СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДЕФОРМИРУЕМОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ Российский патент 2025 года по МПК G01N15/01 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторным методам исследования эритроцитов, и может быть использовано для определения деформируемости эритроцитов и мониторинга этой характеристики с целью получения диагностической информации о состоянии пациента. Способ позволяет получить новые диагностические данные о состоянии эритроцитов, что может быть использовано для улучшения качества оказания медицинской помощи.

Уровень техники

Одним из важнейших свойств эритроцита, обеспечивающего газотранспортную функцию, является его способность к деформации, которая обеспечивается за счет взаимодействия белков мембраны (гликофорины, белок полосы 3) и цитоплазмы (спектрин, анкирин) [Семенович А.А., Переверзев В.А., Зинчук В.В., Короткевич Т.В. Физиология человека: учебное пособие. - Минск: Высшая школа, 2012. - 221 с.].

В настоящее время известны способы измерения деформируемости эритроцитов, которые можно подразделить на прямые и непрямые. К прямым способам можно отнести растягивание эритроцитов лазерным пинцетом (метод оптического пинцета), видеосъемку эритроцитов, деформированных в сдвиговом потоке силами вязкого трения (реоскопия), метод атомно-силовой микроскопии и метод лазерной дифрактометрии (эктацитометрии). Среди косвенных способов можно выделить способ втягивания эритроцитов в микропипетку (микроаспираторный метод) и способ, основанный на пропускании суспензии эритроцитов через искусственный капилляр малого диаметра или продавливание заданного объема суспензии через микропористый фильтр [Kim J., Lee H.Y., Shin S. Advances in the measurement of red blood cell deformability: A brief review // Journal of Cellular Biotechnology. - 2015. - Vol. 1, N 1. - P. 63-79.; RU 2173461].

Однако прямые методы оценки деформируемости эритроцитов являются сложными, связаны с необходимостью использования сложного и дорогостоящего оборудования, например лазерно-оптического ротационного анализатора эритроцитов LoRRca MaxSis (Mechatronics, Нидерланды), автоматизированного цитометра RheoScan-D300 (RheoMeditech Inc., Южная Корея). Косвенные методы оценки деформируемости эритроцитов характеризуются сложностью интерпретации получаемых данных и выявления их связи с деформацией конкретных клеточных структур, зависимостью получаемых данных от объема клетки, ее формы и распределения эритроцитов по размерам.

Из уровня техники известен способ определения показателя деформируемости эритроцитов (RU 2173461), основанный на определении отношения диаметра пятна 60-процентной суспензии отмытых эритроцитов к диаметру пятна физиологического раствора после их нанесения на обеззоленный бумажный фильтр. При этом показатель деформируемости эритроцитов (Z) рассчитывают по формуле

,

где Д_эр - диаметр пятна суспензии эритроцитов, ШПК_эр - ширина периферического кольца суспензии эритроцитов, представленного незначительным количеством наиболее деформированных эритроцитов, Д_фр - диаметр пятна физиологического раствора.

Данный способ позволяет определять показатель деформируемости эритроцитов непосредственно в их суспензии. Однако при реализации известного способа выделяют только основную группу эритроцитов и небольшую группу эритроцитов с высокой деформируемостью без визуального контроля деформируемости отдельных эритроцитов во всей популяции. Кроме того, в известном способе анализу подвергают отмытые эритроциты, что увеличивает сложность и время пробоподготовки. Кроме того, отсутствие визуального контроля изменения морфологии эритроцитов не позволяет выявлять патологические клетки (например, эритроциты с разрушенной оболочкой). Известно, что при колоректальном раке по мере утяжеления заболевания у больных отмечают увеличение полиморфизма клеток красной крови: преобладающими в терминальных стадиях являются деструктивные формы эритроцитов с выраженными явлениями анизо-, пойкилоцитоза и анизохромии. Кроме того, у пациентов с колоректальным раком по мере нарастания тяжести заболевания отмечают нарастание показателей жесткости и деструкции, снижение показателя деформируемости эритроцитов [Кручинина М.В., Стариков А.В., Громов А.А., Генералов В.М. Взаимосвязь электрических и вязкоупругих показателей эритроцитов с биохимическими параметрами у пациентов с различными стадиями колоректального рака // Терапия. - 2016. - №3. - Статья 33291]. Также известно, что увеличение жесткости мембраны эритроцитов происходит в условиях их длительного хранения (до 42 суток, 4 °C, CPD/SAGM) [Сергунова В.А., Кузовлев А.Н., Онуфриевич А.Д., Иноземцев В.А., Гудкова О.Е., Шерстюкова Е.А. Конформационные нарушения мембран эритроцитов в процессе длительного хранения эритроцитной взвеси // Гематология и трансфузиология. - 2022. - Т. 67, №2. - С. 181-192.]. В связи с чем, актуальным является определение показателя деформируемости эритроцитов с оценкой изменения морфологии эритроцитов, по которому в совокупности с другими показателями можно судить о состоянии пациента.

Наиболее близким к заявленному изобретению является способ определения деформируемости эритроцитов [Евсеев А.К., Колесникова А.И., Горончаровская И.В., Трусова Е.В., Костин А. И., Шабанов А.К., Гольдин М.М., Петриков С.С. Использование оптически прозрачных электродов для оценки качества эритроцитов при их хранении // Цитология. - 2021. - Т. 63, №5. - С. 500-508.], включающий воздействие на эритроциты, находящиеся на поверхности оптически прозрачного электрода, постоянным током в потенциодинамическом режиме со скоростью 10 мВ/с в диапазоне потенциалов от -500 мВ до +1400 мВ с одновременной записью изменения морфологии эритроцитов в реальном времени с помощью CCD камеры, подключенной к инвертированному микроскопу, при этом проводили подсчет морфологических форм эритроцитов в разные сроки хранения эритроцитарной взвеси при стационарном потенциале и значениях потенциала -0,5 и 1,2 В и определяли деформируемость эритроцитов фильтрационным методом, представленным в RU 2173461.

Однако в известном способе деформируемость эритроцитов определяют фильтрационным методом, который, как это уже было указано выше, обладает рядом недостатков, при этом в способе-прототипе указано, что показатель деформируемости, определенный фильтрационным методом, снизился на 5% - с 38,34 ± 0,42 отн. ед. (1 сут) до 37,15 ± 0,76 отн. ед. (42 сут)., тогда как доля сфероэхиноцитов, выявленных в результате электрохимического воздействия при -0,5 В, снизилась с 99,6 ± 0,40 % (1 сут) до 42,80 ± 14,49 (42 сут), т.е. более чем на 50%, при этом данный факт не нашел отражения при формировании выводов при определении значения показателя деформируемости эритроцитов; количественные данные представлены только процентным изменением отдельных морфологических форм эритроцитов, что осложняет анализ полученных результатов.

Технической проблемой, решаемой заявленным изобретением, является разработка простого способа оценки показателя деформируемости эритроцитов, устраняющего недостатки аналогов, основанного на оценке изменения морфологии эритроцитов с количественным определением дискоцитов, эхиноцитов I, эхиноцитов II, эхиноцитов III, сфероэхиноцитов I, сфероэхиноцитов II и эритроцитов с разрушенной оболочкой.

Раскрытие сущности изобретения

Техническим результатом, достигаемым при использовании изобретения, является повышение чувствительности способа за счет комплексной оценки общего показателя деформируемости эритроцитов и морфологического статуса отдельных эритроцитов различных эритроцитсодержащих сред, включая свежесобранную кровь, донорскую кровь и эритроцитсодержащие компоненты донорской крови, при этом помимо подсчета основных морфологических форм эритроцитов (дискоцитов, эхиноцитов, сфероэхиноцитов) определяют количество эритроцитов, разрушенных при воздействии постоянным током в потенциодинамическом режиме со скоростью 10 мВ/с от значения бестокового потенциала до минус 600 мВ относительно электрода сравнения, которые учитывают при определении показателя деформируемости эритроцитов и оценке их состояния.

Заявленный способ может найти применение при оценке качества эритроцитов (структурной и функциональной полноценности через параметр их деформируемости) при их хранении для последующей трансфузии, а также для выявления различных патологий, ассоциированных с деформируемостью эритроцитов.

Технический результат достигается способом определения деформируемости эритроцитов, включающий отбор образца цельной крови (венозной или артериальной), или донорской крови, или эритроцитсодержащих компонентов донорской крови (например, в соответствии с Постановлением Правительства РФ от 22 июня 2019 г. N 797 "Об утверждении Правил заготовки, хранения, транспортировки и клинического использования донорской крови и ее компонентов»), смешение отобранного образца с физиологическим раствором в объемном соотношении 1:1000 с получением суспензии, содержащей в поле зрения микроскопа не менее 25 клеток (эритроцитов), например, от 25 до 100 клеток, которую размещают в электрохимической микроячейке, снабженной оптически прозрачным рабочим электродом, вспомогательным электродом и электродом сравнения, с последующим воздействием на суспензию, содержащую эритроциты, постоянным током в потенциодинамическом режиме со скоростью 10 мВ/с от значения бестокового потенциала, соответствующего потенциалу разомкнутой цепи (который составляет примерно от 140 мВ до 180 мВ) до минус 600 мВ относительно электрода сравнения с видеозаписью изменения морфологии эритроцитов, после чего по результатам сравнения изображений эритроцитов, полученных в начальный момент времени при бестоковом потенциале и при достижении значения потенциала минус 600 мВ, определяют количество дискоцитов, эхиноцитов I, эхиноцитов II, эхиноцитов III, сфероэхиноцитов I, сфероэхиноцитов II, и эритроцитов с разрушенной оболочкой с последующим определением показателя деформируемости (ПД), %, с учетом доли патологических клеток (ПК) эритроцитов по формулам:

(I),

(II),

где I_исхi - индекс морфологии эритроцитов в отсутствие электрохимического воздействия при бестоковом потенциале;

n_i - количество клеток, соответствующих индексу морфологии I_исхi;

N_i - общее количество клеток в поле зрения в отсутствие электрохимического воздействия при бестоковом потенциале;

I_конj - индекс морфологии эритроцитов при электрохимическом воздействии при величине потенциала -600 мВ;

n_j - количество клеток, соответствующих индексу морфологии I_конj;

N_j - общее количество клеток в поле зрения в условиях электрохимического воздействия при величине потенциала -600 мВ;

n_p - количество эритроцитов с разрушенной оболочкой при электрохимическом воздействии при величине потенциала -600 мВ;

при этом значения I_исхi и I_конj для дискоцитов определяют равным 1,0, для эхиноцитов I равным 0,8, для эхиноцитов II равным 0,6, для эхиноцитов III равным 0,4, для сфероэхиноцитов I равным 0,2, для сфероэхиноцитов II равным 0,0, для эритроцитов с разрушенной оболочкой индекс морфологии не используют,

и при получении значений ПД ≥ 80% и ПК<0,0003 - делают вывод о нормальном состоянии эритроцитов, при получении значения 60% ≤ ПД < 80% и ПК<0,008 - о субкомпенсированном состоянии эритроцитов, при получении значения ПД < 60% и ПК ≥ 0,008 - о патологическом состоянии эритроцитов.

Заявленным способом возможна оценка деформируемости эритроцитов как в образцах эритроцитсодержащих компонентов крови, так и в цельной крови, что расширяет область применения изобретения, при этом способ является простым в исполнении - не требует дополнительного этапа, связанного с пробоподготовкой, и дорогостоящего оборудования для подсчета количества клеток до воздействия и после воздействия. С целью повышения точности измерения в заявленном изобретении по сравнению с прототипом оценку изменения морфологии эритроцитов осуществляют посредством количественного определения дискоцитов, эхиноцитов I, эхиноцитов II, эхиноцитов III, сфероэхиноцитов I, сфероэхиноцитов II и эритроцитов с разрушенной оболочкой, при этом диапазон потенциодинамического режима увеличен в катодной области до минус 600 мВ (относительно хлоридсеребряного электрода сравнения (3,0 М KCl)), что увеличивает время нахождения эритроцитов в диапазоне потенциалов, соответствующих глубокому изменению морфологии.

Краткое описание чертежей

Изобретение поясняется чертежами, где на фиг. 1-3 представлены изображения эритроцитов по Примерам 1-3 (Таблицы 1-3), при этом на изображениях А представлено состояние эритроцитов в отсутствие электрохимического воздействия, Б - состояние эритроцитов при электрохимическом воздействии, окружностью на изображениях А и Б фиг. 3 выделен эритроцит, разрушенный при электрохимическом воздействии. Изображения сделаны с помощью инвертированного микроскопа Eclipse TS100, объектив CFI S Plan Fluor ELWD 60×/0.70, цифровая камера DS-Fi1 (Nikon, Япония)

Осуществление изобретения

Способ осуществляют следующим образом.

Цельную венозную или артериальную кровь, заготовленную на антикоагулянте, или донорскую кровь, или эритроцитсодержащие компоненты донорской крови (Постановление Правительства РФ от 22 июня 2019 г. N 797 "Об утверждении Правил заготовки, хранения, транспортировки и клинического использования донорской крови и ее компонентов и о признании утратившими силу некоторых актов Правительства Российской Федерации"), в объеме 0,01 мл вносят в 10 мл физиологического раствора. Электрохимическую микроячейку, содержащую оптически прозрачный рабочий электрод, представляющий собой стекло, покрытое оксидами индия и олова (ITO), платиновый вспомогательный электрод и серебряную проволоку, покрытую хлоридом серебра, в качестве электрода сравнения, закрепленную на предметном столике инвертированного микроскопа, заполняют анализируемой суспензией в объеме, например, 0,1-0,3 мл, с обеспечением покрытия суспензией всей поверхности рабочего электрода, и через 10 минут с помощью потенциостата осуществляют развертку потенциала рабочего электрода в потенциодинамическом режиме со скоростью 10 мВ/с от бестокового значения потенциала до -600 мВ относительно хлоридсеребряного электрода сравнения (3,0 М KCl)) с одновременной видеозаписью изменения морфологии эритроцитов с помощью CCD камеры, подключенной к инвертированному микроскопу. После окончания записи проводят анализ морфологических форм эритроцитов при бестоковом значении потенциала и величине потенциала -600 мВ относительно хлоридсеребряного электрода сравнения (3,0 М KCl) и рассчитывают показатель деформируемости эритроцитов. Измерения могут быть сделаны с использованием установки, подробное описание которой представлено в статье (Евсеев А.К., Колесникова А.И., Горончаровская И.В., Трусова Е.В., Костин А. И., Шабанов А.К., Гольдин М.М., Петриков С.С. Использование оптически прозрачных электродов для оценки качества эритроцитов при их хранении // Цитология. - 2021. - Т. 63, №5. - С. 500-508).

При определении значения индекса морфологии эритроцитов (I) могут быть использованы известные классификаторы [Bessis M. Red Cell Shapes. An Illustrated Classification and its Rationale. In: Bessis M., Weed R.I., Leblond P.F. (Eds.) Red Cell Shape. - Berlin: Springer, 1973. - P. 1-25.; 9. Usry R.T., Moore G.D., Manalo F.W. Morphology of Stored, Rejuvenated Human Erythrocytes // Vox sanguinis. - 1975. - Vol. 28, N 3. - P. 176-183. 8, 9]. При этом диагностически и прогностически значимым является определение количества следующих морфологических типов эритроцитов, которым присваивают определенные значения - коэффициенты, отражающие диагностическую/прогностическую значимость при определении показателя деформируемости, при этом, чем больше значение коэффициента, тем большей деформируемостью характеризуются эритроциты: дискоцит (1,0), эхиноцит I (0,8), эхиноцит II (0,6), эхиноцит III (0,4), сфероэхиноцит I (0,2), сфероэхиноцит II (0,0). Дополнительно определяют долю клеток, разрушенных при электрохимическом воздействии.

Показатель деформируемости эритроцитов (ПД), измеряемый в процентах, с учетом доли разрушенных клеток (ПК) определяют по формулам (I) и (II).

Полученные выводы согласуются с опубликованными данными, характеризующими нормальное, субкомпенсированное и патологическое состояние клеток (см. например, Орлов Ю.П. Внутрисосудистый гемолиз эритроцитов в развитии органных дисфункций при критических состояниях // Общая реаниматология. - 2008. - Т. 4, №2. - С. 88-93; Постановление правительства РФ от 22 июня 2019 г. N 797; Чумакова С.П., Уразова О.И., Новицкий В.В., Шипулин В.М., Мальцева И.В., Хохлов О.А., Емельянова Т.В., Юрлова О.В. Факторы внутрисосудистого гемолиза у кардиохирургических больных после операций с искусственным кровообращением // Вестник РАМН. - 2012. - №7. - С. 15-19).

Предлагаемый способ позволяет проводить количественную оценку деформируемости эритроцитов, деформируемости отдельных клеток в небольшом объеме биологической среды (0,01 мл), взятой у пациента для исследования - цельной венозной крови или эритроцитарной взвеси.

Пример 1

Образец крови практически здорового донора-добровольца, заготовленной на антикоагулянте ЭДТА, в объеме 0,01 мл вносили в 10 мл физиологического раствора. Электрохимическую микроячейку заполняли 0,3 мл анализируемой суспензии и через 10 минут, с обеспечением в поле зрения объектива CFI S Plan Fluor ELWD 60x/0.70 (Nikon) от 25 до 100 клеток, с помощью потенциостата IPC-Pro L (ЗАО «Кронас») проводили развертку потенциала рабочего электрода в потенциодинамическом режиме со скоростью 10 мВ/с от бестокового значения потенциала (примерно 150 мВ) до -600 мВ (относительно хлоридсеребряного электрода сравнения (3,0 М KCl)) с одновременной видеозаписью изменения морфологии эритроцитов с помощью CCD камеры DS-Fi1 (Nikon), подключенной к инвертированному микроскопу Eclipse TS100 (Nikon). Индекс морфологии оценивали при бестоковом значении потенциала и величине потенциала -600 мВ (относительно хлоридсеребряного электрода сравнения (3,0 М KCl)).

Значения измеренных параметров представлены в Таблице 1.

Показатель деформируемости, определенный по предлагаемому способу составил

.

Сделан вывод о нормальном состоянии эритроцитов.

В Таблице 1 приведены значения индекса морфологии эритроцитов при бестоковом значении потенциала и величине потенциала -600 мВ (относительно хлоридсеребряного электрода сравнения (3,0 М KCl)), а на Фигуре 1 - фотографии исследуемого образца. В пробе в отсутствие электрохимического воздействия эритроциты представлены в основной массе дискоцитами и эхиноцитами I, а также незначительным количеством эхиноцитов II и III, что не является отклонением от нормы. При электрохимическом воздействии при потенциале -600 мВ (относительно хлоридсеребряного электрода сравнения (3,0 М KCl)) наблюдали переход всех эритроцитов сфероэхиноциты II.

Таблица 1. Показатели деформируемости эритроцитов практически здорового человека.

Индекс морфологии эритроцита в отсутствие электрохимического воздействия Индекс морфологии эритроцита при электрохимическом воздействии 1,0 - 61 клетка
0,8 - 22 клетки
0,6 - 4 клетки
0,4 - 2 клетки
0,2 - 0 клеток
0,0 - 0 клеток 1,0 - 0 клеток
0,8 - 0 клеток
0,6 - 0 клеток
0,4 - 0 клеток
0,2 - 0 клеток
0,0 - 90 клеток

Пример 2

Пациент 1, 42 года. Диагноз: открытый перелом нижней трети левой бедренной кости; открытый перелом левой малоберцовой кости; обширная рвано-ушибленная рана левой голени, бедра; ушибленная рана правой локтевой области; перелом крыла подвздошной кости слева; ушиблено-рваные раны с дефектом мягких тканей левого бедра, голени; ушибленная рана левой стопы; ушибленная рана правой локтевой области.

Образец крови, заготовленной на антикоагулянте ЭДТА, в объеме 0,01 мл вносили в 10 мл физиологического раствора. Электрохимическую микроячейку заполняли 0,3 мл анализируемой суспенизии и через 10 минут, с обеспечением в поле зрения объектива CFI S Plan Fluor ELWD 60x/0.70 (Nikon) от 25 до 100 клеток, с помощью потенциостата IPC-Pro L (ЗАО «Кронас») проводили развертку потенциала рабочего электрода в потенциодинамическом режиме со скоростью 10 мВ/с от бестокового значения потенциала (примерно 180 мВ) до -600 мВ (относительно хлоридсеребряного электрода сравнения (3,0 М KCl)) с одновременной видеозаписью изменения морфологии эритроцитов с помощью CCD камеры DS-Fi1 (Nikon), подключенной к инвертированному микроскопу Eclipse TS100 (Nikon). Индекс морфологии оценивали при бестоковом значении потенциала и величине потенциала -600 мВ (относительно хлоридсеребряного электрода сравнения (3,0 М KCl)).

Значения измеренных параметров представлены в Таблице 2.

Показатель деформируемости эритроцитов, определенный по предлагаемому способу составил

.

Сделан вывод о субкомпенсированном состоянии.

В Таблице 2 приведены значения индекса морфологии эритроцитов при бестоковом значении потенциала и величине потенциала -600 мВ (относительно хлоридсеребряного электрода сравнения (3,0 М KCl)), а на Фигуре 2 - фотографии исследуемого образца. В пробе в отсутствие электрохимического воздействия эритроциты представлены в основной массе эхиноцитами I и II. При электрохимическом воздействии при потенциале -600 мВ (относительно хлоридсеребряного электрода сравнения (3,0 М KCl)) наблюдали переход эритроцитов преимущественно в сфероэхиноциты II.

Таблица 2. Показатели деформируемости эритроцитов пациента 1.

Индекс морфологии эритроцита в отсутствие электрохимического воздействия Индекс морфологии эритроцита при электрохимическом воздействии 1,0 - 8 клетка
0,8 - 19 клетки
0,6 - 29 клетки
0,4 - 2 клетки
0,2 - 1 клеток
0,0 - 0 клеток 1,0 - 0 клеток
0,8 - 0 клеток
0,6 - 0 клеток
0,4 - 0 клеток
0,2 - 8 клеток
0,0 - 78 клеток

Пример 3

Пациент 2, 70 лет. Диагноз: укус змеи в область 2-го пальца правой руки. Уровень свободного гемоглобина в крови при поступлении составлял 3,00 мг/мл Образец крови, заготовленной на антикоагулянте гепарин лития, в объеме 0,01 мл вносили в 10 мл физиологического раствора.

Электрохимическую микроячейку заполняли 0,3 мл суспензии эритроцитов и через 10 минут, с обеспечением в поле зрения объектива CFI S Plan Fluor ELWD 60x/0.70 (Nikon) от 25 до 100 клеток, с помощью потенциостата IPC-Pro L (ЗАО «Кронас») проводили развертку потенциала рабочего электрода в потенциодинамическом режиме со скоростью 10 мВ/с от бестокового значения потенциала (примерно 140 мВ) до -600 мВ (относительно хлоридсеребряного электрода сравнения (3,0 М KCl)) с одновременной видеозаписью изменения морфологии эритроцитов с помощью CCD камеры DS-Fi1 (Nikon), подключенной к инвертированному микроскопу Eclipse TS100 (Nikon). Индекс морфологии оценивали при бестоковом значении потенциала и величине потенциала -600 мВ (относительно хлоридсеребряного электрода сравнения (3,0 М KCl)).

Значения измеренных параметров представлены в Таблице 3.

Показатель деформируемости эритроцитов с учетом доли разрушенных эритроцитов, определенный по предлагаемому способу составил:

.

Сделан вывод о патологическом состоянии эритроцитов.

В Таблице 3 приведены значения индекса морфологии эритроцитов при бестоковом значении потенциала и величине потенциала -600 мВ (относительно хлоридсеребряного электрода сравнения (3,0 М KCl)), а на Фигуре 3 - фотографии исследуемого образца. В пробе в отсутствие электрохимического воздействия эритроциты представлены в основной массе эхиноцитами III. При электрохимическом воздействии при потенциале -600 мВ (относительно хлоридсеребряного электрода сравнения (3,0 М KCl)) наблюдали переход эритроцитов в сфероэхиноциты I и II. При этом одна из клеток (2% от общего количества), дифференцируемая в исходной пробе как сфероэхиноцит II, разрушилась при электрохимическом воздействии.

Таблица 3. Показатели деформируемости эритроцитов пациента 2.

Индекс морфологии эритроцита в отсутствие электрохимического воздействия Индекс морфологии эритроцита при электрохимическом воздействии 1,0 - 0 клеток
0,8 - 0 клеток
0,6 - 5 клеток
0,4 - 39 клеток
0,2 - 7 клеток
0,0 - 2 клетки 1,0 - 0 клеток
0,8 - 0 клеток
0,6 - 0 клеток
0,4 - 0 клеток
0,2 - 4 клетки
0,0 - 55 клеток

Таким образом, получаемые данные позволяют оценить деформируемость эритроцитов человека, что может быть использовано для диагностики нарушений функции эритроцитов. При этом на основании определенного по заявленному способу показателя деформируемости ПД может быть сделан вывод о состоянии эритроцитов.

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторным методам исследования эритроцитов, и может быть использовано для определения деформируемости эритроцитов и мониторинга этой характеристики с целью получения диагностической информации о состоянии пациента. Способ определения деформируемости эритроцитов включает отбор образца цельной крови, или донорской крови, или эритроцитсодержащих компонентов донорской крови. Смешение отобранного образца с физиологическим раствором в объемном соотношении 1:1000 с получением суспензии, содержащей в поле зрения микроскопа не менее 25 клеток, которую размещают в электрохимической микроячейке, снабженной оптически прозрачным рабочим электродом, вспомогательным электродом и электродом сравнения. С последующим воздействием на суспензию, содержащую эритроциты, постоянным током в потенциодинамическом режиме со скоростью 10 мВ/с от значения бестокового потенциала, соответствующего потенциалу разомкнутой цепи до минус 600 мВ относительно электрода сравнения с видеозаписью изменения морфологии эритроцитов. По результатам сравнения изображений эритроцитов, полученных в начальный момент времени при бестоковом потенциале и при достижении значения потенциала минус 600 мВ, определяют количество дискоцитов, эхиноцитов I, эхиноцитов II, эхиноцитов III, сфероэхиноцитов I, сфероэхиноцитов II и эритроцитов с разрушенной оболочкой с последующим определением показателя деформируемости (ПД), %, с учетом доли патологических клеток (ПК) эритроцитов. При получении значений ПД ≥ 80% и ПК не более 0,0003 - делают вывод о нормальном состоянии эритроцитов, при получении значения 60% ≤ ПД < 80% и ПК не более 0,008 - о субкомпенсированном состоянии эритроцитов, при получении значения ПД < 60% и ПК ≥ 0,008 - о патологическом состоянии эритроцитов. Техническим результатом является повышение чувствительности способа. 3 ил, 3 табл.

Способ определения деформируемости эритроцитов, включающий отбор образца цельной крови, или донорской крови, или эритроцитсодержащих компонентов донорской крови, смешение отобранного образца с физиологическим раствором в объемном соотношении 1:1000 с получением суспензии, содержащей в поле зрения микроскопа не менее 25 клеток, которую размещают в электрохимической микроячейке, снабженной оптически прозрачным рабочим электродом, вспомогательным электродом и электродом сравнения, с последующим воздействием на суспензию, содержащую эритроциты, постоянным током в потенциодинамическом режиме со скоростью 10 мВ/с от значения бестокового потенциала, соответствующего потенциалу разомкнутой цепи до минус 600 мВ относительно электрода сравнения с видеозаписью изменения морфологии эритроцитов, после чего по результатам сравнения изображений эритроцитов, полученных в начальный момент времени при бестоковом потенциале и при достижении значения потенциала минус 600мВ, определяют количество дискоцитов, эхиноцитов I, эхиноцитов II, эхиноцитов III, сфероэхиноцитов I, сфероэхиноцитов II, и эритроцитов с разрушенной оболочкой с последующим определением показателя деформируемости (ПД), %, с учетом доли патологических клеток (ПК) эритроцитов по формулам:

где I_исхi – индекс морфологии эритроцитов в отсутствие электрохимического воздействия при бестоковом потенциале;

n_i – количество клеток, соответствующих индексу морфологии I_исхi;

N_i – общее количество клеток в поле зрения в отсутствие электрохимического воздействия при бестоковом потенциале;

I_конj – индекс морфологии эритроцитов при электрохимическом воздействии при величине потенциала -600 мВ;

n_j – количество клеток, соответствующих индексу морфологии I_конj;

N_j – общее количество клеток в поле зрения в условиях электрохимического воздействия при величине потенциала -600 мВ;

n_p – количество эритроцитов с разрушенной оболочкой при электрохимическом воздействии при величине потенциала -600 мВ;

при этом значения I_исхi и I_конj для дискоцитов определяют равным 1,0, для эхиноцитов I равным 0,8, для эхиноцитов II равным 0,6, для эхиноцитов III равным 0,4, для сфероэхиноцитов I равным 0,2, для сфероэхиноцитов II равным 0,0, для эритроцитов с разрушенной оболочкой индекс морфологии не используют,

и при получении значений ПД ≥ 80% и ПК не более 0,0003 делают вывод о нормальном состоянии эритроцитов, при получении значения 60% ≤ ПД < 80% и ПК не более 0,008 – о субкомпенсированном состоянии эритроцитов, при получении значения ПД < 60% и ПК ≥ 0,008 – о патологическом состоянии эритроцитов.