Способ снижения заболеваемости ризоктониозом и повышения качества урожая картофеля Российский патент 2025 года по МПК C12N1/14 

Изобретение относится к области биотехнологии, к области сельского хозяйства и может найти применение в технологии возделывания как семенного, так и продовольственного картофеля.

Картофель Solanium tuberosum L. является одной из основных сельскохозяйственных культур. Важнейшими лимитирующими факторами для формирования урожая картофеля являются болезни и вредители.

Среди комплекса болезней картофеля стабильное негативное влияние на формирование урожая на протяжении всего периода вегетации оказывает ризоктониоз (возбудитель - Rchizoctonia solani Kühn). Распространение возбудителя ризоктониоза происходит преимущественно за счет зараженного семенного материала. В связи с этим важно не допустить развитие патогена, сконцентрированного на посевных клубнях. Среди вредителей картофеля наиболее опасными являются личинки жуков щелкунов и колорадский жук (Leptinotarsa decemlineata Say.), вызывающие снижение урожайности до 50% и более.

Перспективным направлением в защите картофеля является использование препаратов на основе микроорганизмов, обладающих полифункциональным действием. Они стимулируют рост и развитие растений, их устойчивость к абиотическим стрессам и вредным организмам. Чаще всего для расширения спектра или обеспечения полифункционального действия разработчики биопрепаратов предлагают использовать баковые смеси пропагул или культуральных жидкостей микроорганизмов, а также компонентов, усиливающих эффективность средства.

Известна микробная композиция для борьбы с личинками жуков-щелкунов [Патент RU №2311768 опубл. 10.12.2007], включающая равнообъемную смесь маточных культур энтомопатогенных грибов Beauveria bassiana F-65, Metarhizium anisopliae var. anisopliae F-596, а также кормовой лизин и янтарную кислоту. Для контроля численности вредителей применяют трехкомпонентный биологический инсектицид «Биостоп. Ж». В его основе живые клетки Bacillus thuringiensis (штамм Hi), Streptomyces sp. (штамм 3NN) и Beauveria bassiana (штамм ВВ1) [2]. Однако разработчиками этих средств не исследован потенциал данных микроорганизмов в отношении ростостимуляции растений и защиты от фитопатогенов.

Известны полифункциональные средства на основе смесей бактериальных штаммов, стимулирующих рост и адаптивность растений, а также защищающих их от поражения фитопатогенами. Например, предложена смесь бактерий Bacillus subtilis штамм DSM 24613 (ВКПМ В-10641), Bacillus amyloliquefaciens штамм DSM 24614 (ВКПМ В-10642) и Bacillus amyloliquefaciens штамм DSM 24615 (ВКПМ В-10643) в равном процентном соотношении [Патент RU №2729388 опубл. 06.08.2020]. Однако нет данных о инсектицидной активности указанных штаммов.

Известно полифункциональное средство для микробиологической защиты растений, включающее смесь культуральных жидкостей Trichoderma viride, Azotobacter chroococcum, Bacillus megaterium, Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae [Патент RU №2539025 опубл. 10.01.2015]. С использованием указанного средства предложен способ микробиологической защиты растений, одновременно повышающих устойчивость к бактериальным, грибным и вирусным болезням и стрессовым факторам, защищающих от вредителей, улучшающих плодородие почвы и процесс питания растений. Однако для достижения желаемого эффекта заявляемую смесь необходимо применять 2-3- кратно в период вегетации.

Кроме того, все многокомпонентные смеси характеризуются сложностью изготовления, использования и контроля качества. При взаимодействии микроорганизмов в смеси возможны различные эффекты от синергизма до антагонизма. Недостатком многокомпонентных препаратов является необходимость использования нескольких микроорганизмов одновременно, что значительно повышает материальные, энергетические и другие затраты для производства препарата.

Поэтому в качестве альтернативы рассматриваются однокомпонентные микробиологические препараты, основой которых является штамм микроорганизма-продуцента, обладающего комплексным действием: положительным для растения, и негативным в отношении болезней и вредителей. Так, например, предложен рекомбинантный штамм бактерий Bacillus subtilis 26ДСryChS с комплексной биологической активностью [Патент RU 2733132 опубл. 29.09.2020]. Он может применяться в растениеводстве для стимуляции роста растений, мобилизации фосфатов, также штамм обладает высокой инсектицидной и антагонистической активностью. Однако данный штамм исследован лишь в лабораторных условиях, что не гарантирует высокого эффекта в поле.

Наиболее близким аналогом по технической сущности и совокупности существенных признаков является способ обработки клубней картофеля биопрепаратом на основе штамма IC 1530-25-1 гриба Beauveria bassiana [Патент RU №2704859 опубл. 31.10.2019]. Препарат предложен для стимуляции роста картофеля и защиты его от колорадского жука и ризоктониоза. Однако, для обработки клубней картофеля авторы рекомендуют суспензию с очень низким титром (10⁵ КОЕ/мл), что не может обеспечить защитного эффекта даже при использовании высоко активных штаммов микроорганизмов. Вероятно эффект был обеспечен многократностью обработок. Данный препарат выбран в качестве прототипа.

Кроме того, в сравнении с B. bassiana предлагаемый нами Metarhizium robertsii более адаптирован к почвенной среде именно агроландшафтов [7], легко колонизирует ризосферу картофеля [8], более термотолерантен и устойчив к флуктуациям температур [9,10]. Соответственно M. robertsii более перспективен в сравнении с B. bassiana в условиях континентального климата и рискованного земледелия. Нами показано, что M. robertsii проявляет более высокую антагонистическую активность к фитопатогенам по сравнению с B. bassiana [11], в частности угнетает рост воздушного мицелия, снижает жизнеспособность и размеры склероциев R. solani, сформированных на клубнях [12].

Техническая задача состоит в снижении заболеваемости ризоктониозом и повышении качества урожая картофеля, в том числе увеличение урожайности картофеля, при минимальной обработке однокомпонентным биопрепаратом, обладающим полифункциональным пролонгированным действием.

Техническим результатом заявляемого изобретения является расширение ассортимента способов снижения заболеваемости ризоктониозом и повышения качества урожая картофеля.

Указанный технический результат достигается созданием способа снижения заболеваемости ризоктониозом и повышения качества урожая картофеля, включающего однократную предпосадочную обработку семенных клубней картофеля полифункциональным биопрепаратом в жидкой форме путем опрыскивания, причем при предпосадочной обработке семенных клубней картофеля в качестве жидкой формы полифункционального биопрепарата используют водную суспензию бластоспор энтомопатогенного гриба штамм Metarhizium robertsii МВ-1 ВКМ F5018D с титром 5×10⁷ КОЕ/мл из расчета 12 л на 1 тонну семенных клубней картофеля.

Сущность изобретения

Микроорганизм Metarhizium robertsii штамм МВ-1 депонирован Всероссийской коллекцией микроорганизмов ИБФМ им. Г.К. Скрябина РАН под номером ВКМ F5018D.

Проведенные двухлетние производственные испытания экспериментального прототипа препарата на основе конидий M. robertsii в борьбе с ризоктониозом продемонстрировали его способность существенно повышать параметры элементов структуры урожая картофеля, сдерживать развитие ризоктониоза в период вегетации. Уровень рентабельности производства картофеля с использованием энтомопатогенного гриба M. robertsii возрос до 92% (при 50% в контроле) за счет увеличения валового урожая и повышения качества товарной продукции [13]. Таким образом, энтомопатогенный гриб Metarhizium robertsii обладает помимо инсектицицидного, фунгицидным/антагонистическим и ростостимулирующим действием.

Однако твердофазное производство конидиальных препаратов Metarhizium трудозатратно и слабо реализуемо в большинстве биотехнологических фирм, в тоже время бластоспоры Metarhizium успешно культивируются глубинным способом [Патент WO2017200563A1 опубл. 23.11.2017]. В предложенном способе использовали биопрепарат на основе бластоспор гриба M. robertsii, получаемых при глубинном культивировании.

Примеры реализации изобретения.

Пример 1. Влияние предпосадочной обработки клубней водной суспензией бластоспор Metarhizium robertsii на ростовые и физиологические показатели растений картофеля в лабораторных условиях.

Обработку клубней перед посадкой осуществляли путем опрыскивания суспензией бластоспор гриба M. robertsii (штамм МВ-1, титр - 5×10⁷ КОЕ/мл). Растения картофеля (сорт Ред Скарлет) выращивали в универсальном почвогрунте (Terra Vita) без стерилизации (стабильные условия по уровню освещения, температуре и увлажнению). Каждое растение содержали в изолированном сосуде объемом 1 л и учитывали как самостоятельную повторность (20 повторностей на вариант). В конце эксперимента (30 суток после посадки) проводили замеры ростовых параметров (линейные размеры осевых органов, сырая и сухая масса надземных и подземных органов, количество стеблей и столонов), а также подготовку образцов для оценки физиологических/биохимических показателей. Содержание пигментов (каротиноидов и хлорофиллов) определяли в ацетоново-этанольном извлечении спектрофотометрическим методом [15]. В качестве показателей иммунного ответа растений оценивали активность антиоксидантных ферментов (пероксидаз, полифенолоксидаз, супероксиддисмутазы, L-фенилаланин-аммоний-лиазы) и концентрацию малонового диальдегида в листьях картофеля спектрофотометрическими методами (по 20 повторностей на вариант). Для определения общей активности пероксидаз использована модифицированная методика [16], длина волны составляла 510 нм. Активность супероксиддисмутазы определяли по скорости восстановления нитросинего тетразолия супероксид-анионом, образующимся в результате окисления ксантина ксантиноксидазой [17]. Измерения проводили при длине волны 560 нм. Активность полифенолоксидаз оценивали по методу [18]. В качестве субстрата использовали 4 мМ L-DOPA (длина волны 490 нм). Измерение активности L-фенилаланин-аммоний-лиазы проводили при длине волны 290 нм по образованию транс-коричной кислоты в 0.1 М боратном буфере, pH 8.8, в присутствии 20 мМ L-фенилаланина в качестве субстрата [19]. Количество малонового диальдегида оценивали по модифицированной методике [20], в качестве субстрата использовали 2-тиобарбитуровую кислоту. Измерения проводили при длине волны 532 нм. Концентрацию белка в тканях растений оценивали по методу Брэдфорда [21], для построения калибровочной кривой использовали бычий сывороточный альбумин. Результаты представлены в таблицах 1 и 2.

Обработка клубней картофеля суспензией бластоспор M. robertsii способствовала значительной стимуляции роста (Табл. 1). Линейные размеры растений, обработанных грибом, превышали контроль в 1,5 раза, эффект обусловлен значительным увеличением длины побегов (в 1,9 раза; Р < 0,001). Масса растений (сырая и сухая), обработанных M. robertsii, также существенно превышала контрольные значения (в 1.7-2.1 раза) преимущественно за счет роста массы надземных частей (в 2.5-3.2 раза; Р < 0.001). Установлено значительное увеличение количества столонов (в 1.4 раза; Р = 0.02) в результате применения суспензии бластоспор M. robertsii.

Ростостимулирующий эффект от грибной инокуляции сопровождался значительным ростом содержания хлорофиллов и каротиноидов (в 1.2-1.8 раза в сравнении с контролем, Р ≤ 0.033; Табл. 2), причем максимально увеличилось содержание хлорофилла a, играющего центральную роль в процессе фотосинтеза.

Установлен значительный подъем количества малонового диальдегида (в 1.4 раза, P = 0.02; Табл. 2) и активности супероксиддисмутазы (в 1.5 раза, Р < 0.001) в листьях картофеля, обработанных бластоспорами гриба, что свидетельствует об адаптационных изменениях в растениях. Активность остальных антиоксидантных ферментов оставалась на уровне контрольных значений.

Таблица 1. Влияние предпосадочной обработки клубней бластоспорами M. robertsii на морфометрические показатели роста картофеля

Оцениваемые параметры Орган Вариант опыта Контроль Суспензия бластоспор Сырая масса, г корень 10,5 ± 1,0 11,4 ± 0,6 стебель 8,9 ± 0,7 28,5 ± 1,4* Сухая масса, г корень 6,2 ± 0,5 6,7 ± 0,2 стебель 5,3 ± 0,4 13,0 ± 0,6* Длина, см корень 27,2 ± 1,4 30,4 ± 1,3 стебель 22,3 ± 1,6 42 ± 2,1* Количество, шт стеблей 2,1 ± 0,2 2,8 ± 0,3 столонов 8,2 ± 0,4 11,6 ± 1,2*

Таблица 2. Влияние предпосадочной обработки клубней бластоспорами M. robertsii на физиологические/биохимические показатели картофеля

Оцениваемые параметры Вариант опыта Контроль Суспензия бластоспор Концентрация малонового диальдегида, нмоль/г сырой массы 1,60 ± 0,10 2,30 ± 0,30* Активность ферментов супероксиддисмутазы,
усл. ед./мг белка в мин 178,13 ± 18,86 270,78 ± 14,14* полифенолоксидаз, ΔА490/мг белка в мин 4,03 ± 0,27 3,48 ± 0,19 L-фенилаланин-аммоний-лиазы, ΔА290/мг белка в мин 0,08 ± 0,01 0,07 ± 0,00 пероксидаз, ΔА510/мг белка в мин 1,10 ± 0,06 1,08 ± 0,07 Содержание пигментов,
мг/г сырой массы хлорофилла a 395,16 ± 5,76 702,86 ± 10,54* хлорофилла b 202,12 ± 3,03 246,19 ± 3,69* каротиноидов 93,91 ± 2,81 140,35 ± 4,21* * - различия статистически достоверны в сравнении с контролем

Таким образом, получены результаты, свидетельствующие о значительном ростостимулирующем эффекте обработки клубней картофеля бластоспорами M. robertsii. Активный рост инокулированных грибом растений сопровождался подъемом содержания фотосинтезирующих пигментов и изменением иммунного статуса.

Пример 2. Влияние предпосадочной обработки клубней картофеля бластоспорами энтомопатогенного гриба Metarhizium robertsii на величину и качество урожая картофеля в полевых условиях.

Оценку влияния предпосадочной обработки клубней картофеля суспензией бластоспор M. robertsii на продуктивность картофеля и устойчивость к ризоктониозу проведены в полевом эксперименте в ЗАО «Приобское» Новосибирской области. Перед закладкой эксперимента выполнен анализ фитосанитарного состояния посадочного материала (анализ ризоктониоза на клубнях) по методике [22]. Высокий естественный инфекционный фон ризоктониоза обеспечен за счет значительной пораженности ризоктониозом семенного материала. Обработку клубней картофеля сорта Ред Скарлет бластоспорами M. robertsii проводили непосредственно перед посадкой. Использовали малообъемное опрыскивание клубней (расход рабочей суспензии 12 л на 1 т клубней). Концентрация бластоспор в рабочей суспензии составляла 5×10⁷ КОЕ/мл, в контрольном варианте проведена обработка клубней водно-твиновым раствором (0,04%) без пропагул гриба. Площадь делянки составляла 10 м² (50 растений на делянку), повторность - 4-х кратная, размещение рендомизированное.

Развитие ризоктониоза картофеля на растениях в период вегетации учитывали по шкале Франка [23], рассчитывали индекс развития болезни (ИРБ) по общепринятой формуле. На этих же растениях определяли количество стеблей и сырую биомассу растений. В период уборки урожая оценены масса, количество, фракционный состав клубней (с 15 растений в 4-х кратной повторности) и пораженность клубней ризоктониозом с определением склероциального индекса по методике [22]. Результаты применения предлагаемого способа на примере бластоспор M. robertsii представлены в таблицах 3, 4 и 5.

При оценке выпадов всходов отмечено достоверное снижение количества погибших от ризоктониоза ростков после применения суспензии на основе бластоспор M. robertsii в 6,9 раза в сравнении с контролем (Р = 0.008; Табл.3). Установлено также существенное снижение ИРБ на стеблях (в 2.4 раза ниже контроля, Р = 0.002; Табл. 3).

Установлены эффекты обработки бластоспорами M. robertsii на рост и продуктивность картофеля: масса растений картофеля в фазу полных всходов увеличилась в 1,6 раза (Р = 0,006, Табл.3); урожай клубней в период уборки в пересчете на га вырос на 2,68 т (Р = 0,04, Табл. 4). Кроме этого установлено положительное влияние на качество клубней нового урожая. Фитопатологический анализ полученного урожая продемонстрировал увеличение доли здоровых клубней (на 10,6% по сравнению с контролем), в том числе значительное снижение пораженности клубней различными формами проявления ризоктониоза. Склероциальный индекс, как обобщенный показатель пораженности клубней, снижался при внесении бластоспор M. robertsii (в 1.63 раза в сравнении с контролем, P = 0.049, Табл. 5).

Таблица 3. Влияние предпосадочной обработки клубней бластоспорами M. robertsii на развитие картофеля и пораженность ризоктониозом в первой половине вегетации

Вариант Гибель ростков, % Индекс развития болезни, % Количество стеблей, шт Масса 1 растения, г Контроль 15,8 35,5 4,1 31,1 Суспензия бластоспор 2,3* 15,4* 4,3 48,4* * - различия статистически достоверны в сравнении с контролем

Таблица 4. Влияние предпосадочной обработки клубней бластоспорами M. robertsii на урожайность картофеля

Вариант Фракции клубней нового урожая, % Биологическая урожайность, кг/100 кустов (т/га) крупная средняя мелкая Контроль 33,1 50,5 16,4 42,1 (18,96) Суспензия бластоспор 35,2 55,0 9,8 48,1 (21,64)* * - различия статистически достоверны в сравнении с контролем

Таблица 5. Результаты клубневого анализа

Вариант Здоровых клубней, % Зараженных ризоктониозом клубней, % S.i. Сетчатый некроз Углубленная пятнистость Наличие склероциев, доля пораженной поверхности клубня единичные 1/10 1/4 1/2 Контроль 29,5 28,5 0,0 17,6 16,8 6,1 1,5 2,07 Суспензия бластоспор 40,0 27,4 1,3 9,7 15,0 5,5 1,1 1,26* * - различия статистически достоверны в сравнении с контролем
S.i. - склероциальный индекс

Таким образом, в условиях полевых экспериментов продемонстрировано, что применение бластоспор энтомопатогенного гриба M. robertsii путем обработки клубней перед посадкой сдерживает развитие ризоктониоза в период вегетации растений и обеспечивает значительное улучшение качества полученных клубней в полевых условиях. Как следствие, такая обработка обеспечивает увеличение урожайности картофеля и способствуют формированию более здоровых клубней, что имеет решающее значение для снижения инфекционного фона при использовании клубней для семенных целей.

Пример 3. Инсектицидные свойства бластоспор энтомопатогенного гриба Metarhizium robertsii в отношении питающихся личинок колорадского жука (в лабораторных и полевых условиях).

В экспериментах с питающимися личинками (IV возраст) проводили их инокуляцию бластоспорами гриба с последующим содержанием в пластиковых контейнерах в лабораторных условиях при 26°С. Смертность учитывали в течение 10 суток. Использованы концентрации грибов от 5×10⁵ до 5×10⁷ КОЕ/мл. Эксперименты поставлены не менее, чем в 4-х повторностях по 10 особей в каждой. Результаты представлены в таблице 6.

Таблица 6. Биологическая эффективность бластоспор M. robertsii против личинок колорадского жука в лабораторных условиях

Варианты опыта Титр суспензии
M. robertsii
(бластоспор/мл) Эффективность по суткам, (% гибели) 2-е 4-е 6-е 8-е 10-е Личинки IV возраста 5×105 0 2 18 38 50 5×106 0 6 31 74 86 5×107 24 49 84 100 100

Гибель в контроле не зафиксирована

Установлено, что эффективность обработки M. robertsii по отношению к питающимся личинкам колорадского жука зависит от концентрации бластоспор гриба. Максимальный эффект обеспечивает концентрация 5×10⁷ КОЕ/мл (100%-ная гибель личинок наступает на 8-е сутки).

В полевом садковом опыте личинок IV возраста обрабатывали суспензиями бластоспор и конидий (для сравнения эффективности) M. robertsii в концентрации 5×10⁷ КОЕ/мл и высаживали в садки-рукава, размещенные на побегах картофеля в поле, находящемся в степной зоне Новосибирской области (Карасукский стационар). Использовали три повторности по 15 личинок в каждой. В течение эксперимента (10 суток) проводили учеты выживаемости. Результаты представлены в таблице 7.

Таблица 7. Биологическая эффективность пропагул M. robertsii против личинок колорадского жука в полевых условиях (по формуле Аббота с поправкой на гибель в контрольном варианте)

M. robertsii 5×10⁷ пропагул/мл Эффективность по суткам, % 4-е 6-е 8-е 10-е Суспензия бластоспор 2,4 19,1 58,3 100 Суспензия конидий 27,9 100 100 100

В условиях полевого эксперимента, при сильных колебаниях температуры и влажности (от 12 до 50 градусов Цельсия) и действии УФ, бластоспоры M. robertsii оказались менее вирулентными, чем конидии (Табл. 7). Однако, динамика смертности личинок после обработки разными типами пропагул показала, что на 10-е сутки бластоспоры также обеспечивают 100% гибель насекомых.

На основании данных, полученных в ходе проведенных тестирований, предложено применение суспензии бластоспор M. robertsii (штамм MB-1) путем обработки клубней перед посадкой, как структур перспективных для культивирования в промышленных масштабах. Такая обработка существенно снижает гибель ростков, сдерживает развитие ризоктониоза в период вегетации растений и обеспечивает значительное улучшение качества полученных клубней. Кроме того, возможно эффективное использование бластоспор M. robertsii для подавления численности колорадского жука в период питания личинок.

Применение данного способа позволяет получить дополнительные позитивные эффекты, связанные с повышением урожайности картофеля, а также посевного и товарного качества клубней нового урожая за счет снижения поражения склероциальными формами ризоктониоза и получения органической сельхозпродукции.

Список используемых источников

1. Патент RU №2311768 С1, опубл. 10.12.2007. / Ярошенко В.А., Иващенко И.И., Кощеев А.Г. Микробная композиция для борьбы с личинками жуков-щелкунов // Патент России № 2311768. 2007. Бюл. № 34. - 7 с.

2. Справочник пестицидов и агрохимикатов 2024. https://www.agroxxi.ru/goshandbook/prep/biostop-j.html.

3. Патент RU №2729388 С1, опубл. 06.08.2020. / Воронин Ю.А. Полифункциональное средство для растений // Патент России № 2729388. 2020. Бюл. № 22. - 14 с.

4. Патент RU №2539025 С1 опубл. 10.01.2015. / Котляров В.В. Донченко Д.Ю., Котляров Д.В., Сединина Н.В. Средство для микробиологической защиты растений и способ микробиологической защиты растений с использованием этого средства // Патент России № 2729388. 2020. Бюл. № 1. - 14 с.

5. Патент RU №2733132 С1, опубл. 29.09.2020. / Максимов И.В., Благова Д.К., Сарварова Е.Р., Веселова С.В., Бурханова Г.Ф., Сорокань А.В.,. Черепанова Е.А., Румянцев С.Д., Хайруллин Р.М. Штамм бактерий Bacillus subtilis с комплексной биологической активностью // Патент России №2733132. 2020. Бюл. № 28. - 7 с.

6. Патент RU №2704859 С1, опубл. 31.10.2019. / Леляк А.А., Леляк А.И., Штерншис М.В., Цветкова В.П., Масленникова В.С. Штамм гриба Beauveria bassiana, используемый для производства биопрепарата против колорадского жука, грибных патогенов и стимуляции роста картофеля в вегитационный период, биопрепарат на его основе и способ стимуляции роста картофеля в вегитационный период, защиты его от колорадского жука и ризоктониоза // Патент России №2704859. 2019. Бюл. № 31. - 26 с.

7. Jaronski S.T. Soil ecology of the entomopathogenic ascomycetes: a critical examination of what we (think) we know. In: Ekesi, S., Maniania, N.K. (Eds.), Use of Entomopathogenic Fungi in Biological Pest Management. Research Signpost Inc, 2007. Kerala, India, pp. 91-143.

8. St Leger R.J. The evolution of complex Metarhizium-insect-plant interactions / R.J. St Leger // Fungal Biology. - 2024. - https://doi.org/10.1016/j.funbio.2024.01.001.

9. Kryukov V. Ecological preferences of Metarhizium spp. from Russia and neighboring territories and their activity against Colorado potato beetle larvae / V. Kryukov, O. Yaroslavtseva, M. Tyurin [et al.] // Journal of Invertebrate Pathology. - 2017. - Vol. 149. - P. 1-7.

10. Kryukov V.Yu. Temperature adaptations of Cordyceps militaris, impact of host thermal biology and immunity on mycosis development / V.Yu. Kryukov, O. G. Tomilova, O. N. Yaroslavtseva [et al.] // Fungal Ecology. - 2018. - Vol. 35. - P. 98-107.

11. Tomilova O.G., Shaldyaeva E.M., Kryukova N.A., Pilipova Y.V., Schmidt N.S., Danilov V.P., Kryukov V.Y., Glupov V.V. Entomopathogenic fungi decrease Rhizoctonia disease in potato in field conditions // PeerJ. - 2020. - Vol. 16. - 8:e9895.

12. Шалдяева Е.М. Эффективность использования энтомопатогенного гриба Metarhizium robertsii против ризоктониоза картофеля / Е.М. Шалдяева, Ю.В. Пилипова, О.Г. Томилова [и др.] // Микология и фитопатология. - 2023. -Т. 57, № 2. - С. 134-140.

13. Шалдяева Е.М.Продуктивность картофеля на фоне применения энтомопатогенного гриба Metarhizium robertsii в производственных испытаниях / Е.М. Шалдяева, Ю.В. Пилипова, О.Г. Томилова [и др.] // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. - 2024. - Т. 54, № 4. - С. 60-68.

14. Патент WO2017200563, A01N63/042006.1, опубл. 23.11.2017 Aldiguier A.-S.M.E., Latone J.A., Leiva N., Michel J.K., Virag A. Entomopathogenic proucts, Metarhizium anisopliae or Metarhizium robertsii.

15. Методы биохимического исследования растений / Под ред. А.И. Ермакова. – Л.: Агропромиздат. Ленингр. отд-ние, 1987. - 430 с.

16. Nicell J.A. A model of peroxidase activity with inhibition by hydrogen peroxide / J.A. Nicell, H. Wright // Enzyme Microb. Technol. -1997. - Vol. 21. - P. 302-310.

17. Beauchamp C. Superoxide dismutase: Improved assays and an assay applicable to acrylamide gels / C. Beauchamp, I. Fridovich // Anal. Biochem. - 1971. - Vol. 44(1). - P. 276-287.

18. Holzapfel C. Polyphenol oxidase activity in the roots of seedlings of Bromus (Poaceae) and other grass genera / C.Holzapfel, P. Shahrokh, D. Kafkewitz // American journal of botany. - 2010. - Vol. 97(7). - P. 1195-1199.

19. Assis J.S. Effect of high carbon dioxide concentration on PAL activity and phenolic contents in ripening cherimoya fruit / J.S. Assis, R. Maldonado, T. Muñoz [et al.] // Postharvest Biology and Technology. - 2001. - Vol. 23(1). - P. 33-39.

20. Buege J.A. Microsomal lipid peroxidation / J.A. Buege, S.D. Aust // Methods Enzymol. - 1978. - Vol. 52. - P. 302-310.

21. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding / M.M. Bradford // Anal Biochem. 1976. - Vol. 72. - P. 248-254.

22. Шалдяева Е.М. Ризоктониоз картофеля: склероциальный индекс / Е.М. Шалдяева, Ю.В. Пилипова // Защита и карантин растений. - 1999. - № 5. - С. 16-17.

23. Frank J.A. Evaluation of potato clone reaction to Rhizoctonia solani / J.A. Frank, S.S. Leach, R.A. Webb // Plant Dis. Rep. - 1976. - Vol. 60. - № 11. - P. 910-912.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ снижения заболеваемости ризоктониозом и повышения качества урожая картофеля, включающий однократную предпосадочную обработку семенных клубней картофеля полифункциональным биопрепаратом в жидкой форме путем опрыскивания, причем при предпосадочной обработке семенных клубней картофеля в качестве жидкой формы полифункционального биопрепарата используют водную суспензию бластоспор энтомопатогенного гриба Metarhizium robertsii (штамм МB-1, номер ВКМ F5018D) с титром 5×10⁷ КОЕ/мл из расчета 12 л на 1 тонну семенных клубней картофеля. Изобретение расширяет ассортимент способов снижения заболеваемости ризоктониозом и повышения качества урожая картофеля. 7 табл., 3 пр.

Способ снижения заболеваемости ризоктониозом и повышения качества урожая картофеля, включающий однократную предпосадочную обработку семенных клубней картофеля полифункциональным биопрепаратом в жидкой форме путем опрыскивания, причем при предпосадочной обработке семенных клубней картофеля в качестве жидкой формы полифункционального биопрепарата используют водную суспензию бластоспор энтомопатогенного гриба штамм Metarhizium robertsii МB-1 ВКМ F5018D с титром 5×10⁷ КОЕ/мл из расчета 12 л на 1 тонну семенных клубней картофеля.