограничивающих примеров. Данные примеры представлены исключительно для того, чтобы показать возможность осуществления заявленных изобретений с достижением упомянутых выше технических результатов, и их не следует использовать для какого-либо ограничения объема притязаний по настоящей заявке, поскольку специалисту в данной области очевидно, что заявленные изобретения могут быть осуществлены с достижением заявленных технических результатов и в иных частных случаях, прямо не показанных в примерах.

Пример 1

В аппарат для непрерывной экстракции типа «сокслет» объемом 500 мл загружали 250 г перемолотого до состояния мелкого порошка (проходящего через сито с диаметром пор 0,5 мм) сухого растительного сырья (травы борца белоустого). Проводили экстракцию с помощью 250 мл этилового спирта с концентрацией 80 об. % в течение 2 часов. К полученному экстракту прибавляли 2,5 г силикагеля (70-230 меш) и перемешивали в течение 30 мин. Осадок отфильтровывали под вакуумом через стеклянный пористый фильтр с характеристикой пористости фильтра ПОР40 в течение 15 мин, а к полученному раствору добавляли ~0,3 мл 48 % (масс.) бромистоводородной кислоты в 2 мл этилового спирта с концентрацией 80 об. % и перемешивали в течение 15 мин. Раствор упаривали досуха под вакуумом и полученный лаппаконитин гидробромид с сопутствующими алкалоидами чистотой около 90 % (масс.) в пересчете на лаппаконитин гидробромид перекристаллизовывали из этилового спирта с концентрацией 95 об. % из расчета 2 мл спирта на 850 мг лаппаконитина гидробромида.

Получили около 1,9 г лаппаконитина гидробромида с гидробромидами сопутствующих алкалоидов чистотой более 97 % в пересчете на лаппаконитин гидробромид.

Суммарный выход извлечения лаппаконитина гидробромида из растительного сырья по данному методу составляет около 0,76 %. Выход гидробромидов сопутствующих алкалоидов по данному примеру приведен в таблице 3.

Пример 2

В аппарат для непрерывной экстракции типа «сокслет» объемом 500 мл загружали 250 г перемолотого до состояния мелкого порошка (проходящего через сито с диаметром пор 0,5 мм) сухого растительного сырья (корневищ с корнями борца северного). Проводили экстракцию с помощью 250 мл изопропилового спирта в течение 2,5 часов. К полученному экстракту прибавляли 2,5 г угля активированного (БАУ-МФ) и перемешивали 30 мин. Осадок отфильтровывали под вакуумом через бумажный фильтр «синяя лента» (плотная, мелкозернистая фильтровальная бумага), а к полученному раствору добавляли ~0,3 мл 48 % бромистоводородной кислоты в 2 мл изопропиловго спирта и перемешивали 15 мин. Раствор упаривали досуха под вакуумом и получали около 2,5 г лаппаконитина гидробромида с гидробромидами сопутствующих алкалоидов чистотой более 97 % в пересчете на лаппаконитин гидробромид.

Суммарный выход извлечения лаппаконитина гидробромида из растительного сырья по данному методу составил около 1,0 %. Выход гидробромидов сопутствующих алкалоидов по данному примеру приведен в таблице 3.

Пример 3

В аппарат для непрерывной экстракции типа «сокслет» объемом 500 мл загружали 250 г перемолотого до состояния мелкого порошка (проходящего через сито с диаметром пор 0,5 мм) сухого растительного сырья (корневищ и корней борца белоустого). Проводили экстракцию с помощью 250 мл смеси изопропилового и этилового спирта (30/70 (об./об.)) в течение 2,5 часов. К полученному экстракту прибавляли 2,5 г силикагеля (60-120 меш) и перемешивали 30 мин. Осадок отфильтровывали самотеком через бумажный фильтр «синяя лента», а к полученному раствору добавляли ~0,3 мл 48 % бромистоводородной кислоты в 2 мл смеси изопропилового и этилового спирта (30/70 (об/об)) и перемешивали 15 мин. Раствор упаривали досуха под вакуумом и получали около 2,2 г лаппаконитина гидробромида с гидробромидами сопутствующих алкалоидов чистотой более 97 % в пересчете на лаппаконитин гидробромид.

Суммарный выход извлечения лаппаконитина гидробромида из растительного сырья по данному методу составлял около 0,88 %. Выход гидробромидов сопутствующих алкалоидов по данному примеру приведен в таблице 3.

Пример 4

В аппарат для непрерывной экстракции типа «сокслет» объемом 500 мл загружали 250 г перемолотого до состояния мелкого порошка (проходящего через сито с диаметром пор 0,5 мм) сухого растительного сырья (корневищ и корней борца белоустого). Проводили экстракцию с помощью 250 мл смесью изопропилового и этилового спирта (60/40 (об./об.)) в течение 2,5 часов. К полученному экстракту прибавляли 2,5 г угля активированного (БАУ-А) и перемешивали 30 мин. Осадок отфильтровывали под вакуумом через тканевый фильтр, а к полученному раствору добавляли ~0,3 мл 48 % бромистоводородной кислоты в 2 мл смеси изопропилового и этилового спирта (60/40 (об./об.)) и перемешивали 15 мин. Раствор упаривали досуха под вакуумом и полученный лаппаконитин гидробромид с сопутствующими алкалоидами чистотой около 90 % в пересчете на лаппаконитин гидробромид перекристаллизовывали из спирта изопропилового из расчета 3 мл спирта на 1 г лаппаконитина гидробромида.

Получили около 2,2 г лаппаконитина гидробромида с гидробромидами сопутствующих алкалоидов чистотой более 97 % в пересчете на лаппаконитин гидробромид.

Суммарный выход извлечения лаппаконитина гидробромида из растительного сырья по данному методу составляет около 0,88 %. Выход гидробромидов сопутствующих алкалоидов по данному примеру приведен в таблице 3.

Пример 5

В аппарат для непрерывной экстракции типа «сокслет» объемом 500 мл загружали 250 г перемолотого до состояния мелкого порошка (проходящего через сито с диаметром пор 0,5 мм) сухого растительного сырья (корневищ и корней борца белоустого). Проводили экстракцию с помощью 250 мл ацетона в течение 4 часов. К полученному экстракту прибавляли 2,5 г угля активированного БАУ-МФ (березовый активированный уголь марки МФ) и перемешивали 30 мин. Осадок отфильтровывали под вакуумом через нейлоновый фильтр, а к полученному раствору добавляли ~0,3 мл 48 % бромистоводородной кислоты в 2 мл ацетона и перемешивали 15 мин. Раствор упаривали досуха под вакуумом и полученный лаппаконитин гидробромид с гидробромидами сопутствующих алкалоидов чистотой около 90 % в пересчете на лаппаконитин гидробромид перекристаллизовывали из спирта изопропилового из расчета 3 мл спирта на 1 г лаппаконитина гидробромида.

Получили около 2,1 г лаппаконитина гидробромида с гидробромидами сопутствующих алкалоидов чистотой более 97 % в пересчете на лаппаконитин гидробромид.

Суммарный выход извлечения лаппаконитина гидробромида из растительного сырья по данному методу составил около 0,84 %. Выход гидробромидов сопутствующих алкалоидов по данному примеру приведен в таблице 3.

Пример 6

В аппарат для непрерывной экстракции типа «сокслет» объемом 500 мл загружали 250 г перемолотого до состояния мелкого порошка (проходящего через сито с диаметром пор 0,5 мм) сухого растительного сырья (корневищ с корнями борца северного). Проводили экстракцию с помощью 250 мл этилового спирта с концентрацией 95 об. % в течение 2-х часов. К полученному экстракту прибавляли 2,5 г алюминия оксида (марки АОА-1) и перемешивали 30 мин. Осадок отфильтровывали под вакуумом через стеклянный пористый фильтр ПОР 40, а к полученному раствору добавляли ~0,3 мл 48 % бромистоводородной кислоты в 2 мл этилового спирта с концентрацией 95 об. % и перемешивали 15 мин. Раствор упаривали досуха под вакуумом и полученный лаппаконитин гидробромид с сопутствующими алкалоидами чистотой около 90 % в пересчете на лаппаконитин гидробромид перекристаллизовывали из этилового спирта с концентрацией 95 об. % из расчета 2 мл спирта на 850 мг лаппаконитина гидробромида.

Получали около 2,0 г лаппаконитина гидробромида с гидробромидами сопутствующих алкалоидов чистотой более 97 % в пересчете на лаппаконитин гидробромид.

Суммарный выход извлечения лаппаконитина гидробромида из растительного сырья по данному методу составил около 0,8 %. Выход гидробромидов сопутствующих алкалоидов по данному примеру приведен в таблице 3.

Пример 7

В аппарат для непрерывной экстракции типа «сокслет» объемом 500 мл загружали 250 г перемолотого до состояния мелкого порошка (проходящего через сито с диаметром пор 0,5 мм) сухого растительного сырья (травы борца белоустого). Проводили экстракцию с помощью 250 мл смесью изопропилового и этилового спирта (80/20 (об./об.)) в течение 2,5 часов. К полученному экстракту прибавляли 2,5 г алюминия оксида (марки АОА-2) и перемешивали 30 мин. Осадок отфильтровывали под вакуумом через стеклянный пористый фильтр ПОР 40, а к полученному раствору добавляли ~0,3 мл 48 % бромистоводородной кислоты в 2 мл смеси изопропилового и этилового спирта (80/20 (об./об.)) и перемешивали 15 мин. Раствор упаривали досуха под вакуумом и полученный лаппаконитин гидробромид с сопутствующими алкалоидами чистотой около 90 % в пересчете на лаппаконитин гидробромид перекристаллизовывали из спирта изопропилового из расчета 3 мл спирта на 1 г лаппаконитина гидробромида.

Получали около 1,8 г лаппаконитина гидробромида с гидробромидами сопутствующих алкалоидов чистотой более 97 % в пересчете на лаппаконитин гидробромид.

Суммарный выход извлечения лаппаконитина гидробромида из растительного сырья по данному методу составил около 0,72 %. Выход гидробромидов сопутствующих алкалоидов по данному примеру приведен в таблице 3.

Пример 8

В аппарат для непрерывной экстракции типа «сокслет» объемом 500 мл загружали 250 г перемолотого до состояния мелкого порошка (проходящего через сито с диаметром пор 0,5 мм) сухого растительного сырья (травы борца белоустого). Проводили экстракцию с помощью 250 мл этилового спирта с концентрацией 80 об. % в течение 2 часов. К полученному экстракту прибавляли 2,5 г алюминия оксида и перемешивали 30 мин. Осадок отфильтровывали под вакуумом через бумажный фильтр «синяя лента», а к полученному раствору добавляли ~0,3 мл 48 % бромистоводородной кислоты в 2 мл этилового спирта с концентрацией 80 об. % и перемешивали 15 мин. Раствор упаривали досуха под вакуумом и полученный лаппаконитин гидробромид с сопутствующими алкалоидами чистотой около 90 % в пересчете на лаппаконитин гидробромид перекристаллизовывали из этилового спирта с концентрацией 95 об. % из расчета 2 мл спирта на 850 мг лаппаконитина гидробромида.

Получили около 1,7 г лаппаконитина гидробромида с гидробромидами сопутствующих алкалоидов чистотой более 97 % в пересчете на лаппаконитин гидробромид.

Суммарный выход извлечения лаппаконитина гидробромида из растительного сырья по данному методу составил около 0,68 %. Выход гидробромидов сопутствующих алкалоидов по данному примеру приведен в таблице 3.

Пример 9

В аппарат для непрерывной экстракции типа «сокслет» объемом 500 мл загружали 250 г перемолотого до состояния мелкого порошка (проходящего через сито с диаметром пор 0,5 мм) сухого растительного сырья (корневищ с корнями борца северного) лаппаконитин. Проводили экстракцию с помощью 250 мл ацетона в течение 4 часов. К полученному экстракту прибавляли 2,5 г силикагеля (100-200 меш) и перемешивали 30 мин. Осадок отфильтровывали под вакуумом через стеклянный пористый фильтр ПОР 40, а к полученному раствору добавляли ~0,3 мл 48 % бромистоводородной кислоты в 2 мл ацетона и перемешивали 15 мин. Раствор упаривали досуха под вакуумом и полученный лаппаконитин гидробромид с сопутствующими алкалоидами чистотой около 90 % в пересчете на лаппаконитин гидробромид перекристаллизовывали из изопропилового спирта из расчета 3 мл спирта на 1 г лаппаконитина гидробромида.

Получали около 2,3 г лаппаконитина гидробромида с гидробромидами сопутствующих алкалоидов чистотой более 97 % в пересчете на лаппаконитин гидробромид.

Суммарный выход извлечения лаппаконитина гидробромида из растительного сырья по данному методу составил около 0,92 %.

Выход гидробромидов сопутствующих алкалоидов по данному примеру приведен в таблице 3.

Ниже представлена Сводная таблица 1 компонентов, используемых при выделении Лаппаконитина и сопутствующих алкалоидов (в виде гидробромидов) из растительного сырья.

Таблица 1

№ Экстрагент Сорбент Выход лаппаконитина,
% от массы исходного сырья в сухом состоянии Сырье Время производства 1 80 % спирт этиловый силикагель 0,76 % трава борца белоустого 6,5 ч 2 изопропиловый спирт уголь активированный 1,0 % корневища с корнями борца северного 6 ч 3 смесь изопропилового и этилового спирта (30/70 (об./об.) силикагель 0,88 % корневища и корни борца белоустого 9,5 ч 4 смесь изопропилового и этилового спирта (60/40 (об./об.) уголь активированный 0,88 % корневища и корни борца белоустого 6 ч 5 ацетон уголь активированный 0,84 % корневища и корни борца белоустого 5 ч 6 95 % спирт этиловый алюминия оксид 0,8 % корневища с корнями борца северного 7 ч 7 смесь изопропилового и этилового спирта (80/20 (об./об.) алюминия оксид 0,72 % трава борца белоустого 5,5 ч 8 80 % спирт этиловый алюминия оксид 0,68 % трава борца белоустого 7 ч 9 ацетон силикагель 0,92 % корневища с корнями борца северного 5,5 ч

Полученные продукты анализировали с помощью нижеприведенной методики анализа.

Методика анализа:

Обнаружение конкретных алкалоидов, присутствующих в продукте, и определение их количества проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ), осуществляемой при следующих условиях.

Приготовление растворов.

Растворитель (подвижная фаза А). Метанол: вода: хлороформ: триэтиламин (70 : 30 : 2 : 0,1).

Испытуемый раствор. Около 100 мг анализируемой субстанции помещали в мерную колбу вместимостью 10 мл, растворяли в 9 мл растворителя на ультразвуковой ванне (УЗВ) в течение 15-20 мин, охлаждали до комнатной температуры, доводили объем раствора до метки растворителем и перемешивали. Полученный раствор фильтровали через нейлоновый мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Хроматографирование

Условия хроматографирования и оборудование:

- хроматограф жидкостной, оснащённый спектрофотометрическим детектором;

- колонка Phenomenex Luna C18(2), 250 мм × 4,6 мм × 5 мкм с предколонкой той же фазы Phenomenex С18 3 × 4 мм или аналогичная;

- скорость потока 1,0 мл/мин;

- температура колонки 20-25°С;

- детектор 250 нм;

- объём вводимой пробы 25 мкл (допустимо увеличить объем вводимой пробы до 100 мкл при необходимости, для лучшей идентификации минорных пиков алкалоидов);

- подвижная фаза А: метанол: вода: хлороформ: триэтиламин (70 : 30 : 2 : 0,1);

- подвижная фаза В: метанол;

- режим элюирования: градиентный.

В таблице 2 указано соотношение подвижных фаз А (ПФА) и В (ПФВ) при градиентном элюировании.

Таблица 2

Время, мин ПФА, % ПФВ, % 0 100 0 40 65 35 45 100 0 50 100 0

После завершения анализа колонку промывали изопропиловым спиртом в течение 60 минут с потоком 0,5 мл/мин. для очистки и подготовки колонки для последующих анализов.

При хроматографировании в указанных условиях время удерживания пика лаппаконитина, который является самым интенсивным пиком на хроматограмме, составляло около 20-25 мин.

Относительные времена удерживания пиков сопутствующих алкалоидов составляли:

Септефин - 0,33-0,43;

алкалоида структурной формулы - 0,35-0,45;

алкалоида структурной формулы - 0,45-0,55;

сепаконитин - 0,55-0,65;

N-деацетилранаконитин - 0,62-0,72;

N-деацетиллаппаконитин - 0,70-0,80;

N-ацетилсепаконитин - 0,78-0,88;

ранаконитин - 0,88-0,98;

лаппаконитин - 1,0;

изолаппаконитин - 1,04-1,14;

9-деоксилаппаконитин - 1,50-1,70.

Пики, относительные времена удерживания которых меньше относительного времени удерживания пика септефина, являются системными или принадлежат примеси (соединения с другой, отличной от аконитановой, структурой) и не принимаются во внимание.

Результаты анализа считаются достоверными, если выполняются требования теста «Проверка пригодности хроматографической системы».

Проверка пригодности хроматографической системы

Хроматографическая система считается пригодной (ГФ РФ (XIV издания), ОФС.1.2.1.2.0005.15 "Высокоэффективная жидкостная хроматография"), если выполняются следующие условия на хроматограмме испытуемого раствора:

- разрешение между пиками N-дезацетиллаппаконитина и N-ацетилсепаконитина и пиками ранаконитина и N-ацетилсепаконитина - не менее 1,5;

- разрешение между пиками ранаконитина и лаппаконитина и лаппаконитина и изолаппаконитина - не менее 1,0;

- эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пикам ранаконитина, N-ацетилсепаконитина и N-дезацетиллаппаконитина, не менее 2000 теоретических тарелок;

- коэффициент асимметрии пиков ранаконитина N-ацетилсепаконитина и N-дезацетиллаппаконитина не более 2,0.

Полученные результаты по содержанию гидробромидов лаппаконитина и сопутствующих алкалоидов по описанным методам получения (примеры 1-9) приведены в Таблице 3, где указано их относительное содержание масс. %.

Таблица 3

Гидробромиды алкалоидов Пример №1 Пример №2 Пример №3 Пример №4 Пример №5 Пример №6 Пример №7 Пример №8 Пример №9 Септефина гидробромид 0.06 0.01 0.03 0.10 0.07 0.14 0.02 0.02 0.27 Сепаконитина гидробромид 0.08 0.05 0.05 0.12 0.02 0.08 0.05 0.04 0.03 N-деацетилранаконитина гидробромид 0.04 0.01 0.01 0.09 0.06 0.16 0.01 0.01 0.02 N-деацетиллаппаконитина гидробромид 2.61 2.68 2.63 2.63 1.78 3.56 2.63 0.84 1.35 N-ацетилсепаконитина гидробромид 3.58 2.06 2.03 4.86 4.39 3.50 2.01 1.75 2.44 Ранаконитина гидробромид 5.27 0.82 0.81 9.75 7.43 0.71 0.79 4.31 0.79 Лаппаконитина гидробромид 85.44 91.59 91.73 79.36 83.52 87.08 91.85 91.05 92.06 Изолаппаконитина гидробромид 2.03 2.11 2.04 1.76 1.86 3.26 1.99 0.86 1.97 9-деоксилаппаконитина гидробромид 0.47 0.56 0.56 0.44 0.47 0.42 0.54 0.52 0.76

С целью идентификации входящих в субстанцию алкалоидов методом полупрепаративной хроматографии из данной субстанции получили 11 фракций, каждая из которых содержала по одному индивидуальному соединению. Каждая из 11 фракций была собрана в объеме 50 мл и лиофильно высушена. Сухой лиофилизат далее был проанализирован с целью идентификации алкалоидов.

Были выбраны 2 метода идентификации: метод тандемной масс-спектрометрии и метод ядерно-магнитного резонанса (ЯМР). Масс-спектрометрический анализ проводили в условиях электрораспылительной ионизации в режиме регистрации положительных ионов.

Масс-спектрометрическое определение алкалоидов позволяет определить их массу, а также, с помощью фрагментации материнских ионов, брутто-формулу. Схожая фрагментация материнских ионов при одинаковой энергии фрагментации говорит о единой природе исследуемых веществ. В сочетании с хроматографическим разделением алкалоидов метод тандемной масс-спектрометрии позволяет говорить о доказательствах обнаружения 11 алкалоидов группы аконитового ряда. (Таблица 4.)

Таблица 4. Данные масс-спектрометрического анализа

Идентификация выделенных алкалоидов была также проведена с использованием метода ядерно-магнитного резонанса. При регистрации спектров ЯМР использовали стандартную одноимпульсную последовательность с последующим Фурье-преобразованием (в случае спектров 13C дополнительно использовали широкополосную протонную развязку). Химические сдвиги ЯМР-сигналов определяли относительно тетраметилсилана. Отнесение сигналов производили на основании теоретических расчетов и литературных данных с учетом интенсивности сигналов и спин-спиновых взаимодействий. Результаты ЯМР для каждого идентифицированного алкалоида представлены в таблице 5.

Таблица 5

СЕПТЕФИН СЕПАКОНИТИН N-ДЕАЦЕТИЛРАНАКОНИТИН Располо-жение (С) δ,ppm (С) Располо-жение
(Н) δ, ppm
(Н) Располо-жение (С) δ,ppm (С) Располо-жение (Н) δ, ppm (Н) Располо-
жение углерода (С) δ,ppm (С) Располо-
жение (Н) δ, ppm (Н) 1 84.2 H1 3,48 (dd) 2 26.6 H1 3,76 (dd) 1 83.6 H1 3,80 (m) 2 26.2 H2α 1.48 (d) 3 31.7 H2α 2.13 (d) 2 26.1 H2α 2,14 (s) 3 51.9 H2β 2.09 (d) 4 83.7 H2β 2.16 (d) 3 32.0 H2β 2,18(m) 4 84.7 H3α 1,87(m) 5 44.1 H3α 2,26m) 4 84.3 H3α 2,27(m) 5 48.6 H3β 1.57 (d) 6 24.5 H3β 2.54 (d) 5 50.9 H3β 2,50(m) 6 26.8 H4 - 7 47.3 H4 - 6 32.9 H4 - 7 47.6 H5 2.35 (m) 8 75.1 H5 2.34(m) 7 77.7 H5 2,35(m) 8 75.6 H6α 2,07(dd) 9 80.3 H6α 1,65(dd) 8 85.8 H6α 1,67 (dd) 9 78.6 H6β 1.76 (m) 10 79.1 H6β 2.57(m) 9 78.7 H6β 2,60 (d) 10 36.4 H7 2.55 (d) 11 56.0 H7 2,38(m) 10 36.5 H7 - 11 51.0 H8 - 12 37.2 H8 - 11 51.0 H8 - 12 24.2 H9 - 13 34.0 H9 - 12 25.1 H9 - 13 49.0 H10 2,13(m) 14 88.0 H10 - 13 49.7 H10 2,25 14 90.0 H11 - 15 44.9 H11 - 14 90.4 H11 - 15 44.9 H12α 2.28 (m) 16 83.2 H12α 2.13 (m) 15 37.3 H12α 1,96(m) 16 82.9 H12β 2.7(d) 17 61.4 H12β 2.11(d) 16 83.0 H12β 2,10(d) 17 61.5 H13 2.44 (d) 19 55.2 H13 2.55 (d) 17 62.7 H13 2,44(m) 19 55.5 H14 3.42 (s) NCH2CH3 49.5 H14 3.66 (s) 19 55.0 H14 3,60(dd) NCH2CH3 49.9 H15α 2.21 (d) NCH2CH3 13.2 H15α 2.21 (d) NCH2CH3 48.4 H15α 2,25(m) NCH2CH3 13.5 H15β 2.37(m) 1-OMe 56.1 H15β 2.36 (m) NCH2CH3 14.1 H15β 2,34(m) 1-OMe 56.5 H16 3.32 (s) 14-OMe 57.9 H16 3.28 (s) 1-OMe 56.6 H16 3,30(m) 14-OMe 57.9 H17 2.88 (s) 16-OMe 56.3 H17 3.32 (s) 14-OMe 58.3 H17 3,15(s) 16-OMe 56.1 H19α 2.89 (d) C=O 167.3 H19α 2.64 (d) 16-OMe 56.0 H19α 2,68(dd) C=O 167.5 H19β 3.14 (s) C1 аром 112.8 H19β 3.10 (s) C=O 167.1 H19β 3.06 (d) C1 аром 115.8 1-OMe 3.40 (s) C2 аром 151.1 1-OMe 3.27 (s) C1 аром 115.2 1-OMe 3.24 (s) C2 аром 141.7 14-OMe 3.44 (s) C3 аром 115.3 14-OMe 3.36 (s) C2 аром 142.2 14-OMe 3.33 (s) C3 аром 120.3 16-OMe 3.30 (s) C4 аром 134.1 16-OMe 3.25 (s) C3 аром 119.5 16-OMe 3.21(s) C4 аром 134.4 NHCH3 2.81(d) C5 аром 117.3 COCH3 - C4 аром 134.3 COCH3 - C5 аром 122.3 NCH2 2.38(m) C6 аром 131.7 NCH2 2.44(m) C5 аром 121.4 NCH2 2.40(m) C6 аром 131.1 NCH2CH3 1,12(s) NCH2CH3 1,5 (s) C6 аром 131.3 NCH2CH3 1,11 (s) NHCH3 47.3 NHCH3 7.48(q) NH2 5,75(brs) NH2 5,60(brs) H-3'аром 6.63(d) H-3'аром 7.70 (d) H-3'аром 7.68(d) H-4'аром 7.45(t) H-4'аром 7.55(dd) H-4'аром 7.47(dd) H-5'аром 6.57(t) H-5'аром 6.56(dd) H-5'аром 6.48(dd) H-6'аром 7.68(d) H-6'аром 7.60(d) -ДЕАЦЕТИЛЛАППАКОНИТИН N-АЦЕТИЛСЕПАКОНИТИН РАНАКОНИТИН Располо-
жение углерода (С) δ,ppm (С) Располо-
жение (Н) δ, ppm (Н) Располо-
жение углерода
(С) δ,ppm
(С) Располо-
жение (Н) δ, ppm
(Н) Располо-
жение углерода (С) δ,ppm
(С) Располо-
жение (Н) δ, ppm
(Н) 1 83.2 H1 3,56(dd) 1 77.8 H1 3,74 (dd) 1 83.5 H1 3,77 (m) 2 26.3 H2α 1.55 (d) 2 26.5 H2α 2.11 (d) 2 26.5 H2α 2,04 (s) 3 32.3 H2β 2.11 (d) 3 31.6 H2β 2.17 (d) 3 31.6 H2β 2,1(m) 4 84.5 H3α 2,27m) 4 81.7 H3α 2,27m) 4 84.4 H3α 2,27(m) 5 48.9 H3β 2.04 (d) 5 44.3 H3β 2.48 (d) 5 51.1 H3β 2,53(m) 6 26.9 H4 - 6 24.5 H4 - 6 32.5 H4 - 7 47.7 H5 2.24(m) 7 46.9 H5 2.31(m) 7 77.9 H5 2,32(m) 8 75.8 H6α 1,65(dd) 8 74.6 H6α 1,63(dd) 8 85.7 H6α 1,61 (dd) 9 78.7 H6β 2.57(m) 9 78.9 H6β 2.44(m) 9 78.4 H6β 2,66 (d) 10 36.5 H7 2,38(m) 10 79.6 H7 2,35(m) 10 36.6 H7 - 11 51.0 H8 - 11 56.4 H8 - 11 51.4 H8 - 12 24.1 H9 - 12 37.5 H9 - 12 25.9 H9 - 13 49.1 H10 - 13 34.7 H10 - 13 49.8 H10 2,15 14 90.4 H11 - 14 87.9 H11 - 14 90.0 H11 - 15 44.9 H12α 2.13 (m) 15 44.8 H12α 1.98 (m) 15 37.8 H12α 1,98(m) 16 83.1 H12β 2.11(d) 16 82.8 H12β 2.00 (d) 16 82.9 H12β 2,09(d) 17 61.7 H13 2.55 (d) 17 61.5 H13 2.43 (d) 17 63.1 H13 2,47(m) 19 55.8 H14 3.66 (s) 19 55.6 H14 3.58 (s) 19 55.2 H14 3,63(dd) NCH2CH3 48.6 H15α 2.21 (d) NCH2CH3 48.5 H15α 2.15 (d) NCH2CH3 48.7 H15α 2,20(m) NCH2CH3 13.6 H15β 2.36 (m) NCH2CH3 13.4 H15β 2.29(m) NCH2CH3 14.4 H15β 2,37(m) 1-OMe 56.5 H16 3.28 (s) 1-OMe 56.3 H16 3.30 (s) 1-OMe 56.3 H16 3,33(m) 14-OMe 58.0 H17 3.32 (s) 14-OMe 58.0 H17 3.18 (s) 14-OMe 58.0 H17 3,11(s) 16-OMe 56.2 H19α 2.64 (d) 16-OMe 56.2 H19α 2.67 (d) 16-OMe 56.3 H19α 2,66(dd) C=O 167.7 H19β 3.10 (s) C1- C=O 167.1 H19β 3.04 (s) C1- C=O 167.7 H19β 3.04 (d) C1 аром 112.2 1-OMe 3.29 (s) C1 аром 115.8 1-OMe 3.29 (s) C1 аром 115.9 1-OMe 3.27 (s) C2 аром 150.7 14-OMe 3.41 (s) C2 аром 144.7 14-OMe 3.41 (s) C2 аром 141.8 14-OMe 3.45 (s) C3 аром 116.8 16-OMe 3.25 (s) C3 аром 120.3 16-OMe 3.25 (s) C3 аром 120.8 16-OMe 3.31 (s) C4 аром 134.0 COCH3 2.40 (s) C4 аром 134.4 COCH3 2.40 (s) C4 аром 134.6 COCH3 2.31 (s) C5 аром 116.4 NCH2 2.44(m) C5 аром 122.8 NCH2 2.44(m) C5 аром 122.6 NCH2 2.24 (m) C6 аром 131.8 NCH2CH3 1,17 (s) C6 аром 131.0 NCH2CH3 1,17 (s) C6 аром 131.3 NCH2CH3 1.12 (t) NH-Ac 11,00(brs) N-C=O 169.1 NH-Ac 11,00(brs)) N-C=O 169.5 NH-Ac 10,92(brs) H-3'аром 7.68 (d) CH3-C=O 25.5 H-3'аром 7.68 (d) CH3-C=O 25.6 H-3'аром 8.70 (d) H-4'аром 7.15(dd) H-4'аром 7.15(dd) H-4'аром 7.54(dd) H-5'аром 6.53 (dd) H-5'аром 6.53 (dd) H-5'аром 7.00 (dd) H-6'аром 7.38(d) H-6'аром 7.38(d) H-6'аром 7.76(d)

Таким образом, использованные аналитические методы для анализа субстанции лаппаконитина гидробромида с сопутствующими алкалоидами и методы идентификации входящих в субстанцию 11 алкалоидов, позволили доказать качественный и количественный состав субстанции на основе лаппаконитина гидробромида, полученной по заявляемому способу,

Заявляемое антиаритмическое средство, являющееся активным действующим веществом лекарственного препарата Лапоритмин, прошло клинические испытания в исследовательских центрах:

ГБУЗ города Москвы «Городская поликлиника №2 департамента здравоохранения города Москвы (1-я клиническая база);

Филиал «Клиническая фармакология Федерального государственного бюджетного учреждения науки «Научный центр биомедицинских технологий Федерального медико-биологического агентства» (2-я клиническая база).

Общее количество пациентов, включенных в исследование, проводимое на двух клинических базах, составило 100 человек: 25 пациентов - основная группа, 25 пациентов - контрольная группа на каждой клинической базе соответственно.

Целью исследований являлось выявление и сравнение антиаритмической активности и безопасности применения препарата Лапоритмин (таблетки 25 мг) с препаратом Аллапинин (таблетки 25 мг) при желудочковой экстрасистолии.

Основу методологии сравнения составляли следующие исследования:

1. Оценка антиаритмической активности препарата Лапоритмин у пациентов с желудочковой экстрасистолией.

2. Оценка безопасности применения препарата Лапоритмин у пациентов с желудочковой экстрасистолией.

3. Сопоставление эффективности и безопасности применения препарата Лапоритмин (таблетки 25 мг) у пациентов с желудочковой экстрасистолией с эффективностью и безопасностью применения препарата Аллапинин (таблетки 25 мг) и оценка статистической достоверности различий.

Диагноз и основные критерии для включения были следующими:

- мужчины и женщины в возрасте от 30 до 65 лет;

- желудочковая экстрасистолия у больных без органических заболеваний сердца (IV - V класс по классификации по R.J. Myerburg и соавт., 1984) (число экстрасистол более 1 в мин.);

- наличие возможности и желания осуществлять посещения и процедуры, предусмотренные данным исследованием (лабораторные анализы, функциональные пробы и т.д.);

- наличие информированного письменного согласия пациента на участие в исследовании и способность пациента к адекватному сотрудничеству в процессе исследования.

Исследуемые препараты - Аллапинин (номер серии 160315) и Лапоритмин назначали внутрь по 25 мг (1 табл.) 3 раза в день. Таблетки принимали после приема пищи, запивая небольшим количеством воды комнатной температуры, не измельчая. В случае неэффективности терапии доза препарата могла быть увеличена до 50 мг (2 табл.) 3 раза в сутки.

Критерии оценки:

Эффективность:

Эффективность применения препарата оценивалась по динамике критериев эффективности:

- от визита 1 (обследование и включение в исследование) до визита 2 (начало терапии 3 дня +/- 1 день после визита 1);

- от визита 2 (начало терапии 3 дня +/- 1 день после визита 1) до визита 3 (день 7+/-1 терапии);

- от визита 3 визита 3 (день 7+/-1 терапии) до визита 4 (день 14+/-1 терапии);

- от визита 4 (день 14+/-1 терапии) до визита 5 (день 21+/-1 терапии, завершение исследования).

В качестве первичного критерия эффективности устанавливалось уменьшение количества ЖЭС (желудочных экстрасистол) от визита 2 (начало терапии) до визита 3 (1 неделя терапии); от визита 3 (1 неделя терапии ) до визита 4 (2 недели терапии); от визита 4 (2 недели терапии) до визита 5 (3 недели терапии).

Эффективное лечение - уменьшение количества ЖЭС на 75-80 % за период проведения терапии от визита 2 (начало терапии) до визита 5 (3 недели терапии).

Вторичные параметры оценки эффективности:

Динамика от визита 2 (начало терапии) до визита 3 (1 неделя терапии); от визита 3 (1 неделя терапии) до визита 4 (2 недели терапии); от визита 4 (2 недели терапии) до визита 5 (3 недели терапии):

1) выраженности клинических симптомов (частота возникновения ощущения сердцебиения («перебоев» в области сердца); ЧСС; пульс, дефицит пульса, АД.

2) показателей опросника качества жизни.

Безопасность:

Оценка безопасности лечения проводилась на основании регистрации нежелательных явлений путем анализа жалоб и субъективных симптомов, оценки и интерпретации результатов инструментальных методов обследования, анализа клинически значимых изменений лабораторных показателей , а также выраженности этих изменений.

В ходе исследования оценивались:

- количество пациентов (в процентах), которым потребовалось уменьшение дозы или отмена исследуемого препарата из-за развития побочных эффектов;

- жизненно важные показатели;

- данные физикального осмотра;

- данные ЭКГ;

- результаты мониторирования ЭКГ по Холтеру;

- лабораторные данные;

- частота и степень выраженности нежелательных явлений.

Статистические методы

Основная статистическая гипотеза, которую планировалось подтвердить в процессе клинических исследований, заключалась в подтверждении в результате исследования, что эффективность лечения пациентов с применением в качестве антиаритмического препарата Лапоритмин эквивалентна эффективности лечения с применением в качестве антиаритмического препарата Аллапинин.

При статистическом анализе вычисляют дескриптивную статистику переменных для обеих групп пациентов и в целом для всех пациентов. В отношении непрерывных переменных указываются количество случаев, среднее значение, стандартное отклонение, минимум, максимум, медиана и квартили.

Для сопоставления исследуемых параметров сначала производилось тестирование на нормальность распределения. При соответствии закону нормального распределения используется критерий Стьюдента (t-тест). При характере распределения, отличающемся от нормального, используются непараметрические статистические методы (критерий Вилкоксона и др.). Межгрупповое сравнение на точках визитов проводится при использовании пробы Х2 и точного критерия Фишера (двусторонний вариант).

Результаты оценки эффективности:

Согласно протоколу данного клинического исследования было установлено, что лечение исследуемым препаратом Лапоритмин и референтным препаратом Аллапинин является эффективным, так как уменьшение количества ЖЭС за период проведения терапии от визита 2 (включение и начало терапии) до визита 5 (завершение исследования) составило, соответственно для основной и контрольной группы 86,5 % и 86,2 % (1 клиническая база) и 89,8 % и 88,9 % (2 клиническая база), что превышало значение в 75-80 %, установленное в качестве критерия первичной эффективности).

Результаты оценки безопасности

Оценка безопасности лечения проводилась на протяжении трех недель участия пациента в исследовании на основании регистрации нежелательных явлений путем контроля состояния пациентов, анализа жалоб и субъективных симптомов, оценки и интерпретациии результатов инструментальных методов обследования, анализа клинически значимых изменений лабораторных показателей, а также выраженности этих изменений.

В ходе исследований оценивались:

- количество пациентов (в процентах), которым потребовалось уменьшение дозы или отмена исследуемого препарата из-за развития побочных эффектов;

- жизненно важные показатели;

- данные физикального осмотра;

- данные ЭКГ;

- результаты мониторирования ЭКГ по Холтеру;

- лабораторные данные.

За время проведения клинического исследования у одного пациента в основной группе в клиническом центре 2 наблюдали повышение концентрации глюкозы в крови до 6,9 ммоль/л во время визита 2 (во время визита 5 концентрация глюкозы в крови находилась в норме) и удлинение интервала PQ до 0,21 у одного пациента основной группы и у двух пациентов контрольной группы в клиническом центре 1.

Заключение

Согласно проведенному клиническому исследованию специалисты установили, что лечение исследуемым препаратом Лапоритмин на основе заявляемого антиаритмического средства и референтным препаратом Аллапинин является эффективным, так как уменьшение количества ЖЭС за период проведения терапии от визита 2 (включение в начало терапии) до визита 5 (завершение исследования) превышает значение в 75-80 %, установленное в качестве критерия первичной эффективности.

Анализ динамики вторичных параметров эффективности не выявил значимого отличия в фармадинамике изучаемого препарата Лапоритмин и референтного препарата Аллапинин у пациентов с желудочковой экстрасистолией.

Анализ динамики показателей состояния здоровья пациентов, включенных в исследование, по опроснику качества жизни показал, что больные основной и контрольной групп отмечали положительную динамику в состоянии своего здоровья, переносимости повседневных физических нагрузок. Достоверных различий в оценке состояния здоровья у пациентов, получавших исследуемый препарат Лапоритмин, и сравниваемый препарат Аллапинин не выявлено.

Приведенные в Заключении выводы позволяют считать, что заявляемое антиаритмическое средство направлено на реализацию своего назначения - проявлять антиаритмические свойства, заключающиеся в улучшении сердечной деятельности путем уменьшения желудочковой экстрасистолии (ЖЭС).

При этом заявляемый способ позволяет повысить быстродействие технологического процесса получения заявляемого антиаритмического средства за счет исключения ресурсо- и энергоемких стадий упаривания, сушки и последующего растворения в растворителях, отличных от использованных на стадии экстракции, а также повысить качество готового продукта за счет уменьшения времени термического воздействия, что позволяет избежать внесения в него дополнительных примесей.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к антиаритмическому средству, способу его получения и фармацевтической композиции на основе антиаритмического средства. Антиаритмическое средство представляет собой субстанцию, выделенную из растений рода Aconitum (борец) семейства Ranunculaceae (лютиковые), которая содержит алкалоиды: лаппаконитин, септефин, N-ацетилантраноил-изолаппаконидин, изоранаконитин, сепаконитин, N-деацетилранаконитин, N-деацетиллаппаконитин, N-ацетилсепаконитин, ранаконитин, изолаппаконитин, 9-деоксилаппаконитин или их фармацевтически приемлемые соли. Фармацевтическая композиция для перорального применения, обладающая антиаритмическим действием, содержит антиаритмическое средство в эффективном количестве и фармацевтически приемлемый носитель. В способе получения антиаритмического средства экстракцию осуществляют с помощью экстрагента, выбранного из группы, состоящей из этилового спирта, изопропилового спирта, ацетона и смеси этилового и изопропилового спирта, прибавляют к экстракту адсорбирующую добавку, выбранную из группы, состоящей из силикагеля, окиси алюминия и активированного угля, после перемешивания отделяют адсорбирующую добавку с адсорбированными на ней примесями и смолами путем фильтрации, полученный фильтрат подкисляют раствором бромистоводородной кислоты и упаривают полученный раствор до получения сухого остатка целевого продукта, содержащего смесь лаппаконитина гидробромида и солей гидробромидов сопутствующих алкалоидов, включающих септефин, N-ацетилантраноил-изолаппаконидин, изоранаконитин, сепаконитин, N-деацетилранаконитин, N-деацетиллаппаконитин, N-ацетилсепаконитин, ранаконитин, изолаппаконитин, 9-деоксилаппаконитин. Указанное антиаритмическое средство является эффективным и безопасным антиаритмическим средством и обладает высокой антиаритмической активностью при различных формах аритмии. Способ получения данного антиаритмического средства позволяет повысить качество готового продукта за счет уменьшения времени термического воздействия, что позволяет избежать внесения в него дополнительных примесей. 2 н. и 11 з.п. ф-лы, 5 табл., 9 пр.

1. Антиаритмическое средство, представляющее субстанцию, выделенную из растений борца северного (борца высокого) - Aconitum septentrionale Koelle, семейства лютиковые - Ranunculaceae или борца белоустого - Aconitum leucostomum, семейства лютиковые - Ranunculaceae, включающую гидробромиды алкалоидов лаппаконитина, септефина, сепаконитина, N-деацетилранаконитина, N-деацетиллаппаконитина, N-ацетилсепаконитина, ранаконитина, изолаппаконитина, 9-деоксилаппаконитина,

гидробромида алкалоида структурной формулы,

гидробромида алкалоида структурной формулы

при следующем соотношении масс. %:

лаппаконитина гидробромид - 79,36-92,06,

септефина гидробромид - 0,02-0,14,

сепаконитина гидробромид 0,03-0,12,

N-деацетилранаконитина гидробромид 0,01-0,16,

N-деацетиллаппаконитина гидробромид 0,84-3,56,

N-ацетилсепаконитина гидробромид 1,75-4,86,

ранаконитина гидробромид 0,79-9,75,

изолаппаконитина гидробромид 0,86-3,26,

9-деоксилаппаконитина гидробромид 0,42-0,76

алкалоида структурной формулы

гидробромид - 0,10-0,86,

алкалоида структурной формулы

гидробромид - 0,02-0,11.

2. Антиаритмическое средство по п. 1, полученное из корневищ и корней растения борца северного (борца высокого) - Aconitum septentrionale Koelle, семейства лютиковые - Ranunculaceae, или из корневищ и корней растения борца белоустого - Aconitum leucostomum, семейства лютиковые - Ranunculaceae.

3. Антиаритмическое средство по п. 1, полученное из травы растения борца белоустого - Aconitum leucostomum, семейства лютиковые - Ranunculaceae.

4. Способ получения антиаритмического средства по п. 1, основанный на измельчении растительного сырья, экстракции растительного сырья с помощью экстрагента, выбранного из группы органических растворителей, фильтрации, получении целевого очищенного продукта в виде солей, образованных минеральной кислотой, отличающийся тем, что экстракцию осуществляют при соотношении массы сырья в граммах и объема экстрагента в мл 1:1, с помощью экстрагента, выбранного из группы, состоящей из этилового спирта, изопропилового спирта, ацетона и смеси этилового и изопропилового спирта, прибавляют к экстракту адсорбирующую добавку, выбранную из группы, состоящей из силикагеля, окиси алюминия и активированного угля, а количество адсорбирующей добавки выбирают в объеме от 0,1/100 до 5/100 к массе загруженного сырья, после перемешивания отделяют адсорбирующую добавку с адсорбированными на ней примесями и смолами путем фильтрации, полученный фильтрат подкисляют раствором бромистоводородной кислоты и упаривают полученный раствор до получения сухого остатка целевого продукта, содержащего смесь лаппаконитина гидробромида и гидробромидов сопутствующих алкалоидов, включающих септефин, сепаконитин, N-деацетилранаконитин, N-деацетиллаппаконитин, N-ацетилсепаконитин, ранаконитин, изолаппаконитин, 9-деоксилаппаконитин,

гидробромида алкалоида структурной формулы

гидробромида алкалоида структурной формулы

.

5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что экстрагент выбирают из группы, состоящей из этилового спирта с концентрацией 80-95 об. %, изопропилового спирта, ацетона и смеси этилового и изопропилового спирта в соотношении от 1/9 до 9/1 (об./об.).

6. Способ по п. 4, отличающийся тем, что экстракцию проводят в течение 2-4 часов.

7. Способ по п. 4, отличающийся тем, что время перемешивания добавки с экстрактом устанавливают в пределах 5-60 минут.

8. Способ по п. 4, отличающийся тем, что адсорбирующую добавку и экстракт перемешивают в течение 5-60 минут при скорости перемешивания 100-300 об./мин.

9. Способ по п. 4, отличающийся тем, что адсорбирующую добавку отделяют путем фильтрации под вакуумом или самотеком через стеклянный пористый фильтр, или бумажный фильтр, или тканый фильтр, или синтетическое волокно, например, полиамид.

10. Способ по п. 4, отличающийся тем, что раствор бромистоводородной кислоты выбирают из соотношения 0,12 мл бромистоводородной кислоты 48 % к 100 г сырья.

11. Способ по п. 4, отличающийся тем, что полученный фильтрат подкисляют раствором бромистоводородной кислоты в растворителе, который был использован в качестве экстрагента.

12. Способ по п. 4, отличающийся тем, что полученный целевой продукт дополнительно растворяют в спирте и осуществляют его перекристаллизацию.

13. Способ по п. 4, отличающийся тем, что растительное сырье выбирают из группы, состоящей из травы борца белоустого, корневищ и корней борца белоустого - Aconitum leucostomum Worosch, корневищ с корнями борца северного (борца высокого) - Aconitum septentrionale Koelle (A. excelsum Reichenb), семейства лютиковых - Ranunculaceae).