Способ приготовления препаратов из полученных in vivo мембран сетчатки глаза Российский патент 2024 года по МПК A01N1/02 A61K35/12 

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для приготовления препаратов внутренней пограничной, эпиретинальной и других мембран сетчатки глаза для последующего гистологического, иммуногистохимического и других исследований.

Известен способ приготовления гистологических препаратов (Патент № 2420299), который включает подготовление из плотной волокнистой оформленной соединительной ткани прямоугольной полоски необходимого размера, в которой формируют карман, соответствующий размерам биоптата, помещение биоптата в карман, стенки которого сшивают, и полученный биологический контейнер с биоптатом внутри помещают в фиксирующий раствор формалина, обезвоживание в спиртах восходящей концентрации, пропитывание парафином, заливку в парафин, приготовление срезов и окрашивание. Однако, данный способ не пригоден для работы с такими материалами, как мембраны сетчатки глаза из-за крайне небольших размеров материала. Приготовление препарата мембран сетчатки глаза требует точное расположение образца и фиксацию его в определенной позиции, что невозможно при работе с карманом со сшитыми стенками.

Наиболее близким аналогом является стандартный способ приготовления гистологических препаратов, включающий фиксацию полученного биологического материала в 10%-ном растворе нейтрального формалина, его заливку в парафин, и последующее изготовление срезов на микротоме («Гистология», авторы Елисеев В.Г., Афанасьев Ю.И., Юрина Н.А. и другие, М., Изд-во: Медицина, 1983 г., с. 9-10)

Недостатком данного способа является его низкая эффективность при работе с образцами мембран сетчатки глаза. Мембраны сетчатки глаза представляют из себя биологический материал небольшого объема, который при фиксации в формалине сворачивается в неинформативную комковидную структуру. Заливка биологического материала в данном виде парафином не позволяет сохранить исходную форму образца и получить информативные и качественные срезы для последующего гистологического и иммуногистохимического анализа.

Задачей заявляемого изобретения является разработка более эффективного способа приготовления препаратов из полученных in vivo мембран сетчатки глаза, позволяющего достичь приготовление более качественного и информативного препарата для гистологического и иммуногистохимического анализа.

Техническим результатом изобретения является обеспечение анатомически исходного положения тканей образца, аналогичного положению данных тканей внутри глаза от момента резки до приготовления срезов, что позволяет сохранить нативную структуру, форму и целостность образца, а также значительно повысить информативность полученных срезов биологических препаратов мембран сетчатки глаза и повысить точность полученных в ходе исследования препарата результатов.

Указанный технический результат достигается тем, что в стандартном способе приготовления гистологических препаратов, включающем фиксацию биологического материала в 10%-ном растворе нейтрального формалина, заливку материала в парафин, приготовление препарата после фиксации в формалине и до заливки в парафин, согласно изобретению, препарат с помощью шпателя извлекается из раствора формалина и помещается на парафиновую пленку. С помощью шпателя и пинцета мембрана сетчатки глаза ориентируется на поверхности парафиновой пленки так, чтобы сохранялась нормальная анатомия и топографические взаимоотношения частей препарата. Затем края мембраны фиксируются к парафиновой пленке путем вставления в края мембраны игл для шприцов калибра 27 Гейдж (27G, 0,417 мм). Приготовленный таким образом препарат заливается парафином, после чего дожидаются его затвердевания, удаляют иглы и изготавливают срезы на микротоме, ориентируясь на отверстия в клее, оставленные иглами.

Преимуществом данного способа изготовления препаратов является возможность интерпретации положения образца во время формирования срезов на микрокератоме, а также сохранение нативной структуры, формы и целостности образца, что позволяет увеличить качество, точность и информативность исследования данного препарата.

Способ осуществляют следующим образом.

Удаленный в ходе оперативного вмешательства на сетчатке глаза биологический препарат мембраны помещается в пробирку с 10%-ным раствором нейтрального формалина. Препарат вынимается из раствора формалина с помощью шпателя и помещается на парафиновую пленку (Parafilm, Pechiney Plastic Packaging Company, USA). С помощью шпателя и пинцета препарат мембраны сетчатки глаза ориентируется на поверхности парафиновой пленки так, чтобы сохранялась нормальная анатомия и топографические взаимоотношения частей препарата. Затем края мембраны прикрепляются к парафиновой пленке путем вставления в края мембраны четырех игл для шприцов калибра 27 Гейдж (27G, 0,417 мм). Приготовленный таким образом препарат заливается парафином или другим агентом, после чего дожидаются их затвердевания, удаляют иглыи выполняют нарезку срезов на микротоме, ориентируясь на отверстия в клее, оставленные иглами, после чего сформированные срезы помещают на предметное стекло для последующего гистологического и иммуногистохимического анализа. Способ поясняется фигурой 1.

Способ поясняется следующим примером:

Пациентка Н., 65 лет. Диагноз - Идиопатическая эпиретинальная мембрана левого глаза. Максимальная корригированная острота зрения левого глаза - 0,6. Пациентка предъявляла жалобы на искажение зрения, вышеуказанные жалобы появились около 12 месяцев назад. При офтальмоскопии в макулярной зоне обнаружена пленчатая структура. Пациентке выполнено хирургическое лечение с удалением эпиретинальной мембраны и внутренней пограничной мембраны. Из полученных мембран приготовлены препараты по заявленной методике. Полученные срезы препарата подвергнуты иммуногистохимическому исследованию. Результаты исследования показали высокую экспрессию GFAP и нейрофиламентов в составе внутренней пограничной мембраны, что указывает на выраженное повреждение сетчатки в процессе формирования мембраны и низкий прогноз восстановления зрительных функций после оперативного вмешательства.

Изобретение относится к области офтальмологии, а именно к способу приготовления препаратов из полученных in vivo мембран сетчатки глаза. Способ приготовления препаратов из полученных in vivo мембран сетчатки глаза, включающий фиксацию биологического материала в 10%-ном растворе нейтрального формалина, заливку материала в парафин, и последующее изготовление срезов на микротоме, при этом, препарат после фиксации в формалине и до заливки в парафин, с помощью шпателя извлекают из раствора формалина и помещают на парафиновую пленку, затем с помощью шпателя и пинцета мембрана сетчатки глаза ориентируют на поверхности парафиновой пленки так, чтобы сохранялась нормальная анатомия и топографические взаимоотношения частей препарата, затем края мембраны фиксируют к парафиновой пленке путем вставления в края мембраны игл для шприцов калибра 27 Гейдж (27G, 0,417 мм), приготовленный таким образом препарат заливают парафином, после чего дожидаются его затвердевания, удаляют иглы и изготавливают срезы на микротоме, ориентируясь на отверстия в клее, оставленные иглами. Использование изобретения обеспечивает получение анатомически исходного положения тканей образца, аналогичного положению данных тканей внутри глаза от момента резки до приготовления срезов, что позволяет сохранить нативную структуру, форму и целостность образца, а также значительно повысить информативность полученных срезов биологических препаратов мембран сетчатки глаза и повысить точность полученных в ходе исследования препарата результатов. 1 ил., 1 пр.

Способ приготовления препаратов из полученных in vivo мембран сетчатки глаза, включающий фиксацию биологического материала в 10%-ном растворе нейтрального формалина, заливку материала в парафин, и последующее изготовление срезов на микротоме, отличающийся тем, что препарат после фиксации в формалине и до заливки в парафин, с помощью шпателя извлекают из раствора формалина и помещают на парафиновую пленку, затем с помощью шпателя и пинцета мембрана сетчатки глаза ориентируют на поверхности парафиновой пленки так, чтобы сохранялась нормальная анатомия и топографические взаимоотношения частей препарата, затем края мембраны фиксируют к парафиновой пленке путем вставления в края мембраны игл для шприцов калибра 27 Гейдж (27G, 0,417 мм), приготовленный таким образом препарат заливают парафином, после чего дожидаются его затвердевания, удаляют иглы и изготавливают срезы на микротоме, ориентируясь на отверстия в клее, оставленные иглами.