Способ прогнозирования риска развития тройного негативного рака молочной железы у женщин с использованием молекулярно-генетических данных Российский патент 2024 года по МПК G01N33/58 G01N33/574 C12Q1/6806 C12Q1/6827 C12Q1/686 C12Q1/6876 C12Q1/6886 

Изобретение относится к области медицины, в частности, к клинической онкологии, медицинской генетике, молекулярной диагностике и может быть использовано для прогнозирования риска развития тройного негативного рака молочной железы у женщин с использованием молекулярно-генетических данных.

Рак молочной железы (РМЖ) - это опухоль молочной железы злокачественного характера, имеющая эпителиальное происхождение [Gradishar W.J., Anderson B.O., Blair S.L. et al. Breast cancer version 3.2014. J Natl Compr Canc Netw 2014;12(4):542-590]. Согласно данным мировой статистики (материалы Международного агентства по изучению рака) в настоящее время ежегодно среди населения мира выявляется более 2 миллионов новых случаев РМЖ. Среди всех случаев рака (ежегодно в мире регистрируется 19,3 млн новых случаев онкопатологии) РМЖ является наиболее частым (11,7%) [Ferlay J., Colombet M., Soerjomataram I., Parkin D.M., M., Znaor A., Bray F. Cancer statistics for the year 2020: An overview. Int. J. Cancer. 2021;149:778-789. doi: 10.1002/ijc.33588]. Среди женского населения удельный вес РМЖ среди всех онкозаболеваний составляет 24,5% [Sung H., Ferlay J., Siegel R.L., Laversanne M., Soerjomataram I., Jemal A., Bray F. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J. Clin. 2021;71:209-249. doi: 10.3322/caac.21660]. По данным Росстата в 2020 году в Российской Федерации количество женщин у которых был впервые в жизни установлен диагноз РМЖ составило 65,0 тыс. человек, а показатель заболеваемости был равен 82,8 на 100000 человек [Здравоохранение в России. 2021: Стат.сб./Росстат. - М., З-46 2021. - 171 с.]. Обращает на себя внимание имеющаяся тенденция к росту заболеваемости РМЖ в РФ: стандартизованный показатель заболеваемости на 100000 населения (мировой стандарт) за последние десять лет вырос с 42,83 в 2008 г. до 51,63 в 2018 г., параметр среднегодового темпа прироста заболеваемости составил 1,97%, а показатель прироста заболеваемости за данный временной период - 22,15% [Каприн А.Д., Старинский В.В., Петрова Г.В. Злокачественные новообразования в России в 2018 году. М., 2019. 250 с. [Kaprin A.D., Starinskij V.V., Petrova G.V. Malignant neoplasms in Russia in 2018. Moscow: 2019. 250 p. (in Russian)]].

Тройной негативный рак молочной железы (ТН РМЖ) охватывает гетерогенную группу принципиально разных заболеваний с различными гистологическими, геномными и иммунологическими профилями, которые объединяются под этим термином из-за отсутствия в них эстрогеновых рецепторов (ЭР), прогестероновых рецепторов (ПР) и рецепторов эпидермального фактора роста человека 2 типа (HER2).

ТН РМЖ представляет собой гетерогенную опухоль, на долю которой приходится от 15 до 20% всех случаев рака молочной железы, поэтому ее распространенность варьируется среди разных этнических групп и обычно является отрицательной (трижды отрицательной) для экспрессии ЭР, ПР и HER2. ТН РМЖ поражает 170 000 женщин во всем мире в год, из общего миллиона диагнозов рака молочной железы. Заболевание также протекает более агрессивно, характеризуется более высокой частотой рецидивов и худшим прогнозом, чем гормон-рецептор-позитивные опухоли. Опасность ТН РМЖ заключается в высокой распространенности высокопролиферационных опухолей 3 степени при постановке диагноза [Sporikova Z., Koudelakova V., Trojanec R., Hajduch M. Genetic Markers in Triple-Negative Breast Cancer. Clin Breast Cancer. 2018;18(5):e841-e850. doi:10.1016/j.clbc.2018.07.023].

ТН РМЖ имеет отчетливый клинический фенотип из-за его молекулярных характеристик. Его отличают отдаленные метастазы (висцеральные и мозговые метастазы), отсутствие метастазов в кости и ранние рецидивы (обычно в течение трех лет). ТН РМЖ ассоциирован с агрессивным клиническим поведением, которое быстрее растет и распространяется на окружающие ткани, менее поддается лечению и имеет более низкий прогноз [Sarhangi N., Hajjari S., Heydari S.F., Ganjizadeh M., Rouhollah F., Hasanzad M. Breast cancer in the era of precision medicine. Mol Biol Rep. 2022;49(10):10023-10037. doi:10.1007/s11033-022-07571-2].

Несмотря на активное исследование генетических основ РМЖ, которое активно проводится многочисленными научными коллективами, в течении последних десятилетий, значительная часть генетических детерминант, вовлеченных в возникновение заболевания до настоящего времени остается неизвестной, что диктует необходимость продолжения генетико-эпидемиологических исследований РМЖ.

В Российской Федерации исследования вовлеченности генетических маркеров rs8023580 гена NR2F2 - rs440837 гена ZBTB10 - rs17496332 гена PRMT6 в формирование предрасположенности к тройному негативному раку молочной железы у женщин единичны и фрагментарны, а данные о роли генетических вариантов rs8023580 гена NR2F2 - rs440837 гена ZBTB10 - rs17496332 гена PRMT6 в развитии тройного негативного рака молочной железы у женщин с использованием молекулярно-генетических данных отсутствуют.

Для оценки сложившейся патентной ситуации был выполнен поиск по охранным документам за период с 1990 по 2023 гг. Анализ документов производился по направлению: способ прогнозирования риска развития тройного негативного рака молочной железы у женщин. Источники информации: сайты Федерального института промышленной собственности http://fips.ru.

В изученной научно-медицинской и доступной патентной литературе авторами не было обнаружено способа прогнозирования риска развития тройного негативного рака молочной железы у женщин на основе данных о полиморфных маркерах rs8023580 гена NR2F2 - rs440837 гена ZBTB10 - rs17496332 гена PRMT6.

Известен патент RU № 2741232 (опубл. 22.01.2021) описан способ прогнозирования прогрессирования рака молочной железы. Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования прогрессирования рака молочной железы. Проводят определение в периферической крови промежуточного метаболита витамина D 25(OH)D. При значении его содержания в сыворотке крови ≤ 18,9 нг/мл прогнозируют прогрессирование заболевания. Способ обеспечивает повышение точности прогнозирования прогрессирования рака молочной железы за счет определения промежуточного метаболита витамина D 25(OH)D в венозной крови, проявляющееся в снижении показателя промежуточного метаболита витамина D 25(OH)D, предшествующем прогрессированию заболевания. Недостатком этого способа является трудоемкость выполнения и кроме того не учитывается роль генетических полиморфизмов.

Известен патент RU № 2336822 (опубл. 27.10.2008), в котором описан способ прогнозирования рака молочной железы. Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и может быть использовано в качестве способа ранней диагностики рака молочной железы. Проводят исследование крови пациента. Дополнительно при обследовании определяют показатели: возраст, социальный статус, сопутствующие заболевания, количество моноцитов крови, скорость оседания эритроцитов (СОЭ), общий билирубин крови, креатинин крови, удельный вес мочи, реакцию мочи. Затем определяют прогностический коэффициент (ПК) для каждого показателя. В системе возраст при маркере до 20 лет устанавливают ПК равным (0), при маркере 20-29 лет - равным (-10), при маркере 30-39 лет - равным (-7), при маркере 40-49 лет - равным (+4), при маркере 50-59 лет - равным (+3), при маркере 60-69 лет - равным (+2), при маркере 70-79 лет - равным (+4), при маркере 80 и более лет - равным (-3). В системе социальный статус при маркере рабочие устанавливают ПК равным (+4), при маркере служащие - равным (-1), при маркере учащиеся - равным (0), при маркере безработные - равным (-12), при маркере пенсионеры и инвалиды труда (ИТР) - равным (+1). В системе сопутствующие заболевания при маркере заболевания желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) устанавливают ПК равным (-10), при маркере заболевания сердечно-сосудистой системы - равным (+2), при маркере заболевания эндокринной системы - равным (+1,5), при маркере заболевания дыхательной системы - равным (0), при маркере заболевания опорно-двигательного аппарата - равным (0), при маркере заболевания мочеполовой системы - равным (-13), при маркере сочетание сопутствующий заболеваний - равным (-1), при маркере отсутствие сопутствующих заболеваний - равным (+2). В системе моноциты крови при маркере нет устанавливают ПК равным (0), при маркере 1-3% - равным (-2,5), при маркере 4-6% - равным (+2), при маркере 7-10% - равным (+2,5), при маркере более 10% - равным (0). В системе скорость оседания эритроцитов при маркере - 1-10 мм/ч устанавливают ПК равным (-1), при маркере 11-20 мм/ч - равным (-3), при маркере 21-30 мм/ч - равным (+7), при маркере 31-40 мм/ч - равным (0), при маркере более 40 мм/ч - равным (0). В системе общий билирубин при маркере менее 8,8 мкмоль/л устанавливают ПК равным (0), при маркере 8,8-17 мкмоль/л - равным (-1), при маркере более 17 мкмоль/л - равным (+5,5). В системе креатинин при маркере менее 0,07 ммоль/л устанавливают ПК равным (+11), при маркере 0,07-0,17 - равным (-3), при маркере более 0,17 мкмоль/л - равным (0). В системе удельный вес мочи при маркере менее 1008 устанавливают ПК равным (0), при маркере 1008-1026 - равным (+2), при маркере более 1026 - равным (+6). В системе реакция мочи при маркере кислая, устанавливают ПК равным (+3), при маркере нейтральная - равным (-3), при маркере щелочная - равным (-12). При сумме ПК от (-54,5) до (-21,5) прогнозируют низкую вероятность рака молочной железы, при сумме от (+11) до (+44,5) прогнозируют высокую вероятность рака молочной железы. Способ позволяет прогнозировать рак молочной железы на этапе лабораторного обследования и может применяться в ранней диагностике рака молочной железы, характеризуется доступностью и простотой выполнения. Однако прогнозирование таким способом рака молочной железы сопряжено с профилактическими осмотрами, при этом диспансеризация лиц из групп повышенного риска должна проводиться длительное время вплоть до возраста 55 лет.

Известен патент RU №2263319 (опубл. 27.10.2005), в котором описан способ прогнозирования рецидива рака молочной железы. Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическим методам исследования в онкологии. Сущность способа заключается в том, что в динамике наблюдения за менопаузальными женщинами после комплексного лечения констатируют развитие рецидива рака молочной железы при снижении соотношения концентрации эстриола к сумме концентраций эстрона и эстрадиола в моче с 1,68±0,23 у больных без рецидива до 0,74±0,12 - у пациенток, проживших без рецидива менее одного года, до 0,65±0,13 у больных, проживших без рецидива от 2-х до 6 лет, и до 0,50±0,10 у больных с безрецидивным периодом от 6 до 10 лет. Изобретение обеспечивает доклиническое выявление рецидива рака молочной железы, а также точность и простоту способа. Недостатком данного способа является высокая стоимость анализа, что особенно важно при его многократном повторении в ходе наблюдения за больными после комплексного лечения.

Известен патент RU № 2522501 (опубл. 20.07.2014), в котором описан способ прогнозирования наследственной предрасположенности к раку молочной железы. Изобретение относится к области медицины, в частности, к клинической онкологии, медицинской генетике, молекулярной диагностике и может быть использовано для прогнозирования наследственной предрасположенности к раку молочной железы. Способ характеризуется тем, что проводят амплификацию коротких фрагментов гена BLM протяженностью до 200 п.о., с последующим высокоразрешающим плавлением, включающим оптимизированный для гена BLM этап формирования гетеродуплексов: быстрый нагрев до 95°С и медленное снижение температуры до 50°С; выбирают один фрагмент с аберрантным профилем плавления для секвенирования, секвенируют выбранный фрагмент и при выявлении мутации гена BLM прогнозируют наследственную предрасположенность к раку молочной железы. Способ повышает точность детекции мутации, прост в исполнении и высокоинформативен: позволяет выявлять до 100% мутаций в гене BLM. Недостатком этого способа является его трудоемкость, он не учитывает роль генетических полиморфизмов.

Задачей настоящего исследования является расширение арсенала способов диагностики, а именно создание способа прогнозирования риска развития тройного негативного рака молочной железы у женщин с использованием молекулярно-генетических данных о полиморфных маркерах rs8023580 гена NR2F2 - rs440837 гена ZBTB10 - rs17496332 гена PRMT6.

Технический результат использования изобретения - получение критериев оценки риска развития тройного негативного рака молочной железы у женщин русской национальности, уроженок Центрально-Черноземного региона РФ, на основе молекулярно-генетических данных о полиморфных маркерах rs8023580 гена NR2F2 - rs440837 гена ZBTB10 - rs17496332 гена PRMT6, включающий:

- выделение ДНК из периферической венозной крови;

- анализ полиморфных маркеров rs8023580 гена NR2F2 - rs440837 гена ZBTB10 - rs17496332 гена PRMT6;

- прогнозирование риска развития тройного негативного рака молочной железы у женщин с использованием молекулярно-генетических данных при выявлении комбинации генотипов rs8023580TT гена NR2F2 - rs440837AA гена ZBTB10 - rs17496332GG гена PRMT6.

Новизна и изобретательский уровень заключаются в том, что из уровня техники не известна возможность прогноза риска развития тройного негативного рака молочной железы у пациенток на основе данных о комбинации генотипов rs8023580 гена NR2F2 - rs440837 гена ZBTB10 - rs17496332 гена PRMT6.

Способ осуществляют следующим образом:

Выделение геномной ДНК из периферической крови осуществляют методом фенольно-хлороформной экстракции (Miller, S. A. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells / S. A. Miller, D. D. Dykes, H. F. Polesky // Nucleic. Acids. Res. - 1988. - Vol. 16, № 3. - P. 1215) в два этапа. На первом этапе к 4 мл крови с ЭДТА добавляют 25 мл лизирующего буфера, содержащего 320 мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5мМ MgCl₂, 10мМ трис-HCl (pH=7,6). Полученную смесь перемешивают и центрифугируют при 4°С, 4000 об/мин. в течение 20 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 4 мл раствора, содержащего 25 мМ ЭДТА (рН=8,0) и 75 мМ NaCl, ресуспензируют. Затем прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10мг/мл) и инкубируют образец при 37°С в течение 16 часов.

На втором этапе из полученного лизата последовательно проводят экстракцию ДНК равными объемами фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 минут. После каждого центрифугирования производят отбор водной фазы. ДНК осаждают из раствора двумя объемами охлажденного 96% этанола. После лиофилизации полученную ДНК растворяют в бидистиллированной, деионизованной воде и хранят при -20°С.

Анализ полиморфных маркеров rs8023580 гена NR2F2 - rs440837 гена ZBTB10 - rs17496332 гена PRMT6 осуществлялся методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) на термоциклере CFX-96 Real-Time System (Bio-Rad) c использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов (синтезированы в ООО «Тест - Ген» (Ульяновск)).

Амплификация геномной ДНК производилась в реакционной смеси, суммарным объемом 10 мкл, включающей смесь для ПЦР rs7910927 гена rs8023580 гена NR2F2 или rs440837 гена ZBTB10 или rs17496332 гена PRMT6- 4 мкл, Taq-полимеразу - 2 мкл, исследуемый образец (~30 нг ДНК/мкл) - 1 мкл, деионизированная вода - 3мкл.

Генотипирование исследуемых образцов осуществлялось с использованием программного обеспечения «CFX-Manager™» методом дискриминации аллелей по величинам относительных единиц флуоресценции (ОЕФ) (фиг. 1, фиг. 2, фиг. 3).

Изобретение характеризуется фигурами:

фиг. 1 - Визуализация дискриминации генотипов rs8023580 NR2F2 (где красный круг - гомозиготы ТТ, зеленый треугольник - гетерозиготы ТС, синий квадрат - гомозиготы СС, голубой ромб - неопределённый образец);

фиг. 2 - Визуализация дискриминации генотипов rs440837 ZBTB10 (где красный круг - гомозиготы АА, зеленый треугольник - гетерозиготы AG, синий квадрат - гомозиготы GG, голубой ромб - неопределённый образец);

фиг. 3 - Визуализация дискриминации генотипов rs 17496332 PRMT6 (где красный круг - гомозиготы АА, зеленый треугольник - гетерозиготы AG, синий квадрат - гомозиготы GG, голубой ромб - неопределённый образец).

На следующем этапе работы, моделировались в программном комплексе MB-MDR (доступ-https ://github.com/imbs-hl/mbmdR) межлокусные взаимодействия, имеющие рисковое значения для РМЖ (проводился учет ковариат и выполнялись пермутационные процедуры). Оценивались модели с участием 2-,3-,4-,5- локусов. При этом, с целью снижения вероятности ложноположительных результатов для «выделения» наиболее значимых моделей, детерминирующих риск развития заболевания (на каждом уровне мы отбирали 2-3 наиболее значимые модели), на этапе отбора моделей для пермутационного тестирования, нами дополнительно была введена поправка Бонферрони с учетом возможных комбинаций 3 рассматриваемых локусов: для 2-х локусных моделей в качестве «порогового» уровня был установлен показатель р=0,05/36 = 1,39*10-3, для 3-х локусных - р=0,05/84 = 5,95*10-4, для 4-х локусных - р=0,05/126 = 3,97*10-4, для 5-ти локусных - р=0,05/126 = 3,97*10-4. Визуализация межлокусных взаимодействий, связанных с РМЖ, была проведена с применением программы MDR (до ступ-http ://www. multifactordimensionalityreduction.org/).

Возможность использования предложенного способа для оценки прогнозирования риска развития тройного негативного РМЖ у женщин с использованием молекулярно-генетических данных, подтверждает анализ результатов наблюдений 1248 пациенток, из них 108 пациентки с тройным негативным РМЖ и 1140 женщины контрольной группы. Возрастные характеристики больных и контроля были сопоставимы. В выборки для исследования включались (критерии включения): 1) пациентки русской национальности, являющиеся уроженками Центрального Черноземья РФ, не имеющие родства между собой и проживающие в Белгородской области (Чурносов М.И., Сорокина И.Н., Балановская Е.В. Генофонд населения Белгородской области. Динамика индекса эндогамии в районных популяциях // Генетика. 2008. Т. 44. № 8. С. 1117-1125), добровольно согласившиеся на проведение исследования; 2) в группу больных включались пациентки только после установления диагноза заболевания тройного негативного РМЖ, подтвержденного с помощью клинических и лабораторно-инструментальных (в т.ч. морфологических) методов обследования.

Обследование больных раком молочной железы проводилось на базе поликлинического и химиотерапевтического отделений Белгородского областного онкологического диспансера; формирование контрольной группы (без клинико-анамнестических признаков РМЖ) проводилось на базе перинатального центра БОКБ Святителя Иоасафа (в ходе проф. осмотров).

Все больные тройным негативным раком молочной железы и женщины контрольной группы подписали информированное согласие на участие в исследовании (проведение исследования было согласовано с этическим комитетом медицинского института НИУ «БелГУ»).

Типирование молекулярно-генетических маркеров осуществлялось на кафедре медико-биологических дисциплин медицинского института НИУ «БелГУ».

При изучении SNP х SNP взаимодействий установлена генетическая модель, включающая наличие значимой трехлокусной модели, вовлеченной в формирование тройного негативного РМЖ у женщин с использованием молекулярно-генетических данных, является rs8023580 гена NR2F2 - rs440837 гена ZBTB10 - rs17496332 гена PRMT6 (р_perm≤0,001). С развитием заболевания наиболее значимая ассоциация выявлена для комбинации rs8023580-TT гена NR2F2 - rs440837AA гена ZBTB10 - rs17496332GG гена PRMT6 (beta= 1,091; p= 0,008), имеющая рисковую направленность.

В качестве примеров конкретного применения разработанного способа проведено генетическое обследование женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья РФ и не имеющих родства между собой: проведено генетическое исследование по полиморфным маркерам rs8023580 гена NR2F2 - rs440837 гена ZBTB10 - rs17496332 гена PRMT6.

У пациентки О. была взята венозная кровь, проведено генотипирование ДНК-маркеров, при анализе вовлеченности полиморфных маркеров rs8023580 гена NR2F2 - rs440837 гена ZBTB10 - rs17496332 гена PRMT6 была выявлена комбинации генотипов rs8023580-TT гена NR2F2 - rs440837AA гена ZBTB10 - rs17496332GG гена PRMT6, что позволило отнести пациентку в группу больных с риском развития тройного негативного рака молочной железы у женщин с использованием молекулярно-генетических данных. Дальнейшее наблюдение подтвердило диагноз тройного негативного рака молочной железы у пациентки.

У пациентки Ю. была взята венозная кровь, проведено генотипирование ДНК-маркеров, при анализе вовлеченности полиморфных маркеров rs8023580 гена NR2F2 - rs440837 гена ZBTB10 - rs17496332 гена PRMT6 была выявлена комбинации генотипов rs8023580GG гена NR2F2 - rs440837AA гена ZBTB10 - rs17496332AA гена PRMT6, что позволило отнести пациентку в группу пациенток с низким риском развития тройного негативного рака молочной железы у женщин с использованием молекулярно-генетических данных. Дальнейшее наблюдение не подтвердило диагноз у пациентки.

У пациентки Л. была взята венозная кровь, проведено генотипирование ДНК-маркеров, при анализе вовлеченности полиморфных маркеров rs8023580 гена NR2F2 - rs440837 гена ZBTB10 - rs17496332 гена PRMT6 была выявлена комбинации генотипов rs8023580-TC гена NR2F2 - rs440837GG гена ZBTB10 - rs17496332AG гена PRMT6, что позволило отнести пациентку в группу больных с низким риском развития тройного негативного рака молочной железы у женщин с использованием молекулярно-генетических данных. Дальнейшее наблюдение не подтвердило диагноз рака молочной железы у пациентки.

У пациентки Ж. была взята венозная кровь, проведено генотипирование ДНК-маркеров, при анализе вовлеченности полиморфных маркеров rs8023580 гена NR2F2 - rs440837 гена ZBTB10 - rs17496332 гена PRMT6 была выявлена комбинации генотипов rs8023580-CC гена NR2F2 - rs440837GG гена ZBTB10 - rs17496332GG гена PRMT6, что позволило отнести пациентку в группу индивидуумов с низким риском развития тройного негативного рака молочной железы у женщин с использованием молекулярно-генетических данных. При дальнейшем наблюдении диагноз рака молочной железы у пациентки Р. не подтвердился.

Применение данного способа позволит на доклиническом этапе формировать среди женщин группы риска и своевременно реализовывать в этих группах необходимые лечебно-профилактические мероприятия по предупреждению развития тройного негативного рака молочной железы у женщин с использованием молекулярно-генетических данных.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической онкологии, медицинской генетике и молекулярной диагностике, и может быть использовано для прогнозирования риска развития тройного негативного рака молочной железы у женщин. Из периферической венозной крови выделяют ДНК. Проводят анализ генетических маркеров rs8023580 гена NR2F2, rs440837 гена ZBTB10, rs17496332 гена PRMT6. При выявлении комбинации генотипов rs8023580TT гена NR2F2 - rs440837AA гена ZBTB10 - rs17496332GG гена PRMT6 прогнозируют высокий риск развития тройного негативного рака молочной железы. Способ обеспечивает получение новых критериев оценки риска развития тройного негативного рака молочной железы у женщин русской национальности, уроженок Центрально-Черноземного региона РФ, на основе данных о полиморфных маркерах rs8023580 NR2F2 - rs440837 ZBTB10 - rs17496332 PRMT6. 3 ил., 4 пр.

Способ прогнозирования риска развития тройного негативного рака молочной железы у женщин, включающий выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ генетических маркеров rs8023580 гена NR2F2, rs440837 гена ZBTB10, rs17496332 гена PRMT6, где при выявлении комбинации генотипов rs8023580TT гена NR2F2 - rs440837AA гена ZBTB10 - rs17496332GG гена PRMT6 прогнозируют высокий риск развития тройного негативного рака молочной железы у женщин.