СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЧИСТЫХ ПРЕПАРАТОВ ЛИГНАНОВ ИЗ КОМПРЕССИОННОЙ ДРЕВЕСИНЫ Российский патент 2024 года по МПК A61K31/05 A61K36/15 B01D11/02 

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способам выделения фенольных компонентов из компрессионной древесины Pinus sylvestris, Picea abies, Abies sibirica и Larix sibirica, обладающих высокой биологической активностью.

Данные соединения могут быть использованы в качестве сырья для создания новых фармацевтических препаратов и косметических средств, обладающих антиоксидантными свойствами и характеризующихся противовирусной, противоопухолевой, противогрибковой активностью.

Лигнаны представляют собой обширную (более тысячи соединений) группу полифенольных вторичных метаболитов растений, в структуру которых входят два фенилпропановых звена с разной степенью окисления в боковой цепи, соединенных β–β'-углеродной связью [1]. Помимо димеров, к лигнанам относятся также структуры, содержащие три (сесквилигнаны), четыре (дилигнаны) и даже больше фенилпропановых звеньев. Благодаря своей высокой биологической активности, в том числе эстрогенным, противовирусным, противоопухолевым и антиоксидантным свойствам [2, 3], лигнаны привлекают все большее внимание как перспективные соединения для производства новых поколений лекарственных средств и биологически активных добавок. В качестве промышленного источника этих соединений обычно используют лимонник китайский, семена льна и кунжута и некоторые другие растения, содержащие лигнаны в количестве от 0,1 до 2%. Важным и до сих пор недооцененным источником лигнанов является компрессионная древесина хвойных деревьев, располагающаяся преимущественно в сучках и корнях [4]. Активный биосинтез лигнанов в них происходит в ответ на механическое воздействие и приводит к чрезвычайно высокому их содержанию, достигающему 20% [5]. Общее количество лигнанов, идентифицированных в компрессионной хвойной древесине, достигает нескольких десятков, при этом их соотношение широко варьируется в зависимости от породы дерева [6]. Их основными представителями являются секоизоларицирезинол, 5-гидроксиматаирезинол, нортрахелогенин, ларицирезинол, тодолактол, α-конидендрин, лигнан А и матаирезинол. По данным двумерной спектроскопии ядерного магнитного резонанаса (2D ЯМР) [7], в компрессионной древесине пихты и лиственницы, ели и сосны преобладают первые три соединения (более половины от общего содержания лигнанов).

Использование компрессионной древесины в качестве сырья для производства лигнанов предполагает решение задач их выделения, отделения от других экстрактивных веществ (стероидов, флавоноидов, низкомолекулярных фракций лигнина), а также эффективного разделения для получения чистых индивидуальных соединений с высокой биологической активностью. Методы извлечения лигнанов из растительных материалов достаточно хорошо известны и основаны на методах мацерации, ультразвуковой экстракции, сверхкритической флюидной экстракции (СФЭ) и жидкостной экстракции под давлением [8, 9]. В качестве экстрагентов используют этанол, ацетон, бутанол и их смеси с водой или углекислым газом (в случае СФЭ). В то же время очистка полученных экстрактов и выделение отдельных компонентов остается сложной задачей. Наиболее простым подходом к решению проблемы является соосаждение лигнанов из этанольного раствора с ацетатом калия [10, 11], позволяющее получить из экстракта еловой древесины препарат 5-гидроксиматаирезинола с чистотой около 90%. Известно также осаждение лигнанов из спиртовых растворов в виде солей калия или натрия при добавлении концентрированных растворов КОН или NaOH соответственно [12]. Естественно, эти методы подходят для выделения смеси лигнанов или одного компонента, который сильно преобладает в экстракте. Для получения ряда индивидуальных лигнанов требуется их хроматографическое разделение.

Многочисленные методы аналитического и препаративного хроматографического разделения лигнанов описаны в литературе и обобщены в известных обзорах [13, 14]. Препаративная тонкослойная хроматография [15, 16] использовалась для получения небольших количеств фенольных соединений для дальнейшего анализа, в то время как разделение в большем масштабе чаще всего выполнялось с помощью нормально-фазовой колоночной хроматографии низкого и среднего давления на чистом силикагеле с использованием дихлорметана/метанола, дихлорметана/ацетона, хлороформ/метанол/вода и этилацетат/н-гексан [17] в качестве подвижных фаз. Помимо нормально-фазовой, различные авторы использовали также обращенно-фазовую ВЭЖХ (высокоэффективную жидкостную хроматографию), а также хроматографию среднего давления на различных неполярных неподвижных фазах [18]. Учитывая достаточно высокую полярность лигнанов, лучшее удерживание и эффективность разделения достигается при использовании октадецильных (С18) или полярно-функционализированных сорбентов вместо обычной октадециловой неподвижной фазы [19]. Другим хроматографическим методом препаративного разделения лигнанов является высокоскоростная противоточная хроматография. Её преимущество в том, что нет необходимости использовать дорогостоящую твердую неподвижную фазу, а значит, нет проблем с ее загрязнением и плохой воспроизводимостью разделения. Данный метод с использованием двухфазных систем растворителей на основе петролейного эфира, этилацетата, спиртов и воды позволил выделить два новых лигнана из одуванчика (Taraxacum mongolicum) [20], а также добиться одновременного разделения и очистки десяти лигнанов, извлеченных из водяной ивы (Justicia procumbens) [21]. Недостатком всех перечисленных хроматографических методик является значительный расход органических растворителей, большинство из которых токсичны и пожароопасны.

Поставленными задачами в настоящем изобретении являются: разработка подхода к быстрому, экологически безопасному и эффективному выделению лигнанов, а также получение на этой основе чистых препаратов ряда биологически активных лигнанов, выделенных из компрессионной древесины ели, пихты, лиственницы и сосны, которую заготавливают в северной Европе РФ в промышленных масштабах.

На наш взгляд, сверхкритическая флюидная хроматография (СФХ) может быть наиболее перспективным методом разделения лигнанов. Поскольку подвижная фаза в СФХ состоит из суб- или сверхкритического диоксида углерода, элюирующая способность которого регулируется добавлением органического модификатора, он считается методом зеленого разделения, также характеризующимся низкими эксплуатационными затратами [22]. Другими важными преимуществами СФХ являются высокая скорость и эффективность разделения за счет малой вязкости жидкости по сравнению с водой и органическими растворителями, а также селективность, обусловленная характерным для СФХ адсорбционным механизмом удерживания на полярных неподвижных фазах [23]. В случае препаративных разделений применение СФХ позволяет резко снизить трудоемкость выделения целевых соединений из полученных фракций, так как углекислый газ самопроизвольно испаряется при снижении давления, обеспечивая минимальный объем остаточной жидкости в приемных сосудах. Несмотря на то, что в последние годы СФХ все чаще используется для аналитического и препаративного разделения сложных смесей растительных метаболитов [24], в литературе имеется лишь несколько примеров использования этого метода для лигнанов, и все они ориентированы на решение чисто аналитических задач: две недавние публикации по СФХ-анализу лигнанов в экстрактах лимонника китайского [25, 26], а также работа, в которой СФХ использовали совместно с ВЭЖХ с обращенной фазой и гидрофильным взаимодействием для многостадийного разделения лигнанов с получением высокочистых препаратов [27].

Технический результат изобретения – получение чистых препаратов лигнанов, обладающих высокой биологической активностью.

В качестве объекта исследования выбрана компрессионная древесина хвойных пород, характерных для Европейского Севера, - сосна (Pinus sylvestris), ель (Picea abies), пихта (Abies sibirica) и лиственница (Larix sibirica). Растительный материал получали с деревьев возрастом 40-50, 60-70, 40-50 и 80-90 лет соответственно, заготовленных в Архангельской области (Россия).

Внутреннюю часть (находящуюся внутри ствола дерева) сучков высверливали и сушили в вакуумной печи при 40°С в течение ночи. Затем сухой опилок дополнительно измельчали на центробежной мельнице до размера частиц < 1 мм, тщательно усредняли и подвергали двухстадийной экстракции по Сокслету. На первом этапе (8 ч) образец обессмоливали гексаном с удалением неполярных соединений (смоляных кислот, липидов, терпенов). На втором этапе лигнаны и другие фенолы экстрагировали ацетоном в течение 8 часов. Полученный ацетоновый экстракт концентрировали на роторном испарителе до объема 5–7 мл, разбавляли деионизированной водой до 100–150 мл и тщательно перемешивали. Полученную суспензию немедленно замораживали жидким азотом, а затем сушили в лиофилизаторе. Полученные сухие экстракты, богатые лигнанами, хранили в стеклянных флаконах при температуре 4°С. Достигаемый выход экстрактивных веществ составляет 9,5, 16,1, 11,1 и 15,0% для высушенных образцов соснового, пихтового, лиственничного и елового экстракта компрессионной древесины, соответственно.

Определение оптимальных параметров для хроматографического разделения

В связи с большим разнообразием сорбентов с различным химическим составом (силикагелевая фаза, полиэтиленгликолиевая, этилпиридиновая, ционофаза, октадецильная, пентафторфенильная и т.д.), используемых в СФХ, ключевым вопросом при разработке метода разделения является правильный выбор неподвижной фазы, обеспечивающей приемлемое удерживание и эффективное разделение компонентов. В ходе предварительных экспериментов проведен скрининг важнейших для СФХ неподвижных фаз (фиг. 1), на основе результатов которого в качестве оптимальной выбран силикагель с привитыми диольными группами.

Установлено, что минимальная доля органического модификатора (метилового спирта), исключающая осаждение лигнанов в хроматографической системе, должна составлять не менее 10%.

Для полупрепаративного выделения лигнанов использовалась хроматографическая колонка Shim-pack US Diol II (250×10 мм), заполненная силикагелем с привитым полиэтиленгликолем. Ключевым вопросом при масштабировании хроматографического метода является сохранение приемлемого разрешения целевых пиков в условиях экстремально высокого содержания соединений во вводимой пробе (концентрация и объемная перегрузка), что характерно для препаративных разделений. Максимально допустимое количество вводимой пробы в СФХ также ограничивается растворимостью ее компонентов в неполярном сверхкритическом диоксиде углерода. Предварительные опыты показали, что при объеме инжекции 500 мкл максимальная концентрация экстрактивных веществ компрессионной древесины не должна превышать 50 мг/мл для сосны и 20 мг/мл для других хвойных пород. Концентрационные перегрузки приводят к значительному уширению хроматографических зон, что несколько снижает количество компонентов экстракта, которые можно выделить с достаточной степенью чистоты. Оптимизация режима градиентного элюирования позволила достичь продолжительности одного цикла выделения лигнанов равной 30 минут. Такой способ позволяет получить 33 фракции, в том числе пять для экстрактивных веществ сосны, восемь – ель, девять – пихта и одиннадцать – лиственница (фиг. 2).

Расход растворителей для одного цикла очистки и выделения составляет 140 г метанола и 225 г СО₂, что обеспечивает проведение более 100 последовательных разделений с использованием 40-литрового баллона с углекислотой. Метанол регенерируется путем перегонки отходов элюента и высушивания фракций, позволяя повторно использовать его в технологическом процессе.

Характеристика полученных фракций

Каждая из 33 фракций накапливается путем многократного полупрепаративного разделения каждого экстракта с дальнейшей отгонкой органического растворителя. Чистота определяется методом обращенно-фазовой ВЭЖХ со спектрофотометрическим детектированием. 17 фракций характеризуется чистотой не менее 90% (табл. 1, см. в графической части), при этом 10 из них обладает чистотой 95–100%. Наряду с этим, оставшиеся 16 фракций содержат основное вещество в количествах от 30 до 86%. Они могут быть использованы в качестве сырья для дальнейшей очистки целевых компонентов с привлечением дополнительных методов, например, переосаждение.

Выделенные фенольные метаболиты были идентифицированы методами масс-спектрометрии высокого разрешения (МСВР, определение элементного состава) и ЯМР-спектроскопии на ядрах ¹H и ¹³C. Данные, представленные в таблице 1, свидетельствуют о том, что доминирующие в компрессионной хвойной древесине лигнаны (нортрахелогенин, гидроксиматаирезинол и секоизоларицирезинол) могут быть выделены в виде чистых препаратов с высокими выходами. Так, важнейший биологически активный лигнан – гидроксиматаирезинол – может быть выделен предложенным способом в количествах, превышающих 50% от массы введенного в СФХ экстракта, и чистотой не менее 99%. Другие важнейшие лигнаны (например, матаирезинол, ларицирезинол, α-конидендрин, нортрахелогенин и оксоматаирезинол), также могут быть получены в виде препаратов высокой чистоты.

Разработанный способ позволяет также проводить выделение олиголигнанов (производных секоизоларицирезинола) из компрессионной древесины лиственницы и пихты: сесквилигнана С₃₀Н₃₈О₁₀ и дилигнана С₄₀Н₅₀О₁₂. Согласно данным ЯМР, данные компоненты были идентифицированы как гваяцилглицериновый эфир секоизоларицирезинола и димер секоизоларицирезинола с арил-арильной (5-5) связью (фиг. 3). Первое соединение было идентифицировано ранее в древесине марокканской пихты (Abies Marocana) и получило название сесквимароканол В [28-29], а второе было выделено впервые. Похожий дилигнан, образованный двумя молекулами гидроксиматаирезинола с арил-арильной (5-5) связью был описан ранее в составе экстракта компрессионной древесины ели [30].

Помимо лигнанов, препаративная сверхкритическая флюидная хроматография, позволяет параллельно выделять флавоноиды и стильбены. В случае лиственницы, таким компонентом выступает таксифолин, в случае сосны – птеростильбен, пиносильвин и его метиловый эфир. Последние два соединения представляют наибольший интерес, так как для них возможно получение высокочистых препаратов (99%) с выходом на уровне 50% от массы введенного в СФХ систему экстрактов.

Выделенные в чистом виде компоненты, в том числе стильбены, обладают противомикробной, противовоспалительной, антиоксидантной, противогрибковой, а также противораковой активностью, что делает их перспективным сырьем для фармацевтической промышленности.

Вышеописанный способ выделения лигнанов из древесины хвойных пород поясняется следующими примерами:

Пример 1

Компрессионную древесину ели (Picea abies) высушивали, измельчали до размера частиц не более 1 мм, затем подвергали сушке в вакуумном сушильном шкафу при температуре 40°С. После чего полученные сухие опилки экстрагировали в аппарате Сокслета в две стадии: гексаном и ацетоном по 8 ч каждый. После этого, ацетоновый экстракт упаривали на роторном испарителе до минимального объема, добавляли пятикратный избыток деионизованной воды до получения суспензии и подвергали лиофильной сушке. Полученный экстракт в дальнейшем использовался для препаративного разделения.

Выделение лигнанов производили при помощи препаративной системы для сверхкритической флюидной хроматографии Nexera UC Prep (Shimadzu, Япония), оснащенная диодно-матричным детектором и автоматической системой сбора фракций. Для этого готовили метальный раствор ацетонового экстракта с концентрацией 20 мг/мл, 500 мкл из которого вводили в хроматограф. В течение 30-минутного анализа автоматически отбирались фракции, как показано на фиг. 2. Фракции упаривались на роторном испарителе до минимального объема и лиофильно высушивались, после чего анализировались методами ВЭЖХ-УФ, ВЭЖХ-МСВР и ЯМР для идентификации и оценки чистоты.

Пример 2

Эксперимент проводился на основе примера 1, отличаясь тем, что в качестве исходного растительного сырья выступает компрессионная древесина сосны (Pinus sylvestris), концентрация вводимого ацетонового экстракта составляла 50 мг/мл, а программа автоматического сбора фракций соответствовала представленной на фиг. 2 для указанной породы.

Пример 3

Эксперимент проводился на основе примера 1, отличаясь тем, что в качестве исходного растительного сырья выступает компрессионная древесина пихты (Abies sibirica) и программой автоматического сбора фракций, которая соответствовала представленной на фиг. 2 для указанной породы.

Пример 4

Эксперимент проводился на основе примера 1, отличаясь тем, что в качестве исходного растительного сырья выступает компрессионная древесина лиственницы (Larix sibirica) и программой автоматического сбора фракций, которая соответствовала представленной на фиг. 2 для указанной породы.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

1. Calvo-Flores, F.G.; Dobado, J.A.; Isac-García, J.; Martin-Martinez, F.J. Lignin and Lignans as Renewable Raw Materials: Chemistry, Technology and Applications; John Wiley & Sons, Ltd: Chichester, West Sussex, United Kingdom, 2015; 512 p.

2. Wang, L.-X.; Wang, H.-L.; Huang, J.; Chu, T.-Z.; Peng, C.; Zhang, H.; Chen, H.-L.; Xiong, Y.-A.; Tan, Y.-Z. Review of lignans from 2019 to 2021: Newly reported compounds, diverse activities, structure-activity relationships and clinical applications, Phytochemistry 2022, 202, 113326;

3. Zálešák, F.; Bon, D.J.-Y.D.; Pospíšil, J. Lignans and Neolignans: Plant secondary metabolites as a reservoir of biologically active substances. Pharmacol. Res. 2019, 146, 104284.

4. Willför, S.; Hemming, J.; Reunanen, M.; Eckerman, C.; Holmbom, B. Lignans and Lipophilic Extractives in Norway Spruce Knots and Stemwood. Holzforschung 2003, 57, 27-36.

5. Willför, S.; Nisula, L.; Hemming, J.; Reunanen, M.; Holmbom, B. Bioactive phenolic substances in industrially important tree species. Part 1: Knots and stemwood of different spruce species. Holzforschung 2004, 58, 335-344.

6. Kumar, R., Tsvetkov, D.E., Varshney, V.K., Nifantiev, N.E. Chemical constituents from temperate and subtropical trees with reference to knotwood. Ind. Crops Prod. 2020, 145, 112077.

7. Ul’yanovskii, N.V.; Onuchina, A.A.; Faleva, A.V.; Gorbova, N.S.; Kosyakov, D.S. Comprehensive Characterization of Chemical Composition and Antioxidant Activity of Lignan-Rich Coniferous Knotwood Extractives. Antioxidants 2022, 11, 2338.

8. Willför, S.M., Ahotupa, M.O., Hemming, J.E., Reunanen, M.H.T., Eklund, P.C., Sjöholm, R.E., Eckerman, C.S. E., Pohjamo, S.P., Holmbom, B.R. Antioxidant Activity of Knotwood Extractives and Phenolic Compounds of Selected Tree Species. J. Agric. Food Chem. 2003, 51, 7600-7606.

9. Lee, S.; Ban, H.S.; Kim, Y.P.; Kim, B.K.; Cho, S.H.; Ohuchi, K.; Shin, K.H. Lignans from Acanthopanax chiisanensis having an inhibitory activity on prostaglandin E2 production. Phytother. Res. 2005, 19, 103–106.

10. Freudenberg, K.; Knof, L. Die Lignane des Fichtenholzes. Chem. Ber. 1957, 90, 2857-2869.

11. Holmbom, B., Eckerman, C., Eklund, P., Hemming, J., Nisula, L., Reunanen, M., Sjöholm, R., Sundberg, K., Willför, S. Knots in trees - A new rich source of lignans. Phytochem. Rev. 2003, 2, 331-340.

12. Calvo-Flores, F.G.; Dobado, J.A.; Isac-García, J.; Martin-Martinez, F.J. Lignin and Lignans as Renewable Raw Materials: Chemistry, Technology and Applications; John Wiley & Sons, Ltd: Chichester, West Sussex, United Kingdom, 2015; 512 p.

13. Willfor, S.M.; Smeds, A.I.; Holmbom, B.R. Chromatographic analysis of lignans. J. Chromatogr. A 2006, 1112, 64–77.

14. Slanina, J.; Glatz, Z. Separation procedures applicable to lignan analysis. J. Chromatogr. B 2004, 812, 215-229.

15. Srivastava, V.; Singh, M.; Malasoni, R.; Shanker, K.; Verma, R.K.; Gupta, M.M.; Gupta, A.K.; Khanuja, S.P.S. Separation and quantification of lignans in Phyllanthus species by a simple chiral densitometric method. J. Sep. Sci. 2008, 31, 47-55.

16. Owen, R.W.; Mier, W.; Giacosa, A.; Hull, W.E.; Spiegelhalder, B.; Bartsch, H. Identification of lignans as major components in the phenolic fraction of olive oil. Clin. Chem. 2000, 46, 976-88.

17. Takaku, N., Choi, DH., Mikame, K. et al. Lignans of Chamaecyparis obtusa. J. Wood Sci. 2001, 47, 476–482.

18. Willfor, S.M.; Smeds, A.I.; Holmbom, B.R. Chromatographic analysis of lignans. J. Chromatogr. A 2006, 1112, 64–77.

19. Willfor, S.M.; Smeds, A.I.; Holmbom, B.R. Chromatographic analysis of lignans. J. Chromatogr. A 2006, 1112, 64–77.

20. Shi, S.; Zhang, Y.; Huang, K.; Liu, S.; Zhao, Y. Application of preparative high-speed counter-current chromatography for separation and purification of lignans from Taraxacum mongolicum, Food Chem. 2008, 108, 402-406.

21. Zhou, P.; Luo, Q.; Ding, L.; Fang, F.; Yuan, Y.; Chen, J.; Zhang, J.; Jin, H.; He, S. Preparative Isolation and Purification of Lignans from Justicia procumbens Using High-Speed Counter-Current Chromatography in Stepwise Elution Mode. Molecules 2015, 20, 7048-7058.

22. Chester, T.L.; Pinkston, J.D. Supercritical Fluid and Unified Chromatography. Anal. Chem. 2004, 76, 4606–4613.

23. Farrell, W.P. Practical Approaches to Column Selection for Supercritical Fluid Chromatography. In Supercritical Fluid Chromatography; Poole, C.F. Ed.; Elsevier: Amsterdam, Netherlands, 2017; pp. 57–101.

24. Kingston, J.; Leek, H.; Buica, A.; Öhlén, K.; Proctor, K.; Raubo, J.; Sanders, M.; Thunberg, L. Application of preparative SFC in the pharmaceutical industry. In Practical Application of Supercritical Fluid Chromatography for Pharmaceutical Research and Development; Hicks. M.; Ferguson, P. Eds.; Academic Press: London, United Kingdom, 2022; 133-165.

25. Dai, Z.; Xin, H.; Fu, Q.; Hao, H.; Li, Q.; Liu, Q.; Jin, Y. Exploration and optimization of conditions for quantitative analysis of lignans in Schisandra chinensis by an online supercritical fluid extraction with supercritical fluid chromatography system. J. Sep. Sci. 2019, 42, 2444–2454.

26. Onay, S.; Hofer, S.; Ganzera, M. Rapid analysis of nine lignans in Schisandra chinensis by supercritical fluid chromatography using diode array and mass spectrometric detection. J. Pharm. Biomed. Anal. 2020, 185, 113254.

27. Yang, B.; Xin, H.; Wang, F.; Cai, J.; Liu, Y.; Fu, Q.; Jin, Y.; Liang, X. Purification of lignans from Fructus Arctii using off-line two-dimensional supercritical fluid chromatography/reversed-phase liquid chromatography. J. Sep. Sci. 2017, 40, 3231-3238.

28. Barrero, A.F.; Haïdour, A.; Dorado, M.M.; Cuerva, J.M. Two sesquilignans from the wood of Abies marocana. Phytochemistry 1996, 41, 605-609.

29. Yashunsky, D.V.; Men´shov, V.M.; Tsvetkov, D.E.; Bel´ko, A.A.; Vasiyarov, G.G.; Titova, E.V.; Pimenov, A.V.; Onuchin, A.A.; Dokichev, V.A.; Tomilov Yu.V.; Nifantiev N.E. Analysis of content of (–)-secoisolariciresinol and related polyphenols in different morphological parts and anatomical structures of larch wood from Siberia. Russ. Chem. Bull. 2014, 63, 2571–2576.

30. Willför, S.M.; Reunanen, M.; Eklund, P.C.; Eklund, P.; Sjöholm, R.; Kronberg, L.; Fardim, P.; Pietarinen, S.; Holmbom, B. Oligolignans in Norway spruce and Scots pine knots and Norway spruce stemwood. Holzforschung 2004, 58, 345-354.

Изобретение относится к области фармацевтической промышленности, а именно к способу получения чистых препаратов лигнанов из компрессионной древесины. Способ получения чистых препаратов лигнанов из компрессионной древесины, заключающийся в подготовке используемого сырья, выделении экстрактивных веществ с последующим получением индивидуальных компонентов, отличающийся тем, что в качестве сырья используют компрессионную древесину сосны, ели, пихты или лиственницы, подготовку которой проводят высушиванием, измельчением до размера частиц не более 1 мм и последующей сушкой в вакуумном сушильном шкафу при температуре 40°С, после чего полученные сухие опилки экстрагируют в аппарате Сокслета в две стадии: гексаном и ацетоном по 8 ч каждый, далее ацетоновый экстракт упаривают на роторном испарителе до минимального объема, добавляют пятикратный избыток деионизованной воды до получения суспензии и подвергают лиофильной сушке, а для выделения чистых препаратов лигнанов используют метод сверхкритической флюидной хроматографии на неподвижной фазе, модифицированной полиэтиленгликолем. Указанное изобретение позволяет получить чистые препараты лигнанов с высокой биологической активностью. 3 ил., 1 табл., 4 пр.

Способ получения чистых препаратов лигнанов из компрессионной древесины, заключающийся в подготовке используемого сырья, выделении экстрактивных веществ с последующим получением индивидуальных компонентов, отличающийся тем, что в качестве сырья используют компрессионную древесину сосны, ели, пихты или лиственницы, подготовку которой проводят высушиванием, измельчением до размера частиц не более 1 мм и последующей сушкой в вакуумном сушильном шкафу при температуре 40°С, после чего полученные сухие опилки экстрагируют в аппарате Сокслета в две стадии: гексаном и ацетоном по 8 ч каждый, далее ацетоновый экстракт упаривают на роторном испарителе до минимального объема, добавляют пятикратный избыток деионизованной воды до получения суспензии и подвергают лиофильной сушке, а для выделения чистых препаратов лигнанов используют метод сверхкритической флюидной хроматографии на неподвижной фазе, модифицированной полиэтиленгликолем.