Область техники

Настоящее изобретение относится к новым конъюгированным капсульным сахаридным антигенам (гликоконъюгатам), иммуногенным композициям, содержащим указанные гликоконъюгаты, и их применению. Иммуногенные композиции по настоящему изобретению обычно содержат гликоконъюгаты, в которых сахариды происходят из серотипов Streptococcus pneumoniae. Изобретение также относится к вакцинации людей, в частности младенцев и пожилых людей, против пневмококковых инфекций с использованием указанных гликоконъюгатов.

Уровень техники

Подход к повышению иммуногенности слабоиммуногенных молекул путем конъюгации этих молекул с молекулами-«носителями» успешно применяется на протяжении десятилетий (см., например, Goebel et al. (1939) J. Exp.Med. 69: 53). Например, было описано множество иммуногенных композиций, в которых очищенные капсульные полимеры были конъюгированы с белками-носителями для создания более эффективных иммуногенных композиций за счет использования этого «эффекта носителя». Schneerson et al. (1984) Infect. Immun. 45: 582-591). Также было показано, что конъюгация обходит плохой ответ антител, обычно наблюдаемый у младенцев при иммунизации свободным полисахаридом (Anderson et al. (1985) J. Pediatr. 107: 346; Insel et al. (1986) J. Exp.Med. 158: 294).

Конъюгаты были успешно получены с использованием различных поперечно-сшивающих или связывающих реагентов, таких как гомобифункциональные, гетеробифункциональные или поперечно-сшивающие агенты нулевой длины. В настоящее время доступно множество способов связывания иммуногенных молекул, таких как сахариды, белки и пептиды, с пептидными или белковыми носителями. Большинство способов создают аминовые, амидные, уретановые, изотиомочевинные или дисульфидные связи или, в некоторых случаях, тиоэфиры. Недостаток использования поперечно-сшивающих или связывающих реагентов, которые вводят реакционноспособные сайты в боковые цепи реакционноспособных молекул аминокислот на молекулах-носителях и/или иммуногенных молекулах, заключается в том, что реакционноспособные центры, если они не нейтрализованы, могут свободно реагировать с любой нежелательной молекулой либо in vitro (таким образом, потенциально отрицательно влияя на функциональность или стабильность конъюгатов), либо in vivo (таким образом, создавая потенциальный риск нежелательных явлений у людей или животных, иммунизированных препаратами). Такие избыточные реакционноспособные сайты могут быть подвергнуты реакции или «копированы», чтобы инактивировать эти сайты, используя различные известные химические реакции, но в противном случае эти реакции могут нарушать функциональность конъюгатов.

Таким образом, остается потребность в новых гликоконъюгатах, соответствующим образом копированных, и в способах получения указанных конъюгатов, так чтобы функциональность сохранялась, и конъюгат сохранял способность вызывать желаемый иммунный ответ.

Пневмококковые полисахариды, в частности, капсульные полисахариды, являются важными иммуногенами, обнаруженными на поверхности бактерий. Это привело к тому, что они стали важным компонентом при разработке пневмококковых вакцин. Они оказались полезными для индукции иммунных ответов, особенно когда они связаны с белками-носителями.

Некоторые серотипы, в частности серотип 3 Streptococcus pneumoniae, продуцируют большие и вязкие полисахаридные цепи (например, для типа 3, цепи глюкозы/глюкуроновой кислоты длиной 2-3 миллиона дальтон). Их вязкость обуславливает трудность обращения с ними.

Кроме того, было трудно добиться значительной иммуногенности в отношении полисахаридов серотипа 3. Например, в исследовании иммуногенности и безопасности 11-валентной пневмококковой вакцины, конъюгированной с белком D (11-Pn-PD), не наблюдалось эффекта примирования для серотипа 3 у младенцев, получивших три дозы вакцины с последующим введением бустерной дозы либо той же вакцины, либо пневмококковой полисахаридной вакцины (Nurkka et al. (2004) Ped. Inf. Dis. J., 23:1008-1014). В другом исследовании, результаты опсонофагоцитарного анализа (ОРА) у младенцев, получивших дозы 11-Pn-PD, не выявили ответа антител к серотипу 3 на уровнях, сопоставимых с другими протестированными серотипами (Gatchalian et al., 17th annual Meeting of the Eur. Soc. Paed. Inf. Dis. (ESPID), Poster No. 4, PIA Poster Session 1, Istanbul Turkey, Mar. 27, 2001). В еще одном исследовании, в котором оценивалась эффективность 11-Pn-PD в профилактике острого среднего отита, вакцина не обеспечивала защиту от эпизодов, вызванных серотипом 3 (Prymula et al. The Lancet, Vol. 367: 740-748 (March 4, 2006)).

Таким образом, существует потребность в антигенах, которые способны создавать более устойчивый иммунный ответ на Streptococcus pneumoniae серотипа 3.

Настоящее изобретение предлагает, в частности, гликоконъюгаты Streptococcus pneumoniae серотипа 3, которые демонстрируют улучшенную иммуногенность. Настоящее изобретение также предлагает способ (способ получения), который позволяет получить гликоконъюгат Streptococcus pneumoniae серотипа 3 с улучшенным выходом конъюгации.

Сущность изобретения

В одном аспекте изобретение относится к способу получения гликоконъюгата Streptococcus pneumoniae серотипа 3, включающему стадии:

(a) реакции выделенного капсульного полисахарида Streptococcus pneumoniae серотипа 3 с производным углекислоты и азидолинкером в апротонном растворителе с получением активированного азидополисахарида,

(b) реакции белка-носителя с агентом, содержащим фрагмент N-гидроксисукцинимида (NHS) и алкиновую группу, где фрагмент NHS реагирует с аминогруппами с образованием амидной связи, тем самым получая белок-носитель, функционализированный алкином,

(c) реакции активированного азидополисахарида со стадии (а) с активированным алкиновым белком-переносчиком со стадии (b) посредством Cu⁺¹-опосредованной реакции азид-алкинового циклоприсоединения с образованием гликоконъюгата.

В конкретном аспекте перед стадией активации (а) выделенный полисахарид доводят до средневесовой молекулярной массы от 100 кДа до 200 кДа.

В одном аспекте производное углекислоты представляет собой 1,1'-карбонилдиимидазол (КДИ).

В одном аспекте изобретение относится к гликоконъюгату Streptococcus pneumoniae серотипа 3, полученному указанными способами.

В одном аспекте изобретение относится к гликоконъюгату Streptococcus pneumoniae серотипа 3, содержащему сахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 3, ковалентно конъюгированный с белком-носителем (CP) через спейсер и имеющий общую формулу (VII):

где X выбран из группы, состоящей из СН₂(СН₂)_n', (CH₂CH₂O)_mCH₂CH₂, NHCO(СН₂)_n, NHCO(CH₂CH₂O)_mCH₂CH₂, ОСН₂(СН₂)_n, и О(CH₂CH₂O)_mCH₂CH₂; где n' выбран из от 1 до 10 и т выбран из от 1 до 4,

и где X' выбран из группы, состоящей из CH₂O(СН₂)_n', СН₂С=O, CH₂O(CH₂CH₂O)_n'', (СН₂)_n''СН₂С=O, где n'' выбран из от 0 до 10, и m' выбран из от 0 до 4.

В еще одном аспекте изобретение относится к иммуногенной композиции, содержащей указанный гликоконъюгат Streptococcus pneumoniae серотипа 3.

Чертежи

На фигуре 1 показана повторяющаяся полисахаридная структура капсульного полисахарида S. pneumoniae серотипа 3.

На фигуре 2 показана общая схема получения гликоконъюгата Streptococcus pneumoniae серотипа 3 по изобретению, полученного с использованием клик-химии. Pn3 поли=капсульный полисахарид S. pneumoniae серотипа 3; СР=белок-носитель, КДИ=1,1'-карбонилдиимидазол.

На фигуре 3 показаны титры опсонофагоцитарной активности (ОРА) для конъюгатов серотипа 3-CRM₁₉₇ у мышей, содержащих полисахарид различного размера. Классифицированные по размеру полисахариды серотипа 3 (~25, 150 или 250 кДа), конъюгированные с CRM₁₉₇ с использованием конъюгации либо RAC/водный раствор, либо RAC/ДМСО, используют для вакцинации мышей.

На фигуре 4 показаны титры опсонофагоцитарной активности (ОРА) для конъюгатов серотипа 3-CRM₁₉₇ у мышей с различной степенью активации (DoA). Классифицированные по размеру полисахариды серотипа 3, конъюгированные с CRM₁₉₇ с использованием конъюгации либо RAC/водный раствор, либо RAC/ДМСО, используют для вакцинации мышей.

На фигуре 5 показаны титры опсонофагоцитарной активности

(ОРА) для конъюгатов серотипа 3 с -CRM₁₉₇, -SCP или столбнячным анатоксином (ТТ) у мышей. Используют восстановительное аминирование в ДМСО (RAC/ДМСО).

На фигуре 6 показаны титры опсонофагоцитарной активности (ОРА) для конъюгатов серотипа 3-CRM₁₉₇ у мышей. Использовались различные химические способы (восстановительное аминирование в водном растворе (RAC/водн.), восстановительное аминирование в ДМСО (RAC/ДМСО), еТЕС-связанные гликоконъюгаты (еТЕС) или клик-химия (Клик).

На фигуре 7 показаны титры ОРА после введения 1 дозы у детенышей макаков-резусов, вакцинированных конъюгатами химическое соединение серотипа 3/носитель. Используют различные химические способы (восстановительное аминирование в водном растворе (RAC/водн.) или клик-химия (Клик). Титры опсонофагоцитов измеряют в сыворотке, собранной в момент времени через 4 недели после введения 1 дозы между различными химическими способами конъюгации. Каждая точка представляет отдельное животное, и данные выражают в виде геометрических титров с 95% доверительным интервалом. Статистическую значимость определяют на основе однофакторного ANOVA. Приводят значения р, скорректированные по Тьюки. ****=р≤0,0001 LLOQ - нижний предел количественного определения.

На фигуре 8 показан ответ ОРА после введения 2 дозы у детенышей макаков-резусов, вакцинированных конъюгатами химическое соединение серотипа 3/носитель. Титры опсонофагоцитов измеряют в сыворотке, собранной в момент времени через 4 недели после введения 2 дозы между различными химическими способами конъюгации. Каждая точка представляет отдельное животное, и данные выражают в виде геометрических титров с 95% доверительным интервалом. Статистическую значимость определяют на основе однофакторного ANOVA. Приводят значения р, скорректированные по Тьюки. LLOQ - нижний предел количественного определения.

1. Гликоконъюгаты по изобретению

Настоящее изобретение частично направлено на

конъюгированные капсульные сахаридные антигены (также называемые гликоконъюгатами), где сахариды происходят из серотипов S. pneumoniae, в частности, из серотипа 3. Для целей изобретения, термин «гликоконъюгат» означает капсульный сахарид, ковалентно связанный с белком-носителем. В одном из вариантов осуществления, капсульный сахарид непосредственно связан с белком-носителем. Во втором варианте осуществления, бактериальный сахарид связан с белком через спейсер/линкер.

1.1 Пневмококковый сахарид S. pneumoniae серотипа 3

Как показано на Фигуре 1, повторяющаяся единица полисахарида серотипа 3 состоит из линейной дисахаридной единицы с одной глюкопиранозой (Glcp) и одной глюкуроновой кислотой (GlcpA) (см., например, Geno K et al. (2015) Clin Microbiol Rev Vol 28:3, p 871-899).

В одном из вариантов осуществления, капсульный сахарид S. pneumoniae серотипа 3, используемый в настоящем изобретении, представляет собой синтетический углевод. Получение синтетического капсульного сахарида Streptococcus pneumoniae типа 3 можно, например, провести, как описано в WO 2017178664.

Однако, в предпочтительном варианте осуществления, источником бактериального полисахарида по настоящему изобретению могут быть бактериальные клетки Streptococcus pneumoniae серотипа 3. Бактериальные штаммы, которые можно использовать в качестве источника полисахаридов Streptococcus pneumoniae серотипа 3, можно получить из установленных коллекций культур (таких как, например, из Streptococcal Reference Laboratory (Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA USA)) или клинических образцов.

Полисахариды серотипа 3 могут быть получены непосредственно из бактерий с использованием процедур выделения, известных специалисту в данной области техники (см., например, способы, описанные в US 2006/0228380, US 2006/0228381, US 2007/0184071, US 2007/0184072, US 2007/0231340 и US 2008/0102498 и WO 2008/118752). Их также можно получить с использованием синтетических протоколов, известных специалисту в данной области техники. Их также можно приобрести (например, в American Туре Culture Collection (АТСС, Manassas, VA USA) (например, номер ссылки АТСС 172-Х или АТСС 33-Х)).

В случае, если полисахарид серотипа 3 получают непосредственно из бактерий, бактериальные клетки можно выращивать в среде, предпочтительно, в среде на основе сои. После ферментации бактериальных клеток, которые продуцируют капсульные полисахариды S. pneumoniae серотипа 3, бактериальные клетки можно лизировать с получением клеточного лизата. Полисахарид серотипа 3 затем может быть выделен из клеточного лизата с использованием методов очистки, известных в данной области техники, включая использование центрифугирования, глубинной фильтрации, осаждения, ультрафильтрации, обработки активированным углем, диафильтрации и/или колоночной хроматографии (см. например, US 2006/0228380, US 2006/0228381 и WO 2008/118752). Очищенный капсульный полисахарид серотипа 3 затем можно использовать для приготовления иммуногенных конъюгатов.

Выделенный капсульный полисахарид серотипа 3, полученный путем очистки полисахарида серотипа 3 из лизата S. pneumoniae и, необязательно, классификации по размеру очищенного полисахарида, может характеризоваться различными параметрами, включая, например, средневесовую молекулярную массу (Mw).

Молекулярную массу полисахарида можно измерить с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC) в комбинации с детектором многоракурсного рассеяния лазерного света (MALLS).

В предпочтительном варианте осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 (т.е. очищенный перед дальнейшей обработкой) имеет средневесовую молекулярную массу от 5 кДа до 5000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 5 кДа до 4000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 5 кДа до 3000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 5 кДа до 2000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 5 кДа до 1500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 5 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 5 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 5 кДа до 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 5 кДа до 300 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 5 кДа до 200 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 5 кДа до 100 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 50 кДа до 5000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 50 кДа до 4000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 50 кДа до 3000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 50 кДа до 2000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 50 кДа до 1500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 50 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 50 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 50 кДа до 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 50 кДа до 300 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 50 кДа до 200 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 50 кДа до 100 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 100 кДа до 5000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 100 кДа до 4000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 100 кДа до 3000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 100 кДа до 2000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 100 кДа до 1500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 100 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 100 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 100 кДа до 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 100 кДа до 300 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 100 кДа до 200 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 150 кДа до 5000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 150 кДа до 4000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 150 кДа до 3000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 150 кДа до 2000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 150 кДа до 1500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 150 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 150 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 150 кДа до 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 150 кДа до 300 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 150 кДа до 200 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 200 кДа до 5000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 200 кДа до 4000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 200 кДа до 3000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 200 кДа до 2000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 200 кДа до 1500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 200 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 200 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 200 кДа до 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 200 кДа до 300 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 300 кДа до 5000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 300 кДа до 4000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 300 кДа до 3000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 300 кДа до 2000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 300 кДа до 1500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 300 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 300 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 300 кДа до 400 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 400 кДа до 5000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 400 кДа до 4000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 400 кДа до 3000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 400 кДа до 2000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 400 кДа до 1500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 400 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 400 кДа до 500 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 500 кДа до 5000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 500 кДа до 4000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 500 кДа до 3000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 500 кДа до 2000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 500 кДа до 1500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 500 кДа до 1000 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 750 кДа до 5000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 750 кДа до 4000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 750 кДа до 3000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 750 кДа до 2000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 750 кДа до 1500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 750 кДа до 1000 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 1000 кДа до 5000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 1000 кДа до 4000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 1000 кДа до 3000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 1000 кДа до 2000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 1000 кДа до 1500 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 1500 кДа до 5000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 1500 кДа до 4000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 1500 кДа до 3000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 1500 кДа до 2000 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 2000 кДа до 5000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 2000 кДа до 4000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 2000 кДа до 3000 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 2500 кДа до 5000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 2500 кДа до 4000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу от 2500 кДа до 3000 кДа.

Любое целое число в любом из вышеуказанных диапазонов рассматривается как вариант осуществления по описанию.

Предпочтительно, чтобы получить конъюгаты серотипа 3 с выгодными характеристиками фильтруемости, иммуногенностью и/или выходом, до конъюгации с белком-носителем проводят классификацию полисахарида по размерам в целевом диапазоне молекулярной массы. Преимущественно, размер очищенного полисахарида серотипа 3 уменьшают при сохранении важных особенностей структуры полисахарида. Может использоваться механическая или химическая классификация. В одном из вариантов осуществления, размер очищенного полисахарида серотипа 3 уменьшают посредством химического гидролиза. Химический гидролиз можно проводить с использованием мягкой кислоты (например, уксусной кислоты, муравьиной кислоты, пропановой кислоты). В одном из вариантов осуществления, химический гидролиз проводят с использованием муравьиной кислоты. В одном из вариантов осуществления, химический гидролиз проводят с использованием пропановой кислоты. В предпочтительном варианте осуществления, химический гидролиз проводят с использованием уксусной кислоты. Химический гидролиз также можно проводить с использованием разбавленной сильной кислоты (такой как разбавленная хлористоводородная кислота, разбавленная серная кислота, разбавленная фосфорная кислота, разбавленная азотная кислота или разбавленная хлорная кислота). В одном из вариантов осуществления, химический гидролиз проводят с использованием разбавленной хлористоводородной кислоты. В одном из вариантов осуществления, химический гидролиз проводят с использованием разбавленной серной кислоты. В одном из вариантов осуществления, химический гидролиз проводят с использованием разбавленной фосфорной кислоты. В одном из вариантов осуществления, химический гидролиз проводят с использованием разбавленной азотной кислоты. В одном из вариантов осуществления, химический гидролиз проводят с использованием разбавленной хлорной кислоты. Размер очищенного полисахарида серотипа 3 также можно уменьшить путем механической гомогенизации. В одном из вариантов осуществления, размер очищенного полисахарида серотипа 3 уменьшают посредством гомогенизации под высоким давлением. Гомогенизация под высоким давлением обеспечивает высокие скорости сдвига за счет прокачки технологического потока через канал достаточно малых размеров. Скорость сдвига увеличивается за счет использования большего приложенного давления гомогенизации, и время воздействия можно увеличить за счет рециркуляции потока сырья через гомогенизатор.

Процесс гомогенизации под высоким давлением может быть подходящим для уменьшения размера очищенного полисахарида серотипа 3 при сохранении структурных особенностей полисахарида.

В предпочтительном варианте осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 5 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 5 кДа до 900 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 5 кДа до 800 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 5 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 5 кДа до 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 5 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 5 кДа до 450 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 5 кДа до 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 5 кДа до 350 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 5 кДа до 300 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 5 кДа до 250 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 5 кДа до 200 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 5 кДа до 150 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 5 кДа до 100 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 5 кДа до 50 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 50 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 50 кДа до 900 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 50 кДа до 800 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 50 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 50 кДа до 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 50 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 50 кДа до 450 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 50 кДа до 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 50 кДа до 350 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 50 кДа до 300 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 50 кДа до 250 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 50 кДа до 200 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 50 кДа до 150 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 50 кДа до 100 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 100 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 100 кДа до 900 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 100 кДа до 800 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 100 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 100 кДа до 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 100 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 100 кДа до 450 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 100 кДа до 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 100 кДа до 350 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 100 кДа до 300 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 100 кДа до 250 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 100 кДа до 200 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 100 кДа до 150 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 110 кДа до 150 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 120 кДа до 150 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 110 кДа до 150 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 130 кДа до 150 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 120 кДа до 150 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 120 кДа до 140 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 120 кДа до 130 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 130 кДа до 150 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 130 кДа до 140 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 150 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 150 кДа до 900 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 150 кДа до 800 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 150 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 150 кДа до 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 150 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 150 кДа до 450 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 150 кДа до 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 150 кДа до 350 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 150 кДа до 300 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 150 кДа до 250 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 150 кДа до 200 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 200 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 200 кДа до 900 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 200 кДа до 800 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 200 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 200 кДа до 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 200 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 200 кДа до 450 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 200 кДа до 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 200 кДа до 350 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 200 кДа до 300 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 200 кДа до 250 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 250 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 250 кДа до 900 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 250 кДа до 800 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 250 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 250 кДа до 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 250 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 250 кДа до 450 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 250 кДа до 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 250 кДа до 350 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 250 кДа до 300 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 300 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 300 кДа до 900 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 300 кДа до 800 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 300 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 300 кДа до 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 300 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 300 кДа до 450 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 300 кДа до 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 300 кДа до 350 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 350 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 350 кДа до 900 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 350 кДа до 800 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 350 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 350 кДа до 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 350 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 350 кДа до 450 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 350 кДа до 400 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 400 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 400 кДа до 900 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 400 кДа до 800 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 400 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 400 кДа до 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 400 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 400 кДа до 450 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 450 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 450 кДа до 900 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 450 кДа до 800 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 450 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 450 кДа до 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 450 кДа до 500 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 500 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 500 кДа до 900 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 500 кДа до 800 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 500 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 500 кДа до 600 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 600 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 600 кДа до 900 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 600 кДа до 800 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 600 кДа до 700 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 700 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 700 кДа до 900 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 700 кДа до 800 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 800 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 800 кДа до 900 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 классифицирован по размеру до средневесовой молекулярной массы от 900 кДа до 1000 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 5 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 50 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 100 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 110 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 120 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 130 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 140 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 150 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 160 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 170 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 180 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 190 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 200 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 250 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 300 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет размер, составляющий средневесовую молекулярную массу примерно 350 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 450 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 550 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 800 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу примерно 900 кДа. В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 имеет размер, составляющий средневесовую молекулярную массу примерно 1000 кДа.

В одном из вариантов осуществления, выделенный капсульный полисахарид серотипа 3 не классифицируется по размеру.

Выделенный капсульный полисахарид серотипа 3, описанный выше, можно активировать (например, химически активировать), чтобы сделать его способным к реакции (например, с линкером или непосредственно с белком-носителем), и затем включить в гликоконъюгаты, как далее описано в настоящем документе.

Для целей изобретения, термин «гликоконъюгат» означает сахарид, ковалентно связанный с белком-носителем. В одном из вариантов осуществления, сахарид напрямую связан с белком-носителем. Во втором варианте осуществления, сахарид связан с белком-носителем через спейсер/линкер.

В целом, ковалентная конъюгация сахаридов с носителями повышает иммуногенность сахаридов, поскольку превращает их из Т-независимых антигенов в Т-зависимые антигены, тем самым обеспечивая примирование иммунологической памяти. Конъюгация особенно полезна для педиатрических вакцин.

1.2 Гликоконъюгаты Streptococcus pneumoniae серотипа 3 по изобретению

В некоторых вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по настоящему изобретению содержит капсульный полисахарид серотипа 3, где средневесовая молекулярная масса (Mw) указанного полисахарида перед конъюгацией составляет от 10 кДа до 2000 кДа.

Средневесовая молекулярная масса (Mw) сахарида до конъюгации относится к Mw до активации полисахарида (т.е. после возможной стадии классификации по размерам, но до реакции полисахарида с активирующим агентом). В контексте настоящего изобретения, Mw полисахарида существенно не модифицируется стадией активации, и Mw полисахарида, включенного в конъюгат, аналогична Mw полисахарида, измеренной перед активацией. В одном из вариантов осуществления, полисахарид активируется производным углекислоты (например, КДИ или КДТ) в комбинации с азидолинкером (см. разделы 1.3 ниже). В одном из вариантов осуществления, полисахарид активируется КДИ в комбинации с азидолинкером (см. разделы 1.3 ниже). В одном из вариантов осуществления, полисахарид активируется КДТ в комбинации с азидолинкером (см. разделы 1.3 ниже).

В одном из вариантов осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по настоящему изобретению содержит капсульный полисахарид серотипа 3, где средневесовая молекулярная масса (Mw) указанного полисахарида перед конъюгацией составляет от 50 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 50 кДа до 750 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 50 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 50 кДа до 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 50 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 50 кДа до 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 50 кДа до 300 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 50 кДа до 200 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 50 кДа до 150 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 50 кДа до 140 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 50 кДа до 130 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 50 кДа до 120 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 50 кДа до 110 кДа.

В одном из вариантов осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по настоящему изобретению содержит капсульный полисахарид серотипа 3, где средневесовая молекулярная масса (Mw) указанного полисахарида перед конъюгацией составляет от 75 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 75 кДа до 750 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 75 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 75 кДа до 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 75 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 75 кДа до 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 75 кДа до 300 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 75 кДа до 200 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 75 кДа до 150 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 75 кДа до 140 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 75 кДа до 130 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 75 кДа до 120 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 75 кДа до 110 кДа.

В одном из вариантов осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по настоящему изобретению содержит капсульный полисахарид серотипа 3, где средневесовая молекулярная масса (Mw) указанного полисахарида перед конъюгацией составляет от 100 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 100 кДа до 750 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 100 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 100 кДа до 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 100 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 100 кДа до 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 100 кДа до 300 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 100 кДа до 200 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 100 кДа до 150 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 100 кДа до 140 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 100 кДа до 130 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 100 кДа до 120 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 100 кДа до 110 кДа.

В одном из вариантов осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по настоящему изобретению содержит капсульный полисахарид серотипа 3, где средневесовая молекулярная масса (Mw) указанного полисахарида перед конъюгацией составляет от 125 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 125 кДа до 750 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 125 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 125 кДа до 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 125 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 125 кДа до 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 125 кДа до 300 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 125 кДа до 200 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 125 кДа до 150 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 125 кДа до 140 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 125 кДа до 130 кДа.

В одном из вариантов осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по настоящему изобретению содержит капсульный полисахарид серотипа 3, где средневесовая молекулярная масса (Mw) указанного полисахарида перед конъюгацией составляет от 130 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 130 кДа до 750 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 130 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 130 кДа до 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 130 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 130 кДа до 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 130 кДа до 300 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 130 кДа до 200 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 130 кДа до 150 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 130 кДа до 140 кДа.

В одном из вариантов осуществления гликоконъюгат серотипа 3 по настоящему изобретению содержит капсульный полисахарид серотипа 3, где средневесовая молекулярная масса (Mw) указанного полисахарида перед конъюгацией составляет от 150 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 150 кДа до 750 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 150 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 150 кДа до 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 150 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 150 кДа до 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 150 кДа до 300 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 150 кДа до 200 кДа.

В одном из вариантов осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по настоящему изобретению содержит капсульный полисахарид серотипа 3, где средневесовая молекулярная масса (Mw) указанного полисахарида перед конъюгацией составляет от 200 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 200 кДа до 750 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 200 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 200 кДа до 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 200 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 200 кДа до 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 200 кДа до 300 кДа.

В одном из вариантов осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по настоящему изобретению содержит капсульный полисахарид серотипа 3, где средневесовая молекулярная масса (Mw) указанного полисахарида перед конъюгацией составляет от 300 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 300 кДа до 750 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 300 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 300 кДа до 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 300 кДа до 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 300 кДа до 400 кДа.

В одном из вариантов осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по настоящему изобретению содержит капсульный полисахарид серотипа 3, где средневесовая молекулярная масса (Mw) указанного полисахарида перед конъюгацией составляет от 400 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 400 кДа до 750 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 400 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 400 кДа до 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 400 кДа до 500 кДа.

В одном из вариантов осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по настоящему изобретению содержит капсульный полисахарид серотипа 3, где средневесовая молекулярная масса (Mw) указанного полисахарида перед конъюгацией составляет от 500 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 500 кДа до 750 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 500 кДа до 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 500 кДа до 600 кДа.

В одном из вариантов осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по настоящему изобретению содержит капсульный полисахарид серотипа 3, где средневесовая молекулярная масса (Mw) указанного полисахарида перед конъюгацией составляет от 600 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 600 кДа до 750 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 600 кДа до 700 кДа.

В одном из вариантов осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по настоящему изобретению содержит капсульный полисахарид серотипа 3, где средневесовая молекулярная масса (Mw) указанного полисахарида перед конъюгацией составляет от 700 кДа до 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет от 700 кДа до 750 кДа.

В одном из вариантов осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по настоящему изобретению содержит капсульный полисахарид серотипа 3, где средневесовая молекулярная масса (Mw) указанного полисахарида перед конъюгацией составляет от 750 кДа до 1000 кДа.

Любое целое число в любом из вышеуказанных диапазонов рассматривается как вариант осуществления изобретения.

В одном из вариантов осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по настоящему изобретению содержит капсульный полисахарид серотипа 3, где средневесовая молекулярная масса (Mw) указанного полисахарида до конъюгации составляет примерно 1000 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет примерно 750 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет примерно 700 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет примерно 600 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет примерно 500 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет примерно 400 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет примерно 300 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет примерно 200 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет примерно 150 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет примерно 140 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет примерно 130 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет примерно 120 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет примерно 110 кДа. В одном из вариантов осуществления, средневесовая молекулярная масса (Mw) составляет примерно 100 кДа.

В некоторых таких вариантах осуществления, гликоконъюгаты серотипа 3 получают с помощью клик-химии (см. раздел 1.3).

В некоторых вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по изобретению имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 250 кДа до 20000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 500 кДа до 15000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 500 кДа до 10000 кДа.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 250 кДа до 10000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 250 кДа до 9000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 250 кДа до 8000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 250 кДа до 7000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 250 кДа до 6000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 250 кДа до 5000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 250 кДа до 4000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 250 кДа до 3000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 250 кДа до 2000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 250 кДа до 1500 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 250 кДа до 1000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 250 кДа до 750 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 250 кДа до 600 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 250 кДа до 500 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 250 кДа до 400 кДа.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 500 кДа до 10000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 500 кДа до 9000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 500 кДа до 8000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 500 кДа до 7000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 500 кДа до 6000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 500 кДа до 5000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 500 кДа до 4000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 500 кДа до 3000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 500 кДа до 2000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 500 кДа до 1500 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 500 кДа до 1000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 500 кДа до 750 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 500 кДа до 600 кДа.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 750 кДа до 10000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 750 кДа до 9000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 750 кДа до 8000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 750 кДа до 7000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 750 кДа до 6000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 750 кДа до 5000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 750 кДа до 4000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 750 кДа до 3000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 750 кДа до 2000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 750 кДа до 1500 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 750 кДа до 1000 кДа.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 1000 кДа до 10000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 1000 кДа до 9000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 1000 кДа до 8000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 1000 кДа до 7000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 1000 кДа до 6000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 1000 кДа до 5000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 1000 кДа до 4000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 1000 кДа до 3000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 1000 кДа до 2000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 1000 кДа до 1500 кДа.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 2000 кДа до 10000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 2000 кДа до 9000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 2000 кДа до 8000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 2000 кДа до 7000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 2000 кДа до 6000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 2000 кДа до 5000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 2000 кДа до 4000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 2000 кДа до 3000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 2000 кДа до 3500 кДа.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 2250 кДа до 3500 кДа.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 3000 кДа до 10000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 3000 кДа до 9000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 3000 кДа до 8000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 3000 кДа до 7000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 3000 кДа до 6000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 3000 кДа до 5000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 3000 кДа до 4000 кДа.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 4000 кДа до 10000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 4000 кДа до 9000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 4000 кДа до 8000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 4000 кДа до 7000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 4000 кДа до 6000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 4000 кДа до 5000 кДа.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 5000 кДа до 10000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 5000 кДа до 9000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 5000 кДа до 8000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 5000 кДа до 7000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 5000 кДа до 6000 кДа.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 6000 кДа до 10000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 6000 кДа до 9000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 6000 кДа до 8000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 6000 кДа до 7000 кДа.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 7000 кДа до 10000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 7000 кДа до 9000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 7000 кДа до 8000 кДа.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 8000 кДа до 10000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 8000 кДа до 9000 кДа.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) от 9000 кДа до 10000 кДа.

Любое целое число в любом из вышеуказанных диапазонов рассматривается как вариант осуществления изобретения.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) примерно 10000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) примерно 9000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) примерно 8000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) примерно 7000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) примерно 6000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) примерно 5000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) примерно 4000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) примерно 3500 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) примерно 3250 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) примерно 3000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) примерно 2500 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) примерно 2250 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) примерно 2000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) примерно 1000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) примерно 750 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) примерно 600 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) примерно 500 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 имеет средневесовую молекулярную массу (Mw) примерно 400 кДа.

Молекулярную массу полисахарида можно измерить с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC) в комбинации с детектором многоракурсного рассеяния лазерного света (MALLS).

Другой способ охарактеризовать гликоконъюгаты серотипа 3 по изобретению заключается в количестве остатков лизина в белке-носителе (например, CRM₁₉₇ или SCP), которые конъюгируются с сахаридом, который можно охарактеризовать как интервал конъюгированных лизинов (степень конъюгации). Доказательства модификации лизином белка-носителя благодаря ковалентным связям с полисахаридами могут быть получены аминокислотным анализом с использованием обычных способов, известных специалистам в данной области техники. Конъюгация приводит к уменьшению количества восстановленных остатков лизина по сравнению с исходным материалом белка-носителя, используемым для получения материалов конъюгата. В предпочтительном варианте осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет от 2 до 15. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет от 2 до 13. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет от 2 до 10. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет от 2 до 8. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации серотипа 3 гликоконъюгата по изобретению составляет от 2 до 6. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по настоящему изобретению составляет от 2 до 5. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по настоящему изобретению составляет от 2 до 4. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет от 3 до 15. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет от 3 до 13. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет от 3 до 10. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет от 3 до 8. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет от 3 до 8. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет от 3 до 6. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет от 3 до 5. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 изобретения составляет от 3 до 4. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет от 5 до 15. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет от 5 до 10. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет от 8 до 15. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет от 8 до 12. В одном из вариантов степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет от 10 до 15. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет от 10 до 12.

В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет примерно 2.

В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет примерно 3. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет примерно 4. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет примерно 5. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет примерно 6. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет примерно 7. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет примерно 8. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет примерно 9. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет примерно 10, примерно 11. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет примерно 12. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет примерно 13. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет примерно 14. В одном из вариантов осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет примерно 15. В предпочтительном варианте осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата серотипа 3 по изобретению составляет от 4 до 7. В некоторых вариантах осуществления, белок-носитель представляет собой CRM₁₉₇. В других вариантах осуществления, белок-носитель представляет собой SCP.

Гликоконъюгаты серотипа 3 по изобретению также можно охарактеризовать соотношением (масса/масса) сахарида к белку-носителю. В некоторых вариантах осуществления, соотношение полисахарида серотипа 3 к белку-носителю в гликоконъюгате (масс./масс.) составляет от 0,5 до 3,0. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет от 0,5 до 2,0. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет от 0,5 до 1,5. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет от 0,8 до 1,2. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет от 0,5 до 1,0. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет от 1,0 до 1,5. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет от 1,0 до 2,0. В дополнительных вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет от 0,8 до 1,2. В предпочтительном варианте осуществления, отношение капсульного полисахарида серотипа 3 к белку-носителю в конъюгате составляет от 0,9 до 1,1.

В одном из вариантов осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 0,5. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 0,6. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 0,7. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 0,8. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 0,9. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 1,0. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 1,1. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 1,2. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 1,3. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 1,4. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 1,5. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 1,6. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 1,7. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 1,8. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 1,9. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 2,0. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 2,1. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 2,2. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 2,5. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 2,8. В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (масс./масс.) составляет примерно 3,0. В некоторых таких вариантах осуществления, белок-носитель представляет собой CRM₁₉₇. В других таких вариантах осуществления, белок-носитель представляет собой SCP.

Гликоконъюгаты серотипа 3 по изобретению также могут характеризоваться количеством ковалентных связей между белком-носителем и сахаридом в зависимости от единиц повтора сахарида. В одном из вариантов осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по изобретению содержит по меньшей мере одну ковалентную связь между белком-носителем и полисахаридом на каждые 4 сахаридные повторяющиеся единицы полисахарида. В другом варианте осуществления, ковалентная связь между белком-носителем и полисахаридом возникает по меньшей мере один раз в каждых 10 сахаридных единиц повтора полисахарида. В другом варианте осуществления, ковалентная связь между белком-носителем и полисахаридом возникает по меньшей мере один раз в каждых 15 сахаридных единиц повтора полисахарида. В дополнительном варианте осуществления, ковалентная связь между белком-носителем и полисахаридом возникает по меньшей мере один раз в каждых 25 сахаридных единиц повтора полисахарида. В дополнительном варианте осуществления, ковалентная связь между белком-носителем и полисахаридом возникает по меньшей мере один раз на каждые 50 сахаридных единиц повтора полисахарида. В еще одном из вариантов осуществления, ковалентная связь между белком-носителем и полисахаридом возникает по меньшей мере один раз на каждые 100 сахаридных единиц повтора полисахарида.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по изобретению содержит по меньшей мере одну ковалентную связь между белком-носителем и полисахаридом на каждые 5-10 сахаридных единиц повтора полисахарида.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по изобретению содержит по меньшей мере одну ковалентную связь между белком-носителем и полисахаридом на каждые 2-7 сахаридных единиц повтора полисахарида.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по изобретению содержит по меньшей мере одну ковалентную связь между белком-носителем и полисахаридом на каждые 6-11 сахаридных единиц повтора полисахарида.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по изобретению содержит по меньшей мере одну ковалентную связь между белком-носителем и полисахаридом на каждые 9-14 сахаридных единиц повтора полисахарида.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по изобретению содержит по меньшей мере одну ковалентную связь между белком-носителем и полисахаридом на каждые 10-20 сахаридных единиц повтора полисахарида.

В других вариантах осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 по изобретению содержит по меньшей мере одну ковалентную связь между белком-носителем и полисахаридом на каждые 4-25 сахаридных единиц повтора полисахарида.

В частых вариантах осуществления, белок-носитель представляет собой CRM₁₉₇. В частых вариантах осуществления, белок-носитель представляет собой SCP.

В некоторых вариантах осуществления, белок-носитель представляет собой CRM₁₉₇, и ковалентная связь между CRM₁₉₇ и полисахаридом возникает по меньшей мере один раз на каждые 4, 10, 15 или 25 сахаридных единиц повтора полисахарида. В частых вариантах осуществления, белок-носитель представляет собой SCP, и ковалентная связь между SCP и полисахаридом возникает по меньшей мере один раз на каждые 4, 10, 15 или 25 сахаридных единиц повтора полисахарида.

Гликоконъюгаты серотипа 3 и иммуногенные композиции по изобретению могут содержать свободный сахарид, который не конъюгирован ковалентно с белком-носителем, но, тем не менее, присутствует в композиции гликоконъюгата. Свободный сахарид может быть нековалентно связан с гликоконъюгатом (т.е. нековалентно связан, адсорбирован или захвачен в нем или с ним).

В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 содержит менее примерно 50% свободного полисахарида серотипа 3 по сравнению с общим количеством полисахарида серотипа 3. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 содержит менее примерно 40% свободного полисахарида серотипа 3 по сравнению с общим количеством полисахарида серотипа 3. В еще одном предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 содержит менее примерно 25% свободного полисахарида серотипа 3 по сравнению с общим количеством полисахарида серотипа 3. В еще предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 содержит менее примерно 20% свободного полисахарида серотипа 3 по сравнению с общим количеством полисахарида серотипа 3. В еще предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 3 содержит менее примерно 15% свободного полисахарида серотипа 3 по сравнению с общим количеством полисахарида серотипа 3.

Гликоконъюгаты серотипа 3 также можно охарактеризовать по их молекулярному распределению по размерам (K_d). Среду для эксклюзионной хроматографии (CL-4B) можно использовать для определения относительного молекулярного распределения по размерам конъюгата. Эксклюзионную хроматографию по размеру (SEC) используют в колонках с подачей самотеком для определения молекулярного распределения по размерам конъюгатов. Крупные молекулы, исключенные из пор среды, элюируются быстрее, чем мелкие молекулы. Отборники фракций используют для сбора элюата колонки. Фракции тестируют колориметрически с помощью анализа сахаридов. Для определения K_d, колонки калибруют для определения фракции, при которой молекулы полностью исключены (V₀), (K_d=0), и фракции, представляющие максимальное удерживание (V_i), (K_d=1). Фракция, при которой достигается указанный атрибут образца (Ve), связана с выражением K_d=(V_e-V₀) / (V_i-V₀).

В предпочтительном варианте осуществления, по меньшей мере 30% гликоконъюгата серотипа 3 имеют ниже или равен 0,3 в колонке CL-4B. В предпочтительном варианте осуществления, по меньшей мере 40% глико конъюгата имеет ниже или равен 0,3 в колонке CL-4B. В предпочтительном варианте осуществления, по меньшей мере 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80% или 85% гликоконъюгата серотипа 3 имеют ниже или равен 0,3 в колонке CL-4B. В предпочтительном варианте осуществления, по меньшей мере 60% гликоконъюгата серотипа 3 имеют ниже или равен 0,3 в колонке CL-4B. В предпочтительном варианте осуществления, от 50% до 80% гликоконъюгата серотипа 3 имеют ниже или равен 0,3 в колонке CL-4B. В предпочтительном варианте осуществления, от 65% до 80% гликоконъюгата серотипа 3 имеют ниже или равен 0,3 в колонке CL-4B.

1.3. Гликоконъюгаты Streptococcus pneumoniae серотипа 3 по настоящему изобретению, полученные с использованием клик-химии.

В одном из вариантов осуществления, гликоконъюгаты серотипа 3 по настоящему изобретению получают с использованием клик-химии.

Изобретение также относится к способу получения гликоконъюгата серотипа 3, как описано в настоящем документе.

Согласно настоящему изобретению, клик-химия включает три стадии: (а) реакция выделенного капсульного полисахарида серотипа 3 с производным углекислоты и азидолинкером в апротонном растворителе с получением активированного азидополисахарида (активация полисахарида), (b) реакция белка-носителя с агентом, содержащим фрагмент N-гидроксисукцинимида (NHS) и алкиновую группу, где фрагмент NHS реагирует с аминогруппами с образованием амидной связи, с получением белка-носителя, функционализированного алкинами (активация белка-носителя), (с) реакция активированного азидополисахарида со стадии (а) с активированным алкиновым белком-носителем со стадии (b) посредством Cu⁺¹-опосредованной реакции азид-алкинового циклоприсоединения с образованием гликоконъюгата.

После стадии (а), полисахарид считается активированным и упоминается в настоящем документе как «активированный полисахарид» или «активированный азидополисахарид».

После стадии (b), носитель считается активированным и называется «активированным носителем».

Как упоминалось выше, перед активацией (а) можно определить размер полисахарида в целевом диапазоне молекулярной массы (MW).

Поэтому, в одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид калибруют перед активацией производным углекислоты и азидолинкером.

В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид имеет размер, соответствующий любому целевому диапазону молекулярной массы (MW), определенному выше.

В одном из вариантов осуществления, указанное производное углекислоты выбрано из группы, состоящей из 1,1'-карбонилдиимидазола (КДИ), 1,1'-карбонил-ди-[1,2,4-триазола) (КДТ), дисукцинимидилкарбоната (ДСК) и N-гидроксисукцинимидилхлорформиата.

B одном из вариантов осуществления, указанное производное углекислоты представляет собой 1,1'-карбонилдиимидазол (КДИ). В одном из вариантов осуществления, указанное производное углекислоты представляет собой 1,1'-карбонил-ди-(1,2,4-триазол) (КДТ). В другом варианте осуществления, указанное производное углекислоты представляет собой дисукцинимидилкарбонат (ДСК). В еще одном из вариантов осуществления, указанное производное углекислоты представляет собой N-гидроксисукцинимидилхлорформиат.

В одном из вариантов осуществления, указанное производное углекислоты представляет собой 1,1'-карбонилдиимидазол (КДИ) или 1,1'-карбонил-ди(1,2,4-триазол) (КДТ). Предпочтительно, указанное производное углекислоты представляет собой 1,1'-карбонилдиимидазол (КДИ).

В одном из вариантов осуществления, указанный азидолинкер представляет собой соединение формулы (I),

где X выбран из группы, состоящей из СН₂(СН₂)_n, (СН₂СН₂О)_mCH₂CH₂, NHCO(СН₂)_n, NHCO(СН₂СН₂О)_mCH₂CH₂, ОСН₂(СН₂)_n и О(CH₂CH₂O)_mCH₂CH₂; где n выбран из от 1 до 10 и m выбран из от 1 до 4.

В одном из вариантов осуществления, указанный азидолинкер представляет собой соединение формулы (I), где X представляет собой СН₂(СН₂)_n, и n выбран из от 1 до 10. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 1 до 5. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 1 до 4. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 1 до 3. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 1 до 2. В конкретном варианте осуществления, n равен 1. В другом варианте осуществления, n равен 2 В еще одном из вариантов осуществления, n равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 6. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 7. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 8. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 9. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 10.

В одном из вариантов осуществления, указанный азидолинкер представляет собой соединение формулы (I), где X представляет собой (СН₂СН₂О)_mСН₂СН₂, где т выбран из от 1 до 4. В одном из вариантов осуществления, m выбран из от 1 до 3. В одном из вариантов осуществления, m выбран из от 1 до 2. В конкретном варианте осуществления, m равен 1. В другом варианте осуществления, m равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4.

В одном из вариантов осуществления, указанный азидолинкер представляет собой соединение формулы (I), где X представляет собой NHCO(CH₂)_n, и n выбран из от 1 до 10. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 1 до 5. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 1 до 4. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 1 до 3. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 1 до 2. В конкретном варианте осуществления, n равен 1. В другом варианте осуществления, n равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 6. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 7. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 8. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 9. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 10.

В одном из вариантов осуществления, указанный азидолинкер представляет собой соединение формулы (I), где X представляет собой NHCO(СН₂СН₂О)_mCH₂CH₂, где m выбран из от 1 до 4. В одном из вариантов осуществления, m выбран из от 1 до 3. В одном из вариантов осуществления, m выбран из от 1 до 2. В конкретном варианте осуществления, m равен 1. В другом варианте осуществления, m равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4.

В одном из вариантов осуществления, указанный азидолинкер представляет собой соединение формулы (I), где X представляет собой ОСН₂(СН₂)_n, и n выбран из от 1 до 10. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 1 до 5. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 1 до 4. В одном из вариантов осуществления, n выбрано в диапазоне от 1 до 3. В одном из вариантов осуществления, n выбрано в диапазоне от 1 до 2. В конкретном варианте осуществления, n равен 1. В другом варианте осуществления, n равен 2 В еще одном варианте, n равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n равен б. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 7. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 8. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 9. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 10.

В одном из вариантов осуществления, указанный азидолинкер представляет собой соединение формулы (I), где X представляет собой О(CH₂CH₂O)_mCH₂CH₂, где m выбран из от 1 до 4. В одном из вариантов осуществления, m выбран из от 1 до 3. В одном из вариантов осуществления, m выбран из от 1 до 2. В конкретном варианте осуществления, m равен 1. В другом варианте осуществления, m равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4.

В одном из вариантов осуществления, указанный азидолинкер представляет собой соединение формулы (II),

В одном из вариантов осуществления, указанный азидолинкер представляет собой 3-азидопропиламин.

В одном из вариантов осуществления, указанный агент, содержащий фрагмент N-гидроксисукцинимида (NHS) и алкиновую группу, представляет собой агент, содержащий фрагмент N-гидроксисукцинимида (NHS) и концевой алкин.

В одном из вариантов осуществления, указанный агент, содержащий фрагмент N-гидроксисукцинимида (NHS) и алкиновую группу, представляет собой агент, содержащий фрагмент N-гидроксисукцинимида (NHS) и циклоалкин.

В одном из вариантов осуществления, указанный агент, содержащий фрагмент N-гидроксисукцинимида (NHS) и алкиновую группу, представляет собой соединение формулы (III),

где X выбран из группы, состоящей из CH₂O(СН₂)_nCH₂C=O и CH₂O(CH₂CH₂O)_m(СН₂)_nCH₂C=O, где n выбран из от 0 до 10 и m выбран из от 0 до 4.

В одном из вариантов осуществления, указанный агент, содержащий фрагмент N-гидроксисукцинимида (NHS) и алкиновую группу, представляет собой соединение формулы (III), где X представляет собой CH₂O(СН₂)_nCH₂C=O, где n выбран из от 0 до 10. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 0 до 5. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 0 до 4. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 0 до 3. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 0 до 2. В конкретном варианте осуществления, n равен 0. В конкретном варианте осуществления, n равен 1. В другом варианте осуществления, n равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 4. В следующем варианте осуществления, n равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 6. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 7. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 8. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 9. В другом варианте осуществления, n равен 10.

В одном из вариантов осуществления, указанный агент, содержащий N-гидроксисукцинимидную группу (NHS) и алкиновую группу, представляет собой соединение формулы (III), где X представляет собой CH₂O(CH₂CH₂O)_m(СН₂)_nCH₂C=O, где n выбран из от 0 до 10 и m выбран из от 0 до 4. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 0 до 5. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 0 до 4. В одном из вариантов осуществления, n равен выбрано от 0 до 3. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 0 до 2. В конкретном варианте осуществления, n равен 0. В конкретном варианте осуществления, n равен 1. В другом варианте осуществления, n равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 6. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 7. Еще в еще одном из вариантов осуществления, n равен 8. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 9. В еще одном из вариантов осуществления, n равен 10. В одном из вариантов осуществления, m выбран из от 0 до 3. В одном из вариантов осуществления, m выбран из от 0 до 2. В конкретном варианте осуществления, m равен 1. В другом варианте осуществления, m равен 1. В другом варианте осуществления, m равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4.

В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 0 до 5 и m выбран из от 0 до 3. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 0 до 5 и m выбран из от 0 до 2.

В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 0 до 4 и m выбран из от 0 до 3. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 0 до 4 и m выбран из от 0 до 2.

В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 0 до 3 и m выбран из от 0 до 3. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 0 до 3 и m выбран из от 0 до 2.

В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 0 до 2 и m выбран из от 0 до 3. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 0 до 2 и m выбран из от 0 до 2.

В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 0 до 1 и m выбран из от 0 до 3. В одном из вариантов осуществления, n выбран из от 0 до 1 и m выбран из от 0 до 2.

В одном из вариантов осуществления, n равен 0 и m равен 0. В одном из вариантов осуществления, n равен 1 и m равен 0. В одном из вариантов осуществления, n равен 2 и m равен 0. В одном из вариантов осуществления, n равен 3 и m равен 0. В одном из вариантов осуществления, n равен 3 и m равен 0. В одном из вариантов осуществления, n равен 4 и m равен 0. В одном из вариантов осуществления, n равен 5 и m равен 0. В одном из вариантов осуществления, n равен 6 и m равен 0. В одном из вариантов осуществления, n равен 7 и m равен 0. В одном из вариантов осуществления, n равен 8 и m равен 0. В одном из вариантов осуществления, n равен 9 и m равен 0. В одном из вариантов осуществления, n равен 10 и m равен 0.

В одном из вариантов осуществления, n равен 0 и m равен 1. В одном из вариантов осуществления, n равен 1 и m равен 1. В одном из вариантов осуществления, n равен 2 и m равен 1. В одном из вариантов осуществления, n равен 3 и m равен 1. В одном из вариантов осуществления, n равен 3 и m равен 1. В одном из вариантов осуществления, n равен 4 и m равен 1. В одном из вариантов осуществления, n равен 5 и m равен 1. В одном из вариантов осуществления, n равен 6 и m равен 1. В одном из вариантов осуществления, n равен 7 и m равен 1. В одном из вариантов осуществления n равен 8 и m равен 1. В одном из вариантов осуществления, n равен 9 и m равен 1. В одном из вариантов осуществления, n равен 10 и m равен 1.

В одном из вариантов осуществления, n равен 0 и m равен 2. В одном из вариантов осуществления, n равен 1 и m равен 2. В одном из вариантов осуществления, n равен 2 и m равен 2. В одном из вариантов осуществления, n равен 3 и m равен 2. В одном из вариантов осуществления, n равен 4 и m равен 2. В одном из вариантов осуществления, n равен 5 и m равен 2. В одном из вариантов осуществления, n равен 6 и m равен 2. В одном из вариантов осуществления, n равен 7 и m равен 2. В одном из вариантов осуществления, n равен 8 и m равен 2. В одном из вариантов осуществления, n равен 9 и m равен 2. В одном из вариантов осуществления, n равен 10 и m равен 2.

В одном из вариантов осуществления, n равен 0 и m равен 3. В одном из вариантов осуществления, n равен 1 и m равен 3. В одном из вариантов осуществления, n равен 2 и m равен 3. В одном из вариантов осуществления, n равен 3 и m равен 3. В одном из вариантов осуществления, n равен 3 и m равен 3. В одном из вариантов осуществления, n равен 4 и m равен 3. В одном из вариантов осуществления, n равен 5 и m равен 3. В одном из вариантов осуществления, n равен 6 и m равен 3. В одном из вариантов осуществления, n равен 7 и m равен 3. В одном из вариантов осуществления, n равен 8 и m равен 3. В одном из вариантов осуществления, n равен 9 и m равен 3. В одном из вариантов осуществления, n равен 10 и m равен 3.

В одном из вариантов осуществления, n равен 0 и m равен 4. В одном из вариантов осуществления, n равен 1 и m равен 4. В одном из вариантов осуществления, n равен 2 и m равен 4. В одном из вариантов осуществления, n равен 3 и m равен 4. В одном из вариантов осуществления, n равен 3 и m равен 4. В одном из вариантов осуществления, n равен 4 и m равен 4. В одном из вариантов осуществления, n равен 5 и m равен 4. В одном из вариантов осуществления, n равен 6 и m равен 4. В одном из вариантов осуществления, n равен 7 и m равен 4. В одном из вариантов осуществления, n равен 8 и m равен 4. В одном из вариантов осуществления, n равен 9 и m равен 4. В одном из вариантов осуществления, n равен 10 и m равен 4.

В одном из вариантов осуществления, указанный агент, содержащий фрагмент N-гидроксисукцинимида (NHS) и алкиновую группу, представляет собой соединение формулы (IV):

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с производным углекислоты с последующей реакцией полисахарида, активированного производным углекислоты, с азидолинкером в апротонном растворителе с получением активированного азидополисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,01-10 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,05-10 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,1-10 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,2-10 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,3-10 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,4-10 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,5-10 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,8-10 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 1-10 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 2-10 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 3-10 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 5-10 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,01-5 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,05-5 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,1-5 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,2-5 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,3-5 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,4-5 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,5-5 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,8-5 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 1-5 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 2-5 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 3-5 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,01-3 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,05-3 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,1-3 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,2-3 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,3-3 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,4-3 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,5-3 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,8-3 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 1-3 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 2-3 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,01-2 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,05-2 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,1-2 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,2-2 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,3-2 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,4-2 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,5-2 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,8-2 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 1-2 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,01-1 молярный эквивалент к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,05-1 молярный эквивалент к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,1-1 молярный эквивалент к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,2-1 молярный эквивалент к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,3-1 молярный эквивалент к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,4-1 молярный эквивалент к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,5-1 молярный эквивалент к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,8-1 молярный эквивалент к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,01-0,5 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,05-0,5 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,1-0,5 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,2-0,5 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,3-0,5 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,4-0,5 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с некоторым количеством производного углекислоты.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,01-0,4 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,05-0,4 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,1-0,4 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,2-0,4 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,3-0,4 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,01-0,3 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,05-0,3 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,1-0,3 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, которое составляет 0,2-0,3 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, составляющим примерно 0,01 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, составляющим примерно 0,05 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, составляющим примерно 0,08 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, составляющим примерно 0,1 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, составляющим примерно 0,2 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, составляющим примерно 0,3 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, составляющим примерно 0,4 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, составляющим примерно 0,5 молярного эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, составляющим примерно 1 молярный эквивалент к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, составляющим примерно 2 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, составляющим примерно 3 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, составляющим примерно 4 молярных эквивалента к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, составляющим примерно 5 молярных эквивалентов количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, составляющим примерно 8 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) включает реакцию полисахарида с количеством производного углекислоты, составляющим примерно 10 молярных эквивалентов к количеству капсульного полисахарида серотипа 3, присутствующего в реакционной смеси.

В одном из вариантов осуществления, на стадии а) выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с производным углекислоты в апротонном растворителе.

В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с производным углекислоты в растворе, состоящем по существу из диметилсульфоксида (ДМСО) или диметилформамида (ДМФ). В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с производным углекислоты в растворе, состоящем по существу из диметилформамида (ДМФ). В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с производным углекислоты в растворе, состоящем по существу из диметилсульфоксида (ДМСО).

В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с производным углекислоты в растворе, состоящем по существу из диметилацетамида. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с производным углекислоты в растворе, состоящем по существу из N-метил-2-пирролидона. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с производным углекислоты в растворе, состоящем по существу из гексаметилфосфорамида (ГМФА).

В предпочтительном варианте осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с производным углекислоты в растворе, состоящем по существу из диметилсульфоксида (ДМСО).

В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с производным углекислоты в диметилсульфоксиде (ДМСО) или диметилформамиде (ДМФ). В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с производным углекислоты в диметилформамиде (ДМФ). В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с производным углекислоты в диметилсульфоксиде (ДМСО).

В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с производным углекислоты в диметилацетамиде. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с производным углекислоты в N-метил-2-пирролидоне. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с производным углекислоты в гексаметилфосфорамиде (ГМФА).

В предпочтительном варианте осуществления, выделенный полисахарид подвергают реакции с КДИ в диметилсульфоксиде (ДМСО). В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают реакции с КДИ в безводном ДМСО.

Неожиданно было обнаружено, что реакция выделенного полисахарида с КДИ в среде с уровнем влажности примерно от 0,1% до 1% (об./об.) позволяет избежать побочных реакций. Поэтому, в одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем от 0,1% до 1% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают реакции с КДИ в апротонном растворителе, содержащем от 0,1% до 0,8% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем от 0,1% до 0,4% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем от 0,1% до 0,3% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем от 0,1% до 0,2% (об./об.) воды.

В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем от 0,2% до 1% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем от 0,2% до 0,8% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем от 0,2% до 0,4% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем от 0,2% до 0,3% (об./об.) воды.

В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем от 0,3% до 0,8% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем от 0,3% до 0,5% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем от 0,3% до 0,4% (об./об.) воды.

В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем примерно 0,1% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем примерно 0,2% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем примерно 0,3% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем примерно 0,4% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем примерно 0,5% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем примерно 0,6% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем примерно 0,7% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем примерно 0,8% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в апротонном растворителе, содержащем примерно 0,9% (об./об.) воды.

В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в ДМСО, содержащем от 0,1% до 1% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в ДМСО, содержащем от 0,1% до 0,8% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в ДМСО, содержащем от 0,1% до 0,5% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в ДМСО, содержащем от 0,1% до 0,4% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в ДМСО, содержащем от 0,1% до 0,3% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в ДМСО, содержащем от 0,1% до 0,2% (об./об.) воды.

В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают реакции с КДИ в ДМСО, содержащем от 0,2% до 1% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в ДМСО, содержащем от 0,2% до 0,8% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в ДМСО, содержащем от 0,2% до 0,5% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в ДМСО, содержащем от 0,2% до 0,4% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в ДМСО, содержащем от 0,2% до 0,3% (об./об.) воды.

В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в ДМСО, содержащем от 0,3% до 0,8% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в ДМСО, содержащем от 0,3% до 0,5% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают реакции с КДИ в ДМСО, содержащем от 0,3% до 0,4% (об./об.) воды.

В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают реакции с КДИ в ДМСО, содержащем примерно 0,1% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают реакции с КДИ в ДМСО, содержащем примерно 0,2% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают реакции с КДИ в ДМСО, содержащем примерно 0,3% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают реакции с КДИ в ДМСО, содержащем примерно 0,4% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают реакции с КДИ в ДМСО, содержащем примерно 0,5% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают реакции с КДИ в ДМСО, содержащем примерно 0,6% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают реакции с КДИ в ДМСО, содержащем примерно 0,7% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают взаимодействию с КДИ в ДМСО, содержащем примерно 0,8% (об./об.) воды. В одном из вариантов осуществления, выделенный полисахарид подвергают реакции с КДИ в ДМСО, содержащем примерно 0,9% (об./об.) воды.

В одном из вариантов осуществления производное свободной углекислоты затем гасят добавлением воды перед добавлением азидолинкера. Вода может инактивировать свободный КДИ.

Поэтому, в одном из вариантов осуществления, активация производного углекислоты сопровождается добавлением воды. В одном из вариантов осуществления, воду добавляют для доведения общего содержания воды в смеси до примерно 1-10% (об./об.). В одном из вариантов осуществления, воду добавляют для доведения общего содержания воды в смеси до примерно 1,2-8% (об./об.). В одном из вариантов осуществления, воду добавляют для доведения общего содержания воды в смеси до примерно 1,5%-5% (об./об.). В одном из вариантов осуществления, воду добавляют для доведения общего содержания воды в смеси до примерно 1,5-3% (об./об.). В одном из вариантов осуществления, воду добавляют для доведения общего содержания воды в смеси до примерно 1,5-2,5% (об./об.). В одном из вариантов осуществления, воду добавляют для доведения общего содержания воды в смеси примерно до 1% (об./об.). В одном из вариантов осуществления, воду добавляют для доведения общего содержания воды в смеси до примерно 1,2% (об./об.). В одном из вариантов осуществления, воду добавляют для доведения общего содержания воды в смеси до примерно 1,4% (об./об.). В одном из вариантов осуществления, воду добавляют для доведения общего содержания воды в смеси до примерно 1,5% (об./об.). В одном из вариантов осуществления, воду добавляют для доведения общего содержания воды в смеси до примерно 2% (об./об.). В одном из вариантов осуществления, воду добавляют для доведения общего содержания воды в смеси до примерно 2,5% (об./об.). В одном из вариантов осуществления, воду добавляют для доведения общего содержания воды в смеси до примерно 3% (об./об.). В одном из вариантов осуществления, воду добавляют для доведения общего содержания воды в смеси до примерно 5% (об./об.). В одном из вариантов осуществления, воду добавляют для доведения общего содержания воды в смеси до примерно 7% (об./об.). В одном из вариантов осуществления, воду добавляют для доведения общего содержания воды в смеси до примерно 10% (об./об.).

После того как полисахарид прореагировал с производным углекислоты и после возможного гашения производного углекислоты водой, полисахарид, активированный производным углекислоты, вступает в реакцию с азидолинкером.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,01-10 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида (молярный эквивалент ЕП).

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,01-8 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,01-5 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,01-4 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,01-3 молярного эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,01-2 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,01-1 молярный эквивалент к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,01-0,5 молярного эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,01-0,1 молярного эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,05-10 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,05-8 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,05-5 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,05-4 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое находится в пределах 0,05-3 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,05-2 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,05-1 молярный эквивалент к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,05-0,5 молярного эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,05-0,1 молярного эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,1-10 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,1-8 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,1-5 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,1-4 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,1-3 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,1-2 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,1-1 молярный эквивалент к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,1-0,5 молярного эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,5-10 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,5-8 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,5-5 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,5-4 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,5-3 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,5-2 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 0,5-1 молярный эквивалент к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 1-10 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 1-8 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 1-5 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 1-4 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 1-3 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 1-2 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 2-10 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 2-8 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 2-5 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 2-4 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 2-3 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 3-10 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 3-8 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 3-5 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 3-4 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 4-10 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 4-8 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 4-5 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 5-10 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 5-8 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет 8-10 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет примерно 0,01 молярного эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет примерно 0,05 молярного эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет примерно 0,1 молярного эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет примерно 0,5 молярного эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет примерно 1 молярный эквивалент к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет примерно 2 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет примерно 3 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет примерно 4 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет примерно 5 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет примерно 8 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, стадия а) дополнительно включает реакцию полисахарида, активированного производным углекислоты, с количеством азидолинкера, которое составляет примерно 10 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В приведенных выше вариантах осуществления, указанное производное углекислоты предпочтительно представляет собой КДИ. В другом варианте осуществления, указанное производное углекислоты представляет собой КДТ.

В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет от 0,5 до 50%. Степень активации азидополисахарида определяют как долю единиц повтора, связанных с азидолинкером.

В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет от 1 до 30%. В другом варианте осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет от 2 до 25%. В другом варианте осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет от 3 до 20%.

В другом варианте осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет от 3 до 15%. В другом варианте осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет от 4 до 15%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет от 1 до 6%.

В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет от 3 до 6%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет от 10 до 15%.

В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 1%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 2%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 3%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 4%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 5%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 6%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 7%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 8%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 9%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 10%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 11%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 12%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 13%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 14%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 15%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 16%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 17%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 18%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 19%. В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного полисахарида после стадии а) составляет примерно 20%.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 0,1-10 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 0,5-10 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 1-10 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 1,5-10 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 2-10 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 2,5-10 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 3-10 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 5-10 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 7,5-10 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 0,1-7,5 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 0,5-7,5 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 1-7,5 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 1,5-7,5 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 2-7,5 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 2,5-7,5 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 3-7,5 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 5-7,5 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 0,1-5 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 0,5-5 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 1-5 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 1,5-5 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 2-5 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 2,5-5 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 3-5 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 0,1-3 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 0,5-3 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 1-3 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 1,5-3 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 2-3 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 2,5-3 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 0,1-2,5 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 0,5-2,5 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 1-2,5 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 1,5-2,5 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 2-2,5 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 0,1-2 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 0,5-2 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 1-2 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 1,5-2 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 0,1-1,5 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 0,5-1,5 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 1-1,5 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 0,1-1 молярный эквивалент к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 0,5-1 молярный эквивалент к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве 0,1-0,5 молярного эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве примерно 10 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве примерно 7,5 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве примерно 5 молярных эквивалентов к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве примерно 3 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве примерно 2,5 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве примерно 2 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве примерно 1,5 молярных эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве примерно 1 молярный эквивалент к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве примерно 0,5 молярного эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, стадия b) включает реакцию белка-носителя с количеством агента, несущего N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу в количестве примерно 0,1 молярного эквивалента к лизину на носителе.

В одном из вариантов осуществления, степень активации активированного носителя после стадии b) составляет от 1 до 50. Степень активации активированного носителя определяют как количество остатков лизина в белке-носителе, которые становятся связанными с агентом, несущим N-гидроксисукцинимидный (NHS) фрагмент и алкиновую группу.

В одном из вариантов осуществления, белок-носитель представляет собой CRM₁₉₇, который содержит 39 лизиновых остатков. В указанном варианте осуществления, степень активации активированного носителя после стадии b) может составлять от 1 до 30. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет от 5 до 20. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет от 9 до 18. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет от 8 до 11. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет от 15 до 20. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 5. Степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 6. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 7. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 8. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 9. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 10. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 11. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 12. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 13. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 14. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 15. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 16. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 17. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 18. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 19. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 20. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 21. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 22. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 23. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b) составляет примерно 24. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (CRM₁₉₇) после стадии b)составляет примерно 25.

В одном из вариантов осуществления, белок-носитель представляет собой SCP или его фрагмент. В указанном варианте осуществления, степень активации активированного носителя после стадии b) может составлять от 1 до 50.

В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (SCP) после стадии b) составляет от 5 до 50. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (SCP) после стадии b) составляет от 7 до 45. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (SCP) после стадии b) составляет от 5 до 15. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (SCP) после стадии b) составляет от 20 до 30. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (SCP) после стадии b) составляет от 30 до 50. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (SCP) после стадии b) составляет от 30 до 40. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (SCP) после стадии b) составляет от 10 до 40. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (SCP) после стадии b) составляет примерно 5. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (SCP) после стадии b) составляет примерно 7. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (SCP) после стадии b) составляет примерно 10. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (SCP) после стадии b) составляет примерно 13. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (SCP) после стадии b) составляет примерно 15. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (SCP) после стадии b) составляет примерно 20. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (SCP) после стадии b) составляет примерно 26. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (SCP) после стадии b) составляет примерно 30. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (SCP) после стадии b) составляет примерно 35. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (SCP) после стадии b) составляет примерно 37. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (SCP) после стадии b) составляет примерно 40. В другом варианте осуществления, степень активации активированной несущей (SCP) после стадии b) составляет примерно 45. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (SCP) после стадии b) это примерно 50.

В одном из вариантов белок-носитель представляет собой ТТ или его фрагмент. В указанном варианте осуществления, степень активации активированного носителя после стадии b) может составлять от 1 до 30.

В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (ТТ) после стадии b) составляет от 5 до 25. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (ТТ) после стадии b) составляет от 7 до 25. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (ТТ) после стадии b) составляет от 10 до 20. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (ТТ) после стадии b) составляет примерно 5. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (ТТ) после стадии b) составляет примерно 7. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (ТТ) после стадии b) составляет примерно 10. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (ТТ) после стадии b) составляет примерно 12. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (ТТ) после стадии b) составляет примерно 15. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (ТТ) после стадии b) составляет примерно 20. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (ТТ) после стадии b) составляет примерно 25. В другом варианте осуществления, степень активации активированного носителя (ТТ) после стадии b) составляет примерно 30.

В одном из вариантов осуществления, реакцию конъюгации с) проводят в водном буфере. В одном из вариантов осуществления, реакцию конъюгации с) проводят в водном буфере в присутствии меди (I) в качестве катализатора. В одном из вариантов осуществления, реакцию конъюгации с) проводят в водном буфере в присутствии окислителя и меди (I) в качестве катализатора. В предпочтительном варианте осуществления, реакцию конъюгации с) проводят в водном буфере в присутствии меди (I) в качестве катализатора и аскорбата в качестве окислителя. В одном из вариантов осуществления, дополнительно могут быть добавлены ТНРТА (трис(3-гидроксипропилтриазолилметил)амин) и аминогуанидин для защиты белка от побочных реакций. Поэтому в предпочтительном варианте осуществления, реакцию конъюгации с) проводят в водном буфере в присутствии меди (I) в качестве катализатора и аскорбата в качестве окислителя, при этом реакционная смесь дополнительно содержит ТНРТА (трис(3-гидроксипропилтриазолилметил)амин) и аминогуанидин.

В одном из вариантов осуществления, соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкину-носителю на стадии с) составляет от 0,1 до 3. В одном из вариантов осуществления, соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкину-носителю на стадии с) составляет от 0,5 до 2. В одном из вариантов осуществления, соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкину-носителю на стадии с) составляет от 0,6 до 1,5. В предпочтительном варианте осуществления соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкину-носителю на стадии с) составляет от 0,8 до 1. В одном из вариантов осуществления, соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкин-носитель на стадии с) составляет примерно 0,5. В одном из вариантов осуществления, соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкину-носителю на стадии с) составляет примерно 0,6. В одном из вариантов осуществления, соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкину-носителю на стадии с) составляет примерно 0,7. В одном из вариантов осуществления, соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкину-носителю на стадии с) составляет примерно 0,8. В одном из вариантов осуществления, соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкину-носителю на стадии с) составляет примерно 0,9. В одном из вариантов осуществления, соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкину-носителю на стадии с) составляет примерно 1. В одном из вариантов осуществления, соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкину-носителю на стадии с) составляет примерно 1.1. В одном из вариантов осуществления, соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкину-носителю на стадии с) составляет примерно 1.2. В одном из вариантов осуществления, соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкину-носителю на стадии с) составляет примерно 1.3. В одном из вариантов осуществления, соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкину-носителю на стадии с) составляет примерно 1.4. В одном из вариантов осуществления, соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкину-носителю на стадии с) составляет примерно 1.5. В одном из вариантов осуществления, соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкину-носителю на стадии с) составляет примерно 1.6. В одном из вариантов осуществления, соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкину-носителю на стадии с) составляет примерно 1.7. В одном из вариантов осуществления, соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкину-носителю на стадии с) составляет примерно 1.8. В одном из вариантов осуществления, соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкину-носителю на стадии с) составляет примерно 1,9. В одном из вариантов осуществления, соотношение начального ввода (масс./масс.) активированного азидополисахарида к активированному алкину-носителю на стадии с) составляет примерно 2.

После реакции клик-конъюгирования, в конъюгатах могут оставаться непрореагировавшие азидогруппы, их можно кэпировать с использованием подходящего агента, кэпирующего азидогруппу. Таким образом, в одном из вариантов осуществления, после стадии с) непрореагировавшие азидогруппы в конъюгатах кэпируют с использованием подходящего агента, кэпирующего азидогруппу. В одном из вариантов осуществления, этот агент, кэпирующий азидогруппу, представляет собой агент, несущий алкиновую группу. В одном из вариантов осуществления, этот агент, кэпирующий азидогруппу, представляет собой агент, несущий концевой алкин. В одном из вариантов осуществления, этот агент, кэпирующий азидогруппу представляет собой агент, содержащий циклоалкин.

В одном из вариантов осуществления, указанный агент, кэпирующий азидогруппу, представляет собой соединение формулы (V),

где X представляет собой (СН₂)_n, где n выбран из от 1 до 15.

В одном из вариантов осуществления, этот агент, кэпирующий азидогруппу, представляет собой пропаргиловый спирт.

Таким образом, в одном из вариантов осуществления, после стадии (с) способ дополнительно включает стадию кэпирования непрореагировавших азидогрупп, оставшихся в конъюгатах, с помощью агента, кэпирующего азидогруппу.

В одном из вариантов осуществления, кэпирование непрореагировавших азидогрупп осуществляется с использованием количества кэпирующего агента, которое составляет от 0,05 до 20 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, кэпирование непрореагировавших азидогрупп осуществляется с использованием количества кэпирующего агента, которое составляет от 0,1 до 15 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, кэпирование непрореагировавших азидогрупп осуществляется с использованием количества копирующего агента, которое составляет от 0,5 до 10 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших азидогрупп осуществляется с использованием количества копирующего агента, которое составляет от 0,5 до 5 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших азидогрупп осуществляется с использованием количества копирующего агента, которое составляет от 0,5 до 2 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших азидогрупп осуществляется с использованием количества копирующего агента, которое составляет от 0,5 до 1 молярного эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших азидогрупп осуществляется с использованием количества копирующего агента, которое составляет от 1 до 2 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших азидогрупп осуществляется с использованием количества копирующего агента, которое составляет от 0,75 до 1,5 молярного эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших азидогрупп осуществляется с использованием количества копирующего агента, которое составляет примерно 1 молярный эквивалент к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших азидогрупп осуществляется с использованием количества копирующего агента, которое составляет примерно 1,5 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших азидогрупп осуществляется с использованием количества кэпирующего агента, которое составляет примерно 0,5 молярного эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, кэпирование непрореагировавших азидогрупп осуществляется с использованием количества кэпирующего агента, которое составляет примерно 2 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

После реакции клик-конъюгации, в конъюгатах могут оставаться непрореагировавшие алкиновые группы, их можно кэпировать с использованием подходящего агента, кэпирующего алкиновую группу. В одном из вариантов осуществления, этот агент, кэпирующий алкиновую группу, представляет собой агент, несущий азидогруппу.

В одном из вариантов осуществления, указанный агент, кэпирующий алкиновую группу, представляет собой соединение формулы (VI),

где X представляет собой (СН₂)_n, где n выбран из от 1 до 15.

В одном из вариантов осуществления, этот агент, кэпирующий алкиновую группу, представляет собой 3-азидо-1-пропанол.

Таким образом, в одном из вариантов осуществления, после стадии (с) способ дополнительно включает стадию кэпирования непрореагировавших алкиновых групп, оставшихся в конъюгатах, с помощью агента, кэпирующего алкиновые группы.

В одном из вариантов осуществления, кэпирование непрореагировавших алкиновых групп осуществляется с использованием количества кэпирующего агента, которое составляет от 0,05 до 20 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, кэпирование непрореагировавших алкиновых групп осуществляется с использованием количества кэпирующего агента, которое составляет от 0,1 до 15 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, кэпирование непрореагировавших алкиновых групп осуществляется с использованием количества кэпирующего агента, которое составляет от 0,5 до 10 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших алкиновых групп осуществляется с использованием количества копирующего агента, которое составляет от 0,5 до 5 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших алкиновых групп осуществляется с использованием количества копирующего агента, которое составляет от 0,5 до 2 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших алкиновых групп осуществляется с использованием количества копирующего агента, которое составляет от 0,5 до 1 молярного эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших алкиновых групп осуществляется с использованием количества копирующего агента, которое составляет от 1 до 5 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших алкиновых групп осуществляется с использованием количества копирующего агента, которое составляет от 1 до 2 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших алкиновых групп осуществляется с использованием количества копирующего агента, которое составляет от 1,5 до 2,5 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших алкиновых групп осуществляется с помощью количества копирующего агента, которое составляет примерно 0,5 молярного эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших алкиновых групп осуществляется с помощью количества копирующего агента, которое составляет примерно 1 молярный эквивалент к количеству единицы повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших алкиновых групп осуществляется с помощью количества копирующего агента, которое составляет примерно 1,5 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших алкиновых групп осуществляется с помощью количества копирующего агента, которое составляет примерно 2 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших алкиновых групп осуществляется с помощью количества копирующего агента, которое примерно 2,5 молярных эквивалента к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

В одном из вариантов осуществления, копирование непрореагировавших алкиновых групп осуществляется с помощью количества копирующего агента, которое составляет примерно 5 молярных эквивалентов к количеству единиц повтора полисахарида активированного полисахарида.

После конъюгации с белком-носителем, гликоконъюгат может быть очищен (обогащен по количеству конъюгата сахарид-белок) с помощью различных методов, известных специалисту в данной области техники. Эти методы включают диализ, операции концентрирования/диафильтрации, осаждение/элюирование тангенциальной поточной фильтрацией, колоночную хроматографию (DEAE или хроматографию с гидрофобным взаимодействием) и глубинную фильтрацию. Следовательно, в одном из вариантов осуществления, способ получения гликоконъюгата по настоящему изобретению включает стадию очистки гликоконъюгата после его получения.

В одном аспекте, изобретение предлагает гликоконъюгат серотипа 3, полученный любым из способов, описанных в настоящем документе.

В одном аспекте, изобретение предлагает гликоконъюгат серотипа 3, содержащий сахарид серотипа 3, ковалентно конъюгированный с белком-носителем (CP) через спейсер и имеющий общую формулу (VII):

где X выбран из группы, состоящей из СН₂(СН₂)_n', (CH₂CH₂O)_mCH₂CH₂, NHCO(СН₂)_n^,, NHCO(CH₂CH₂O)_mCH₂CH₂, ОСН₂(СН₂)n_' и О(CH₂CH₂O)_mCH₂CH₂; где n' выбран из от 1 до 10 и m выбран из от 1 до 4,

и где X' выбран из группы, состоящей из CH₂O(СН₂)_n''СН₂С=O, CH₂O(CH₂CH₂O)_m, (СНо)_n''СН₂С=O, где n'' выбран из от 0 до 10, и m' выбран из от 0 до 4.

Формула (VII) представляет собой схематическое изображение гликоконъюгатов серотипа 3 по изобретению. Не следует понимать, что связь присутствует в каждой повторяющейся единице сахарида. Скорее, большая часть единиц повтора сахарида S. pneumoniae серотипа 3 остается не модифицированной, и ковалентные связи между белком-носителем и сахаридом сохраняются для меньшинства единиц повтора сахарида. Кроме того, молекула отдельного белка-носителя (CP) может быть связана с более чем одной молекулой сахарида S. pneumoniae серотипа 3, и отдельная молекула сахарида S. pneumoniae серотипа 3 может быть связана с более чем одной отдельной молекулой белка-носителя (CP).

В предпочтительном варианте осуществления, изобретение предлагает гликоконъюгат серотипа 3, содержащий сахарид серотипа 3, ковалентно конъюгированный с белком-носителем (CP) через спейсер, и имеющий общую формулу (VII), где X представляет собой СН₂(СН₂)_n', где n' равен 2 и где X' представляет собой CH₂O(СН₂)_n''-СН₂С=O, где n'' равен 1.

В одном из вариантов осуществления, изобретение предлагает гликоконъюгат серотипа 3, содержащий сахарид серотипа 3, ковалентно конъюгированный с белком-носителем (CP) через спейсер, и имеющий общую формулу (VII), где X представляет собой СН₂(СН₂)_n', где n' выбран из от 1 до 10, и где X' представляет собой CH₂O(СН₂)_n''СН₂С=O, где n'' выбран из от 0 до 10. В одном из вариантов осуществления, n' выбран из от 1 до 5 и n'' выбран из от 0 до 10. В одном из вариантов осуществления, n' выбран из от 1 до 5 и n'' выбран из от 0 до 5. В одном из вариантов осуществления, n' выбран из от 1 до 3 и n'' выбран из от 0 до 3. В одном из вариантов осуществления, n' выбран из от 1 до 2 и n'' выбран из от 0 до 2. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, n' равен 2 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 6 и n'' равен 0. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1 и n'' равен 1. В другом варианте осуществления, n' равен 2 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 6 и n'' равен 1. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1 и n'' равен 2. В другом варианте осуществления, n' равен 2 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 6 и n'' равен 2. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1 и n'' равен 3. В другом варианте осуществления, n' равен 2 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 2 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 6 и n'' равен 3. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1 и n'' равен 4. В другом варианте осуществления, n' равен 2 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 6 и n'' равен 4. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1 и n'' равен 5. В другом варианте осуществления, n' равен 2 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 6 и n'' равен 5. В конкретном варианте осуществления n' равен 1 и n'' равен 6. В другом варианте осуществления, n' равен 2 и n'' равен 6. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3 и n'' равен 6. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4 и n'' равен 6. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5 и n'' равен 6. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 6 и n'' равен 6.

В одном из вариантов осуществления, изобретение предлагает гликоконъюгат серотипа 3, содержащий сахарид серотипа 3, ковалентно конъюгированный с белком-носителем (CP) через спейсер, и имеющий общую формулу (VII), где X представляет собой СН₂(СН₂)_n', где n' выбран из от 1 до 10 и где CH₂O(CH₂CH₂O)_m'(СН₂)_n''СН₂С=O, где n'' выбран из от 0 до 10 и m' выбран из от 0 до 4.

В одном из вариантов осуществления, n' выбран из от 1 до 5, m' выбран из от 0 до 4 и n'' выбран из от 0 до 10. В одном из вариантов осуществления, n' выбран из от 1 до 5, m' выбран из от 0 до 4 и n'' выбран из от 0 до 5. В одном из вариантов осуществления, n' выбран из от 1 до 3, m' выбран из от 0 до 2 и n'' выбран из от 0 до 3. В одном из вариантов осуществления, n' выбран из от 1 до 2, m' выбран из от 0 до 2 и n'' выбран из от 0 до 1.

В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 0 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 1 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 2 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 3 и n'' равен 0.

В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 0 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 1 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m ' равен 2 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 3 и n'' равен 0.

В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 0 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 1 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 2 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 3 и n'' равен 0.

В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 0 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 1 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 2 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 3 и n'' равен 0.

В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 0 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 1 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 2 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 3 и n'' равен 0.

В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 0 и n'' равен 1. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 1 и n'' равен 1. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 2 и n'' равен 1. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 3 и n'' равен 1.

В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 0 и n'' равен 1. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 1 и n'' равен 1. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 2 и n'' равен 1. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 3 и n'' равен 1.

В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 0 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 1 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 2 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 3 и n'' равен 1.

В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 0 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 1 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 2 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 3 и n'' равен 1.

В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 0 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 1 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 2 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 3 и n'' равен 1.

В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 0 и n'' равен 2. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 1 и n'' равен 2. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 2 и n'' равен 2. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 3 и n'' равен 2.

В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 0 и n'' равен 2. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 1 и n'' равен 2. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 2 и n'' равен 2. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 3 и n'' равен 2.

В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 0 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 1 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 2 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 3 и n'' равен 2.

В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 0 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 1 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 2 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 3 и n'' равен 2.

В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 0 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 1 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 2 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 3 и n'' равен 2.

В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 0 и n'' равен 3. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 1 и n'' равен 3. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 2 и n'' равен 3. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 3 и n'' равен 3.

В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 0 и n'' равен 3. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 1 и n'' равен 3. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 2 и n'' равен 3. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 3 и n'' равен 3.

В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 0 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 1 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 2 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 3 и n'' равен 3.

В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 0 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 1 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 2 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 3 и n'' равен 3.

В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 0 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 1 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 2 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 3 и n'' равен 3.

В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 0 и n'' равен 4. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 1 и n'' равен 4. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 2 и n'' равен 4. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 3 и n'' равен 4.

В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 0 и n'' равен 4. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 1 и n'' равен 4. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 2 и n'' равен 4. В другом варианте осуществления n' равен 2, m' равен 3 и n'' равен 4.

В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 0 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 1 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 2 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 3 и n'' равен 4.

В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 0 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 1 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 2 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 3 и n'' равен 4.

В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 0 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 1 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 2 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 3 и n'' равен 4.

В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 0 и n'' равен 5. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 1 и n'' равен 5. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 2 и n'' равен 5. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 3 и n'' равен 5.

В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 0 и n'' равен 5. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 1 и n'' равен 5. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 2 и n'' равен 5. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 3 и n'' равен 5.

В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 0 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 1 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 2 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, m' равен 3 и n'' равен 5.

В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 0 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 1 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 2 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4, m' равен 3 и n'' равен 5.

В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 0 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 1 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 2 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5, m' равен 3 и n'' равен 5.

В одном из вариантов осуществления изобретение предлагает гликоконъюгат серотипа 3, содержащий сахарид серотипа 3, ковалентно конъюгированный с белком-носителем (CP) через спейсер, и имеющий общую формулу (VII), где X представляет собой (СН₂СН₂О)_mCH₂CH₂, где т выбран из от 1 до 4, и где X' представляет собой СН₂О(СН₂)_n''СН₂С=O, где n'' выбран из от 0 до 10. В одном из вариантов осуществления, m выбран из от 1 до 3 и n'' выбран из от 0 до 10. В одном из вариантов осуществления, m выбран из от 1 до 3 и n'' выбран из от 0 до 5. В одном из вариантов осуществления m выбран из от 1 до 2 и n'' выбран из от 0 до 3. В одном из вариантов осуществления, m выбран из от 1 до 2 и n'' выбран из от 0 до 2. В конкретном варианте осуществления, m равен 1 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, m равен 2 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4 и n'' равен 0. В конкретном варианте осуществления, m равен 1 и n'' равен 1. В другом варианте осуществления, m равен 2 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4 и n'' равен 1. В конкретном варианте осуществления, m равен 1 и n'' равен 2. В другом варианте осуществления, m равен 2 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4 и n'' равен 2. В конкретном варианте осуществления, m равен 1 и n'' равен 3. В другом варианте осуществления, m равен 2 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4 и n'' равен 3. В конкретном варианте осуществления, m равен 1 и n'' равен 4. В другом варианте осуществления, m равен 2 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4 и n'' равен 4. В конкретном варианте осуществления, m равен 1 и n'' равен 5. В другом варианте осуществления, m равен 2 и n 11 равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4 и n'' равен 5. В конкретном варианте осуществления, m равен 1 и n'' равен 6. В другом варианте осуществления, m равен 2 и n'' равен 6. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3 и n'' равен 6. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4 и n'' равен 6.

В одном из вариантов осуществления изобретение предлагает гликоконъюгат серотипа 3, содержащий сахарид серотипа 3, ковалентно конъюгированный с белком-носителем (CP) через спейсер и имеющий общую формулу (VII), где X представляет собой (CH₂CH₂O)_mCH₂CH₂, где m выбран из от 1 до 4 и где X' представляет собой CH₂O(CH₂CH₂O)_m'(СН₂)_n''СН₂С=O, где n'' выбран из от 0 до 10 и m' выбран из от 0 до 4.

В одном из вариантов осуществления, m выбран из от 1 до 3, m' выбран из от 0 до 4 и n'' выбран из от 0 до 10. В одном из вариантов осуществления, m выбран из от 1 до 2, m' выбран из от 0 до 4 и n'' выбран из от 0 до 5. В одном из вариантов осуществления, m выбран из от 1 до 2, m' выбран из от 0 до 2 и n'' выбран из от 0 до 3. В одном из вариантов осуществления, m выбран из от 1 до 2, m' выбран из от 0 до 2 и n'' выбран из от 0 до 1.

В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 0 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, m равен 1, m' равен 1 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, m равен 1, m' равен 2 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, m равен 1, m' равен 3 и n'' равен 0.

В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 0 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 1 и n' ' равен 0. В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 2 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 3 и n'' равен 0.

В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 0 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 1 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 2 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 3 и n'' равен 0.

В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 0 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 1 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 2 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 3 и n'' равен 0.

В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 0 и n'' равен 1. В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 1 и n'' равен 1. В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 2 и n'' равен 1. В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 3 и n'' равен 1.

В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 0 и n'' равен 1. В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 1 и n'' равен 1. В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 2. и n'' равен 1. В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 3 и n'' равен 1.

В еще одном варианте осуществления, m равен 3, m' равен 0 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 1 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 2 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 3 и n'' равен 1.

В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 0 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 1 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 2 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 3 и n'' равен 1.

В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 0 и n'' равен 2. В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 1 и n'' равен 2. В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 2 и n'' равен 2. В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 3 и n'' равен 2.

В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 0 и n'' равен 2. В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 1 и n' ' равен 2. В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 2 и n'' равен 2. В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 3 и n'' равен 2.

В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 0 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, m равен

3, m' равен 1 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 2 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 3 и n'' равен 2.

В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 0 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, m равен

4, m' равен 1 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 2 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 3 и n'' равен 2.

В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 0 и n'' равен 3. В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 1 и n'' равен 3. В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 2 и n'' равен 3. В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 3 и n'' равен 3.

В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 0 и n'' равен 3. В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 1 и n'' равен 3. В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 2 и n'' равен 3. В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 3 и n'' равен 3.

В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 0 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 1 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 2 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 3 и n'' равен 3.

В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 0 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 1 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 2 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 3 и n'' равен 3.

В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 0 и n'' равен 4. В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 1 и n'' равен 4. В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 2 и n'' равен 4. В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 3 и n'' равен 4.

В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 0 и n'' равен 4. В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 1 и n'' равен 4. В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 2 и n'' равен 4. В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 3 и n'' равен 4.

В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 0 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 1 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 2 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 3 и n'' равен 4.

В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 0 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 1 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 2 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 3 и n'' равен 4.

В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 0 и n'' равен 5. В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 1 и n'' равен 5. В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 2 и n'' равен 5. В конкретном варианте осуществления, m равен 1, m' равен 3 и n'' равен 5.

В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 0 и n'' равен 5. В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 1 и n'' равен 5. В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 2 и n'' равен 5. В другом варианте осуществления, m равен 2, m' равен 3 и n'' равен 5.

В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 0 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 1 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 2 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 3, m' равен 3 и n'' равен 5.

В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 0 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 1 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 2 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, m равен 4, m' равен 3 и n'' равен 5.

В одном из вариантов осуществления, изобретение предлагает гликоконъюгат серотипа 3, содержащий сахарид серотипа 3, ковалентно конъюгированный с белком-носителем (CP) через спейсер, и имеющий общую формулу (VII), где X представляет собой NHCO(CH₂)_n', где n' выбран из от 1 до 10, и где X' представляет собой СН₂О(СН₂)_n''СН₂С=O, где n'' выбран из от 0 до 10. В одном из вариантов осуществления, n' выбран из от 1 до 5 и n'' выбран из от 0 до 10. В одном из вариантов осуществления, n' выбран из от 1 до 5 и n'' выбран из от 0 до 5. В одном из вариантов осуществления, n' выбран из от 1 до 3 и n'' выбран из от 0 до 3. В одном из вариантов осуществления, n' выбран из от 1 до 2 и n'' выбран из от 0 до 2. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, n' равен 2 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5 и n'' равен 0. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 6 и n'' равен 0. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1 и n'' равен 1. В другом варианте осуществления, n' равен 2 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5 и n'' равен 1. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 6 и n'' равен 1. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1 и n'' равен 2. В другом варианте осуществления, n' равен 2 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5 и n'' равен 2. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 6 и n'' равен 2. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1 и n'' равен 3. В другом варианте осуществления, n' равен 2 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5 и n'' равен 3. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 6 и n'' равен 3. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1 и n'' равен 4. В другом варианте осуществления, n' равен 2 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3, и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5 и n'' равен 4. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 6 и n'' равен 4. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1 и n'' равен 5. В другом варианте осуществления, n' равен 2 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5 и n'' равен 5. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 6 и n'' равен 5. В конкретном варианте осуществления, n' равен 1 и n'' равен 6. В другом варианте осуществления, n' равен 2 и n'' равен 6. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 3 и n'' равен 6. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 4 и n'' равен 6. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 5 и n'' равен 6. В еще одном из вариантов осуществления, n' равен 6 и n'' равен 6.

В одном из вариантов осуществления, изобретение предлагает гликоконъюгат серотипа 3, содержащий сахарид серотипа 3, ковалентно конъюгированный с белком-носителем (CP) через спейсер, и имеющий общую формулу (VII), где X представляет собой NHCO(CH₂)_n', где n' выбран из от 1 до 10, и где X' представляет собой CH₂O(CH₂CH₂O)_m'(СН₂)_n''СН₂С=O, где n'' выбран из от 0 до 10 и m' выбран из от 0 до 4.

В одном из вариантов осуществления, n' выбран из от 1 до 5, m' выбран из от 0 до 4 и n'' выбран из от 0 до 10. В одном из вариантов осуществления, n' выбран из от 1 до 5, m' выбран из от 0 до 4 и n'' выбран из от 0 до 5. В одном из вариантов осуществления, n' выбран из от 1 до 3, m' выбран из от 0 до 2 и n'' выбран из от 0 до 3. В одном из вариантов осуществления, n' выбран из от 1 до 2, m' выбран из от 0 до 2 и n'' выбран из от 0 до 1.

В конкретном варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 0 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 1 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 2 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, n' равен 1, m' равен 3 и n'' равен 0.

В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 0 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 1 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 2 и n'' равен 0. В другом варианте осуществления, n' равен 2, m' равен 3 и n'' равен 0.