N-[4-(4-бромфенил)-2-гидрокси-4-оксобут-2-еноил]-2-гидроксибензогидразид, проявляющий противогрибковую активность Российский патент 2025 года по МПК C07C243/38 C07C241/04 A61K31/166 A61P31/10 

Изобретение относится к биологически активным соединениям, а именно к N-[4-(4-бромфенил)-2-гидрокси-4-оксобут-2-еноил]-2-гидроксибензогидрази-ду (I) формулы:

,

обладающим противогрибковой активностью и низкой токсичностью, что позволяет предположить возможность его использования в медицине в качестве лекарственного противогрибкового препарата.

Известны само заявляемое соединение, а также структурные аналоги, получаемые взаимодействием 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фурандионов с гидразидом салициловой кислоты [Милютин, А.В. Синтез, свойства и биологическая активность β-(о-окси- и м-оксибензоил)гидразидов ароилпировиноградных кислот / А.В. Милютин, Н.В. Сафонова, Р.Р. Махмудов // Пермская фармацевтическая академия – Пермь, 1995. – 7 с. – Деп. в ВИНИТИ 25.01.96. – № 305. – В96].

В качестве эталона сравнения нами был взят противогрибковый препарат флуконазол [Celeste De Monte, Simone Carradori, Bruna Bizzarri, Adriana Bolasco et al. / Anti-Candida activity and cytotoxicity of a large library of new N-substituted-1,3-thiazolidin-4-one derivatives // European Journal of Medicinal Chemistry 2016, 107, P. 82-96].

Целью данного изобретения является поиск в ряду N-(4-арил-2-гидрокси-4-оксобут-2-еноил)-2-гидроксибензогидразидов соединения, обладающего выраженным противогрибковым действием и низкой токсичностью.

Поставленная задача достигается получением N-[4-(4-бромфенил)-2-гидрокси-4-оксобут-2-еноил]-2-гидроксибензогидразида реакцией 5-(4-бромфенил)-2,3-дигидро -2,3-фурандиона (III) с 2-гидроксибензогидразидом.

Пример 1. Получение заявляемого соединения (I)

Смесь 1,27 г (0,005 моль) соответствующего 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фурандиона (III) и 0.76 г 2-гидроксибензогидразида (0,005 моль) в 40 мл абсолютного диоксана кипятили в течение 5 минут до растворения исходных соединений. Выпавший при охлаждении осадок отфильтровывали и перекристаллизовывали из диоксана. Получали 1,48 г (73%) бесцветного кристаллического вещества (I) с Т_пл. 217-218°С. C₁₇H₁₃BrN₂O₅. ИК-спектр, n, см^-1 (кристаллы): 3327 (NH), 3263 (NH), 3076 (ОH), 1660 (CONH), 1628 (С=O), 1572 (С=O). Спектр ПМР, d, м. д., ДМСО-d₆: 4.63 с (2Н, СН₂), 6.92-7.00 м (2H_аром), 7.16 с (1Н, СН), 7.45-8.03 м (6H_аром), 10.68 уш. с (1H, ОH), 10.98 уш. с (1H, NH), 11.82 уш. с (1H, NH). Спектр ЯМР ¹³С, δ, м.д., ДМСО-d₆: 114,5, 117.3, 119.0, 128,0, 129.6, 130.4, 131,9, 132,4, 132,8, 134.2, 158.9, 160,0, 167,0, 176,2, 185,7.

Заявляемое соединение представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, растворимое в диметилсульфоксиде, диметилформамиде, растворимое при нагревании в спирте, диоксане, нерастворимое в гексане и воде.

Пример 2. Исследование биологической активности

Острую токсичность изучали в опытах на белых нелинейных мышах-самках массой 20-22 г, содержащихся на обычном рационе вивария. Для определения средней летальной дозы использовали экспресс-метод Прозоровского В.Б. (Прозоровский, В.Б. Статистическая обработка результатов фармакологических исследований / В. Б. Прозоровский // Психофармакология и биологическая наркология. – 2007. - №7. – С. 2090-2120). Исследуемые соединения вводили перорально в виде взвеси в 1% растворе крахмала в возрастающих дозах, для расчетов использовали четыре последовательных дозы. Каждую дозу вводили двум животным. Регистрировали общее состояние и поведение животных, состояние шерстного покрова, определяли массу тела. В каждой группе животных учитывали число смертельных исходов за весь срок наблюдения. Результаты обрабатывали статистически с вычислением средней смертельной дозы (ЛД₅₀).

Противогрибковую активность определяли методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде Сабуро [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. – Ч. 1. – М.: Гриф и К, 2012. – С. 576-578]. Для испытуемого соединения (I) были определены минимальные подавляющие концентрации (МПК) в отношении фармакопейного штамма Candida albicans NCTC 885-653, полученного из ФГБУ "Научный центр экспертизы средств медицинского применения" Минздрава России. Посевы производили в жидкую среду Сабуро с различной концентрацией испытуемых соединений. Иccледуемое соединение в количестве 0,05 г растворяли в 5 мл диметилсульфоксида, 1 мл полученного разведения 1:100 соединяли с 4 мл жидкой среды Сабуро. Далее готовили ряд серийных разведений соединений с двукратно уменьшающейся концентрацией.

Культуры выращивали в пробирках на скошенной агаризированной среде (плотная среда Сабуро). Для определения противогрибковой активности использовалась 48 часовая культура. Для приготовления рабочей взвеси микроорганизмов производили смыв выросшей культуры изотоническим раствором натрия хлорида и устанавливали плотность микробной взвеси по стандарту мутности 5 единиц. Далее из полученной микробной взвеси готовили рабочий раствор с концентрацией 5×10⁵ КОЕ/мл. Данную взвесь вносили в количестве 0,1 мл в пробирки с серийными разведениями изучаемых соединений. Таким образом, микробная нагрузка при определении противогрибковой активности составила 2-2,5×10⁴ КОЕ/мл.

Учет результатов производили через 24 часа выдержки контрольных и опытных пробирок в термостате при температуре 35°С±2°С. Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) устанавливали по отсутствию признаков роста на питательной среде: последняя пробирка с задержкой роста (прозрачная) соответствует МПК соединения в отношении данного штамма.

Фунгистатический эффект исследуемого соединения (I) сравнивали с действием флуконазола [Cordeiro R.A., Teixeira C.E.C., Brilhante R.S.N. et al. / Minimum inhibitory concentrations of amphotericin B, azoles and caspofungin against Candida species are reduced by farnesol // Medical Mycology January 2013, 51, Р. 53-59]. Результаты испытаний представлены в таблице 1.

Таблица 1

Противогрибковая активность и острая токсичность соединения (II)

Cоединение Острая токсичность соединений
ЛД₅₀, мг/кг, (в/б) Противогрибковая активность
МПК, мкг/мл NCTC
Candida albicans 885-653 Заявляемое соединение (I) 4900,0±46,0 1.0/2.0 Флуконазол 1273* 2 – >64*

* – литературные данные.

Как видно из таблицы 1, заявляемое соединение (I) при более низкой токсичности по противогрибковой активности превосходит препарат сравнения – флуконазол по отношению к Candida albicans NCTC 885-653.

Следовательно, заявляемое соединение может найти применение в медицине в качестве противогрибкового лекарственного средства.

Изобретение относится к биологически активным соединениям, а именно к применению N-[4-(4-бромфенил)-2-гидрокси-4-оксобут-2-еноил]-2-гидроксибензогидразида формулы (I), указанной ниже, в качестве средства, обладающего противогрибковой активностью. Применяемое соединение формулы (I) обладает выраженной противогрибковой активностью и низкой токсичностью. 1 табл., 2 пр.

Применение N-[4-(4-бромфенил)-2-гидрокси-4-оксобут-2-еноил]-2-гидроксибензогидразида формулы

в качестве средства, обладающего противогрибковой активностью.